PT2238458E - Método para prever a resposta a um tratamento farmacêutico para a obesidade - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO

"MÉTODO PARA PREVER A RESPOSTA A UM TRATAMENTO FARMACÊUTICO PARA A OBESIDADE"

Estão envolvidos múltiplos sistemas fisiológicos na regulação do peso corporal e na homeostasia energética e estes sistemas estão inter-relacionados através de múltiplos mecanismos complexos de resposta. Apesar dessa complexidade dar origem a uma multiplicidade de alvos terapêuticos passíveis de tratamento farmacológico, difícil e moroso, o complexo de inter-regulação também proporciona o desenvolvimento do tratamento farmacológico eficaz na obesidade e excesso de peso.

Além disso, geralmente quando é encontrado um agente farmacológico eficaz no tratamento da obesidade e/ou excesso de peso, as diferenças fisiológicas e/ou genéticas, entre os indivíduos, podem dar origem a grandes variações em termos de eficácia entre uma população de doentes; ou seja, há uma tendência para sub-populações de doentes serem respondedores ou não respondedores a um agente terapêutico com base na fisiologia individual. Como resultado, é difícil prever, antes de um ciclo de tratamento prolongado, se um determinado indivíduo irá ou não responder bem a um determinado agente terapêutico. 2 ΡΕ2238458

Seria de grande valor dispor de métodos para determinar, previamente ao ensaio clinico prolongado com a terapêutica para perda de peso, a probabilidade de um composto ter o efeito fisiológico desejado sobre o peso corporal e/ou sobre a homeostasia energética. Também seria de grande valor dispor de métodos para determinar previamente, se um indivíduo doente irá responder favoravelmente aos efeitos terapêuticos de um determinado agente farmacêutico para perda de peso, preferencialmente, antes do início de um ciclo de tratamento com esse agente. A presente invenção proporciona um biomarcador e métodos, sistemas e programas de computador, para a utilização de biomarcadores para testar a capacidade de um agente farmacêutico para modular o metabolismo das lipoproteínas e/ou triglicéridos num mamífero, que por sua vez, é indicador do provável benefício fisiológico no tratamento da obesidade e/ou excesso de peso.

Num aspecto da presente invenção, verificou-se que as alterações na concentração de partículas grandes de lipoproteínas ricas em triglicéridos da subclasse V6 (LRT V6) podem ser utilizadas como um biomarcador para a modulação do metabolismo das lipoproteínas e/ou triglicéridos, num mamífero, induzida por um agente farmacêutico para perda de peso. Especificamente, um agente farmacêutico adequado para o tratamento da obesidade ou excesso de peso através da modulação do metabolismo das lipoproteínas e/ou triglicéridos, produzirá uma redução na concentração das LRT V6, no mamífero. Do mesmo modo, uma forma de realização 3 ΡΕ2238458 da presente invenção, proporciona um método para a previsão da resposta de um ser humano, ao tratamento da obesidade ou excesso de peso, com um agente farmacêutico para perda de peso, compreendendo a determinação, no ser humano, se existe uma redução na resposta das LRT V6 em resposta a uma carga de gordura na presença de um agente farmacêutico quando comparado com a resposta das LRT V6 na ausência do agente farmacêutico. Outras formas de realização incluem, se o agente farmacêutico é um qualquer composto ou qualquer associação de dois ou mais compostos seleccionados independentemente do grupo consistindo, num antagonista do recep-tor 5-HT2c, um antagonista do receptor canabinóide 1 (CB-1), um inibidor da fosfodiesterase-10 (PDE-10), um antagonista do receptor tipo 1 da orexina, um inibidor da recaptação tripla da serotonina-noradrenalina-dopamina (IRSND), um inibidor da lipase e/ou um inibidor do receptor da absorção lipídica.

Num outro aspecto da presente invenção, é proporcionado um método para determinar se provavelmente, um indivíduo doente irá responder favoravelmente a um determinado agente farmacêutico para perda de peso, que é um método para prever se, um indivíduo doente a necessitar de tratamento para a obesidade e/ou excesso de peso, será um respondedor ou um não-respondedor ao tratamento com um determinado agente farmacêutico para perda de peso, através da determinação, se o agente produz uma redução na resposta das LRT V6, no doente. Em várias formas de realização deste aspecto da presente invenção, o agente farmacêutico para 4 ΡΕ2238458 perda de peso é qualquer composto ou qualquer associação de dois ou mais compostos, seleccionados independentemente do grupo consistindo, num agonista do receptor 5-HT2c/· um antagonista do receptor canabinóide 1 (CB-1), um inibidor da fosfodiesterase-10 (PDE-10), um antagonista do receptor tipo 1 da orexina, um inibidor da recaptação tripla da serotonina-noradrenalina-dopamina (IRSND), um inibidor da lipase e/ou um inibidor do receptor da absorção lipídica.

Numa outra forma de realização deste aspecto da invenção, é proporcionado um método para a determinação da adequação de um agente farmacêutico para perda de peso, no tratamento de um doente a necessitar de tratamento para a obesidade e/ou excesso de peso, compreendendo a administração ao doente de uma dose do agente farmacêutico para perda de peso, em conjunto com, a administração de uma carga de gordura ao doente, e depois, a determinação onde é que se verifica uma redução na resposta das LRT V6 à carga de gordura quando comparada com a resposta das LRT V6 do doente à carga de gordura, na ausência do agente farmacêutico, em que, uma redução significativa na resposta das LRT V6 indica, se o agente farmacêutico para perda de peso é adequado para o tratamento do doente e a ausência de uma redução significativa na resposta das LRT V6 indica que o agente farmacêutico para perda de peso não é adequado para o tratamento do doente.

Numa outra forma de realização deste aspecto da invenção, é o de proporcionar um método para a determinação 5 ΡΕ2238458 da adequação de um agente farmacêutico para perda de peso no tratamento de um doente a necessitar do tratamento para a obesidade e/ou excesso de peso, compreendendo os seguintes passos de: 1) administração ao doente de uma primeira carga de gordura; 2) medição da resposta das LRT V6 do doente à primeira carga de gordura; 3) administração ao doente de uma dose do agente farmacêutico para perda de peso, em conjunto com, a administração, ao doente, de uma segunda carga de gordura; 4) medição da resposta das LRT V6 do doente à segunda carga de gordura; 5) determinação se há uma redução na resposta das LRT V6 à segunda carga de gordura quando comparado com a resposta das LRT V6 à primeira carga de gordura; 6) determinação da adequação do agente farmacêutico para perda de peso com base na redução comparativa da resposta das LRT V6; em que uma redução significativa na resposta das LRT V6 indica que o agente farmacêutico para perda de peso é adequado para o tratamento do doente e a ausência de uma redução significativa na resposta das LRT V6 indica que o agente farmacêutico para perda de peso não é adequado para o tratamento do doente.

Ainda noutra forma de realização deste aspecto da invenção, é proporcionado um método para a determinação da 6 ΡΕ2238458 adequação de um agente farmacêutico para perda de peso no tratamento de um doente a necessitar de tratamento para a obesidade e/ou excesso de peso, compreendendo os seguintes passos de: 1) administração ao doente, de uma dose do agente farmacêutico para perda de peso, em conjunto com, a administração ao doente de uma carga de gordura; 2) medição da resposta das LRT V6 do doente à carga de gordura; 3) comparação da resposta das LRT V6 do doente à carga de gordura com a resposta das LRT V6 padrão à carga de gordura na ausência do agente farmacêutico para perda de peso; 4) determinação da adequação do agente farmacêutico para perda de peso com base no passo de comparação; em que, uma redução significativa na resposta das LRT V6 do doente, quando comparada com a resposta das LRT V6 padrão, indica que o agente farmacêutico para perda de peso é adequado para o tratamento do doente e a ausência de uma redução significativa na resposta das LRT V6 do doente quando comparada com a resposta das LRT V6 padrão, indica que o agente farmacêutico para perda de peso não é adequado para o tratamento do doente.

Numa outra forma de realização, é proporcionado um método para prever se um doente necessitando do tratamento para a obesidade e/ou excesso de peso será um 7 ΡΕ2238458 respondedor ao tratamento com um determinado agente farmacêutico para perda de peso, compreendendo os seguintes passos de: 1) administração ao doente de uma primeira carga de gordura; 2) medição da resposta das LRT V6 do doente à primeira carga de gordura; 3) administração ao doente de uma dose do agente farmacêutico em conjunto com a administração ao doente de uma segunda carga de gordura; 4) medição da resposta das LRT V6 do doente à segunda carga de gordura; 5) determinação se existe uma redução na resposta das LRT V6 do doente à segunda carga de gordura quando comparada com a resposta das LRT V6 do doente à primeira carga de gordura; e 6) previsão de que o doente será um respondedor, com base no passo de determinação, em que, uma redução significativa na resposta das LRT V6 prevê que, provavelmente o doente será um respondedor.

Numa outra forma de realização, é proporcionado um método para prever se um doente necessitando do tratamento para a obesidade e/ou excesso de peso será um respondedor ao tratamento com um determinado agente farmacêutico para perda de peso, compreendendo os passos de: 1) administração ao doente de uma dose do agente farmacêutico para perda de peso em conjunto com a 8 ΡΕ2238458 administração ao doente de uma carga de gordura; 2) medição da resposta das LRT V6 do doente à carga de gordura; 3) comparação da resposta da V6 do doente à carga de gordura com a resposta da V6 padrão à carga de gordura na ausência do agente farmacêutico para perda de peso; e 4) previsão de que o doente será um respondedor ao tratamento com o agente farmacêutico para perda de peso com base no passo de comparação; em que, uma redução significativa na resposta da V6 do doente quando comparada com a resposta da V6 padrão prevê se provavelmente o doente será um respondedor.

Num outro aspecto da presente invenção, é proporcionado um método para a determinação da capacidade de um agente farmacêutico afectar o metabolismo das lipoproteinas e/ou triglicéridos, num mamífero, compreendendo a determinação da redução na concentração das LRT V6 no mamífero, em resposta a uma carga de gordura e/ou uma dieta rica em gordura, quando comparada com uma resposta equivalente do placebo.

Um outro aspecto da invenção está relacionado com métodos para a avaliação da probabilidade de um doente responder favoravelmente a um agente farmacêutico para perda de peso. Os métodos incluem: (a) medição de um nível das LRT V6 em, pelo menos duas amostras do doente, in vitro, pelo menos, uma é recolhida em conjunto com a 9 ΡΕ2238458 administração do agente farmacêutico para perda de peso; (b) identificação electronicamente se existe uma redução no nivel das LRT V6 associada ao agente para perda de peso; e (c) avaliação da probabilidade de um doente responder favoravelmente ao agente farmacêutico para perda de peso com base no passo de identificação.

Breve Descrição das Figuras

Figura 1 é um gráfico dos sinais de RMN do grupo metilo dos lipidos para exemplificar subfracções de partículas lipoproteícas ricas em triglicéridos (subclasses) .

Figura 2 é uma ilustração esquemática de um sistema de RMN de acordo com as formas de realização da presente invenção.

Figura 3 é um diagrama esquemático para exemplificar um sistema de processamento de dados de acordo com as formas de realização da presente invenção.

Figura 4 é um diagrama esquemático para exemplificar um sistema de processamento de dados de acordo com as formas de realização da presente invenção.

Figura 5 é um esquema para exemplificar um relatório do ensaio realizado a um doente sobre uma avaliação das LRT V6, de acordo com, as formas de realização da presente invenção.

Agora a presente invenção será seguidamente descrita mais detalhadamente, em que são apresentadas as 10 ΡΕ2238458 formas de realização da invenção. No entanto, esta invenção pode ser realizada de diferentes formas e não deve ser interpretada como limitada às formas de realização aqui estabelecidas. Além disso, as formas de realização são proporcionadas, de modo que, esta descrição será minuciosa e completa, e irá transmitir totalmente o âmbito da invenção para os especialistas na matéria. Nos desenhos, os números referem-se no seu todo a elementos e, a espessura, tamanho e dimensões de alguns componentes, linhas ou funcionalidades podem estar exagerados para maior clareza. A ordem das operações e/ou os passos apresentados nas figuras ou, citados de novo nas reivindicações, não se destinam a limitar a ordem apresentada, excepto se indicação em contrário. As linhas tracejadas nas figuras, quando utilizadas, indicam que a funcionalidade, a operação ou o passo assim indicado é opcional, excepto quando indicado especificamente o contrário.

Conforme será apreciado por qualquer especialistas na matéria, algumas formas de realização da presente invenção, podem ser realizadas como, um aparelho, um método, um programa computacional e/ou sistema de processamento de sinal ou de dados. Deste modo, determinados métodos de formas de realização não requerem limitações de software, enquanto certas outras formas de realização podem assumir a forma de realização inteiramente por software ou uma forma de realização combinando aspectos de hardware e software. Além disso, determinadas formas de realização da presente invenção podem assumir a forma de um programa de 11 ΡΕ2238458 computador num suporte de armazenamento utilizável pelo computador dispondo de um código do programa utilizável pelo computador, o que significa, incorporado no suporte. Pode ser utilizado, qualquer suporte que permita a leitura informaticamente, incluindo, discos rígidos, CD-ROMs, dispositivos de armazenamento óptico, ou dispositivos magnéticos de armazenamento. 0 suporte utilizável ou legível pelo computador pode ser, mas não está limitado a um sistema electrónico, magnético, óptico, supercondutor magnético, infravermelho, ou semi-condutor, aparelho, dispositivo ou meio de propagação. Exemplos mais específicos (uma lista não exaustiva) do suporte legível por computador incluiriam o seguinte: uma ligação eléctrica possuindo um ou mais cabos, uma disquete para computador portátil, uma memória de acesso aleatório (RAM), uma memória somente de leitura (ROM), uma memória programável apagável somente de leitura (EPROM ou memória Flash), uma fibra óptica e um disco compacto - memória somente de leitura (CD-ROM) portátil. É de notar que o suporte informático utilizável ou legível pelo computador poderá até estar em papel ou qualquer outro suporte adequado, sobre o qual o programa é impresso, como o programa pode ser capturado electronicamente, por exemplo, através de digitalização óptica do suporte em papel ou outro, depois compilado, interpretado ou, se necessário, processado de outra forma, numa forma adequada, e em seguida armazenado na memória do computador. 12 ΡΕ2238458 0 código do programa do computador, para a realização das operações da presente invenção, pode ser escrito numa linguagem de programação orientada a objectos tais como Java7, Smalltalk, Python, Labview, C++ ou VisualBasic. No entanto, o código de programa de computador, para a realização de operações da presente invenção, também pode estar escrito em linguagem de programação de processo convencional, tal como, a linguagem de programação "C" ou, até mesmo, a linguagem Assembly. 0 código do programa pode ser inteiramente executado no computador do utilizador, ou em parte no computador do utilizador, como um pacote de software stand-alone ou auto-suficiente parcialmente no computador do utilizador e, parcialmente num computador de localização remota ou inteiramente no computador de localização remota. No último cenário, o computador de localização remota pode estar ligado ao computador do utilizador através de uma rede de área local (LAN) ou de uma rede de longa distância (WAN) ou a ligação pode ser efectuada a um computador externo (por exemplo através da Internet utilizando um provedor de serviço de Internet - Internet Service Provider) .

As formas singulares "um", "uma" e "o ou a", como aqui são utilizadas, destinam-se a incluir também as formas no plural, excepto se o contexto indicar claramente o contrário. Adicionalmente, deve ser entendido que, os termos "compreende" e/ou "compreendendo", quando utilizados nesta especificação, especifica a presença de funcionalidades, números inteiros, passos, operações, elementos 13 ΡΕ2238458 e/ou componentes indicados, mas não exclui a presença ou a adição de uma outra ou mais funcionalidades, números inteiros, passos, operações, elementos, componentes e/ou seus grupos. 0 termo "e/ou", como aqui é utilizado, inclui qualquer uma e todas as associações de um ou mais dos itens associados listados.

Salvo indicação em contrário, todos os termos aqui utilizados (incluindo termos técnicos e científicos) têm, o mesmo significado que normalmente é entendido por qualquer especialista na matéria a quem pertence esta invenção. Deverá ser também entendido que os termos, tais como aqueles definidos nos dicionários geralmente utilizados, devem ser interpretados como tendo um significado que é consistente com o seus significados no contexto do estado da arte relevante e deste pedido e não deve ser interpretado num sentido idealizado ou excessivamente formal excepto se definido expressamente neste documento.

Para os objectivos deste pedido, os seguintes termos terão os seguintes significados, salvo se indicado especificamente o contrário: 0 termo "IMC" significa índice de massa corporal, que é o peso de um indivíduo dividido pela sua altura ao quadrado (kg/m2) . 0 termo "estado de jejum" significa que o estado fisiológico de um indivíduo após um período superior a cerca de 6 horas sem comida ou bebidas contendo 14 ΡΕ2238458 calorias. Neste estado, o esvaziamento gástrico do indivíduo foi conseguido e os triglicéridos encontram- se num nível basal. 0 termo "excesso de peso" significa o estado de estar significativamente mais pesado do que o peso ideal para um determinado indivíduo.

As definições podem variar amplamente, mas para os objectivos gerais, um doente com um IMC entre cerca de 25 e cerca de 29,9 kg/m2 será considerado como tendo excesso de peso (Donato, PiSunyer et al. , 1998) . A invenção não é afectada pela definição exacta de excesso de peso como definido pelo actual padrão de IMC e todas estas definições devem ser consideradas como equivalentes. 0 termo "obesidade" significa o estado de estar com o peso gravemente acima do normal ou ter peso excessivo grave. As definições podem variar amplamente, mas para os objectivos gerais, um doente com um IMC >30,0 kg/m2 será considerado obeso (Donato, PiSunyer et al., 1998). A invenção não é afectada pela definição exacta de obesidade conforme definida pelo actual padrão de IMC e todas estas definições devem ser consideradas como equivalentes. 0 termo "carga de gordura" significa uma dose de lípidos suficiente para induzir a hiperlipidémia num indivíduo do ensaio e pode assumir a forma de uma carga de gordura administrada por via oral, uma perfusão intravenosa contendo gordura, um suplemento alimentar com elevado teor em gordura, uma refeição, 15 ΡΕ2238458 uma bebida rica em gordura, ou outras semelhantes. Está também contemplado que, a carga de gordura ou uma carga de gordura simulada, pode ser desenvolvida num agente farmacêutico que é utilizado para a fornecer. 0 termo "LRT V6" refere-se a subfracções ou partículas de LRT (lipoproteínas ricas em triglicéridos) com um diâmetro entre cerca de 90 nm até um máximo de cerca de 170 nm, mais tipicamente com diâmetros entre cerca de 100-140 nm. O termo "LRT V6" também pode ser definido relativamente ao sinal de RMN do deslocamento químico do grupo metilo dos lipídos (ppm), correspondendo aos diâmetros estimados conforme proporcionado na seguinte Tabela I. 0 termo "LRT V5" refere-se a partículas grandes das LRT com um diâmetro compreendido entre cerca de 60 nm e cerca de 80 nm (ver a Tabela 1 seguinte, relativamente aos deslocamentos químicos associados ao RMN). 0 termo "quilomícrones" refere-se a partículas muito grandes das LRT, com diâmetros maiores do que as LRT V6. Como tal, quilomícrones referem-se a subfracções ou partículas de LRT com um diâmetro compreendido entre cerca de 170 nm até cerca de 260 nm (ver a Tabela 1 seguinte relativamente aos seus deslocamentos químicos associados ao RMN). É importante notar-se que não existe uma demarcação nítida entre as LRT V5 e as LRT V6, nem entre as LRT V6 e as quilomícrones, de tal forma que, existe uma distribuição de tamanhos de partículas para cada subgrupo que se sobrepõem na gama entre cerca de 80-90 nm para as LRT V5-V6 e entre 16 ΡΕ2238458 cerca de 140-170 nm para as LRT V6 e as quilomícrones. O termo "resposta das LRT V6" significa o aumento na concentração dos triglicéridos das LRT V6 e/ou no número de partículas, de um mamífero ou doente em ensaio, tipicamente como resposta à administração de uma carga de gordura ou de uma dieta rica em gordura. Deve ser entendido que, em determinadas circunstâncias, pode ser vantajoso determinar as "LRT V", uma vez que para os objectivos deste pedido, entende-se como um subgrupo das LRT muito grande, que contêm tanto os subtipos de partículas de LRT V6 como os subtipos de partículas de LRT V5, como um substituto para a determinação apenas das concentrações das LRT V6, em que, sob algumas circunstâncias, a concentração das LRT V5 não apresenta uma resposta substancial à carga de gordura, deste modo, uma resposta em "LRT V" pode, em circunstâncias particulares, indicar-nos a resposta das LRT V6. No entanto, isto não é verdade para a determinação da concentração total das LRT ou dos triglicéridos (ou número de partículas) do grupo como um todo (como por exemplo, VLDL V total). Deve-se notar que a determinação das várias LRT pode ser reportada tanto como, a concentração e em última análise significar a concentração dos triglicéridos das mencionadas LRT na amostra, ou, como o número de partículas e em última análise significar a concentração das partículas de LRT na amostra. Como aqui definido, em ambos os casos dão os mesmos resultados relativamente à redução ou resposta das LRT V6. 17 ΡΕ2238458 0 termo "resposta de VLDL" significa o aumento no tamanho de partículas das subclasses Vl-6 das LRT como um grupo, num doente ou num mamífero em teste, em resposta à administração de uma carga de gordura ou dieta rica em gordura, o que aumenta é o efeito causado pelo aumento da concentração das LRT V6 (ou número de partículas) na distribuição por tamanhos dos tamanhos de partículas de VLDL, como uma classe (ou seja, a alteração no tamanho médio das sub-populações das LRT, V1-V6).

Uma redução significativa na resposta das LRT V6 significa uma redução estatisticamente significativa na concentração das LRT V6 determinada (ou número de partículas ou tamanho de partículas de VLDL) . Uma redução seria definida como uma alteração na resposta das LRT V6 que, pelo menos, reduza para valores inferiores ao intervalo de confiança do percentil 80° do limite inferior da distribuição entre determinações ocasionais medidas numa população de doentes, na ausência de um composto de teste ou agente farmacêutico para perda de peso. Para um qualquer protocolo do ensaio, o actual intervalo de confiança seleccionado para determinar uma resposta positiva a um composto de teste ou agente farmacêutico para perda de peso, dependerá do valor de previsão desejado do protocolo do ensaio. Como por exemplo, um protocolo de ensaio desejando proporcionar o menor número de falsos positivos nas reduções da resposta das LRT V6, irá seleccionar um intervalo de confiança de percentil mais elevado, digamos 18 ΡΕ2238458 por exemplo, o percentil 90° ou, por exemplo, o percentil 95°. Para protocolos de ensaio desejando menor número de falsos negativos, seria adequado intervalos de confiança inferiores, como por exemplo, o percentil 80°. O termo "agente farmacêutico para perda de peso" significa um composto farmacêutico (cujo termo inclui péptidos, anticorpos e, outros semelhantes), uma formulação ou composição, utilizada ou para ser utilizada no tratamento da obesidade ou excesso de peso, em que, se procura o beneficio terapêutico através da indução de perda de peso no doente e/ou a manutenção do peso após uma redução de peso. Entende-se que, um agente farmacêutico para perda de peso, como aqui é utilizado, pode compreender um ingrediente activo, ou uma associação de mais de um ingredientes activos, que podem ser tomados como um medicamento único associado ou como uma associação de medicamentos. De forma semelhante, o termo "perda de peso" refere-se à perda do peso actual e/ou à manutenção do peso dentro de um intervalo desejado, geralmente após uma redução no peso. O termo "bioamostra" inclui sangue total, plasma, soro, urina, liquido cefalorraquidiano (LCR), amostras linfáticas, amostras de fezes, tecidos e/ou fluidos corporais na forma bruta e/ou em preparações. No entanto, o sangue total ou as bioamostras plasmáticas podem ser particularmente adequadas para as formas de realização da presente invenção. As bioamostras podem ser recolhidas de 19 ΡΕ2238458 qualquer indivíduo em estudo. De acordo para a presente invenção, os indivíduos, podem ser, qualquer indivíduo da classe dos mamíferos (por exemplo, seres humanos, caninos, felinos, bovinos, caprinos, ovinos, equídeos, roedores (ratinhos, ratos, hamsteres, cobaias ou outros), suínos, primatas, macacos e/ou lagomorfos). Os animais podem ser animais de laboratório ou não de laboratório, ocorrendo naturalmente, por engenharia genética ou geneticamente modificados e/ou se alterados laboratorialmente, se estilo de vida e/ou dieta alteradas ou alterações em animais tratados por fármacos. 0 termo "automático" significa que praticamente todas ou mesmo todas as operações assim descritas podem ser realizadas sem necessidade de intervenção manual de um operador humano, e significa tipicamente que a(s) operação (ões) podem ser dirigidas e/ou realizadas por programação . 0 termo "electrónico" significa que o sistema, a operação ou o dispositivo podem comunicar utilizando qualquer suporte electrónico adequado e tipicamente utiliza o controlo da comunicação por programação, entre um sistema de controlo, que pode ser remoto e um ou mais aparelhos de RMN no local, utilizando uma rede de computadores.

As lipoproteínas incluem uma grande variedade de partículas encontradas no plasma, soro, sangue total e na linfa, compreendendo vários tipos e quantidades de 20 ΡΕ2238458 triglicéridos, colesterol, fosfolipídos, esfingolípidos e proteínas. Estas diversas partículas permitem a solubilização de outras moléculas lipídicas hidrófobas no sangue e desempenham uma variedade de funções relacionadas com a lipólise, lipogénese e o transporte lipídico entre o intestino, fígado, tecido muscular e tecido adiposo. As lipoproteínas sanguíneas ou plasmáticas têm sido classificadas de diversas maneiras, geralmente com base nas propriedades fisicas, tais como a densidade ou a mobilidade electroforética. A classificação baseada no tamanho de partícula, determinada por ressonância magnética nuclear, distingue pelo menos, 16 diferentes subtipos de partículas de lipoproteínas ricas em triglicéridos, incluindo 5 subtipos de lipoproteínas de alta densidade, 4 subtipos de lipoproteínas de baixa densidade e 6 subtipos de lipoproteínas de muito baixa densidade, designadas por LRT VI até V6 e quilomícrones. Para além destes subtipos de lipoproteínas e, em contraste com os outros subtipos, a presente invenção determinou que o maior subtipo de partículas de LRT, as LRT V6, pode ser utilizado como um biomarcador do metabolismo das lipoproteínas e/ou triglicéridos, em que, as concentrações das LRT V6, tornam-se previsivelmente elevadas após o consumo de uma refeição contendo gordura e depois retornam a níveis basais em determinado momento após a refeição quando o indivíduo em teste se aproxima de um estado de jejum.

Para correlacionar as caracterizações das partículas de LRT por RMN para os diâmetros estimados, a 21 ΡΕ2238458 seguinte Tabela 1 define o deslocamento químico para a gama das LRT V6, bem como, para as LRT V5 e quilomícrones. TABELA 1: Características das Subclasses de Lipoproteínas Ricas em Triglicéridos Determinadas por Análise por NMR LipoProfile

Subclasse Componentes da Deslocamento Diâmetro Subclasse das Químico por RMN Estimado LRT (ppm) (nm) Quilomícrones C-260 0,8477 260 Quilomícrones C-250 0,8470 250 Quilomícrones C-240 0,8464 240 Quilomícrones C-225 0,8457 225 Quilomícrones C-200 0,8443 200 Quilomícrones C-190 0,8440 190 Quilomícrones C-185 0,8436 185 Quilomícrones C-180 0,8429 180 Quilomícrones C-175 0,8422 175 Quilomícrones C-170 0,8416 170 LRT V6 V6-140 0,8402 140 LRT V6 V6-120 0,8388 120 LRT V6 V6-100 0,8374 100 LRT V5 V5-80 0,8361 80 LRT V5 V5-70 0,8347 70 LRT V5 V5-60 0,8333 60 A Tabela 1 ilustra os deslocamentos químicos, por 22 ΡΕ2238458 RMN, do protão das subclasses (subfracções) de lipopro-teínas ricas em triglicéridos (LRT) isoladas, que foram determinados relativamente ao sinal interno de referência de EDTA de Ca (2,519 ppm) . A Figura 1 ilustra os sinais caracteristicos de RMN exemplificativos das subclasses de LRT. As determinações por RMN foram realizadas num espec-trómetro de 400 MHz a 47 graus C. As subclasses LRT identificadas como quilomicrones foram isoladas a partir de espécimes plasmáticas pós-prandiais recolhidas em indivíduos humanos após a ingestão de uma refeição contendo gordura. As subclasses de LRT identificadas como LRT V6 ou LRT V5 foram obtidas a partir de espécimes plasmáticas obtidas em jejum a partir de indivíduos humanos sofrendo de hipertrigliceridemia. As subclasses LRT foram inicialmente isoladas por ultracentrifugação sequencial (densidade <0,94 g/m para quilomicrones e <1,006 g/mL para LRT V5-V6) e purificadas de novo por cromatografia de filtração em gel utilizando agarose em grânulos a 1% ou 2% (Bio-Rad, Hercules, CA) num tampão contendo KC1 a 120 mM, EDTA a 5 mM, CaCl2 a 1 mM, Na2HP04 a 50 mM e NaN3 a 0,2 g/L, pH 7,4. Os diâmetros estimados das lipoproteínas foram obtidos, a partir de determinações efectuadas em microscópio electró-nico, nas subclasses das LRT isoladas.

Assim, enquanto as LRT V6 têm sido definidas pelo diâmetro mencionado anteriormente, o deslocamento químico por RMN na Tabela 1 representa o equivalente aos intervalos do diâmetro definido. Assim, utilizando a avaliação por RMN, as LRT V6 também podem ser definidas como tendo 23 ΡΕ2238458 deslocamentos químicos compreendido entre cerca de 0,8374 e cerca de 0,8402 e as subfracções das LRT vizinhas (por exemplo, LRT V5 e quilomícrones) também têm os deslocamentos químicos observados na Tabela 1. Do mesmo modo, a definição de "LRT V6" também se refere a qualquer subtrac-ção das LRT que apresente deslocamento químico por RMN, conforme referido anteriormente (gama de determinações +/-razoável), quando medido conforme descrito, mesmo que o teste actual em questão utilize uma metodologia de avaliação sem RMN ou defina o parâmetro em relação à densidade ou, de qualquer outro modo, em vez do diâmetro.

Uma técnica conhecida para medir as partículas de LRT muito grandes, é por exemplo, a ultra-centrifugação por flotação, que utiliza uma separação com base na densidade. Redgrave et al. têm caracterizado as partículas pelas suas taxas de flotação (Sf, unidades Svedberg), em relação aos seus diâmetros estimados: >400 Sf incluem partículas >75 nm; 175-400 Sf incluem partículas entre 50-75 nm; 100-175 Sf incluem partículas entre 37-50 nm; e 20-100 Sf incluem partículas entre 20-37 nm. Ver, Redgrave et al., Alterações no tamanho, na composição e no conteúdo de lipo-proteínas de baixa densidade e de densidade muito baixa no plasma, após uma refeição rica em gordura em indivíduos do sexo masculino, normais e sofrendo de hipertrigliceridemia, Journal of Lipid Research, vol. 20 pp, 217-229 (1979). Ver também, Karpe et al. Differences in Postprandial Concentrations of Very-Low-Density Lipoprotein and Chylomicron Remnants Between Normotryglicyeridemic and 24 ΡΕ2238458

Hypert riglyceridemic Men With and Without Coronary Heart Disease, Metabolism, Vol. 48, N° 3 (Março), 1999, pp. 301-307. Assim, mesmo que não sejam caracterizadas só por si, com base no tamanho pelo método de ensaio, e se, as partículas separadas por densidades tiverem os deslocamentos químicos observados anteriormente, as partículas de LRT são partículas de LRT V6.

Além disso, a presente invenção determinou que o nível de triglicéridos pós-prandial está relacionado com o aumento da concentração das LRT V6. Estes níveis de triglicéridos podem ser atribuídos, quer aos triglicéridos hidrolisados no aparelho digestivo, quer aos ácidos gordos absorvidos ao nível do intestino e depois re-esterifiçados como triglicéridos e transportados para o sistema linfático ou para a circulação como quilomícrones, ou como VLDL excretadas pelo fígado. Num estado de equilíbrio energético positivo, como por exemplo, após a ingestão excessiva de alimentos, os triglicéridos são transportados como um componente de VLDL para ser armazenado no tecido adiposo, em oposição ou adicionalmente a outros tecidos, tal como os músculos, para a utilização da energia através da oxidação dos ácidos gordos. Assim, uma redução nos níveis de triglicéridos pós-prandial indicaria um aumento na oxidação de ácidos gordos e/ou uma redução na absorção de gordura e, em qualquer dos casos, correlaciona-se com uma redução no armazenamento lipídico. Em algumas formas de realização, a presente invenção demonstra especificamente que, uma redução na concentração das LRT V6 correlaciona-se com esta 25 ΡΕ2238458 redução no armazenamento lipídico, de tal forma que, determinações das alterações nas concentrações das LRT V6 devidas ao tratamento com um composto experimental ou com um agente farmacêutico para perda de peso, podem ser utilizadas como um biomarcador para efeitos sobre o metabolismo das lipoproteinas e/ou dos triglicéridos, particularmente, como um marcador para uma redução no armazenamento lipidico, incluindo a previsão se um determinado indivíduo doente será, um respondedor ou um não-respon-dedor, a um determinado composto ou um agente farmacêutico para perda de peso.

Será entendido que o aumento da concentração das LRT V6 (ou número de partículas), nalguns casos também pode ser monitorizado através do aumento da média do tamanho de partícula de VLDL, (a média ou o tamanho médio de todas as partículas de lipoproteinas no grupo de partículas das lipoproteinas VLDL, LRT V1-V6) ou mesmo apenas as LRT maiores = LRT V5 + LRT V6) . Isto acontece porque o componente dominante que apresenta uma concentração alterada na resposta a uma carga de gordura neste grupo, é o componente das LRT V6 conforme anteriormente descrito. Este sinal será diluído pelo sinal de outros subtipos, mas pode ser possível discernir uma resposta VLDL (alteração no tamanho médio) e portanto, uma redução na resposta VLDL pode ser um substituto para determinar directamente a resposta das LRT V6. É de notar que, a concentração total de VLDL como um grupo V1-V5, não altera consideravelmente, e a resposta das LRT V6 como uma classe, geralmente não é detectável a 26 ΡΕ2238458 partir da determinação das concentrações de VLDL (como diferença no tamanho médio). A Tabela 2 apresenta a análise estatística da redução induzida pela sibutramina, na área sob a curva (AUC), a partir da carga lipídica quando comparada com o placebo, para as subclasses maiores de lipoproteínas ricas em triglicéridos determinadas por RMN. Estes resultados ilustram que a Sibutramina reduziu a resposta das LRT V6, mas não a resposta das LRT V5 ou quilomícrones (observa-se que apenas as LRT V6 têm uma variação estatisticamente significativa quando determinada como subgrupos individuais), indicando assim, que a LRT V6 é o biomarcador. Os resultados demonstram também que, em determinadas circunstâncias, a redução na resposta das LRT V6 pode ser detec-tada mesmo quando a determinação inclui o sinal de outros subtipos, mas não para todas as combinações de sub-subti-pos. Neste estudo em particular, as LRT V6 + quilomícrones apresentaram uma alteração significativa, mas as LRT V6 + LRT V5 e LRT V6 + LRT V5 + quilomícrones não produziram uma alteração significativa. Note-se que quando a resposta das LRT V6 pode ser equiparada com a resposta de uma associação de subtipos, é porque a grandeza da alteração no sinal, que é devida à alteração do sinal das LRT V6, é suficientemente elevada quando comparada com o sinal da linha de base, para ser considerada uma diferença significativa (isto é, o sinal das LRT V6 no sinal da linha de base sobrepõe-se ao sinal da combinação, de modo que, uma alteração nas LRT V6 é confiadamente detectada). 27 ΡΕ2238458 TABELA 2: Análise da redução induzida por sibutramina na AUC (a períodos de tempo entre as 5-11 horas) pela carga lipídica quando comparada com o placebo, para as subclasses maiores de lipoproteínas ricas em triglicéridos, determi-nadas por RMN e analisadas no ensaio de NMR LipoProfile de lipoproteínas III (LipoScience, Inc., Raleigh, NC) .Analito(s) Tratamento Media Geométrica LS Sibutramina/Placebo Rácio I.C. 90% i>-valor Quilamícrones Sibutramina 81,11 0,98 (0,90; 1,07) 0,721 Placebo 82,63 LRT V5 Sibutramina 222,34 1,10 (0,88; 1,38) 0,474 Placebo 201,96 LRT V6 Sibutramina 119,35 0,73 (0,63; 0,84) 0,001 Placebo 163,80 LRT V6 + Sibutramina 205,0 0,81 (0,73; 0,91) 0,004 Quilamícrones Placebo 163,80 LRT V6 +LRT V5 Sibutramina 364,08 0,88 (0,77; 1,00) 0,091 Placebo 414,39 LRT V6 +LRT V5 + Sibutramina 458,04 0,89 (0,80; 1,00) 0,110 Quilamícrones Placebo 512,27 £>-valores <0,05, são estatisticamente significativos r p-valores >0,05, não são estatisticamente significativos.

Uma redução significativa na concentração das LRT V6 é facilmente determinada devido aos níveis basais tipicamente elevados (o que é facilmente mensurável), nos ratos. Assim, os estudos com compostos experimentais ou agentes farmacêuticos para perda de peso podem ser realizados directamente em ratos. No entanto, no ser humano, os 28 ΡΕ2238458 valores basais são relativamente baixos e tendem a estar perto ou abaixo dos limites de detecção dos métodos analíticos actualmente utilizados, tal como, a espectroscopia por RMN em amostras plasmáticas.

Em estudos com ratos, utilizando ratos obesos induzidos pela dieta, alimentados com dieta rica em gordura, as concentrações das LRT V6 são constitucionalmente elevadas e a redução da concentração das LRT V6 induzida pela administração de um agente farmacêutico é um indicador da capacidade do agente farmacêutico para modular o metabolismo das lipoproteínas e/ou dos triglicéridos, de tal forma que, o armazenamento lipidico no tecido adiposo é reduzido. Em humanos, a concentração das LRT V6 é normalmente muito baixa para uma quantificação fiável. No entanto, as formas de realização da presente invenção demonstraram que as concentrações das LRT V6 fielmente mensuráveis podem ser induzidas pela administração de uma carga de gordura num curto período de tempo, particularmente depois do indivíduo doente ter atingido o estado de jejum. Além disso, essas concentrações elevadas voltam a níveis basais como se o doente se aproximasse novamente de um estado de jejum. Adicionalmente, a administração de determinados agentes farmacêuticos para perda de peso são agora apresentados para reduzir a grandeza da resposta das LRT V6 a uma carga de gordura.

Determinadas formas de realização da presente invenção são adequadas para testar os agentes farmacêuticos para perda de peso experimentais, visando um ou mais alvos 29 ΡΕ2238458 terapêuticos, cada alvos mencionado modela indirectamente ou directamente a(s) via(s) metabólicas das lipoproteínas e/ou dos triglicéridos. Exemplos de alvos terapêuticos cuja modulação pode ser determinada utilizando os métodos da presente invenção são os receptores 5-HT2C (estão sendo desenvolvidos agonistas para tratar a obesidade/excesso de peso), o receptor CB-1 (antagonistas), IRSND (inibidores), PDE-10 (inibidores) e receptores da orexina-1 (antagonistas) . Os alvo farmacêuticos dos receptores 5-HT2cn receptores CB-1, e/ou inibição de PDE-10, são particularmente adequados para os métodos de ensaio da presente invenção. Outros alvos terapêuticos podem ser prontamente encontrados sem a devida experimentação por meio de moduladores de um alvo utilizando os métodos da presente invenção e a determinação de que é observada uma redução na resposta das LRT V6.

Para estudos em humanos, incluindo ensaios experimentais com agentes terapêuticos em teste e para testar a capacidade de um indivíduo ser respondedor/não-respondedor para um determinado agente terapêutico, um doente é tipicamente testado depois de acordar e antes de consumir, seja o que for, como por exemplo, após jejuar durante cerca de 5-10 horas, preferencialmente entre cerca de 6-9 horas, como por exemplo, cerca de 8 horas. Os doentes podem ingerir água em qualquer altura, antes ou durante o período do ensaio. Pode ser efectuado um período prévio ao teste, para facilitar a compatibilidade com o conteúdo da refeição e o tempo que antecede cada sessão do ensaio. É recolhida uma amostra de sangue para proporcionar 30 ΡΕ2238458 uma determinação do nível basal da concentração das LRT V6 ou do número de partículas para esse doente, quando o doente está num estado de jejum.

Depois, o doente pode tomar uma carga de gordura adequada, ao longo de um período de tempo relativamente curto, como por exemplo, em cerca de <40 minutos, preferencialmente em <20 minutos. Dependendo do estudo realizado ou das condições desejadas para o ensaio de rotina preferido, são depois recolhidas, uma ou mais amostras sanguíneas, para determinar o aumento da concentração das LRT V6, em resposta à carga de gordura. Uma colheita de sangue será tipicamente suficiente para os ensaios de rotina, utilizando um agente farmacêutico para perda de peso estabelecido, como por exemplo, para determinar previamente uma resposta individual provável do doente ao agente da terapêutica. Para outras utilizações, pode ser preferido tirar múltiplas amostras de sangue para obter uma curva completa de respostas das LRT V6. A resposta das LRT V6 a uma carga de gordura (isto é, o aumento da concentração das LRT V6) em seres humanos, inicia-se normalmente cerca de 2 horas após a administração de carga de gordura, com o pico máximo compreendido entre cerca de 4 horas e cerca de 6 horas após a administração da carga de gordura, o retorno às concentrações basais entre cerca de 9 horas e cerca de 12 horas após a administração de carga de gordura. Observe-se que no decurso pode haver um deslocamento do tempo para depois do início/posterior retorno aos níveis basais quando são administradas concentrações de gordura muito elevadas. 31 ΡΕ2238458

Estes deslocamentos normalmente observam-se com um início, a cerca de 4-6 horas, atingindo os picos máximos a cerca de 10 horas e o retorno aos níveis basais entre cerca de 12-15 horas. Uma resposta das LRT V6, típica no ser humano, a uma carga de gordura é um aumento na concentração plasmática desde um nivel basal, em jejum, de cerca de 0 mg/dL até cerca de 35 mg/dL para entre cerca de 80 e cerca de 250 mg/dL. O doente é depois novamente testado em conjunto com a administração do agente farmacêutico. Entender-se-á que o ensaio em conjunto com o agente farmacêutico pode ser realizado antes ou depois do ensaio para determinar a resposta normal das LRT V6 no doente, desde que o agente farmacêutico tenha sido depurado do organismo do doente antes do reteste, embora isto não seja preferido. Nos seres humanos, uma redução típica na resposta das LRT V6, é indicadora de uma resposta benéfica relativamente ao agente farmacêutico em estudo ou é uma redução estatisticamente significativa na resposta das LRT V6 para o agente farmacêutico para perda de peso. É habitual observada uma redução, na resposta das LRT V6, desde cerca de 20% até cerca de 80%. As respostas tipicamente indicativas de uma resposta favorável podem ter reduções de cerca de 50% ou superiores.

Numa forma de realização optimizada, pode ser adequado na pré-determinação, por exemplo, utilizar por rotina a probabilidade de um determinado doente responder 32 ΡΕ2238458 favoravelmente a um tratamento proposto com um agente farmacêutico para perda de peso, (isto é, prever se o doente irá ser um respondedor ou não respondedor) a uma administração em dose única, de uma carga de gordura, em conjunto com uma dose do agente farmacêutico para perda de peso proposto, de modo que, a redução na resposta das LRT V6 possa ser determinada a partir da média das respostas das LRT V6 a uma determinada carga de gordura, por uma população de doentes pré-determinada. De tal forma que, numa forma de realização optimizada, pode ser suficiente uma colheita de sangue antes da administração da carga de gordura e do agente farmacêutico para perda de peso e uma única colheita de sangue num período de tempo pré-determinado após a administração da carga de gordura, para se determinar se o agente farmacêutico para perda de peso reduz a resposta das LRT V6 do doente, à carga de gordura, e assim, pré-determinar, se o agente modula o metabolismo das lipoproteínas e/ou triglicéridos no doente. Neste caso, pode também ser possível determinar uma resposta das LRT V6 relevante ou a redução da resposta das LRT V6 sem ser necessário uma colheita de sangue inicial, mas tirar apenas uma amostra num intervalo de tempo pré-determinado após a administração de uma carga de gordura, em conjunto com, a administração do agente farmacêutico para perda de peso. Está também contemplado que, em vez de, uma carga de gordura baseada nos alimentos, a carga de gordura administrada pode ser induzida quimicamente e/ou farmaceuticamente ou a carga de gordura simulada.

Entender-se-á que os protocolos específicos do 33 ΡΕ2238458 ensaio clínico utilizado vão depender do agente farmacêutico para perda de peso considerado para o tratamento e que, a determinação de tais protocolos está ao alcance de qualquer pessoa especialista na matéria. Como por exemplo, o momento específico para a administração do agente e da segunda carga de gordura vai variar dependendo da farma-cocinética do agente. Um factor a ter em consideração, é que, o nível do agente no sangue, tenham atingido num nível efectivo antes da administração da carga de gordura. Assim, entende-se que "em conjunto com" o agente farmacêutico, significa que a administração do agente e da carga de gordura estão coordenados de modo a permitir que o agente atinja um nível eficaz no doente, e assim, a afectar a distribuição/metabolismo da carga de gordura quando esta é administrada. Dependendo da especificidade do agente, pode significar, que o agente é administrado ao mesmo tempo que a carga de gordura ou um pouco depois, até cerca de 30 minutos após a administração de carga de gordura ou, que o agente é administrado antes da carga de gordura, no período necessário para se atingir um nível plasmático efectivo do agente, como por exemplo, entre cerca de 0 e cerca de 3 horas antes da administração da carga de gordura, como por exemplo, entre 15 minutos e 30 minutos antes da administração da carga de gordura. Se o agente farmacêutico é administrado como um pró-fármaco ou se os metabolitos activos são importantes na farmacocinética do agente farmacêutico, pode ser necessário um período de tempo superior, para permitir a acumulação e a concentração plasmática apropriada das unidades activas. A determinação destes 34 ΡΕ2238458 regimes posológicos é rotineira e bem conhecida dos especialistas na matéria.

Da mesma forma, o tempo e o número de colheitas de sangue após a administração da(s) carga(s) de gordura podem variar dependendo da taxa de depuração plasmática do agente, sendo factor importante, os níveis plasmáticos do agente permanecerem num nível efectivo até posteriormente à colheita de sangue depois da carga de gordura e idealmente deve ser cronometrada para corresponder ao pico da resposta das LRT V6 devida à carga de gordura administrada.

As cargas de gordura adequadas compreendem quantidades superiores a cerca de 30 g gordura, preferencialmente quantidades superiores ou iguais a cerca de 50 g de gordura, preferencialmente entre cerca de 60-70 g de gordura. As cargas de gordura compreendendo quantidades superiores ou iguais a cerca de 80 g de gordura podem começar por induzir períodos de tempo superiores para se obter a resposta das LRT V6 inicial.

Entenderíeis que a composição exacta da carga de gordura não é importante e existem muitas composições adequadas que podem ser prontamente formulada pelo nutricionista qualificado. As formulações de cargas de gordura adequadas podem ser adaptadas para se adequarem ao estudo pretendido e/ou de acordo com as preferências população de doentes. 0 factor importante é que, num curto espaço de tempo, seja proporcionado o conteúdo suficiente de gordura 35 ΡΕ2238458 e o conteúdo calórico total excessivo para produzir um aumento mensurável na concentração das LRT V6, na ausência de um agente farmacêutico em teste. A carga de gordura pode tomar qualquer forma de uma série de formas adequadas, como por exemplo, uma refeição preparada, uma refeição pré-embalada, um suplemento alimentar em dose única, como uma barrita de lanche, uma formulação liquida para dose única, tal como, uma bebida pré-embalada ou mistura em pó para preparação de bebida ou comprimidos ou cápsulas para administração oral. Exemplos de composições adequadas que podem ser utilizadas como cargas de gordura são as seguintes:

Exemplo 1 de carga de gordura:

Itens alimentares Porção Energia Carb. Proteína Gordura (Kcal) (g) (g) (g) Arroz 1 colher de gelado 65 15 1 0 (50 g) Margarina (para ser adicionada 1 colher de 72 0,0 0,0 8,0 ao arroz enquanto está quente) sobremesa (10 g) Asas de frango fritas 1 asa 223 6,7 19,1 13,3 (revestimento de farinha) (70 g) batatas picadas e fritas (hash 2 peças (120 g) 378 33,3 2,9 26 brown) Ovos categoria A (fritos) 1 ovo 90 0,1 5,7 7,4 (35 g) Pepino fatiado 5 fatias (15 g) 2 0,5 0 0 Total 830 55 27 55 Calorias Totais 830 229 108 495 Calorias (%) 28% 13% 60% 36 ΡΕ2238458

Exemplo 2 de carga de gordura:

Menu Proteína Gordura Carb. Total CAL. Proteína Gordura Carb. (g) (g) (g) ct o. o o, o 1 cmoleta ccm 2 ovos 12 14 2 180 30 mL de manteiga de amendoim 7 16 7 200 2 fatias de pão branco, torrado 4 0,5 17 80 237 mL de milho integral 8 8 12 150 2 tiras de bacon 5 7 0 80 30 mL de margarina 0 7 0 66 Total de refeições (servidas) 36 52,5 38 756 18,7% 61,5% 19,8%

Exemplo 3 de carga de gordura: Bebida: Volume de leite integral ou nata ou suas misturas, para proporcionar a quantidade de gordura desejada. Por exemplo, cerca de 150 mL a cerca de 180 mL de natas batidas. Pode ser adicionado um agente aromatizante para melhorar o paladar.

Determinação da concentração das LRT V6 ou do número de partículas

A resposta das LRT V6 pode ser determinada de qualquer modo adequada. Um dos métodos actualmente conhecidos para determinar selectivamente, a concentração das LRT V6 ou o número de partículas, é através da espec-troscopia de RMN em amostras plasmáticas, seguida por análise de deconvulação para separar as contribuições relativas dos diversos subtipos de lipoproteínas para o sinal completo de RMN. Um desses métodos de deconvolução é o NMR 37 ΡΕ2238458

LipoProfile®, NMR LipoProfile®-II e/ou NMR LipoProfíle®-III, análise de subclasse de partículas conforme proporcionado por LipoProfile, Inc., Raleigh, North Caroline. Do mesmo modo, o tamanho médio de partículas VLDL pode ser determinado com o NMR LipoProfile , bem como, a análise da subclasse de partículas. Para uma descrição desta técnica analítica, ver a Patente dos EUA N° 5 343 389 para Otvos, Patente dos EUA N° 6 617 167, Patente dos EUA N° 4 933 844 e a Patente dos EUA N°7 243 030. Ver também, o pedido de patente dos EUA 2005-0222504 para uma descrição do Analisador Clínico RMN. Ver também, Handbook of Lipoprotein Testing, Chapter 31: "Measurement of lipoprotein subclass profiles by nuclear magnetic resonance spectroscopy", J. D.

Otvos, AACC Press, Whashington DC, 2000, 2nd ed., pp 609- 623 e Jeyarajah EJ, Cromwell WC, Otvos JD. Lipoprotein particle analysis by nuclear magnetic resonance spectroscopy. Clin. Lab. Med. 2006;26:847-70.

Como um exemplo típico, as amostras de sangue total são recolhidas em tubos para colheita de sangue de 2 ml com EDTA, invertidos várias vezes para misturar bem e colocados sobre gelo. As amostras são depois centrifugadas a 3 000 rpm aproximadamente por 10-15 minutos a 4°C. Depois de terminar a centrifugação, o tubo é colocado no gelo e é retirado o plasma. O plasma é colocar num tubo de polipropileno e mantido a 4°C até ser efectuada a análise. As amostras podem ser analisadas em qualquer altura por um período de cerca de 4 dias após a colheita. As amostras são analisadas para determinar a resposta das LRT V6, como por 38 ΡΕ2238458 exemplo, por análise das lipoproteínas plasmáticas por RMN, como por exemplo, análises das lipoproteínas por NMR LipoProfile®, NMR LipoProfíle®-II ou NMR LipoProfile®-III, fornecidos por LipoScience, Inc. of Raleigh, North

Carolina.

Os resultados espectrais por RMN são analisados conforme descrito anteriormente no Jeyarajah et al. As concentrações das subclasses de lipoproteínas foram apresentadas em unidades de concentração de massa lipídica (as subclasses das LRT em unidades de triglicéridos em mg/dL) ou, alternativamente, em unidades de concentração de partículas de nmol/L (nanomoles de partículas por litro). A fonte de informação (amplitude do sinal de RMN de cada subclasse) é transformada nessa massa ou em unidades de concentração de partículas pela análise por software, utilizando um conjunto de factores de conversão obtidos a partir das análises da química dos lipídos e análises por RMN dos padrões de subclasse de quilomícrones, VLDL, LDL e HDL isolados da composição lipídica normal. A Figura 2 ilustra um exemplo do sistema 7 de analisador de RMN, que pode ser utilizado para realizar a análise das LRT V6 e/ou as determinações das LRT V6 utilizando um módulo de avaliação das LRT V6 100. 0 módulo de avaliação das LRT V6 100 pode estar inserido no sistema num processador e/ou controlador de sinal 11 ou pode estar parcialmente ou totalmente presente num local diferente ou processador remoto, tal como, num servidor, no computador 39 ΡΕ2238458 do cliente e/ou noutro computador. Referindo-se agora à Figura 2, o sistema 7 inclui um espectrómetro de RMN 10 para obter as determinações por RMN de uma bioamostra. Em algumas formas de realização, o espectrómetro 10 é configurado para que as determinações para os sinais de protões por RMN sejam realizadas a 400 MHz; numa outra forma de realização as determinações podem se realizadas a 360 MHz ou noutra frequência desejada. Isto é, também podem ser utilizadas outras frequências correspondendo a uma intensidade de campo operacional requerida. Tipicamente, é instalada uma sonda de fluxo de protões, como seja, um controlador de temperatura para manter a temperatura da amostra a 47°C±0,2°C. A homogeneidade dos campos do espectrómetro 10 pode ser optimizada oscilando uma amostra de D20 a 99,8% até que a largura da linha espectral do sinal de HDO no RMN (água semi-pesada) seja inferior a 0,6 Hz. A largura de 90° de pulso de excitação por RF utilizada para a determinação de D20 é normalmente de cerca de 6-7 micro-segundos.

Referindo novamente à Figura 2, o espectrómetro 10 pode ser controlado por um processador e/ou controlador de sinal digital 11 ou outra unidade de processamento de sinal. 0 processador/controlador 11 deverá ser capaz de realizar transformações Fourier rápidas e com este objectivo, pode ser incluída uma tabela de linhas sinusoidais e circuitos de linhas que se multiplicam e dividem. Também pode incluir uma ligação de dados 12 a um computador remoto ou externo 13 e um canal de acesso 40 ΡΕ2238458 directo à memória 14 que se liga a uma unidade de armazenamento electrónico 15. 0 processador/controlador 11 também pode incluir um conjunto de conversores de digital para analógico, conversores de analógico para digital e dispositivo lento de portas I/O que se ligam através de uma interface do circuito e controlo de pulso 16 aos elementos operativos do espectrómetro. Estes elementos incluem um transmissor de RF 17, que produz uma excitação de pulso de RF de duração e grandeza da frequência dirigida pelo computador digital 11 e um amplificador da potência de RF 18, que amplifica o pulso e acopla-o à bobine de transmissão de RF 19 que envolve a célula da amostra 20. 0 sinal de RMN produzido pela amostra no estado de excitação na presença de um campo magnético polarizado de 9,4 Tesla produzido por um electroiman supercondutor 21 é recebido por uma bobine 22 e aplicado a um receptor de RF 23. 0 sinal de RMN amplificado e filtrado é demodulado em 24 e os sinais em quadratura resultantes são aplicados à interface do circuito 16 onde são digitalizados e entram através do computador digital 11 para um ficheiro no disco de armazenamento 15. 0 sistema 7 pode incluir um módulo de deconvolução localizado parcialmente ou totalmente no processador/controlador de sinal 11 e/ou num outro processador localizado num computador, servidor diferente ou cliente que pode estar no local ou remotamente. Para descrição detalhada do adequado analisador clinico por RMN, ver Patente dos E.U.A. 2005/0222504. 41 ΡΕ2238458

Após os resultados por RMN serem obtidos a partir da amostra na célula de medição 20, o processamento de sinal produz um ficheiro informático que é uma representação digital do espectro de deslocamento químico que pode ser armazenado no registo de armazenamento do arquivo electrónico clínico 25. 0 computador 13, que pode ser um computador pessoal, portátil, de escritório ou outro tipo de computador, processa o espectro de deslocamento químico e pode fornecer um relatório do doente, o qual é enviado para uma impressora 26 ou armazenado electronicamente e transmitido para um endereço de e-mail ou URL pretendido. Os especialistas nesta matéria irão reconhecer que outros dispositivos de saída, tal como, um monitor, também podem ser utilizados para proporcionar os resultados.

Deve ser evidente para os especialistas na matéria que as funções realizadas pelo computador 13 e seu armazenamento 25 também podem ser incorporadas nas funções realizadas pelo processador/controlador 11 de sinal digital do espectrómetro ou em circuitos adicionais de comunicação com o espectrómetro de RMN 10 e/ou processador 11. As outras interfaces e dispositivos de saída também podem ser utilizados, uma vez que são bem conhecidos pelos especialistas na matéria.

As Figuras 3 e 4 ilustram exemplos de módulos de avaliação das LRT V6 100a, 100b que podem comunicar com o sistema 7, estar integrado no sistema 7 e ou analisar os resultados das LRT V6 determinadas pelo sistema 7 ou por 42 ΡΕ2238458 outros sistemas de medição que forneçam os resultados das LRT V6. Conforme apresentado, as Figuras 3 e 4 ilustram exemplos de formas de realização de sistemas de processamento de resultados que podem ser incorporados ou fornecidos como sistemas, métodos e/ou programa de computador de acordo com as formas de realização da invenção. 0 processador 410 (que facultativamente, pode estar, ou comunicar com o processador 11 e/ou com o computador 13 da Figura 2) comunica com a memória 414 através de um endereço/barramento de dados 448. 0 processador 410 pode ser qualquer microprocessador comercialmente disponível ou personalizado. A memória 414 é representativa dos dispositivos de memória da hierarquia global contendo o software e os dados utilizados para implementar a funcionalidade do sistema de processamento de dados. 405. A memória 414 pode incluir, mas não está limitada aos seguintes tipos de dispositivos: cache, ROM, PROM, EPROM, EEPROM, memória flash, SRAM e DRAM.

Conforme apresentado nas Figuras 3 e 4, a memória 414 pode incluir diversas categorias de software e dados utilizados no sistema de processamento de dados 405: o sistema operativo 452; os programas aplicativos 454; os controladores de dispositivo entrada/saída (1/0) 458; o Módulo de Previsão para a Resposta de Perda de Peso das LRT V6 100a (Figura 3) e/ou o Módulo de Avaliação do Fármaco Experimental para a Perda de Peso Baseado nas LRT V6 100b (Figura 4); e os dados 456. 43 ΡΕ2238458

Os dados 456 podem incluir os dados do sinal da subclasse das LRT por RMN (forma da linha espectral composta e/ou constituída) 462, que podem ser obtidos a partir de dados ou sistema de aquisição de sinal 420 (tais como o sistema 7 apresentado na Figura 2) . Para cada bioamostra do modelo animal ou do doente, os dados podem incluir valores de dados específicos das LRT V6 ou as LRT V6 com outros dados das subfracções (por exemplo, de quilomicrones e/ou das LRT V5) . Conforme será apreciado pelos especialistas na matéria, o sistema operativo 452 pode ser qualquer sistema operativo adequado para ser utilizado com um sistema de processamento de dados, tais como OS/2, AIX ou OS/390 da International Business Machines Corporation, em Armonk, NY, Windows CE, Windows NT, Windows 95, Windows 98, Windows 2000 ou Windows XP da Microsoft Corporation, Redmond, WA, Palm OS da PalmSource, Inc., Sunnyvale, CA, Mac OS da Apple Computer, Inc, UNIX, FreeBSD ou Linux, sistemas operativos proprietário ou sistemas operativos dedicados, por exemplo, para sistemas de processamento de dados embebidos.

Os controladores de dispositivos 1/0 458 incluem tipicamente rotinas de software acedidos através do sistema operativo 452 pelos programas aplicativos 454 para comunicar com os dispositivos, tais como o(s) porto (s) de dados 1/0, armazenamento de dados 456 e determinados componentes de memória 414 e/ou os sistemas de aquisição de dados 420. Os programas aplicativos 454 são ilustrativos dos programas que implementam as diversas funcionalidades 44 ΡΕ2238458 do sistema de processamento de dados 405 e, incluem preferencialmente, pelo menos, uma aplicação que suporta operações de acordo com as formas de realização da presente invenção. Finalmente, os dados 454 representam os dados estáticos e dinâmicos utilizados pelos programas aplicativos 454, o sistema operativo 452, os controladores de dispositivos 1/0 458, e, outros programas de software que podem residir na memória 414.

Enquanto as formas de realização da presente invenção são ilustrativas, por exemplo, com referência aos Módulos 100a, 100b sendo um programa aplicativo nas Figuras 3 e 4, e conforme será apreciado pelos especialistas na matéria, também podem ser utilizadas outras configurações, beneficiando ainda assim dos ensinamentos das formas de realização da presente invenção. Por exemplo, os Módulos 100a, 100b, também podem ser incorporados, no sistema operativo 452, nos dispositivos de controladores I/O 458 ou em qualquer outra divisão lógica do sistema de processamento de dados 405. Assim, as formas de realização da presente invenção não devem ser interpretadas como limitadas às configurações das Figuras 3/4, as quais destinam-se a abranger qualquer configuração capaz de realizar as operações descritas neste documento. Em certas formas de realização, os Módulos 100a e/ou 100b podem incluir o código computacional para comunicar com um sistema de controlo remoto (local ou externamente).

Será apreciado que os métodos, sistemas e 45 ΡΕ2238458 programas de computador da presente invenção não estejam limitados pelos meios de medição da resposta das LRT V6 ou da resposta de VLDL, em que, os novos métodos de realizar dessas determinações distintas dos subtipos sejam provavelmente verificadas no futuro ou esses métodos convencionais possam ser modificados para permitir tais determinações. Como por exemplo, pode tornar-se possível medir a resposta das LRT V6 por técnicas de imuno-ensaio se, e quando, os antigénios específicos das LRT V6 se tornarem conhecidos e os anticorpos específicos estarem desenvolvidos para esses antigénios. Também pode tornar-se possível distinguir e quantificar as proteínas específicas das LRT V6 ou de outros componentes específicos das LRT V6, e assim, ser possível o aparecimento de novos métodos para medir a resposta das LRT V6 ou que possam ser modificados, a avaliação por flotação e ultracentrifugação ou outros métodos convencionais, para fornecer a informação adequada de LRT V6. Tais métodos serão entendidos pelos especialistas na matéria para serem equivalentes aos métodos que utilizam as técnicas de RMN, aqui descritos. A Figura 5 ilustra um exemplo de um relatório de um doente 200. Conforme apresentado, o relatório 200 pode incluir o nome do doente 201 e os dados pessoais 205 (tais como datas da recolhas de amostras, peso, administração da carga de gordura e os horários para a administração do fármaco) . 0 relatório 200 também pode incluir o nome do agente farmacêutico para perda de peso (AFPP) administrado em conjunto com a colheita da segunda bioamostra do doente 46 ΡΕ2238458 (bloco 210) . 0 relatório 200, facultativamente pode proporcionar duas avaliações ou determinações das LRT V6 diferentes, uma de uma amostra que é indicadora de uma resposta das LRT do doente normal e outra recolhida em conjunto com o AFPP (blocos 215, 225). 0 relatório 200 pode indicar se existe uma resposta das LRT V6 positiva associada ao AFPP (bloco 230). 0 relatório 200, pode incluir uma recomendação para que o doente continue a tomar o AFPP ou que o AFPP provavelmente não é benéfico para este doente (bloco 250) . A recomendação pode indicar a redução percentual das LRT V6 (não apresentado) , se for o caso, e pode proporcionar dados estatísticos relevantes para aqueles que são susceptíveis de responder à redução de pelo menos 80%. Isso pode permitir a um médico prosseguir com o tratamento com o AFPP caso o doente seja um respondedor no limite (por exemplo, redução entre 60-75%).

As formas de realização da presente invenção são explicadas em maior detalhe nos seguintes Exemplos não limitativos.

Exemplo 1: Ensaio de Alvo Terapêutico Cruzado realizado em Ratos A capacidade, dos agentes farmacêuticos para perda de peso experimentais, de reduzirem a concentração das LRT V6 em ratos, é apresentada para três compostos, visando mecanismos de acção diferentes, incluindo um ago-nista selectivo do receptor 5-HT2c conhecido como potente e 47 ΡΕ2238458 um antagonista/agonista reverso selectivo do receptor CB-1 e um IRSND potente (sibutramina) . Cada um desses compostos são conhecidos por induzirem a perda de peso em ratos, e assim, o biomarcador na redução da concentração das LRT V6 correlaciona-se com os agentes farmacêuticos para perda de peso experimentais com capacidade para induzir a perda de peso. Por outro lado, um antagonista opióide (naltrexona) , que é conhecido por ser ineficaz na indução da perda de peso em ratos ou em seres humanos com peso excessivo e obesos (Malcolm R et al, Int. J. Obes.1985;9(5):347-53.), é apresentado para não reduzir a concentração das LRT V6 em ratos, correlacionando-o novamente como biomarcador na redução da concentração das LRT V6 por agentes farmacêuticos para perda de peso experimentais, com capacidade para induzir a perda de peso. É administrada, a ratos DIO-LE mantidos com ração de elevado teor de gordura, uma dose de um veiculo ou uma dose aguda do composto de teste. A tempos específicos após a administração da dose, os animais são sacrificados e o sangue é recolhido em tubos de ensaio para amostras de sangue contendo EDTA e procede-se essencialmente como descrito anteriormente. As amostras são analisadas pelo ensaio de sub-partículas de lipoproteínas por NMR LipoProfile com a relação de todos os subtipos de partículas (especificamente a concentração das LRT V6 ou número de partículas). A dose de 10 mg/kg do agonista 5-HT2c reduz a 48 ΡΕ2238458 concentração das LRT V6 circulante em cerca de 90% às 2 horas após a dose e em cerca de 80% cerca das 8 horas após a dose. A concentração plasmática das LRT V6 e a média do tamanho de partículas VLDL voltam às concentrações basais cerca das 18 horas após a dose. A dose de 0,3 mg/kg do antagonista CB-1 reduz a concentração das LRT V6 e o tamanho das partículas VLDL circulantes para cerca de 75% a cerca de 1 hora após a dose e a cerca de 3 horas após a dose. As reduções nas respostas continuam em cerca de 50% a cerca de 5 horas após a dose. A concentração plasmática das LRT V6 retorna aos valores da concentração basal cerca de 18 horas após a dose. A dose de 3 mg/kg de IRSND reduz a concentração das LRT V6 e o tamanho médio das partículas de VLDL circulantes para cerca de 78% às 2 horas após a dose e às 5 horas após a dose. A concentração plasmática das LRT V6 retorna aos valores da concentração basal cerca das 18 horas após a dose.

Em comparação, a dose de 10 mg/kg de naltrexona administrada por via oral teve um efeito minimo sobre os níveis das LRT V6 circulantes. A naltrexona reduziu os níveis das LRT V6 para apenas 30% em 2 horas após a dose. O nível das LRT V6 retorna ao nível basal em 5 horas e mantiveram-se inalteráveis às 18 horas após a dose. 49 ΡΕ2238458

Redução na resposta das LRT V6 Alvo Gatpasto E0S8 Tl-(i.e. 2 beras) I2-(i.e. 5 boas) I3-(i.e. 18 boas) Ãgcnista 5-4¾ LY2140119 10 mg/kg 90% 84% 0% Antagcnista CB-1 LY2509419 0,3 mg/kg 75% 50% 0% IB3SD Siblramina 3 mg/kg 78% 78% 0% antagcnista cpiákte Naltrexcna 10 mg/kg 30% 0% 0%

Exemplo 2: Estudo de um IRSND (sibutramina) realizado no ser Humano

Um IRSND (sibutramina) conhecido como sendo capaz de induzir a perda de peso em seres humanos é testada para correlacionar a sua capacidade para reduzir as concentrações plasmáticas na resposta das LRT V6 e na resposta das V-LRT, em seres humanos, num estudo exploratório de biomarcador, utilizando um ensaio cruzado e cego, comparando a sibutramina e o placebo, em indivíduos sofrendo de hipertrigliceridemia, com peso excessivo e obesos, mas de qualquer forma saudáveis.

Três coortes contendo 6 indivíduos cada, foram submetidos a três períodos durante o estudo. Os indivíduos estavam em jejum de um dia para o outro e foram efectuadas duas colheitas de sangue durante o período de jejum, se-guindo-se o pequeno almoço, aproximadamente às 7:00 horas. O placebo ou a sibutramina foi administrado aproximadamente às 10:00 horas. A colheita de amostras de sangue começou aproximadamente 1 hora após o início do pequeno almoço e continuou a recolha de amostras de sangue de hora a hora durante 7 horas, e depois a cada 2 horas durante as 10 50 ΡΕ2238458 horas seguintes. É servido um almoço, de acordo com o Exemplo 2 de carga de gordura, aproximadamente pelas 12:00 horas (aproximadamente com 60 g a 65 g de gordura). Não foi permitido, nenhum outro alimento, durante 12 horas após a administração de carga de gordura. Os indivíduos foram dispensados após a última colheita da amostra de sangue, por um periodo de descanso de 4 a 8 dias, antes de voltarem para o segundo periodo de testes do estudo. Depois do periodo de descanso, os indivíduos ficam outra vez em jejum de um dia para o outro. Os procedimentos são então repetidos como no primeiro período de testes do estudo, excepto que cada indivíduo é cruzado para receber o tratamento alternativo, sibutramina ou placebo. As amostras são recolhidas, processadas e analisadas, conforme descrito essencialmente no anterior Exemplo 1. São observadas as respostas das LRT V6 e as respostas das V-LRT durante o período compreendido entre 5 e 11 horas após a administração da carga de gordura. A AUC (área sob a curva das respostas) desde as 5-11 horas após a administração da carga de gordura, é calculada e analisada estatisticamente utilizando uma análise do modelo de efeito de mistura para comparar o braço da sibutramina com o braço do placebo. 0 braço tratado com sibutramina, apresenta em média uma diminuição estatisticamente significativa na resposta das LRT V6 em cerca de 28%, mas não apresenta uma alteração significativa nas concentrações plasmáticas de qualquer dos subtipos das LRT VI, V2, V3, V4 ou V5. É também observada, a diminuição estatisticamente significa- 51 ΡΕ2238458 tiva, na média das respostas das V-LRT , apesar da magnitude dessa mudança ser menor do que a alteração na resposta das LRT V6. Na maioria dos indivíduos, a administração de sibutramina reduziu a magnitude da resposta das LRT V6 e da resposta das V-LRT quando comparada com as respostas dos indivíduos tratados com placebo. Assim, a redução da resposta das LRT V6 e da resposta das V-LRT induzidas pela IRSND está correlacionada com a capacidade conhecida da IRSND para induzir a perda de peso em seres humanos.

Exemplo 3: Estudo com um agonista do receptor 5-HT2c em seres humanos

Um potente agonista selectivo do receptor 5-HT2c, conhecido por induzir a perda de peso em ratos e macacos, e acredita-se que induza a perda de peso em seres humanos, é testado para correlacionar a sua capacidade de reduzir a resposta das LRT V6, num estudo realizado num único centro, em meio hospitalar/ambulatório, duplo-cego (cego tanto para o indivíduo como para o investigador), aleatório, controlado por placebo, em dose única, com incremento de doses, em indivíduos com excesso de peso ou obesos, mas de qualquer forma saudáveis.

Os indivíduos em cada grupo coorte participaram em quatro períodos de administração (três períodos com o fármaco activo e um período com o placebo, seguido um código de aleatorização para garantir que nenhum indivíduo receba duas vezes o placebo). Os indivíduos estavam em 52 ΡΕ2238458 jejum de um dia para o outro e foi retirada uma amostra de sangue antes da administração. Depois foi administrada aos indivíduos, uma dose por via oral, do composto ou do placebo. É administrada aos indivíduos, uma carga de gordura por via oral, às 2 horas após a dose, de acordo com o anterior Exemplo 2 de carga de gordura. As amostras de sangue são recolhidas e processadas a intervalos regulares durante o período de tempo entre as 0 e as 12 horas após a administração da dose e analisadas essencialmente como no Exemplo 2 anterior. A AUC para a resposta das LRT V6 é estimada para o período de amostragem, desde as 0 até às 12 horas após a administração da dose, para avaliar a resposta das LRT V6 a uma carga de gordura administrada por via oral na presença do composto ou do placebo.

Utilizando um modelo de efeitos mistos para comparar estatisticamente a resposta das LRT V6 para os braços tratados com o composto e os braços tratados com o placebo, é observada uma redução estatisticamente significativa na resposta das LRT V6 para os braços do composto, quando comparada com a resposta à refeição rica em gordura, relacionada com o placebo. A relação entre a resposta das LRT V6 e a exposição plasmática ao composto é não-linear, com uma redução muito acentuada na magnitude da resposta das LRT V6 às concentrações plasmáticas mais elevadas do fármaco. Assim, a redução da resposta das LRT V6 e da resposta de VLDL induzidas pelo agonista 5-HT2C correlaciona-se com a capacidade conhecida do composto para induzir a perda de peso em ratos. ΡΕ2238458 53 nao deve realização Lisboa, 27 0 mencionado é ilustrativo da presente ser interpretado como limitado às específicas descritas. de Dezembro de 2011 invenção e formas de

Claims (6)

1. ΡΕ2238458 1 REIVINDICAÇÕES 1. Método para prever a capacidade de resposta ao tratamento contra a obesidade ou peso excessivo, num ser humano, com um agente farmacêutico seleccionado a partir do grupo constituído por um agonista do receptor 5-HT2c, um antagonista do receptor canabinóide 1 (CB-1), um inibidor da fosfodiesterase-10 (PDE-10), um antagonista do receptor tipo 1 da orexina, um inibidor da recaptação tripla da serotonina-noradrenalina-dopamina (IRSND), um inibidor da lipase e/ou um inibidor do receptor da absorção lipídica, compreendendo a determinação numa bioamostra isolada, a partir do um ser humano, se existe uma redução na resposta das partículas lipoproteícas ricas em triglicéridos da subclasse V6 (LRT V6) a uma carga de gordura na presença do agente farmacêutico quando comparado com a resposta das LRT V6 na ausência do agente farmacêutico, em que, a redução na resposta das LRT V6 indica que o doente será respondedor ao tratamento contra a obesidade ou excesso de peso.
2. 2. Método para a determinação da adequação de um agente farmacêutico para perda de peso para o tratamento de um doente a necessitar do tratamento contra a obesidade e/ou excesso de peso, compreendendo os seguintes passos de: i) medição da resposta das LRT V6 a uma primeira carga de gordura numa bioamostra isolada a partir do doente, a quem foi administrada a primeira carga de gordura; 2 ΡΕ2238458 ii) medição da resposta das LRT V6 a uma segunda carga de gordura, numa bioamostra isolada a partir do doente, a quem foi administrada uma dose do agente farmacêutico para perda de peso e a segunda carga de gordura; iii) determinação se existe uma redução na resposta das LRT V6 à segunda carga de gordura quando comparada com a resposta das LRT V6 à primeira carga de gordura; e iv) determinação da adequação do agente farmacêutico para perda de peso com base na redução comparativa na resposta LRT V6; em que uma redução significativa na resposta das LRT V6 indica que o agente farmacêutico para perda de peso é adequado para o tratamento do doente e a ausência de uma redução significativa na resposta das LRT V6 indica que o agente farmacêutico para perda de peso não é adequado para o tratamento do doente.
3. 3. Método para a determinação da adequação de um agente farmacêutico para perda de peso no tratamento de um doente a necessitar de tratamento para a obesidade e/ou excesso de peso, compreendendo os seguintes passos de: i) medição da resposta das LRT V6 a uma carga de gordura numa bioamostra isolada a partir de um doente, a quem foi administrada uma dose do agente farmacêutico para perda de peso e a carga de gordura; ii) comparação da resposta das LRT V6 à carga de 3 ΡΕ2238458 gordura determinada no Passo i) com uma resposta das LRT V6 padrão à carga de gordura na ausência do agente farmacêutico para perda de peso; iii) determinação da adequação do agente farmacêutico para perda de peso com base no passo de comparação; em que, uma redução significativa na resposta das LRT V6 do doente, quando comparada com a resposta das LRT V6 padrão, indica que o agente farmacêutico para perda de peso é adequado para o tratamento do doente e a ausência de uma redução significativa na resposta das LRT V6 do doente, quando comparada com a resposta das LRT V6 padrão, indica que o agente farmacêutico para perda de peso não é adequado para o tratamento do doente.
4. 4. Método para prever se, um doente necessitando de tratamento para a obesidade e/ou excesso de peso será um respondedor ao tratamento com um determinado agente farmacêutico para perda de peso, compreendendo os seguintes passos de: i) medição da resposta das LRT V6 a uma primeira carga de gordura numa bioamostra isolada a partir do doente, a quem foi administrada a primeira carga de gordura; ii) medição da resposta das LRT V6 a uma segunda carga de gordura numa bioamostra isolada a partir do doente, a quem foi administrada uma dose do agente farmacêutico para perda de peso e a segunda carga de gordura; iii) determinação se existe uma redução na resposta 4 ΡΕ2238458 das LRT V6 do doente à segunda carga de gordura quando comparada com a resposta das LRT V6 do doente à primeira carga de gordura; e iv) previsão se o doente será um respondedor com base no passo de determinação, em que, uma redução significativa na resposta das LRT V6 indica, provavelmente que, o doente vai ser um respondedor.
5. 5. Método para prever se, um doente a necessitar de tratamento para a obesidade e/ou excesso de peso será um respondedor ao tratamento com um determinado agente farmacêutico para perda de peso, compreendendo os passos de: i) medição da resposta das LRT V6 a uma carga de gordura numa bioamostra separada do doente a quem foi administrada uma dose do agente farmacêutico para perda de peso e da carga de gordura; ii) comparação da resposta de V6 à carga de gordura determinada no Passo i) com a resposta padrão do V6 à carga de gordura na ausência do agente farmacêutico para perda de peso; e iii) previsão se o doente será um respondedor ao tratamento com o agente farmacêutico para perda de peso com base no passo de comparação; em que uma redução significativa na resposta de V6 quando comparada com a resposta padrão do V6 indica, provavelmente que, o doente será um respondedor. 5 ΡΕ2238458
6. 6. Método para avaliação da probabilidade do doente responder favoravelmente a um agente farmacêutico para perda de peso, compreendendo: medição de uma concentração das LRT V6, em pelo menos, duas amostras do doente in vitro, pelo menos uma é recolhida em conjunto com a administração ao doente, do agente farmacêutico para perda de peso; identificação electronicamente se existe uma redução no nível das LRT V6 associada ao agente farmacêutico para perda de peso; e avaliação da probabilidade do doente responder favoravelmente a um agente farmacêutico para perda de peso com base no passo de identificação. Lisboa, 27 de Dezembro de 2011