PT1572726E - Composto kahalalide f 4-metil-hexanóico - Google Patents

Description

1 DESCRIÇÃO "COMPOSTO KAHALALIDE F 4-METIL-HEXANÓICO"

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção encontra-se direccionada para novos compostos anti-tumorais de kahalalide, em particular para análogos de kahalalide F, onde o ácido 5-metil-hexanóico alifático foi substituído pelo ácido 4-metil-hexanóico, composições farmacêuticas que contêm os mesmos e sua utilização como agentes anti-tumorais, antivirais, antifúngicos e no tratamento da psoríase.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Os compostos de kahalalide são peptídeos isolados de espécies marinhas herbívoras havaianas do molusco Elysia rufescens e sua alimentação, a alga verde Bryopsis.sp. . Kahalalides A-F são descritas em Hamman et al., J. Am. Chem. Soc., 1993, 115, 5825-5826.

Kahalalide A-G são descritos em Hamann, M. et al., J. Org. Chem, 1996, 61, 6594-6600: "Kahalalides: peptídeos bioactivos de um molusco marinho Elysia rufescens e sua dieta de algas Bryopsis sp.". ".

Kahalalide H e J são descritas em Scheuer p.j. et al., J. Nat. Prod. 1997, 60,562-567: "Two acyclic kahalalides from the sacoglossan mollusk Elysia rufescens".

Kahalalide O é descrito em Scheuer P.J. et al., J. Nat. Prod. 2000,63(1) 152-4: A new depsipeptide from the sacoglossan mollusk Elysia ornata and the green alga Bryopsis species". 2

Para kahalalide K, vide Kan, Y. et al., J. Nat. Prod. 1999 62(8) 1169-72: "Kahalalides K: A new cyclic depsipeptide from the Hawaiian green alga bryopsis species".

Para relatórios relacionados, vide igualmente Goetz et al., Tetrahedron, 1999, 55; 7739-7746: "The absolute stereochemistry of Kahalalide F"; Albericio, F. et al. Tetrahedron Letters, 2000,41, 9765-9769: "Kahalalide B. Synthesis of a natural cyclodepsipeptide"; Becerro et al. J. Chem. Ecol. 2001, 27(11), 2287-99: "Chemical defenses of the sarcoglossan mollusk Elysia rufescens and its host Alga bryopsis sp."

Dos compostos kahalalide, o kahalalide F é o mais promissor devido à sua actividade anti-tumoral. A sua estrutura é complexa, incluindo seis aminoácidos como uma parte cíclica e uma cadeia exocíclica de sete aminoácidos com um terminal de grupo terminal de ácido gordo. A sua actividade contra culturas de células in vitro de carcinoma humano A-549 do pulmão e carcinoma humano HT-29 do cólon foi registada na Patente europeia EP 610 078. Kahalalide F demonstrou igualmente possuir características antivirais e antifúngicas.

Estudos pré-clínicos in vivo determinaram que a dose máxima tolerada (MTD) de Kahalalide F, em ratinhos fêmeas, após uma injecção dum único bólus iv era de 280 pg/kg. Enquanto as doses únicas imediatamente acima da mtd iv eram extremamente tóxicas, exibindo os animais sinais de neurotoxicidade e consequente morte, podiam ser administrados repetidamente 280 pg/kg de Kahalalide F, de acordo com um esquema de uma vez ao dia durante cinco dias, sem qualquer sinal aparente de toxicidade aguda. Vide Supko, F. et al., Proceedings of the 1999 AACR NCI EORTC 3 3 Preclinical

International Conference, abstract 315: pharmacology studies with the marine natural product Kahalalide F". WO 02 36145 descreve composições farmacêuticas que contêm kahalalide F e novas utilizações deste composto na terapia do cancro. WO 03 33012, a partir do qual reivindicamos prioridade, descreve a utilização clinica em oncologia de compostos Kahalalide. GB 0304367, a partir do qual reivindicamos igualmente prioridade, descreve a utilização de compostos kahalalide no tratamento da psoriase e doenças relacionadas com a mesma. A sintese e as actividades citotóxicas de compostos de kahalalide sintéticos e naturais são descritas em WO 01 58934. WO 01 58934 descreve a sintese Kahalalide F e também de compostos com estrutura semelhante, na qual a cadeia de ácido gordo terminal é substituída por outros ácidos gordos.

Existe ainda uma necessidade de facultar mais compostos anti-tumorais, em particular, mais compostos de Kahalalide com características melhoradas.

RESUMO DA INVENÇÃO

Descobrimos, inesperadamente, que um dos compostos análogos de kahalalide apresenta uma actividade promissora e eficácia anti-tumoral melhorada em modelos in vivo. A presente invenção está orientada para um composto da fórmula 1: 4

e para sais farmaceuticamente aceitáveis, pró-fármacos, tautómeros e solvatos dos mesmos.

Este composto corresponde a Kahalalide F com uma cadeia de ácido gordo terminal 4-metilhexanóica, a qual será, doravante referida como KF 4-metil-hexanóico.

Numa realização preferida, a presente invenção encontra-se direccionada para um composto que contenha ácido (4S)-metil-hexanóico, com a fórmula 2: 5

Formula 2 e para sais farmaceuticamente aceitáveis, pró-fármacos, tautómeros e solvatos dos mesmos. Este composto será doravante referido como KF (4S)-metil-hexanóico. A presente invenção encontra-se igualmente direccionada para uma composição farmacêutica que inclui um composto, tal como anteriormente definido, e um suporte, veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável. A presente invenção apresenta ainda um método para tratar qualquer mamífero, nomeadamente um ser humano, afectado por cancro ou psoríase, o qual inclui a administração, ao indivíduo afectado, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como o acima definido. A presente invenção pode ser empregue particularmente para o tratamento de doentes com cancro refractário que não respondem favoravelmente a outros tratamentos. Em particular, as composições da presente invenção podem ser 6 empregues após se ter tentado outra quimioterapia, a qual não apresentou resultados. A presente invenção está particularmente orientada para o tratamento de doentes afectados pelo cancro da próstata, cancro da mama, carcinoma hepatocelular, melanoma, cancro colorectal, cancro renal, cancro do ovário, cancro NSCL, cancro epitelial, cancro pancreático e tumores que expressam em excesso o oncogénio Her2/-neu.

Num outro aspecto a presente invenção é orientada para a utilização de um composto, tal como acima definido, na produção de um medicamento. Numa realização preferida, o medicamento é para o tratamento do cancro, psoriase, infecção virai ou infecção fúngica. A invenção apresenta adicionalmente kits que incluem recipientes separados que contêm uma composição farmacêutica que inclui uma composição, tal como acima definido, e um agente reconstituinte. São igualmente apresentados métodos de reconstituição. A presente invenção é igualmente orientada para um processo para a preparação de um composto, como acima definido. Preferencialmente, o processo utiliza o ácido 4-metil-hexanóico como material de partida. Numa realização preferida, o ácido 4-metil-hexanóico é ácido (4S)-metil-hexanóico. Numa realização mais preferida o processo é uma sintese de fase sólida.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Identificámos análogos de Kahalalide F que indicam um melhoramento significativo na actividade relativamente ao Kahalalide F. Tal como indicado nos exemplos comparativos, o KF 4-metil-hexanóico apresentou, inesperadamente, uma eficácia significativamente melhorada em modelos de cancro 7 in vivo. Este é o facto mais surpreendente tendo em conta a pequena diferença estrutural entre KF 4-metil-hexanóico e KF 5-metil-hexanóico. 0 composto da presente invenção é o Kahalalide F com uma cadeia de ácido gordo 4-metil-hexanóico em vez de 5-metil-hexanóico e com uma estrutura de acordo com a fórmula 1:

Em particular preferimos que o composto tenha uma estereoquimica como definido pela fórmula 2: 8

No entanto, os compostos da presente invenção possuem centros assimétricos e por conseguinte existem em diferentes formas enantioméricas e diastereoméricas. A presente invenção refere-se à utilização de todos os isómeros e estereoisómeros dos compostos da presente invenção e misturas dos mesmos e todas as composições farmacêuticas e métodos de tratamento que possam empregar ou conter os mesmos.

Por conveniência, referimo-nos aos compostos da presente invenção, notavelmente os compostos 1 e 2, como compostos kahalide F 4-metil-hexilo ou compostos KF 4-mehex. Preferencialmente os compostos KF 4-mehex da presente invenção são grandemente livres, substancialmente livres ou completamente livres de outros compostos kahalalide. Por exemplo, o KF 4-mehex da presente invenção é preferencialmente livre de kahalalide F possuindo uma cadeia lateral 5-metil-hexilo. Em particular, o KF 4-mehex da presente invenção contém preferencialmente no máximo 25%, 10%, 5%, 2%, 1% ou 0,5%, ou menos do que 0,5% de 9 qualquer outro kahalalide, nomeadamente kahalalide F. Num aspecto relacionado, o KF 4-mehex da presente invenção é facultado numa forma substancialmente pura. Este composto kk 4-mehex livre, em certa medida, de outros kahalalides é particularmente adequada para composições farmacêuticas e métodos de tratamento da presente invenção. A presente invenção inclui os compostos da presente invenção e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que um ou mais átomos de hidrogénio e carbono ou outros são substituídos por isótopos dos mesmos. Estes compostos podem ser úteis como instrumentos de investigação e diagnóstico em estudos farmacocinético-metabólicos e em ensaios de ligação.

Tal como presentemente utilizado, os compostos desta invenção, incluindo os compostos de fórmula 1 e 2, são definidos para incluir derivados ou produtos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos Um "derivado ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável" designa qualquer sal farmaceuticamente aceitável, éster, sal de um éster ou outro derivado de um composto da presente invenção que, mediante administração a um receptor, tem capacidade de facultar (directa ou indirectamente) um composto da presente invenção ou um metabolito ou resíduo do mesmo. Pró-fármacos e derivados particularmente favorecidos são aqueles que aumentam a biodisponibilidade dos compostos da presente invenção, quando tais compostos são administrados a um doente (por exemplo, ao permitir que um composto oralmente administrável seja mais rapidamente absorvido pelo sangue), melhorar a distribuição do composto progenitor num determinado compartimento biológico, aumentar a solubilidade para permitir administração por 10 injecçao, alterar o metabolismo ou alterar a taxa de excreção.

Sais dos compostos da presente invenção podem incluir sais de adição de ácido derivados de um azoto no composto de fórmula 1 ou 2. A actividade terapêutica reside na fracção derivada do composto da presente invenção como presentemente definido e a identidade do outro componente é de menor importância, embora para efeitos terapêuticos e profiláticos seja, de preferência, farmaceuticamente aceitável para o doente. Exemplos de sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis incluem aqueles derivados de ácidos minerais, tais como, ácidos clorídrico, bromídrico, fosfórico, metanofosfórico, nítrico e sulfúrico, e ácidos orgânicos, tais como, ácidos tartárico, acético, trifluoroacético, cítrico, málico, láctico, fumárico, benzóico, glicólico, glucónico, succínico e metanossulfónico e arilsulfónico, por exemplo, p- toluenossulf ónico. Um sal preferido é o sal trifluoroacético.

Os compostos da presente invenção podem ser preparados de acordo com o processo de síntese descrito em WO 01 58934, por exemplo adicionando o ácido 4-metil-hexanóico (S) ou (R) apropriado em vez de of 5-metil-hexanóico no exemplo 3 de WO 01 58934. Assim, a presente invenção abrange igualmente um processo para preparar um composto de acordo com a fórmula 1 ou 2. Preferencialmente, o processo utiliza ácido 4- metil-hexanóico como material de partida. Mais preferencialmente o material de partida é ácido (4S) — metil-hexanóico. A síntese é, preferencialmente, um processo sintético de fase sólida. São facultados exemplos, em maior detalhe, sobre a síntese nos exemplos abaixo. 11 0 processo da presente invenção pode ser realizado a partir de materiais de partida num modo rápido enantio-controlado, estereo-controlado, tirando partido da metodologia sintética de fase sólida, em que a molécula em construção é ligada a um suporte insolúvel durante todas as operações sintéticas.

As formulações farmacêuticas dos compostos da presente invenção podem ser adaptadas para administração por qualquer via apropriada, por exemplo, por uma via oral (incluindo bucal ou sublingual), rectal, nasal, tópical (incluindo bucal ou sublingual ou transdérmica), vaginal ou parentérica (incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa ou intradérmica. Estas formulações podem ser preparadas por qualquer método conhecido na técnica de farmácia, por exemplo, ao associar o ingrediente activo com o(s) veiculo (s) ou excipiente(s).

Preferencialmente, as composições farmacêuticas dos compostos da presente invenção incluem liquido (soluções, suspensões ou emulsões) com composição adequada para administração intravenosa, e podem conter o composto puro ou em combinação com qualquer veiculo ou outros compostos farmacologicamente activos. É possível encontrar uma maior orientação sobre os compostos farmacêutico em WO 02 36145,0 qual é presentemente incorporado por referência na integra.

Deste modo, uma combinação de um surfactante não-iónico e um ácido orgânico é adequada para utilização com um agente de volume para se obter uma forma liofilizada de um composto da invenção adequada para reconstituição. A reconstituição é preferencialmente efectuada com uma mistura de um solubilizante emulsionante, alcanol e água. A composição liofilizada inclui preferencial e principalmente o agente de volume, tal como pelo menos 90% 12 ou pelo menos 95% do agente de volume. Exemplos de agentes de volume são bem conhecidos e incluem sucrose e manitol. Podem ser empregues outros agentes de volume. 0 surfatante não-iónico na composição liofilizada é preferencialmente um éster de sorbitano, mais preferencialmente um éster de polietileno sorbitano, tal como um alcanoato de polioxietileno de sorbitano, principalmente um mono-oleato de polioxietileno de sorbitano, por exemplo polisorbato 80. O surfatante não-iónico inclui normalmente uma pouca % da composição, tal como 0 a 5% da composição, por exemplo 2 a 3 ou 4% da composição. O ácido orgânico na composição liofilizada é tipicamente um ácido alifático, preferencialmente um ácido hidroxicarboxilico e mais preferencialmente um ácido hidroxipolicarboxílico, nomeadamente ácido citrico. O ácido orgânico inclui tipicamente uma pequena % da composição, tal como 0 a 5% da composição, por exemplo 2 a 3 ou 4% da composição. A quantidade do composto da invenção na composição liofilizada é tipicamente inferior a 1%, ou frequentemente inferior a 0,1%, da mistura. Uma quantidade adequada situa-se na proporção de 50 a 200 pg, podendo dizer-se de aproximadamente 100 pg, por 100 mg da composição. O solubilizante emulsionante para o agente reconstituinte inclui adequadamente um éster de polietilenoglicol, nomeadamente um éster de um ácido gordo, mais preferencialmente um PEG oleato tal como PEG-35 oleato. O solubilizante emulsionante constitui adequadamente 0 a 10% do agente reconstituinte, tipicamente entre cerca de 3 a 7%, podendo dizer-se aproximadamente de 5%. O alcanol é normalmente etanol e constitui 13 adequadamente na proporção de 0 a 10% do agente reconstituinte, tipicamente entre cerca de 3 a 7%, podendo dizer-se aproximadamente de 5%. O remanescente do agente reconstituinte é água, e proporciona uma solução reconstituída adequada para injecção intravenosa.

Pode ser ainda apropriada uma diluição da solução reconstituída com 0,9% de solução salina para perfusão do composto kahalalide. Um equipamento de perfusão adequado inclui preferencialmente um recipiente de vidro em vez de um de polietileno. Os tubos são preferencialmente de silicone. O agente reconstituinte preferido inclui então 2 a 7%, podendo dizer-se aproximadamente 5%, solubilizante emulsionante; 2 a 7%, podendo dizer-se aproximadamente 5%, álcool; e o remanescente água.

As formulações podem ser apresentadas em recipientes de dose unitária ou de dose múltipla, por exemplo, ampolas e frascos selados, e podem ser armazenadas em condições liofilizadas requerendo apenas a adição de um veículo líquido estéril, por exemplo, água para injecções, imediatamente antes da respectiva utilização.

Deste modo, a presente invenção apresenta adicionalmente kits que incluem recipientes separados que contêm a composição liofilizada e o agente reconstituinte. São igualmente apresentados métodos de reconstituição. A administração dos compostos ou composições da presente invenção é realizada por perfusão intravenosa. Podem ser utilizados períodos de perfusão de até 72 horas, mais preferencialmente 1 a 24 horas, sendo cerca de 1 hora ou 3 horas o período mais preferido. Os tempos curtos de perfusão, que permitem que o tratamento seja executado sem 14 necessidade do doente permanecer uma noite no hospital são particularmente desejados. No entanto, a perfusão pode durar aproximadamente 24 horas ou mais, se necessário. A administração é realizada em ciclos, no método de aplicação preferido, uma perfusão intravenosa de um composto da presente invenção é administrada ao doente na primeira semana de cada ciclo; é permitido que os doentes recuperem durante o resto do ciclo. A duração preferida de cada ciclo é de 1, 3 ou 4 semanas; podem ser administrados ciclos múltiplos, se necessário. Num protocolo de dosagem alternativo, o composto da presente invenção é administrado durante aproximadamente 1 hora durante 5 dias consecutivos todas as 3 semanas. Podem ser pensados outros protocolos como variantes.

Consoante as necessidades são efectuados atrasos das doses e/ou reduções nas doses e ajustes de horários dependendo da tolerância individual do doente aos tratamentos, em particular são recomendadas reduções nas doses em doentes com níveis de transaminases hepáticas no soro ou fosfatase alcalina mais elevados que o normal.

Num aspecto, a presente invenção apresenta um método para tratar um ser humano doente que sofre de cancro, incluindo a administração ao referido doente de um composto da presente invenção numa dose inferior 1200 mcg/m2/dia, preferencialmente inferior 930 mcg/m2/dia e ainda mais preferencialmente inferior a 800 mcg/m2/dia. Adequadamente a dose é de, pelo menos, 320 mcg/m2/dia. Preferencialmente a dose encontra-se na proporção de 400-900 mcg/m2/dia, preferencialmente 500-800 mcg/m2/dia, mais preferencialmente 600-750 mcg/m2/dia. As doses principalmente preferidas são de aproximadamente 650-700 mcg/m2/dia. 15

Num outro aspecto, a presente invenção apresenta um método para tratar um ser humano doente que sofre de cancro, que inclui a administração diária durante 5 dias ao referido doente de um composto da invenção a uma dose inferior a 930 mcg/m2/dia, seguida de um período de descanso de 1 a 4 semanas, durante as quais o composto kahalalide não é administrado. A dose é preferencialmente de 650-750 mcg/m2/dia, mais preferencialmente cerca de 700 mcg/m2/dia. O período de perfusão é preferencialmente de entre 1 a 24 horas, mais preferencialmente entre 1 a 3 horas. O período de perfusão principalmente preferido é de aproximadamente 1 a 3 horas. O período de descanso é de preferencialmente 2-3 semanas, mais preferencialmente cerca de 2 semanas. A presente invenção apresenta igualmente um método para tratar um ser humano doente que sofre de cancro, o qual inclui a administração, ao referido doente, de um composto da presente invenção uma vez por semana a uma dose inferior a 800 mcg/m2/dia. A dose é preferencialmente 600-700 mcg/m2/dia, mais preferencialmente 650 mcg/m2/dia. O período de perfusão é preferencialmente entre 1 a 24 horas, mais preferencialmente entre 1 a 3 horas. O período de perfusão principalmente preferido é de aproximadamente 1 hora.

Embora sejam facultadas abaixo orientações para a dosagem, a dosagem correcta do composto irá variar de acordo com a formulação particular, o modo de aplicação, e o local particular, hóspede e tumor a ser criado. Outros factores como a idade, peso corporal, sexo, dieta tempo de administração, proporção de excreção, condição do hospedeiro, combinações de fármacos, sensibilidades de reacção e severidade da doença devem ser considerados. A 16 administração pode ser realizada continuamente ou periodicamente dentro da dose máxima tolerada. A presente invenção está particularmente orientada para o tratamento de doentes afectados pelo cancro da próstata, cancro da mama, carcinoma hepatocelular, melanoma, cancro colorectal, cancro renal, cancro do ovário, cancro NSCL, cancro epitelial, cancro pancreático e tumores que expressam em excesso o oncogénio Her2/-neu.

Mais preferencialmente, a presente invenção está orientada para o tratamento do cancro hepatocelular, melanoma, cancro da mama e cancro da próstata. A presente invenção encontra-se igualmente orientada para um método de tratar uma doença da pele que envolve hiperproliferação de células da derme num mamífero, o qual inclui a administração, ao mamífero, de uma quantidade eficaz não tóxica de um composto da presente invenção. A doença de pele é preferencialmente psoríase. A presente invenção está preferencialmente orientada para o tratamento de seres humanos doentes afectados por psoríase, em particular psoríase severa.

Os compostos e composições desta invenção podem ser utilizados com outros fármacos para se proporcionar uma terapia de combinação. Os outros fármacos podem fazer parte da mesma composição, ou ser facultados como uma composição separada para administração ao mesmo tempo ou numa altura diferente. A identidade do outro fármaco não é particularmente limitada, embora se preveja a combinação com outro agente quimioterapêutico, hormonal ou anticorpo. As quantidades do composto da presente invenção e o outro agente ou outros agentes farmaceuticamente activos e os períodos de tempo relativos serão seleccionados de modo a se obter o efeito terapêutico combinado desejado. 17

EXEMPLOS

Exemplo 1: Preparação de KF (4S)-metil-hexanólco

Procedimentos Gerais e fases iniciais do processo tal como descrito em WO 01 58934. (4S)-MeHex-D-Val-Thr(iBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-allo-lle-D-allo-Thr(Val-Alloc)-D-allo-lle-D-Val-O-TrtCl-resina: O grupo Fmoc foi removido e Fmoc-Val-OH (678 mg, 2 mmol, 4 equiv), Fmoc-Thr(tBu)-OH (992 mg, 2,5 mmol, 5 equiv) , Fmoc-D-Val-OH (678 mg, 2 mmol, 4 equiv), e (4 S) — MeHex-OH (195 mg, 1,5 mmol, 3 equiv) foram sequencialmente adicionados a peptidil-resina acima indicada (Exemplo 3) utilizando DIPCDI (233 pL, para 1,5 mmol e 3 equiv; 310 pL, para 2 mmol e 4 equiv; e 388 pL, para 2,5 mmol, 5 equiv) e HOBt (230 mg, para 1,5 mmol e 3 equiv; 307 mg, para 2 mmol e 4 equiv; e 395 mg, 2,5 mmol. 5 equiv) para 90 min. Em todos os casos, após 90 minutos de acoplagem, o resultado do teste com ninidrina foi negativo. A remoção do grupo Fmoc e as lavagens foram realizadas como descrito nos Procedimentos Gerais. (4 S)-MeHex-D-Val-Thr(iBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-allo-lle-D-allo-Thr(Val-Z-Dhb-Phe-Alloc)-D-allo-Ile-D-Val-O-TrtCl-resina: O grupo alloc foi removido com Pd(PPh3)4 (58 mg, 0,05 mmol, 0,1 equiv) na presença de PhSiH3 (617 pL, 5 mmol, 10 equiv) sob atmosfera de Ar e Alloc-Phe-Z-Dhb-OH (666 mg, 2 mmol, 4 equiv) e HOAt (273 mg, 2 mmol, 4 equiv) foram dissolvidos em DMF (1,25 mL) e adicionados a peptidil-resina, depois foi adicionado DIPCDI (310 pL, 2 mmol, 4 equiv) e a mistura foi agitada durante 5 h, tendo o resultado do teste com ninidrina sido negativo. Após 18 lavagens com DMF e CH2C12, foi tratada uma aliquota da peptidil-resina com TFA-H20 (1:99) durante 1 min e o produto foi caracterizado por MALDI-TOF-MS, calculado para C88 Hi46 N14 02i, 1.736, 18. Descoberto: m/z 1.758m67 [M+Na]+, 1.774,62 1.618,2 [M+K]+. (4 S)-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-allo-Ile-D-alo-Thr(Val-Z-Dhb-Phe-H)-D-allo-Ile-D-Val-OH:

Após lavagens com DMF e CH2C12, o grupo Alloc foi removido com Pd(PPh2)4 (58 mg, 0,05 mmo/, 0,1 equiv) na presença de PhSiH3 (617 pL, 5 mmo/, 10 equiv) sob atmosfera de Ar. O peptideo protegido foi clivado da resina por TFA-CH2C12 (1:99) (5 x 30 seg). O filtrado foi ligado sobre H20 (4 mL) e a H20 foi parcialmente removida num rotavapor. Foi depois adicionado ACN para dissolver a substância sólida que surgiu durante a remoção de H20 e a solução foi liofilizada para se obter 639 mg (387 pmol, 77% rendimento) do composto em epígrafe com uma pureza >95% como verificado por HPLC (Condição A, tR 10,5 min). KF (4S)-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-ciclo(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)=(4S)-metil-hexanóico O peptideo protegido (Exemplo 6) (639 mg, 387 pmol) foi dissolvido em CH2C12 (390 mL, 1 mM) , e HOBt (237 mg, 1,55 inmol) foi dissolvido no volume mínimo de DMF para dissolver HOBt, e foram adicionados DIEA (203 pL, 1,16 mmol, 3 equiv) e DIPCDI (240 pL, 1,55 mmol, 4 equiv). A mistura foi deixada agitar durante 1 hora e depois o curso da fase de ciclização foi verificado por HPLC. O solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida. O peptideo cíclico protegido foi dissolvido em TFA-H20(19: 1, 85 mL) e mistura foi deixada em agitação durante 1 h. O solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida, foi 19 adicionado dioxano (30 mL) e o solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida (o processo foi repetido três vezes). Depois foi acrescentada e liofilizada H20 (40 mL). O produto bruto foi purificado por HPLC (Kromasil C8 5 pm, 205 x 50 mm), isocrático de 44% acetonitrilo (+0,05% TFA) em água (+0,05% TFA), 55 mL/h, detecção a 220 nm, para se obter o produto em epígrafe (192 mg, 0,13 mmol, 26% produção, 92,3%). MALDI-TOF-MS, calculado para C75 H124 N14 0i6, 1, 477.9. Descoberto: m/z 1,500.12 [M+Na]+, 1,515.97 [M+K]+. 0 espectro 1H-NMR (2,5 mM; 500 MHz, H20-D20 (9:1) do composto encontra-se indicado no Quadro I).

Quadro I RESÍDUO N-H Ha Hfi OUTRO (Z) -Dhb 9, 59 (s) 6, 63 (q, J =7,5 Hz) 1,19 (d, y-CH3) D-allo-Ile 1 8,82 (d, J =9, 0 Hz) 4,42 1,87 1,25, 1,09, 0,82 (γ-CH2,y-CH3, 8- CH3) L-Fe 8,75 (d, J =5,5 Hz) 4, 63 3,08 (m) 7,31 (2H Ar, t) 7,25 (3H Ar, d) D-allo-Thr 8,67 (d, J =9,0 Hz) 4, 64 5,05 (m) 1,21 (y-CH3) D-Val 3 8,13 (d, J =7,5 Hz) 4,33 2,01 0,90 (2γ-ΟΗ3) L-Orn 8,29 (d, J =7,5 Hz) 4,31 1,66 (2H) 1,88 (γ-ΟΗ2) , 2,96 (bs, Õ-CH2), 7,56 (ε-ΝΗ3+) D-al lo~Ile 2 7,92 (d) 4,18 1,80 1,25, 1,09, 0,81 (γ-CH2,y-CH3, õ-CH3) D-Val 5 8,01 (d) 4, 08 2,07 0,87 (2y-CH3) L-Thr 8,19 (d, J =7,5 Hz) 4, 29 4,14 (m) 1,13 (y-CH3) D-Val 2 7,89 (d, J =7,5 Hz) 4, 32 2,11 0,78 (γ-ΟΗ3) D-Val 4 8,04 (d) 4,10 2,07 0,90 (2y-CH3) 20 L-Val 1 7,19 (d, J =9 Hz) 4,02 1,52 0,75 (y-CH3) , 0,65 (d, y-CH3) D-Pro 4,36 2,23, 1, 99 (m,J5-CH2) 1,85 (πι,γ-ΟΗ2) , 3,83 (1H, m, 5-CH2), 3,64 (1H, m, õ-CH2) 4(S)-MeHex 2,26 (2H) 1,57 (b-CH2), 1,26, 1,10,1,33, 0,79 (d-CH2, S-CH3, y-CH, e-CH3) A espectroscopia ^-RMN [1H, NOESY, TOCSY a (278K)] foi executada num Varian Unity Plus (500 MHz)

As alterações químicas (d) são expressas em partes por milhão do lado contrário de TMS. Constantes de acoplagem são expressas em hertz.

Exemplo 2: Preparação de KF (4R)-metil-hexanóico

Os procedimentos experimentais, tal como descritos no Exemplo 1, começando com 1 g de resina, foram realizados com as únicas excepções que, na fase apropriada, (4 S) — MexHex foi substituído por (4R)-MexHex. O produto (220 mg, 0,15 mmo/, 30%, 92,3% pureza) foi caracterizado por ES-MS, C75 H124 N14 Oi6, 1,477.9. Descoberto: m/z 1, 499, 07 [M+Na]+, 1,514.94 [M+K] +.

Exemplo 3: Actividade citotóxica in vitro A finalidade destes ensaios é interromper o crescimento de uma cultura celular tumoral "in vitro" por meio de uma exposição continuada das células à amostra a ser testada.

LINHAS CELULARES

Nome N° ATCC Espécie Tecido Caracteristicas P-388 CCL-46 ratinho fluido asciticoNeoplasia linfóide K-562 CCL-243 Ser Humano leucemia Eritroleucemia (efusão pleural) A-549 CCL-185 Ser Humano pulmão Carcinoma do pulmão "NSCL 21 SK-MEL-28 HTB-72 Ser Humano melanoma melanoma maligno HT-29 HTB-38 Ser Humano cólon adenocarcinoma do cólon LoVo CCL-229 Ser Humano cólon adenocarcinoma do cólon LoVo-Dox Ser Humano cólon adenocarcinoma do cólon (MDR) SW620 CCL-228 Ser Humano cólon adenocarcinoma do cólon (metástase em nódulo linfático) DU-145 HTB-81 Ser Humano próstata carcinoma da próstata, receptores não androgénicos LNCaP CRL-1740 Ser Humano próstata carcinoma da próstata, com receptores androgénicos SK-BR-3 HTB-30 Ser Humano mama Adenocarcinoma da mama (Her2/neu, (efusão pleural) MCF-7 HTB-22 Ser Humano mama Adenocarcinoma da mama (efusão pleural) MDA-MB-231 HTB-26 Ser Humano mama Adenocarcinoma da mama Her2/neu, (efusão pleural) IGROV-1 Ser Humano ovário Adenocarcinoma do ovário IGROV-ET Ser Humano ovário Adenocarcinoma do ovário, caracterizado como células resistentes à ET-743 SK-OV-3 HTB-77 Ser Humano ovário Adenocarcinoma do ovário (ascites malignas) OVCAR-3 HTB-161 Ser Humano ovário Adenocarcinoma do ovário HeLa CCL-2 Ser Humano cérvix Carcinoma epitelóide do cérvix HeLa-APL CCL-3 Ser Humano cérvix Carcinoma epitelóide do cérvix, caracterizado como 22 células resistentes à aplidina A-498 HTB-44 Ser Humano rim carcinoma do rim PANC-1 CRL-1469 Ser Humano pâncreas Carcinoma pancreático epitelóide HMEC1 Ser Humano endotélio

Um ensaio de tipo colorimétrico, utilizando uma reacção de sulforhodamina B (SRB) foi adaptado para uma medida quantitativa de crescimento e viabilidade celular [seguindo a técnica descrita por Philip Skehan, et ai. (1990), New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer drug screening, j. Natl. Câncer Inst., 82:

Esta forma de ensaio emprega micro-placas de cultura celular de 96 poços com 9 mm de diâmetro (Faircloth, 1988; Mosmann, 1983). A maioria das linhas celulares é obtida da American Type Culture Collection (ATCC) derivadas a partir de diferentes tipos de cancro humano.

As células são mantidas em RPMI 1640 10% FBS, suplementado com 0,1 g/1 de penicilina e 0,1 g/1 de sulfato de estreptomicina e depois incubadas a 37° C, 5% de C02 e 98% de humidade. Para as experiências, as células são colhidas a partir de culturas subconfluentes utilizando tipsina e re-suspensas num meio fresco antes de serem colocadas em placas.

As células são semeadas em placas de microtitulação de 96 poços, a 5x 103 células por poço em aliquotas de 195 μΐ meio sendo-lhes permitido ligar-se à superfície da placa ao crescerem num meio isento de fármacos durante 18 horas. Depois, as amostras são adicionadas em aliquotas de μΐ numa proporção de 10 a 10-8 pg/ml, dissolvidas em DMSO/EtOH/PBS 23 (0,5: 0,5:99). Após 48 horas de exposição, o efeito anti-tumor é medido pela metodologia SRB: as células são fixadas ao se adicionarem 50 μΐ de 50% (p/vol) de ácido tricloroacético (TCA) frio ao serem incubadas durante 60 minutos a 4°C. As placas são lavadas com água desionizada e secas. Cem μΐ de solução SRB (0,4% p/vol 1% de ácido acético) são adicionados a cada poço de microtitulação e incubados durante 10 minutos à temperatura ambiente. O SRB não ligado é removido por lavagem com 1% de ácido acético. As placas são secas ao ar e as manchas ligadas são solubilizadas com o tampão Tris. As densidades ópticas são lidas num leitor de placa espectrofotométrico automatizado a um comprimento de onda simples de 490 nm. São calculados os valores para a média +/- SD de dados dos poços triplicados. Alguns parâmetros para respostas celulares podem ser calculados: GI = Inibição de crescimento, TGI = inibição de crescimento total (efeito citostático) e LC = morte celular (efeito citotóxico).

Os resultados são apresentados no Quadro II, não se verifica diferença significativa entre os compostos:

Quadro II Dados da Actividade (Molar) LINHA CELULAR 5-methhex. KF KF (4 S) -methhex KF (4R)-methhex DU-145 GI50 7,51 E-07 2,37E-07 1,20E-06 TGI 1,64E-06 6,97E-07 2,14E-06 LC50 3,60E-06 2,49E-06 3,82E-06 LN-caP GI50 9,61 E-07 1,12E-06 1,50E-06 TGI 2,31 E-06 2,58E-06 2,46E-06 24 LINHA CELULAR 5-methhex. KF KF (4 S) -methhex KF (4R)-methhex LC50 5,57E-06 5,93E-06 4,04E-06 SKOV-3 GI50 - - - TGI - - - LC50 - - - IGROV GI50 4,20E-07 2,92E-07 9,41E-07 TGI 1,40E-06 7,51 E-07 1,81E-06 LC50 3,80E-06 2,62E-06 3,50E-06 IGROV-ET GI50 4, 47E-07 2,25E-07 8,05E-07 TGI 9,54E-07 4,79E-07 1,62E-06 LC50 3,09E-06 2,82E-06 3,2 6E-0 6 SK-BR-3 GI50 3,98E-07 1,81 E-07 1,25E-06 TGI 4,48E-06 3,32E-07 2,20E-06 LC50 6,77E-06 6,06E-07 3,8 6E-0 6 MEL-28 GI50 6,90E-07 1,43E-06 1,14E-06 TGI 1,56E-06 2,60E-0 6 2,09E-06 LC50 3,55E-06 4,72E-06 3,80E-06 H-MEC-1 GI50 - - - TGI - - - 25 LINHA CELULAR 5-methhex. KF KF (4 S) -methhex KF (4R)-methhex LC50 - - - A-549 GI50 8,66E-07 2,67E-07 1,20E-06 TGI 1,81 E-06 7,17E-07 2,2 6E-06 LC50 3,78E-06 3,09E-06 4,24E-06 K-562 GI50 1,54E-06 2,52E-0 6 3,73E-06 TGI 2,95E-06 6,77E-06 6,77E-06 LC50 5,66E-06 6,77E-06 6,77E-06 PANC-1 GI50 1,38E-06 6,77E-06 4,70E-06 TGI 2,89E-06 6,77E-06 4,24E-06 LC50 6,07E-06 6,77E-06 4,24E-06 HT-29 GI50 1,41 E-07 3,01 E-07 7,38E-07 TGI 2,81 E-07 7,51 E-07 1,54E-06 LC50 5,62E-07 2,71 E-06 3,22E-06 LOVO GI50 1,20E-07 1,63E-07 2,48E-07 TGI 2,26E-07 3,08E-07 7,78E-07 LC50 4,28E-07 5,80E-07 2,28E-06 LOVO-DOX GI50 1,62E-07 1,57E-07 2,88E-07 TGI 3,17E-07 3,25E-07 7,71 E-07 26 LINHA CELULAR 5-methhex. KF KF (4 S) -methhex KF (4R)-methhex LC50 6,20E-07 6, 77E-07 2,19E-06 HELA GI50 8,39E-07 1,18E-06 1,05E-06 TGI 1,89E-06 2, 42E-06 1,93E-06 LC50 4,26E-06 4,97E-06 3,55E-06 HELA-APL GI50 1,06E-06 1,04E-06 1,56E-06 TGI 2, 17E-06 2,13E-06 3,47E-06 LC50 4,43E-06 4,39E-06 6,77E-06

Exemplo 4: Toxicidade in vitro

De modo a avaliar a toxicidade dos fármacos relativamente a células normais, utilizámos placas de 96 poços a uma densidade de 5000 células por poço, tendo sido as linhas celulares mantidas conforme as instruções do ATCC: AML-12, células de fígado de ratinho normais e NRK-52E, células de rim de rato normais. As células em cada placa puderam assentar de um dia para o outro antes de se adicionar o fármaco teste. Para cada poço (ΙΟΟμΙ de meio) foram adicionados 10μ do fármaco em meio a várias concentrações (lxlCT10-0,01 mg/ml de concentração final) e foi ainda incubado de um dia para o outro a 37°C com 5% de CO2. Todas as experiências foram repetidas pelo menos 3 vezes e foram analisadas em duplicado. Após 24 horas, o ensaio MTS (CellTiter 96 aqueous) foi realizado de acordo com as direcções (para todos os tipos de células) facultadas pelo fabricante (Promega). A viabilidade celular 27 (actividade mitocondrial) é determinada por meio de conversão enzimática do substrato de formazana.

Como é possível observar a partir dos resultados no Quadro III, não se verificam diferenças significativas entre os compostos KF 5-metil-hexanóico e KF (4S)-metil-hexanóico.

Quadro III. ALM Fígado NRK Rim IC50 (μΜ) IC50 (μΜ) KF 5- metil-hexanóico 3,4 2,7 KF (4S)-metil-hexanóico 5,4 2,7

Exemplo 5: MTD in vivo em ratinhos CD-I e em animais atímicos A Dose Máxima Tolerada é determinada em ratinhos CD-I e atímicos (ambos os sexos) para cada fármaco após administração de bólus simples e após 5 doses diárias. Os resultados são apresentados no Quadro IV, não se verificam diferenças significativas entre os compostos KF 5-metil-hexanóico e KF (4S)-metil-hexanóico.

Quadro IV KF 5- metil- KF (4S)-metil- hexanóico hexanóico Ratinhos macho CD-I Bólus MTD 300 300 Ratinhos fêmea CD-I Bólus MTD 200 200 Ratinhos macho CD-I MTD 5DD 175-350 175-350 28

Ratinhos fêmea CD-I MTD 5DD 175-350 175-350 Ratinhos macho atímicos MTD Bólus 350 350 Ratinhos fêmea atímicos MTD Bólus 325 325 Ratinhos macho atímicos MTD 5DD 350 350 Ratinhos fêmea atímicos MTD 5DD 325 325

Exemplo 6: Eficácia in vivo em xenoenxertos da mama (5DD) A eficácia de KF 5-metil-hexanóico e KF (4S)-metil-hexanóico, cada um ao nível de três quartos da dose máxima tolerada (MTD), foi analisada em xenoenxertos da mama após um regime de administração de injecções diárias intravenosas (iv) de bólus (Dias 0-4) em cinco dias consecutivos em ratinhos fêmea atímicos. Os compostos foram facultadas como soluções embaladas em frascos preparadas de fresco num veículo [Cremofor-EL/Etanol/Água (5: 5: 90)]. Cada dose diária (de horário QDx5) foi administrada iv num volume de injecção de 0,2 ml por 20 gramas/animal. A avaliação do crescimento do tumor bruto do grupo tratado correspondente relativamente ao grupo de controlo com veículo (isto é,% AT/AC) indicou que o valor mais baixo (ideal) teve ocorreu no Dia 3 após iniciação do tratamento do fármaco para todos os grupos. Para além disso, as análises estatísticas em pares (utilizando o método não paramétrico, Mann-Whitney) revelaram que, inesperadamente considerando a sua estrutura muito semelhante, e tendo em conta os exemplos anteriores, houve uma diferença significativa na eficácia entre os dois compostos. 29

Com base em estudos de eficácia presentemente descritos e experiências de toxicidade realizadas anteriormente (exemplo 4) um indice terapêutico de pelo menos 1,33 (1 x MTD / 0,75 x dose mtd, dose na qual o fármaco é tóxico/ dose em que a droga é eficaz) pode ser atribuído a KF (4S) — metil-hexanóico. Para além disso, uma observação biologicamente relevante foi que o efeito anti-tumor de KF (4S)-metil-hexanóico na mama demorou mais tempo do que nos xenoenxertos da próstata (exemplo 7), com a mesma dose relativa de MTD. Em resumo, KF (4S)-metil-hexanóico aparece claramente para ser o isómero mais potente nos xenoenxertos da mama e a duração da sua acção biológica sugere que este possui um impacto de longa duração neste tipo de tumor.

Quadro V

Dose (pg/kg) Crescimento do Tumor (valor líquido) mm3, n=9 % ΔΤ/AC Controlo - 167 100 KF 5- metil-hexanóico 245 108 65 KF (4S)-metil-hexanóico 245 74 44

Exemplo 7: Eficácia in vivo em xenoenxertos da próstata (5DD) A eficácia de KF 5-metil-hexanóico e KF (4S)-metil-hexanóico, a uma única dose, foi analisada em xenoenxertos da próstata após um regime de administração de injecções diárias intravenosas (iv) de bólus (Dias 0-4) em cinco dias consecutivos em ratinhos macho atímicos. Os compostos foram facultados como soluções embaladas em frascos preparadas de 30 fresco em veículo [Cremofor-EL/Ethanol/Água (5: 5: 90)]. Cada dose diária (de horário QDx5) foi administrada iv num volume de injecção de 0,2 ml por 20 gramas/animal. A avaliação do crescimento do tumor bruto do grupo tratado correspondente relativamente ao grupo de controlo com veículo (isto é, % ΔΤ/AC) indicou que o valor mais baixo (ideal) teve ocorreu no Dia 3 após iniciação do tratamento do fármaco para todos os grupos. Para além disso, as análises estatísticas em pares (utilizando o método não paramétrico, Mann-Whitney) revelaram que foi obtida uma maior eficácia com KF (4S) metil-hexanóico com uma dose 262 pg/kg/dia. Com base em estudos de eficácia presentemente descritos e experiências de toxicidade realizadas anteriormente (exemplo 4), um índice terapêutico de pelo menos 1,33 (1 x MTD / 0,75 x dose MTD, dose na qual o fármaco é tóxico/ dose em que a droga é eficaz) pode ser atribuído a KF (4S)-metil-hexanóico. Os resultados são apresentados no quadro VI, em baixo:

Quadro VI

Dose (pg/kg) Crescimento do Tumor (valor líquido) mm3, n=10 % ΔΤ/ΔΟ Controlo - 236 100 KF 5- metil-hexanóico 262 126 53 KF (4S)-metil-hexanóico 262 62 26 31

Exemplo 8: Actividade anti-tumor de análogos de kahalalide F em fibra oca utilizando um painel de linhagens de células tumorais humanas. A actividade anti-tumor dos análogos de F Kahalalide acima discutida foi testada no sistema de fibra oca (HF) utilizando um painel de linhagens de células tumorais humanas, nomeadamente, SH-Hep-1 (hepatoma), HepG2 (carcinoma hepatocelular), Pac-1 (pâncreas) e Mel-28 (melanoma). As células tumorais humanas são encapsuladas em HFs in vitro e posteriormente implantadas em ratinhos fêmea atímicos in vivo.

Foram seleccionadas doses de KF 5-metil-hexanócio e kf (4 S) metil-hexanóico com base em experiências MTD anteriores realizadas em ratinhos atímicos resultando numa dosagem de 325 pg/l kg/dia (vide exemplo 5). Foram administradas diariamente, por via intraperitoneal (ip), cinco doses consecutivas num volume de injecção de 0,2 ml por 20 gramas/animal.

Acima de tudo, KF-4(S)-Met demonstra uma actividade anti-tumoral estatisticamente significativa contra o hepatoma (sc), carcinoma hepatocelular carcinoma (tanto ip como sc) ), e melanoma (sc), mas não em qualquer tipo de cancro do fígado testado. Um resumo dos resultados é apresentado no quadro abaixo, o qual mostra claramente as diferenças existentes entre os compostos. 32 FÁRMACO TIPO DE TUMOR/LOCALIZAÇÃO HF (número arbitrário de células/HF) SK-Hep-1 HepG2 Panc-1 Mel-28 ip SC ip SC ip SC ip SC Veículo 0,575 0, 872 0,576 0,509 0,200 0,392 2, 078 1,77 KF-4(S)-Met 0, 485 0,525* 0,335* 0,319* 0,129* 0,237§ 1, 906 1,51 KF-5-Met 0, 693 0, 686 0, 475 0,361 0,149* 0,192* 1,771 1,56 ^Estatisticamente significativo, P < 0,05 § tendência no sentido de significância, i.e., P = 0,059 33

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO

Esta lista das referências citadas pelo requerente serve apenas de interesse ao leitor. Esta lista não faz parte do documento da patente europeia. Apesar da compilação cuidadosa das referências, os erros ou as omissões não podem ser excluídos e o EPO rejeita toda a responsabilidade a este respeito.

Documentos de patente citados na descrição: • EP 610078 A [0008] • WO 0236145 A [0010] [0037] • WO 0333012 A [0011] • GB 0304367 A [0012] • WO 0158934 A [0013] [0034] [0058]

Literatura, não relacionada com patentes, citada na descrição: • Hamman et al. J. Am. Chem. Soc., 1993, vol. 115, 5825-5826 [0002] • Hamann, M. et al. Kahalalides: bioactive peptides from a marine mollusk Elysia rufescens and its algal diet Bryopsis sp. J. Org. Chem, 1996, vol. 61, 6594-6600 [0003] • Scheuer P.J. et al. Two acyclic kahalalides from the sacoglossan mollusk Elysia rufescens. J. Nat. Prod., 1997, vol. 60, 562-567 [0004] • Scheuer P.J. et al. A new depsipeptide from the sacoglossan mollusk Elysia ornata and the green alga Bryopsis species. J. Nat. Prod., 2000, vol. 63 (1), 152-4 [0005] 34 • Kan, Y. et al. Kahalalide K: A new cyclic depsipeptide from the hawaiian green alga bryopsis species. J. Nat. Prod., 1999, vol. 62 (8), 1169-72 [0006] • Goetz et al. The absolute stereochemistry of Kahalalide F. Tetrahedron, 1999, vol. 55, 7739-7746 [0007] • Albericio, F. et al. Kahalalide B. Synthesis of a natural cyclodepsipeptide. Tetrahedron Letters, 2000, vol. 41, 9765-9769 [0007] • Becerro et al. Chemical defenses of the sarcoglossan mollusk Elysia rufescens and its host Alga bryopsis sp. J. Chem. Ecol., 2001, vol. 27 (11), 2287-99 [0007] • Supko, F. et al. Preclinical pharmacology studies with the marine natural product Kahalalide F. Proceedings of the 1999 AACR NCI EORTC International Conference, 1999 [0009] • Philip Skehan et al. New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer drug screening. J. Natl. Câncer Inst., 1990, vol. 82, 1107-1112 [0068]

Claims (20)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto que possui a fórmula (4S)-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-lle-cício(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-L-Phe-Z-Dhb-L-Val), ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

2. Composto de acordo com a fórmula 1, com a fórmula (4S)-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-Ile-ciclo(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-L-Phe-Z-Dhb-L-Val), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o composto contém no máximo 25% de qualquer outro kahalalide.

4 . Composto de acordo com a qualquer das reivindicações acima, em que o composto contém no máximo 10% de qualquer outro kahalalide.

5. Composto de acordo com qualquer das reivindicações acima, em que o composto contém no máximo 5% de qualquer outro kahalalide.

6. Composto de acordo com qualquer das reivindicações acima, em que o composto contém no máximo 2% de qualquer outro kahalalide.

7. Composto de acordo com qualquer das reivindicações acima, em que o composto contém no máximo 1% de qualquer outro kahalalide. 2

8. Composto de acordo com qualquer das reivindicações acima, em que o composto contém no máximo 0,5% de qualquer outro kahalalide.

9. Composto de acordo com qualquer das reivindicações acima, em que o composto contém menos do que 0,5% de qualquer outro kahalalide.

10. Composto de acordo com qualquer das reivindicações acima, em que o outro kahalalide é kahalalide F com uma cadeia lateral 5-metil-hexanóica.

11. Composto de acordo com qualquer das reivindicações acima, em que o composto é substancialmente puro.

12. Composição farmacêutica que inclui um composto como definido em qualquer das reivindicações 1 a 11, em conjunto com um veiculo, suporte ou diluente farmaceuticamente aceitável.

13. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11 para utilização como um medicamento.

14. Composto tal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11 para utilização no tratamento de um mamífero afectado por cancro.

15. Utilização de um composto, tal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, na produção de um medicamento para o tratamento de um mamífero afectado por cancro. 3

16. Utilização, de acordo com a reivindicação 14 ou reivindicação 15, em que o mamífero afectado por cancro é um ser humano.

17. Utilização, de acordo com as reivindicações 14 a 16, em que o cancro é um cancro refractário que não responde favoravelmente a outros tratamentos.

18. Utilização, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 17, em que o cancro é seleccionado de entre cancro da próstata, cancro da mama, carcinoma hepatocelular, melanoma, cancro colorectal, cancro renal, cancro do ovário, cancro NSCL, cancro epitelial, cancro pancreático e um tumor que sobreexpressa o oncogénio Her2/neu.

19. Kit que inclui recipientes separados que contêm uma composição farmacêutica que inclui um composto, tal como definido em qualquer das reivindicações de 1 a 11, e um agente reconstituinte.

20. Processo para preparação de um composto, tal como definido em qualquer das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo facto de utilizar ácido (4S) metil-hexanóico como material de partida.