Przedmiotem wynalazku jest spos6b wytwarza¬ nia kwasów chlorowcofenylotioacetamidocefalospo- ranowych, które skutecznie hamuja rozwój mikro¬ organizmów Staphylococcus odpornych na dziala¬ nie metycyliny.Liczne publikacje omawiaja skutki, jakie po¬ woduje brak skutecznosci dzialania wielu anty¬ biotyków na rózne szczepy Staphylococcus aureus odporne na dzialanie metycyliny. Szczepy nie wy¬ stepuja wprawdzie zbyt czesto i prawdopodobnie pojawiaja sie przewaznie u chorych obloznie i osla¬ bionych, ale obecnosc ich stwierdzono w kulturach pobranych u chorych cierpiacych na schorzenia nowotworowe, chroniczne schorzenia kosci i/lub stawów, chroniczne zaburzenia krazenia, zaburze¬ nia swiadomosci i chroniczne schorzenia pluc.Znane sa dwie metody odrózniania iii vitro szcze¬ pów Staphylococcus aureus odpornych od nieod¬ pornych na dzialanie metycyliny. Jedna z nich polega na stosowaniu róznych temperatur hodowli mikroorganizmów, a druga na stosowaniu róznych stezen chlorku sodowego w srodowisku hodowla¬ nym.Z opisu patentowego Stanów Zjedn. Ameryki nr 3 335 136 znane sa pewne kwasy chlorowcofenylo- tioacetamidocefalosporanowe odporne na dzialanie penicyliny, trwale w srodowiskach kwasnych oraz skuteczne przeciwko bakteriom Gram-dodatnim i niektórym 'bakteriom Gram-ujemnym. W opisie tym nie ma jednak mowy o identyfikowaniu szcze- pów Staphylococcus aureus odpornych na dzia¬ lanie metycyliny, ani o tym, ze zwiazki te moga byc stosowane do zwalczania takich uodpornionych szczepów.Nieoczekiwanie stwierdzono, ze niektóre kwasy polichloro- i chlorofluorofenylotioacetamidocefalo- sporanowe, nalezace do grupy podanej ogólnie w opisie patentowym Stanów Zjedn. Am. nr 3 335136, w którym nie ma zadnej wzmianki o mozliwosci stosowania takich kwasów do skutecznego zwal¬ czania zakazen spowodowanych przez szczepy Staphylococcus aureus uodpornione na dzialanie metycyliny, skutecznie hamuja rozwój takich szcze¬ pów i moga byc stosowane do skutecznego ich zwalczania. Zwiazkami tymi sa zwiazki o ogólnym wzorze 1, w którym R' oznacza atom wodoru, grupe dwucykloheksyloamfaiowa lub farmakologicz¬ nie dopuszczalny kation, a R oznacza grupe o ogól¬ nym* wzorze 2, w którym, gdy R1 oznacza atom fluoru, wówczas R2 i R4 oznaczaja atomy wodoru lub chloru i R8 oznacza atom wodoru, a gdy R1 oznacza atom chloru, wówczas R2 oznacza atom wodoru i jeden z symboli R* i R4 oznacza atom chloru, a drugi oznacza atom wodoru, albo R2 ozna¬ cza atom chloru, a R' i R4 oznaczaja atomy wo¬ doru lub chloru, zas gdy R2 oznacza atom fluoru, wówczas R* oznacza atom chloru, a R1 i R4 ozna¬ czaja atomy wodoru.Sposobem wedlug wynalazku zwiazki o wzo¬ rze 1, w którym wszystkie symbole maja wyzej 87 70787707 podane znaczenie, wytwarza sie przez acylowanie kwasu 7-aminocefalosporanowego za pomoca kwa¬ su o ogólnym wzorze 3, w którym R1, R*, R* i r* maja wyzej podane znaczenie, albo za pomoca bez¬ wodnika, mieszanego bezwodnika lub halogenku tego kwasu.Jako produkt wyjsciowy w procesie prowadzo¬ nym sposobem wedlug wynalazku mozna stosowac cefalosporyne C, otrzymana na drodze fermentacyj¬ nej. Cefalosporyne C rozszczepia sie znanymli spo¬ sobami, otrzymujac kwas 7-aminocefalosporanowy, lftory acyluje sie znanymi sposobami, wprowadza¬ jac do grupy aminowej w pozycji 7 zadany lan¬ cuch boczny. Jako srodki acylujace stosuje sie ko¬ rzystnie chlorki lub bromki acylowe albo mie¬ szane bezwodniki alkilowe, wytworzone in situ.Przyklady procesów acylowania podano ponizej, a poza tym ^nozna stosowac warunki acylowania podane w. opisie patentowym Stanów Zjedn. Am.Bt 3 335136, Otrzymane sposobem wedlug wynalazku kwasy mozna przeprowadzac w ich estry acetoksymetyIo¬ we, których zdolnosc do ulegania absorpcji jest wieksza niz kwasów.Zwiazki o ogólnym wzorze 1, w którym wszyst¬ kie symbole maja wyzej podane znaczenie, wy¬ twarza sie i stosuje korzystnie w postaci soli za¬ wierajacej kation w grupie karboksylowej. Korzy¬ stnie stosuje sie sole dopuszczalne farmakologicz¬ nie, na przyiklad sodowe, potasowe, litowe, amono¬ we lub amoniowe, na przyklad metyloamoniowe lub etyloamoniowe, a takze trudniej rozpuszczalne w wodzie sole wapniowe, barowe, prokainowe, chininowe, cykloheksylodwumetyloamoniowe lub dwubenzyloetylenodwuaminowe. W celu wyosobnia¬ nia z mieszanin reakcyjnych i badania wytwarza¬ nych zwiazków na zwierzetach niekiedy stosuje sie sole dwucykloheksyloaminowe.Zwiazki wytwarzane sposobem wedlug wynalazku stosuje sie korzystnie w postaci wyjalowionych roztworów w wodzie lub w izotonicznych roztwo¬ rach soli albo dekstrozy jako preparaty do wstrzy¬ kiwania sródmiesniowego. Dawka dla chorych wy¬ nosi 0,25—0,5 g co 4—6 godzin. Zwiazki te mozna równiez stosowac doustnie, w nieco wiekszych daw¬ kach, wynoszacych przewaznie 0,5—1,0 g co 4—6 godzin. Preparaty do podawania doustnego ma¬ ja postac tabletek, kapsulek zelatynowych lub za¬ wiesin, wytwarzanych znanymi sposobami.Stwierdzono, ze wiekszosc zwiazków wytwarza¬ nych sposobem wedlug wynalazku, badana w nie¬ obecnosci ludzkiej surowicy typowa metoda skos¬ nej plytki, wykazuje skutecznosc przeciwko szcze¬ pom Staphylococcus aureus odpornym na dziala¬ nie metycyliny przy minimalnym stezeniu (MIC) wynoszacym mniej niz 11 mikrogramów/ml. War¬ tosci te ustalono metoda opisana przez Bryson'a i Szybalskiego (Science, 116, str. 45—46, 1952), zas wartosci w odniesieniu do sizczepów gromkowców odpornych na dfelialamie penicyliny .ustalono metoda opisana przez Godzeskiego i in. w Antimierobiol Agents and Chemotherapy, maj 1969, str. 547^554.W badaniach stosuje sie typowe, kwadratowe plytki Petriego, wykonane z tworzywa sztucznego.Na jedna z plytek wlewa sie warstwe agaru w ilosci 10 ml, odchyla plytke o S^mni od poziomu i pozostawia w tej pozycji do stwardnienia agaru.Ta dolna warstwa agaru zawiera antybiotyk, su¬ rowice i/luJb inny material poddawany badaniu.Jako srodowisko stosuje sie Difco Penassay Agar zawierajacy • 2% agaru. W celu zbadania „inakty- wacji surowicy" stosuje sie z reguly 4 ml surowi¬ cy ludzkiej lub konskiej. Surowice mozna doda¬ wac równiez do warstwy górnej, a wiec nie sto¬ sujac gradientu, ale próby wykonane z wieloma antybiotykami wykazaly, ze nie ma zasadniczych róznic pomiedzy wynikami uzyskiwanymi przy uzy¬ ciu obu tych plytek, totez surowice z reguly do¬ daje sie tylko do warstwy górnej. Gdy dolna, skos¬ na warstwa agaru stwardnieje, plytke umieszcza sie poziomo, naklada druga warstwe pozywki w ilosci 10 ml i pozostawia do stwardnienia. " Szczepionke odpornych gronkowców przygotowu¬ je sie rozcienczajac wodna zawiesine w stosunku 1 :50 roztworem wodnym lub solankowym zawie¬ rajacym 0,25% agaru. Przy badaniu mikroorganiz¬ mów Gram-ujemnych, brzeczke hodowlana otrzy¬ mana w ciagu nocy rozciencza sie w stosunku 1 :50 woda zawierajaca 0,25% agaru. Po rozcien¬ czeniu zawiesine wytrzasa sie dokladnie i do prób odmierza pipeta 1 ml zawiesiny zawierajacej pod- wielokrotnosc koncowego stezenia agaru wynosza¬ cego 0,05%. Próbka powinma byc naniesliona na plytke w postaci pasma równomiernie i jednym, bardzo szybkim ruchem. Hodowle prowadzi sie w ciagu 24 godzin w temperaturze 35—37°C, po czym odczytuje wynik mierzac wzrost bakterii jako pro¬ cent w stosunku do calkowitej dlugosci pasma i nastepnie przelicza w odniesieniu do stezenia antybiotyku na plytce. Jezeli linijke o dlugosci 100 mm zmniejszy sie fotograficznie tak, aby jej dlugosc odpowiadala dokladnie wnetrzu plytki, wówczas dlugosc zmierzona w milimetrach jest równa stezeniu w procentach.Ustala sie wyniki srednie z dwóch pomiarów i podane nizej minimalne stezenia hamujace (MIC) sa srednimi z dwóch pasm na plytce i 2—3 ply¬ tek. Na jednej plytce mozna latwo umiescic 8 pasm.Jezeli pasmo nie ma wyraznie zurpowanego za¬ konczenia, wówczas mierzy sie srednie stezenie po¬ miedzy poczatkiem hamowania wzrostu w pasmie do konca wzrostu., Stezenie badanego antybiotyku •w poszczególnych seriach plytek w mikrogra- mach/ml zmienia sie jak podano w tablicy I.Tablica I 55 Nr plytki 1 i 2 3 i 4 i 6 7 i 8 9 i 10 11 i 12 Stezenie antybiotyku 200 100 50 1 | 65 Opisana wyzej metoda badania daje w przy¬ padku penicylin i cefalosporyn zadowalajaca do¬ kladnosc wyników. W celu oznaczenia aktywnosci badanych zwiazków w odniesieniu do gronkow¬ ców uodpornionych stosuje sie plytki kontrolne,8T*W zawierajace penicyline i stafcyline lub prostafline albo inne antybiotyki porównawcze. Metoda skos¬ ne] plytki wykazuje róznice pomiedzy antybioty¬ kami nie dajace sie uchwycic przy uzyciu innych metod. Istnienie tych róznic potwierdzaja inne, bardziej szczególowe badania, na przyklad terapia zwierzeca. Wydaje sie, ze metoda skosnej plytki umozliwia lepiej niz inne metody uchwycenia nie¬ wielkich róznic, w dzialaniu antybiotyków, a przy tym wyniki uzyskiwane ta metoda mozna prze¬ chowywac w postaci fotografii. Poza tym mozna stosowac latwo modyfikacje tej metody do spe¬ cjalnych celów, na przyklad gradienty krzyzowe.Ponizej .podano przyklady zwiazków wytwarza¬ nych sposobem wedlug wynalazku, przy czym w wiekszosci przypadków po nazwie zwiazku poda¬ no w mikrogramach/ml minimalne stezenie hamu¬ jace tego zwiazku w nieobecnosci surowicy krwi iw obecnosci «)•/• surowicy kiwi: kwas 7-tl//2*,5'r- -dwuchlorofenylotio/-acetamido]-3-metylo-3-cefe- , mokarboksylowy-4, sól sodowa kwasu 74273^^^-dwuchlloiroifenylotio/- -acetamdo\]^efolottpioianowego, MIC— 2fi I 8,7, sól sodowa kwasu T-te^-za^^^wiuchlo^o-S^-fluoro- fenylotio/-acetamido]-cefalosporanowego, MIC"= 3,0 - i 20,0, sól sodowa kwasu T^^/S^^^^^ructtlorolfenylotk)/- -acetamido]-cefalosporanowego, Mi)C—1,0 i 1,7, sól sodowa kwasu 7-{2'/2",5"-dwuchlorofenyiotio/- -acetaraido]-cefalosporanowago, MIC—0^ i 1,0, kwas 7^V3"^Moiro-4"-iffl!uoi^tóyl^ -cefalosporanowy, MIC—9,3 i 12,2.Sposób wedlug wynalazku jest dokladniej wy¬ jasniony w nizej podanych przykladach.Przyklad I. Do roztworu 7,1 g (30 milimoli) kwasu 3,4-dwuchlorofenylomerkaptooctowego w 100 ml bezwodnego benzenu dodaje sie.7,5 g <5,0 ml, 60 milimoli) chlorku oksalilu i jedna krople N,N- -dwumetyloformamidu. Roztwór miesza sie w tem¬ peraturze 25°C w ciagu 3 godzin, po czym odpa¬ rowuje benzen w obrotowej wyparce i .pozostalosc w postaci syropu o barwie zóltej ponownie roz¬ puszcza w benzenie i odparowuje w celu usunie¬ cia reszty chlorku oksalilu. Otrzymany syrop roz¬ puszcza sie w 50 ml acetonu iw ciagu 1 godziny wkrapla w temperaturze —6°C-do roztworu 8,5 g kwasu 7-aminocefalosporanowego w 200 ml 502 wodnego roztworu acetonu, zawierajacego 8,5 g wodoroweglanu sodowego, po czym miesza sie w ciagu 2 godzin, ogrzewajac powoli do temperatu¬ ry 25°C.Nastepnie odparowuje sie aceton w obrotowej wyparce i pozostaly wodny roztwór wytrzasa z 100 ml octanu etylu, zakwasza kwasem solnym do wartosci pH2, miesza sie i rozdziela warsttfy. Roz¬ twór wodny ekstrahuje sie ponownie 2 porcjami po 50 ml octanu etylu, laczy roztwory organiczne, suszy nad siarczanem magnezu, przesacza i odpa¬ rowuje w obrotowej wyparce, otrzymujac klarow¬ ny syrop o barwie zóltej.Produkt ten rozpuszcza sie w 250 ml metanolu, dodaje roztwór 30 milimoli 2-etyloheksanolanu so¬ dowego w 100 ml etanolu, zageszcza i chlodzi.Otrzymuje sie sól sodowa kwasu 7-/3,4-dwuchlo- rofenylotioacetamido/-cefalosporanowego w postaci krysztalów o barwie bialej. Widmo produktu w ultrafiolecie wykazuje maksimum przy dlugosci fali 258 milimikronów {E—13 400), a widmo w pod¬ czerwieni wykazuje pasmo przy dlugosci fali 1760 cm-i.Przyklad II. W sposób analogiczny do opi¬ sanego w przykladzie I wytwarza sie sól sodowa kwasu 7-/2,5-dwuchlorofenylotioacetamido/-cefalo- sporanowego. Widmo produktu w ultrafiolecie wy- kazuje maksimum przy dlugosci fali 253 milimikro- ny (E—12 550), a widmo w podczerwieni ma pasmo przy dlugosci fali 1760 cm-i.. Przyklad III. W sposób analogiczny do opi¬ sanego w przykladzie I wytwarza sie, sól sodo- wa kwasu 7-/3,5-dwuchlorofenylotioacetamido/-ce- falosporanowego. Widmo produktu w ultrafiolecie wykazuje maksimum przy dlugosci fali 260 mili¬ mikronów (E=*15 600), a widmo w podczerwieni ma pasmo przy dlugosci fali 1760 cm-1.Przyklad IV. W sposób analogiczny do opi¬ sanego w przykladzie I wytwarza sie sól sodowa kwasu 7-/2,4-dwuchloro-5^£luorofenylotioacetami- do/^cefalosporanowego. Widmo produktu w ultra¬ fiolecie wykazuje maksimum przy dlugosci fali 257 milimikronów (E—17 500), a widmo w pod¬ czerwieni ma pasmo przy dlugosci fali 1760 cm-1.Przyklad V. W sposób analogiczny do opisa¬ nego w przykladzie I, przez acylowanie kwasu 7- -aminocefalosporanowego kwasem 3-chloro-4-flu- orofenylomerkaptooctowym, wytwarza sie sól so¬ dowa kwasu 7-/3'-chloro-4-fluorofenylotioacetamir do/-cefalosporanowego. Widmo produktu w ultra¬ fiolecie wykazuje maksimum przy dlugosci fali 254 milimikronów (E-*10 400), a widmo w pod* czerwieni ma pasmo dlugosci fali 1760 cm-*.Przyklad VI. W przykladzie tym porównuje sie wlasciwosci antybiotyczne trzech znanych zwiazków, mianowicie metycyliny, cefalotyny i ce- falorydyny z wlasciwosciami trzech zwiazków wy- 40 tworzonych w sposób opisany w wyzej podanych przykladach. Porównuje sie minimalne stezenie ha¬ mujace tych zwiazków w odniesieniu do róznych wyosobnionych kultur Staphylococcus aureus. Nu¬ mery kultur bakterii i sposób prowadzenia badan 45 oparto na artykule W. E. Wiek i D. A. Preston' p.t. Heterogenecus MeHricilin-Resistant Staphylo¬ coccus Aureus, opublikowanym w Progress in Antimierobial and Anticancer Chemotherapy, sprawozdanie z VI International Conkress of Cne¬ go motherapy, tom 1, Tokyo, 1970.W próbach tych szczepionke rozcienczono do 101 bakterii w jednej plamie. Jako próby porównawcze stosowano wrazliwe n.a dzialanie benzylopenicyli¬ ny kultury 3056 i uodpornione na dzialanie tego 55 antybiotyku kultury H232. Pozostale kultury sa odporne na dzialanie metycyliny i za wyjatkiem kultury 3136 sa otrzymane klicznie. Kultura 3136 stanowi mutant po czterokrotnym przeniesieniu laboratoryjnym.Wyniki prób podano w tabeli II.Wyniki podane w tablicy II swiadcza p tym, ze zwiazki wytworzone w sposób opisany w przy¬ kladach I, II i III sa w badaniach in vitro bar¬ dziej skuteczne przeciwko róznym kulturom Stap* ta hylococeus aureus odpornym na metycyline niz 6087 767 i © i wid i—s ~H U o cd IO © cd CO M i-H rH CJ 966 Setl o u Cb x cd ,Q QJ § cd PQ (U fi 3 ^ Prób © CO M © co ^H co c~ CO CO co 1—1 eo co »-H co T*H CO CO co co rH co CM eo i-H co co i-H CO o co i-4 co CO CM W io IO 8 ^! fi o Bada antybi zywka © CM « CM »-l © ^ ^N » rH rH © © © i-H © rl< W CM © »-H A IO CM W CM © © CM rH © © © © CM tJh © CM CM » rH rH © © ^ IO © CM^© CM ©"©" W io © CM ©^ »H ©"o1 W cd lO IO Tf O © IO IO © © lO CM IO © © IO © rH CN rH CM CM m CM IO ©© io io © © IO © rH lO rH © CM IO O © IO © rH IO IO © © © © ©"©" w © © co^© ©~©~ w H 3 rj 2 cd ^'S T3 .2 fi tj jg cd £3 3 -m cd cd c d a fi o o i-H -O cd ^ cd i£j cT g a ftl-H A HH NHN ' io © lO © io © rH rH CM IO © IO © i-H io © IO © IO •© © © © V © © ©" V 3 3 cc ^ © CM © rH 1-4 © CM ^ CM CO rH lO CM -^ CM © © CO CON^ CM CO A 00 ^ © CM © rH iH A W « CM CM CM CO rH rH A t* CM © © CO rH ^ CM W © CO ^ Tt< © © © i-i co ^ © CM © rH CM © CM CO rH CO CM © CM CO rH i-t CM © 1-4 IO CO CM © CM ©""© W IO IO CN CM CM O*"©" W rt rH E3 s 2£ •h Co metycyl cefaloty cefalory CM rH rH l°- CM ©" rH IO IO [ lO CM CM ©" ©"*©" to cm io rH ©©" IO ^ o*"1-1 tJ4 CM ^ io CM © rH IO - CM i^ ©~ i^ IO rH ©~CM i-i rH CM IO CM IO ©~ ©"© iH i-* ~4 \ rH rH CM © © © © © © ©" ©~©~ V W © © © © ©„©, ©" ©"©" V W rH rH z przykladu III z przykladu z przykladu i-H O •rt cd t,r5 IO Si cd H 3 fH cd CO $H 3 X cd i-H TJ cd B cd jh W) CU u cd* •r-» a cd '» fi i-H CS a I kterie ro Xi dane cd fi ntrol o ^ Próby © co N- IO co C73 rH 1 113850 Kavar mick (U 966 eatt] co © co co © co 1-H co 137 co © 1 313 IO co I-i co eo co 3133 CM CO rH CO co co © co 1-^ co CM co CM 3035 fi o Bada antybi wka ozy | Pk © © * i-i © CO TT i-i ^ N°.q CO ^ CM © ©^ ©~CM*TjT © © KO ^ rH rH © © CM ^f CM CO © ^ © CM © y~i A O CM CM IO co y . © © CM CM CM CO Q CM CM fe CO CO rH ©^ » cnT^ © © CM CM CM CO © © © CM CM © © Q - & Tji O ^ ©w 9 CMO^* IO © © CM IO © © CM IO IO © O O^IO i-4 ©~ © © CM rH 1-4 1-4 © © CM CM" IO IO ©© IO IO w ©© 1-^ 1-1 IO IO V IO (O V © IO rH V IO IO © V CM CM rH ^ ©*©" 0,06 0,06 IO o IO o IO © 0,5 IO © 2,0 2,0 IO CM^ ©" IO V o CM IO V IO V IO V o 1-4 CM 0,1 0,06 Cd rt fi ^ 33 .3 fi *0 cd cd co ^?& metyc cefalo cefalo ?2* M XX z przyIII z przy z przy II T* <«* © © © l-H <<# tP co © © rH CO Tf © CM © rH rH ^ CM © © CO CO CM 00 CM CO A co ^ © CM© rH rH © © CM CM CM CO r-4 w^ A co ^ © l CM © rH i-~t -^ ^4 © © rH *t *f Q ©©£ co 3« © CM © rH ^ ^ co CO © rH © ^ © CM © rH i-i © ©z Q ^ c ^ oioS CM ©"^ O © rH CM © R.CM CM © © rH CM © « CM © © CM ^4 ©,©^ CM" rH ®.°.^ ^ ©© N CM © © CM CM O© © © CM* CM O © rH CM °.® rH CM 9.R CM ^ CM IO rH CM ©"©" 0,06 0,06 0 CM © CM| a\ CM ©^ csf ' 0" V 2,0 0 | © ^ ©J CM 4,0 f _2.0_ CP ^ °- CM CS CO] IO 0,2 90*0 cd ^ 33 .3 fi ^ * J2 J3 metyc cefalo cefalo cd 0 oO 1 CG M z przyk III z przyk z przyk] II87 707 9 Cefalotyna | Zwiazek opisany w przykladzie *III Zwiazek opisany w przykladzie V Cd 1 fiTO 1 N Tarcza mg O 0 co S - SU N Tarcza mg U o o co O 0 t- co zmiana w mm 37°—30°C Tarcza mg co co Badany szczep S. aureus o csf co i^ c© io co ^ r*^ irT co" i cTcT + i i i i i maT m + i co.cm^co cx^^eaec|o co^o ^ hm o* & cTio cico"' COCN^-li-H^-Hi-li-HCSl ,-H CM i-H 00 00 00 " ¦A • ^co^co^co^co^eo^o^cp^co^CM^c^fr"; »^ co"cf o co" co" t* co irT t-" co" of ó m i-Tco" 00 CO CM CM CM CM CM 00 i-H CM 00 CM 00 CO CO CO^CM^CO^OO^C^C^e^CM^^CO^T^ lO^ CM^f^f^i-^i-rco^i-Tir^o^cfco^i-r i o i-T ++-.+ +++++T+ 1+ ' 1 C^«OCO^CO^CO^G^»0Ó t^ co" l-T cm" gT co"of cjT co* af cm cTio io cm" CO CO CO 00 CO CO CM CM CM CM CO 00 CO CO 00 A CM O^O^OC^CO © CM^C^O^CO O^ 1 *? CM"o" i-h" O)" OT CO O CO" l" CO" CO" ift uo" ^ CO 00 CO 00 CM CM CM 00 CM CM 00 CM 00 CO 00 A CM^CM T^^CO^CM^CP O^CO ^ ^ O O O) CM CMCM"fH CM o"cm"t^ CM 0"CM"CM 1 o" + 1+ 1 1 1 II 1 1 1 1 ' + © CO^O © €©^€0^© ^l^^^L ^^l co" i^ c» co" ^ i^ 00 CO CM CM CM CM CM CO CM CM 00 SM CO 00 CO A co c^co^^co^©^©^©©^ ®,*1 co" co" eó* aS c^ oo* co tfT *? io"^ oo" m co" co" CO CO CM CM CM CM CM CO CM CM CO CM CO CO 00 A lO O i-l CM CO "*« Ift CO f 00 Cft O lO ^ CM CM CO 00 CO CO CO CO CO CO CO 00 ^* 1/5 t" 00 vHi-4^H^4i-Hi-4i-li-Hi-H<-Hi-|i-H©©CM CO CO CO CO CO CO CO COcOCOCOCOCOCOh"! znane antybiotyki metycylina, cefalotyna i cefa- lorydyna.Przyklad Vii. W próbie tej porównuje sie za pomoca badan prowadzonych przez rozcien¬ czanie brzeczki wlasciwosci antybiotyczne* zwiazków wytworzonych w sposób opisany w przykladach I, II i III z wlasciwosciami metycyliny, cefalotyny i cefalorydyny. Wartosci minimalnych stezen ha¬ mujacych oblicza sie w stosunku do kultur Stap¬ hylócoccus aureus opisanych w przykladzie VI, ale hodowle prowadzi sie w dwóch pozywkach sojowych, z których jedna zawiera tylko 0,5%, a druga 5,0Vo chloru sodowego, Ma to na celu umo¬ zliwienie odróznienia szczepów odpornych na dzia¬ lanie metycyliny od szczepów nieodpornych.Wartosci minimalnego stezenia hamujacego w przypadku metycyliny dla hodowli o niskiej za¬ wartosci chlorku sodowego róznia sie bardzo od odpowiednich wartosci dla hodowli o wysokiej zawartosci tej sola, przy czym róznica ta nasuwa wniosek, ze kultury takie sa odporne na dziala¬ nie metycyliny, ale nie dotyczy to kultur ulega¬ jacych dzialaniu antybiotyków, na przyklad 3055 i H232 [patrz Y. A. Chalbert, 1967 Postgrad Med.J. 43 (dodatek), str. 40—46]. Nalezy sie spodziewac, ze zmiany wartosci minimalnego stezenia hamu¬ jacego dla tego typu kultur równiez beda ozna¬ czaly to samo równiez i w przypadku innych anty¬ biotyków (3-laktamowych, na przyklad róznych pe¬ nicylin i cefalosporyn. Przykladem moze tu byc cefolotyna, której minimalne stezenie hamujace w stosunku do niektórych kultur Staphylócoccus aureus odpornych na metycyline wzrasta z 2 do 64. W odróznieniu od tego, takie róznice wartosci stezenia hamujacego nie wystepuja w przypadku antybiotyków wytwarzanych sposobem wedlug wy¬ nalazku. Swiadczy to o braku odpornosci róznych kultur na te antybiotyki, co swiadczy o tym, ze kultury S. aureus odporne na dzialanie metycy¬ liny ulegaja dzialaniu antybiotyków wytwarzanych sposobem wedlug wynalazku.Wyniki prób podano w tablicy III.Stosowane w próbach szczepionki zawieraja w i ml 105 bakterii.Przyklad VIII. Antybiotyczne dzialanie roz¬ puszczalnego w wodzie kwasu 7-|273"-chloro-4"- -fluorofenylotio/-acetamido]-cefalosporanowego opi- sanego w przykladzie V na rózne kultury Staphy^ lococcus aureus bada sie metoda tarczowa A. W.Bauer, W. M. M. Kirby, J. C. Sherris i Turek, opisana w Amer. J. Clin. Pazhol 45, str. 493—496 (1966). Kultury hoduje sie w temperaturze 37°C lub 30°C, przy czym zgodnie z artykulem D. I. An- near zamieszczonym w The Medical Journal of Australia, 16 marca 1966 r. róznorodnosc S.aureus w zakresie odpornosci na metycyline wystepuje przy prowadzeniu hodowli tych bakterii w tem¬ peraturze 30°C. Badaniom poddaje sie szczepy opi¬ sane w przykladzie VL Szczepy o numerach 3125—3140 sa odporne na dzialanie metycyliny, a ich odpornosc na cefalotyna, jest rózna, szczep 3055 jest wrazliwy na penicyline, a szczepy 3074 i H232 sa wrazliwe na dzialanie metycyliny.Wyniki prób podano w tablicy IV.Przyklad IX. Bada sie antybiotyczne wlas¬ ciwosci kwasu 7-[2'-/3'r-chloro-4//-fluoro(fenylotib/- -acetamido]-cefalosporanowego w stosunku do Streptococcus pyogens, szczep C203, u myszy, po¬ równujac w takich samych warunkach z wlasci¬ wosciami cefalorydyny. Próby przeprowadzone wy¬ kazaly, ze antybiotyki skuteczne wedlug tej me¬ tody przeciwko Streptococcus pyogenes, szczep C203, sa przy stosowaniu klinicznym skuteczne przeciwko szczepom Staphylócoccus aureus. Przy¬ klad ten wykazuje, ze antybiotyki wytwarzane87 707 11 sposobem wedlug wynalazku powinny byc sku¬ teczne przy stosowaniu klinicznym.Próby prowadzi sie in vivo, metoda W. E. Wiek, F. Streightoff i D. H. Holmes, J. Bacteriol. 81, str. 233—235 (1961). Srednia skuteczna dawke ED50 niezbedna w celu wyleczenia 50% myszy oblicza sie metoda L. J. Reed i H. Muench, Am. J. Hyg. 27 stf. 493^497 (1938).Wyniki podano w tablicy V.Tablica V Badany srodek Zwiazek z przykladu V cefalory- dyna Stosowanie doustnie podskórnie doustnie podskórnie ED5« mg/kgX2 7 0,21 0,323 0,10 Wskaznik zarazenia XID50 27,9 27,9 27,9 27,9 12 PL