PT1503624E

PT1503624E - Aumento da vitalidade das plantas por tratamento de sementes com um composto neonicotinóide

Info

Publication number: PT1503624E
Application number: PT03731187T
Authority: PT
Inventors: Jawed Asrar; Frank C Kohn; Ernest F Sanders
Original assignee: Monsanto Technology Llc
Priority date: 2002-05-16
Filing date: 2003-05-15
Publication date: 2007-12-19
Also published as: EP1503624B1; BR0311183A; DE60316284D1; DE60316284T2; EP1503624A1; AU2003241451A1; ATE372676T1; MXPA04011393A; CA2483690A1; ES2294292T3; MX254089B; WO2003096811A1; US20040023801A1

Description

PE 1503624 - 1 -

DESCRIÇÃO "AUMENTO DA VITALIDADE DAS PLANTAS POR TRATAMENTO DE SEMENTES COM UM COMPOSTO NEONICOTINÓIDE" (1) Âmbito da Invenção: A presente invenção relaciona-se com uma melhoria do rendimento e/ou vitalidade de plantas agronómicas e mais especialmente com um método de melhoramento do rendimento e/ou vitalidade de plantas agronómicas desenvolvidas a partir de uma semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência a herbicidas ou ambas por tratamento de uma semente da planta com um composto neonicotinóide quando a protecção insecticida não é adequada. (2) Descrição da Técnica Relacionada:

As plantas são uma fonte crucial de alimento, alimentação animal, fibras, madeira, materiais estruturais, medicamentos e substâncias químicas úteis. O aumento da procura destes produtos das plantas tem induzido esforços mundiais continuados para aumentar a produtividade de solos aráveis. Estes esforços resultaram num grande aumento de PE 1503624 - 2 - produtividade da terra e rendimento das plantações. Muitos destes aumentos podem ser atribuídos às variedades melhoradas das plantas e ao aumento de pesticidas, aos novos tipos de pesticidas com actividades mais elevadas, aos novos tipos de herbicidas, e à utilização continuada de fertilizantes.

Em contraste com os benefícios proporcionados por estes factores, contudo, cada um deles possui desvantagens. Por exemplo, as variedades de plantações de elevados rendimentos podem ficar menos robustas e podem ficar sujeitas a perdas catastróficas devido a pragas ou stress ambiental aos quais não estão aclimatadas; as actividades tóxicas de pesticidas e herbicidas geralmente não se limitam às pragas podendo ser prejudiciais às espécies não-visadas - que incluem os seres humanos; os fertilizantes podem perder-se por lixiviação e escorrerem para as águas superficiais e causar grave quebra do curso natural da vida e da qualidade da água.

Foram desenvolvidos novos tipos de pesticidas que são muito eficazes contra as pragas visadas. Em especial, verificou-se que uma família de insecticidas demonstra grande potencial para a protecção de sementes e plantas de culturas agronómicas importantes contra os prejuízos causados por insectos. Esta família, os neonicotinóides, compreendem agentes tais como o tiametoxam (disponível no mercado como HELIX® e CRUISER®), imidacloprid (disponível no mercado como GAÚCHO®), bem como alguns outros compostos - 3 - PE 1503624 relacionados. A utilização de tiametoxam como um tratamento pesticida para sementes foi referida, pelo menos para o algodão, sorgo, milho, milho doce, beterraba, para o controlo de larva de elatérida, ferrugem das sementes de algodão, ferrugem do tomate, bicha-cadela do campo, pulgão do algodão, e outros insectos. O tratamento da semente com imidacloprid foi referido, pelo menos para os cereais de Inverno, milho, trigo, cevada, beterraba sacarina, sorgo, batata, algodão e canola, para o controlo de afideos, escaravelho pulga, insectos Lygus, larvas da couve Seedpod Weevil, verme das raízes, percevejo, larva de elatérida, e outras pragas de insectos. Verifica-se que a utilização de insecticidas como o tratamento de sementes, em vez das formulações aplicadas ao campo, reduz a exposição e o odor dos pesticidas, e reduz a quantidade e aplicação após o cultivo das plantas. Para mais informação, ver, e.g. U.S. Patent N°. 6 331 531 Bl, e WO 99/35913.

Uma outra área de controlo de pragas na agricultura em que se fez progressos significativos é a da engenharia genética das plantas para expressar proteínas tóxicas do ponto de vista insecticida, em especial, as delta endotoxinas de Bacillus thuringensis (Bt) . Uma listagem ampla destas Bt endotoxinas pode ser encontrada, por exemplo, em http: / ,/epunix .blols . susx, ac .uk/3ome/Neil_Crickmore/Bt/Index .html; de 04/27/2002. - 4 - PE 1503624

Diversos artigos discutiram a combinação do tratamento de plantas transgénicas que produzem toxinas de insectos com os compostos pesticidas com o fim de controlar os insectos. Por exemplo, Lee, B. et ai, em WO 99/35913, descreve um método com um composto neonicotinóide para controlar pragas por tratamento das plantas que expressam um ou mais toxinas de insectos Bt que ocorrem naturalmente. Em WO 99/35910, descreveu-se um método de controlar as pragas que compreende a aplicação de pimetrozina, profenofos, um derivado de benzilureia, ou um derivado do carbamato às pragas, ao respectivo meio, ou a uma planta transgénica que contém um ou mais dos genes delta-endotoxinas Bt naturais. Na U.S. Patent No. 6 331 531, Kern descreve o tratamento de plantações transgénicas com alguns compostos que compreendem o imidacloprid, de modo a obter um controlo sinérgico dos insectos prejudiciais.

Comercialmente, a Monsanto Company, St. Louis, Mo, ofereceu milho tratado com GAÚCHO que é Roundup Ready (híbridos RX738RR e RX740RR), milho que tem YieldGuard® para a praga que ataca as plantações de milho (híbrido DK636BtY), e milho que tem conjuntamente Roundup Ready e YieldGuard com eventos transgénicos para a praga que ataca as plantações de milho (híbridos DK440RR/YG, DK520RR/YG, DK551RR/YG). O fim em vista de aplicar o insecticida à semente está descrito como sendo para a protecção do primeiro desenvolvimento verdadeiro das folhas contra as pragas tais como a larva de elatérida, larva de insecto nas sementes de milho, formiga vermelha importada, e pulga escaravelho. - 5 - PE 1503624

Com o desenvolvimento permanente de técnicas de clonagem molecular, foram isolados alguns genes de delta-endotoxinas e determinadas as suas sequências de DNA. Estes genes foram utilizados para construir alguns produtos Bt geneticamente manipulados que foram aprovados para utilização comercial. Desenvolvimentos recentes verificaram que os sistemas de libertação de novas delta-endotoxinas desenvolvidos, compreendem plantas que contêm e expressam os genes delta-endotoxinas manipulados geneticamente. A clonagem e a determinação da sequência de diversos genes de delta-endotoxinas a partir de uma diversidade de estirpes Bt foram descritas e estão resumidas por Hofte e Whiteley, Microbiol. R., 53:242-255 (1989). Os vectores vaivém dos plasmídeos concebidos para a clonagem e expressão de genes de delta-endotoxinas na E.coli ou na B. thuringiensis estão descritos por Gawron-Burke e Baum, Genet. Engineer, 13:237-263 (1991). A U.S. Patent 5 441 884 descreve um sistema de recombinação de sítio-especifico para a reconstrução de B. thuringiensis recombinante que contém genes delta-endotoxinas que estão livres de DNA não nativo para o B. thuringiensis.

Nos últimos anos os investigadores dirigiram os esforços na construção de delta-endotoxinas híbridas na esperança de produzir proteínas com maior actividade ou com propriedades melhoradas. Os avanços em matéria de genética molecular durante a década passada facilitaram uma possibilidade lógica e organizada de manipulação das - 6 - PE 1503624 proteínas com propriedades melhoradas. Os métodos de mutagenese aleatória e de sítio-específico, o advento de metodologias de reacções em cadeia da polimerase (PCR™), e o desenvolvimento de métodos recombinantes para gerar as fusões de genes e para construir proteínas quiméricas facilitaram uma diversidade de métodos para a alteração dos da sequência de aminoácidos de proteínas, fundindo porções de duas ou mais proteínas numa única proteína recombinante, e alterando as sequências genéticas que codificam as proteínas de interesse comercial.

Contudo, num estudo anterior com proteínas cristalizadas, estas técnicas apenas foram exploradas de um modo limitado. A probabilidade de criar arbitrariamente uma proteína quimérica com propriedades melhoradas a partir de porções de diversas proteínas nativas que foram identificadas foi remota dada a complexa natureza da estrutura da proteína, dobragem, oligomerização, activação, e processamento correcto da protoxina quimérica para uma unidade activa. Apenas por cuidadosa selecção das regiões alvo específicas em cada proteína, e subsequente manipulação de proteínas podem ser sintetizadas toxinas que têm actividade insecticida melhorada.

Na C7.5. Patent No. 6 281 016, contudo, English et al. descrevem métodos seguros e composições que compreendem proteínas cristalizadas por engenharia de recombinação que têm actividade insecticida melhorada, especificidades para uma gama de hospedeiros alargada, e que são adequadas para - 7 - PE1503624 a produção comercial em B. thuringiensis. Este trabalho descreve métodos para a construção de delta-endotoxinas híbridas de B. thuringiensis que compreende sequências de aminoácidos a partir de proteínas cristalizadas CrylAC e CrylF. Estas proteínas híbridas, nas quais toda ou uma porção de CrylAc domínio 2, toda ou uma porção de CrylAc domínio 3, e toda ou uma porção do seqmento da protoxina CrylAc está recolocada pelas correspondentes porções de CrylF, não possuem apenas características insecticidas das delta-endotoxinas mãe, mas têm também propriedades notáveis e surpreendentes de uma gama alargada de especificidade melhorada que não são proficientemente exibidas por qualquer uma das delta-endotoxinas nativas a partir das quais as proteínas quiméricas foram construídas.

Um método de utilização de genes que codificam as toxinas dos insectos é incorporar o gene na planta que requer a protecção. As técnicas para a realização desta transformação são conhecidas na matéria, e podem ser encontradas em, por exemplo, U.S. Patent Nos. 6 023 013 e 6 284 949, entre outras. Na prática comercial, é comum transferir os genes da toxina insecticida para um armazém genético da planta agronómica que é estável e vigoroso mas não é a variedade de rendimento máximo. Uma vez estabilizado o evento transgénico no recipiente selecciona-do, é utilizado um processo de selecção e reprodução híbrida normal para cruzar as plantas transgénicas com variedades de rendimentos elevados para obter variedades de rendimentos elevados que expressam o evento transgénico - 8 - PE 1503624 desejado. Finalmente, quando é seleccionado um híbrido que demonstra rendimento e vitalidade adequado, enquanto também expressa o evento transqénico, este pode seguir para a utilização comercial.

Contudo, uma desvantagem desta técnica que permanece é que é vulgar para as variedades híbridas da planta, e, em particular, para híbridos transgénicos, demonstrar vitalidade inferior, tal como, por exemplo, crescimento e desenvolvimento das raízes com menos vitalidade, do que as da mãe e das variedades não transgénicas.

Por isso, apesar destes avanços tal como acima descrito, continua a procura para uma produtividade aumentada a partir de terra agrícola útil, independentemente de estes aumentos serem devidos ao controlo das pragas ou de outros factores. Concordantemente, permanece uma alta prioridade para proporcionar métodos para aumentar o rendimento e a vitalidade das plantas agronómicas. Seria útil se estes métodos pudessem ajudar a reduzir a quantidade de aplicação de substâncias químicas às culturas no campo e durante o crescimento das plantas. Seria também útil se estes métodos pudessem ser realizados com uma exposição reduzida aos pesticidas tóxicos dos agricultores e terras e aquíferos envolventes, das plantas não visadas e dos animais. Seria também útil se estes métodos pudessem ser utilizados em combinação com outras tecnologias emergentes, tais como aumentar a vitalidade de plantas - 9 - PE1503624 híbridas, e em especial, as híbridas transgénicas que expressam as toxinas insecticidas.

SUMARIO DA INVENÇÃO

Por isso, sucintamente, a presente invenção relaciona-se directamente com um novo método de aumentar o rendimento e/ou vitalidade de uma planta agronómica que está em crescimento a partir de uma semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas, método este que compreende: a. determinar se a semente é para ser plantada num local com um nível de infestação pela praga que deveria indicar o tratamento com um insecticida; e, se este tratamento não é o indicado, b. realizar uma acção que é seleccionada a partir de um grupo que consiste em: i. tratar a semente com um composto neonicotinóide, e iv. plantar no local uma semente que foi tratada com um composto neonicotinóide. A presente invenção está dirigida também para um novo método de aumentar o rendimento e/ou vitalidade de uma planta agronómica que está em crescimento a partir de uma semente que compreende uma sequência de polinucleótido PE 1503624 - 10 - estranho que expressa para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas, onde se plantou a semente num local com um nível de infestação por um insecto que é uma praga para a planta agronómica e contra a qual um composto neonicotinóide tem uma actividade insecticida, método esse que compreende: a. determinar se o nível de infestação pelo insecto que é uma praga para a planta agronómica indica o tratamento com um insecticida; e, se este tratamento não é indicado, b. tratar a semente com um composto neonicotinóide. A presente invenção também se relaciona com um novo método de reprodução de uma planta híbrida que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que expressa para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas, que aumentou o rendimento e/ou vitalidade a partir de duas plantas progenitoras, método este que compreende: o tratamento das sementes com uma ou ambas plantas progenitoras com um composto neonicotinóide antes de plantar as sementes; a polinização da planta fêmea com o pólen da planta macho; e colher a semente produzida pela planta parental fêmea. - 11 - PE1503624 A presente invenção também se relaciona com um novo método de aumentar o rendimento e/ou vitalidade de uma planta agronómica que está em crescimento a partir de uma semente que é plantada num local onde não é indicado um tratamento com um insecticida da semente ou da planta agronómica, método esse que compreende o tratamento de uma semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas, com um composto neonicotinóide e que planta a semente tratada num local onde não é praticado o tratamento com um insecticida da semente ou da planta agronómica. A presente invenção também se relaciona com um novo método de aumentar o rendimento e/ou vitalidade de uma planta agronómica que está em crescimento a partir de uma semente que é plantada num local onde não é indicado um tratamento com um nível de infestação por um insecto que é uma praga para a planta agronómica e contra a qual o composto neonicotinóide tem uma actividade insecticida, método esse que compreende o tratamento de uma semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas, com um composto neonicotinóide e que planta a semente tratada num local onde não é praticado o tratamento insecticida da semente ou da planta agronómica. - 12 - PE1503624 A presente invenção também se relaciona com um novo método de aumentar o rendimento e/ou vitalidade de uma planta agronómica que está em crescimento a partir de uma semente que é plantada num local com um nivel de infestação por um insecto que é uma praga para a planta agronómica e contra a qual o composto neonicotinóide tem uma actividade insecticida, método esse que compreende: a. tratar a semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambos, com um insecticida neonicotinóide; e b. plantar a semente tratada num local que tem um nível de infestação por insecto abaixo do qual este tratamento insecticida está indicado. A presente invenção também se relaciona com um novo método de aumentar o rendimento e/ou vitalidade de uma planta agronómica que está em crescimento a partir de uma semente, que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas, método esse que compreende: a. seleccionar um local no qual a semente vai ser plantada e onde o nível de infestação por insectos está abaixo do que para o qual está indicado um insecticida; e PE1503624 - 13 - b. realizar uma acção que é seleccionada a partir do grupo que consiste em. i. tratar a semente com um composto neonicotinóide, e plantar no local uma semente que tenha sido tratada com um composto neonicotinóide. A presente invenção também se relaciona com uma nova semente que é tratada pelo método descrito acima em primeiro lugar.

Por isso, entre as diversas vantagens verificadas pela presente invenção, pode ser verificada a provisão de um método de aumento de rendimento e vitalidade de plantas agronómicas, e também a provisão destes métodos que são seguros e fáceis de utilizar, e também a provisão destes métodos que podem ajudar a reduzir a quantidade de aplicação de substâncias químicas às plantas no campos cultivados durante o crescimento, e também a provisão destes métodos que podem ser realizados com exposição reduzida aos pesticidas tóxicos dos agricultores, das terras e aquíferos envolventes, e das plantas não visadas e dos animais, e também a provisão de métodos que podem ser utilizados em combinação favorável com outras tecnologias emergentes, tais como para aumentar o vigor de plantas híbridas, e em especial, as plantas híbridas transgénicas que expressam as toxinas insecticidas. PE1503624 - 14 -

DESCRIÇÃO RESUMIDA DAS FIGURAS A Figura 1 é um mapa que ilustra os níveis da utilização de insecticida em acres de terra de milho nos Estados Unidos no ano de 2001 por plantação referente ao distrito; A Figura 2 é um gráfico de barras que ilustra o rendimento do milho (em bu/ac) a partir de semente com um tratamento com o imidacloprid (GAÚCHO®) relativamente ao rendimento do controlo de milho sem este tratamento de semente para doze híbridos do milho diferentes; e A Figura 3 é um gráfico de barras que ilustra o rendimento do milho (em bu/ac) a partir de semente com o tratamento com o imidacloprid (GAÚCHO®) em relação ao rendimento do controlo de milho sem este tratamento de sementes para vinte e quatro locais diferentes.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS FORMAS DE REALIZAÇAO PREFERIDAS

De acordo com a presente invenção, verificou-se que o rendimento e/ou vitalidade de uma planta agronómica pode ser aumentado por tratamento da semente da planta que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas, com uma quantidade - 15 - PE1503624 eficaz de um composto neonicotinóide do tipo que foi até agora identificado principalmente como um insecticida. Surpreendentemente, demonstrou-se que estes compostos neonicotinóides têm a capacidade de causar um aumento no rendimento e/ou vitalidade de uma planta quer a planta esteja sob pressão de uma praga a partir de patogénios de insectos ou não. De facto, o aumento do rendimento e/ou vitalidade pode verificar-se ter lugar mesmo quando a semente e a planta tratadas não estejam de todo sob a pressão de praga, por exemplo, como nos ensaios onde a germinação, a formação de rebentos e crescimento da planta pode ter lugar substancialmente em condições de esterilização. 0 aumento no rendimento e/ou vitalidade é totalmente surpreendente porque foi originado pela utilização de um composto que foi previamente identificado como um insecticida, mas ocorre mesmo na ausência da pressão de uma praga por patogénios insecticidas contra os quais o composto é conhecido como sendo activo. A propósito, o método é útil para aumentar o rendimento e/ou vitalidade em áreas geográficas, ou com práticas de cultura, onde o insecticida especial é normalmente utilizado - - e mesmo em condições em que a utilização do insecticida não está indicada explicitamente.

De facto, verifica-se que não seria intuitivo para alguém especialista na matéria controlar as pragas com a aplicação de um composto quimico a uma semente ou uma - 16 - PE1503624 planta - com dispêndio significativo - em condições onde se verifica não ser necessária a actividade conhecida do composto. Para além disso, dado o cuidado dispendido sobre a minimização da utilização de recursos nas práticas modernas da exploração agrícola, esta aplicação seria considerada ser um desperdício. Mas, surpreendentemente, os inventores verificaram não ser o caso. Os inventores verificaram que alguns compostos neonicotinóides insecticidas neonicotinóides, em particular — podem ser aplicados em sementes com o resultado de que as plantas que cresceram a partir de sementes demonstraram um rendimento e/ou vitalidade aumentado.

Também se verificou que os novos métodos demonstraram resultados especialmente úteis e surpreendentes em situações onde a planta ou a semente está sujeita a algum stress durante ou após a germinação. Por exemplo, este stress pode ser causado por stress ambiental, tais como seca, frio, frio e chuva, e outros estados semelhan- tes. Verifica-se, de facto, que as comparações lado-a-lado de plantas crescidas a partir de sementes tratadas pelas formas de realização preferidas do novo método e as plantas crescidas a partir de sementes não tratadas sujeitas durante algum tempo a condições de seca após a germinação demonstrarão o rendimento e/ou vitalidade superior das plantas crescidas a partir das sementes tratadas.

Dado que os compostos neonicotinóides que são úteis no novo método podem ser aplicados antes da PE1503624 - 17 - plantação, o presente método proporciona um método fácil de conseguir as vantagens de rendimento e/ou vitalidade das plantas melhorado sem o esforço e expensas adicionais de cultura ou aplicação no campo após a germinação e da produção de rebentos.

Numa outra forma de realização, o composto neonicotinóide pode ser aplicado com bons resultados para as sementes de plantas que têm eventos transgénicos especiais, quer o nivel de infestação por insecto indique ou não a utilização de um insecticida. Num exemplo desta forma de realização, o composto neonicotinóide pode ser aplicado a uma semente que contém um ou mais genes capazes de expressar uma delta-endotoxina B. thuringiensis de qualquer tipo, quando este tratamento neonicotinóide não está indicado na situação de pressão do insecto. Num outro exemplo desta forma de realização, o composto neonicotinóide é aplicado a uma semente que contém um ou mais genes capazes de expressar uma delta-endotoxina B. thuringiensis quimérica ou modificada, que tem uma sequência de aminoácidos que é diferente da de qualquer endotoxina natural ou não modificada tais como as descritas em WO 99/35910 e WO 99/35913. Uma vantagem inesperada do tratamento da semente de uma planta transgénica é o aumento surpreendente na vitalidade que o método proporciona à planta transgénica. Nas formas de realização preferidas, a combinação do tratamento da semente por neonicotinóide com uma planta transgénica proporciona uma vantagem sinérgica. - 18 - PE 1503624

Este é de valor especial, por exemplo, nos programas de reprodução para as plantas transgénicas.

Como acima mencionado, a aplicação do composto neonicotinóide tem a capacidade de aumentar o rendimento e/ou vitalidade de uma planta desenvolvida a partir de uma semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas, mesmo na ausência de pragas de insectos contra as quais o composto tem uma actividade insecticida. De facto, o composto neonicotinóide é capaz de aumentar o rendimento e/ou vitalidade de uma planta mesmo quando a semente germinou e deu rebentos e a planta cresceu em condições de esterilização. Por outras palavras, na ausência total de qualquer praga de plantas.

Quando se referiu que a semente germinou e deu rebentos e a planta cresceu em condições de esterilização, o que significa é que uma semente, que foi sujeita um procedimento de esterilização superficial não-fitotóxica, tal como o contacto com uma solução de hipoclorito de sódio a 0,5% de detergente doméstico durante 10 minutos, seguido de lavagem com água destilada esterilizada por 3 vezes, ou outros procedimentos sanitários apropriados como são conhecidos na técnica, é plantada num meio de crescimento que foi esterilizado, ou está de outro modo substancial- - 19 - PE 1503624 mente livre de pragas de insectos e outros organismos que são patogénicos para a planta.

Salvo indicação em contrário, quando se refere a uma "praga de insecto", ou é referido também a um "insecto que é uma praga para uma planta agronómica", significa que é uma espécie de insectos conhecida como sendo uma importante praga de uma planta agronómica especial. Normalmente uma praga deverá ser considerada ser uma praga importante para uma planta ou plantação em especial se esta praga foi capaz de reduzir o rendimento e/ou vitalidade da planta ou plantação a um nivel abaixo do que a planta ou a plantação proporcionaria na ausência da praga.

Como aqui utilizado, os termos "planta agronómica" e "planta agronomicamente importante" significam a mesma coisa, e ambos referem-se a uma planta da qual uma parte ou toda é, ou foi, colhida ou cultivada numa escala comercial, ou serve como fonte importante de recurso de alimento, comida, fibra, madeira serrada ou outros compostos quimicos. Os exemplos destas plantas agronómicas compreendem sem limitação, milho, cereais, que compreendem o trigo, a cevada, o centeio, e o arroz, os vegetais, os trevos, os legumes, que compreendem os feijões, as ervilhas, e a alfafa, cana-de-açúcar, beterraba sacarina, tabaco, algodão, colza (canola), girassol, açafroa, e sorgo. Outras plantas agronómicas serão descritas a seguir. PE1503624 - 20 -

Quando o assunto do método é descrito aqui como " aumento do rendimento" de uma planta agronómica, o que significa é que o rendimento de um produto da planta é aumentado por uma quantidade mensurável relativamente ao mesmo produto da planta produzido nas mesmas condições, mas sem a aplicação do método sujeito. É preferível que o rendimento seja aumentado pelo menos cerca de 0,5%, mais preferido que o aumento seja de cerca de 1%, mesmo mais preferido é cerca de 2%, e ainda mais preferido é cerca de 4% ou mais. O rendimento pode ser expresso em termos de uma quantidade em peso ou volume de um produto da planta em determinada base. A base pode ser expressa em termos de tempo, área de crescimento, peso de plantas produzido, quantidade de matérias-primas utilizadas, ou outras semelhantes. Como um exemplo, se as sementes de soja não tratadas renderem 35 bu/ac, e se as sementes de soja que receberam o tratamento submetido renderam 38 bu/ac nas mesmas condições de crescimento, então pode afirmar-se que o rendimento das sementes de soja foi aumentado de (38— 35)/35 x 100 = 85%. Este aumento no rendimento deverá ser considerado estar na definição de "aumento do rendimento" da soja como estes termos são aqui utilizados.

Do mesmo modo, se um componente desejado em especial de uma planta agronómica é aumentado de uma quantidade mensurável relativamente ao rendimento do mesmo componente da planta produzido nas mesmas condições, mas sem a aplicação do método sujeito, então o rendimento da planta agronómica aumentou. Como um exemplo, se as sementes PE 1503624 - 21 - de soja (que pesam 60 lb/bu) não tratadas renderem 35 bu/ac, de grãos que contêm 20% de óleo em peso e se as sementes de soja que receberam o tratamento sujeito renderam 35 bu/ac de grãos que contêm 22% de óleo em peso nas mesmas condições de tratamento, então pode afirmar-se que o rendimento das sementes de soja aumentou de (0,22 x 60 x 35) - (0,2 x 60 x 35)/(0, 2 x 60 x 35) = 10%. Este aumento no rendimento de óleo deverá ser considerado estar na definição de "aumento do rendimento" de uma plantação agronómica como estes termos são aqui utilizados.

Quando o método sujeito está descrito aqui como "aumento de vitalidade" de planta agronómica, o que significa é que a proporção de vitalidade, ou as plantas jovens (o número de plantas por unidade de área), ou o peso da planta, ou cúpula da planta, ou aparência visual, ou a avaliação das raízes, ou qualquer combinação destes factores, é aumentada ou melhorada de uma quantidade mensurável ou notável relativamente ao mesmo factor da planta produzido nas mesmas condições, mas sem a aplicação do método sujeito. É preferido que este(s) factor(s) seja(m) aumentado(s) ou melhorado(s) de uma quantidade significativa.

Quando é referido que o presente método é capaz de "aumentar o rendimento e/ou vitalidade" de uma planta agronómica, significa que o método resulta num aumento quer no rendimento, como acima descrito, quer na vitalidade da - 22 - PE1503624 planta, como acima descrito, ou ambos o rendimento e a vitalidade da planta.

Como aqui referido, o termo "local" significa o lugar onde se plantou a semente, e quando se plantou num campo, jardim, ou numa sementeira, que compreende a área geográfica à volta do campo, jardim, ou sementeira em que se esperaria ter o mesmo grau de infestação por praga de insecto como no lugar onde se plantou a semente. Como exemplo, seria de esperar normalmente que os campos adjacentes e os campos localizados relativamente próximo do lugar onde se plantou a semente, tivessem o mesmo grau de infestação da praga de insecto. Em alguns casos seria de esperar ter o mesmo grau de infestação da praga de insecto toda uma região de crescimento, tal como um concelho, ou vários concelhos, ou uma plantação referente a um distrito, ou mesmo um estado, ou uma grande região. Verifica-se que o delinear destas regiões, e os métodos para a determinação da sua extensão, são de conhecimento comum na aptidão de um técnico vulgar em matéria de controlo de praga agrícola.

Os termos "grau de infestação", tal como aqui utilizado, significa a capacidade para prejudicar a planta pela entidade infestante expressa numa base determinada. A base pode ser por unidade de área, por unidade de tempo, por planta, ou outra semelhante. No caso presente, um grau de infestação pode incluir a infestação zero. Os parâmetros comuns para o grau de infestação de insectos incluem, por exemplo, a concentração dos insectos em termos de número PE 1503624 - 23 - por unidade de área, e o número de insectos encontrados, apanhados, ou contados de outro modo, por unidade de tempo num local especifico.

Quando é referido que um insecto é um "contra o qual um composto neonicotinóide tem uma actividade insecticida", significa que um insecticida neonicotinóide, tal como o imidacloprid, tiametoxam, ou clotianidin, por exemplo, tem um efeito tóxico contra o insecto. Este efeito tóxico pode incluir directa ou indirectamente acções tais como a de induzir a morte de um insecto a partir de sementes, raízes, rebentos, e/ou folhagem de plantas, inibindo a alimentação do insecto ou dos seus estádios larvares em desenvolvimento, ou a postura dos seus ovos, nas sementes, raízes, rebentos, e/ou folhagem de plantas, e inibindo ou impedindo a reprodução do insecto.

Numa forma de realização do método sujeito o rendimento e/ou vitalidade de uma planta agronómica que cresceu a partir de uma semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas pode ser aumentado determinando se a semente é para ser plantada num local que tem um grau de infestação por praga de insecto que indicaria tratamento com um insecticida; e, se este tratamento não for indicado, realizar uma acção que é seleccionada do grupo que consiste em: (i) tratamento da semente que compreende uma sequência - 24 - PE 1503624 de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas com um composto neonicotinóide, e plantando num local uma semente que foi tratada com um composto neonicotinóide.

Numa forma de realização alternativa, o método pode ser realizado por selecção de um local em que a semente é para ser plantada onde o grau de infestação por praga de insecto é inferior ao do indicado para tratamento com um insecticida; e por tratamento da semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas com um composto neonicotinóide, ou plantando num local uma semente que foi tratada com um composto neonicotinóide.

Surpreendentemente, o presente método requer que se faça precisamente o que o presente estado de conhecimento na prática de pesticidas ensinaria não se fazer - tratar a semente com um composto neonicotinóide até agora conhecido como um insecticida - quando a utilização de um insecticida não é indicada. A determinação de se o grau de infestação pelo insecto que é uma praga para a planta agronómica indica o tratamento com um insecticida que pode ser feito por PE1503624 - 25 - qualquer um dos diversos modos e é uma determinação que é bem conhecida para quem é especialista corrente na técnica de controlo de pragas. Como exemplo, um método para fazer esta determinação é comparar o rendimento ou a vitalidade da planta agronómica que cresceu num local sem tratamento com insecticida (por exemplo, como um controlo não tratado) com o rendimento ou vitalidade da planta que cresceu no mesmo local com tratamento corrente do solo com insecticida. Se o tratamento do solo com insecticida não resulta numa melhoria do rendimento ou vitalidade da planta, isto seria considerado ser uma determinação de que o tratamento com um insecticida não foi o indicado. Na realização desta determinação, é preferido que a aplicação do insecticida ao solo seja um insecticida neonicotinóide.

Um outro método para a determinação de que o tratamento com um insecticida não está indicado é rever os dados históricos de um local em particular, e, se as sementes da planta agronómica não foram tratadas historicamente com um insecticida nesse local - mesmo quando este tratamento da semente foi aprovado para utilização e foi disponibilizado no mercado - podendo então isto determinar que não foi indicado esse tratamento.

Um exemplo de um método para a determinação de que o tratamento com um insecticida não é o indicado por revisão dos dados históricos de um local em particular é exemplificado por citação dos dados pertinentes que mostram os aspectos actuais do tratamento insecticida para uma PE 1503624 - 26 - plantação seleccionada. Nos Estados Unidos, por exemplo, foram definidas algumas plantações referentes aos distritos (CRDs), que delimitaram áreas geográficas nas quais as condições de crescimento são as mesmas ou similares. Os dados históricos compilados para cada um destes CRDs referem-se ao tipo e à medição em acres de culturas plantadas, bem como à utilização do insecticida. As companhias comerciais que servem o sector agrícola, tal como Doane Market Research, Doane Agricultural Services, Inc., St. Louis, MO, proporcionam esta informação. Por meio de exemplo, os dados que ilustram a medição em acres plantados, a área em acres tratada com insecticida, a área em acres tratada com insecticida aplicado ao solo, a área em acres que não é tratada com insecticida, podem ser fornecidos para as plantações como milho, algodão, e soja. A inspecção desta informação por um técnico especialista rapidamente deverá permitir a determinação de se o tratamento da plantação pertinente foi o indicado para um local especial. Em particular, o tratamento não será indicado para um CRD, ou outra região referida, em que não figura o tratamento insecticida. De facto, sem o conhecimento de que o tratamento proporcionará benefícios de rendimento e/ou vitalidade de outro modo para além de como um pesticida, não será intuitiva a eleição para utilizar um insecticida num local onde não é referida a utilização de insecticida.

Por que a informação sobre a infestação e a utilização do insecticida está geralmente disponível para - 27 - PE 1503624 as empresas de sementes, distribuidores e vendedores de sementes, e agricultores, deve ser assumido que esta informação é bem conhecida pelo público apropriado. Assim, o tratamento da semente não seria indicado para qualquer local onde o tratamento não é praticado. Tal como aqui utilizado, os termos "tratamento não é praticado", como estes modificam a região onde as culturas são plantadas, significa que para menos de 1% do total da área em acres plantada para uma cultura foi referida como sendo tratada. Um nivel de determinação preferido onde não é praticado o tratamento é o de 0,5%, ou menos, do total da área em acres para uma cultura é tratada, mesmo mais preferida que abaixo de 0,1% do total da área em acres plantada para uma cultura é tratada, e mesmo ainda mais preferida que nada do total da área plantada para uma cultura é tratada.

Podem ser proporcionados mapas e tabelas que demonstram os locais onde não é praticado o tratamento insecticida. Crê-se, por isso, que o tratamento de semente do milho com um composto neonicotinóide que tem propriedades insecticidas não seria indicado para estes locais. Dados semelhantes podem ser exibidos para o algodão e soja, entre outras culturas, e estes dados podem servir, igualmente, como a base de indicação de que o tratamento de semente destas culturas com um composto neonicotinóide que tem propriedades insecticidas não seria indicado.

Por via de exemplo, nos E.U., os dados estão disponíveis e mostram a área total em acres em cada CRD que PE1503624 - 28 - tem plantada uma determinada cultura e quanto, e quais, os acres que recebem tratamento insecticida. Para o milho nos E.U., por exemplo, a Tabela 1 ilustra que dos cerca de 76 milhões de acres que foram plantados com milho, apenas 21 milhões de acres, ou menos do que 30% de área total em acres, recebeu um tratamento insecticida. Isto significa que mais de 70% de área em acres de plantação de milho não recebeu tratamento insecticida. A Figura 1 ilustra a informação sob a forma de um gráfico. (Fonte de Fig.l: Doane Agro Trak Study - Doane Marketing Research, Inc., St Louis, Missouri) . Devido aos insecticidas aprovados para o milho, e as sementes de milho tratadas com insecticidas, foi aprovado para utilização e ficaram facilmente disponíveis no mercado. Crê-se que estes insecticidas e as sementes tratadas com insecticidas terão sido utilizados em locais onde a sua utilização teria sido justificada do ponto de vista económico. Por isso, crê-se que a não utilização num local especial, deverá indicar que o grau de infestação por insecto nesse local é inferior ao do que indica tratamento insecticida. - 29 - PE1503624

Tabela 1: Area plantada com milho que é tratada e não tratada com insecticida por plantações relativas ao distrito dos E.U. em 2001. Número do CRD Plantado Tratado Base Acres Solo Tratado Base Acres Folhage m Tratada Base Acres Não Tratado Base Acres 01010 36 638 36 638 01020 46 741 46 741 01030 17 041 17 041 01040 30 183 2 040 2 040 0 28 143 01050 30 700 30 700 01060 38 696 38 696 04020 5 165 5 165 04050 8 983 8 983 04090 45 852 34 434 0 34 434 11 418 05030 120 971 40 443 40 443 0 80 528 05040 46 341 7 583 0 7 583 38 758 05050 1 354 1 354 05070 3 009 3 009 05090 8 325 1 204 0 1 204 7 121 06050 153 489 78 097 16 801 61 296 75 392 06051 346 903 293 405 212 328 81 077 53 498 06060 8 231 8 231 06080 11 381 11 381 0 11 381 0 08020 287 677 173 554 172 422 2 788 114 123 - 30 - PE 1503624 08060 858 921 305 532 186 717 209 179 553 389 08070 26 419 6 860 3 299 6 860 19 559 08090 26 990 12 296 11 086 1 660 14 694 09010 33 000 1 062 1 062 0 31 938 10020 13 600 10 880 10 880 0 2 720 10050 139 681 120 364 120 364 0 19 317 10080 16 719 2 253 2 253 0 14 466 12010 32 103 2 122 2 122 0 29 981 12030 23 846 13 291 13 291 0 10 555 12050 22 052 21 016 21 016 0 1 036 13010 23 207 16 258 16 258 0 6 949 13020 405 405 13030 244 244 244 0 0 13040 1 143 259 259 0 884 13050 11 472 2 126 2 126 0 9 346 13060 45 531 1 099 1 099 0 44 432 13070 116 002 21 994 21 212 782 94 008 13080 50 999 2 46 9 2 469 0 48 530 13090 31 000 2 094 2 094 0 28 906 16070 67 128 2 186 2 186 0 6 4 942 16080 54 926 5 155 4 791 364 49 771 16090 52 946 52 94 6 17010 1 710 990 785 864 723 053 62 811 925 126 17020 1 046 005 298 635 298 635 0 747 370 17030 1 025 010 413 595 402 051 11 545 611 415 17040 1 482 998 576 869 576 869 0 906 129 17050 1 526 002 1 194 112 1 194 112 0 331 890 17060 1 461 016 578 679 551 175 80 172 882 337 31 PE 1503624 17070 1 493 004 607 656 586 697 21 239 885 348 17080 599 186 254 277 240 301 13 976 344 909 17090 555 803 113 776 107 804 5 972 442 027 18010 943 999 738 560 738 560 142 408 205 439 18020 791 003 305 422 305 422 0 485 581 18030 583 994 147 091 125 942 23 948 436 903 18040 714 001 385 66 9 385 669 0 328 332 18050 1 208 995 396 205 371 516 24 689 812 790 18060 443 044 112 696 112 696 0 330 348 18070 797 000 447 838 439 723 8 116 349 162 18080 74 274 21 105 21 105 0 53 169 18090 343 679 17 763 17 763 0 325 916 19010 1 805 002 298 391 298 391 0 1 506 611 19020 1 675 995 222 223 201 472 20 752 1 453 772 19030 1 439 993 452 420 452 100 320 987 573 19040 1 734 002 234 033 219 639 14 394 1 499 969 19050 1 6 76 001 86 720 62 098 24 622 1 589 281 19060 1 238 998 231 582 217 701 13 881 1 007 416 19070 817 029 103 263 103 263 0 713 766 19080 613 195 93 235 93 235 0 519 960 19090 799 771 231 685 231 685 0 568 086 20010 520 286 205 947 52 107 175 889 314 339 20020 329 087 91 171 91 171 0 237 916 20030 922 629 567 295 52 476 514 819 355 334 20040 356 067 34 488 34 488 0 321 579 20050 100 346 100 346 20060 286 587 41 491 10 280 31 211 245 096 20070 408 997 75 816 75 816 0 333 181 - 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40 - PE 1503624 46060 877 994 86 155 86 155 0 791 839 46070 43 786 43 786 46080 188 339 188 339 46090 915 998 37 148 37 148 0 878 850 47010 209 194 24 142 20 135 4 007 185 052 47020 170 806 7 012 7 012 0 163 794 47030 74 000 22 152 22 152 0 51 848 47040 72 000 20 433 15 801 4 631 51 567 47050 60 000 7 399 7 399 0 52 601 47060 44 002 18 133 15 891 2 242 25 869 48011 4 69 812 207 087 17 895 194 491 262 725 48012 126 373 57 116 0 57 116 69 257 48021 1 957 1 957 48040 405 026 160 434 160 434 0 244 592 48051 20 945 14 301 14 301 0 6 644 48052 148 432 148 432 148 432 0 0 48070 11 431 7 647 7 647 0 3 784 48081 223 875 198 273 197 776 497 25 602 48082 3 731 281 281 0 3 450 48090 136 539 115 662 115 662 0 20 877 48096 18 226 6 182 6 182 0 12 044 48097 33 670 3 288 0 3 288 30 382 49010 22 056 8 347 6 997 1 350 13 709 49050 31 284 9 148 9 148 0 22 136 49060 6 661 6 661 50010 90 002 6 739 5 638 1 201 83 263 51020 123 132 41 110 41 110 0 82 022 51040 22 210 11 677 11 677 0 10 533 41 PE 1503624 51050 31 930 18 875 18 875 0 13 055 51060 158 936 30 416 22 726 7 690 128 520 51070 24 789 8 953 8 953 0 15 836 51080 13 790 4 325 4 325 0 9 465 51090 55 213 5 992 5 992 0 49 221 53010 50 293 50 293 53020 8 801 8 801 53050 35 326 416 0 416 34 910 53090 20 581 20 581 54020 8 181 862 862 0 7 319 54040 21 439 17 962 17 962 0 3 477 54060 25 379 12 507 12 507 3 250 12 872 55010 313 822 39 424 38 795 629 274 398 55020 216 400 216 400 55030 129 776 129 776 55040 534 002 131 838 115 623 16 214 402 164 55050 271 999 28 785 28 785 0 243 214 55060 513 001 65 281 65 281 0 447 720 55070 496 001 159 547 149 901 9 646 336 454 55080 700 001 224 248 224 248 0 475 753 55090 225 002 23 648 23 648 0 201 354 56010 36 158 5 348 5 348 0 30 810 56050 48 843 3 679 3 679 1 982 45 164 Total 76 009 055 21 168 19 184 522 2 387 54 840 361 694 397 - 42 - PE1503624

Nota:

Fonte: 2001 Doane Agro-Trak Study - Doane Marketing Research, Inc., St. Louis, Missouri. A informação também está disponível para indicar as plantações referentes ao distrito em que não foi referida a utilização de insecticida no milho em qualquer local das plantações referentes ao distrito. Para o ano de 2001, por exemplo, a Tabela 2 mostra que plantações referentes ao distrito com um total de mais de 3 milhões de acres não referiram a utilização de insecticidas no milho.

Tabela 2: Área plantada de milho que é cultivado sem aplicação de insecticida em 2001 por plantações relativas ao distrito nos E.U. Número de CRD Acres Plantados 01010 36 638 01020 46 741 01030 17 041 01050 30 700 01060 38 696 Número de CRD Acres Plantados 04020 5 165 04050 8 983 05050 1 354 05070 3 009 06060 8 231 43 PE 1503624 Número de Acres CRD Plantados 13020 405 16090 52 94 6 20050 100 346 22010 1 816 22040 121 344 22060 13 984 22070 1 151 23010 321 23030 267 26010 39 610 26020 49 386 26030 36 792 27020 79 289 27030 9 331 28020 4 722 28040 118 945 28070 86 611 28090 40 096 29080 8 898 30030 23 263 30080 13 709 30090 23 028 32010 3 000 33010 15 000 34080 22 284 - 44 - PE 1503624 37040 37 000 38010 2 240 38020 22 893 38030 71 865 38040 5 208 38050 83 792 38070 44 260 38080 76 740 40020 5 437 40030 14 992 40040 301 40050 18 160 40060 2 988 40070 19 344 40080 47 264 40090 8 237 44010 2 000 45010 10 229 45040 8 617 46020 589 000 46040 5 785 46050 561 995 46070 43 786 46080 188 339 48021 1 957 49060 6 661 53010 50 293 53020 8 801 - 45 - PE 1503624 53090 20 581 55020 216 400 55030 129 776 Total 3 368 043

Nota:

Fonte: 2001 Doane AgroTrak Study — Doane Marketing

Research, Inc., St. Louis, Missouri.

Em alguns CRD's pouco insecticida é utilizado no milho. Crê-se que isto indica que enquanto o insecticida é usado numa, ou em poucas, localizações dentro de uma plantação relativa ao distrito, outras localizações dentro de uma plantação relativa ao distrito não têm a utilização de nenhum insecticida. Por exemplo, pode ser que enquanto os insecticidas são utilizados no milho num concelho dentro de uma plantação relativa ao distrito, outros concelhos dentro da mesma plantação relativa ao distrito não teriam qualquer utilização de insecticida no milho. Desta forma, crê-se que o nível de infestação de insectos nesses concelhos está abaixo dos concelhos onde a utilização de insecticida é indicada. A informação sobre a utilização de insecticida para plantações que não o milho também está disponível. O Quadro 3, por exemplo, mostra a utilização de insecticida na área de plantação de algodão nos E. U. em 2001 por plantações relativas ao distrito. Pode-se notar que mais de metade dos 16,1 milhões de acres plantados para algodão não receberam tratamento de insecticida. Assim, presume-se - 46 - PE 1503624 que estes locais tenham níveis de infestação de insectos abaixo das que para as quais o tratamento com insecticida teria sido indicado.

Tabela 3: Área plantada de algodão que é tratada e a não tratada com insecticida nos E.U. em 2001 por plantações referentes ao distrito. Número de CRD Plantado Tratado Base Acres Solo Tratado Base Acres Folhagem Tratada Base Acres Não Tratado Base Acres 01010 224 001 134 050 118 985 25 580 89 951 01020 38 403 31 735 7 987 23 748 6 668 01030 31 597 31 597 01040 62 001 42 975 10 565 37 231 19 026 01050 104 006 84 789 73 099 56 933 19 217 01060 149 998 62 011 26 082 42 084 87 987 04050 194 001 131 763 115 677 34 987 62 238 04070 42 675 19 287 7 826 11 461 23 388 04090 49 326 20 057 20 057 1 690 29 269 05030 559 973 459 015 359 296 254 736 100 958 05050 16 277 16 277 05060 274 725 233 754 215 278 178 615 40 971 05070 16 747 16 301 16 301 7 377 446 05090 302 249 257 163 222 557 148 460 45 086 06040 15 187 9 051 9 051 0 6 136 06050 9 621 9 621 6 591 9 621 0 06051 781 186 686 973 583 146 338 150 94 213 - 47 - PE 1503624 06080 19 002 14 457 14 457 11 467 4 545 12010 119 913 57 852 36 184 34 611 62 061 12030 5 088 5 088 5 088 5 088 0 13030 2 692 2 692 2 692 2 692 0 13040 11 428 2 244 2 244 0 9 184 13050 150 878 63 620 55 109 27 358 87 258 13060 197 001 103 66 9 82 338 35 975 93 332 13070 448 002 223 152 166 067 121 489 224 850 13080 576 007 326 073 251 726 174 616 249 934 13090 114 001 83 146 6 4 927 66 139 30 855 20060 32 193 22 771 19 041 7 459 9 422 20090 11 807 11 807 22010 72 173 70 476 69 028 59 652 1 697 22020 9 827 8 828 8 828 2 876 999 22030 610 005 495 803 348 946 276 107 114 202 22050 217 772 207 064 203 484 28 891 10 708 22060 227 53 474 -53 247 28010 434 001 400 361 66 967 434 001 28020 138 726 88 401 31 703 138 726 28030 4 6 270 24 404 18 768 4 6 270 28040 745 992 681 705 280 740 745 992 28050 201 999 126 604 110 239 201 999 28060 97 411 41 721 46 020 97 411 28070 29 569 20 116 20 116 3 545 9 453 28090 6 022 5 751 5 751 0 271 29040 7 074 7 074 0 7 074 0 29070 6 082 1 839 0 1 839 4 243 29090 386 848 212 146 120 555 99 647 174 702 - 48 - PE 1503624 35030 22 987 1 379 276 1 379 21 608 35070 15 013 1 021 1 021 1 021 13 992 35090 44 002 18 691 17 706 1 773 25 311 37050 9 129 9 129 3 485 8 839 0 37060 39 869 19 251 0 19 251 20 618 37070 449 006 342 415 310 303 150 380 106 591 37080 316 004 172 135 165 404 98 612 143 869 37090 246 001 128 661 102 906 87 010 117 340 40010 984 984 40020 52 039 1 326 1 326 0 50 713 40030 192 993 95 247 93 644 10 215 97 746 40040 2 531 1 205 1 205 0 1 326 40060 1 446 1 446 45010 1 262 1 262 45020 769 769 0 769 0 45030 142 003 100 010 94 434 30 444 41 993 45040 13 463 9 076 9 076 5 169 4 387 45050 100 998 73 675 69 726 18 080 27 323 45080 41 506 37 499 37 499 22 273 4 007 47010 207 001 83 399 77 836 24 830 123 602 47020 373 391 284 890 248 742 117 732 88 501 47030 13 284 13 284 47040 10 325 10 325 47060 6 003 6 003 6 003 6 003 0 48011 889 009 180 233 83 983 111 518 708 776 48012 2 872 020 434 271 154 605 326 335 2 437 749 48021 398 000 37 833 18 984 18 848 360 167 48022 678 000 34 887 34 887 0 643 113 - 49 - PE 1503624 48030 3 228 3 228 48040 175 713 160 882 159 683 68 330 14 831 48052 14 058 14 058 14 058 8 461 0 48060 31 084 31 084 48070 266 914 18 415 18 415 11 112 248 499 48081 42 452 42 452 26 957 40 651 0 48082 297 998 290 816 241 938 48 878 7 182 48090 293 549 270 302 257 790 90 542 23 247 48096 21 951 21 951 21 951 16 978 0 48097 233 052 186 088 186 088 21 027 46 964 51060 11 167 6 890 6 890 2 284 4 277 51090 93 835 62 536 54 292 31 510 31 299 Total 16 194 022 7 167 490 7 026 416 4 042 561 9 026 532

Nota:

Fonte: 2001 Doane AgroTrak Study—Doane Marketing Research, Inc., St. Louis, Missouri.

Um outro método de determinar se o nivel de infestação por insecto que é uma praga para uma planta agronómica indica tratamento com um insecticida envolve a comparação com um nível de infestação pelo insecto para o qual estaria indicado o tratamento com um insecticida. Como via de exemplo, isto pode ser realizado por determinação do nível de infestação pelo insecto no local, e a determinação de um nível de infestação pelo insecto para o qual estaria indicado o tratamento com um insecticida. Quando estes dois níveis de infestação foram determinados, estes foram PE 1503624 - 50 - comparados para ver qual é o mais elevado. Por outras palavras, para determinar se sim ou senão se trata a semente com um insecticida a fim de reduzir ou evitar o prejuízo previsto pelo insecto. Logo, se o nível de infestação do local pelo insecto é mais baixo do que o nível de infestação para o qual o tratamento está indicado, tratar a semente com um insecticida neonicotinóide.

No método presente, o passo de "determinação do nível de infestação do local pelo insecto" significa incluir a aquisição de conhecimento acerca do nível de infestação de qualquer modo e a partir de qualquer fonte, que compreende, sem limitação, ensaios directos, relatórios orais e escritos, discussões com pessoal relacionado com a agricultura, agentes do concelho, reportagens de rádio, boletins agrícolas, dados anedóticos derivados das discussões entre agricultores vizinhos ou outras pessoas conhecedoras do grau de infestação do local pelo insecto, tal como equipamento agrícola e fornecedores de materiais, produtores, vendedores, retalhantes, e consultores, bem como a partir de dados históricos, recomendações de fabricantes e fornecedores de pesticidas ou sementes, e outros semelhantes.

Nas formas de realização preferidas, o nível de infestação do local pelo insecto é determinado pela medida do nível de infestação do insecto contra insecticidas neonicotinóides que têm actividade insecticida, e que são pragas para as plantas agronómicas que se espera crescerem, PE 1503624 - 51 - onde a medida é realizada no local ou próximo onde se espera as plantas crescerem. Os exemplos de como estas medidas podem ser feitas compreendem a inspecção visual de plantas, colocação de engodos não específicos e armadilhas, e por colocação de espécies ou engodos de espécies não específicas e armadilhas. Estes ensaios e técnicas de medidas são bem conhecidas em matéria de gestão de pragas de insectos. O nível de infestação pelo insecto para o qual um tratamento com um insecticida estaria indicado pode ser determinado em qualquer base que é do interesse do profissional. Como exemplo, uma base comum é uma determinação económica - e.g. custo vs. Valor. Pode-se comparar o custo da aplicação do insecticida neonicotinóide com o valor esperado do rendimento adicional devido à redução do prejuízo pelo insecto. Se o custo é menor que o valor adicional esperado, então estaria indicado o tratamento com um insecticida. Por outro lado, se o custo é maior que o valor esperado do rendimento adicional, então não seria indicado o tratamento com um insecticida. É óbvio, que se nível de infestação do insecto é zero, ou próximo de zero, então não estará indicado o tratamento com um insecticida em qualquer caso.

Um exemplo de uma outra base para esta determinação é um objectivo padrão, tal como o nível de prejuízo causado pelo verme das raízes no milho (VRM). Um ensaio para o verme das raízes no milho pode ser realizado por - 52 - PE 1503624

Iowa Root Rating Method, que está descrito a seguir e é um ensaio que avalia o prejuízo numa escala de 1-6 (do prejuízo menor para o prejuízo pior). Se os dados históricos mostram um nível de prejuízo em VRM menor que cerca de 3, então não estará indicado o tratamento com um insecticida activo contra o VRM, enquanto que o prejuízo do VRM maior que cerca de 3 indica a necessidade de tratamento insecticida. Nas formas de realização preferidas, um nível do VRM abaixo de 2,6 indicaria que não foi necessário um insecticida para a protecção contra o verme das raízes no milho, mais preferido seria um nível do VRM abaixo de 2,0.

Depois de serem determinados o nível de infestação do insecto no local e o nível de infestação do insecto para o qual seria indicado um tratamento com um insecticida, os dois foram comparados. Numa forma de realização preferida da presente invenção, se o nível de infestação no local é abaixo do nível para o qual o tratamento com um insecticida seria indicado, a semente é tratada com um composto neonicotinóide.

Numa outra forma de realização, se o nível de infestação no local é abaixo do nível para o qual o tratamento com um insecticida estaria indicado, o método envolve que se plante no local uma semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona uma resistência herbicida, ou ambas, que foi tratada com um composto - 53 - PE1503624 neonicotinóide. O acto de plantar compreende plantar uma semente directamente no solo bem como o transplante de uma planta que cresceu a partir de uma semente. A plantação pode ser manual, com uma máquina comercial, ou não comercial, sem limitação. O "composto neonicotinóide" da presente invenção é qualquer composto neonicotinóide que proporciona as propriedades de proporcionar o rendimento e/ou maior vitalidade que são as vantagens da presente invenção quando o composto é utilizado como um tratamento de semente de acordo com o método aqui descrito. Nas formas de realização preferidas, o composto neonicotinóide é o que tem propriedades insecticidas.

Os compostos neonicotinóides que são úteis na presente invenção compreendem os mencionados no The Pesticide Manual, 12 ed., designados por acetamiprid, imidacloprid, tiametoxam, clotianidin (TI—435), dinotefuran e nitenpiram. Os compostos neonicotinóides úteis podem compreender os insecticidas neonicotinóides do tipo de insecticidas nitroguanidina, insecticidas nitrometileno, insecticidas piridilmetilamina, como mencionados no Compendium of insecticide common names, em http://www.hclrss.demon.co.uk/class_insecticides,html (02/19/2002). Os compostos neonicotinóides úteis podem incluir os compostos de nitroguanidina descritos em h1.1p: //www.ηigu.de/pdf /-chemistrv21.pdf (07/08/02). Estão também incluídos os compostos neonicotinóides tais como a - 54 - PE1503624 flonicamid, nitiazina e tiaclopride.

Quando o composto neonicotinóide é um insecticida nicotinóide de tipo da nitroguanidina, os compostos que são úteis na presente invenção compreendem um composto que tem a fórmula:

N* NOs 1 R2 em que: R1 é hidrogénio, ou Ci-C4alquilo; R2 é hidrogénio, ou Ci-C4alquilo, Ci-C4alcenilo, Ci-C4alcinilo, hidroxilo, amino, arilo, tio, alquilarilo, arialquilo, ou C4-C6 heterocíclico; R3 é hidrogénio, ou Ci-C4alquilo, Ci-C4alcenilo, Ci-C4alcinilo, hidroxilo, amino, arilo, tio, alquilarilo, arialquilo, ou um heterocíclico de 4-6-membros; e R2 e R3 podem ligar-se para formarem um heterocíclico que pode opcionalmente ser substituído ou não substituído; e R4 é hidrogénio, ou Ci-C4alquilo, Ci-C4alcenilo, Ci-C4alcinilo, hidroxilo, amino, arilo, tio, alquilarilo, arialquilo, ou C4-C6 heterocíclico, halogenotiazoilalquilo, ou furilalquilo.

Quando o composto neonicotinóide é um insecticida - 55 - PE1503624 nicotinóide de tipo da nitroguanidina, os compostos que são preferidos para utilizar na presente invenção compreendem um composto que tem a fórmula:

em que: R1 é hidrogénio, ou metilo; R2 é hidrogénio, ou metilo, R3 é hidrogénio, ou metilo, ou de uma forma que se pode ligar com R2 para formar um anel de oxadiazina ou um anel 2,3-diazol; e R4, se presente, é clorotiazoimetilo, ou furilmetilo.

Verifica-se que o método presente de aumento do rendimento e/ou vitalidade pode ser utilizado com sementes de plantas não transgénicas, ou com sementes de plantas que têm pelo menos um evento transgénico. A sequência de polinucleótido estranho, juntamente com outros genes necessários para a expressão da proteína activa em níveis úteis, pode ser referido aqui como um "evento transgénico". Um evento transgénico numa semente, ou planta, por isso, compreende a capacidade para - 56 - ΡΕ1503624 expressar uma proteína. Quando é referido que um "evento transgénico tem actividade contra a praga", deve ser entendido que é uma proteína que está codificada pelo gene que realmente tem esta actividade quando a proteína está expressa e posta em contacto com a praga.

Os exemplos de eventos transgénicos que são úteis na presente invenção, as sementes, e as plantas que compreendem estes eventos, bem como os métodos para a sua utilização podem ser encontrados nas U.S. Patent Nos. 6 329 504, 6 326 351, 6 326 169, 6 316 407, 6 313 378, 6 288 312; 6 284 949; 6 281 016; 6 255 560, 6 248 536, 6 242 241; 6 221 649; 6 218 145, 6 215 048, 6 211 430; 6 197 747; 6 177 615; 6 174 724, 6 156 573; 6 153 814; 6 140 075; 6 121 436, 6 114 610; 6 110 464; 6 093 695; 6 063 597; 6 060 594; 6 023 013; 6 018 100; 5 962 264; 5 959 091; 5 942 658; 5 880 275; 5 877 012; 5 869 720; 5 859 347; 5 763 241; 5 759 538; 5 679 343; 5 616 343; 5 616 319; 5 424 412; 5 378 619; 5 349 124; 5 250 515; e 5 229 112, entre outras, e no WO 01/49834, WO 98/13498, WO 00/66742, e WO 99/1248. O WO 99/1248 e as U.S.Patent Nos. 6 326 351, 6 281 016, 6 063 597, 6 060 594 e 6 023 013 descrevem métodos para os genes de δ-endotoxinas de B. thuringiensis geneticamente manipulados e portanto as δ-endotoxinas modificada podem ser expressas. As δ-endotoxinas modificadas diferem das proteínas do tipo selvagem por terem substituições em aminoácidos específicos, adições ou omissões quando comparadas com as proteínas produzidas por - 57 - PE1503624 um organismo do tipo selvagem. Estas δ-endotoxinas modificadas estão identificadas aqui pela utilização do asterisco (*), ou por referência a uma proteína específica pelo seu número de identificação.

Os genes preferidos das toxinas de insectos geneticamente modificadas Cry* estão descritos na U.S. Patent No. 6 326 169, e compreendem as proteínas codificadas por sequências de polinucleótidos que estão contidas nas estirpes de B. thuringiensis depositadas como NRRL B-21579, NRRL B-21580, NRRL B-21581, NRRL B-21635,e NRRL B-21636.

Os tipos preferidos de toxinas de insectos Cry* geneticamente modificadas estão descritas na U.S. Patent No. 6 281 016, e compreendem as produzidas por estirpes de B. thuringiensis EG 11060, EG 11062, EG 11063, EG 11065, EG 11067, EG 11071, EG 11073, EG 11074, EG 11087, EG 11088, EG 11090, EG 11091, EG 11092, EG 11735, EG 11751 e EG 11768.

Os tipos preferidos de toxinas de insectos Cry* geneticamente modificadas estão descritas na U.S. Patent No. 6 023 013, e compreendem as proteínas codificadas por sequências de polinucleótidos que estão contidas nas estirpes de B. thuringiensis depositadas como NRRL B- 21774, NRRL B-21745, NRRL B-21746, NRRL B-21747, NRRL B- 21748, NRRL B-21749, NRRL B-21750, NRRL B-21751, NRRL B- 21752, NRRL B-21753, NRRL B-21754, NRRL B-21755, NRRL B- 21756, NRRL B-21757, NRRL B-21758, NRRL B-21759, NRRL B- 21760, NRRL B-21761, NRRL B-21762, NRRL B-21763, NRRL B- PE1503624 - 58 - 21764, NRRL B-21765, NRRL B-21766, NRRL B-21767, NRRL B-21768, NRRL B-21769, NRRL B-21770, NRRL B-21771, NRRL B-21772, NRRL B-21773, NRRL B-21774, NRRL B-21775, NRRL B-21776, NRRL B-21777, NRRL B-21778 e NRRL B-21779.

Os tipos preferidos de toxinas de insectos Cry* geneticamente modificadas estão descritas na Patent No. 6 063 597, e compreendem, sem limitação:

Cry3Bb.11230, Cry3Bb.11231, Cry3Bb.11232, Cry3Bb.11233, Cry3Bb.11234, Cry3Bb.11235, Cry3Bb.11236, Cry3Bb.11237, Cry3Bb.11238, Cry3Bb.11239, Cry3Bb.11241, Cry3Bb.11242, Cry3Bb.11098,

Verificou-se que algumas das δ-endotoxinas modificadas que foram descritas no WO 99/31248 e na U. S.Patent No. 6 063 597 aumentaram a actividade contra os insectos coleopteranos, e em especial contra a Diabrotica spp. que compreende o verme das raízes. Tal como aqui utilizado, os termos "actividade aumentada" referem-se a actividade insecticida aumentada de uma toxina modificada quando comparada com a actividade da mesma toxina sem as modificações do aminoácido, quando ambas são ensaiadas nas mesmas condições. Em particular, verificou-se que as δ-endotóxinas Cry3* ficaram com a actividade aumentada contra o verme das raízes, e são por isso preferidas para utilizar na presente invenção quando a semente do milho está a ser tratada. Mais preferidas são as δ-endotoxinas Cry3B*, e ainda mais preferidas são as δ-endotoxinas Cry3Bb*. Mesmo os eventos transgénicos mais preferidos são os que compreendem a capacidade para expressar as δ-endotoxinas - 59 - PE 1503624 modificadas que estão enumeradas na Tabela 4 seguinte. Também são ilustradas na tabela estirpes de B. thuringiensis transgénicas que compreendem os genes para a expressão das respectivas endotoxinas novas, e as datas e número de acesso do seu depósito na Agricultural Research Service Culture Collection (NRRL) em 1815 N. University Street, Peoria, IL 61604.

Tabela 4: Estirpes de B. thuringiensis que expressam as proteínas tóxicas modificadas. ESTIRPES DATA DE DEPÓSITO PROTEÍNA NÚMERO DE ACESSO (NÚMERO NRRL) EG 11230 27/5/97 Cry3Bb.11230 B-21768 EG 11231 27/5/97 Cry3Bb.11231 B-21769 EG 11232 27/5/97 Cry3Bb.11232 B-21770 EG 11233 27/5/97 Cry3Bb.11233 B-21771 EG 11234 27/5/97 Cry3Bb.11234 B-21772 EG 11235 27/5/97 Cry3Bb.11235 B-21773 EG 11236 27/5/97 Cry3Bb.11236 B-21774 EG 11237 27/5/97 Cry3Bb.11237 B-21775 EG 11238 27/5/97 Cry3Bb.11238 B-21776 EG 11239 27/5/97 Cry3Bb.11239 B-21777 EG 11241 27/5/97 Cry3Bb.11241 B-21778 EG 11242 27/5/97 Cry3Bb.11242 B-21779 EG 11098 28/11/97 Cry3Bb.11098 B-21903 A presente invenção também compreende o - 60 - PE1503624 tratamento de sementes com mais de um evento transgénico. Estas combinações são referidas como sendo eventos transgénicos "sobrepostos". Estes eventos transgénicos sobrepostos podem ser eventos que estão directamente relacionados com a mesma praga alvo, ou podem ser dirigidas para pragas alvo diferentes. Num método preferido, uma semente com a capacidade para expressar uma proteína Cry3 tem também a capacidade para expressar pelo menos uma outra proteína insecticida que é diferente de uma proteína Cry3. A presente invenção também compreende o tratamento de sementes com um ou mais eventos transgénicos que codifica para a produção de proteínas insecticidas binárias, mas não limitadas a, CryET33 e CryET34, CryET80 e CryET76, tlClOO e tlClOl, e PS149B1. A presente invenção também compreende o tratamento de sementes com eventos transgénicos Herculex® I (disponível a partir de Dow Agrosciences, Mycogen Seeeds, e Pioneer Hi-Bred International).

Numa forma de realização da presente invenção em que o método sujeito compreende o tratamento da semente e/ou folhagem de uma planta com um herbicida ou com um pesticida diferente de um neonicotinóide, é preferido que a planta seja uma planta transgénica com um evento transgénico que confere resistência ao herbicida especial ou outro pesticida que é utilizado. PE1503624 - 61 -

Quando um herbicida tal como o glifosato está incluido no tratamento, é preferido que a planta transgénica ou o material de propagação da planta seja com um evento transgénico que proporciona resistência ao glifosato. Alguns exemplos destas plantas transgénicas com eventos transgénicos que conferem resistência ao glifosato estão descritos no U.S. Patent Nos. 6 248 876, 6 225 114, 6 107 549, 5 866 775, 5 804 425, 5 776 760, 5 633 435, 5 627 061, 5 463 175, 5 312 910, 5 310 667, 5 188 642, 5 145 783, 4 971 908 e 4 940 835. Quando uma planta é uma planta de soja transgénica, são preferidas estas plantas com as caracteristicas de soja transgénicas de "Roundup-Ready" (disponível a partir de Monsanto Company, St. Louis, MO). A presente invenção também é útil para a aplicação às sementes de plantas que têm sido melhoradas por um programa de uma reprodução selectiva baseada nas informações locais quantitativas (ILQ). Informação adicional acerca da utilização destes programa de uma reprodução pode ser encontrado na U.S. Patent No. 5 476 524, e em Edwards, M.D. et al., Genetics, 116:113-125 (1987) ; Edwards, M.D. et al., Theor. Appl. Genet., 83:165- 774 (1992); Paterson, A.H. et al., Nature, 335:721-726 (1988) ; e Lander, E.S. et al., Mapping Medelian Factors Underlying Quantitative Traits RFPL Linkage Maps, Genetics Society of America, pp. 185-199 (1989).

Numa forma de realização, o método presente é particularmente útil quando aplicado a uma plantação como PE1503624 - 62 - uma parte de um programa de reprodução convencional de aumento de rendimento. Isto é particularmente útil quando o programa de reprodução é para uma plantação transgénica. Como a cima mencionado, os eventos transgénicos são inicialmente transferidos para as espécies de plantas que são estáveis, vigorosas e têm boas referências como progenitoras nos ensaios de hibridação, mas geralmente não elas próprias híbridos de alto rendimento. As espécies transgénicas são depois hibridadas com outros progenitores em programas de reprodução convencionais, para ter híbridos de alto rendimento que também contêm o(s) evento(s) transgénico(s). Como acima mencionado, uma desvantagem que é um aspecto comum aos híbridos de alto rendimento no mercado - e particularmente aos híbridos transgénicos, é que estes não são tão vigorosos como os progenitores. Em alguns casos, por exemplo, as plantas de milho híbrido transgénico têm os sistemas radiculares significativamente menores que os das seus progenitores. Isto pode causar grande sensibilidade aos danos causados pelas pragas dos vermes das raízes, bem como para a implantação.

Numa forma de realização, o método presente é particularmente útil quando aplicado às sementes que são utilizadas num programa de reprodução. Em especial, o método pode ser aplicado a um programa de reprodução em que pelo menos um progenitor é uma planta transgénica. Também, o método presente é útil, tal como explicado adiante, como um tratamento para as sementes transgénicas de elevado rendimento que são o produto da experiência de reprodução. PE1503624 - 63 -

Num método de reprodução de uma planta híbrida a partir de duas plantas progenitoras, o método compreende a tratamento de sementes de um ou ambas das plantas progenitoras com um composto neonicotinóide antes de plantar as sementes em que a semente de um ou das duas plantas progenitoras contêm uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas, que poliniza a progenitora fêmea com o pólen da progenitora macho; e que colhe a semente produzida pela planta progenitora fêmea.

Numa forma de realização preferida, uma ou ambas das plantas contêm um gene estranho que codifica para a produção de uma proteína pesticida. É ainda preferido que a proteína pesticida compreenda uma toxina do insecto.

As plantas que são adequadas para a prática da presente invenção compreendem as gimnospérmicas e as angiospérmicas, que compreendem as dicotiledóneas e as monocotiledóneas. As plantas preferidas são as que são agronomicamente importantes. Os exemplos de plantas agronomicamente importantes compreendem, por exemplo, plantas que são comestíveis em parte ou no total pelo ser humano ou por um animal. As plantas comestíveis que podem ser úteis na presente invenção não estão particularmente limitadas e podem ser gimnospérmicas, angiospérmicas, que compreendem as dicotiledóneas e as monocotiledóneas. Estas PE1503624 - 64 - plantas compreendem os cereais (trigo, cevada, centeio, aveia, arroz, sorgo, e as culturas relacionadas, etc), beterraba, frutos semelhantes às peras, frutos com caroço, frutas macias (maçã, pêra, ameixa, pêssego, pêssego Japonês, ameixa seca, amêndoa, cereja, morango, framboesa, amora silvestre, etc.,), legumes (feijão encarnado, lentilha, ervilha, soja), plantas oleaginosas (colza, mostrada, papoila, azeitona, girassol, coco, planta de óleo de ricino, cacau, amendoim, etc.), curcubitáceas (abóbora, pepino, melão, etc.), citrinos (laranja, limão, toranja, tangerina, toranja de Watson (citrus natsidaidai), etc.), vegetais (alface, couve, couve aipo, rábano Chinês, cenoura, cebola, tomate, batata, pimenta verde, etc.), a canforeiras (abacate, canela, cânfora, etc.) milho, tabaco, nozes, café, cana-de-açúcar, chá, vinha, lúpulo e banana.

As plantas comestíveis que são especialmente úteis compreendem arroz, trigo, cevada, centeio, milho, batata, cenoura, batata-doce, beterraba sacarina, feijão, ervilha, chicória, alface, couve, couve-flor, brócolos, nabo, rabanete, espinafre, espargo, cebola, alho, beringela, pimento, aipo, canot, abóbora, variedade de abóbora, curgete, pepino, maçã, pêra, marmelo, melão, ameixa, cereja, pêssego, nectarina, alperce, morango, uva, framboesa, amora, ananás, abacate, papaia, manga, banana, soja, tomate, sorgo, e framboesas, banana e outras suas variedades comestíveis. A presente invenção também pode ser útil para - 65 - PE1503624 aumentar o rendimento e/ou vitalidade de plantas que produzem fibras que compreendem o algodão, o linho, o cânhamo, a juta, a rama, o sisal, as árvores que produzem madeira que compreendem as madeiras duras e madeiras macias, tais como pinheiro, carvalho, madeira vermelha, choupo, borracha, freixo, abeto, bétula, cónio, lariço, mogno, ébano, e outras semelhantes, bem como arbustos e árvores.

No método da presente invenção, o composto neonicotinóide é aplicado a uma semente. Embora, se verifique que o método presente pode ser aplicado a uma semente em qualquer estado fisiológico, é preferível que a semente esteja num estado suficientemente duradoiro para que não ocorra nenhum dano durante o processo de tratamento. Tipicamente, a semente seria uma semente que foi colhida no campo; removida da planta; e separada de qualquer espiga, talo, casca exterior, e polpa envolvente ou qualquer outro material da planta que não é semente. Preferencialmente a semente deverá ser também biologicamente estável para que o tratamento não cause qualquer dano biológico à semente. Numa forma de realização, por exemplo, o tratamento pode ser aplicado à semente de milho que foi colhida, limpa e seca para que o teor de humidade seja inferior a 15% em peso.

Numa forma de realização alternativa, a semente pode ser a que foi seca e depois escorvada com água e/ou noutra substância e depois novamente secada antes ou - 66 - PE1503624 durante o tratamento com o composto neonicotinóide. Com as limitações já descritas, verifica-se que o tratamento pode ser aplicado à semente em qualquer altura entre a colheita da semente e o semear da semente. Como aqui utilizado, o termo "semente não semeada" significa incluir a semente em qualquer periodo entre a colheita da semente e o semear da semente no solo para a germinação e crescimento da planta.

Nas formas de realização preferidas, o composto neonicotinóide é aplicado directamente à semente, em vez de ao solo no qual a semente é ou vai ser plantada. Noutras formas de realização, o composto neonicotinóide pode ser aplicado ao solo — por exemplo, por deposição nas bandas, bandas-T, em regos, ao mesmo tempo que a semente é semeada — bem como directamente à semente. Noutras formas de realização, o composto neonicotinóide é aplicado directamente à semente, tal como por aplicação do composto ao solo em que a semente é semeada. O composto neonicotinóide pode ser aplicado "puro", isto é, sem qualquer diluição ou componentes adicionais presentes. Contudo, o composto é tipicamente aplicado às sementes na forma de uma formulação. Esta formulação pode conter um ou mais componentes desejados que compreendem mas não limitado a diluentes líquidos, ligantes para servir de uma matriz para o composto neonicotinóide, enchimentos para proteger as sementes durante as condições de stress, e plastificantes para melhorar a flexibilidade, adesão e/ou o espalhar do revestimento. Adicionalmente para - 67 - PE1503624 as formulações oleosas que contêm pouco ou nenhum enchimento, pode ser desejável adicionar à formulação agentes secantes tais como carbonato de cálcio, caulino, bentonite em pó, perlite, terra de diatomáceas, ou qualquer outra substância adsorvente. A utilização destes componentes no tratamento das sementes é conhecida na matéria. Ver, e.g., U.S. Patent No 5 876 739. Os especialistas na matéria podem facilmente seleccionar os componentes desejados para utilizar na formulação do composto neonicotinóide que depende do tipo de semente e em especial do composto neonicotinóide seleccionado. Adicionalmente, formulações facilmente disponíveis no mercado de insecticidas conhecidos e outros pesticidas podem ser utilizados, como demonstrado nos exemplos adiante.

As sementes também podem ser tratadas com uma ou mais das substâncias seguintes: pesticidas para além dos compostos neonicotinóides que actuam apenas no solo; fungicidas, tais como o captano, tiram, metalaxil, mefenoxam (isómero resolvido de metalaxil), fludioxonil, oxadixil, azoxistrobin, ipconazole, e isómeros de cada uma destas substâncias, e outras semelhantes; herbicidas, que compreendem compostos seleccionados a partir de carbamatos, tiocarbamatos, acetamidas, triazinas, dinitroanilinas, éteres de glicerol, piridazinonas, uracilos, fenoxis, ureias, e ácidos benzóicos; protectores herbicidas tais como a benzoxazina, derivados do benzidril, N,N- dialil dicloroacetamida, diversos dihalogenoacilos, oxazolidinil e PE1503624 - 68 - compostos de tiazolidinilo, etanona, compostos de anidrido naftálico, e derivados de oxima; fertilizantes; e agentes de biocontrolo tais como os que ocorrem naturalmente ou de fungos ou bactéria recombinante a partir do género Rhizobium Bacillus, Pseudomonas, Serratia, Trichoderma, Glomus, Cliocladium e fungos mycorrhízal. Estas substâncias podem ser adicionadas como uma camada separada sobre a semente ou alternativamente pode ser adicionada como parte da composição de tratamento.

Quando a semente é tratada com pesticidas além dos compostos neonicotinóides, estes pesticidas podem compreender fungicidas e herbicidas; protectores de herbicidas; fertilizantes e/ou agentes de biocontrolo. Estas substâncias podem ser adicionadas como uma camada separada ou alternativamente adicionados ao pesticida na camada de revestimento.

Quando a semente é tratada com outros pesticidas, estes pesticidas podem ser seleccionados a partir de acaricidas, bactericidas, fungicidas, nematicidas e moluscicidas.

Quando a semente é tratada com um fungicida, é preferencialmente seleccionado a partir de um grupo que consiste de tebuconazole, tetraconazole, simeconazole, difenoconazole, fluquinconazole, fludioxonil, captano, metalaxil, carboxin, azoxistrobin, ipconazole, e tirame. PE1503624 - 69 -

Quando a semente é tratada com um herbicida, este pode ser seleccionado a partir dos seguintes herbicidas úteis: reguladores de crescimento, que compreendem ácidos fenoxiacéticos, tal como, 2,4-D e MCPA, ácidos fenoxipropónicos, tal como, diclorprop e mecoprop, ácidos fenoxibutíricos, tal como, 2,4-db e mcpb, ácidos benzóicos, tal como, dicamba, ácidos picolinicos e compostos relacionados, tais como picloram, triclopir, clopiralid e quinclorac; inibidores de transporte de auxina, que compreende naptalam, semicarbonas, tais como, diflufenzopir-sódio, s-triazinas, tais como, simazina, cianazina, prometon, ametrina e prometrina, outras triazinas, tais como hexazinona e metribuzina, ureias substituídas, tais como, diuron, fluometuron, linuron e tebutiuron, uracilos, tais como, bromacilo, e terbacilo, benzotiadiazoles, tais como, bentazon, benzonitroles, tais como bromoximil, fenilcarbamatos, tais como, desmedifram e fenmedifam piridazinonas, tais como, pirazon, fenipiriddazinas, tais como, piridato, e outros, tais como, propanil; inibidores de pigmentos, que compreendem amitrole, clomazona, e fluridona, piridazinonas, tais como, norflurazon, - 70 - PE 1503624 isoxazoles, tais como, isoxaflutole; inibidores de crescimento, que compreendem interruptores relativos à mitose, dos tipos, dinitroanilinas, tais como, benefin, etalfluralin, orizalin, pendimetalin, prodiamina e trifluralin, oxisulfulrons, tais como, flutiamida, piridinas, tais como, ditiopir e tiazopir, amidas, tais como, pronamida, e outras, tais como, DCPA; inibidores de rebentos de plantas nascidas de sementes, dos tipos, carbamotioatos, tais como, EPTC, cicloato, pebulato, triallato, butilato, molinato, tiobencarb e bernolato; inibidores de raizes apenas de plantas nascidas de sementes, dos tipos, amidas, tais como, napropamida, fenilureias, tais como, siduron, e outros, tais como bensulide, betasan e bensumec; inibidores de raizes e rebentos de plantas nascidas de sementes, dos tipos, cloroacetamidas, tais como, acetoclor, dimetenamida, propaclor, alaclor e metolaclor; inibidores de síntese de aminoácidos, que compreendem, inibidores de síntese de aminoácidos aromáticos, tais como glifosato e sulfosato, inibidores de síntese de aminoácidos de cadeia ramificada, dos tipos, sulfonilureias, tais como, bensulfuron, clorsulfuron, halagenossulfuron, nicosulfuron, fimsulfuron, - 71 - PE 1503624 tifensulfuron, tribenuron, clorimuron, etametsulf uron, metsulfuron, primisulfuron, oxasulfuron, sulfometuron, triasulfuron e triflusulfuron, imidazolinonas, tais como, imazametabenz, imazamox, imazapic, imazapir, imazaquin e imazetapir, triazolopirimidinas, tais como, cloransulam e flumetsulam, tirimidiniloxibenzoatos, tais como, piritiobac; inibidores de biossintese de lipidos, que compreendem, arioxifenoxiproprionatos, tais como, ciclofop-metilo, fenoxapropetilo, fenoxaprop-p-etilo, fluazifop-p-butilo, halogenoxifop e quizalofop-p-etilo, ciclohexanodionas, tais como, cletodim, setoxidim e tralquoxidim; inibidores de biossintese de parede celular, que compreende, nitrilos, tais como, diclobenil, benzamidas, tais como, isoxaben, e outros, tais como, quinclorac; interruptores de membrana celular, que compreendem, ácido sulfúrico diluído, dihidrogenossulfato de monocarbamida e óleos herbicidas, bipiridiliums, tais como, diquat e paraquat, éteres difenílicos, tais como, acifluorfen, fomesafen, lactofen e oxifluorfen, carfentrazona como oxidiazoles, tais como, flutiacet e oxadiazon, N-fenilheterociclos, tais - 72 - PE 1503624 flumiclorac e sulfentrazona; inibidores de glutamina sintetase, tais como glufosinato; e outros, tais como, DSMA, MSMA, asulam, endotall, etofumesato, difenzoquat e TCA.

Os herbicidas preferidos compreendem etil-clorimuron, ácido cloroacético, clorotoluron, clorprofam, clorsulfuron, dimetil-clortal, clortiamid, cinmetilin, cinosulfuron, cletodim, clodinafop-propargilo, clomazona, clomeprop, clopiralid, metil-cloransulam, cianazina, cicloato, ciclosulfamuron, cicloxidim, cihalogenofop- butilo, 2,4-D, daimuron, dalapon, dazomet, 2,4DB, desmedifam, desmetrin, dicamba, diclobenil, diclorprop, diclorprop-P, diclofop-methyl, difenzoquat metilsulfato, diflufenican, dimefuron, dimepiperato, dimetaclor, dimetametrin, dimetenamida, dimetipin, ácido dimetil- arsínico; dinitramina, dinocap, dinoterb, difenamid, dibrometo de diquat, ditiopir, diuron, DNOC, EPTC, esprocarb, etalfluralin, metil-etametsulfuron, etofumesato, etoxisulfuron, etobenzanid, fenoxaprop-P-etilo, fenuron, sulfato ferroso, flamprop-M, flazasulfuron, fluazifop-butilo, fluazifop-P-butilo, flucloralin, flumetsulam, flumiclorac-pentilo, flumioxazin, fluometuron, fluoro- glicofen-etilo, flupoxam, flupropanato, flupirsulfuron- metil-sódio, flurenol, fluridona, flurocloridona, fluroxipir, flurtamona, metil-flutiacet, fomesafen, fosamina, glufosinato-amónio, glifosato, metil-halogeno-sulfuron, halogenoxifop, HC-252, hexazinona, metil- PE 1503624 - 73 - imazametabenz, imazamox, imazapir, imazaquin, imazetapir, imazosuluron, imidazilinona, indanofan, ioxinil, isoproturon, isouron, isoxaben, isoxaflutole, lactofen, lenacil, linuron, MCPA, MCPA-thioetilo, MCPB, mecoprop, mecoprop-P, mefenacet, metamitron, metazaclor, metabenztiazuron, ácido metilarsónico , metildimron, isotiocianato de metilo, metobenzuron, metobromuron, metolaclor, metosulam, metoxuron, metribuzin, metsulfuron-metilo, molinato, monolinuron, naproanilida, napropamida, naftalam, neburon, nicosulfuron, ácido nonanóico , norflurazon, ácido oleico (ácidos gordos), orbencarb, orizalin, oxadiargil, oxadiazon, oxasulfuron, oxifluorfen, dicloreto de paraquat , pebulate, pendimetalin, pentaclorofenol, pentanoclor, pentoxazona, óleos de petróleo, fenmedifam, picloram, piperofos, pretilaclor, primisulfuron-metilo, prodiamina, prometon, prometrin, propaclor, propanil, propaquizafop, propazina, profam, propisoclor, propizamida, prosulfocarb, prosulfuron, piraflufen-etilo, pirazolinato, pirazosulfuron-etilo, pirazoxifen, piributicarb, piridato, piriminobac-metilo, pirithiobac de sódio, quinclorac, quinmerac, quinoclamina, quizalofop, quizalofop-P, rimsulfuron, setoxidim, siduron, simazina, simetrin, clorato de sódio, Sistema-STS, sulcotriona, sulfentrazona, sulfometuron-metilo, sulfo-sulfuron, ácido sulfúrico , óleos de alcatrão, 2,3,6-TBA, TCA- sódio, tebutam, tebutiuron, terbacil, terbumeton, terbutilazina, terbutrin, tenilclor, tiazopir, tifensulfuron-metilo, tiobencarbe, tiocarbazil, tralquoxi-dim, triallato, triasulfuron, triaziflam, tribenuron- - 74 - PE 1503624 metilo, triclopir, trietazina, trifluralin, triflusulfuron-metilo, vernolato.

Preferencialmente, a quantidade utilizada de composto neonicotinóide ou de outras substâncias no tratamento da semente não deve inibir a germinação da semente, ou causar dano fitotóxico à semente. A formulação do composto neonicotinóide que é utilizado para tratar a semente na presente invenção pode estar na forma de uma suspensão ou emulsão; suspensão de partículas num meio aquoso (e.g., água); pós molháveis; grânulos molháveis (flocos secos); e grânulos secos. Se formulado como uma suspensão ou emulsão, a concentração do composto neonicotinóide na formulação é preferencialmente cerca de 0,5% até cerca de 99% em peso (p/p), preferencialmente 5-40%.

Como mencionado acima, outras substâncias convencionais inactivas ou inertes podem ser incorporadas na formulação. Estas substâncias inertes compreendem mas não estão limitadas a: agentes de agregação, agentes dispersantes tal como a metilcelulose (Methocel A 15L V ou Methocel A 15C, por exemplo, servem como agentes combinados dispersantes/agregantes para utilização nos tratamentos da semente), álcool polivinílico (e.g., Elvanol 51-05), lecitina (e.g., Yelkinol P), dispersantes poliméricos (e.g., polivinilpirrolidona/acetato de vinilo PVP/VA 8-630), espessantes (e.g., espessantes de argila tal como Van - 75 - PE1503624

Gel B para aumentar a viscosidade e reduzir a deposição de partículas das suspensões), estabilizadores de emulsões, tensioactivos, compostos anticongelantes (e.g., ureia), pigmentos, corantes, e outros semelhantes. Outras substâncias inertes úteis na presente invenção podem ser encontradas em McCutcheon's, vol. 1, "Emulsifiers and Detergents, " MC Publishing Company, Glen Rock, New Jersey, U.S.A., 1996. Substâncias inertes adicionais úteis na presente invenção podem ser encontradas em McCutcheon's, vol. 2, "Functional MateriaisMC Publishing Company,Glen Rock, New Jersey, U.S.A., 1996.

Os compostos neonicotinóides e as formulações da presente invenção podem ser aplicados às sementes por qualquer metodologia de tratamento corrente de sementes, que compreende mas não está limitado a misturar num recipiente (e.g., um frasco ou saco), aplicação mecânica, espalhar por rotação ao acaso, pulverização, e imersão. Qualquer substância activa ou inerte convencional pode ser utilizada no contacto das sementes com os pesticidas que de acordo com a presente invenção, tal como as substâncias de revestimento por película convencionais que compreendem mas não limitadas a substâncias de revestimento por película baseadas em água tais como Sepiret (Seppic, Inc., Fairfield, NJ) and Opacoat (Berwind Pharm. Services, Westpoint, PA).

Os compostos neonicotinóides podem ser aplicados à semente como um componente do revestimento da semente. Os - 76 - PE 1503624 métodos e as composições de revestimento de sementes que são conhecidos na matéria são úteis quando são modificados por adição de um dos compostos neonicotinóides da presente invenção. Estes métodos de revestimento e equipamento para a sua aplicação estão descritos, por exemplo, em u.S. Patent Nos. 5 918 413, 5 891 246, 5 554 445, 5 389 399, 5 107 787, 5 080 925, 4 759 945 e 4 465 017. As composições para revestimento estão descritas em, por exemplo, em u.S. Patent Nos. 5 939 356, 5 882 713, 5 876 739, 5 849 320, 5 834 447, 5 791 084, 5 661 103, 5 622 003, 5 580 544, 5 328 942, 5 300 127, 4 735 015, 4 634 587, 4 383 391, 4 372 080, 4 339 456, 4 272 417 e 4 245 432, entre outros.

Os revestimentos de sementes úteis contêm um ou mais ligantes e pelo menos um dos compostos neonicotinóides .

Os ligantes que são úteis na presente invenção preferencialmente compreendem um polímero adesivo que pode ser natural ou de síntese e sem efeito fitotóxico na semente a ser revestida. O adesivo pode ser seleccionado a partir de copolímeros de acetatos de polivinilo; copolímeros acetato etilenovinilo (EVA); copolímeros de álcoois polivinílicos; celuloses, que compreendem as etilceluloses, metilceluloses, hidroximetilceluloses, hidroxipropilceluloses e carboximetilcelulose; polivinil-pirrolidonas; polissácaridos, que compreendem amido, amido modificado, dextrina, maltodextrina, alginato e quitosanos; gorduras; óleos; proteínas, que compreendem gelatina e - 77 - PE 1503624 zeínas; gomas-laca; goma-arábica; copolímeros de cloreto de vinilideno e cloreto de vinilideno; linhinossulfatos de cálcio; copolímeros acrílicos; polivinilacrilatos; óxido de polietileno; polímeros e copolímeros de acrilamida; acrilato de polihidroxietilo; monómeros de metilacrilamida; e policloropreno. É preferível que o ligante seja seleccionado para servir de matriz para o composto neonicotinóide sujeito. Enquanto os ligantes descritos acima podem ser úteis como uma matriz, o ligante específico dependerá das propriedades do neonicotinóide. O termo "matriz", como aqui utilizado, significa uma fase sólida contínua de um ou mais compostos ligantes através dos quais está distribuída uma fase descontínua de um ou mais dos compostos neonicotinóides. Opcionalmente pode estar presente um enchimento e/ou outros componentes presentes na matriz. O termo matriz deve ser entendido compreender o que pode ser tido como um sistema matriz, um sistema reservatório ou um sistema microencapsulado. Em geral, um sistema matriz consiste de um composto neonicotinóide da presente invenção e um enchimento uniformemente disperso num polímero, enquanto um sistema reservatório consiste de uma fase separada que compreende os compostos neonicotinóides sujeitos, que estão fisicamente dispersos num fase polimérica, envolvente, em proporção limitada. A microencapsulação compreende o revestimento de pequenas partículas ou gotículas de líquido, mas também de dispersões numa matriz sólida. - 78 - PE1503624 A quantidade de ligante num revestimento pode variar, mas estará numa gama de cerca de 0,01 até cerca de 25% do peso da semente, mais preferencialmente cerca de 0,05 até cerca de 15%, e mesmo mais preferencialmente a partir de 0,1% até cerca de 10%.

Como acima mencionado, a matriz pode opcionalmente incluir um enchimento. O enchimento pode ser um enchimento absorvente ou inerte, tal como são conhecidos na matéria, e pode compreender serradura, argila, carvão activado, açúcares, terra de diatomáceas, farinhas de cereais, sólidos inorgânicos de grão fino, carbonato de cálcio, e outros semelhantes. Os sólidos inorgânicos ou argilas, que podem ser utilizadas, incluem a bentonite de cálcio, o caulino, a argila da china, o talco, a perlite, a mica, a vermiculite, as silicas, o quartzo em pó, a montmorilonite, e as suas misturas. Os açúcares que podem ser úteis, compreendem a dextrina e a maltodextrina. As farinhas de cereais podem compreender a farinha de trigo, a farinha de aveia e a farinha de cevada. O enchimento é seleccionado de modo a proporcionar um microclima apropriado à semente, por exemplo o enchimento é utilizado para aumentar a proporção das substâncias activas e para ajustar a libertação controlada das substâncias activas. O enchimento pode ajudar na produção ou processo de revestimento da semente. A quantidade de enchimento pode variar, mas geralmente o peso do enchimento será na gama de cerca 0,05 até cerca de PE1503624 - 79 - 75% do peso da semente, mais preferencialmente cerca de 0,1 até cerca de 50%, e ainda mais preferencialmente cerca de 0,5% até 15%. A quantidade de composto neonicotinóide que é utilizada para o tratamento da semente variará de acordo com o tipo de semente e o tipo de composto neonicotinóide, mas o tratamento compreenderá o contacto das sementes com uma quantidade do composto neonicotinóide, ou combinação de dois ou mais compostos neonicotinóides, que é eficaz para aumentar o rendimento e/ou vitalidade da planta agronómica que cresceu a partir da semente tratada.

Em geral a quantidade de composto neonicotinóide que é aplicado no tratamento estará na gama de cerca 0,1 g até cerca de 1000 g do composto por 100 kg de peso da semente. Preferencialmente, a quantidade de composto neonicotinóide estará na gama de cerca 5 g até cerca de 600 g do composto activo por 100 kg de peso da semente, mais preferencialmente, estará na gama de cerca 10 g até cerca de 400 g do composto activo por 100 kg de peso da semente, e ainda mais preferencialmente, estará na gama de cerca 20 g até cerca de 300 g do composto neonicotinóide por 100 kg de peso da semente. Alternativamente, verificou-se ser preferido que a quantidade do composto neonicotinóide seja acima de 20 g do composto por 100 kg de peso da semente, e mais preferível acima de cerca de 40 g por 100 kg de semente. Quando o composto neonicotinóide é o imidacloprid, uma gama preferida de utilização compreende cerca de 40 g/100 kg de semente até cerca de 100 g/100 kg. - 80 - PE 1503624

Opcionalmente, pode ser utilizado um plasticizante na formulação do revestimento. Os plastici-zantes são tipicamente utilizados para tornar a película formada pela camada de revestimento mais flexível, para aumentar a adesão e o espalhamento, e para aumentar a velocidade de processamento. A maior flexibilidade da película é importante para minimizar a raspagem, quebra ou a agregação durante os processos de armazenagem, transporte ou sementeira. Podem ser utilizados muitos plasticizantes, no entanto, os plasticizantes mais úteis compreendem o polietilenoglicol, glicerol, butilbenzilftalato, glicol-benzoatos e os compostos relacionados. A gama de plasticizante na camada de revestimento estará na gama a partir de cerca de 0,1 até cerca de 20% em peso.

Quando o composto neonicotinóide utilizado no revestimento é uma formulação do tipo oleosa e pouco ou nenhum enchimento está presente, pode ser útil acelerar o processo de secagem por secagem da formulação. Este passo opcional pode ser realizado por meios que serão conhecidos na matéria e podem compreender a adição de carbonato de cálcio, caulino, argila bentonite, perlite, terra de diatomáceas, ou qualquer substância absorvente que é adicionada preferencialmente simultaneamente com a camada de revestimento pesticida para absorver o óleo ou o excesso de humidade. A quantidade de carbonato de cálcio ou de compostos relacionados necessária para proporcionar eficazmente um revestimento seco estará na gama de cerca de PE1503624 - 81 - 0,5 até cerca de 10% do peso de semente.

Numa forma de realização preferida, o revestimento da semente que contém o composto neonicotinóide é um revestimento de libertação controlada. Quando os termos "libertação controlada" são aqui utilizados para descrever um revestimento de semente, siqnifica que o revestimento da semente actua como um reservatório do composto neonicotinóide e é capaz de libertar o composto neonicotinóide numa proporção que é mais baixa do que o composto neonicotinóide seria libertado se estivesse presente à superfície da semente sem ser um componente de um revestimento. As técnicas vulqares para proporcionar revestimentos de libertação controlada estão descritas, em Controlled-Release Delivery Systems for Pesticides, H.B.Scher, Ed., Mareei Dekker, Inc., NY (1999), e compreendem sem limitações, revestimentos de matriz, microparticulas de matriz, gotas revestidas, microcápsulas, e outros semelhantes. Alguns revestimentos formados com o composto neonicotinóide são capazes de efectuar uma libertação lenta do composto por difusão ou movimento através da matriz para o meio envolvente. As sementes tratadas também podem ser embrulhadas numa película de polímero de sobrerevestimento para proteger o revestimento e/ou servir de barreira de difusão do composto neonicotinóide. Estes sobrerevestimentos são conhecidos na técnica e podem ser aplicados utilizando os leitos fluidificados convencionais e técnicas de revestimento de película em tambor. A formulação do composto neonicotinóide pode ser - 82 - ΡΕ1503624 aplicada às sementes utilizando as técnicas e máquinas de revestimento convencionais, tal como técnicas de leitos fluidificados, método do moinho de cilindro, tratadores de sementes rotoestáticos, e tambores de revestimento. Também podem ser úteis outros métodos tais como os leitos de esguicho. As sementes devem ser calibradas antes do revestimento. Após o revestimento, as sementes são tipicamente secas e depois transferidas para uma máquina de calibração para serem dispostas por tamanho. Estes procedimentos são conhecidos na matéria.

Noutra forma de realização da presente invenção, o composto neonicotinóide pode ser introduzido sobre ou na semente por utilização de primeira matriz sólida. Por exemplo, a quantidade do composto neonicotinóide pode ser misturada com uma substância de matriz sólida e em seguida a semente é colocada em contacto com a substância de matriz sólida durante um periodo para permitir a introdução do composto neonicotinóide na semente. A semente pode então ser opcionalmente separada da matriz sólida e guardada ou utilizada, ou a mistura da substância de matriz sólida com a semente pode ser guardada ou plantada directamente. As substâncias de matriz sólida que são úteis na presente invenção compreendem poliacrilamida, amido, argila, silica, alumina, terra, areia, poliureia, poliacrilato, ou qualquer outra substância capaz de absorver ou adsorver o composto neonicotinóide durante um intervalo de tempo e libertar este composto sobre ou na semente. É útil ter a certeza de que o composto neonicotinóide e a substância de matriz - 83 - PE 1503624 sólida são compatíveis entre si. Por exemplo, a substância de matriz sólida pode ser escolhida de modo a que possa libertar o composto numa proporção razoável, por exemplo durante um período de minutos, horas ou dias. A presente invenção ainda apresenta outra forma de realização de embebimento como outro método de tratar a semente com o composto neonicotinóide. Por exemplo, a semente da planta pode ser combinada durante um período de tempo com uma solução que compreende desde cerca de 1% em peso até cerca de 75% em peso do composto neonicotinóide num solvente tal como a água. Preferencialmente a concentração da solução é desde cerca de 5% em peso até cerca de 50% em peso, mais preferencialmente desde cerca de 10% em peso até cerca de 25% em peso. Durante o período em que a semente está combinada com a solução, a semente absorve (embebe) uma porção do composto neonicotinóide. Opcionalmente, a mistura de semente da planta e a solução podem ser agitadas, por exemplo por agitação, rolamento, mexer ao acaso, ou outros meios. Após o embebimento, a semente pode ser separada da solução e opcionalmente seca, por exemplo por movimentos rápidos ou secagem ao ar.

Numa outra forma de realização, o composto neonicotinóide em pó pode ser misturado directamente com a semente. Opcionalmente pode ser utilizado um agente de colagem para aderir o pó à superfície da semente. Por exemplo uma quantidade de semente pode ser misturada com a agente de colagem e opcionalmente agitada para permitir um PE 1503624 - 84 - revestimento uniforme da semente com o agente de colagem. A semente revestida pelo agente de colagem pode depois ser misturada com o composto neonicotinóide. A mistura pode ser agitada, por exemplo mexida ao acaso, para permitir a o contacto do agente de colagem com o composto neonicotinóide em pó, permitindo assim a aderência à semente do composto em pó.

As sementes tratadas da presente invenção podem ser utilizadas para a propagação das plantas do mesmo modo que as sementes tratadas de modo convencional. As sementes tratadas podem ser armazenadas, transportadas, semeadas e plantadas do mesmo modo que qualquer outra semente tratada com pesticida. Devem ser tomadas medidas de segurança apropriadas para limitar o contacto das sementes tratadas com o ser humano, alimentos, ou materiais de alimentação, água, e pássaros e animais domésticos e selvagens. O exemplo seguinte descreve as formas de realização preferidas da invenção. Outras formas de realização no âmbito das reivindicações serão aqui apresentadas a qualquer especialista na matéria a partir da consideração da especificação ou prática da invenção aqui descrita. Pretende-se que esta especificação, conjuntamente com o exemplo, apenas seja considerada exemplarmente, no âmbito e espírito da invenção que é indicado pelas reivindicações que seguem os exemplos. No exemplo todas as percentagens são dadas numa base de peso salvo indicação em contrário. PE 1503624 - 85 - EXEMPLO 1

Este exemplo ilustra o tratamento de sementes de milho transgénico com imidacloprid.

As sementes de milho foram preparadas para expressar a endotoxina Cry3Bb. 11231 ou CryBb. 11098 de Bacillus thuringiensis pelos métodos descritos para os eventos respectivos em WO 99/31248.

As sementes de milho das mesmas espécies híbridas, com ou sem eventos transgénicos, foram tratadas com imidacloprid (disponível como GAÚCHO da Gustafson LLC, Plano, TX) como se segue. Preparou-se a formulação de tratamento contendo imidacloprid por mistura de uma quantidade medida da substância que contém imidacloprid em água como um veículo. Também foram adicionadas à mistura outras substâncias não neonicotinóides, tais como corantes, agentes adesivos, tensioactivos, lubrificantes e outras substâncias geralmente conhecidas na técnica a utilizar nas formulações de tratamento de sementes. Depois aplicou-se a formulação à temperatura ambiente a um peso determinado de semente de milho num tratador de sementes rotoestático. Determinaram-se os pesos respectivos da preparação de imidacloprid e da semente de milho para proporcionar o tratamento em proporção desejada na semente. Misturou-se o imidacloprid em água suficiente para permitir uma distribuição eficiente da formulação por todas as sementes no conjunto enquanto se minimizou a perda da formulação do PE1503624 - 86 - tratamento devido à falta de absorção da formulação pelas sementes. As sementes tratadas foram deixadas repousar não tapadas durante pelo menos quatro horas antes da plantação.

Quando as sementes foram tratadas com o imidacloprid, misturou-se bem uma quantidade suficiente de GAÚCHO® 600 FS (que contém 48,7% em peso de imidacloprid) em água para formar uma formulação de tratamento de sementes, e a formulação foi aplicada a um determinado peso de semente de milho por meio de um tratador de sementes rotoestático para proporcionar níveis de tratamento de 0,165 mg de imidacloprid por grão. (se se assumir que cerca de 1650 grãos de milho pesam uma libra, então esta proporção é equivalente a 60 g de imidacloprid por 100 kg de semente), ou 1,34 mg de imidacloprid por grão (cerca de 487 g de imidacloprid por 100 kg de semente). EXEMPLO 2

Este exemplo ilustra o efeito do tratamento de semente de milho com imidacloprid numa ensaio de produção de semente híbrida.

Doze híbridos de milho comerciais foram tratados com imidacloprid em 0,165 mg/grão (GAÚCHO® 600). Todas as proporções de aplicação estão dadas como peso da substância activa (imidacloprid) por grão de semente. O método de tratamento da semente foi igual ao descrito no Exemplo 1. PE 1503624 - 87 -

As sementes foram plantadas em vinte e quatro locais de ensaio através de uma faixa de milho central nos U.S. utilizando equipamento de plantação corrente. Cada local de ensaio consistiu em seis híbridos, com tratamentos experimentais estabelecidos onde cada híbrido recebeu quer um tratamento fungicida apenas (MAXIM® XL com 0,165 oz. de substância activa (SA/cp de semente), quer um tratamento fungicida com um tratamento de semente com um composto neonicotinóide).

Os ensaios foram estabelecidos como experiências replicadas (quatro replicações) em pequenos lotes (2-4 filas por 15-40 pés em comprimento) num projecto em bloco de lotes separados ao acaso. No projecto experimental, os híbridos foram estabelecidos como lotes principais e os tratamentos das sementes foram estabelecidos como sub-lotes. Cada ensaio recebeu aplicações de um herbicida corrente para controlar as ervas daninhas e as outras plantações padrão mantiveram os procedimentos, com excepção de que nenhum dos ensaios recebeu tratamentos insecticidas adicionais durante o decurso da estação de crescimento. O efeito do tratamento experimental foi avaliado por determinação final das plantas jovens (em estádios de crescimento V4/V5) e rendimentos dos lotes na maturidade da colheita. Os rendimentos dos lotes foram padronizados para 15% de humidade. Os valores a partir destes ensaios estão ilustrados na Tabela 5. 88 PE 1503624

Tabela 5: Rendimento e contagem de plantas jovens nos ensaios da estação de reprodução de híbridos de milho que foram não tratados ou tratados com imidacloprid

Resposta Código do Híbrido Contagem de plantas jovens (plts/ac), ou rendimento do milho (bu/ac) Rendimento Real Acima do Esperado Rendimento Real 2x Acima do Esperado Controlo Imidacloprid tratado Diferença Plantas -jovens A 31 076 31 920 843,8 Plantas jovens B 31 622 32 061 439,0 Plantas jovens c 30 467 31 217 749,5 Plantas jovens D 30 881 31 828 946,8 Plantas "jovens E 31 391 32 011 620,0 Plantas jovens F 29 624 30 786 1162,3 Plantas jovens G 27 577 28 766 1189,2 Plantas jovens H 27 964 28 004 39, 6 Plantas jovens I 26 638 28 460 1822,2 Plantas jovens J 27 844 28 273 429,3 Plantas jovens K 27 961 28 984 1022,8 Plantas jovens L 28 182 28 986 803,7 Rendimento A 161, 5 163,5 2, 0 Sim Não Rendimento B 166, 7 170,8 4,1 Sim Sim Rendimento C 153, 7 159,6 co LO Sim Sim Rendimento D 170,1 169, 4 o 1 Não Não Rendimento E 170, 2 171,2 1,0 Não Não - 89 - PE 1503624

Rendimento F 168, 4 173,1 4,7 Sim Sim Rendimento G 164, 0 167, 5 3,5 Sim Não Rendimento H 159, 9 164, 6 4,8 Sim Sim Rendimento I 163, 1 172,3 CM CTi Sim Sim Rendimento J 175, 9 179,5 3,7 Sim Sim Rendimento K 171, 2 171,3 0,1 Não Não Rendimento L 173, 8 180,7 6, 9 Sim Sim

Notas: a. A chave para os híbridos do milho é A = DK440, B = DKC 46-26, C = DK493, D = DKC51-88, E = DK537, F = LH244XLH295, G = DK567, H = HC33XLH277, I = DKC57-38, J = DK585, K = DK611, e L = RX708. b. Os híbridos A-F cresceram em 10 locais; os híbridos G-L cresceram em 14 locais. c. A coluna assinalada por "Resposta" representa as contagens finais das plantas jovens no estádio V5 (plantas/ac), e traça os rendimentos (bu/ac) na maturidade. d. Todas as sementes receberam tratamento fungicida corrente.

Os resultados de rendimento deste conjunto de ensaios no campo estão também ilustrados na forma de gráficos de barras que mostram o aumento ou diminuição (em bu/ac) no rendimento do milho para as sementes tratadas com imidacloprid quando comparadas contra as sementes não tratadas como uma função do tipo de milho híbrido que foi - 90 - PE1503624 utilizado (Ver Figura 2) . Na Figura 3, um gráfico de barras mostra o aumento ou diminuição (em bu/ac) no rendimento do milho para as sementes tratadas com imidacloprid para os vinte e quatro locais diferentes em que foram plantadas as sementes. Os dois gráficos ilustram consistente e comercialmente importantes aumentos de rendimento do milho quando a semente é tratada com imidacloprid independentemente do nível de infestação por insecto.

Os resultados a partir das experiências descritas acima demonstram conclusivamente que o efeito de imidacloprid na melhoria do porte da planta e aumento de rendimento da plantação. Foi notável, contudo, que o aumento do rendimento proporcionado pelo tratamento com um composto neonicotinóide em relação ao correspondente aumento de plantas jovens foi surpreendentemente elevado. De acordo com as publicações de Purdue University (Ver, e.g., Nielsen, R.L. Estimating Yield and Dollar Retuns From Com Replanting AY-264-W(Ver. Jul-02), Purdue Cooperative Extension Service, West Lafayette, IN (Julho 2002), disponível em http://www.agry.purdue.edu/ext/pubs/AY-2 64-W.pdf; 4/29/03), uma diferença em 1000 plantas por acre plantado de milho de óptimas populações proporcionará uma diferença esperada no rendimento de cerca de 1%. (ver também, Shaw, Corn Production, pp. 659-662 em, Corn and Corn Production, pp 659-662 em, Corn and Corn Improvement, Number 18 in the series, Agronomy, Sprague, G.F., et al., Eds., Soc. of Agronomy, Inc., Madison, WI (1988). Na Tabela 5, a coluna designada por "rendimento real acima do - 91 - PE 1503624 esperado" mostra que 9 em 12 combinações tratamento da semente/híbrido mostraram um aumento de rendimento que foi maior do que o aumento que seria esperado na base de apenas melhoria de plantas jovens quando comparado com o controlo tratado com fungicida. De facto, mais de metade das combinações tratamento hibrido/semente (7 em 12) demonstraram um aumento de rendimento que foi cerca de duas vezes o que seria de esperar na base da melhoria de plantas jovens, ("rendimento real 2X acima do esperado"). Este aumento foi inesperado e foi surpreendentemente alto. Isto indica que o rendimento do milho foi aumentado por tratamento com imidacloprid, e que o aumento no rendimento foi superior ao aumento no rendimento que se poderia explicar pelo aumento das contagens de plantas jovens. EXEMPLO 3

Este exemplo mostra que o tratamento de sementes de milho com imidacloprid resultou num aumento de rendimento do milho mesmo numa pressão de praga de insecto baixa.

Três híbridos de milho diferentes (EXP0050, EXP056, e EXP062A) foram tratados pelo método descrito no Exemplo 1 com GAÚCHO 600 FS numa proporção de aplicação de 0,165 mg de imidacloprid/grão (semente) e plantados em locais diferentes. Esta proporção de imidacloprid revelou não reduzir significativamente os danos nas raizes nos locais com niveis de prejuízo económico do milho devido ao - 92 - PE 1503624 verme das raízes, mas é eficaz na protecção dos rebentos de milho contra a redução de plantas jovens e na limitação de crescimento de pragas de insecto secundárias de milho. Foram determinados na colheita o rendimento do milho a partir de amostras de controlo não tratadas, a partir de milho desenvolvido em solos com aplicação convencional de insecticidas, e milho tendo a semente tratada com imidacloprid, que estão relatados na Tabela 6. (O tratamento insecticida convencional aplicado ao solo compreende FORCE 3G aplicado em 4-5 oz/1000 pés de fila (30 in. de espaçamento por fila), LORBSAN 15G aplicado numa proporção de 8 oz/1000 pés de fila, e COUNTER 20G aplicado numa proporção de 6 oz/1000 pés de fila).

Tabela 6: Rendimento do milho nos ensaios de híbridos de milho não-transgénicos com e sem tratamento de sementes com imidacloprid em áreas com pressão de praga baixa RENDIMENTO (BU/AC) HÍBRIDO PRÁCTICA DE LAVOURA CONTROLO NÃO TRATADO SOLO APLICADO (Força 3G, Lorsban 15G, Counter 20G) Gaúcho® (0,165 mg/grão) EXP050 MÍNIMA 134 131 140 EXP056 MÍNIMA 130 130 132 EXP062A MÍNIMA 151 154 154 MÉDIA 138,3 138,3 142 A pressão do insecto secundária em todas os locais PE1503624 - 93 - foi insignificante ou inexistente. Foi também evidente uma pressão secundária baixa dado que a aplicação de insecticidas ao solo não afectou positivamente o rendimento. Contudo, o tratamento com imidacloprid aumentou o rendimento em cerca de 4 bu/ac (cerca de 2,9%). Estes resultados demonstraram que o tratamento com imidacloprid aumentou o rendimento do milho, mesmo quando a pressão da praga de insecto está abaixo da que teria indicado a necessidade do tratamento insecticida. EXEMPLO 4

Este exemplo mostra que o imidacloprid aumenta rendimento do milho nos ensaios de campo com milho híbrido < diferentes regimes de lavoura.

As sementes de três milhos híbridos foram tratadas com imidacloprid de modo descrito no Exemplo 3.

As sementes foram plantadas utilizando equipamento padrão no campo das experiências através da cintura de milho nos E.U. Todas as experiências foram realizadas como ensaios em faixas, numa variedade de regimes de lavoura, e todos os ensaios tiveram controlo de ervas daninhas e práticas de cultura comuns à produção de milho para o mercado. A produção dos lotes resultou da utilização de equipamento de colheita mecânico corrente.

Aplicaram-se os insecticidas ao solo de modo descrito no Exemplo 2. Também se observou aumento - 94 - PE 1503624 considerável no rendimento de milho quando as sementes de milho tratadas com o imidacloprid foram plantadas em solos tratados com aplicação de insecticida ao solo. Observou-se um aumento de rendimento em todas as condições de lavoura e para todos os híbridos ensaiados. A Tabela 7 compara o rendimento a partir de sementes de milho não tratadas e sementes de milho tratadas com o imidacloprid quando plantadas em solos tratados com a aplicação de insecticida ao solo. As sementes tratadas com o imidacloprid produziram rendimentos consideravelmente mais elevados do que as sementes que não receberam tratamento com o imidacloprid. A aplicação de insecticidas ao solo é conhecida como sendo um método eficaz para o controlo de insectos secundários, pelo que o aumento de rendimento do milho foi surpreendente.

Tabela 7: Rendimento nos testes de campo com pressão de insecto baixa para o milho com práticas de lavoura diferentes e com tratamento insecticida ao solo apenas ou com tratamento insecticida ao solo mais o tratamento de semente com Gaúcho 95 PE 1503624 PRÁCTICA HÍBRIDO RENDIMENTO RENDIMENTO DE (Solo com (Tratamento com LAVOURAa aplicação sementes Gaúcho + de Solo com insecticida insecticida) em ) em Bu/Ac Bu/Ac Conservação EXP050 129 152 Conservação EXP050 176 174 Conservação EXP050 182 187 Conservação EXP056 177 166 Conservação EXP050 160 177 Conservação EXP056 214 199 Conservação EXP062A 219 222 MÉDIA 179, 6 182, 4 Convencional EXP050 212 217 Convencional EXP050 209 211 Convencional EXP056 228 217 Convencional EXP056 153 157 Convencional EXP056 213 216 Convencional EXP062A 188 185 Convencional EXP056 182 183 Convencional EXP056 181 192 Convencional EXP056 188 188 Convencional EXP056 187 197 Convencional EXP062A 192 201 Convencional EXP062A 193 194 Convencional EXP050 150 152 - 96 - PE 1503624

Convencional EXP062A 194 207 MÉDIA 190, 8 194,1 Sem arar EXP056 105 123 Sem arar EXP056 176 174 Sem arar EXP056 173 172 Sem arar EXP056 153 157 Sem arar EXP062A 123 133 Sem arar EXP062A 164 185 Sem arar EXP062A 167 185 MÉDIA 151.8 161,3 MÉDIA TOTAL 178.1 183

Notas: a. Métodos descritos como sem lavoura, lavoura mínima, conservação ou tipos de lavoura que diferem um do outro principalmente no grau em que o solo é remexido e preparado, antes da plantação. Por definição, a lavoura de conservação deixa pelo menos 30 por cento do solo coberto de resíduos de colheitas.

Os sistemas de não-lavoura referem-se a situações em que não foram aplicados os métodos de arar o solo antes de ou na plantação.

Conservação/Lavoura mínima refere-se às práticas de lavoura mínima que permitem que pelo menos 30% da superfície do solo permaneça coberto de resíduos de colheitas. - 97 - PE 1503624

Lavoura Convencional refere-se às práticas de lavoura em que menos de 30% da superfície do solo está coberta de resíduos de colheitas.

Estas práticas podem compreender lavrar com aiveca, lavrar com grade niveladora, ou os passos múltiplos do cultivo no campo antes ou na plantação da cultura. O lavrar do solo em faixas e o lavrar em leivas de terra, embora geralmente agrupados na lavoura de conservação devido aos efeitos benéficos no solo e na retenção de água, são agrupados na lavoura convencional aqui porque as zonas lavradas em que a cultura é plantada proporciona um ambiente mais parecido com a da lavoura convencional verdadeira.

Os resultados deste ensaio também indicam que o rendimento do crescimento do milho utilizando a cultura sem arar aumentou de uma grande percentagem (aumento de 6,3%) do que a do milho que teve a lavoura convencional ou lavoura de conservação/mínima (aumento de 1,6%). EXEMPLO 5

Este exemplo ilustra o efeito no rendimento do tratamento de semente de milho transgénico da mesma linha com imidacloprid.

Os híbridos do milho com e sem eventos transgénicos que expressam as proteínas insecticidas foram PE1503624 - 98 - avaliados quanto a eficiência no campo. Os híbridos que foram avaliados foram o RX6 70 e o RX601, cada um como uma mesma linha (não tendo eventos transgénicos) e cada um tendo um evento transgénico que expressa a proteína Cry3Bb com actividade contra a Diabrotica spp. (verme de raízes de milho) — designada como MON853, ou um evento transgénico que expressa a proteína Cry3Bb com actividade contra o verme de raízes de milho - designada como MON863, ou uma combinação de MON863 e um evento transgénico que expressa a proteína CrylA que tem actividade contra o teredem do milho Europeu - designado por MON810, ou uma combinação de MON863 e de MON810. Concordantemente, foram ensaiadas uma mesma linha e quatro formas transgénicas para cada híbrido. Cada tipo de semente foi ensaiado com e sem tratamento da semente com 60 gm de imidacloprid por 100 kg de semente, aplicado por um tratador de sementes Niklas. As sementes da mesma linha foram também ensaiadas com e sem utilização dos insecticidas convencionais aplicados ao solo, que foram aplicados como descrito no Exemplo 3. O rendimento do milho nos ensaios está ilustrado nas Tabelas 8 e 9.

Tabela 8: Rendimento do milho nos ensaios de campo de híbridos não transgénicos com e sem tratamento com o imidacloprid em áreas com pressão de praga de insecto baixa. - 99 - PE 1503624 RENDIMENTO (BU/AC) LOCALIZ HÍBRIDO CONTROLO NÃO SOLO APLICADO Gaúcho AÇÃO TRATADO e (Força 3G, (6 0g/ (Proporção de Danos Lorsban, 100 kg de nas Raízes)a Counter)b semente) 1 RX6 70 76,8 (PDR = 2,3) OO r-- 73 2 RX601 105,1 (PDR = 1,9) 98,7 101,5 3 RX601 199,3 (PDR = 2,5) 171,1 180 4 RX601 119,8 (PDR = 2,6) 117,1 117,1

Notas: a. A Proporção de Danos nas Raízes (PDR) é medida de acordo com o sistema de Iowa Root Rating (Hill and Peters, 1971, ibid.) . e é expresso numa escala de 0-6. Qualquer contagem inferior a 3 indica um nível de danos que deveria ser considerado indicar que não foi requerido tratamento insecticida. b. O tratamento de sementes com Força 3G, Lorsban 15G, e Counter 20G, foi realizado de acordo com as práticas e as proporções descritas no Exemplo 3.

Os valores indicados na tabela 8 indicam que o rendimento para uma mesma linha de milho aumentou por tratamento com o imidacloprid em metade. Contudo, os aumentos não foram substanciais. Os valores também demonstraram que os danos nas raizes devido à pressão pelos 100 - PE1503624 vermes das raízes durante os ensaios não foram significativos .

Em contraste, contudo, quando foi aplicado o imidacloprid às sementes transgénicas neste ensaio, o aumento do rendimento do milho sobre o que foi obtido com sementes transgénicas não tratadas foi substancial. A tabela 9 ilustra que em todos os ensaios, as sementes transgénicas tratadas com o imidacloprid deram um rendimento mais elevado que o das mesmas linhas, e também mais elevado do que as espécies transgénicas não tratadas. Na ausência relativa de pressão de insecto, este resultado foi surpreendente. 101 PE1503624

Tabela 9: Rendimento do milho em testes de campo com pressão de praga baixa para as sementes de milho + co CO r- o Ω O co LD co H Pi o τ—1 τ—1 ffl CO d τ—1 τ—1 Ή co 0 kO CO o \£> O u T—1 H co \ m co Ή *sD a CO τ—1 co O O V ω τ—1 \—1 r~- H co ΟΪ o \—1 •\ + τ—1 \—1 m co Ή LD a CO KD o O V u T—1 04 H co O ps \ T—1 m co Ή LO a CO O ·—··· o co u < u H + Gauchc LD co o P a ra co *sD co 04 m Ή CO ' ' κ o H o r~- s Ω *· H H CO o a P^ f"· H m CO Q Ή a a H tá O Ω τ—1 + 0 Λ 78 r~- tá co u co CQ ld ti o Ή tá CO LD o Ω 04 H CO LD a LO ra co Ή κ o Ω to CO o LD <1 Φ ** ** ** H de N OJ \—1 OJ OJ <! II II II II 2 íti tá tá tá tá H Ω Ω Ω Ω ífd o tá tá tá P^ O ><! to rd s c co τ—1 CO τ—1 a V V V V o to kO LD o [-" J 0 \> O o T—1 O P^ a P (d τ—1 τ—1 τ—1 H M s u o to u Φ o O !< o [-- O o o O Ω vO vO vO vO < H w X X X IS] a tá tá a H ffl tá J Ή < u o κ \—1 04 co H l-l PE 1503624 102 - EXEMPLO 6

Este exemplo ilustra como as tabelas para insecticidas utilizados no milho por distritos referentes às plantações nos Estados Unidos podem ser utilizadas para determinar se a pressão do insecto num local particular indica uma necessidade de tratamento com um insecticida.

Referindo à Tabela 1, uma pessoa selecciona um local para plantar milho de acordo com o relatório distrital das plantações nos E.u. (CRD) n° 010050. A partir da Tabela 1, pode-se ver que em 2001, não foi relatado nenhum tratamento insecticida na área em acres do milho nesse CRD. Concordantemente, pode ser determinado que o nivel de pressão do insecto nesse local está abaixo do qual é necessário o tratamento da semente do milho com um insecticida que seria indicado.

Pela consulta da tabela 1, podem ser retiradas conclusões semelhantes para os CRD's 01010, 01020, 01030, 01060, 04020, 04050, 05050, 05070, 06060, 13020, 16090, 20050, 22010, 22010, 22040, 22060, 22070, 23010, 23020, 26010, 26020, 26030, 27020, 27030, 28020, 28040, 28070, 28090, 29080, 30030, 30080, 30090, 32010, 33010, 34080, 37040, 38010, 38020, 38030, 38040, 38050, 38070, 38080, 40020, 40030, 40040, 40050, 40060, 40070, 40080, 40090, 44010, 45010, 45040, 46020, 46040, 46050, 46070, 46080, 48021, 49060, 53010, 53020, 53090, 55020, e 55030. PE1503624 103 - EXEMPLO 7

Este exemplo ilustra como os relatórios sobre a utilização de insecticidas no milho por concelho podem ser utilizados para determinar se a pressão de insecto num local em particular indica uma necessidade de tratamento com um insecticida.

Se uma pessoa selecciona um local para plantar milho num concelho que está no relatório distrital das plantações dos E.u. (CRD), em que está indicado no CRD algum nivel de utilização de insecticida - por exemplo número de CRD 01040, mas sabe-se que o concelho no qual a pessoa elege plantar milho estar isento de utilizar insecticida no milho, então pode ser determinado que o nível de pressão de insecto nesse concelho está abaixo do que o tratamento da semente de milho com insecticida indicaria.

Uma conclusão semelhante pode ser retirada para todos os concelhos para os quais o nível de utilização de insecticida no milho pode ser determinado.

Todas as referências citadas nesta especificação, que compreendem sem limitação todos os artigos, publicações, patentes, relatórios, pedidos de patente, apresentações, textos, manuscritos, livros, sites da Internet, artigos jornalísticos, periódicos, e outros semelhantes, são citados por referência na sua integridade. 104 - PE1503624

Aqui a discussão das referências meramente pretendeu resumir as afirmações feitas pelos seus autores e não se fez a admissão que qualquer referência constitui matéria principal. Os autores do pedido reservam o direito de mudar a visão e pertinência das referências citadas.

Tendo em conta o acima referido, deverá ser considerado que da invenção são conseguidas algumas vantagens e outros resultados vantajosos obtidos.

Como podem ser feitas algumas alterações nos métodos e composições acima referidas sem afastar do âmbito da invenção, pretende-se que toda a matéria contida na descrição acima referida e ilustrada nas figuras anexas deve ser interpretada como ilustrativa e não em sentido limitado.

Lisboa, 7 de Dezembro de 2007

Claims

PE 1503624 - 1 - REIVINDICAÇÕES 1. Método de aumentar o rendimento e/ou vitalidade de uma planta agronómica que está em crescimento a partir de uma semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteina insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas, método este que compreende: a. determinar se a semente é para ser plantada num local com um nivel de infestação pela praga que deveria indicar o tratamento com um insecticida; e, se este tratamento não é o indicado, b. realizar uma acção que é seleccionada a partir de um grupo que consiste em: 1. tratar a semente com um composto neonicotinóide, e ii. plantar no local uma semente que foi tratada com um composto neonicotinóide.
2. Método de aumentar o rendimento e/ou vitalidade de uma planta agronómica que está em crescimento a partir de uma semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteina insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas, em que a semente está plantada num local com um - 2 - PE 1503624 nível de infestação por um insecto que é uma praga para a planta agronómica e contra a qual o composto neonicotinóide tem actividade insecticida, método este que compreende: a. determinar se o nível de infestação pelo insecto que é uma praga para a planta agronómica indica o tratamento com um insecticida; e, se este tratamento não é o indicado, b. tratar a semente com um composto neonicotinóide.
3. Método de acordo com a reivindicação 2 que compreende: a. comparar um nível de infestação pelo insecto no local com um nível de infestação pelo insecto com um insecticida que seria indicado; e, se o nível de infestação do local pelo insecto é mais baixo do que o nível de infestação para o qual o tratamento está indicado, b. tratar a semente com um composto neonicotinóide.
4. Método de acordo com a reivindicação 2 que compreende: a. determinar o nível de infestação pelo insecto no local; b. determinar um nível de infestação pelo insecto para o qual o tratamento com um insecticida estaria indicado; PE1503624 - 3 - c. comparar o nível de infestação pelo insecto no local com o nível de infestação pelo insecto com um insecticida que seria o indicado; e, se o nível de infestação do local pelo insecto é mais baixo do que o nível de infestação para o qual o tratamento está indicado. d. tratar a semente com um composto neonicotinóide.
5. Método de acordo com a reivindicação 2 que compreende: a. determinar se o nível de infestação pelo insecto que é uma praga para a planta agronómica indica que é necessário o tratamento com um insecticida; e, se este tratamento não é indicado, b. plantar no local uma semente que foi tratada com um composto neonicotinóide.
6. Método de acordo com a reivindicação 2 que compreende: a. determinar o nível de infestação pelo insecto no local; b. determinar um nível de infestação pelo insecto para o qual o tratamento com um insecticida estaria indicado; c. comparar o nível de infestação pelo insecto no local com o nível de infestação pelo insecto com um insecticida que estaria indicado; e, se o nível de infestação do local pelo insecto é mais baixo do que o - 4 - PE 1503624 nível de infestação para o qual o tratamento estaria indicado, d. plantar a semente depois ter sido tratada com um composto neonicotinóide.
7. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 até 6, em que o composto neonicotinóide compreende um composto com a fórmula: / NO* R R N R em que: R1 é hidrogénio, ou Ci-C4alquilo; R2 é hidrogénio, ou Ci-C4alquilo, Ci-C4alcenilo, Ci-C4alcinilo, hidroxilo, amino, arilo, tio, alquilarilo, arialquilo, ou C4-C6 heterocíclico; R3 é hidrogénio, ou Ci-C4alquilo, Ci-C4alcenilo, Ci-C4alcinilo, hidroxilo, amino, arilo, tio, alquilarilo, arialquilo, ou um heterocíclico de 4-6-membros; ou é tal que R2 e R3 podem ligar-se para formarem um heterocíclico que pode opcionalmente ser substituído ou não substituído; e R4, quando presente, é hidrogénio, ou Ci-C4 alquilo, Ci-C4alcenilo, Ci-C4alcinilo, hidroxilo, amino, arilo, tio, alquilarilo, arialquilo, ou C4-C6 - 5 - PE1503624 heterocíclico, halogenotiazoilalquilo, ou furilalquilo.
8. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 até 6, em que o composto neonicotinóide compreende um composto com a fórmula: fv2 / tf NTR3 'N' Fç em que: R1 é hidrogénio, ou metilo; R2 é hidrogénio, ou metilo, R3 é hidrogénio, ou metilo, ou de uma forma que se pode ligar com R2 para formar um anel de oxadiazina ou um anel 2,3-diazol; e R4, se presente, é clorotiazoilmetilo, ou furilmetilo.
9. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 até 6, em que o composto neonicotinóide é seleccionado a partir do grupo que consiste em acetamiprid, imidacloprid, tiametoxam, clotianidin, nitenpiram, flonicamid, nitiazina e tiacloprid.
10. Método de acordo com a reivindicação 9, em que o composto neonicotinóide é seleccionado a partir do - 6 - PE 1503624 grupo que consiste em acetamiprid, imidacloprid, tiametoxam, clotianidin, dinotefuran, nitenpiram.
11. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 - 6, em que a semente compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica uma δ-endotoxina B. thuringiensis.
12. Método de acordo com a reivindicação 11, em que a δ-endotoxina modificada é tal que é expressa pela sequência genética de B. thuringiensis estranha que está presente numa estirpe seleccionada a partir do grupo que consiste em estirpes com os números de depósito NRRL B-21579, NRRL B-21580, NRRL B-21581, NRRL B-21635, e NRRL B-21636.
13. Método de acordo com a reivindicação 11, em que a δ-endotoxina modificada é tal que é expressa pela sequência genética de B. thuringiensis estranha que está presente numa estirpe seleccionada a partir do grupo que consiste em estirpes com os números de depósito NRRL B- 21774, NRRL B-21745, NRRL B-21746, NRRL B-21747, NRRL B- 21748, NRRL B-21749, NRRL B-21750, NRRL B-21751, NRRL B- 21752, NRRL B-21753, NRRL B-21754, NRRL B-21755, NRRL B- 21756, NRRL B-21757, NRRL B-21758, NRRL B-21759, NRRL B- 21760, NRRL B-21761, NRRL B-21762, NRRL B-21763, NRRL B- 21764, NRRL B-21765, NRRL B-21766, NRRL B-21767, NRRL B- 21768, NRRL B-21769, NRRL B-21770, NRRL B-21771, NRRL B- PE 1503624 - 7 - 21772, NRRL B-21773, NRRL B-21774, NRRL B-21775, NRRL B-21776, NRRL B-21777, NRRL B-21778 e NRRL B-21779.
14. Método de acordo com a reivindicação 11, em que a δ-endotoxina modificada é seleccionada a partir do grupo que consiste em Cry3Bb.11230, Cry3Bb.11231, Cry3Bb.11232, Cry3Bb.11233, Cry3Bb.11234, Cry3Bb.11235, Cry3Bb.11236, Cry3Bb.11237, Cry3Bb.11238, Cry3Bb.11239, Cry3Bb.11241, Cry3Bb.11242, Cry3Bb.11098, uma proteína insecticida binária CryET33 e CryET34, uma proteína insecticida binária CryET80 e CryET76, uma proteína insecticida binária ticioo e tlClOl, e uma proteína insecticida binária PS149B1.
15. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 até 6, com o passo adicional de tratamento do solo em que a semente é plantada com o composto neonicotinóide.
16. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 até 6, com o passo adicional de cultivar a semente e a planta que cresce a partir da semente de acordo com prática de não lavrar a terra.
17. Método de acordo com a reivindicação 1, em que se determina se a semente é para ser plantada num local com um nível de infestação de praga de insecto que estaria indicada a necessidade do tratamento com um insecticida que compreende determinar se a semente é para ser plantada num PE 1503624 - 8 - local com um nível de infestação de praga de insecto que indicaria a necessidade do tratamento com um insecticida neonicotinóide.
18. Método de acordo com as reivindicações 7, 10, e 11, em que a semente é tratada com uma quantidade de composto neonicotinóide a partir de cerca de 0,1 g/100 kg de semente até cerca de 1000 g/100 kg de semente.
19. Método de acordo com a reivindicação 18, em que a semente é tratada com o composto neonicotinóide numa quantidade a partir de cerca de 5 g/100 kg de semente até cerca de 600 g/100 kg de semente.
20. Método de acordo com a reivindicação 19, em que a semente é tratada com um composto neonicotinóide a partir de cerca de 10 g/100 kg de semente até cerca de 400 g/100 kg de semente.
21. Método de acordo com a reivindicação 20, em que a semente é tratada com um composto neonicotinóide a partir de cerca de 20 g/100 kg de semente até cerca de 300 g/100 kg de semente.
22. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 7, 10, e 11, em que a planta agronómica é seleccionada a partir do grupo que consiste em cereais, trigo, cevada, centeio, aveia, arroz, sorgo, beterraba, frutos parecidos com as peras, frutos de caroço, maçã, PE 1503624 - 9 - pêra, ameixa, pêssego, alperce Japonês, ameixa seca, amêndoa, cereja, morango, framboesa, amora, legumes, feijão encarnado, lentilha, ervilha, soja, oleaginosas, colza, mostarda, papoila, azeitona, cacau, coco, planta do rícino, amendoim, Curcubitáceas abóbora, pepino, melão, citrinos, laranja, limão, toranja, tangerina, toranja de Watson, citrus natsidaidai, vegetais alface, couve, couve do aipo, rábano Chinês, cenoura, cebola, tomate, batata, pimenta verde, canforeiras, abacate, canela, cânfora, milho, tabaco, nozes, café, cana de açúcar, chá, vinha, lúpulo e banana.
23. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 7, 10, e 11, em que a planta agronómica é seleccionada a partir do grupo que consiste em arroz, trigo, cevada, centeio, milho, batata, cenoura, batata doce, beterraba sacarina, feijão, ervilha, chicória, alface, couve, couve-flor, brócolos, nabo, rabanete, espinafre, espargo, cebola, alho, beringela, pimento, aipo, canot, abóbora, variedade de abóbora, curgete, pepino, maçã, pêra, marmelo, melão, ameixa, cereja, pêssego, nectarina, alperce, morango, uva, framboesa, amora, ananás, abacate, papaia, manga, banana, soja, tomate, sorgo, e framboesas, banana.
24. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 7, 10, e 11, em que a planta agronómica é seleccionada a partir do grupo que consiste em algodão, linho, cânhamo, juta, rama, sisal, pinheiro, carvalho, - 10 - PE1503624 madeira vermelha, choupo, borracha, freixo, abeto, bétula, cónio, lariço, mogno, ébano, arbustos ornamentais e árvores ornamentais.
25. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 7, 10, e 11, em que a planta agronómica é seleccionada a partir do grupo que consiste em milho, cereais, cevada, centeio, arroz, vegetais, trevos, legumes, feijões, ervilhas, alfafa, cana-de-açúcar, beterrabas sacarinas, tabaco, semente de colza (canola), girassol, açafroa, e sorgo.
26. Método de acordo com a reivindicação 25, em que a planta agronómica é milho.
27. Método de acordo com a reivindicação 25, em que a planta agronómica é a planta do grão de soja.
28. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 7, 10, e 11, em que o tratamento da semente da planta compreende, adicionalmente, o tratamento da semente com um fungicida seleccionado do grupo que consiste em mefenoxam, oxadixil, tebuconazole, tetraconazole, simeconazole, fludioxonil, fluquinconazole, difenoconazole, captano, metalaxil, carboxin, azoxistrobin, ipconazole, e tirame.
29. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 7, 10, e 11, em que a semente possui um PE1503624 - 11 - evento transgénico, que proporciona à planta uma resistência a um herbicida e o tratamento compreende uma aplicação foliar do herbicida.
30. Método de acordo com a reivindicação 29 em que o herbicida é seleccionado do grupo que consiste de reguladores de crescimento, ácidos fenoxiacéticos, ácidos fenoxipropiónicos, ácidos fenoxibutiricos, ácidos benzóicos, ácidos picolinicos, e compostos relacionados, clopiralid, quinclorac, inibidores de transporte de auxina, semicarbonas, s-triazinas, outras triazinas, ureias substituídas, uracilos, benzotiadiazoles, benzonitroles, fenilcarbamatos, piridazinonas, fenipiriddazinas, inibidores de pigmentos, piridazinonas, isoxazoles, inibidores de crescimento, interruptores relativos à mitose, dinitroanilinas, oxisulforons, piridinas, amidas, inibidores de rebentos emergentes da germinação, carbamotiatos, inibidores de raízes apenas de plantas da germinação de sementes, amidas, fenilureias, inibidores de raízes e rebentos de plantas da germinação de sementes, cloroacetamidas, inibidores de síntese de aminoácidos aromáticos, inibidores de aminoácidos de cadeia ramificada, sulfonilureias, midazolinonas, triazolopirimidinas, trimidiniloxibenzoatos, inibidores de síntese de lípidos, arioxifenoxiproprionatos, ciclohexanodionas, inibidores de biossíntese de parede celular, nitrilos, benzamidas, interruptores de membrana celular, ácido sulfúrico diluído, dihidrogenossulfato de monocarbamida, óleos herbicidas, PE 1503624 - 12 - bipiridiliums, éteres difenilicos, oxidiazoles, N-fenilheterociclos, e inibidores de glutaminossintetase.
31. Método de acordo com a reivindicação 29, em que o herbicida é seleccionado do grupo que consiste em clorimuron-etilo, ácido cloroacético, clorotoluron, clorprofam, clorsulfuron, clortal-dimetilo, clortiamid, cinmetilin, cinosulfuron, cletodim, clodinafop-propargilo, clomazona, clomeprop, clopiralid, cloransulam-metilo, cianazina, cicloato, ciclosulfamuron, cicloxidim, cihalogenofop-butilo, 2,4-D, daimuron, dalapon, dazomet, 2,4DB, desmedifam, desmetrin, dicamba, diclobenil, diclorprop, diclorprop-P, diclofop-metil, difenzoquat metilsulfato, diflufenican, dimefuron, dimepiperato, dimetaclor, dimetametrin, dimetenamida, dimetipin, ácido dimetilarsinico; dinitramina, dinocap, dinoterb, difenamid, dibrometo de diquat, ditiopir, diuron, DNOC, EPTC, esprocarb, etalfluralin, etametsulfuron-metilo, etofumesato, etoxisulfuron, etobenzanid, fenoxaprop-P- etilo, fenuron, sulfato ferroso, flamprop-M, flazasulfuron, fluazifop-P-butilo, fluazifop-P-butilo, flucloralin, flumetsulam, flumiclorac-pentilo, flumioxazin, fluometuron, fluoroglicofen-etilo, flupoxam, flupropanato, flupirsulfuron-metilo-sódio, flurenol, fluridona, flurocloridona, fluroxipir, flurtamona, flutiacet-metilo, fomesafen, fosamina, glufosinato-amónio, glifosato, halogenosulfuron-metilo, halogenoxifop, HC-252, hexazinona, imazametabenz-metilo, imazamox, imazapir, imazaquin, imazetapir, imazosuluron, imidazilinona, indanofan, PE 1503624 - 13 - ioxinil, isoproturon, isouron, isoxaben, isoxaflutole, lactofen, lenacil, linuron, MCPA, MCPA-tioetilo, MCPB, mecoprop, mecoprop-P, mefenacet, metamitron, metazaclor, metabenztiazuron, ácido metilarsónico, metildimron, isotiocianato de metilo, metobenzuron, metobromuron, metolaclor, metosulam, metoxuron, metribuzin, metsulfuron-metilo, molinato, monolinuron, naproanilida, napropamida, naftalam, neburon, nicosulfuron, ácido nonanóico, norflurazon, ácido oleico (ácidos gordos), orbencarb, orizalin, oxadiargil, oxadiazon, oxasulfuron, oxifluorfen, dicloreto de paraquat, pebulato, pendimetalin, pentaclorofenol, pentanoclor, pentoxazona, óleos do petróleo, fenmedifam, picloram, piperofos, pretilaclor, primisulfuron-metilo, prodiamina, prometon, prometrin, propaclor, propanil, propaquizafop, propazina, profam, propisoclor, propizamida, prosulfocarb, prosulfuron, piraflufen-etilo, pirazolinato, pirazosulfuron-etilo, pirazoxifen, piributicarb, piridato, piriminobac-metilo, piritiobac de sódio, quinclorac, quinmerac, quinoclamina, quizalofop, quizalofop-P, rimsulfuron, setoxidim, siduron, simazina, simetrin, clorato de sódio, Sistema-STS, sulcotriona, sulfentrazona, sulfometuron-metilo, sulfo-sulfuron, ácido sulfúrico , óleos de alcatrão, 2,3,6-TBA, TCA- sódio, tebutam, tebutiuron, terbacil, terbumeton, terbutilazina, terbutrin, tenilclor, tiazopir, tifensulfuron-metilo, tiobencarb, tiocarbazil, tralquoxi-dim, triallato, triasulfuron, triaziflam, tribenuron- metilo, triclopir, trietazina, trifluralina, tri-flusulfuron-metilo, vernolato, e suas misturas. PE1503624 - 14 -
32. Método de acordo com a reivindicação 29, em que o herbicida é seleccionado do grupo que consiste em glifosato, glifosinato, glufosinato, imidazilinona e sistema STS.
33. Método de acordo com a reivindicação 32, em que o herbicida seleccionado compreende o glifosato.
34. Método de acordo com a reivindicação 32, em que a δ-endotoxina é seleccionada a partir de Cry3Bb 11231 e Cry3Bb 11098.
35. Método de acordo com qualquer das reivindicações 7, 10, e 11, em que a semente é tratada com um composto neonicotinóide que é um componente do revestimento de libertação controlada.
36. Método de reprodução de uma planta híbrida com rendimento e/ou vitalidade aumentados a partir de duas plantas progenitoras, método este que compreende: tratar as sementes de uma ou de ambas plantas progenitoras com um composto neonicotinóide antes de plantar as sementes, em que a semente de uma ou de ambas plantas progenitoras contêm uma sequência de polinucleótido estranho que expressa para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas; polinizando a planta fêmea com o pólen da planta macho; e PE1503624 - 15 - colhendo a semente produzida pela planta fêmea.
37. Método de acordo com a reivindicação 36, em que a proteína insecticida compreende uma toxina de insecto.
38. Método de acordo com a reivindicação 37, em que a toxina de insecto é uma delta-endotoxina Bacillus thuringiensis.
39. Método de acordo com a reivindicação 37, em que a toxina de insecto é uma delta-endotoxina Bacillus thuríngiensis modificada do tipo da que é descrita na reivindicação 14.
40. Método de aumentar o rendimento e/ou vitalidade de uma planta agronómica que cresceu a partir de uma semente que é plantada num local onde o tratamento da semente ou da planta agronómica com um insecticida não está indicado, método este que compreende tratar a semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que expressa para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas, com um composto neonicotinóide e plantar a semente num local onde o tratamento da semente ou da planta agronómica com um insecticida não é praticado.
41. Método de aumentar o rendimento e/ou - 16 - PE 1503624 vitalidade de uma planta agronómica que cresceu a partir de uma semente que é plantada num local com um nivel de infestação por um insecto que é uma praga agronómica contra a qual um composto neonicotinóide tem uma actividade insecticida, método este que compreende tratar a semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas, com um composto neonicotinóide e plantar a semente num local onde o tratamento insecticida da semente ou da planta agronómica não é praticado.
42. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 e 41, em que plantando a semente num local onde o tratamento da semente ou da planta agronómica com um insecticida não é praticado compreende plantar a semente numa plantação referente ao distrito em que não foi utilizado insecticida na plantação durante o ano anterior.
43. Método de acordo com a reivindicação 42, em que plantando a semente tratada num local onde o tratamento da semente ou da planta agronómica com um insecticida não é praticado compreende plantar a semente numa plantação referente ao distrito onde não foi utilizado insecticida na plantação durante o ano anterior.
44. Método de acordo com a reivindicação 40, em que plantando a semente tratada num local onde o tratamento - 17 - PE1503624 da semente ou da planta agronómica com um insecticida não é praticado compreende plantar a semente num concelho onde não foi utilizado insecticida na plantação durante o ano anterior.
45. Método de acordo com a reivindicação 44, em que plantando a semente tratada num local onde o tratamento da semente ou da planta agronómica com um insecticida não é praticado compreende plantar a semente num concelho onde não foi utilizado insecticida neonicotinóide na plantação durante o ano anterior.
46. Método de aumentar o rendimento e/ou vitalidade de uma planta agronómica que cresceu a partir de uma semente que é plantada num local com um nível de infestação por um insecto que é uma praga agronómica contra a qual um composto neonicotinóide tem uma actividade insecticida, método este que compreende: a. tratar a semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambas, com um insecticida neonicotinóide; e b. plantar a semente tratada num local com um nível de infestação por insecto abaixo do qual este tratamento insecticida está indicado.
47. Semente que é tratada pelo método de acordo com qualquer uma das reivindicações 7, 10 e 11. PE 1503624 - 18 -
48. Método de aumentar o rendimento e/ou vitalidade de uma planta agronómica que cresceu a partir de uma semente que compreende uma sequência de polinucleótido estranho que codifica para a produção de uma proteína insecticida, ou uma sequência de polinucleótido estranho que proporciona resistência ao herbicida, ou ambos, método este que compreende: a. seleccionar um local no qual a semente vai ser plantada onde o nível de infestação por um insecto está abaixo do qual o tratamento com um insecticida está indicado; e b. realizar uma acção que é seleccionada do grupo que consiste em: i. tratar a semente com um composto neonicotinóide; e ii. plantar no local a semente que foi tratada com um composto neonicotinóide. Lisboa, 7 de Dezembro de 2007