PT1569917T - Inibidores de tubulina à base de pirazina - Google Patents

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PT1569917T
PT1569917T PT37781614T PT03778161T PT1569917T PT 1569917 T PT1569917 T PT 1569917T PT 37781614 T PT37781614 T PT 37781614T PT 03778161 T PT03778161 T PT 03778161T PT 1569917 T PT1569917 T PT 1569917T
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PT
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carcinoma
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alkyl
cell
cancer
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PT37781614T
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John Burns Christopher
Frederick Wilks Andrew
Sikanyika Harrison
Francis Harte Michael
Bu Xianyong
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Ym Biosciences Australia Pty
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    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/645—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07F9/6509—Six-membered rings
    • C07F9/650952—Six-membered rings having the nitrogen atoms in the positions 1 and 4

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Description

DESCRIÇÃO "INIBIDORES DE TUBULINA À BASE DE PIRAZINA"
CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção envolve compostos definidos nas reivindicações, composições farmacêuticas compreendendo tais compostos e o seu uso em métodos de supressão do crescimento de cancros e de outras doenças proliferativas.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO Há muitas doenças humanas e veterinárias que resultam de processos de proliferação celular descontrolada ou anormal. A mais importante entre estas doenças é o cancro, o nome genérico dado a uma ampla gama de malignidades celulares caracterizadas pelo crescimento não regulado e falta de diferenciação. A psoríase é outra doença que é caracterizada por proliferação celular descontrolada ou anormal. A psoríase é uma doença da pele crónica comum caracterizada pela presença de escamas e placas secas. A doença resulta da hiperproliferação da epiderme e da diferenciação incompleta dos queratinócitos. A psoríase envolve frequentemente o couro cabeludo, cotovelos, joelhos, costas, glúteos, unhas, sobrancelhas e regiões genitais, e pode variar na gravidade de ligeira a extremamente debilitante, resultando em artrite psoriática, psoríase pustular e dermatite psoriásica esfoliativa. Não existe, atualmente, nenhuma cura terapêutica geral para a psoriase. Enquanto os casos mais ligeiros são frequentemente tratados com corticosteróides tópicos, os casos mais graves podem ser tratados com agentes antiproliferativos, tais como o antimetabólito metotrexato, o inibidor de síntese de ADN hidroxiureia e o disruptor de microtúbulos colquicina.
Outras doenças associadas a um nível anormalmente elevado de proliferação celular incluem reestenose, em que estão envolvidas células de músculo liso vascular; estados de doença inflamatória, onde estão envolvidas células endoteliais, células inflamatórias e células glomerulares; enfarte do miocárdio, onde estão envolvidas células do músculo cardíaco; glomerulonefrite, onde estão envolvidas células renais; rejeição de transplante, onde estão envolvidas células endoteliais; e doenças infeciosas tais como infecção por HIV e malária, em que estão envolvidas certas células imunitárias e/ou outras células infectadas. A inibição da proliferação celular pode ser provocada por vários mecanismos, incluindo; agentes alquilantes; inibidores de topoisomerase; análogos de nucleótidos; antibióticos; antagonistas hormonais; e agentes danificadores de ácidos nucléicos; inter alia. Um mecanismo farmacologicamente importante de inibição da proliferação celular é através da ligação de tubulina. A tubulina é um dímero assimétrico composto por subunidades alfa e beta, que se polimeriza para formar componentes estruturais do citoesqueleto chamados microtúbulos. Os microtúbulos devem ser altamente dinâmicos por forma a realizarem muitas das suas funções. Em determinadas etapas do ciclo celular, ou em tipos celulares particulares ou organelos, são necessários microtúbulos estáveis, tais como para o transporte dentro de axónios ou para movimento ciliar e flagelar. Os microtúbulos agrupam-se durante a fase G2 do ciclo celular, e participam na formação do fuso mitótico, o que facilita a segregação das cromátides-irmãs durante o processo de divisão celular. 0 papel essencial dos microtúbulos na divisão celular e a capacidade de drogas que interagem com a tubulina para interferirem com o ciclo celular tornaram a tubulina um alvo bem sucedido para aplicações que incluem drogas anticancerigenas, fungicidas e herbicidas. Ligandos típicos de tubulina, tais como colquicina, paclitaxel, os alcaloides Vinca, tais como a vimblastina, as epotilonas, as halicondrinas, o benomil e o mebendazol, inibem diretamente a divisão celular por ligação à tubulina, o que conduz à paragem do ciclo celular no limite G2/M da mitose. Este mecanismo é a base do valor terapêutico dos compostos deste tipo, tais como o tratamento da gota com colquicina, da reestenose com paclitaxel, do cancro com paclitaxel, vinblastina, eptilonas e halicondrinas, e de infeções fúngicas com benomil e de malária e helmintos com mebendazol.
Interferir com a dinâmica ou a estabilidade dos microtúbulos pode inibir a divisão celular de várias maneiras. Tanto a estabilização dos microtúbulos como a inibição da sua polimerização impedirão a reestruturação do citoesqueleto que é necessária em vários pontos no ciclo celular e levam à paragem da progressão da célula de uma etapa no ciclo celular para a seguinte. Foram identificadas três classes principais de drogas de ligação à tubulina, nomeadamente análogos de colquicina, alcaloides da Vinca e taxanos, cada deles possuindo um local de ligação específico na molécula de β-tubulina. 0 paclitaxel (Taxol™) e os taxanos afins representam uma classe de drogas que estabiliza os microtúbulos, um processo que em última instância conduz ao "congelamento" das estruturas dos microtúbulos, de tal forma que não podem ser reestruturados (Jordan Μ. A. e Wilson L., 1998). A paragem subsequente na mitose induz o mecanismo apoptótico que causa a morte celular. Uma série de análogos de colquicina, bem como vários outros compostos que se ligam ao mesmo local na β-tubulina que a colquicina, deterioram a polimerização da tubulina e a formação microtubular. A vinblastina e várias outras drogas relacionadas com Vinca ligam-se a um local que é distinto do local da colquicina. Os compostos que se ligam ao local da Vinca impedem a formação de microtúbulos e desestabilizam os microtúbulos (Jordan et al., 1986; Rai e Wolff, 1996). Esta invenção é portanto dirigida a compostos que potencialmente modulam a dinâmica dos microtúbulos através da ligação à tubulina.
Consequentemente, a presente invenção tem como objetivo proporcionar compostos que são direta ou indiretamente tóxicos para células que se dividem ativamente e que são úteis no tratamento de cancro, infeções virais e bacterianas, reestenose vascular, doenças inflamatórias, doenças autoimunes ou psoriase. A presente invenção é também dirigida a composições terapêuticas para o tratamento das ditas condições. Outros aspetos da invenção referem-se ao facto de proporcionarem compostos para uso em métodos para se matarem células de proliferação ativas, tais como células cancerosas, bacterianas ou epiteliais, e para o tratamento de todos os tipos de cancros, infeções, e condições inflamatórias e geralmente proliferativas. Um aspeto adicional refere-se a compostos para uso em métodos para o tratamento de outras condições médicas caracterizadas pela presença de células que proliferam rapidamente, tais como psoriase e outras desordens da pele.
Numa concretização, os compostos da invenção são utilizados no tratamento de sarcomas, carcinomas e/ou leucemias. Desordens exemplificativas para as quais o composto em causa pode ser utilizado isoladamente ou como parte de um regime de tratamento incluem fibrossarcoma, mixossarcoma, lipossarcoma, condrossarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiossarcoma, endoteliossarcoma, linfangiossarcoma, linfangioendoteliossarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiossarcoma, rabdomiossarcoma, carcinoma do cólon, cancro pancreático, cancro da mama, cancro do ovário, cancro da próstata, carcinoma de células escamosas, carcinoma basocelular, adenocarcinoma, carcinoma da glândula sudorípara, carcinoma da glândula sebácea, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de células renais, hepatoma, carcinoma do dueto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionário, tumor de Wilms, cancro cervical, tumor testicular, carcinoma do pulmão, carcinoma pulmonar de células pequenas, carcinoma da bexiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craniofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, meningioma, melanoma, neuroblastoma, e retinoblastoma.
Em certas concretizações, o composto da invenção é utilizado para tratar desordens tais como carcinomas que se formam a partir de tecido da mama, da próstata, do rim, da bexiga ou do cólon.
Noutras concretizações, o composto da invenção é utilizado para tratar desordens hiperplásicas ou neoplásicas que surgem em tecido adiposo, tais como tumores de células adiposas, por exemplo, lipomas, fibrolipomas, lipoblastomas, lipomatose, hibernomas, hemangiomas e/ou lipossarcomas.
Ainda noutras concretizações, agentes infecciosos e parasitários (por exemplo bactérias, tripanossomas, fungos, etc.) podem também ser controlados utilizando-se as composições e compostos em questão.
RESUMD DA INVENÇÃO
Os presentes inventores descobriram que um grupo de compostos com base numa estrutura de pirazina di-substituída são inibidores do crescimento e proliferação de células cancerígenas. Os presentes inventores mostraram adicionalmente que estes compostos podem ligar-se à tubulina. Tais compostos seriam também úteis no tratamento de outras desordens relacionadas com hiperproliferação e podem ainda ser úteis no tratamento de desordens à base de tirosina-quinase.
Num primeiro aspeto, a presente invenção proporciona os compostos definidos nas reivindicações.
Num segundo aspeto, a presente invenção proporciona uma composição compreendendo um portador e pelo menos um composto do primeiro aspeto da invenção.
Num terceiro aspeto, a presente invenção proporciona pelo menos um composto do primeiro aspeto ou uma composição do segundo aspeto para uso num método de tratamento de um estado de doença ou desordem relacionado com hiperproliferação num indivíduo.
Num quarto aspeto, a presente invenção proporciona pelo menos um composto do primeiro aspeto ou uma composição do segundo aspeto para uso num método de tratamento de um estado de doença ou desordem associada à tirosina-quinase num indivíduo.
Num quinto aspeto, a presente invenção proporciona um composto de acordo com o primeiro aspeto para uso num método de modulação de polimerização de microtúbulos numa célula. São proporcionados aspetos adicionais que não estão relacionados com o âmbito das reivindicações para referência.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
De um modo geral, a descrição proporciona um composto da fórmula geral
I ou pró-drogas, sais, hidratos, solvatos, formas cristalinas ou diastereómeros farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que:
Ri é H, alquiloCi-6, alquilCi-6NR5R6, alquilCi-6 NR5COR6, alquilCi-6 NR5S02R6, alquilCi-6C02R5, alquilCi-6 CONR5R6, em que R5 e R6 são cada um independentemente H, alquiloCi-4, arilo, hetarilo, alquilCi-4 arilo, alquilCi-4 heteroarilo, ou podem ser ligados para formarem um anel com 3-8 membros opcionalmente substituído, contendo opcionalmente um átomo selecionado de 0, S, NR7, e R7 é selecionado de H, alquiloCi-4; R2, R3 e R4 são cada um independentemente H, halogéneo, alquiloCi-4, OH, 0-alquiloCi-4, CF3, OCF3, CN, alquilCi-4 NR8R9, 0-alquilCi-4 NR8R9, OCONR8R9, NR8R9, NR8COR9, NR10CONR8R9, NR8S02R9, C00R8, CONR8R9; e R8 e R9 são cada um independentemente H, alquiloCi-4, alquilCi-4 cicloalquilo, ou podem ser ligados para formarem um anel com 3-8 membros opcionalmente substituído, contendo opcionalmente um átomo selecionado de 0, S, NRll; RIO e Rll são independentemente selecionados de H, alquiloCi-4, CF3;
Alternativamente, dois de R2, R3 e R4, quando localizados em átomos de carbono adjacentes, podem ser ligados para formarem um sistema de anéis selecionado de:
em que R12 é selecionado de H, alquiloCi-4, CF3 e R13 é selecionado de H, alquiloCi-4, CF3, C0R14, S02R14; e R14 é selecionado de H, alquiloCi-4; C1-4 Q é uma ligação, ou alquiloCi-4; W é selecionado de H, alquiloCi-4, alceniloC2-6; onde alquiloCi-4 ou alceniloC2-6 podem ser opcionalmente substituídos com alquiloCi-4, OH, O-alquiloCi-4, NR15R16; e R15 e R16 são cada um independentemente H, alquiloCi-4, alquilCi-4CÍcloalquilo, alquilCi-4ciclo-hetalquilo, arilo, hetarila, ou podem ser ligados para formarem um anel com 3-8 membros opcionalmente substituído, contendo opcionalmente um átomo selecionado de 0, S, NR17, e R17 é selecionado de entre H, alquiloCi-4; A é arilo, hetarilo opcionalmente substituído com 0-3 substituintes escolhidos independentemente de halogéneo, alquiloCi-4, CF3, arilo, hetarilo, OCF3, O-alquiloCi-4, 0-alquilC2-s NR18R19, 0- arilo, 0-hetarilo, CO2RI8, CONR18R19, NR18R19, alquilCi-4NRl8Rl9, NR20-alquilCi-4NRl8Rl9, NR18COR19, NR20CONR18R19, NR18S02R19; e R18 e R19 são cada um independentemente H, alquiloCi-4, alquilCi-4ciclo-hetalquilo, arilo, hetarilo, alquilCi-4arilo, alquilCi-4hetarilo, ou podem ser ligados para se formar um anel com 3-8 membros opcionalmente substituído, contendo opcionalmente um átomo selecionado de 0, S, NR21; e R20 é selecionado de H, alquiloCi-4; e R21 é selecionado de H, alquiloCi-4; Y é selecionado de H, alquiloCi-4, OH, NR22R23, e R22 e R23 são cada um independentemente H, alquiloCi-4.
Na descrição anterior será apreciado que:
AlquiloCi-4 significa uma cadeia de alquilo linear ou ramificada não substituída ou opcionalmente substituída.
Arilo significa fenilo ou naftilo não substituído ou opcionalmente substituído.
Hetarilo significa um anel heteroaromático de 5 ou 6 membros não substituído ou opcionalmente substituído contendo um ou mais heteroátomos selecionados de 0, N, S.
Cicloalquilo significa um anel saturado com 3-8 membros.
Ciclo-hetalquilo significa um anel saturado com 3-8 membros contendo 1-3 heteroátomos selecionados de 0, S, NR18, em que R18 é H, alquiloCi-4, arilo, hetarilo.
É também revelado um composto de fórmula geral II
II ou pró-drogas, sais, hidratos, solvatos, formas cristalinas ou diastereómeros farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que:
Rl é H, alquilo (Ci-β), alquil (Ci-6)NR3R4, em que R3 e R4 são cada um independentemente H, alquiloCi-4, ou podem ser ligados para formarem um anel com 3-8 membros opcionalmente substituído, contendo opcionalmente um átomo selecionado de 0, S, NR5, e R5 é selecionado de H, alquiloCi-4; A é arilo, hetarilo opcionalmente substituído com 0-3 substituintes independentemente escolhidos de halogéneo, alquiloCi-4, CF3, arilo, hetarilo, OCF3, O-alquiloCi-4, 0-alquilC2-s NR6R7, O-arilo, 0-hetarilo, CO2R6, CONR6R7, NR6R7, alquilCi-4NR6R7, NR8-alquilCi-4 NR6R7, NR6COR7, NR8CONR6R7, NR6S02R7; e R6 e R7 são cada um independentemente H, alquiloCi-4, alquilCi-4ciclo-hetalquilo, arilo, hetarilo, alquilCi-4arilo, alquilCi-4 hetarilo, ou podem ser ligados para formarem um anel com 3-8 membros opcionalmente substituído, contendo opcionalmente um átomo selecionado de 0, S, NR9; e R8 é selecionado de H, alquiloCi-4; e R9 é selecionado de H, alquiloCi-4,* R2 é/são 0-2 substituintes independentemente selecionados de halogéneo, alquiloCi-4, OH, O-alquiloCi-4, CF3, OCF3, CN, alquilCi-4 NR10R11, 0-alquilCi-4 NR10R11, CO2RIO, CONRlORll, NR10R11, NRlOCORll, NR12CONR10R11, NRIOSO2RH; e RIO e Rll são cada um independentemente H, alquiloCi-4; e R12 é selecionado de H, alquiloCi-4; Y é H, OH, NR12R13; e R12 e R13 são cada um independentemente H, alquiloCi-4, ou podem ser ligados para formarem um anel opcionalmente substituído com 3-6 membros, contendo opcionalmente um átomo selecionado de 0, S, NR14, e R14 é selecionado de H, alquiloCi-4; n = 0-4; W é selecionado de H, alquiloCi-4, alceniloc2-6; onde alquiloCi-4 ou alceniloc2-6 podem ser opcionalmente substituídos com alquiloCi-4, OH, O-alquiloCi-4, NR15R16; e R15 e R16 são cada um independentemente H, alquiloCi-4, alquilCi-4ciclo-hetalquilo, ou podem ser ligados para formarem um anel com 3-8 membros opcionalmente substituído, contendo opcionalmente um átomo selecionado de 0, S, NR17, e R17 é selecionado de H, alquiloCi-4.
Na descrição anterior será apreciado que:
AlquiloCi-4 significa uma cadeia de alquilo linear ou ramificada não substituída ou opcionalmente substituída.
Arilo significa fenilo ou naftilo não substituído ou opcionalmente substituído.
Hetarilo significa um anel heteroaromático de 5 ou 6 membros não substituído ou opcionalmente substituído contendo um ou mais heteroátomos selecionados de 0, N, S.
Cicloalquilo significa um anel saturado com 3-8 membros.
Ciclo-hetalquilo significa um anel saturado com 3-8 membros contendo 1-3 heteroátomos selecionados de 0, S, NR18, em que R18 é H, alquiloCi-4, arilo, hetarilo.
Compostos preferidos da invenção são selecionados do grupo constituído por:
Os compostos desta invenção incluem todos os isómeros conformacionais (por exemplo, isómeros cis e trans). Os compostos da presente invenção têm centros assimétricos e portanto existem em diferentes formas enantioméricas e diastereoméricas. Esta invenção refere-se ao uso de acordo com as reivindicações de todos os isómeros óticos e estereoisómeros dos compostos da presente invenção, e misturas dos mesmos, e a todas as composições farmacêuticas e usos que podem empregá-las ou contê-las de acordo com as reivindicações.
Os compostos de fórmula I podem também existir como tautómeros.
Esta invenção refere-se ao uso de todos tais tautómeros e misturas dos mesmos.
Os compostos de fórmula I que possuem grupos amino, amido, hidroxi ou carboxilico livres podem ser convertidos em pró-drogas. Pró-drogas incluem compostos em que um resíduo de aminoácido ou uma cadeia polipeptídica de dois ou mais resíduos de aminoácidos (por exemplo, dois, três ou quatro) são ligados covalentemente através de ligações peptídicas a grupos amino, hidroxi e ácido carboxilico livres de compostos de fórmula I. Os resíduos de aminoácidos incluem os 20 aminoácidos que ocorrem naturalmente geralmente designados por três símbolos de letras e incluem também 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, demosina, isodemosina, 3-metil-histidina, norvalina, beta-alanina, ácido gama-aminobutírico, citrulina, homocisteína, homoserina, ornitina e metionina sulfona. Pró-drogas incluem também compostos em que carbonatos, carbamatos, amidas e ésteres alquílicos estão covalentemente ligados aos substituintes anteriores da fórmula I através da cadeia lateral da pró-droga de carbonilo carbono. Pró-drogas incluem também derivados de fosfato de compostos de fórmula I (tais como ácidos, sais de ácidos, ou ésteres) ligados através de uma ligação fósforo-oxigénio a um hidroxilo livre de compostos de fórmula I. Pró-drogas incluem também compostos em que as metades aciloxialquilo ou fosfono-oxialquilo estão covalentemente ligadas a compostos de fórmula I possuindo um grupo hidroxilo livre. As metades aciloxialquilo ou fosfono-oxialquilo podem também estar ligadas covalentemente a compostos de fórmula I possuindo um anel piridilo através da formação de um sal N-(aciloxialquil)- ou N-(fosfono-oxialquil)-piridínio. São aqui reveladas composições farmacêuticas que contêm pró-drogas de compostos da fórmula I.
Numa concretização ainda mais preferida o composto possui quiralidade S no carbono quiral que contém W, em que W é alquiloCi-4 ou alquilCi-4alcoxi. 0 composto pode ser utilizado como um isómero purificado ou como uma mistura de qualquer proporção de isómeros. É contudo preferido que a mistura compreenda pelo menos 70%, 80%, 90%, 95% ou 99% do isómero preferido.
Num sequndo aspeto a presente invenção proporciona uma composição compreendendo um portador e pelo menos um composto do primeiro aspeto da invenção.
Num terceiro aspeto a presente invenção proporciona pelo menos um composto do primeiro aspeto ou uma composição do sequndo aspeto para uso num método de tratamento de um estado de doença ou desordem relacionado com hiperproliferação num indivíduo.
Tal como é aqui utilizado, o termo estado de doença ou desordem relacionado com hiperproliferação refere-se aos estados de doença ou desordens que resultam de proliferação celular aberrante.
De preferência, o estado de doença ou desordem relacionado com hiperproliferação é tratável pela modulação de polimerização de microtubulos. Foi demonstrado pelos presentes inventores que os compostos de Fórmula I são capazes de se ligarem à tubulina e por isso podem ser utilizados para modularem a polimerização de microtubulos.
Numa concretização preferida da presente invenção o estado de doença é selecionado do grupo constituído por Atopia, tal como Asma Alérgica, Dermatite Atópica (Eczema) e Rinite Alérgica;
Hipersensibil idade Mediada por Células, tal como Dermatite de Contacto Alérgica e Pneumonite de Hipersensibilidade; Doenças Reumáticas, tal como Lúpus Eritematoso Sistémico (SLE - Systemic Lupus Erythematosus), Artrite Reumatóide, Artrite Juvenil, Síndrome de Sjõgren, Esclerodermia, Polimiosite, Espondilite Anquilosante, Artrite Psoriática; Outras doenças autoimunes tais como Diabetes tipo I, desordens da tiróide autoimunes, e doença de Alzheimer; Doenças Virais, tais como Virus de Epstein Barr (EBV - Epstein Barr Virus), Hepatite B, Hepatite C, HIV, HTLV 1, Virus Varicella-Zoster (VZV - Varicella-Zoster Virus), Virus do Papiloma Humano (HPV -Human Papilloma Virus); Cancro, tal como fibrossarcoma, mixossarcoma, lipossarcoma, condrossarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiossarcoma, endoteliossarcoma, linfangiossarcoma, linfangioendoteliossarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiossarcoma, rabdomiossarcoma, carcinoma do cólon, cancro pancreático, cancro da mama, cancro do ovário, cancro da próstata, carcinoma de células escamosas, carcinoma basocelular, adenocarcinoma, carcinoma da glândula sudorípara, carcinoma da glândula sebácea, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de células renais, hepatoma, carcinoma do dueto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionário, tumor de Wilms, cancro cervical, tumor testicular, carcinoma do pulmão, carcinoma pulmonar de células pequenas, carcinoma da bexiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craniofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, meningioma, melanoma, neuroblastoma, e retinoblastoma, e carcinomas que se formam a partir de tecido da mama, da próstata, do rim, da bexiga ou do cólon, e desordens neoplásicas que surgem em tecido adiposo, tais como tumores de células adiposas, por exemplo, lipomas, fibrolipomas, lipoblastornas, lipomatose, hibernomas, hemangiomas e/ou lipossarcomas; doenças infecciosas tais como infeções virais, maláricas e bacterianas; restenose vascular; doenças inflamatórias, tais como doenças autoimunes, nefrite glomerular, enfarte do miocárdio e psoriase.
Num quarto aspeto a presente invenção proporciona pelo menos um composto do primeiro aspeto ou uma composição do segundo aspeto para uso num método de tratamento de um estado de doença ou desordem associado à tirosina-quinase num indivíduo.
Da forma como é aqui utilizado o termo "estado de doença associado à tirosina-quinase" refere-se às desordens que resultam de atividade de tirosina-quinase aberrante e/ou que são aliviadas pela inibição de uma ou mais destas enzimas. A presente invenção proporciona composições farmacêuticas compreendendo pelo menos um dos compostos da invenção capazes de tratarem um estado de doença ou desordem relacionado com hiperproliferação numa quantidade eficaz para esse fim, e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável. As composições da presente invenção podem conter outros agentes terapêuticos conforme abaixo descrito, e podem ser formuladas, por exemplo, empregando-se veículos ou diluentes sólidos ou líquidos convencionais, bem como aditivos farmacêuticos de um tipo apropriado para o modo de administração desejado (por exemplo, excipientes, ligantes, conservantes, estabilizantes, aromatizantes, etc.) de acordo com técnicas, tais como as bem conhecidas na técnica da formulação farmacêutica.
Os compostos da invenção podem ser administrados através de qualquer meio adequado, por exemplo, por via oral, tal como na forma de comprimidos, cápsulas, grânulos ou pós; por via sublingual; por via bucal; por via parentérica, tal como através de injeção subcutânea, intravenosa, intramuscular ou intracisternal ou através de técnicas de infusão (por exemplo, como soluções ou suspensões aquosas ou não aquosas estéreis injetáveis); por via nasal, tal como por pulverização por inalação de spray; por via tópica, tal como na forma de um creme ou pomada; ou por via retal, tal como na forma de supositórios; em formulações de dosagem unitária contendo veículos ou diluentes não tóxicos, farmaceuticamente aceitáveis. Os compostos podem, por exemplo, ser administrados numa forma adequada para libertação imediata ou libertação prolongada. A libertação imediata ou a libertação prolongada pode ser conseguida através do uso de composições farmacêuticas adequadas compreendendo os presentes compostos, ou, particularmente no caso de libertação prolongada, através do uso de dispositivos tais como implantes subcutâneos ou bombas osmóticas.
Para além dos primatas, tais como seres humanos, uma variedade de outros mamíferos pode ser tratada de acordo com a presente invenção. Por exemplo, podem ser tratados mamíferos incluindo, mas não se limitando a, vacas, ovelhas, cabras, cavalos, cães, gatos, cobaias, ratos ou outras espécies bovina, ovina, equina, canina, felina, roedora ou murina. Contudo, a invenção pode também ser praticada noutras espécies, tais como espécies aviárias (por exemplo, frangos).
Doenças e condições associadas a inflamação e infeção podem ser tratadas utilizando-se a presente invenção. Numa concretização preferida, a doença ou condição é uma em que as ações de eosinófilos e/ou linfócitos devem ser inibidas ou promovidas, de modo a modular-se a resposta inflamatória.
Os indivíduos tratados, nos quais é desejada inibição do crescimento celular, são mamíferos, incluindo, mas não se limitando a, vacas, ovelhas, cabras, cavalos, cães, gatos, cobaias, ratos, ou outras espécies bovina, ovina, equina, canina, felina, roedora ou murina, e de preferência um ser humano, macho ou fêmea. 0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz" significa a quantidade da composição para o indivíduo que provocará a resposta biológica ou médica de um tecido, sistema, animal ou ser humano que é pretendida pelo investigador, veterinário, médico ou outro clínico. 0 termo "composição", tal como é aqui utilizado, pretende abranger um produto que compreende os ingredientes especificados nas quantidades especificadas, bem como qualquer produto que resulte, direta ou indiretamente, da combinação dos ingredientes especificados nas quantidades especificadas. Por "farmaceuticamente aceitável" entende-se que o portador, diluente ou excipiente deve ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não deve ser deletério para o recetor do mesmo.
Os termos "administração de" e/ou "administrar um" composto devem ser entendidos como proporcionando um composto da invenção ao indivíduo que necessita de tratamento.
As composições farmacêuticas para a administração dos compostos desta invenção podem ser convenientemente apresentadas na forma de dosagem unitária e podem ser preparadas através de qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica da farmácia. Todos os métodos incluem a etapa de colocar o ingrediente ativo em associação com o portador que constitui um ou mais ingredientes acessórios. Em geral, as composições farmacêuticas são preparadas colocando-se o ingrediente ativo de forma uniforme e íntima em associação com um portador líquido ou um portador sólido finamente dividido ou ambos, e em seguida, se necessário, moldando-se o produto na formulação desejada. Na composição farmacêutica o composto objeto ativo é incluído numa quantidade suficiente para se produzir o efeito desejado no processo ou condição de doença. Tal como é aqui utilizado, o termo "composição" pretende abranger um produto que compreende os ingredientes especificados nas quantidades especificadas, bem como qualquer produto que resulte, direta ou indiretamente, da combinação dos ingredientes especificados nas quantidades especificadas.
As composições farmacêuticas contendo o ingrediente ativo podem estar numa forma adequada para uso oral, por exemplo, como comprimidos, trociscos, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós ou grânulos dispersíveis, emulsões, cápsulas duras ou moles, ou xaropes ou elixires. As composições destinadas ao uso oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica do fabrico de composições farmacêuticas e tais composições podem conter um ou mais agentes selecionados do grupo constituído por agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes corantes e agentes conservantes com o objetivo de se proporcionarem preparações farmaceuticamente elegantes e saborosas. Os comprimidos contêm o ingrediente ativo misturado com excipientes não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis que são adequados para o fabrico de comprimidos. Estes excipientes podem ser, por exemplo, diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegração, por exemplo, amido de milho ou ácido algínico; agentes ligantes, por exemplo amido, gelatina ou acácia; e agentes lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos através de técnicas conhecidas para retardar-se a desintegração e a absorção no trato gastrointestinal, proporcionando-se assim uma ação contínua durante um período mais longo. Por exemplo, pode ser empregue um material de retardamento de tempo tal como monoestearato de glicerilo ou diestearato de glicerilo. Podem também ser revestidos para formarem comprimidos terapêuticos osmóticos para libertação controlada.
As formulações para uso oral podem também ser apresentadas como cápsulas de gelatina dura em que o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulino, ou como cápsulas de gelatina mole em que o ingrediente ativo é misturado com água ou com um meio oleoso, por exemplo óleo de amendoim, parafina líquida ou azeite.
As suspensões aquosas contêm os materiais ativos misturados com excipientes adequados para o fabrico de suspensões aquosas. Tais excipientes são agentes de suspensão, por exemplo carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroxi-propilmetilcelulose, alginato de sódio, polivinil-pirrolidona, goma de tragacanto e goma-arábica; agentes dispersantes ou humidificadores podem ser um fosfatídeo que ocorre naturalmente, por exemplo lecitina, ou produtos de condensação de um óxido de alquileno com ácidos gordos, por exemplo estearato de polioxietileno, ou produtos de condensação de um óxido de alquileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemplo heptadecaetilenoxicetanol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos gordos e um hexitol tal como monooleato de polioxietileno sorbitol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos gordos e anidridos de hexitol, por exemplo monooleato de polietileno sorbitano. As suspensões aquosas podem também conter um ou mais conservantes, por exemplo etil, ou n-propil p-hidroxibenzoato, um ou mais agentes corantes, um ou mais agentes aromatizantes, e um ou mais agentes edulcorantes, tais como sacarose ou sacarina.
As suspensões oleosas podem ser formuladas por suspensão do ingrediente ativo num óleo vegetal, por exemplo óleo de amendoim, azeite, óleo de gergelim ou óleo de coco, ou num óleo mineral tal como parafina liquida. As suspensões oleosas podem conter um agente espessante, por exemplo cera de abelha, parafina dura ou álcool cetílico. Podem ser adicionados agentes edulcorantes, tais como os apresentados anteriormente, e agentes aromatizantes, para proporcionarem uma preparação oral palatável. Estas composições podem ser conservadas por adição de um anti-oxidante tal como ácido ascórbico. Pós e grânulos dispersáveis adequados para a preparação de uma suspensão aquosa por adição de água proporcionam o ingrediente ativo em mistura com um agente dispersante ou humidificante, um agente de suspensão e um ou mais conservantes. Agentes dispersantes ou humidificantes e agentes de suspensão adequados são exemplifiçados pelos já mencionados anteriormente. Podem também estar presentes excipientes adicionais, por exemplo agentes edulcorantes, aromatizantes e corantes.
As composições farmacêuticas da invenção podem também estar na forma de emulsões de óleo em água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, por exemplo azeite ou óleo de amendoim, ou um óleo mineral, por exemplo parafina liquida, ou misturas destes. Agentes emulsionantes adequados podem ser gomas que ocorrem naturalmente, por exemplo goma arábica ou goma adragante, fosfatideos que ocorrem naturalmente, por exemplo óleo de soja, lecitina e ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos gordos e anidridos de hexitol, por exemplo monooleato de sorbitano, e produtos de condensação dos ditos ésteres parciais com óxido de etileno, por exemplo monooleato de polioxietileno sorbitano. As emulsões podem também conter agentes edulcorantes e aromatizantes.
Os xaropes e os elixires podem ser formulados com agentes edulcorantes, por exemplo glicerol, propileno glicol, sorbitol ou sacarose. Tais formulações podem também conter um demulcente, um conservante e agentes aromatizantes e corantes.
As composições farmacêuticas podem estar na forma de uma suspensão estéril injetável aquosa ou oleaginosa. Esta suspensão pode ser formulada de acordo com a técnica conhecida utilizando-se os agentes dispersantes ou humidificantes adequados e os agentes de suspensão que foram anteriormente mencionados. A preparação injetável estéril pode também ser uma solução ou suspensão injetável estéril num diluente ou solvente não tóxico parentericamente aceitável, por exemplo como uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregues estão a água, solução de Ringer e solução isotónica de cloreto de sódio. Para além disso, óleos fixos estéreis são convencionalmente empregues como um solvente ou meio de suspensão. Para este fim pode ser empregue qualquer óleo fixo brando, incluindo mono- ou di-glicéridos sintéticos. Além disso, ácidos gordos, tal como ácido oleico, são usados na preparação de injetáveis.
Os compostos da presente invenção podem também ser administrados na forma de supositórios para administração retal da droga. Estas composições podem ser preparadas misturando-se a droga com um excipiente não irritante adequado, o qual é sólido às temperaturas normais mas liquido à temperatura retal e portanto irá fundir no reto para libertar a droga. Tais materiais são manteiga de cacau e polietilenoglicóis.
Para uso tópico, empregam-se cremes, pomadas, geleias, soluções ou suspensões, etc., contendo os compostos da presente invenção. (Para os fins deste pedido, a aplicação tópica deve incluir colutórios e soluções para gargarejar).
Os compostos da presente invenção podem também ser administrados na forma de lipossomas. Como é sabido na técnica, os lipossomas são geralmente derivados de fosfolípidos ou de outras substâncias lipidicas. Os lipossomas são formados por cristais líquidos mono- ou multi-lamelares hidratados que são dispersos num meio aquoso. Pode ser utilizado qualquer lípido não tóxico, fisiologicamente aceitável e metabolizável capaz de formar lipossomas. As presentes composições na forma de lipossomas podem conter, além de um composto da presente invenção, estabilizantes, conservantes, excipientes e semelhantes. Os lípidos preferidos são os fosfolípidos e as fosfatidilcolinas, tanto naturais como sintéticos. Os métodos para se formarem lipossomas são conhecidos na técnica. A composição farmacêutica da presente invenção pode ainda compreender outros compostos terapeuticamente ativos conforme aqui referido, os quais são normalmente aplicados no tratamento das condições patológicas acima mencionadas. A seleção dos agentes apropriados para uso em terapia de combinação pode ser feita por um perito comum na técnica, de acordo com os princípios farmacêuticos convencionais. A combinação de agentes terapêuticos pode atuar sinergicamente para efetuar o tratamento ou prevenção das várias desordens anteriormente descritas. Utilizando-se esta abordagem, pode-se conseguir uma eficácia terapêutica com menores dosagens de cada agente, reduzindo-se assim o potencial de efeitos secundários adversos.
Exemplos de outros agentes terapêuticos incluem os seguintes: ciclosporinas (por exemplo, ciclosporina A), CTLA4-Ig, anticorpos tais como ICAM-3, recetor anti-IL-2 (Anti-Tac), anti-CD45RB, anti-CD2, anti-CD3 (0ΚΓ-3), anti-CD4, anti-CD80, anti-CD86, agentes bloqueadores da interação entre CD40 e gp39, tais como anticorpos específicos para CD40 e/ou gp39 (ou seja, CD154), proteínas de fusão construídas a partir de CD40 e gp39 (CD401g e CD8gp39), inibidores, tais como inibidores de translocação nuclear, de função NF-kappa B, tal como desoxispergualina (DSG), inibidores da biossíntese de colesterol tais como inibidores da HMG CoA redutase (lovastatina e simvastatina), drogas anti-inflamatórias não-esteroides (NSAIDs) tais como ibuprofeno, aspirina, acetaminofeno e inibidores de ciclooxigenase tais como rofecoxib, esteroides tais como prednisolona ou dexametasona, compostos de ouro, agentes antiproliferativos tais como metotrexato, FK506 (tacrolimus, Prograf), micofenolato mofetil, agentes antineoplásicos tais como azatioprina, VP-16, etopósido, fludarabina, cisplatina, doxorrubicina, adriamicina, amsacrina, camptotecina, citarabina, gemcitabina, vinblastina, vincristina, fluorodesoxiuridina, melfalan e ciclofosfamida, inibidores de TNF-α tal como tenidap, anticorpos anti-TNF ou recetor de TNF solúvel, e rapamicina (sirolimus ou Rapamune) ou derivados dos mesmos.
Quando são empregues outros agentes terapêuticos em combinação com os compostos da presente invenção, eles podem ser utilizados por exemplo em quantidades tais conforme referido na Physician Desk Reference (PDR) ou conforme determinado por um indivíduo de perícia comum na técnica. A composição farmacêutica da presente invenção pode ainda compreender outros compostos terapeuticamente ativos conforme aqui referido, os quais são conhecidos inibidores ou substratos de sistemas de efluxo de droga ou sistemas de desintoxicação e excretores de drogas. Tais sistemas incluem P-glicoproteína, proteína associada à resistência a múltiplas drogas, proteína de resistência pulmonar e isoenzimas alfa, mu, pi, sigma, teta, zeta e kappa glutationa S-transferase. A co-administração de drogas conhecidas para inibirem ou reduzirem a atividade destes sistemas pode aumentar a eficácia dos compostos descritos na presente invenção através do aumento da quantidade de agente terapêutico na célula. Utilizando-se esta abordagem, pode-se conseguir eficácia terapêutica com doses inferiores, reduzindo-se assim o potencial de efeitos secundários adversos. Exemplos de inibidores ou substratos para estes sistemas incluem verapamil, probenecida, dipiridamol, ácido etacrinico, indometacina, sulfasalazina, butionina sulfoximina, ciclosporina A e tamoxifeno.
No tratamento ou prevenção de desordens ou estados de doença relacionados com hiperproliferação um nível de dosagem apropriado será geralmente cerca de 0,01 a 500 mg por kg de peso corporal do paciente por dia, o qual pode ser administrado em doses únicas ou múltiplas. De preferência, o nível de dosagem será cerca de 0,1 a cerca de 250 mg/kg por dia; mais preferivelmente, cerca de 0,5 a cerca de 100 mg/kg por dia. Um nivel de dosagem adequado pode ser cerca de 0,01 a 250 mg/kg por dia, cerca de 0,05 a 100 mg/kg por dia, ou cerca de 0,1 a 50 mg/kg por dia. Dentro desta gama a dosagem pode ser de 0,05 a 0,5, 0,5 a 5 ou 5 a 50 mg/kg por dia. Para administração oral, as composições são preferencialmente proporcionadas na forma de comprimidos contendo 1,0 a 1000 miligramas do ingrediente ativo, particularmente 1,0, 5,0, 10,0, 15.0, 20,0, 25,0, 50,0, 75,0, 100,0, 150,0, 200,0, 250,0, 300,0, 400.0, 500,0, 600,0, 750,0, 800,0, 900,0 e 1000,0 miligramas do ingrediente ativo para o ajuste sintomático da dosagem ao paciente a ser tratado. Os compostos podem ser administrados num regime de 1 a 4 vezes por dia, de preferência uma ou duas vezes por dia.
Deve no entanto entender-se que o nível de dose específico e a frequência de dosagem para qualquer paciente particular podem variar e dependerão de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico empregue, a estabilidade metabólica e a extensão da ação desse composto, a idade, o peso corporal, a saúde geral, o sexo, a dieta, o modo e o tempo de administração, a taxa de excreção, a combinação de droga, a gravidade da condição particular e a terapia a que o hospedeiro se encontra submetido.
Ao longo desta especificação, a palavra "compreender", ou variações tais como "compreende" ou "compreendendo", serão entendidas como implicando a inclusão de um elemento especificado, inteiro ou em etapa, ou grupo de elementos, inteiros ou em etapas, mas não a exclusão de qualquer outro elemento, inteiro ou em etapas, ou grupo de elementos, inteiros ou em etapas.
Qualquer discussão de documentos, atos, materiais, dispositivos, artigos ou semelhantes que tenha sido incluída na presente especificação é exclusivamente com o objetivo de proporcionar um contexto para a presente invenção. Não deve ser considerado como uma admissão de que um qualquer questão, ou todas estas questões, fazem parte da base da técnica anterior ou que fazem parte do conhecimento geral comum no campo relevante para a presente invenção, tal como existia na Austrália antes da data de prioridade de cada reivindicação deste pedido.
De modo a que a natureza da presente invenção possa ser mais claramente compreendida, formas preferidas da mesma serão agora descritas por referência aos Exemplos que se seguem.
EXEMPLOS MATERIAIS E MÉTODOS: Síntese dos Compostos
Os compostos são geralmente preparados num processo de 2 passos a partir de 2,6-dicloropirazina. 0 primeiro passo é uma substituição aromática nucleofílica para gerar-se um intermediário monoamino e mono-halo (Esquema 1).
Esquema 1 A substituição aromática nucleofilica é tipicamente levada a cabo por adição de uma amina primária ao heterociclo di-halogenado num solvente tal como etanol, isopropanol, terc-butanol, dioxano, THF, DMF, etoxietanol, tolueno ou xileno. A reacção é tipicamente efetuada a temperatura elevada na presença de excesso de amina ou de uma base não nucleofilica tal como trietilamina ou diisopropiletilamina, ou numa base inorgânica tal como carbonato de potássio ou carbonato de sódio.
Alternativamente, o substituinte amino pode ser introduzido através de uma reacção de aminação catalisada por metal de transição. Catalisadores típicos para tais transformações incluem Pd (OAc) 2/P (t-Bu) 3, Pda (dba) 3/BINAP e Pd(OAc) 2/BINAP. Estas reacções são tipicamente realizadas em solventes tais como tolueno ou dioxano, na presença de bases tais como carbonato de césio ou terc-butóxido de sódio ou potássio a temperaturas que variam desde a temperatura ambiente até ao refluxo.
As aminas utilizadas no primeiro passo da síntese destes compostos são obtidas comercialmente ou são preparadas utilizando-se métodos bem conhecidos dos especialistas na matéria. São de particular interesse as a-alquilbenzilaminas que podem ser preparadas através da redução de oximas (Esquema 2) . Redutores típicos incluem hidreto de alumínio e lítio, hidrogénio gasoso na presença de catalisador de paládio sobre carvão, Zn na presença de ácido clorídrico, boro-hidreto de sódio na presença de um ácido de Lewis tal como TÍCI3, ZrClí, N1CI2 e M0O3, ou boro-hidreto de sódio conjuntamente com resina de permuta iónica Amberlyst H15 e LiCl.
Esquema 2
As α-alquilbenzilaminas podem também ser preparadas por aminação redutora das correspondentes cetonas. Um método clássico para tal transformação é a reacção de Leuckart-Wallach, embora possam também ser utilizadas condições catalíticas ou procedimentos alternativos (por exemplo NH4OAC, Na(CN)BH3).
As oí-alquilbenzilaminas podem também ser preparadas a partir dos álcoois α-alquilbenzílicos correspondentes. Tais métodos incluem a derivatização do hidroxilo como um mesilato ou tosilato e o deslocamento com um nucleófilo de de azoto, tal como ftalimida ou azida que é convertida na amina primária utilizando-se métodos de síntese convencionais; ou, deslocamento do hidroxilo com um nucleófilo de azoto adequado sob condições tipo Mitsunobu. Os álcoois a-alquilbenzilícos podem ser preparados por redução das cetonas correspondentes com um agente redutor tal como boro-hidreto de sódio num solvente tal como metanol. Alternativamente, os álcoois α-alquilbenzílicos podem ser obtidos por adição de uma espécie de metal alquílico (tal como um reagente de Grignard) a um derivado de benzaldeído, tipicamente à temperatura ambiente ou abaixo, em solventes tais como tetra-hidrofurano. a-Alquilbenzilaminas de elevada pureza óptica podem ser preparadas a partir de álcoois α-alquilbenzílicos quirais utilizando-se os métodos descritos acima. Os álcoois a-alquilbenzílicos quirais podem ser obtidos por meio de redução quiral das cetonas correspondentes. Métodos de redução quiral são agora bem conhecidos na química orgânica e incluem processos enzimáticos, procedimentos de hidrogenação assimétrica e oxazaborolidinas quirais. 0 segundo passo da síntese envolve tipicamente um acoplamento cruzado mediado por paládio do intermediário monoamino-monocloro com um parceiro de acoplamento adequadamente funcionalizado. Parceiros de acoplamento típicos são ácidos borónicos (acoplamento de Suzuki: ver por exemplo Miyaura, N. e Suzuki, Chem. Rev. 1995, 95 2457) ou estananos (acoplamento de Stille: ver por exemplo Stille, J.K., Angew. Chem., Int. Ed. Engl., 1986, 25, 508) (Esquema 3).
Esquema 3 O acoplamento de Suzuki é o método de acoplamento preferido e é tipicamente realizado num solvente tal como DME, THF, DMF, etanol, propanol, tolueno ou 1,4-dioxano na presença de uma base tal como carbonato de potássio, hidróxido de lítio, carbonato de césio, hidróxido de sódio, fluoreto de potássio ou fosfato de potássio. A reacção pode ser efetuada a temperaturas elevadas e o catalisador de paládio empregue pode ser seleccionado de Pd(PPh3)4, Pd(OAc)2, [PdCl2 (dppf) ], Pd2 (dba) 3/P (t-Bu) 3, Pd/C.
Os produtos formados desta sequência reacional podem ainda ser derivatizados utilizando-se técnicas bem conhecidas dos especialistas na técnica. Alternativamente, a derivatização da mono-amino mono-cloropirazina pode ser realizada antes do deslocamento do substituinte 6-cloro. Esta derivatização tipicamente envolve a funcionalidade originalmente presente na espécie amina e emprega métodos bem conhecidos dos especialistas na técnica. Sínteses representativas são relatadas abaixo.
Exemplo 1 1-[4- (Trifluorometil) fenil]butan-l-ol
Uma solução 2M de cloreto de propilmagnésio em éter (4 ml, 8 mmol) foi adicionada a uma solução do aldeído (1,14 g, 6,6 mmol) em THF seco (10 ml) arrefecida a 0 °C sob N2. Agitou-se a mistura durante 16 horas à temperatura ambiente, após o que se adicionou solução saturada de cloreto de amónio. O produto foi extraído para acetato de etilo, e a camada de acetato de etilo seca e concentrada para fornecer o produto puro (1,4 g, 98%). iH-n.m.r. (CDCI3) δ 0,94 (t, J= 7,2 Hz, 3H CH3) , 1,41 (m, 2H, CH2), 1,75 (m, CH2, 2H), 4,77 (br s, 1H, CH) , 7,44-7,62 (m, 4H,
ArH) .
Utilizando procedimentos idênticos foram preparados os compostos seguintes.
Exemplo 2 1-(1-Azidobutil)-4-(trifluorometil)benzeno
Uma solução de 1-[4-(trifluorometil)fenil]butan-l-ol (1,4 g, 6,4 mmol) e difenilfosforil azida (2,8 ml, 2,8 mmol) em THF (6 mL) arrefecida a -10 °C sob N2 foi tratada com DBU (1,9 mL, 12,8 mmol). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas e depois diluída com uma mistura de éter e H2O. A fase orgânica foi seca e concentrada e o resíduo purificado por cromatografia em coluna utilizando-se hexano:acetato de dietil etilo (10:1) como eluente para fornecer azida pura (0,85 g, 54%). lH-n.m.r. (CDCI3) δ 0,94 (t, J = 7,2 Hz, 3H CH3), 1,37 (m, 2H, CH2), 1,75 (m, 2H, CH2), 4,50 (t, 1H, CH), 7,42 (d, J = 7,8 Hz, 2H, ArH), 7,64 (d, J = 7,8 Hz, 2H, ArH).
Utilizando procedimentos idênticos foram preparados os compostos seguintes.
Exemplo 3 l-[4- (Trifluorometil) fenil]butan-l-amina
Agitou-se a uma mistura de 1-(1-azidobutil)-4-(trifluorometil)benzeno (0,84 g, 3,5 mmol) e trifenilfosfina (1,8 g, 6,9 mmol) em acetato de etilo (6 mL) e HC1 a 10% (6 ml) à temperatura ambiente durante 64 h. Recolheu-se a fase aquosa e extraiu-se a fase orgânica com HC1 a 10% (3x5 mL) . As camadas aquosas foram combinadas e basificadas com NaOH 5 M, e depois extraídas com acetato de etilo (5 x 15 mL). A fase orgânica foi seca e concentrada para dar amina pura (0,4 g, 54%). lH-n.m.r. (CDC13) δ 0,91 (t, J = 7,4 Hz, 3H CH3), 1,31 (m, 2H, CH2), 1,62 (m, 2H, CH2), 3,97 (m, 1H, CH), 7,43 (dd, 2H, Ar- Η), 7,58 (dd, 2Η, Ar-H).
Utilizando procedimentos semelhantes prepararam-se os seguintes compostos.
Exemplo 4 3-Fl uoro-N-metoxi -N-metilbenzamida
A uma suspensão de ácido 3-fluorobenzóico (140 mg, 1 mmol) e cloridrato de Ν,Ο-dimetil-hidroxilamina (107 mg, 1,1 mmol) em diclorometano (2,5 mL) adicionou-se 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (EDC) (211 mg, 1,1 mmol) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 75 h. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo submetido a cromatografia utilizando-se acetato de etilo-hexano (4:6) para separar-se o produto puro (130 mg, 71%). lH-n.m.r. (CDCI3) δ 3,36 (s, 3H, N-Me), 3,55 (s, 3H, N-OMe), 7,1-7,2 (m, 1H, Ar), 7,3-7,5 (m, 3H, Ar).
Utilizando procedimentos semelhantes prepararam-se os seguintes compostos.
Exemplo 5 1-(3-Fluorofenil)butan-l-ona
A uma solução de 3-fluoro-N-metoxi-N-metilbenzamida (130 mg, 0,71 mmol) em THF seco (2 mL) arrefecida a -10 °C foi adicionado cloreto de propilmagnésio (532 [fL, solução 2M em éter, 1,1 mmol) sob azoto. A solução foi agitada a -10 °C durante 1 hora e à temperatura ambiente durante 75 min. A solução foi vertida em cloreto de amónio aquoso saturado e o produto extraído para acetato de etilo (3 x 25 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura, secas (MgSCt) e concentradas para darem um óleo amarelo pálido, o qual foi purificado por cromatografia utilizando-se acetato de etilo-hexano (1:9) para se separar o produto puro (78 mg, 66%). lH-n.m.r. (CDC13) δ 1,01 (t, J = 7,4 Hz, 3H, Me), 1,77 (sep, 2H, CH2CH3), 2,93 (t, J= 7,2 Hz, 2H, C0CH2), 7,15-7,30 (m, 1H, Ar), 7,35-7,50 (m, 1H, Ar), 7,60-7,70 (m, 1H, Ar), 7,70-7,80 (m, 1H, Ar) .
Utilizando procedimentos semelhantes prepararam-se os seguintes compostos.
Exemplo 6 1-(3-Clorofenil)butan-l-amina
A uma solução de 1-(3-fluorofenil)butan-l-ona (430 mg, 2,4 mmol) e acetato de amónio (1,09 g, 14,1 mmol) em metanol (10 mL) sob azoto foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (2,35 ml, solução 1 M em THF, 2,35 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 38 h, tempo após o qual se adicionou HC1 conc. para dar um pH ~2. Depois de ter cessado o borbulhamento o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo dissolvido em acetato de etilo e água. Recolheu-se a fase orgânica e lavou-se a fase aquosa com acetato de etilo (20 mL) . A fase aquosa foi basificada até pH ~10 com KOH sólido e o produto extraído para acetato de etilo (3 x 20 mL) . As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura, secas (Na2S04) e concentradas para darem um produto puro (120 mg, 28%) . lH-n.m.r. (CDC13) δ 0,90 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH2 CH2 CH2), 1,17-1,44 (m, 2H, CH2 CH2 CH3), 1,58-1, 69 (m, 2H, ÇH2 CH2 CH3), 1,81 (brs, 2H, NH2), 3,88 (t, J = 6,8 Hz, CHNH2), 7,20-7,32 (m, 4H, Ar).
Utilizando procedimentos semelhantes prepararam-se os seguintes compostos.
Exemplo 7 3-Amino-3-fenilpropan-1-ol
A uma suspensão de ácido 3-amino-3-fenilpropanóico (2,0 g, 12,1 mmol) em THF seco (45 mL) arrefecida até 0 °C sob N2 foi adicionada em porções e durante 20 minutos LÍAIH4 sólido (920 mg, 24,2 mmol). A agitação foi continuada à temperatura ambiente durante 24 h, após o que se adicionou Na2SO4.10H2O sólido com agitação até estar presente apenas um precipitado branco pesado. Diluiu-se a camada orgânica com éter e filtrou-se através de Celite® e concentrou-se sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (50 mL) e extraído com HC1 1 N (3 x 40 mL). As camadas aquosas foram combinadas e basificadas a pH ~ 12 com NaOH 5M. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (3 x 50 mL) e as fases orgânicas combinadas secas (Na2S04) e concentradas sob vácuo para se separar o produto que foi utilizado sem purificação adicional (0,9 g, 49%). lH-n.m.r. (CDC13) δ 1,84-1,94 (m, 2H, CH2CH2OH), 2,68 (br s, 1H, NH2), 3,79 (t, J = 5,8 Hz, 2H, CH2CH2OH), 4,08-4,15 (m, 1H, CHNH2) 4,77 (q, 1H, CH), 7,21-7,38 (m, 5H, Ar-H) .
Exemplo 8 6-Cloro-N-[1-(4-metilfenil)butil ] pirazin-2-amina
A uma solução de 1-[4-(trifluorometil)fenil]butan-l-amina (0,40 g, 1,9 mmol) e 2,6-dicloropirazina (0,55 g, 3,7 mmol) em 1,4-dioxano (6 mL) adicionou-se carbonato de potássio anidro (0,39 g, 2,8 mmol). A mistura resultante foi aquecida ao refluxo durante 18 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura foi diluída com acetato de etilo e H20. A fase orgânica foi recolhida, seca e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (flash) eluindo-se com acetato de etilo-hexano (1:1) para dar o produto puro (0,03 g, 5%). lH-n.m.r. (CDCI3) δ 0,95 (t, J = 7,4 Hz, 3H CH3), 1,39 (m, 2H, CH2), 1,81 (m, 2H, CH2), 4,77 (q, 1H, CH), 5,09 (br d, 1H, NH), 7,42-7,62 (m, 5H, Ar-H), 7,80 (s, 1H, piraz.-H).
Utilizando procedimentos semelhantes prepararam-se os seguintes compostos.
Exemplo 9 N- (3-{1-[(6-Cloropirazin-2-il) aminoJbutiljfenil) acetamida
A urna solução agitada de N- [1- (3-aminofenil)butil]-6-cloropirazin-2-amina (0,10 g, 0,36 mmol) e trietilamina (100 μΐ, 0,72 mmol) em diclorometano (3 mL) arrefecida a 0 °C adicionou-se cloreto de acetilo (31 |uL, 0,43 mmol). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h, depois diluida com diclorometano (10 mL) e lavada com H2O (10 mL) e salmoura (10 mL) . A fase orgânica foi recolhida, seca e concentrada e o resíduo purificado por cromatografia instantânea eluindo-se com acetato de etilo-hexano (1:1) para dar o produto puro (94 mg, 82%). ^-n.m.r. (CDCI3) δ 0,93 (t, J = 7,4 Hz, 3H, Me), 1,28-1,43 (m, 2H, CH2), 1,76-1, 85 (m, 2H, CH2), 2,16 (s, 3H, COCH3), 4,48-4,59 (m, 1H, CHCH2CH2CH3), 5,15 (br d, J = 6,8 Hz, 1H, NH), 7,06 (d, J= 7,4 Hz, 1H, Ar), 7,23-7,33 (m, 3H, Ar), 7,54 (s, 1H, CONH), 7,60 (s, 1H, piraz-H), 7,77 (s, 1H, piraz-H).
Exemplo 10 6-Cloro-N- [1-(4-metilfenil)butil ]pirazin-2-amina
Sob uma atmosfera de azoto, uma mistura de 6-cloro-N-[1-(3-metilfenil)butil)pirazin-2-amina (0,21 g, 0,76 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenol (0,23 g, 91 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (90 mg, 0,08 mmol) em tolueno-n-propanol (4 mL, 3:1) foi tratada com solução aquosa de carbonato de sódio 2M (0,4 mL, 0,84 mmol). A mistura resultante foi agitada vigorosamente enquanto se aquecia sob refluxo durante 22 horas. Uma vez adicionado acetato de etilo arrefecido, a mistura foi seca (MgS04) e filtrada. Remoção do solvente sob vácuo originou então o produto bruto, o qual foi purificado por cromatografia em coluna utilizando-se diclorometano:éter dietílico (90:10) como eluente para o proporcionar (0,165 g, 60%). lH-n.m.r. (CDC13) δ 0,95 (t, 3H, CH3), 1,42 (m, 2H, CH2), 1,82 (m, 2H, CH2), 2,33 (s, 3H, CH3-Ar), 3,94 (s, 3H, CH3-O), 4,75 (m, 1H, CH), 5,09 (d, 1H, NH), 6,25 (br s, 1H, OH), 6, 94-7,50 (m, 7H, Ar-H), 7,66 (s, 1H, piraz.-H), 8,20 (s, 1H, piraz.-H).
Utilizando procedimentos semelhantes prepararam-se os seguintes compostos.
Exemplo 11 3,5-Dicloro-2-metilpirazina
A uma solução de n-butil-lítio (3,8 mL, 2,5M em hexano, 9,4 mmol) em THF (40 mL) arrefecida a -30 °C sob azoto adicionou-se 2,2,6,6-tetrametilpiperidina (1,7 mL, 10,1 mmol). Esta solução foi deixada aquecer até 0 °C durante 20 min, e foi depois arrefecida até -70 °C. Adicionou-se gota a gota uma solução de 2,6-dicloropirazina (1 g, 6,7 mmol) em THF (40 mL) e agitou-se a solução castanha resultante a -70 °C durante 30 min. Adicionou-se então iodometano (4,1 mL, 67 mmol) e agitou-se a solução a -70 °C durante mais 45 minutos, após os quais se adicionou uma mistura de etanol (5 mL), THF (5 mL) e HC1 IN (1 mL) . A solução foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em H2O (50 mL) e o produto extraído para diclorometano (3 x 30 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com H2O (50 mL) e salmoura (50 mL) e secas (Na2S04) . A camada orgânica foi concentrada sob vácuo e o resíduo purificado por cromatografia em coluna eluindo-se com diclorometano-hexano (1:1) para se separar o produto como um óleo móvel transparente(820 mg). iH-n.m.r. (CDCI3) δ 2,65 (s, 3H, CH3), 8,41 (s, 1H, piraz.-H).
Exemplo 12 4-(6-{[(IS)-l-(3-Fluorofenil)butil]amino}pirazin-2-il)-2-metoxifenil di-hidrogenofosfato
Arrefeceu-se uma solução desgaseifiçada do fenol (0,25 g, 0,72 mmol) em CH3CN anidro (30 ml) até -10 °C, adicionou-se CBr4 (1,19 g; 3,60 mmol) e agitou-se a mistura durante 10 min antes de se adicionar N,N-diisopropiletilamina (0,20 g; 1,51 mmol) e 4-pirrolidinilpiridina (0,011 g; 0,072 mmol). Um minuto depois, iniciou-se a adição gota a gota de dibenzilfosfonato (0,27 g; 1,04 mmol). A reacção exotérmica foi controlada pela taxa de adição do fosfonato e com arrefecimento adicional, mantendo-se a temperatura interna a ou abaixo de -10 °C. A mistura reaccional ficou amarela clara e foi agitada a -10° C até ser julgada completa por TLC (cerca de 45 min). Adicionou-se KH2PO4 aquoso (0,5 M, 32 ml/100 ml de CH3CN) e a mistura foi extraída com EtOAc (3 x 100 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados sucessivamente com água (1 x 50 mL), salmoura (1 x 75 mL) e secos (Na2C03/Na2S04) e concentrados sob vácuo. Cromatografia do resíduo sobre alumina neutra, eluindo-se com uma mistura gradiente de éter de petróleo/acetato de etilo proporcionou o éster de dibenzil fosfonato com 74% de rendimento. Ή RMN (200 MHz, EMSO-d6) δ 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 3H, CH2CH2CH3) , 1,52-1,23 (m, 2H, CH2CH2CH3), 1,93-1,75 (m, 2H, CH2CH2CH3), 3,84 (s, 3H, OCH3), 4,87-4,83 (m, 1H, NHCHCH2), 5,16 (s, 2H, PhCH2), 5,17 (d, J=1,8 Hz, 1H, NH), 5,20 (s, 2H, CH2), 6,97-6,87 (m, 1H, ArH), 7,48- 7,06 (m, 16H, ArH), 7,77 (s, 1H, piraz.-H), 8,20 (s, 1H, piraz-H). A uma solução purgada com azoto do dibenzil fosfonato (0,95 g; 1,51 mmol) em metanol (100 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (250 mg) e hidrogenou-se a mistura num hidrogenador Parr durante a noite. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, filtrou-se a mistura reacional através de Celite®. Os sólidos foram lavados com MeOH (3 x 50 ml) e o MeOH e os filtrados combinados removidos sob pressão reduzida, deixando para trás um sólido amarelo que foi recristalizado a partir de Me0H/Et20 para dar o produto desejado, 0,48 g; 71%. m/z (ES) 448,22; (M+l).
TRIAGEM
Diluição do Composto
Para efeitos de triagem, os compostos foram diluídos em placas de 96 poços a uma concentração de 20 μΜ. As placas foram aquecidas a 37 °C durante 30 minutos antes do ensaio.
Estabelecimento de linhas celulares TEL: JAK A região de codificação que engloba os nucleótidos 1-487 de TEL foi amplificada por PCR utilizando-se os oligonucleótidos 5TEL (5' -GGA GGA TCC TGA TCT CTC TCG CTG TGA GAC-3') E 3TEL (5'-AGGC GTC GAC TTC TTC TTC ATG GTT CTG-3') e mRNA de U937 como modelo (template) . Um sítio BamH I estava presente no iniciador 5TEL, foi incorporado um sítio Sal I no iniciador 3TEL. As regiões que abrangem os domínios quinase de JAK2 (nucleótidos 2994-3914; JAK2F 5'-ACGC GTC GAC GGT GCC TTT GAA GAC CGG GAT-3'; JAK2R 5'-ATA GTT TAG CGG CCG CTC AGA ATG AAG GTC ATT T-3') e JAK3 (nucleótidos 2520-3469; JAK3F 5'-GAA GTC GAC TAT GCC TGC CAA GAC CCC ACG ATC TT-3'; JAK3R 5'-GGA TCT AGA CTA TGA AAA GGA CAG GG GTG GTG TTT-3') foram produzidos por PCR usando-se Taq ADN Polimerase (Gibco/BRL) e U937 mRNA como modelo. Foi incorporado um sítio Sail no iniciador direto de JAK2 e JAK3, foi incorporado um sítio Not I no iniciador inverso UAK2 e adicionou-se um sítio Xba I ao iniciador inverso de UAK3.
Gerou-se uma fusão de TEL/Jak2 por digestão do produto TELPCR com BamH I/Sal I, digestão do produto PCR JAK2 com Sal I/Not I seguindo-se ligação e subclonagem na expressão de mamífero do vetor pTRE2 (Clontech) digerido com BamH I-Not I (pTELJAK2) . Para JAK3 o produto PCR de domínio de quinase clivado Sal I/Not I oi ligado com producto TEL clivado com BamH I/Sal I seguindo-se ligação a pTRE2 (pTELJAK3) clivado com BamH I/Not I. A linha de células mielomonocíticas dependentes de fator de crescimento BaF3 contendo o plasmídeo pTET-off (Clontech) foi transfectada com pTELJAK2 ou pTELJAK3 e as células selecionadas para crescimento independente de fator. As células de tipo selvagem BaF 3 foram cultivadas em meio condicionado com DMEM 10% FCS, 10% WEHI 3B. As células BaF3 TEL/JAK foram cultivadas em DMEM 10% Tet-System FBS Aprovado (sem meio condicionado WEHI 3B).
Crescimento e Manutenção de Linhas Celulares de Cancro
Obteve-se K562 (Leucemia Mielóide Crónica), PC3 (Cancro da Próstata) e DU145 (Cancro da Próstata) a partir da American Type Culture Collection (ATCC). A K562 foi cultivada em RPMI, com 10% FBS com Glutamx adicionado. As células DU145 foram cultivadas em DMED, com 10% FBS e adicionados Glutamx e aminoácidos não essenciais MEM. As células PC3 foram cultivadas em meio F12K, com 10% FBS e adicionados Glutamx e aminoácidos não essenciais MEM. Todas as células foram crescidas a 37 °C em 5% de CO2.
Os ensaios celulares foram realizados da seguinte forma:
As suspensões celulares foram preparadas colhendo-se células da cultura. (As células utilizadas neste teste devem estar na fase posterior de crescimento e com alta viabilidade.) As células foram diluídas em meio de crescimento correto até à concentração final de l,lx (de 50000 células/mL até 200000 células/mL, dependendo da linha celular).
Os compostos a serem testados foram adicionados (10 fjL, 10X a concentração final) a uma placa de 96 poços de fundo plano. Adicionou-se a suspensão celular (90 jlL por poço), incubou-se a placa durante 40 horas a 37 °C, 5% de CO2 MTT (20 |uL por poço, 5 mg/mL em PBS) e devolveram-se as placas à incubadora durante mais 6 horas. Adicionou-se tampão de lise (100 jlL por poço, 10% SDS a, HC1 0,01 N) e armazenou-se a placa na incubadora durante a noite. A placa foi então lida a 590 nm.
Ensaio de Tubulina
Os ensaios turbidométricos da montagem de microtubulos foram realizados incubando-se a proteína dos microtubulos em cuvetes a 37 °C num espectrofotómetro controlado termostaticamente medindo a alteração na absorvância a 340 nm ao longo do tempo. A proteína dos microtubulos foi incubada com cada um dos compostos de teste a 0 °C e iniciou-se a polimerização por adição de 1 mM de GTP, antes de se aquecer a 37 °C.
Resultados A actividade de uma gama de compostos é mostrada na
Tabela 1. Os compostos que exibiram uma capacidade para inibirem 50% do crescimento celular a uma concentração de 20 μΜ ou menos são designados como Do mesmo modo, os compostos que inibiram a polimerização de tubulina em mais de 50% a 50 μΜ são designados como os compostos que não inibiram a polimerização de tubulina em 50% a 50 μΜ são designados como e os compostos que não foram testados são designados como "NT".
Tabela 1
Será apreciado pelos especialistas na técnica que podem ser feitas numerosas variações e/ou modificações à invenção tal como mostrado nas concretizações especificas.
Lisboa, 07 de março de 2017

Claims (7)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Um composto seleccionado de
    ou os sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos, solvatos, formas cristalinas ou diastereómeros dos mesmos.
  2. 2. Um composto de acordo com a reivindicação 1 o qual é
  3. 3. Um composto de acordo com a reivindicação 1 o qual é
  4. 4. Uma composição compreendendo um veiculo e pelo menos um composto de qualquer das reivindicações 1 a 3. 5. 0 uso de pelo menos um dos compostos de qualquer uma das reivindicações 1 a 3 ou uma composição da reivindicação 4 na preparação de um medicamento para o tratamento de um estado de doença relacionado com hiperproliferação, estado de doença ou desordem associado a tirosina-quinase, desordem autoimune, doença infecciosa, restenose vascular, ou doença inflamatória.
  5. 6. Pelo menos um dos compostos de qualquer uma das reivindicações 1 a 3 ou uma composição da reivindicação 4 para uso no tratamento de um estado de doença relacionado com hiperproliferação, estado de doença ou desordem associada a tirosina-quinase, desordem autoimune, doença infecciosa, restenose vascular, ou doença inflamatória.
  6. 7. Pelo menos um dos compostos ou a composição para uso conforme reivindicado na reivindicação 6 em que o estado de doença relacionado com hiperproliferação é tratável pela modulação da polimerização de microtubulos.
  7. 8. Pelo menos um dos compostos ou a composição para uso conforme reivindicado na reivindicação 6 ou 7 em que o estado de doença relacionado com hiperproliferação é selecionado do grupo constituído por: Atopia, tal como Asma Alérgica, Dermatite Atópica (Eczema) e Rinite Alérgica; Hipersensibilidade Mediada por Células, tal como Dermatite de Contacto Alérgica e Pneumonite de Hipersensibilidade; Doenças Reumáticas, tal como Lúpus Eritematoso Sistémico (SLE - Systemic Lupus Erythematosus), Artrite Reumatóide, Artrite Juvenil, Síndrome de Sjõgren, Esclerodermia, Polimiosite, Espondilite Anquilosante, Artrite Psoriática; Outras doenças autoimunes tais como Diabetes tipo I, desordens da tiróide autoimunes, e doença de Alzheimer; Doenças Virais, tais como Vírus de Epstein Barr (EBV - Epstein Barr Virus), Hepatite B, Hepatite C, HIV, HTLV 1, Virus Varicella-Zoster (VZV - Varicella-Zoster Virus), Virus do Papiloma Humano (HPV - Human Papilloma Virus); Cancro, tal como fibrossarcoma, mixossarcoma, lipossarcoma, condrossarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiossarcoma, endoteliossarcoma, linfangiossarcoma, linfangioendoteliossarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiossarcoma, rabdomiossarcoma, carcinoma do cólon, cancro pancreático, cancro da mama, cancro do ovário, cancro da próstata, carcinoma de células escamosas, carcinoma basocelular, adenocarcinoma, carcinoma da glândula sudorípara, carcinoma da glândula sebácea, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de células renais, hepatoma, carcinoma do dueto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionário, tumor de Wilms, cancro cervical, tumor testicular, carcinoma do pulmão, carcinoma pulmonar de células pequenas, carcinoma da bexiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craniofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, meningioma, melanoma, neuroblastoma, e retinoblastoma, e carcinomas que se formam a partir de tecido da mama, da próstata, do rim, da bexiga ou do cólon, e desordens neoplásicas que surgem em tecido adiposo, tais como tumores de células adiposas, por exemplo, lipomas, fibrolipomas, lipoblastomas, lipomatose, hibernomas, hemangiomas e/ou lipossarcomas; doenças infecciosas tais como infecções virais, maláricas e bacterianas; restenose vascular; doenças inflamatórias, tais como doenças autoimunes, nefrite glomerular, enfarte do miocárdio e psoríase. REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Patentes citadas na Descrição * Mi Y AURA. fi.; 5UZUKL Chetn 1895, νοΐ. 95, STtLLE; Aíige»'. Qtem., M. Ed. Engf, Í386. 2457 toí, 26. 508
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