PT2937095T - Extrato de farelo da semente de coix lacryma-jobi e sua utilização - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

"EXTRATO DE FARELO DA SEMENTE DE COIX LACRYMA-JOBI E SUA UTILIZAÇÃO"

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO 1. Campo da invenção A invenção relaciona-se com um extrato de farelo de adlay e suas utilizações; mais particularmente com as suas utilizações no tratamento de uma doença da pele e/ou tecido subcutâneo, diminuição da interleucina (IL)-la, interleucina-6, fator de necrose tumoral (TNF)-α, interleucina-8, prostaglandina-2 (PGE2) e/ou Proteína Reactiva C (CRP). 2. Descrição da Arte Relacionada A pele é o maior órgão do corpo humano e é a principal barreira entre o corpo e o ambiente, sendo a primeira linha de defesa contra patógenos e esforços e estimulações físicas e químicas. A pele não proporciona apenas a proteção física e química, mas também é um órgão imune, que pode efetivamente provocar uma resposta imune passiva e ativa, protegendo assim o corpo humano.

Do exterior para o interior, a pele apresenta uma estrutura em três camadas composta pela epiderme, a derme e o tecido subcutâneo. A camada exterior, a epiderme, é responsável por funções de proteção; a camada dérmica, sob a cada de epiderme, é a parte mais importante da pele e é responsável por suportar a epiderme e interliga-se com diversas fibras para formar uma rede de suporte, estando também distribuídos pela camada dérmica vasos sanguíneos, nervos, glândulas sebáceas, glândulas sudoriferas e foliculos capilares; a camada mais interna da pele é o tecido subcutâneo, que em geral se refere à camada mais profunda da derme dos vertebrados e num sentido mais restrito refere-se aos tecidos conetivos adiposos entre a derme e o esqueleto e músculos abaixo da derme. 0 tecido subcutâneo, formado principalmente por células gordas, não tem fronteiras óbvias com a derme e é responsável por bloquear e absorver vibração e proporcionar uma fonte de energia. 0 tecido subcutâneo é o principal local para o metabolismo de gordura. A pele e/ou o tecido subcutâneo podem ser afectados por diversas doenças devidas a fatores congénitos ou adquiridos, resultando em desconforto para os pacientes e alterações no aspeto provocam cargas psicológicas nos pacientes. Contudo, os agentes atualmente adotados para a pele e/os tecidos subcutâneos são esteróides ou agentes ácidos e grandes efeitos secundários podem ser provocados por utilização imprópria, de modo que a utilização dos agentes existentes não é um tratamento apropriado.

Nas doenças da pele e/ou do tecido subcutâneo, as lesões provocadas por terapia por radiação são um dos tipos importantes e a terapia com radiação induz sempre efeitos laterais tais como dermatide de radiação, fadiga, pneumonia por radiação e linfedema (McCormick et ai., 1989, Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 17:12 9 9-1302; Lingos et al. , 1991, Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 21:355-360; Taylor at al.,1995, Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 31:753-764; Gorodetsky et al., 1999, Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 45:893-900; Erickson et al.,2001, J. Natl. Cancer Inst., 93:96-111). Com o cancro da mama como exemplo, cerca de 50% a 60% dos pacientes com cancro da mama necessitam de terapia com radiação depois da cirurgia. Após a operação de reseção e quimioterapia sistémica, os efeitos laterais, como a perda de cabelo, neutropenia, náusea e vómitos ocorrem sempre nos pacientes. Como resultado, os pacientes podem evitar ou recusar o tratamento devido ao medo. A comunidade médica tem efetuado alguns melhoramentos no equipamento para tratamento e tecnologia, para reduzir os efeitos laterais da terapia com radiação. Tal como para o eritrema cutâneo e pigmentação causadas pela radiação e para alguns efeitos laterais sérios, como a ulceração numa minoria de pacientes, a comunidade médica tenta sempre utilizar alguns agentes de proteção contra a radiação, como a Amifostina (Yubas et al. , 1980, Cancer Clin. Trials, 3:211-216). Contudo, os agentes quase não são utilizados na prática real devido aos fortes efeitos laterais que os acompanham, efeitos não óbvios ou preço elevado.Um agente que possuao efeito de proteçãocontra a radiação ou de fortalecimento do efeito da radiação e possa reduzir a dose de radiação ainda é necessário, de modo a beneficiar os pacientes com cancro recebendo terapia com radiação.

As sementes de adlay (Coix lachryma-jobi L. var. ma-yuen Stapf), também chamadas lágrimas de Job, são um componente da medicina tradicional chinesa (TCM) e têm desde há muito sido utilizadas como um agente anti-inflamatório para tratamento de verrugas, pele gretada, reumatismo e neuralgia (Li, S.C., Pen-t' sao kangmu (Systematic Pharmacopoeia); China, 1596). Um estudo recente mostrou que o adlay descorticado (DA) modulava o microbiota no trato intestinal de ratos (Chiang, W.; Cheng, C.; Chiang, M.; Chung, K.T.J., Agric. Food Chem., 2000, 48, 829-832). Também os efeitos anti-inflamatórios e antioxidantes do adlay foram elucidados in vitro (Lee, M.Y.; Tsai, S. Η. ; Kuo, Y.H.; Chiang, W., J. Food Sei. Biotechnol., 2008, 17, 1265-1271; Kuo, C.C.; Shih, M.C.; Kuo, Y.H.; Chiang, W., J. Agric. Food Chem., 2001, 49, 1564-1570). Os teores de diversos compostos potentes em sementes de adlay de diversas origens foram quantificados (Wu, T.T.; Charles, A.L.; Huang, T., C. Food Chem., 2007, 104, 1509-1515). Verificou-se que diversos antioxidantes fenólicos isolados a partir das sementes de adlay e compostos bioativos das sementes de adlay permaneceran estáveis durante o processamento (Hsu, H.Y.; Lin, B.F.; Lin, J.Y.; Kuo, C.C.; Chiang, W., J. Agric. Food Chem., 2003, 51, 3763-3769). Isolaram-se lignanos e compostos fenólicos a partir da casca de adlay (AH) num ensaio de isolamento conduzido (Kuo, C.C.; Shih, M.C.; Kuo, Y.H.; Chiang, W.J., Agric. Food Chem., 2001, 49, 1564-1570).

Isolaram-se flavanona e diversos ácidos fenólicos a partir de frações anti-inflamatórias de sementes de adlay (Huang, D.W.; Kuo, Y.Η.; Lin, F.Y.; Lin, Y.L.; Chiang, W., J. Agric. Food Chem., 2009, 57, 2259-2266; Huang, D.W.; Chung, C.P.; Kuo, Y.H.; Lin, Y.L.; Chiang, W.J., J. Agric. Food Chem., 2009, 57, 10651-10657; Chen, H.J.; Chung, C.P.;

Chiang, W.; Lin, Y., Food Chem., 2011, 126, 1741-1748). Foi relatado que o álcool fenólico no tegumento de adlay (AT) possuía atividade antialérgica (Chen, H.J.; Shih, C.K.; Hsu, H.Y.; Chiang, W., J. Agric. Food Chem., 2010, 58, 2596-2601) . Adicionalmente, foi demonstrado que o DA e o farelo de adlay (AB) retardava a carcinogénese através de uma via anti-inflamatória (Shih, C.K.; Chiang, W.; Kuo, M.L., Food Chem. Toxicol., 2004, 42, 1339-1347; Li, S.C.;

Chen, C.M.; Lin, S.H.; Chiang, W.; Shih, C.K., J. Sei. Food Agric., 2011, 91, 547-552) e o ácido ferúlico foi visto como o componente ativo numa outra investigação (Chung, C.P.; Hsu, Η. Y. ; Huang, D.W.; Hsu, Η.H.; Lin, J.T.; Shih, C.K.; Chiang, W., J. Agric. Food Chem., 2010, 58, 7616- 7623) . A US 2004/101593 Al revela estratos diferentes de sementes de Coix, utilizados em combinação para o ratamento de distúrbios cutâneos. HONG-JHANG et al., "Anti-inflammatory effects and chemical study of a flavonoid-enriched fraction from adlay bran", FOOD CHEMISTRY, ELSEVIER LTD, NL, vol. 126, n° 4, 14 de Dezembro de 2010 (2010-12-14), páginas 1741-1748, XP028134527, revela que extratos etanólicos de farelo de adlay suprimem as citoquinas inflamatórias. A CN 102 177978 A revela que pode obter-se óleo de semente de Coix lacryma-jobi por extração das sementes com álcool etílico absoluto ou com dióxido de carbono supercritico. A CN 1 502 680 A revela a extração de óleo de sementes de Coix por utilização de um processo de extração com C02 supercritico. A CN 101 189988 A, extração de óleo de adlay por água ou dióxido de carbono.

Apesar de existirem muitas utilizações reportadas para as sementes de adlay, diversas aplicações de extrato de sementes de adlay permenecem sem desenvolvimento.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO É um objetivo da presente invenção proporcionar uma composição para tratamentos melhorados da pele.

Este problema é resolvido por uma composição como reivindicado na reivindicação 1 e 8, respetivamente. Outras realizações vantajosas são o objecto das reivindicações dependentes.

Na presente invenção o extrato de farelo de adlay possui efeitos no tratamento de uma doença da pele e/ou do tecido subcutâneo e na diminuição de interleucina la, interleucina 1β, interleucina-6, fator α de necrose tumoral, interleucina-8, prostaglandina-2, e/ou Proteína Reativa C. Em particular, o extrato de farelo de adlay proporciona proteção contra a radiação ou melhora a eficácia da radiação reduzindo a dose de radiação e adicionalmente, beneficiando pacientes com cancro recebendo a terapia com radiação. A presente invenção proporciona uma composição compreendendo um extrato de farelo de adlay, em que o extrato de farelo de adlay compreende um extrato de álcool Cl a Cl de farelo de adlay (A) e um extrato por dióxido de carbono supercrítico líquido de farelo de adlay (B) e a relação em peso entre o extrato de álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono supercrítico líquido de farelo de adlay (B) situa-se entre 3:1 a cerca de 1:4.

Um método para tratamento de uma doença da pele e/ou do tecido subcutâneo num sujeito, compreendendo a administração ao sujeito referido de uma quantidade eficaz de extrato de farelo de adlay e, opcionalmente, de um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, em que o extrato de farelo de adlay compreende um extrato de álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A) e um extrato por dióxido de carbono supercrítico líquido de farelo de adlay (B) e a relação em peso entre o extrato de álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono supercrítico líquido de farelo de adlay (B) situa-se entre 3:1 a cerca de 1:4.

Um método para diminuição de interleucina-la, interleucina-ΐβ, interleucina-6, fator α de necrose tumoral, interleucina-8, prostaglandina-2, e/ou Proteína Reativa C num sujeito, compreendendo a administração ao referido sujeito de uma quantidade eficaz de extrato de farelo de adlay e, opcionalmente, de um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, em que o extrato de farelo de adlay compreende um extrato de álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A) e um extrato por dióxido de carbono supercrítico líquido de farelo de adlay (B) e a relação em peso entre o extrato de álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono supercrítico líquido de farelo de adlay (B) situa-se entre 3:1 a cerca de 1:4.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A FIG. 1 ilustra um espetrograma de HPLC do extrato de álcool com Cl a C7 do farelo de adlay (A) de acordo com a invenção. A FIG. 2 ilustra um espetrograma de HPLC do extrato com dióxido de carbono supercrítico de farelo de adlay (B) de acordo com a invenção. A FIG. 3 um espetrograma de HPLC do extrato de farelo de adlay de acordo com a invenção, com a relação 1:4 entre o extrato de álcool com Cl a C7 do farelo de adlay (A) e o extrato com dióxido de carbono supercrítico fluido de farelo de adlay (B). A FIG. 4 ilustra cortes de tecidos patológicos mostrando efeitos de cápsulas de adlay, em diferentes doses na alimentação ou do agente Sulfasil, para tratamento de lesões na pele provocadas por terapia clinica com radiações, sobre lesões no tecido produtor do pelo na perna de murganho. RT representa terapia por radiação; sham representa sem terapia com radiação; e veiculo representa sem veiculo ou utilização de extrato de adlay. A FIG. 5 ilustra os resultados de alterações de pesos corporais de animais com tumores recebendo a terapia com radiação e, ao mesmo tempo, alimentados com cápsula de adlay com diferentes concentrações, ou o agente Sulfasil, para tratamento das lesões da pele provocadas pela terapia clinica com radiação, através de um tubo. RT representa terapia por radiação; sham representa sem terapia por radiação; e veiculo representa sem veiculo ou utilização de extrato de adlay. A FIG. 6 ilustra os resultados das alterações do volume do tumor em animais com tumor recebendo a terapia com radiação e, ao mesmo tempo, alimentados com cápsula de adlay com diferentes concentrações, ou o agente Sulfasil, para tratamento das lesões da pele provocadas pela terapia clinica com radiação, através de um tubo. RT representa terapia por radiação; sham representa sem terapia por radiação; e veiculo representa sem veiculo ou utilização de extrato de adlay. A FIG. 7 ilustra os resultados de alterações da concentração de IL-Ια no soro de animais com tumor recebendo a terapia com radiação e, ao mesmo tempo, alimentados com cápsula de adlay com diferentes concen trações, ou o agente Sulfasil, para tratamento das lesões da pele provocadas pela terapia clinica com radiação, através de um tubo. RT representa terapia por radiação; sham representa sem terapia por radiação; e veiculo representa sem veiculo ou utilização de extrato de adlay. A FIG. 8 ilustra os resultados de alterações da concentração de IL-Ιβ no soro de animais com tumor recebendo a terapia com radiação e, ao mesmo tempo, alimentados com cápsula de adlay com diferentes concen trações, ou o agente Sulfasil, para tratamento das lesões da pele provocadas pela terapia clinica com radiação, através de um tubo. RT representa terapia por radiação; sham representa sem terapia por radiação; e veiculo representa sem veiculo ou utilização de extrato de adlay. A FIG. 9 ilustra os resultados de alterações da concentração de IL-6 no soro de animais com tumor recebendo a terapia com radiação e, ao mesmo tempo, alimentados com cápsula de adlay com diferentes concentrações, ou o agente Sulfasil, para tratamento das lesões da pele provocadas pela terapia clinica com radiação, através de um tubo. RT representa terapia por radiação; sham representa sem terapia por radiação; e veiculo representa sem veiculo ou utilização de extrato de adlay. A FIG. 10 ilustra os resultados de alterações da concentração de TNF-α no soro de animais com tumor recebendo a terapia com radiação e, ao mesmo tempo, alimentados com cápsula de adlay com diferentes concentrações, ou o agente Sulfasil, para tratamento das lesões da pele provocadas pela terapia clinica com radiação, através de um tubo. RT representa terapia por radiação; sham representa sem terapia por radiação; e veiculo representa sem veiculo ou utilização de extrato de adlay. A FIG. 11 ilustra os resultados de alterações da concentração de IL-8 no soro de animais com tumor recebendo a terapia com radiação e, ao mesmo tempo, alimentados com cápsula de adlay com diferentes concentrações, ou o agente Sulfasil, para tratamento das lesões da pele provocadas pela terapia clinica com radiação, através de um tubo. RT representa terapia por radiação; sham representa sem terapia por radiação; e veiculo representa sem veiculo ou utilização de extrato de adlay. A FIG. 12 ilustra os resultados de alterações da concentração de PGE2 no soro de animais com tumor recebendo a terapia com radiação e, ao mesmo tempo, alimentados com cápsula de adlay com diferentes concentrações, ou o agente Sulfasil, para tratamento das lesões da pele provocadas pela terapia clinica com radiação, através de um tubo. RT representa terapia por radiação; sham representa sem terapia por radiação; e veiculo representa sem veiculo ou utilização de extrato de adlay. A FIG. 13 ilustra os resultados de alterações da concentração de IL-Ια no soro de animais com tumor recebendo a terapia com radiação e, ao mesmo tempo, alimentados com cápsula de adlay com diferentes concentrações, ou o agente Sulfasil, para tratamento das lesões da pele provocadas pela terapia clinica com radiação, através de um tubo. RT representa terapia por radiação; sham representa sem terapia por radiação; e veiculo representa sem veiculo ou utilização de extrato de adlay. A FIG. 14 ilustra cortes de tecido patológico mostrando os efeitos de 25 diferentes doses/combinações de terapia sobre as lesões no tecido produtor de pelo na perna de murganhos causadas pela terapia com radiação. 0 eixo horizontal e o eixo vertical representam respetivamente a dose/combinação (mg/kg) do extrato em álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A) e do extrato por dióxido de carbono supercritico fluido de farelo de adlay (B) . Cada figura ilustra, respetivamente, os cortes de tecido patológico de tecidos produtores de pelo de murganhos, a que foram proporcionadas diferentes doses através de um tubo, no processo de terapia de tumor com radiação.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona uma composição compreendendo um extrato em álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A) e um extrato por dióxido de carbono supercrítico fluido de farelo de adlay (B) e a relação em peso entre o extrato de álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono supercrítico fluido de farelo de adlay (B) situa-se entre cerca de 3:1 a cerca de 1:4. A presente invenção pode ser mais facilmente entendida por referência à descrição detalhada das diversas realizações da invenção, aos exemplos, aos desenhos químicos e tabelas com as descrições relevantes, que se seguem. Deve ter-se em consideração que a menos que especificamente indicado nas reivindicações, a invenção não é limitada a métodos específicos de preparação, veículos ou formulações ou a modos particulares de formulação do extrato da invenção em produtos ou composições destinados a administração tópica, oral ou parenteral, porque, como é do conhecimento de qualquer técnico das áreas relevantes, essas coisas podem, obviamente, variar. Também deve ser tomado em consideração que a terminologia aqui utilizada se destina apenas a descrever realizações particulares e não pretende ser limitante.

Tal como utilizados de acordo com a presente publicação, os termos que se seguem, a menos que indicado e outro modo, devem ser interpretados como possuindo os significados seguintes:

Frequentemente, os intervalos são aqui expressos como desde "cerca" de um valor particular e/ou até "cerca" de outro valor particular. Quando é expresso tal intervalo, uma realização inclui o intervalo desde um valor particular e/ou até ao outro valor particular. De igual modo, quando os valores são expressos como aproximações, com a utilização da palavra "cerca", deve ter-se em consideração que o valor particular forma outra realização. Deve também ser tomado em consideração que os pontos extremos de cada um dos intervalos são significativos, tanto em relação a como independentemente do outro valor extremo. Tal como utilizado aqui, o termo "cerca" refere-se a ± 10%. "Opcional" ou "opcionalmente" significa que o acontecimento ou circunstância subsequentemente descrita, pode ou não ocorrer e que a descrição inclui casos onde o referido acontecimento ou circunstância ocorre e casos onde não ocorre. Por exemplo, a frase "compreendendo opcionalmente um agente" significa que o agente pode existir ou não.

Deve notar-se que, tal como utilizado na especificação e reivindicações apensas, as formas singulares "um", "uma" e "o" incluem respetivos plurais, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Assim, a menos que seja requerido pelo contexto de outra forma, os termos singulares deverão incluir o plural e os termos no plural deverão incluir o singular. 0 termo "sujeito", tal como aqui utilizado, refere-se a qualquer animal, preferencialmente um mamífero e mais preferencialmente um ser humano. Exemplos de sujeitos incluem seres humanos, primatas não humanos, roedores, porcos da índia, coelhos, ovelhas, porcos, cabras, vacas, cavalos, cães e gatos. 0 termo "quantidade eficaz" do ingrediente ativo, como aqui proporcionado, significa uma quantidade suficiente de ingrediente para proporcionar a regulação desejada de uma função desejada, tal como expressão genética, função proteica ou a indução de um tipo particular de resposta. Como será indicado abaixo, a quantidade exata necessária variará de sujeito para sujeito, dependendo do estado da doença, condição física, idade, sexo, espécie e peso do sujeito, identidade e formulação específica da composição, etc. Os regimes de dosagem podem ser ajustados para induzir a resposta terapêutica ótima. Por exemplo, podem ser administradas diariamente várias doses divididas ou a dose pode ser proporcionalmente reduzida, como indicado pelas exigências da situação terapêutica. Assim, não é possível especificar uma "quantidade eficaz" exata. Contudo, uma quantidade eficaz apropriada pode ser determinada por um técnico da matéria utilizando apenas experimentação de rotina. 0 termo "tratar" ou "tratamento", tal como aqui utilizado, refere-se a reverter, aliviar, inibir o progresso de, ou melhorar o distúrbio, doença ou condição a que se aplica tal termo, ou um ou mais sintomas de tal distúrbio, doença ou condição. 0 termo "veiculo" ou "excipiente", tal como aqui utilizado, refere-se a qualquer substância que não sendo um agente terapêutico é utilizada como carga inerte e/ou diluente e/ou adjuvante ou veiculo para proporcionar um agente terapêutico a um sujeito ou adicionado a uma formulação para melhorar o seu manuseamento ou propriedades de armazenagem ou para permitir ou facilitar a formação de uma dose unitária da composição num artigo discreto, tal como uma cápsula ou comprimido adequado para administração oral. Veículos ou excipientes adequados são bem conhecidos pelos técnicos na matéria de manufatura de formulações farmacêuticas ou produtos alimentares. Os veículos ou excipientes podem incluir, a título de ilustração não limitante, tampões, diluentes, desintegrantes, agentes ligantes, adesivos, agentes molhantes, polímeros, lubrificantes, deslizantes, substâncias adicionadas para mascarar ou contrariar um odor ou sabor desagradáveis, aromatizantes, corantes, fragrâncias e substâncias adicionadas para melhorar o aspeto da composição. Veículos ou excipientes aceitáveis incluem tampão citrato, tampão fosfato, tampão acetato, tampão bicarbonato, ácido esteárico, estearato de magnésio, óxido de magnésio, sais de sódio e de cálcio dos ácidos fosfórico e sulfúrico, carbonato de magnésio, talco, gelatina, goma de acácia, alginato de sódio, pectina, dextrina, manitol, lactose, sacarose, amidos, gelatina, materiais celulósicos (tais como estéres de celulose de ácidos alcanóicos e estéres alquilicos de celulose), ceras de baixo ponto de fusão, manteiga de cacau, amino ácidos, ureia, álcoois, ácido ascórbico, fosfolípidos, proteínas (por exemplo, albumina de soro), ácido etilenediamina tetra-acético (EDTA), sulfóxido de dimetilo (DMSO), cloreto de sódio ou outros sais, lipossomas, manitol, sorbitol, glicerol ou pó, polímeros (tais como polivinil-pirrolidona, álcool polivinílico e polietileno glicóis) e outros materiais farmaceuticamente aceitáveis. 0 veículo não deve destruir a atividade farmacológica do agente terapêutico e deve ser não tóxico quando administrado em doses suficientes para proporcionar uma quantidade terapêutica do agente. A composição de acordo com a presente invenção compreende o extrato de farelo de adlay. 0 farelo de adlay de acordo com a invenção é preferencialmente obtido a partir de sementes descorticadas de adlay. 0 farelo de adlay de acordo com a invenção é preferencialmente obtido a partir de sementes descorticadas de adlay. 0 termo "sementes descorticadas de adlay", tal como aqui utilizado, refere-se a sementes de adlay sem películas, testas, coberturas, cascas ou caules. A forma de remoção das películas, coberturas, cascas ou caules das sementes de adlay é bem conhecida dos artesãos da área. Em geral as sementes descorticadas de adlay compreende o farelo e o endosperma e a forma de obtenção do farelo a partir das sementes descorticadas de adlay é bem conhecida dos artesãos com prática na área.

As sementes de adlay referidas nesta invenção não são particularmente limitadas. 0 adlay pertence, preferencialmente, à família Gramineae, sub-família

Panicoideae e espécie Coix ou à ordem Poales, família Poaceae e espécie Coix. Mais preferencialmente, o adlay é Coix lachryma-jobi, Coix lachryma-jobi L., Coix lachryma-jobi L. var. ma-yuen Stapf, Coix agrestis Lour., Coix arundinacea Lam., Coix exaltata Jacq. Ou Coix lacryma L. 0 estrato de farelo de adlay de acordo com a invenção compreende o extrato de álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono supercrítico fluido de farelo de adlay (B). 0 termo "álcool Cl a C7", tal como aqui utilizado, refere-se a um álcool linear ou ramificado, substituído ou não substituído, mono ou polifuncional, e saturado ou insaturado; preferencialmente, um álcool não substituído, monofuncional e saturado. Numa realização preferida da invenção, o álcool Cl a C7 é selecionado do grupo que consiste em metanol, etanol, n-propanol isopropanol, n-butanol, iso-butanol, sec-butanol, terc-butanol, 1-pentanol, 2-pentanol, 3-pentanol, 2-metil-l- butanol, 2-metil-2-butanol, 3-metil-2-butanol, 3-metil-l-butanol, 2,2-dimetil-l-propanol, 1-hexanol, 2,4-hexadieno-l-ol, 2-metil-ciclopentanol, ciclohexanol, 1-heptanol, 2-heptanol ou álcool cicloheptilico. Mais preferencialmente, o álcool Cl a C7 é metanol ou etanol; ainda mais preferencialmente, o álcool Cl a C7 é etanol. 0 álcool Cl a C7 pode ser utilizado isoladamente ou em combinações. 0 álcool Cl a C7, tal como aqui utilizado, é preferencialmente uma solução alcoólica com uma concentração desde cerca de 49% (v/v) a cerca de 99,9% (v/v); mais preferencialmente, desde cerca de 75% (v/v) a cerca de 99, 9% (v/v); ainda mais preferencialmente, desde cerca de 90% (v/v) a cerca de 98,0% (v/v).

Tal como aqui utilizado, o termo "extrato de álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A)" refere-se ao extrato obtido por extração do farelo de adlay com o álcool Cl a C7. A forma de extração de uma parte de uma semente com uma solução é bem conhecida dos artesãos com conhecimentos na matéria. Numa realização preferida da invenção, o farelo de adlay é embebido na solução alcoólica para extração; mais preferencialmente, o farelo de adlay é embebido na solução alcoólica e sujeito a extração com vibração ultrassónica. A temperatura de extração situa-se preferencialmente entre desde cerca de 10°C até cerca de 100°C; mais preferencialmente, cerca de 15°C a cerca de 50°C; ainda mais preferencialmente, desde cerca de 20°C a cerca de 40°C.

Numa realização preferida da invenção o extrato de álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A) é preparado de acordo com um processo compreendendo: (a) proporcionar o farelo de adlay; (b) fragmentação do farelo de adlay em partículas pequenas; e (c) extração das pequenas partículas do passo (b) com o álcool Cl a C7, para se obter um extrato.

De acordo com o processo da invenção, antes do passo (b), o farelo de adlay é, preferencialmente, seco.

Numa realização preferida da invenção, o passo (b) compreende também a mistura das pequenas partículas até formar um pó. A forma de cortar e/ou misturar é bem conhecida dos artesãos com conhecimentos nesta área. A relação (p/v) entre o farelo de adlay e a solução alcoólica não é especificamente restringida e pode ser cerca de 1:1 até cerca de 1:10; preferencialmente cerca de 1:3 a cerca de 1:8 e mais preferencialmente, cerca de 1:5.

Numa realização preferida da invenção, o passo de extração (c) pode ser epetido e o extrato é recolhido por mistura.

Preferencialmente, o processo compreende ainda (d) a obtenção de uma fração líquida a partir do extrato, sendo removida a fração sólida. A forma de remoção da fração sólida para se obter a fração líquida é bem conhecida dos artesãos com conhecimentos nesta área. 0 processo compreende ainda, preferencialmente, um passo de condensação. A forma de condensar é bem conhecida dos artesãos com conhecimentos nesta área, tal como por condensação sob pressão reduzida. 0 extrato por dióxido de carbono supercrítico fluido do farelo de adlay (B) , de acordo com a presente invenção, refere-se a um extrato obtido por extração do farelo de adlay por fluido supercrítico de dióxido de carbono. 0 fluido supercrítico refere-se a um estado fluido homogéneo obtido finalmente quando as propriedades do gás e do líquido se tornam similares, a uma temperatura superior à temperatura crítica e a uma pressão superior à pressão crítica. De forma semelhante a um gás o fluido supercrítico é compressível e, de modo semelhante a um fluido, possui fluidez e pode ser utilizado para extração. Adicionalmente, equipamentos comerciais para extração por fluidos supercríticos são disponibilizados, por exemplo, por NATEX, SEPAREX, UHDE e TAIWAN SUPERCRITICAL TECHNOLOGY Co. , Ltd., proporcionando equipamentos comerciais para extração por fluidos supercríticos nos quais as especificações são geralmente indicadas pela capacidade do tanque de extração, tal como de 500 g a 2000 kg, para seleção de modo a que possa ser selecionado um equipamento de extração por fluidos supercríticos de acordo com as necessidades.

Numa realização preferida da invenção, o extrato de dióxido de carbono fluido supercrítico do farelo de adlay (B) é extraído a uma pressão entre desde cerca de 150 bar a cerca de 500 bar; mais preferencialmente desde cerca de 200 bar a cerca de 400 bar; ainda mais preferencialmente, desde cerca de 350 bar a cerca de 380 bar.

Numa realização preferida da invenção, o extrato de dióxido de carbono fluido supercrítico do farelo de adlay (B) é extraído a uma temperatura desde cerca de 30°C até cerca de 80°C; mais preferencialmente desde cerca de 40°C até cerca de 70°C; ainda mais preferencialmente, desde cerca de 50°C até cerca de 60°C.

Numa realização preferida da invenção, o extrato de dióxido de carbono fluido supercrítico do farelo de adlay (B) é extraído com um fluxo de dióxido de carbono fluido supercrítico desde cerca de 20 kg/h a cerca de 50 kg/h; mais preferencialmente, desde cerca de 30 kg/h a cerca de 45 kg/h; ainda mais preferencialmente, desde cerca de 38 kg/h a cerca de 40 kg/h.

Numa realização preferida da invenção a duração da extração para o extrato de dióxido de carbono fluido supercrítico do farelo de adlay (B) é de cerca de 40 minutos a cerca de 100 minutos; mais preferencialmente, desde cerca de 50 minutos a cerca de 80 minutos.

Numa realização preferida da invenção, o extrato de dióxido de carbono fluido supercrítico do farelo de adlay (B) é extraído em presença de um co-solvente, tal como cerca de 1% a cerca de 10% de etanol a 95%.

Preferencialmente o extrato com dióxido de carbono supercrítico fluido inclui também um passo de condensação. A forma de condensar é bem conhecida pelos artesãos com conhecimentos nesta área, por exemplo por um condensador de pressão reduzida.

De acordo com a invenção, a relação em peso entre o extrato de álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A) e o extrato de farelo de adlay por dióxido de carbono fluido supercrítico situa-se desde cerca de 3:1 a cerca de 1:4. Neste intervalo, o efeito farmacêutico no tratamento de uma doença da pele e/ou do tecido subcutâneo é muito efetivo; preferencialmente, a relação situa-se entre cerca de 3:2 e cerca de 1:2; mais preferencialmente, a relação é de cerca de 3:2, cerca de 3:1, cerca de 1:2 ou cerca de 1:4.

Numa realização preferida da invenção, o extrato de farelo de adlay é sujeito a um ensaio de cromatografia líquida de elevado desempenho. A amostra é preparada com uma concentração de 1 g/mL, utilizando acetona como solvente e filtrada através de um filtro de 0,45 μπι. Analisaram-se 20 μ]1 de amostra filtrada num aparelho de análise por HPLC Hitachi®. A coluna foi uma coluna C18 de fase reversa (250 x 4,6 mm, d.i,, YMC Co., INC) e o detetor foi um detetor de foto diodos. A temperatura da coluna foi de 40°C. Os cromatogramas foram extraídos a 280 nm. A fase móvel utilizou Solução A: 5% de ácido acético em água e Solução B: 0,5% de ácido acético em água/100% de aceto-nitrilo (1:1, v/v) . O program de grediente de eluição é mostrado na Tabela 1.

Tabela 1

O espetrograma do extrato em álcool Cl a C7 do farelo de adlay (A) é mostrado na FIG. 1; o espetrograma do extrato por dióxido de carbono supercrítico fluido do farelo de adlay (B) é mostrado na FIG. 2; e o espetrograma do extrato de farelo de adlay com a relação em peso de 1:4 entre o extrato de álcool Cl a C7 do farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono supercrítico fluido do farelo de adlay (B) é mostrado na FIG. 3. Como mostrado na FIG. 3, o espetrograma obtido compreende picos com tempos de retenção de cerca do minuto 12,5 a cerca do minuto 13,5, cerca do minuto 14 até cerca do minuto 15,5, cerca do minuto 15,5 até cerca do minuto 16,5, cerca do minuto 21 até cerca do minuto 22,5 e cerca do minuto 32 até cerca do minuto 35. A composição de acordo com a invenção é, preferencialmente, uma composição farmacêutica, uma composição alimentar ou uma composição cosmética. A composição farmacêutica de acordo com a invenção é, preferencialmente, administrada topicamente ou sistemicamente, segundo qualquer método conhecido na arte, incluindo, mas não se limitando, as vias intramuscular, intradérmica, intravenosa, subcutânea, intraperitoneal, intranasal, oral, mucosal ou vias externas. A via propriada, formulação e calendarização da administração podem ser determinados pelos técnicos da matéria. Na presente invenção, a composição farmacêutica pode ser formulada de diversas formas, de acordo com a via de administração correspondente, tal como uma solução liquida, uma suspensão, uma emulsão, um xarope, um comprimido, uma pílula, uma cápsula, uma formulação para libertação controlada, um pó, um grânulo, uma ampola, uma injeção, uma infusão, um "kit", uma pomada, uma loção, um linimento, um creme ou uma combinação destes. Se necessário, pode ser esterilizado ou misturado com qualquer veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, muitos dos quais são conhecidos pelos técnicos da matéria; ver parágrafo [0037], por exemplo. A via externa, tal como aqui utilizado, também é conhecida como administração local e inclui, mas não se limita, à administração por insuflação e inalação. Exemplos de diversos tipos de preparações para administração local incluem pomadas, loções, cremes, geles, espumas, preparações para dosagem por compressas transdérmica, pós, pulverizações, aerossoles, cápsulas ou cartuchos para utilização num inalador ou insuflador ou gotas (e.g., gotas oculares ou nasais), soluções/suspensões para nebulização, supositórios, pessários, enemas de retenção, comprimidos ou granulados mastigáveis ou chupáveis ou preparações em lipossomas ou microencapsuladas.

As pomadas, cremes e geles podem, por exemplo, ser formuladas com uma base aquosa ou oleosa com a adição de agentes espessantes e/ou gelificantes e/ou solventes adequados. Tais bases podem, assim, incluir, por exemplo, água e/ou óleo, tal como parafina liquida, ou um óleo vegetal, tal como óleo de amendoim ou óleo de rícino ou um solvente como o polietileno glicol. Os agentes espessantes e agentes gelificantes que podem ser utilizados de acordo com a natureza da base, incluem parafina mole, estearato de alumínio, álcool cetoestearílico, polietileno glicóis, gordura de lã, cera de abelhas, carboxipolimetileno e derivados de celulose e/ou monoestearato de glicerilo e/ou agentes emulsionantes não iónicos.

As loções podem ser formuladas com uma base aquosa ou oleosa e em geral conterão também um ou mais agentes emulsionantes, agentes estabilizantes, agentes dispersantes, agentes de suspensão ou agentes espessantes.

Os pós para aplicação externa podem ser formados com o auxílio de qualquer base adequada em pó, por exemplo, talco, lactose ou amido. Podem ser formuladas gotas com uma base aquosa ou não aquosa, contendo também um ou mais agentes de dispersão. Agentes solubilizantes, agentes de suspensão ou preservantes.

As composições pulverizáveis podem, por exemplo, ser formuladas comosoluções aquosas ou suspensões ou como aerossoles libertados a partir de embalagens pressurizadas, tal como um inalador com dose calibrada, com a utilização de um propelente liquefeito adequado. As composições de aerossol adequadas para inalação podem ser ou uma suspensão ou uma solução. A composiçãp de aerossol pode opcionalmente conter excipientes de formulação adicionais bem conhecidos na arte, tais como surfatantes, e.g., ácido oleico ou lecitina e co-solventes, e.g., etanol.

As preparações tópicas podem ser administradas em uma ou mais aplicações por dia na área afetada; podem ser vantajosamente utilizadas ligaduras de oclusão sobre as áreas da pele. A libertação contínua ou prolongada pode ser conseguida com um sistema adesivo com reservatório. A composição cosmética de acordo com a invenção pode ser uma formulação em fase aquosa consistindo essencialmente em água; pode também conter uma mistura de água e de um solvente miscível em água (miscibilidade com água superior a 50%, em peso, a 25°C), por exemplo, monoal-coóis inferiores contendo de 1 a 5 átomos de carbono, tais como etanol ou isopropanol, glicóis contendo de 2 a 8 átomos de carbono, tal como propileno glicol, etileno glicol, 1,3-butileno glicol ou dipropileno glicol, C3-C4 cetonas e C2-C4 aldeídos e glicerina. Tal formulação aquosa estará, preferencialmente, sob a forma de uma formulação em gel aquoso ou hirogel. A formulação em hidrogel inclui um agente espessante para espessar a solução líquida. Exemplos de agentes espessantes incluem, mas não se limitam a, carbómeros, materiais com base em celulose, gomas, algina, agár, pectinas, carragenano, gelatina, espessantes minerais ou minerais modificados, polietileno glicol e poliálcoois, poliacrilamida e outros espessantes poliméricos. São preferencialmente utilizados os agentes espessantes que conferem caraterísticas ótimas de estabilidade e fluidez. A composição cosmética de acordo com a presente invenção pode estar sob a forma de uma formulação em emulsão ou creme. Pode conter surfatantes emulsionantes. Estes surfatantes podem ser escolhidos entre surfatantes aniónicos e não iónicos. Deve ser efetuada referência ao documento "Encyclopedia of Chemical Technology, Kirk-Othmer", volume 22, pp. 333-432, 3a edição, 1979, Wiley, para a definição das propriedades e funções (emulsionantes) dos surfatantes, em particular às páginas 347-377 da referência referida, para os surfatantes aniónicos e não iónicos.

Os surfatantes preferencialmente utilizados na composição cosmética de acordo com a invenção são escolhidos entre: surfatantes não iónicos: ácidos gordos, álcoois gordos, álcoois gordos polietoxilados ou poliglicerolados, tal como álcool estearílico ou cetilestearílico polietoxilado, ésteres de ácidos gordos de sacarose, esteres de alquilglucose, em particular esteres gordos polioxietilenados de C1-C6 alquil glucose e misturas destes; surfatantes aniónicos: ácidos gordos C16-C30 neutralizados com aminas, amónia aquosa ou sais alcalinos e misturas destes. São preferencialmente utilizados surfatantes que tornem possível obter-se uma emulsão óleo-em água ou cera-em-água. A composição cosmética de acordo com a invenção pode também incluir uma quantidade eficaz de um antioxidante fisiologicamente aceitável selecionado de um grupo consistindo em p-cresol butilado, éter monometílico de hidroquinona butilada e um tocoferol. A composição cosmética de acordo com a invenção pode também incluir um amino ácido natural ou modificado, um composto esterol natural ou modificado, colagénio natural ou modificado, proteína de seda ou proteína de soja.

As composições cosméticas de acordo com a invenção são preferencialmente formuladas para aplicação tópica a materiais queratinosos, tais como pele, cabelo, sobrancelhas ou unhas. Podem estar em qualquer forma de apresentação normalmente utilizada para este tipo de aplicação, especialmente sob a forma de uma solução aquosa ou oleosa, uma emulsão óleo-em-água ou água-em-óleo, uma emulsão em silicone, uma microemulsão ou nanoemulsão, um gel ou um líquido aquoso ou oleoso, pasta ou produto sólido anidro. A composição cosmética de acordo com a invenção pode ser mais ou menos fluida e pode possuir o aspeto de um creme branco ou colorido, de uma pomada, leite, loção, soro, pasta, espoma ou gel. Pode. Opcionalmente, ser topicamente aplicado na pele sob a forma de um aerossol, uma compressa ou um pó. Pode estar também em forma sólida, por exemplo, na forma de um "stick". Pode ser utilizada como produto de higiene e/ou como produto de maquilhagem para a pele. Alternativamente, pode ser formulado como shampôs ou condicionadores.

De forma conhecida, a composição cosmética de acordo com a invenção pode também conter aditivos e adjuvantes que são vulgares nos cosméticos, tais como agentes gelificantes hidrofílicos ou lipofílicos, preservantes, antioxidantes, solventes, fragrâncias, agentes de volume, pigmentos, absorventes de odores e materiais corantes. 0 extrato de farelo de adlaypode ser adicionado a uuma composição alimentar convencional (i.e., alimento ou bebida edível ou seus precursores) no processo de manufatura da composição alimentar. Quase todas as composições alimentares podem ser suplementadas com o extrato de farelo de adlay da invenção. As composições alimentares que podem ser suplementadas com o extrato de farelo de adlay incluem, mas não se limitam a, doces, produtos panificados, gelados, produtos lácteos, "snacks" doces e aromatizados, "snacks" em barras, produtos de substituição de refeições, comidas rápidas, sopas, massas, "noodles", comidas enlatadas, comidas congeladas, comidas secas, comidas refrigeradas, óleos e gorduras, comidas para bebés ou alimentos pouco consistentes pintados no pão ou misturas destes. A invenção também proporciona um método para tratamento de uma doença de pele e/ou do tecido subcutâneo num sujeito, compreendendo a administração ao referido sujeito de uma quantidade eficaz de extrato de farelo de adlay e, opcionalmente, um veiculo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, em que o extrato de farelo de adlay compreende o extrato em álcool Cl a Cl do farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono fluido supercritico de farelo de adlay (B) e a relação em peso entre o extrato em álcool Cl a C7 do farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono fluido supercritico de farelo de adlay (B) situa-se entre cerca de 3:1 até cerca de 1:4. A invenção também proporciona a utilização de um extrato de farelo de adlay para a manufatura de um medicamento para tratamento de uma doença de pele e/ou do tecido subcutâneo, em que o extrato de farelo de adlay compreende o extrato em álcool Cl a C7 do farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono fluido supercrítico de farelo de adlay (B) e a relação em peso entre o extrato em álcool Cl a C7 do farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono fluido supercrítico de farelo de adlay (B) situa-se entre cerca de 3:1 até cerca de 1:4. A "doença na pele e/ou no tecido subcutâneo", tal como aqui utilizado, refere-se a uma doença ocorrendo na pele e/ou no tecido subcutâneo. Numa realização preferida da invenção, a doença da pele e/ou do tecido subcutâneo é selecionada do grupo que consiste em inflamação, lesão do foliculo capilar, atrofia cutânea, contusão, queimadura, queilite, pele seca, ruborização, alopecia, hiperpigmentação, hipopigmentação, endurecimento, fibrose, reação no local de injeção, alteração de extravasamento, troca de unha, fotossensibilidade, prurido, irritação, erupção, descamação, acne, acneiforme, dermatite associada com radiação, eritema multiforme, reação cutânea mão-pé, gretas cutâneas, úlceras de decúbito, estrias, telangiectasia, ulceração e urticária.

Numa realização preferida da invenção, a doença da pele e/ou do tecido subcutâneo é provocada por radiação. Preferencialmente, a radiação é radiação de terapia com radiação para tratamento de um tumor. 0 tumor é, preferencialmente, um tumor da mama ou um tumor do pulmão. A invenção proporciona ainda um método para diminuição da interleucina-la, interleucina-ΐβ, interleu-cina-6, fator a de necrose tumoral, interleucina-8, prosta-glandina-2 e/ou Proteína Reativa C num sujeito, que compreende a administração ao referido sujeito de uma quantidade eficaz de um extrato de farelo de adlay e, opcionalmente, um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, em que o extrato de adlay compreende o extrato em álcool Cl a C7 do farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono fluido supercrítico de farelo de adlay (B) e a relação em peso entre o extrato em álcool Cl a C7 do farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono fluido supercrítico de farelo de adlay (B) situa-se entre cerca de 3:1 até cerca de 1:4. A invenção também proporciona a utilização do farelo de adlay na manufatura de um medicamento para diminuição da interleucina-la, interleucina- ΐβ, inter-leucina-6, fator a de necrose tumoral, interleucina-8, prostaglandina-2 e/ou Proteína Reativa C num sujeito, que compreende a administração ao referido sujeito de uma quantidade eficaz de um extrato de farelo de adlay e, opcionalmente, um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, em que o extrato de adlay compreende o extrato em álcool Cl a Cl do farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono fluido supercrítico de farelo de adlay (B) e a relação em peso entre o extrato em álcool Cl a C7 do farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono fluido supercrítico de farelo de adlay (B) situa-se entre cerca de 3:1 até cerca de 1:4.

Os exemplos que se seguem são proporcionados apenas com finalidade ilustrativa e não se destinam a limitar o âmbito da presente invenção.

Exemplo 1: Modelo Animal Fármacos e reagentes: Sementes de adlay (C. lachrymajobi L., Taichung Shuenyu n°. 4, TSC4),adquiridas aos agricultores na região de Taichung, Taiwan. 0 extrato em álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A): removeram-se a casca e a cobertura da semente de adlay utilizando um moinho e moeu-se o farelo de adlay até se obter um pó, imergiu-se em três volumes de etanol a 95% (p/v) a 25°C e sujeitou-se a extração por vibração ultrasónica durante 24 horas. Combinaram-se os extratos de três extrações a condensaram-se sob pressão reduzida, a 50°C, até ao extrato de farelo de adlay em etanol obtido.

Extrato de farelo de adlay por dióxido de carbono fluido supercrítico (B): são removidos a casca e o revestimento da semente de adlay utilizando um moinho e o farelo de adlay é moído até um pó e colocado num tanque de extração interior, sendo depois o tanque interior colocado num tanque de extração num equipamento de extração super-crítica. As condições de extração são: pressão de extração: 360 bar; temperatura de extração: 55°C; fluxo de dióxido de carbono: 38 a 40 kg/h; co-solvente: 2% de etanol a 95%; duração da extração: 60 min. O estrato é recolhido e condensado por meio de um condensador de pressão reduzida.

Relação em peso de extrato: a dose de alimentação do extrato de farelo de adlay foi selecionada como sendo de 100 mg/kg e 100 μϋΟ/άιη, e o volume do tubo de alimentação de 100 μΒ/πηι^3η]ιο. O extrato de farelo de adlay utilizado nas experiências foi suspenso em 0,5% de CMC (carboximetil celulose) por meio de vibração ultrassónica e foi proporcionado através de um tubo, tendo os murganhos sido savrifiçados no dia 35. As 25 doses diferentes proporcionadas foram obtidas combinando a dose proporcionada do extrato em álcool Cl a C7 do farelo de adlay (A), que foram de 0, 100, 200, 300 e 400 mg/kg e a dose de extrato de dióxido de carbono supercrítico fluido de farelo de adlay (B) , que foram 0, 100, 200, 300 e 400 mg/kg, sendo o volume do tubo de alimentação de 100 μ]4/^^η]αο/άί3.

Discussão sobre a atividade e mecanismos do extrato contra os efeitos laterais da inflamação da pele provocada por terapia com radiação de tumores animais: A cápsula de adlay é administrada a animais através de um tubo (grupo de teste, extrato A: extrato B de 1:4) e o efeito das diferentes dosagens no alívio dos efeitos laterais da inflamação da pele provocada por terapia com radiação, é testado. No modelo animal, implantaram-se células do cancro da mama (4T1, 1 x 106 células/murganho) nas pernas de murganhos BALB/c e quando o tumor atingiu um diâmetro de cerca de 4 mm, administraram-se diferentes doses de amostras de teste através do tubo e dois dias mais tarde iniciou-se a terapia com radiação (5 Gy de irradiação por dia, cinco dias no total), administrando-se o extrato de adlay diariamente através do tubo, até ao fim da experiência. No processo experimental mediram-se diáriamente o tamanho do tumor e o peso foram medidos diariamente e o sangue amostrado de cinco em cinco dias. Foi utilizado o agente Sulfasil, para tratamento de lesões cutâneas na terapia com radiação atual, como grupo de controlo. Depois de os murganhos terem sido sacrificados, efetuaram-se cortes dos tecidos tumorais submetidos a terapia por radiação, abrangendo a epiderme e o tecido com foliculos pilosos foram patologicamente examinadose determinou-se a lesão das células epidérmicas e fibroblastos no tecido epidérmico, adotando um ensaio TUNEL, em combinação com a patologia e deteção de moléculas relacionadas com a inflamação, tais como NF-kB, COX-2, IL-Ιβ e TNF-a, utilizando imunocoloração. Os resultados dos cortes são mostrados na FIG. 4.

Os resultados das alterações de peso são mostrados na FIG. 5, tendo as amostras de teste sido administradas aos animais com tumores simultaneamente com a administração de terapia por radiações e não existiu uma diferença significativa de alterações de peso entre os grupos; pode ser percebido a partir da FIG. 6 que as amostras de teste são administradas aos animais com tumores quando é administrada a terapia por radiação, reduzindo-se significativamente o volume do tumor, em comparação com o grupo "branco" e não existiu diferença significativa entre os grupos a que se administrou terapia com radiação.

Noutro aspeto, as cápsulas de adlay (grupo de teste, extrato A:extrato B de 1:4) de 200 e 400 mg/kg reduziram significativamente a inflamação cutânea causada pela terapia com radiação e, ao mesmo tempo, inibiram o aumento de IL-la (FIG. 7), IL-Ιβ (FIG. 8), IL-6 (FIG. 9), TNF-a (FIG. 10), IL-8 (FIG. 11), PGE2 (FIG. 12) e CRP (FIG. 13) no soro, provocado pela terapia por radiação; a cápsula de 100 mg/kg de adlay teve um efeito inibitório significativo meramente em alguns índices. Pode observar-se a partir dos resultados que as cápsulas de adlay de 200 e de 400 mg/kg possuíram efeitos significativos na redução das lesões nos tecidos pilosos e inibiram os índices de fatores inflamatórios no animal in vivo.

Alívio de doenças da pele e/ou subcutâneas provocadas por terapia com radiação: Os passos são realizados como descrito na avaliação de segurança, exceto por a classificação toxicológica da resposta epidérmica in vivo, provocada pela terapia do tumor com radiação, ser efetuada de sete em sete dias no processo do estudo. No método de classificação da resposta toxicológica da epiderme in vivo, adotou-se o sistema CTCAE (Common Terminology Criteria for Adverse Events v3.0), que é o mais vulgarmente utilizado em avaliação toxicológica em tratamento clinico, sendo a classificação realizada respetivamente por observação macroscópica e microscopia de biópsia de tecido patológico em fisiologia vlinica, sendo a avaliação quantitativa realizada utilizando uma tabela de índices de resposta cutânea. Efetuaram-se cortes de tecidos patológicos da parte tratada. Os resultados são mostrados na FIG. 14.

Na quantificação da resposta cutânea utilizou-se a aplicação CompuSyn (para Drug Combinations and for General Dose-Effect Analysis) para calcular a combinação de efeitos sinergísticos dos materiais experimentais no alívio das respostas da pele e do tecido piloso às lesões causadas pela terapia com radiação. Os resultados são mostrados na Tabela 2:

Tabela 2:

Quanto ao índice de Combinação (Cl), de acordo com as definições, se o valor de CI<1, existe efeito aditivo, se o valor de CI=1, o efeito é independente e se o valor de CI>1 existe um efeito antagonístico, sendo mostrada na Tabela 2 uma combinação dos quatro melhores Cl (CI<0,8) obtidos ao longo do decorrer da experiência, indicando inibição significativa da inflamação no tecido piloso, em que extrato A:extrato B se situa no intervalo de 3:1 a 1:4.

Pode observar-se, a partir dos resultados na Tabela 2 e na FIG. 14 que, nesta realização do modelo de radiação do tumor no animal, a inflamação, lesão dos foliculos pilosos, perda de pelo, dermatite por radiação e/ou respostas mão-pé dos animais podem ser aliviadas. Assim, o extrato de farelo de adlay de acordo com a presente invenção pode ser utilizado para tratamento de doenças da pele e/ou do tecido subcutâneo, especialmente inflamação, lesão dos foliculos pilosos, perda de pelo, dermatite por radiação e/ou respostas mão-pé.

Exemplo 2: Experimentação humana no alivio de efeitos laterais da terapia com radiação em pacientes com cancro da mama

Administraram-se duas cápsulas de adlay (grupo de teste, extrato A:extrato B de 1:4) ou cápsulas de óleo de oliva (grupo de controlo, 500 mg/cápsula), após o pequeno almoço e jantar, sendo administrado um total de quatro cápsulas por dia.

Neste ensaio clinico adotou-se o método de agrupamento prospetivo e aleatório, duplamente cego, sendo designados um grupo de teste e um grupo de controlo, sendo o ensaio clinico realizado em duas fases: num primeiro estádio é testado em primeiro lugar a resposta de pessoas vulgares à cápsula de adlay, sendo administradas duas cápsulas (500 mg/cápsula) após o pequeno almoço e jantar, diariamente, sendo administrado um total de quatro cápsulas por dia e continuando-se a administração durante quatro semanas. Efetuou-se o exame do sangue antes do teste, incluindo a rotina sanguínea, função hepática (incluindo GOT e GPT), função renal (incluindo BUN e CRTN), parâmetros rotineiros sanguíneos (incluindo colesterol, HDL, LDL, TG e açúcar AC) . Após quatro semanas de administração contínua, efetuaram-se novamente os mesmo exames ao sangue e após determinação da não existência de efeitos laterais significativos, iniciou-se o segundo estádio de testes para determinar se a cápsula de adlay pode efetivamente reduzir as respostas cutâneas provocadas pela radiação, quando pacientes com cancro da mama recebem terapia por radiação e se exite uma melhoria da qualidade de vida. Alterações da função imune antes e depois de os pacientes com cancro da mama receberem terapia por radiação foram determinadaspor meio de exame do sangue, determinando-se se a cápsula de adlay pode efetivamente melhorar a resposta imune e realizando a análise estatística sobre as respostas cuâneas clínicas e alterações fisiológicas.

No segundo estádio de teste, os pacientes que satisfizeram as condições foram divididos em dois grupos; um grupo é o grupo de teste e o outro grupo é o grupo de controlo. Para o grupo de teste, no período de terapia com radiação, foram administradas duas cápsulas de adlay (500 mg/cápsula) após o pequeno almoço e jantar, diariamente, sendo administrado um total de quatro cápsulas por dia, continuando-se a administração durante 5 a 7 semanas; para o grupo de controlo, administrou-se um substituto (placebo, sendo o conteúdo óleo de oliva) , com a mesma embalagem e mesma forma de administração. Os dois grupos foram sujeitos a exames sanguíneos, questionário sobre qualidade de vida e exame físico da pele, antes e depois do tratamento. Número de pacientes:

Primeiro estádio: 10 pessoas vulgares.

Segundo estádio: 80 pacientes com cancro da mama no grupo de teste e no grupo de controlo, respetivamente. 170 sujeitos no total dos dois estádios. Método de avaliação:

Teste de segurança no primeiro estádio: os sujeitos foram sujeitos a exame de sangue para exame rotineiro do sangue, função hepática, função renal e parâmetros sanguíneos rotineiros, para determinar seres-postas anormais sérias foram provocadas devido à administração da cápsula de adlay. No segundo estádio: após um paciente com cancro da mama ter concordado em aceitar o teste e assinado um formulário de consentimento, após explicação, foi aleatoriamente atribuído ao grupo de teste ou ao grupo de controlo e sujeito a exame sanguíneo, a rotina sanguínea, função hepática (incluindo GOT e GPT), função renal (incluindo BUN e CRTN), citoquinas (incluindo IL-1, IL-6 e IL-8) e parâmetros rotineiros sanguíneos (incluindo colesterol, HDL, LDL, TG e açúcar AC) , questionário sobre qualidade de vida e fadiga, exame físico da pele (incluindo valor de pH, humidade e gordura sobre a superfície da pele, função humectante, cor, emperatura, elasticidade e ultrasson Doppler da pele) . Depois de se ter a terapia com radiação, foram registados semanalmente as respostas cutâneas e o exame físico do paciente, incluindo a resposta cutânea e alterações de cor na parede toraxica tratada. Depois de ter terminado a terapia com radiação os pacientes foras sujeitos a exame sanguíneo, questionário sobre qualidade de vida e exame físico da pele, de modo semelhante ao efetuado antes do tratamento.

Terapia com radiação:

Os pacientes com cancro da mama receberam terapia com radiação durante 5 a 7 semanas, tomando os sujeitos a cápsula de adlay ou o substituto, oralmente e diariamente. Na terapia com radiação os limites e o volume do tratamento foram formulados por meio de tomografia computorizada e a distribuição da dose e a uniformidade da dose foram obtidas por meio de um sistema operacional de tratamento, tendo as respostas da pele e outros efeitos laterais sido registados aquando da visita do paciente, todas as semanas.

Resultados:

Realizaram-se exames ao sangue antes e depois da administração do produto de teste, continuando-se a administração durante quatro semanas, tendo um paciente sofrido de distensão abdominal e não se tendo verificado efeitos adversos ou efeitos laterais sérios.

No segundo estádio de testes participaram 67 pacientes na seleção de sujeitos, tendo sido admitidos 51 pacientes, não pretendendo 16 pacientes entre os selecionados participar neste programa devido a alergia, edema e desconforto das extremidads inferiores causado por tratameto químico, por incapacidade de cooperar devido a afazeres laborais, por não terem essa intenção ou por terem ingerido demasiados fármacos, o que os tornou incapazes de participar no tratamento, tendo os restantes pacientes assinado o formulário de consentimento, pelo que foram sujeitos a exame ao sangue, exame físico da pele, registo fotográfico da parte afetada, questionário e administração do produto de teste.

Num segundo estádio, 2 pacientes sofreram distensão abdominal e um paciente apresentou fezes líquidas, tendo um paciente deixado de participar no teste devido a efitos laterais, tal como distensão abdominal, e outro abandonou o teste.

De acordo com o plano de tratamentos, o período de tratamento para cada sujeito era de cerca de 5 a 7 semanas e esperava-se que fossem admitidos 160 sujeitos. De modo a melhorar a determinação dos sujeitos em participar neste plano,aumentou-se o números de amostragens, aumentou-se a segurança da recolha de dados, ajustou-se a relação entre o grupo de teste e o grupo de controlo para de 1:1 a 2:1. O número de casos individuais em que os dados eram analizáveis foi de 27 e os resultados analíticos são mostrados da Tabela 3 até à Tabela 6. A Tabela 3 mostra uma comparação entre os valores médios dos exames de sangue de pessoas vulgares, antes e depois da administração da cápsula de adlay no primeiro estádio, não existindo diferença entre o antes e o após a administração, entre o grupo de teste e o grupo de controlo, indicando que a cápsula de adlay não afeta as funções do fígado e rim.

Tabela 3:

A Tabela 4 mostra os índices RTOG/EORTC, classificando a resposta cutânea quando os pacientes com cancro da mama receberam tratamento e pode verificar-se a partir da análise preliminar dos resultados que 3/14 (21,4%) dos pacientes no grupo de teste tiveram um grau de resposta cutânea superior ale 6/13 (46,2% dos pacientes no grupo de controlo possuíram um grau de resposta cutânea superior a 1.

Tabela 4:

Grau Ο: sem resposta

Grau 1: com folículos claros, eritema, perda de cabelo, redução da sudação e descamação seca.

Grau 2: com eritema moderado e descamação e edema de infiltração irregular, mais óbvias nas pregas da pele, na maioria dos pacientes.

Grau 3: com descamação e trauma de infiltração, e abrasão e sangramento.

Grau 4: com necrose, úlcera, sangramento espontâneo e outros sintomas.

Grau 5: morte. A tabela 5 mostra caraterísticas clínicas e patológicas de pacientes com cancro da mama, após administração da cápsula de adlay, onde não existiu diferença na distribuição entre o grupo de teste e o grupo de controlo.

Tabela 5:

Estádio clínico do 0,733 tumor primário 0 1 (7,1%) 1 (7,7%) 1 3 (21,4%) 1 (7,7%) lb 0 (0,0%) 1 (7,7%) lc 3 (21,4%) 5 (38,5%) 2 5 (35,7%) 4 (30,8%) 3 1 (7,1%) 0 (0,0%) is 1 (7,1%) 1 (7,7%)

Estádio clínico do 0,340 tumor primário la 3 (21,4%) 1 (7,7%) lb 3 (21,4%) 3 (23,1%) lc 3 (21,4%) 5 (38,5%) 2 3 (21,4%) 2 (14,3%) 3 2 (14,3%) 0 (0,0%) is 0 (0,0%) 2 (14,3%)

Classificação 0,308 patológica

Carcinoma ductal 13 10 (76,9%) infiltrante (92,9%)

Carcinoma lobular 1 (7,1%) 1 (7,7%) infiltrante

A Tabela 6 mostra alterações do exame do sangue antes e depois do tratamento dos pacientes com cancro da mama, após terapia com radiação, não existindo diferenças significativas.

Tabela 6:

Os resultados desta realização mostram que pele seca, endurecimentos, irritações, descamações, acne, aritema multiforme, gretas cutâneas e/ou ulceração nos pacientes com cancro da mama podem ser aliviados; adicionalmente, o extrato de farelo de adlay de acordo com a presente invenção pode ser utilizado para tratar doenças da pele e/ou do tecido subcutâneo, especialmente pele seca, endurecimentos, irritações, descamações, acne, aritema multiforme, gretas cutâneas e/ou ulceração.

Apesar de as realizações da presente invenção terem sido ilustradas e descritas, os técnicos da matéria poderão efetuar várias modificações e melhoramentos. Pretende-se que a presente invenção não seja limitada às formas particulares, como ilustrado. A presente invenção é definida pelas reivindicações que se seguem.

Claims (11)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Uma composição compreendendo um extrato de farelo de adlay, em que o extracto de farelo de adlay compreende um álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A) e um extrato por dióxido de carbono supercrítico fluido de farelo de adlay (B) , e em que a relação em peso entre o extrato em álcool Cl a C7 de farelo de adlay (A) e o extrato por dióxido de carbono supercrítico fluido de farelo de adlay (B) é desde cerca de 3:1 a cerca de 1:4.
2. 2. Composição de acordo com a Reivindicação 1, em que o adlay é Coix lachryma-jobi L..
3. 3. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, em que o álcool Cl a C7 é etanol.
4. 4. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, em que o álcool Cl a C7 é uma solução alcoólica com uma concentração entre desde cerca de 49% (v/v) a cerca de 99,9% (v/v).
5. 5. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, em que o extrato por dióxido de carbono supercrítico fluido de farelo de adlay (B) é extraído a uma pressão entre desde cerca de 150 bar a cerca de 500 bar e a uma temperatura desde cerca de 30°C a cerca de 80°C.
6. 6. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, em que a relação em peso entre o extrato em álcool Cl a C7 de farelo de adlau (A) e o extrato por dióxido de carbono supercrítico fluido de farelo de adlay (B) se situa entre cerca de 3:2 a cerca de 1:2.
7. 7. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, que é uma composição farmacêutica, uma composição alimentar ou uma composição cosmética.
8. 8. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, para utilização no tratamento de uma doença da pele e/ou do tecido subcutâneo.
9. 9. Composição para utilização de acordo com a reivindicação 8, em que a doença da pele e/ou do tecido subcutâneo é selecionada do grupo que consiste em inflamação, lesão do foliculo capilar, atrofia cutânea, contusão, queimadura, queilite, pele seca, ruborização, alopecia, hiperpigmentação, hipopigmentação, endurecimento, fibrose, reação no local de injeção, alteração de extravasamento, troca de unha, fotossensibilidade, prurido, irritação, erupção, descamação, acne, acneiforme , dermatite associada com radiação, eritema multiforme, reação cutânea mão-pé, gretas cutâneas, úlceras de decúbito, estrias, telangiectasia, ulceração e urticária.
10. 10. Composição para utilização de acordo com as reivindicações 8 ou 9, em que a doença da pele e/ou do tecido subcutâneo é causada por radiação.
11. 11. Composição para utilização de acordo com a reivindicação 10, em que a radiação é radiação de terapia por radiação para tratamento de um tumor.