PT106367B

PT106367B - SYSTEM FOR DETERMINING THE BLOOD TYPE OF HUMANS AND RESPECT METHOD OF USE

Info

Publication number: PT106367B
Application number: PT106367A
Authority: PT
Inventors: Graça Maria Henriques Minas; Filomena Maria Da Rocha Menezes De Oliveira Soares; Sara Filomena Ribeiro Pimenta
Original assignee: Univ Do Minho
Priority date: 2012-06-06
Filing date: 2012-06-06
Publication date: 2014-08-12
Also published as: PT106367A

Abstract

A PRESENTE INVENÇÃO ESTÁ RELACIONADA COM UM SISTEMA E RESPETIVO MÉTODO DE FUNCIONAMENTO, PARA ANÁLISES CLÍNICAS E CONSISTE NUMA SOLUÇÃO PORTÁTIL, REUTILIZÁVEL E DE BAIXO CUSTO QUE PERMITE A DETERMINAÇÃO DOS TIPOS SANGUÍNEOS ABO-RH DE UMA FORMA SIMPLES, RÁPIDA, SEGURA E EM QUALQUER LOCAL. O MÉTODO DE FUNCIONAMENTO BASEIA-SE NA PREPARAÇÃO DE QUATRO AMOSTRAS, RECORRENDO AO PROTOCOLO CONVENCIONAL EM LÂMINA, EM QUE SÃO UTILIZADAS AMOSTRAS DE SANGUE TOTAL E SOLUÇÕES COMERCIAIS DE ANTICORPOS TIPO A, E, AB E D. O SISTEMA RECORRE À ESPETROFOTOMETRIA PARA DETETAR A REAÇÃO DE AGLUTINAÇÃO E ASSIM REALIZAR A ANÁLISE E É COMPOSTO POR UM ECRÃ, UMA LÂMINA INTERMÉDIA (1) COM QUATRO CAVIDADES DE REGIÕES DE TESTE (2) ONDE SE COLOCAM AS AMOSTRAS A ANALISAR E OS RESPETIVOS REAGENTES; COMPONENTES OPTOELETRÓNICOS, CONCRETAMENTE, CONJUNTOS DE LEDS (5) E A SUA ELETRÓNICA DE CONTROLO, E FOTODÍODOS (6) E A SUA ELETRÓNICA DE LEITURA (7) . ESTA INVENÇÃO CARATERIZA-SE POR RECORRER À MEDIÇÃO DE TRÊS VALORES DE DENSIDADE ÓTICA, POR CADA REGIÃO DE TESTE DA LÂMINA, EM COMPRIMENTOS DE ONDA ESPECÍFICOS. ESTES VALORES DE DENSIDADE ÓTICA SÃO OBTIDOS ATRAVÉS DO SISTEMA DE ILUMINAÇÃO COM LEDS OU COM LUZ BRANCA.The present invention relates to a system and a working method for clinical analyzes and consists of a portable, reusable and low cost solution which allows the determination of the ABO-RH blood types in a simple, fast, safe and non-hazardous manner . THE FUNCTIONING METHOD IS BASED ON THE PREPARATION OF FOUR SAMPLES, REFERRING TO THE CONVENTIONAL PROTOCOL ON SLAUGHTER, WHICH SAMPLES OF TOTAL BLOOD AND COMMERCIAL SOLUTIONS OF TYPE A, AND, AB AND D ANTIBODIES ARE USED. THE SYSTEM WILL GO TO SPECTOPHETOMETRY TO DETECT THE REACTION OF AGGLUTINATION AND THEREFORE ANALYSIS AND IS COMPOSED BY A SCREEN, AN INTERMEDIATE BLADE (1) WITH FOUR CAVITIES OF TEST REGIONS (2) WHERE THE SAMPLES TO BE ANALYZED AND RESPECTIVE REAGENTS ARE PLACED; OPTOELETRONIC COMPONENTS, CONCRETELY, SETS OF LEDS (5) AND TO THEIR CONTROL ELECTRONICS, AND PHOTODIODOS (6) AND TO THEIR READING ELECTRONICS (7). This invention is characterized by reference to the measurement of three optical density values, for each region of the blade test, in specific wave lengths. THESE OPTICAL DENSITY VALUES ARE OBTAINED THROUGH THE LIGHTING SYSTEM WITH LEDS OR WITH WHITE LIGHT.

Description

SISTEMA PARA DETERMINAÇÃO DO TIPO SANGUÍNEO DE HUMANOS ESYSTEM FOR DETERMINING BLOOD TYPE OF HUMANS AND

RESPETIVO MÉTODO DE UTILIZAÇÃORESPECT METHOD OF USE

Domínio da InvençãoField of the Invention

A presente invenção insere-se no domínio das análises clínicas, consistindo num sistema para determinação do tipo sanguíneo ABO-Rh de humanos por deteção da aglutinação do sangue total com os respetivos anticorpos, através de espetrofotometria e respetivo método de deteção.The present invention is in the field of clinical analysis, consisting of a system for determining the ABO-Rh blood type of humans by detecting agglutination of whole blood with its antibodies by spectrophotometry and its detection method.

Antecedentes da Invenção sangue é constituído por diversos componentes. Em termos gerais, é formado por um fluido principal, o plasma sanguíneo, e por componentes celulares. Destes, são osBackground of the Invention Blood is made up of several components. In general terms, it is formed by a major fluid, blood plasma, and cellular components. Of these are the

eritrócitos os mais relevantes, no the most relevant red blood cells in the que what diz say respeito à respect to determinação dos tipos sanguíneos, determination of blood types, uma an vez turn que são that are os the antigénios presentes na superfície surface antigens destas of these células cells que what definem o tipo sanguíneo de um indivíduo. define an individual's blood type. Quando se pretende classificar o When you want to classify the tipo type de in sangue blood num on one

indivíduo recorre-se usualmente a dois sistemas sanguíneos, ABO e Rh.The individual usually resorts to two blood systems, ABO and Rh.

sistema sanguíneo ABO é definido pela existência de antigénios na superfície dos eritrócitos do tipo A (sangue do tipo A) , do tipo B (sangue do tipo B) ou ambos os tipos (sangue do tipo AB) . Podem ainda existir eritrócitos que não têm antigénios A nem B (sangue do tipo 0) . No que diz respeito ao plasma sanguíneo, um indivíduo com sangue do tipo A contém anticorpos do tipo B que atacam os antigénios tipo B. Seguindo a mesma lógica, o plasma sanguíneo de um indivíduo com sangue tipo B contém anticorpos tipo A. Portanto, o plasma de um dado tipo sanguíneo contém o isoanticorpo natural (anticorpo A e/ou anticorpo B) que corresponde ao antigénio que não está presente na superfície dos seus eritrócitos. Por essa razão o tipo sanguíneo AB não contém nenhum anticorpo no seu plasma, e o sangue do tipo O contém os anticorpos A e B.ABO blood system is defined by the presence of antigens on the surface of the red blood cells type A (blood type A), type B (blood type B) or both types (blood type AB). There may also be erythrocytes that have neither A nor B antigens (blood type 0). With regard to blood plasma, an individual with type A blood contains type B antibodies that attack type B antigens. Following the same logic, the blood plasma of an individual with type B blood contains type A antibodies. Plasma of a given blood type contains the natural isoantibody (antibody A and / or antibody B) which corresponds to the antigen that is not present on the surface of its erythrocytes. For this reason blood type AB contains no antibodies in its plasma, and blood type O contains antibodies A and B.

sistema sanguíneo Rh é bastante complexo, com vários antigénios. Contudo, o termo Rh positivo é usualmente utilizado quando um indivíduo tem um antigénio Rh específico na superfície dos seus eritrócitos, o antigénio D. Pelo contrário, se o antigénio D está ausente diz-se que o indivíduo é Rh negativo.Rh blood system is quite complex with several antigens. However, the term Rh positive is usually used when an individual has a specific Rh antigen on the surface of their erythrocytes, antigen D. On the contrary, if antigen D is absent the individual is said to be Rh negative.

Portanto, a existência de grupos sanguíneos distintos faz com que um paciente não possa receber qualquer tipo de sangue no seu organismo, uma vez que este pode conter anticorpos que podem atacar os antigénios fornecidos.Therefore, the existence of distinct blood groups means that a patient cannot receive any type of blood in his or her body as it may contain antibodies that may attack the supplied antigens.

A determinação do tipo de sangue é assim um teste essencial que antecede o processo de transfusão sanguínea. Este pode ser crítico, especialmente em situações de emergência, uma vez que o estado do doente é preocupante e o tempo para a determinação do seu tipo de sangue é escasso. Para além disso, uma transfusão de um tipo sanguíneo errado pode acarretar riscos elevados para o paciente, ou até mesmo a sua morte.Blood type determination is thus an essential test prior to the blood transfusion process. This can be critical, especially in emergency situations, as the patient's condition is worrying and the time to determine their blood type is scarce. In addition, a transfusion of the wrong blood type may pose a high risk to the patient or even death.

Os processos existentes para a determinação do tipo sanguíneo dividem-se em dois grandes grupos: os testes manuais e os sistemas automáticos. Os métodos manuais são caracterizados por produzirem resultados muito rapidamente, adequando-se a situações de emergência. No entanto, a decisão final do teste depende do técnico que o realiza. Para além disso, são testes propícios à ocorrência de erro humano, já que todas as etapas até à decisão final estão dependentes do técnico analista. Relativamente aos sistemas automáticos, estes reduzem alguma subjetividade, através da automação dos procedimentos e/ou decisão de teste. Para além disso, são bastante precisos e fiáveis. Contudo, são complexos, de grandes dimensões, o que inviabiliza a sua portabilidade, economicamente dispendiosos e não conseguem produzir resultados tão rapidamente como no caso dos testes manuais. Tal facto pode ser crítico, especialmente em situações de emergência.Existing processes for blood type determination are divided into two broad groups: manual testing and automatic systems. Manual methods are characterized by producing results very quickly, adapting to emergencies. However, the final decision of the test depends on the technician performing it. In addition, these tests are conducive to the occurrence of human error, since all steps until the final decision are dependent on the analyst technician. Relative to automatic systems, they reduce some subjectivity by automating the procedures and / or testing decision. Moreover, they are very accurate and reliable. However, they are complex, large in size, making their portability unfeasible, economically expensive and unable to produce results as quickly as in the case of manual testing. This can be critical, especially in emergency situations.

Assim, a presente invenção surge como uma solução às limitações descritas, já que se trata de um dispositivo que automatiza o processo de determinação do tipo de sangue, que produz resultados rapidamente, que pode atuar próximo do paciente, devido à sua portabilidade, sendo assim adequado em situações de emergência e é economicamente competitivo.Thus, the present invention appears as a solution to the described limitations, since it is a device that automates the process of blood type determination, which produces results quickly, which can act close to the patient, due to its portability. suitable in emergency situations and is economically competitive.

A determinação dos grupos sanguíneos pode ser baseada em vários princípios, tais como: a utilização de marcadores de fluorescência, o uso de membranas porosas seletivas a células aglutinadas, o conhecimento da informação genética do indivíduo, ou ainda, a medição da transmitância ótica ou densidade ótica das amostras.Blood group determination can be based on several principles, such as: the use of fluorescence markers, the use of agglutinated cell-selective porous membranes, the knowledge of the individual's genetic information, or the measurement of optical transmittance or density. optics of the samples.

Os documentos de patente WO9821593A1, US6955889B1, US5776711A e EP1059534A2 descrevem a utilização de anticorpos marcadores de fluorescência (tipos A, B e D) que se ligam aos correspondentes antigénios na superfície das células vermelhas do sangue. Estes são depois identificados pela técnica de citometria de fluxo, permitindo assim a determinação do tipo sanguíneo em análise. Esta tecnologia permite ainda a identificação de anticorpos no correspondente plasma sanguíneo.WO9821593A1, US6955889B1, US5776711A and EP1059534A2 describe the use of fluorescence marker antibodies (types A, B and D) that bind to the corresponding antigens on the surface of red blood cells. These are then identified by the flow cytometry technique, thus allowing the determination of the blood type under analysis. This technology also allows the identification of antibodies in the corresponding blood plasma.

documento de patente US7718420 descreve um biochip microfluídico portátil para a determinação dos grupos sanguíneos baseado na deteção da reação de aglutinação. 0 dispositivo contém um microcanal para a inserção da amostra de sangue, um sistema de microcanais para a entrada dos reagentes, um sistema de micromisturadores para facilitar a mistura entre os reagentes e a amostra, uma microcâmara de reação e, ainda, um microfiltro de forma a reter as células aglutinadas que possam ter resultado da reação entre a amostra e o respetivo reagente e assim determinar o tipo de sangue.US7718420 describes a portable microfluidic biochip for the determination of blood groups based on the detection of the agglutination reaction. The device contains a microchannel for insertion of the blood sample, a microchannel system for reagent entry, a micromixer system for easy mixing between reagents and the sample, a reaction microchamber and a microfilter. to retain the agglutinated cells that may have resulted from the reaction between the sample and its reagent and thereby determine the blood type.

documento de patente US4851210 descreve a utilização de uma membrana de afinidade a regiões especificas das células sanguíneas, para a distinção dos grupos sanguíneos. Esta membrana pode ser acoplada a uma amostra de sangue de forma a constituir um dispositivo para classificação do tipo sanguíneo.US4851210 describes the use of an affinity membrane to specific regions of blood cells for the distinction of blood groups. This membrane may be coupled to a blood sample to form a device for blood type classification.

documento de patente US20060105402 apresenta um dispositivo que utiliza um filtro poroso, especificamente construído para permitir a passagem de células não aglutinadas na direção perpendicular à superfície, permitindo assim a classificação dos grupos sanguíneos.US20060105402 discloses a device using a porous filter specifically constructed to allow passage of unglutinated cells in the direction perpendicular to the surface, thereby permitting the classification of blood groups.

documento de patente US2009264318A1 descreve a realização de testes genéticos a um organismo como a forma de marcação inequívoca do mesmo, tornando assim possível a identificação dos antigénios na superfície dos eritrócitos, e assim determinar o tipo de sangue, a partir da informação genética do indivíduo.US2009264318A1 describes performing genetic tests on an organism as the unambiguous way of labeling it, thereby making it possible to identify antigens on the surface of the erythrocytes, and thus to determine the blood type from the genetic information of the individual.

documento de patente US6330058B1 descreve o uso da espetrofotometria para a determinação dos tipos sanguíneos. Neste, o espetro de densidade ótica de uma amostra de sangue diluída na presença de um reagente também sujeito a diluição é medido num intervalo de comprimentos de onda entre 200 nm a 1000 nm. Para além disso, o espetro de referência de uma amostra de controlo (respetiva amostra de sangue diluída em solução salina) é também obtido. Os reagentes utilizados são soluções comerciais de anticorpos (Anti-A, Anti-B e Anti-D), que permitem a classificação dos grupos sanguíneos ABO e Rh. As soluções são preparadas em cuvetes, e os espectros de densidade ótica são obtidos num espectrofotómetro comercial. Para cada um dos espetros é calculado um indicador numérico de aglutinação, que é obtido dividindo o declive da reta na região linear do espectro pelo declive da reta na região linear do espectro de referência. O valor resultante é depois multiplicado por 100. 0 índice de aglutinação (IA) é obtido subtraindo o resultado a 100. Um valor elevado de IA significa que se está perante uma amostra aglutinada (interação anticorpo-antigénio); pelo contrário, um valor baixo de IA, significa que não existiu interação entre o anticorpo e o antigénio presente na amostra, ou seja, a amostra é não aglutinada. Esta distinção entre os dois tipos de amostras permite aferir o tipo sanguíneo em análise. Neste tipo de procedimento, é necessário um espetrofotómetro, equipamento de grandes dimensões, o que invalida a portabilidade e a possibilidade de se realizar a análise em qualquer local, principalmente em situações de emergência. Para além disso, é necessário a preparação de uma amostra de controlo e de amostras envolvendo quantidades de reagentes superiores a 100 pL; é necessário efetuar um conjunto de diluições, quer das amostras de sangue, quer dos reagentes; é necessário esperar cerca de 1 minuto para se obter a reação antes de se poder proceder às medições espetrofotométricas; e são necessárias condições específicas para essas reações ocorrerem, como a utilização de incubadoras com temperatura controlada.US 6330058B1 describes the use of spectrophotometry for the determination of blood types. In this, the optical density spectrum of a diluted blood sample in the presence of a reagent also diluted is measured over a wavelength range of 200 nm to 1000 nm. In addition, the reference spectrum of a control sample (its saline diluted blood sample) is also obtained. The reagents used are commercial antibody solutions (Anti-A, Anti-B and Anti-D), which allow the classification of ABO and Rh blood groups. The solutions are prepared in cuvettes, and optical density spectra are obtained on a commercial spectrophotometer. For each spectrum, a numerical indicator of agglutination is calculated, which is obtained by dividing the slope of the line in the linear region of the spectrum by the slope of the line in the linear region of the reference spectrum. The resulting value is then multiplied by 100. The agglutination index (IA) is obtained by subtracting the result from 100. A high AI value means that it is in front of a agglutinated sample (antibody-antigen interaction); On the contrary, a low AI value means that there was no interaction between the antibody and antigen present in the sample, ie the sample is unglued. This distinction between the two sample types allows us to gauge the blood type under analysis. In this type of procedure, a spectrophotometer, large equipment is required, which invalidates the portability and the possibility to perform the analysis in any place, especially in emergency situations. In addition, preparation of a control sample and samples involving reagent quantities greater than 100 µL is required; a set of dilutions must be performed on both blood samples and reagents; It takes about 1 minute to obtain the reaction before spectrophotometric measurements can be made; and specific conditions are required for such reactions to occur, such as the use of temperature controlled incubators.

O documento de patente US5169601A refere-se a um sistema não portátil para deteção da reação de aglutinação imunológica (deteção de anticorpos, antigénios, proteínas, entre outros). A reação de aglutinação é detetada por utilização de um LED, sendo baseada no padrão de transmissão da luz emitida pelo LED através de uma amostra. Este sistema possui sensores CCD, como detetores de luz, lentes convexas, um CPU, uma placa com poços de fundo cónico, para reservatório de várias amostras, e ainda motores para movimento dessas placas. A determinação do tipo sanguíneo é baseada na utilização de células eritrocitárias que são colocadas na placa com poços em conjunto com reagentes anticorpos. Posteriormente, a transmitância ótica da amostra é analisada, tendo em conta a utilização do conjunto LED/lente convexa/sensor CCD.US5169601A relates to a non-portable system for detecting the immune agglutination reaction (detection of antibodies, antigens, proteins, among others). The agglutination reaction is detected by the use of an LED, based on the light transmission pattern emitted by the LED through a sample. This system has CCD sensors such as light detectors, convex lenses, a CPU, a plate with conical bottom wells for multi-sample reservoir, and motors to move these plates. Blood type determination is based on the use of erythrocyte cells that are placed in the well plate together with antibody reagents. Subsequently, the optical transmittance of the sample is analyzed taking into account the use of the LED / convex lens / CCD sensor array.

documento de patente WO9417212A1 apresenta um sistema portátil para detetar e monitorizar uma reação de aglutinação à medida que esta vai ocorrendo, permitindo assim a deteção de hormonas, anticorpos, antigénios, entre outros. Este sistema é constituído por um conjunto de capilares, para fluxo da amostra ao longo dos vários estágios de aglutinação. Em cada um dos capilares, existe um conjunto LED/fotodíodo para análise da amostra, sendo que o sistema monitoriza a aglutinação das partículas (nos 3 capilares) com base nas propriedades de dispersão de luz das mesmas, ou seja, as alterações ao nível da densidade ótica da amostra são monitorizadas ao longo do tempo. A deteção da reação de aglutinação é baseada na diferença da densidade ótica que é medida em cada capilar à medida que a amostra chega aos respetivos capilares. É uma medição sequencial ao longo do tempo, ou seja, cada amostra é medida 3 vezes em 3 instantes de tempo diferentes e em 3 capilares diferentes. Assim, o objetivo do sistema é detetar a presença da reação de aglutinação e ainda o seu tipo (forte ou fraca).WO9417212A1 discloses a portable system for detecting and monitoring an agglutination reaction as it occurs, thereby allowing the detection of hormones, antibodies, antigens, among others. This system consists of a set of capillaries for sample flow through the various agglutination stages. In each of the capillaries, there is an LED / photodiode array for sample analysis, and the system monitors particle agglutination (in the 3 capillaries) based on their light scattering properties, ie changes in light level. Optical density of the sample are monitored over time. Detection of the agglutination reaction is based on the difference in optical density that is measured in each capillary as the sample reaches its capillaries. It is a sequential measurement over time, ie each sample is measured 3 times at 3 different time points and 3 different capillaries. Thus, the objective of the system is to detect the presence of the agglutination reaction and its type (strong or weak).

Contrariamente a todos os sistemas, dispositivos e métodos conhecidos e apresentados até agora, apresenta-se uma tecnologia que consiste num sistema automático, portátil, para a determinação dos grupos sanguíneos baseado num protocolo simples de teste em lâmina e na medição discreta de três valores de densidade ótica por amostra, em comprimentos de onda diferentes, recorrendo a um sistema de Díodos Emissores de Luz (LEDs), ou em alternativa na utilização de apenas uma luz branca e filtros óticos para o sistema de iluminação.Contrary to all systems, devices and methods known and presented so far, there is presented a technology consisting of an automatic, portable system for the determination of blood groups based on a simple slide test protocol and the discrete measurement of three values of optical density per sample at different wavelengths using a Light Emitting Diode (LED) system or alternatively using only one white light and optical filters for the lighting system.

Assim, a preparação das amostras é rápida, simples, sem necessidade de diluição de reagentes e envolve a utilização de uma reduzida quantidade de reagentes de anticorpos, contrariamente à patente US6330058B1, levando assim a uma diminuição do tempo de análise e à redução dos custos com o gasto de reagentes.Thus, sample preparation is fast, simple, with no reagent dilution, and involves the use of a small amount of antibody reagents, contrary to US6330058B1, thus leading to a shorter analysis time and reduced assay costs. the expense of reagents.

Adicionalmente, na determinação do tipo sanguíneo, a presente invenção utiliza sangue total, e não células eritrocitárias como descrito em US5169601A.Additionally, in determining blood type, the present invention utilizes whole blood, not erythrocyte cells as described in US5169601A.

Descrição geral da invençãoGeneral Description of the Invention

A presente invenção consiste num novo sistema e respetivo método de determinação do tipo sanguíneo ABO-Rh de humanos, baseado em espetrofotometria. Com este novo sistema não é necessário existirem amostras de controlo, é rápido, elimina a subjetividade associada à interpretação dos resultados por parte dos técnicos e é simples, uma vez que os reagentes e as amostras de sangue total não necessitam de ser sujeitas a diluições, centrifugação ou incubação a temperatura controlada. 0 protocolo de teste aplicado é baseado no procedimento em lâmina utilizado no teste manual convencional, utilizando-se por isso, uma lâmina que possui quatro regiões de teste, onde serão colocados o sangue total e em cada região um tipo de reagente anticorpo que consiste em soluções comerciais de anticorpos tipo A (AntiA), tipo B (Anti-B), tipo AB (Anti-AB) e tipo D (Anti-D).The present invention is a novel system and method for determining human ABO-Rh blood type based on spectrophotometry. With this new system there is no need for control samples, it is fast, eliminates subjectivity associated with the interpretation of results by technicians and is simple as reagents and whole blood samples do not need to be diluted, centrifugation or incubation at controlled temperature. The test protocol applied is based on the slide procedure used in the conventional manual test, using, therefore, a slide that has four test regions, where the whole blood will be placed and in each region an antibody reagent type consisting of commercial solutions of Type A (AntiA), Type B (Anti-B), Type AB (Anti-AB), and Type D (Anti-D) antibodies.

sistema é composto por quatro conjuntos de Díodos Emissores de Luz (LEDs) (5) a uma distância horizontal equivalente à distância entre as regiões da lâmina. Cada conjunto de LEDs irá compreender 3 LEDs que emitem uma gama de comprimentos de onda de 400 nm - 430 nm, 530 nm - 575 nm e maior que 7 50 nm, respetivamente. A vantagem de cada conjunto compreender 3 LEDs deve-se a uma análise precisa da amostra, em 3 comprimentos de onda relevantes para a classificação da amostra em aglutinada ou não aglutinada. Os feixes de luz irão incidir perpendicularmente sobre as amostras e, irão ser detetados pelos fotodíodos (6), sendo o sistema controlado por um microcontrolador que define qual o LED em funcionamento e por conversores correntetensão (7), de forma a produzir um valor de tensão proporcional à corrente gerada pelos fotodíodos, e que possa ser adquirido pelo ADC (Conversor Analógico Digital) do microcontrolador.The system consists of four sets of LEDs (5) at a horizontal distance equivalent to the distance between the blade regions. Each set of LEDs will comprise 3 LEDs that emit a wavelength range of 400 nm - 430 nm, 530 nm - 575 nm and greater than 750 nm, respectively. The advantage of each set comprising 3 LEDs is due to an accurate sample analysis at 3 wavelengths relevant for classifying the sample into agglutinated or unglued. The light beams will focus perpendicularly on the samples and will be detected by the photodiodes (6), the system being controlled by a microcontroller that defines which LED is in operation and current-voltage converters (7), to produce a value of voltage proportional to the current generated by the photodiodes, and which can be acquired by the ADC (Digital Analog Converter) of the microcontroller.

A escolha da gama de comprimentos de onda de análise das amostras foi selecionada tendo em conta as propriedades óticas das células sanguíneas - picos de absorção da hemoglobina e ainda a alteração das propriedades óticas do sangue total com o estado da aglutinação do sangue total com os reagentes anticorpos. Após a realização de testes experimentais com um sistema espetrofotométrico comercial e aplicando o método de deteção descrito, foi possível aferir as 3 gamas de comprimentos de onda selecionadas, como as mais adequadas para a distinção dos dois tipos de amostras: aglutinadas ou não aglutinadas. Assim, para cada comprimento de onda, a intensidade de luz detetada pelo fotodíodo (7) dependente das caracteristicas da amostra: amostra aglutinada ou não aglutinada, o que se traduz pelo facto de ter ocorrido ou não interação entre o antigénio presente no sangue e o anticorpo reagente, respetivamente. De preferência, os picos de emissão nos comprimentos de onda deverão rondar os 406 nm, 566 nm e 956 nm, que são os comprimentos de onda, dentro da gama referida, que permitem a correta e eficiente distinção entre amostras aglutinadas e não aglutinadas e, como consequência, a determinação dos tipos sanguíneos ABO-Rh, segundo os testes experimentais realizados.The choice of sample analysis wavelength range was selected taking into account the optical properties of blood cells - hemoglobin absorption peaks and also the change in optical properties of whole blood with the state of whole blood agglutination with reagents. antibodies. After conducting experimental tests with a commercial spectrophotometric system and applying the detection method described, it was possible to measure the 3 selected wavelengths as the most suitable for distinguishing the two types of samples: agglutinated or non-agglutinated. Thus, for each wavelength, the light intensity detected by the photodiode (7) depends on the characteristics of the sample: agglutinated or non-agglutinated sample, which translates into whether or not there was interaction between the antigen present in the blood and the reagent antibody, respectively. Preferably, the emission peaks at the wavelengths should be around 406 nm, 566 nm and 956 nm, which are the wavelengths within the said range which allow the correct and efficient distinction between agglutinated and non-agglutinated samples. consequently, the determination of ABO-Rh blood types according to the experimental tests performed.

microcontrolador recebe os três valores de tensão para cada uma das quatro cavidades das regiões de teste (2) da lâmina (1) , e tendo por base valores de tensão de referência, isto é valores obtidos apenas com os reagentes numa fase de calibração do sistema, calcula os três valores discretos de densidade ótica, por aplicação da lei de Lambert-Beer.The microcontroller receives the three voltage values for each of the four wells of the test regions (2) of the slide (1), and is based on reference voltage values, ie values obtained with reagents only in a system calibration phase. , calculates the three discrete optical density values by applying the Lambert-Beer law.

Após o cálculo dos valores de densidade ótica, o microcontrolador executa um conjunto de algoritmos, de forma a classificar cada uma das amostras em aglutinada ou não aglutinada. Os algoritmos de classificação das amostras baseiam-se na variação existente entre os três valores de densidade ótica obtidos pelos três LEDs de um mesmo conjunto de LEDs, ou seja, para uma dada região de amostra. A variação existente entre esses 3 valores de densidade ótica é distinta consoante o tipo de amostra analisada, aglutinada ou não aglutinada, permitindo assim classificar cada uma das amostras presentes na cavidade das regiões de teste. No final, tendo a classificação das quatro amostras, pode aferir-se o tipo de sangue em análise uma vez que cada tipo é caracterizado por aglutinar com um grupo especifico de anticorpos.After calculating the optical density values, the microcontroller executes a set of algorithms in order to classify each of the samples as agglutinated or non-agglutinated. The sample classification algorithms are based on the variation between the three optical density values obtained by the three LEDs of the same set of LEDs, ie for a given sample region. The variation between these 3 optical density values is different depending on the type of sample analyzed, agglutinated or unglued, thus allowing to classify each of the samples present in the cavity of the test regions. In the end, having the classification of the four samples, the blood type under analysis can be measured since each type is characterized by agglutination with a specific group of antibodies.

Mais concretamente, após a determinação dos três valores calculados de densidade ótica, para uma dada amostra e para os comprimentos de onda de 406 nm, 566 nm e 956 nm, são executados os algoritmos de classificação e decisão, recorrendo à seguinte sequência, introduzida no microcontrolador:In particular, after determining the three calculated optical density values for a given sample and for the wavelengths of 406 nm, 566 nm and 956 nm, the classification and decision algorithms are performed using the following sequence introduced in microcontroller:

São calculadas as diferenças entre os 3 valores de densidade ótica (DO), para uma dada amostra, através das expressões:The differences between the 3 optical density (OD) values for a given sample are calculated by the expressions:

diferença_l=sqrt((DO[566 nm]-DO[406 nm])*(DO[566 nm]DO[406 nm]));difference_l = sqrt ((OD [566 nm] -DO [406 nm]) * (OD [566 nm] OD [406 nm]));

diferença_2=sqrt((DO[956 nm]- DO[566 nm])*(DO[956 nm]DO[566 nm]));difference_2 = sqrt ((OD [956 nm] - OD [566 nm]) * (OD [956 nm] OD [566 nm]));

Se o valor determinado em diferença_l for menor que o valor de uma variável determinada previamente e experimentalmente (limite_maior) e se o valor da diferença_2 for menor que uma segunda variável também determinada previamente e experimentalmente (limite_menor), então a amostra é aglutinada, sendo atribuída à variável amostra o valor de 1. Se as duas condições anteriores não se verificarem então a amostra é não aglutinada sendo atribuída à variável amostra o valor de 0.If the value determined in difference_l is less than the value of a previously and experimentally determined variable (upper_limit) and if the value of difference_2 is less than a second variable also previously and experimentally determined (lower_limit), then the sample is agglutinated and assigned. If the two previous conditions are not met then the sample is unglued and the value of 0 is assigned to the sample variable.

Os valores das variáveis limite_maior e limite_menor são ajustados de acordo com os valores obtidos pelos testes experimentais, realizados com amostras de sangue padronizadas. Nos testes experimentais efetuados, utilizando apenas os 3 comprimentos de onda selecionados, é possível verificar os valores limite, das variáveis limite_maior e limite_menor, que permitiram uma distinção precisa entre amostras aglutinadas e não aglutinadas, isto baseado no conhecimento do tipo sanguíneo testado e no tipo de amostras. Assim, para os dois tipos de amostras aglutinadas e não aglutinadas, verificou-se quais os valores médios obtidos para as variáveis diferença_l e diferença_2, e com base nesses valores médios definiu-se valores limite para a distinção das amostras - limite_maior e limite_menor, sendo estes valores classificados como valores limites de referência. O valor limite maior rondará o 1.0 e o limite menor ronda o 0.2.The values of the upper_limit and lower_limit variables are adjusted according to the values obtained by the experimental tests performed with standardized blood samples. In the experimental tests performed, using only the 3 selected wavelengths, it is possible to verify the limit values of the upper_limit and lower_limit variables, which allowed a precise distinction between agglutinated and non-agglutinated samples, based on the knowledge of the blood type tested and the type. of samples. Thus, for both types of agglutinated and non-agglutinated samples, it was verified which average values were obtained for the variables difference_l and difference_2, and based on these average values, limit values were defined for the distinction of the samples - upper_limit and lower_limit. these values are classified as reference limit values. The higher limit value will be around 1.0 and the lower limit will be around 0.2.

Por fim, é executado o algoritmo de decisão, com base na tabela 1, de forma a concluir-se o tipo sanguíneo em análise.Finally, the decision algorithm, based on table 1, is executed in order to conclude the blood type under analysis.

Tabela 1 - Algoritmo de decisão do dispositivo (X - aglutinação).Table 1 - Device decision algorithm (X - agglutination).

Tipo Sanguíneo Type Blood Reação com: Reaction with: Anti-A Anti-A Anti-B Anti-B Anti-AB Anti-AB Anti-D Anti-D A positivo A positive X X X X X X A negativo To negative X X X X B positivo Positive B X X X X X X B negativo Negative B X X X X AB positivo Positive AB X X X X X X X X AB negativo Negative AB X X X X X X 0 positivo 0 positive X X O negativo The negative

O resultado de teste é apresentado no ecrã (display) do microcontrolador, fornecendo assim a informação ao utilizador, ecrã que pode ser tátil ou não, e o resultado de teste pode ser armazenado num cartão de memória (tipo micro SD) e/ou transmitido para um computador por USB e/ou comunicação sem fios.The test result is displayed on the microcontroller display, thus providing information to the user, which screen may be tactile or not, and the test result may be stored on a memory card (micro SD type) and / or transmitted. to a computer via USB and / or wireless communication.

Os LEDs deverão ser circulares com um diâmetro na gama dos 5 mm - 30 mm, gama esta adequada ao tamanho do feixe de luz dos LEDs.The LEDs should be circular with a diameter in the range of 5 mm - 30 mm, which is suitable for the size of the LED light beam.

Em termos de eficácia, verifica-se que a quantidade ideal dos reagentes para a correta deteção da aglutinação é 20 pL a 50 pL e desse volume de sangue total. Isto é, se numa região da lâmina se coloca 20 pL a 50 pL do reagente anti-A e h de sangue total, numa outra região deverá ser colocado 20 pL a 50 pL do reagente anti-B e M de sangue total, numa outra 20 pL a 50 pL do reagente anti-AB e de sangue total e na última 20 pL a 50 pL do reagente anti-D e de sangue total.In terms of efficacy, it is found that the optimal amount of reagents for the correct detection of agglutination is 20 pL to 50 pL and this whole blood volume. That is, if 20 µl to 50 µl of whole blood anti-A and h reagent is placed in one region of the slide, 20 µl to 50 µl of whole blood anti-B and M reagent should be placed in another region. pL to 50 pL anti-AB and whole blood reagent and last 20 pL to 50 pL anti-AB and whole blood reagent.

O material da lâmina utilizada deverá ser transparente, podendo ser vidro, poliestireno, entre outros, para possibilitar a passagem de luz. As cavidades das regiões de teste necessitam de ter um fundo plano para não afetar a medição ótica, mas podem ter qualquer formato, desde que possibilite que os feixes de luz dos 3 LEDs de cada conjunto fiquem confinados nessa região.The material of the blade used must be transparent, and may be glass, polystyrene, among others, to allow the passage of light. The test region wells need to have a flat bottom so as not to affect the optical measurement, but can be any shape as long as it allows the light beams of the 3 LEDs of each array to be confined within that region.

Durante o During the processamento, processing, é necessário garantir it is necessary to ensure o O alinhamento alignment entre in between o feixe the beam de luz, a amostra e light, the sample and os the fotodíodos, photodiodes, de in forma a way to que o feixe atravesse let the beam through perpendicularmente perpendicularly as regiões the regions de teste, que contêm which contain as at

amostras.samples.

Verifica-se que o sistema apresentado permite a distinção das amostras aglutinada e não aglutinada através da variação da grandeza de três valores de densidade ótica recolhidos para cada região de teste, sem a necessidade de preparação de uma amostra de controlo; e permitindo uma maior fiabilidade dos resultados uma vez que não se baseia apenas na transmissão de luz através de um capilar/poço de uma amostra.It is found that the presented system allows the distinction of agglutinated and non-agglutinated samples by varying the magnitude of three optical density values collected for each test region, without the need to prepare a control sample; and allowing greater reliability of results as it is not solely based on light transmission through a sample capillary / well.

A presente tecnologia para além de permitir a determinação rápida do tipo de sangue, adequando-se a situações de emergência médica na determinação do tipo sanguíneo humano, caracteriza-se pela sua especificidade e simplicidade: utilização de apenas uma lâmina de teste descartável. A lâmina de teste poderá ter qualquer formato mas terá de ter, obrigatoriamente, um fundo plano, de forma a permitir uma correta transmissão dos feixes de luz emitidos pelos LEDs.The present technology, besides allowing the rapid determination of blood type, adapting to medical emergencies in the determination of human blood type, is characterized by its specificity and simplicity: the use of only one disposable test slide. The test slide may be of any shape but must necessarily have a flat bottom to allow correct transmission of the light beams emitted by the LEDs.

Numa realização preferencial, o dispositivo de utilização é um dispositivo portátil, constituído por circuitos numa placa PCB superior (3) (Printed Circuit Board) com os quatro conjuntos compostos por três LEDs cada (5) e circuitos eletrónicos para controlar qual o LED em funcionamento em cada momento, alinhada paralelamente com a lâmina de teste e uma outra placa PCB inferior, constituindo a parte de leitura eletrónica do dispositivo (4) formada pelos fotodiodos (6) e por conversores corrente-tensão (7). A disposição dos PCBs e da lâmina de teste é paralela, sendo viável a configuração reversa (sistema de leitura na parte superior). Em qualquer configuração é necessário garantir o alinhamento entre o feixe de luz, a amostra e os fotodiodos, de forma a que o feixe atravesse perpendicularmente as regiões de teste.In a preferred embodiment, the user device is a portable device consisting of circuits on a Printed Circuit Board (3) with four sets consisting of three LEDs each (5) and electronic circuits to control which LED is in operation. at each moment, aligned parallel with the test slide and another lower PCB board, constituting the electronic reading portion of the device (4) formed by photodiodes (6) and current-voltage converters (7). The arrangement of the PCBs and the test slide is parallel and the reverse configuration is feasible (upper reading system). In any configuration it is necessary to ensure alignment between the light beam, the sample and the photodiodes so that the beam crosses perpendicularly to the test regions.

Numa outra realização, cada um dos sistemas de LEDs referido pode ser substituído por uma luz branca convencional com três filtros óticos passa-banda, centrados nos comprimentos de onda de 406 nm, 566 nm e 956 nm, com cerca de 20 nm a 30 nm de banda passante. Esses filtros óticos podem ser colocados por cima ou por baixo da lâmina de teste.In another embodiment, each of said LED systems may be replaced by a conventional white light with three optical bandpass filters, centered at the wavelengths of 406 nm, 566 nm and 956 nm, at about 20 nm to 30 nm. bandwidth These optical filters can be placed above or below the test slide.

Breve descrição das figurasBrief Description of the Figures

A figura 1 representa uma lâmina (1) com quatro cavidades de regiões de teste (2), utilizada para a colocação das amostras no sistema.Figure 1 represents a slide (1) with four wells of test regions (2) used for placing the samples in the system.

A figura 2 representa a disposição dos componentes eletrónicos em que (3) corresponde ao sistema de iluminação, (4) sistema de leitura em relação à lâmina de teste (1), (5) conjuntos de LEDs, (6) os fotodiodos e (7) os blocos de conversão corrente-tensão.Figure 2 shows the arrangement of the electronics where (3) corresponds to the lighting system, (4) reading system relative to the test slide (1), (5) LED sets, (6) photodiodes and ( 7) the current-voltage conversion blocks.

A figura 3 apresenta um resultado de teste para uma amostra de sangue tipo A negativo, isto é, os valores de densidade ótica discretos para cada um dos comprimentos de onda considerados na análise das amostras.Figure 3 shows a test result for a negative type A blood sample, ie the discrete optical density values for each of the wavelengths considered in the sample analysis.

A figura 4 apresenta uma segundo resultado de teste para uma amostra de sangue tipo B negativo.Figure 4 shows a second test result for a negative type B blood sample.

A figura 5 representa um exemplo de um dispositivo final, em que (8) corresponde à embalagem com tampa (10), de cor preta para um melhor isolamento da luz, (9) o suporte para a lâmina de teste.Fig. 5 is an example of an end device, wherein (8) corresponds to the black lid package (10) for better light isolation, (9) the test slide holder.

A figura 6 apresenta a tampa do dispositivo (10) caso seja utilizada a luz branca convencional com os filtros óticos, com quatro aberturas (11), de forma a permitir a entrada do feixe de luz.Figure 6 shows the cover of the device (10) if conventional white light is used with the four-aperture optical filters (11) to allow the light beam to enter.

Descrição Detalhada presente exemplo é demonstrativo, não se pretendendo limitar o âmbito da proteção.Detailed Description The present example is demonstrative and is not intended to limit the scope of protection.

Inicialmente será preparada a amostra que consiste nos seguintes passos:Initially a sample consisting of the following steps will be prepared:

1. Adicionar numa das cavidades de região de teste (2) de uma lâmina (1) 20 pL a 50 pL de reagente Anti-A, numa outra cavidade (2) adicionar 20 pL a 50 pL de reagente Anti-B, numa outra cavidade colocar 20 pL a 50 pL de reagente Anti-AB e numa outra cavidade colocar 20 pL a 50 pL de reagente Anti-D.1. Add in one of the test region wells (2) of one slide (1) 20 pL to 50 pL Anti-A reagent in another well (2) add 20 pL to 50 pL Anti-B reagent in another Into another well place 20 pL to 50 pL Anti-AB reagent and in another well place 20 pL to 50 pL Anti-AB reagent.

2. Adicionar sangue total com cerca de um quarto da quantidade de reagente, em cada uma das cavidades das regiões de teste da lâmina;2. Add whole blood with about one quarter of the amount of reagent in each well of the slide test regions;

3. Misturar o sangue e o reagente anticorpo uniformemente, durante cerca de 5 segundos.3. Mix blood and antibody reagent evenly for about 5 seconds.

Após a amostra se encontrar preparada, e após se calibrar o sistema, ou seja, obter os valores de tensão com a utilização de apenas reagentes anticorpos na lâmina, procede-se então à análise das amostras. Os passos são:After the sample is prepared and the system calibrated, ie obtaining the stress values using only antibody reagents on the slide, the samples are then analyzed. The steps are:

1. Inserir a lâmina no sistema exatamente no local e posição para o efeito, o que faz com que os conjuntos de LEDs e fotodíodos fiquem alinhados paralelamente com as regiões de teste;1. Insert the slide into the system exactly at the location and position for the purpose, which makes the LED and photodiode assemblies aligned parallel with the test regions;

2. O conjunto de LEDs (5) e respetivos circuitos eletrónicos entram em funcionamento, sendo que cada um dos LEDs acende alternadamente e é adquirido um valor de tensão para cada um deles. Esse valor é diretamente proporcional à quantidade de luz recebida pelo fotodíodo (6) em cada medição, gerando uma corrente elétrica que é depois convertida numa tensão pelo bloco de conversão (7);2. The set of LEDs (5) and their electronic circuits start working, each LED lighting alternately and a voltage value is acquired for each of them. This value is directly proportional to the amount of light received by the photodiode (6) in each measurement, generating an electric current which is then converted to a voltage by the conversion block (7);

3. Adquiridos os valores de tensão por parte do microcontrolador, são calculadas as densidades óticas para cada comprimento de onda, através do conhecimento dos respetivos valores de tensão aquando da calibração e pela aplicação da lei de Lambert-Beer;3. Once the microcontroller voltage values are acquired, the optical densities for each wavelength are calculated by knowing the respective voltage values during calibration and applying the Lambert-Beer law;

4. Com base nos valores de densidade ótica calculados, o microcontrolador efetua a determinação do tipo sanguíneo, tendo como base a execução dos algoritmos de classificação de cada amostra de região de teste e respetiva decisão;4. Based on the calculated optical density values, the microcontroller performs blood type determination based on the execution of the classification algorithms of each test region sample and its decision;

5. 0 resultado de teste é indicado num ecrã, informando o utilizador do tipo sanguíneo em análise.5. The test result is displayed on a screen informing the user of the blood type being analyzed.

A Figura 2 demonstra onde deverão estar localizados os conjuntos de LEDs (5); a lâmina de teste (1) e os fotodiodos (7 ) .Figure 2 shows where the LED sets (5) should be located; the test slide (1) and the photodiodes (7).

A figura 3 apresenta o resultado obtido, para uma amostra de sangue tipo A negativo. Como pode ser observado, uma amostra não aglutinada (tipo sanguíneo A negativo na presença de anticorpos tipo B e tipo D) tem valores de densidade ótica mais elevados e com uma maior variação ao longo dos comprimentos de onda considerados. Pelo contrário, amostras aglutinadas (tipo sanguíneo A negativo na presença de anticorpos tipo A e tipo AB) têm um espectro com valores reduzidos de densidade ótica e aproximadamente constantes entre eles. Tais factos estão de acordo com o teoricamente esperado e são explicados pela teoria de dispersão de Mie associada com as células aglutinadas, que leva a uma existência de grandes quantidades de luz dispersa por parte destas e consequentemente a uma menor densidade ótica no espectro obtido.Figure 3 shows the result obtained for a negative type A blood sample. As can be observed, a non-agglutinated sample (blood type A negative in the presence of type B and type D antibodies) has higher optical density values and with greater variation over the considered wavelengths. In contrast, agglutinated specimens (blood type A negative in the presence of type A and type AB antibodies) have a spectrum with reduced and approximately constant optical density values between them. Such facts are in accordance with the expected theory and are explained by the Mie scattering theory associated with the agglutinated cells, which leads to their existence of large amounts of scattered light and consequently to a lower optical density in the obtained spectrum.

A figura 4 apresenta o resultado obtido para uma amostra de sangue tipo B negativo. Neste caso, apesar dos valores de densidade ótica para os dois tipos de amostras serem menores, o que pode estar relacionado com uma menor concentração de hemoglobina na amostra de sangue testada, pode mais uma vez aferir-se que as diferenças entre os valores de densidade ótica, dentro da mesma amostra, são distintas para o caso em que se tenha uma amostra aglutinada e não aglutinada. Assim, o facto da análise efetuada pelo sistema integrar a medição de 3 valores de densidade ótica por amostra, e efetuar-se a classificação baseado nas diferenças entre esses três valores, e não apenas na grandeza dos mesmos, é uma caracteristica que permite garantir a precisão do resultado obtido.Figure 4 shows the result obtained for a negative type B blood sample. In this case, although the optical density values for both types of samples are smaller, which may be related to a lower hemoglobin concentration in the blood sample tested, it can once again be verified that the differences between the density values optics within the same sample are different if you have a bonded and unglued sample. Thus, the fact that the analysis performed by the system integrates the measurement of 3 optical density values per sample, and the classification based on the differences between these three values, and not only on their magnitude, is a characteristic that ensures the accuracy of the result obtained.

A figura 5 representa a configuração de um dispositivo final, sendo as dimensões ajustáveis de acordo com o tamanho da lâmina de teste (1). 0 dispositivo é constituído por um suporte que fica na região central (9) de forma a fixar a lâmina com as amostras. As placas PCB (3) e (4) ficam na parte superior e inferior do suporte, consoante a configuração desejada. Na parte superior do dispositivo ficam acoplados o microcontrolador e as baterias. 0 dispositivo tem ainda uma tampa (10) que encaixa na base (8) de forma a isolar a luz externa para que esta não afete as medições óticas.Figure 5 represents the configuration of an end device, the dimensions being adjustable according to the size of the test slide (1). The device is constituted by a support that is in the central region (9) in order to fix the slide with the samples. PCB cards (3) and (4) are at the top and bottom of the bracket, depending on the desired configuration. At the top of the device are attached the microcontroller and the batteries. The device further has a lid (10) which engages with the base (8) to insulate the external light so that it does not affect optical measurements.

A Figura 6 demonstra um dispositivo para se usar com iluminação por luz branca e filtros óticos, que podem ser posicionados por cima ou por baixo da lâmina de teste, a tampa deve ter 4 aberturas (11) posicionadas na zona das amostras.Figure 6 demonstrates a device for use with white light illumination and optical filters, which can be positioned above or below the test slide, the cap must have 4 openings (11) positioned in the sample zone.

Claims

1. Human blood type agglutination reaction detection system comprising optoelectronic components positioned at the top and bottom of the system, electronic control circuits, microcontroller for optoelectronic component control and for the performance of methods of analysis and interpretation of readable photodiodes, characterized in the upper zone being four sets, each set comprising three LEDs with wavelength ranges of 400 nm

430 nm, 530 nm - 575 nm greater than

750 nm on each region of the sample, in the lower zone there are four photodiodes (6), each oriented towards a set of LEDs and current converters, a test slide (1) placed between the set of

LEDs and photodiodes (6), wherein the test regions (2) are aligned parallel to the LEDS assemblies and photodiodes so that the light beams transmitted by the LEDs fall on the test regions.

System according to the preceding claim, characterized in that the LEDs and control electronic circuit assemblies are on a PCB board.

System according to claim 1, characterized in that the photodiodes and current-voltage converters are on another PCB board.

System according to Claims 1 to 3, characterized in that it comprises a display and / or memory card and / or USB connection and / or wireless connection.

Agglutination detection method for the determination of human blood type according to the system described in claims 1 to 4, characterized in that it comprises the following steps:

a) calibrate the system by placing a reagent in each test region of the slide and activating the system so that each set of the three LEDs emit the light beam that will be collected by the photodiodes and converted into a voltage value that will be read by the microcontroller. ;

b) Place the specimen slide with whole blood and reagents, the test regions being parallel to the LEDs / photodiodes assembly;

c) activate the system so that the four sets of three LEDs emit a beam of light, which beam alternating between the three LEDs, which beam passes through the sample to the photodiodes;

d) generation of an electric current from the photodiode that is converted into a voltage by the conversion block (7);

e) obtain the voltage values through the microcontroller and calculate the optical densities for each of the wavelengths of the three LEDs of each test region sample by obtaining the respective voltage values in the calibration step;

(f) calculate the differences between the three optical density values for each test region sample to obtain two results and compare against pre-defined threshold values as reference values;

g) perform the microcontroller classification of the samples and the blood type decision;

h) transmission of the results obtained.

Method, as characterized in that in the steps in each set of the preceding claim, a) and c) each of the LEDS LEDs, alternately emit a beam of light of wavelengths between 400 nm - 430 nm, between 530 nm - 575 nm and greater than 750 nm, and focuses perpendicularly on the test region.

Method according to the preceding claim, characterized in that the emission peaks are preferably for each of the LEDs of each set 406nm, 566nm and 956 nm.

Method according to the preceding claim, characterized in that each of the photodiodes captures the light intensity passing through the test region and generates an electric current that is proportional to the amount of light received and to transmit to the current conversion block. -tension.

Method according to claim 5, characterized in that in step b) the sample preparation consists of placing in a slide test region 20 µl to 50 µl Anti-A reagent and Ls of that whole blood value; in another test region 20 pL to 50 pL Anti-B reagent and that whole blood value; in another 20 pL to 50 pL Anti-AB and M reagent of that whole blood value and in the last test region 20 pL to 50 pL of Anti-AB reagent and M of that whole blood value.

Method according to the preceding claim, characterized in that the solutions are manually mixed for a period of 5 seconds.

Method according to Claim 5, characterized in that in step d) the photodiode generates three values of electric current, each for each of the 3 wavelengths of the LEDs, which are directly proportional to the amount of light passing through the light. test region, and whose value is dependent on the reaction between the blood and the reagent.

Method according to claim 5, characterized in that in step f) the predefined limit values are as

of reference consist of the higher limit prowl preferably the 1.0 and the lower limit prowl preferably the 0.2. 13. Method of according to claims 5 and 12, characterized by if the calculation of two differences of the three

If optical values are less than the reference limits, the sample is classified as agglutinated.

Method according to claims 5 and 12, characterized in that if the results of the two differences of the three optical values are greater than the reference limits, the sample is classified as unglued.