PL89803B1 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- PL89803B1 PL89803B1 PL16912274A PL16912274A PL89803B1 PL 89803 B1 PL89803 B1 PL 89803B1 PL 16912274 A PL16912274 A PL 16912274A PL 16912274 A PL16912274 A PL 16912274A PL 89803 B1 PL89803 B1 PL 89803B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- albumin
- concentration
- sorbent
- bearing
- sodium chloride
- Prior art date
Links
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 18
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 11
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 claims description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 6
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 3
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- UDPGUMQDCGORJQ-UHFFFAOYSA-N (2-chloroethyl)phosphonic acid Chemical compound OP(O)(=O)CCCl UDPGUMQDCGORJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000004690 coupled electron pair approximation Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wyodrebniania i zageszczania albumin, obecnych w «fcJ*ra*tten
lozyskowych.< , la*«.
Lozyska ludzkie sa latwo dostepnym i tanim zródlem bialek surowicy krwi, a przed* wttywfclm
gamma-globulin i albumin. Zawarta w lozyskach surowice zazwyczaj ekstrahuj, sie fizjologicznym '©*ww«m
chlorku sodu. Uzyskane w ten sposób ekstrakty lozyskowe, poza bialkami surowicy krwi. zawora* btolk.
tkankowe i hemoglobine w ilosci, przekraczajacej 50% ogólnej ilosci bialka w roztworze. Niskie stezenie bul*
surowicy przy równoczesnie wysokiej zawartosci hemoglobiny w ekstraktach lozyskowych sprawia, ze *'»>***
metody frakcjonowania bialek surowicy alkoholem znajduja zastosowani, tylko do wy«lre*niania*««^*»*
lin. Dalsze frakcjonowanie ekstraktów lozyskowych metodami klasycznymi woalu '^T*"^^
jeszcze albumin surowicy ludzkiej prowadzi do uzyskania preparatu, zantaczyszczonego berwnfcami hwnewyml.
.Preparaty takie nie moga byc stosowane w lecznictwie. « u„w„«tm HvndmanLA
Znany jest sposób otrzymywania albumin z ekstraktów lozyskowych WordonTK^I"^*J«LAj
Bloom T.C., Anderson H.D., TaylorH.L., McCall K.B.. J.Am.Ch.m.So£, t.7* m*3'£^™$*^^
w nim ekstrakt zawieral okolo 5% bialka ogólem, .«goJZ 60% T^^JS^A^SSI
skomolikowane frakcjonowanie (6 wirowart duzych objetosci plynów na wirówkach CEPA z szybkoscia
^ZTTm^Z^nL jonowymiennej kolumny) prowadzilo do otrzymani, czystego preparatu
Tumin z wydXoscia 29%. Opisany proces technologiczny byl bardzo kosztowny ze wzgledu na duza ilotó
byc prowadzone sposobami zazwyczaj stosowanym, w przemys*J£JZZ.l£Z * *—S2
89 803
w rachube, gdyz sa to procesy o stosunkowo niskiej wydajnosci, niewspólmiernej z duzymi objetosciami
ekstraktów lozyskowych, które nalezy poddac zageszczeniu. Wymagaja one równiez kosztownych i drogich
w eksploatacji urzadzen.
Sposób wedlug wynalazku usuwa te trudnosci, pozwala bowiem na 10-krotne zageszczenie albumin za
pomoca szybkiego i wydajnego procesu chromatograficznego, który jednoczesnie oddziela od albumin wiekszosc
zanieczyszczen hemoproteidowych. Istota wynalazku jest zastosowanie jonowymiennej chromatografii dla
wychwytywania albumin z roztworu, zawierajacego alkohol etylowy o stezeniu do 20%, ewentualnie z dodatkiem
alkoholu metylowego przy stezeniu chlorku sodu nie nizszym niz 0,05 M w pH = 6,3-8,5. Do tego celu
najbardziej przydatne sa nierozpuszczalne wielocukry, w których grupy hydroksylowe zostaly podstawione
resztami aminowymi lub ich pochodnymi (np. DEAE sefadeks).
Istota chromatografii jonowymiennej polega na elektrostatycznym wiazaniu bialek przez czasteczki
sorbenta o odmiennym ladunku. Wymywanie (elucje) frakcji bialkowych przeprowadza sie, stosujac bufory
o wzrastajacym stezeniu chlorku sodu w granicach 0,1-0,3 M, który wypiera czasteczki bialka, elektrostatycznie
zwiazane z jonowymiennym sorbentem.
Poniewaz w pH zblizonym do obojetnego ladunek elektrostatyczny albumin rózni sie od ladunku innych
bialek, znajdujacych sie w ekstraktach lozyskowych, istnieje mozliwosc oddzielania ich na drodze chromatogra¬
fii jonowymiennej od wiekszosci bialek balastowych, w odpowiednio dobranych warunkach pH i stezenia
chlorku sodu.
Stezenie chlorku sodu musi byc dobrane szczególnie starannie w momencie, gdy przeznaczony do
zageszczania ekstrakt jest w kontakcie z sorbentem. Zbyt niskie stezenie soli w roztworze moze w tych
warunkach spowodowac wychwytywanie przez jonowymienny sorbent takze hemoglobiny j innych bialek
balastowych. Natomiast wysokie stezenie elektrolitu w roztworze powoduje, ze sorbent w tych warunkach traci
zdolnosc do wychwytywania albumin.
Staranne dobranie stezenia elektrolitów w roztworze, przeznaczonym do wymywania albumin z sorbenta
pozwala takze na oddzielenie bialek, mocniej zwiazanych przez sorbent, niz albuminy. Jest to mozliwe dzieki
temu, ze bialka mocniej wiazane eluuja sie z jonowymiennego sorbenta przy wyzszym stezeniu soli niz albuminy.
Mozna wiec tak dobrac stezenie soli wplynie eluujacym, aby mocniej wiazane bialka nie eluowaly sie wraz
z albuminami i pozostaly na jonowymiennym sorbencie.
Przyklad. Materialem wyjsciowym do izolowania albumin byl plyn odpadowy, uzyskiwany w trakcie
frakcjonowania gamma-globulin z ekstraktów lozyskowych. Zawieral on 20% alkoholu etylowego i 1,5% bialka
ogólem. Stezenie albumin w tym roztworze wynosilo 0,27%.
700 g namoczonego DEAE-sefadeksu A-50 zrównowazono 0,01 M buforem fosforanowym opH = 7,0
w 0,02 M NaCI i przeniesiono do kolumny o srednicy 50 cm i wysokosci 40 cmr umieszczonej w pomieszczeniu
o temp. 4°C. Sefadeks w kolumnie zrównowazono 0,01 M buforem fosforanowym o pH = 7,0 w 0,02 M NaCI
i 20% alkoholu etylowym.
300 I sklarowanego plynu odpadowego nalozono na kolumne, podajac go z.szybkoscia 15 l/godz. Po
przejsciu calosci plynu kolumne przemyto 50 I 0,01 M buforu fosforanowego opH=s7,0 w 0,04 Vi NaCI.
Albuminy wymyto z sefadeksu 50 I 0,04 M buforu fosforanowego opH=7,0 w 0,15 M NaCI z szybkoscia
l/godz.
Eluat zbierano w porcjach po 5 I. Po przejsciu przez kolumne calosci buforu odczytano ekstynkcje przy
280 nm roztworu w poszczególnych porcjach i polaczono ze soba roztwory, których ekstynkcja byla równa lub
wyzsza niz 3.
Otrzymano 34,5 I roztworu o stezeniu bialka 2,41%. Stezenie albumin w tym roztworze wynosilo 2,3%.
Wydajnosc procesu wynosila 95%.
Claims (1)
1. Zastrzezenie patentowe Sposób wyodrebniania i zageszczania albumin obecnych w ekstraktach lozyskowych, znamienny t y mf ze ekstrakt lozyskowy zawierajacy alkohol etylowy o stezeniu do 20%, ewentualnie z dodatkiem a^h^ metylowego, doprowadza sie przed chromatografia do sily jonowej nie nizszej niz 0,05 i pH w granicach 6,3-8,5 a nastepnie adsorbuje na anionowych sorbentach, najkorzystniej na nierozpuszczalnych wielocukrach, w których grupy hydroksylowe zostaly podstawione resztami aminowymi lub ich pochodnymi, uprzednio doprowadzonych do pH w granicach 6,3-8,5 a nastepnie oddziela sie albuminy od sorbenta roztworem buforowym o stezeniu chlorku sodu w granicach 0,1-0,3 M w pH = 6,3-8,5. Sk-ia'.-1-Prac. Poligraf UPPRL Druk-WOSJ /A^pclnu Sprjwa" Format A4. Naklad 120+13. Cena 10 zl
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL16912274A PL89803B1 (pl) | 1974-02-27 | 1974-02-27 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL16912274A PL89803B1 (pl) | 1974-02-27 | 1974-02-27 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL89803B1 true PL89803B1 (pl) | 1976-12-31 |
Family
ID=19966248
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL16912274A PL89803B1 (pl) | 1974-02-27 | 1974-02-27 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL89803B1 (pl) |
-
1974
- 1974-02-27 PL PL16912274A patent/PL89803B1/pl unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rosenberg et al. | Fractionation of the protein components of human erythrocyte membranes | |
| Lotan et al. | The purification, composition, and specificity of the anti-T lectin from peanut (Arachis hypogaea). | |
| Stein et al. | Chromatographic determination of the amino acid composition of proteins | |
| Dozy et al. | Studies on the heterogeneity of hemoglobin: XIV. Chromatography of normal and abnormal human hemoglobin types on CM-Sephadex | |
| CA1107648A (en) | Glycoprotein and process for isolating it | |
| Bernard et al. | Competition between low-and high-molecular-weight proteins for renal tubular uptake | |
| CA1110617A (en) | Glycoprotein and process for isolating it | |
| Rasmussen et al. | Purification of bovine parathyroid hormone by gel filtration | |
| Castellani et al. | Egg yolk phosvitin: preparation of metal-free purified protein by fast protein liquid chromatography using aqueous solvents | |
| US4254021A (en) | Tissue specific protein and process for preparing same | |
| JPS63503352A (ja) | タンパク質の精製 | |
| Li et al. | Separation of mistletoe lectins based on the degree of glycosylation using boronate affinity chromatography | |
| Strydom et al. | Snake venom toxins—I. Preliminary studies on the separation of toxins of elapidae venoms | |
| Gordon et al. | Refinement of fluorescent antibody by gel filtration. | |
| Ersson | A phytohemagglutinin from Sunn Hemp seeds (Crotalaria juncea) II. Purification by a high capacity biospecific affinity adsorbent and its physicochemical properties | |
| Lynen et al. | Purification and some Properties of a Heat Labile Serum Factor (UF); Identity with Glycine-rich ß-Glycoprotein and Properdin Factor B | |
| Hansson et al. | Adsorption and desorption of proteins in metal chelate affinity chromatography: purification of albumin | |
| Lundahl et al. | Fractionation of human red cell membrane proteins by ion-exchange chromatography in detergent on Mono Q, with special reference to the glucose transporter | |
| Westall | The amino-acids and other ampholytes of urine. 1. A general method of isolation | |
| PL89803B1 (pl) | ||
| Kuttan et al. | Studies on bound trans-4-hydroxy-L-proline in sandal (Santalum album L.) | |
| Snoeren et al. | Preparation of κ-and minor αs-casein by electrostatic affinity chromatography | |
| Perry et al. | ε-N-Methyl Lysine: an Additional Amino-acid in Human Plasma | |
| Blomkalns et al. | Purification of bovine α-lactalbumin by immobilized metal ion affinity chromatography | |
| Schlüter et al. | Application of non-size-related separation effects to the purification of biologically active substances with a size-exclusion gel |