PL87664B1 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- PL87664B1 PL87664B1 PL16353073A PL16353073A PL87664B1 PL 87664 B1 PL87664 B1 PL 87664B1 PL 16353073 A PL16353073 A PL 16353073A PL 16353073 A PL16353073 A PL 16353073A PL 87664 B1 PL87664 B1 PL 87664B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- polifungin
- mutants
- revertants
- carried out
- completely
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 31
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 claims description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 12
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 claims description 10
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 8
- 241000187310 Streptomyces noursei Species 0.000 claims description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 6
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 4
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000186046 Actinomyces Species 0.000 claims description 3
- 238000012136 culture method Methods 0.000 claims description 3
- 238000007433 macroscopic evaluation Methods 0.000 claims description 3
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 claims description 3
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 claims description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 claims description 2
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 claims 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 12
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 12
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 7
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 7
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N acetyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 2
- ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N Propane Chemical compound CCC ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 2
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 2
- 230000036438 mutation frequency Effects 0.000 description 2
- QAQREVBBADEHPA-IEXPHMLFSA-N propionyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)CC)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 QAQREVBBADEHPA-IEXPHMLFSA-N 0.000 description 2
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 2
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 2
- 238000013337 sub-cultivation Methods 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 241001446247 uncultured actinomycete Species 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L Malonate Chemical compound [O-]C(=O)CC([O-])=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241001415849 Strigiformes Species 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- DVARTQFDIMZBAA-UHFFFAOYSA-O ammonium nitrate Chemical group [NH4+].[O-][N+]([O-])=O DVARTQFDIMZBAA-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 230000008436 biogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000001055 chewing effect Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000007269 microbial metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000000010 nanu Nutrition 0.000 description 1
- 244000082862 nanu Species 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000001294 propane Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000007362 sporulation medium Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Opis patentowy opublikowano: 15.12.1976
87664
MKP C12k 1/02
lnt.CI2.C12K1/02
CZ i 5LLNIA
Urredo Po*o«t«w#go
Piliklij Iftizflumffiii
Twórcywynalazku: Danuta Kotiuszko, Halina Morawska, Krystyna Strzezek,
Mieczyslaw Pikala, Andrzej Rafalski, Kazimierz Czarny,
Zygmunt Zaczynski
Uprawniony z patentu: Instytut Przemyslu Farmaceutycznego, Warszawa (Polska)
Sposób otrzymywania mutantów Streptomyces noursei var. polifungini
o zwiekszonej zdolnosci wytwarzania polifunginy
Wynalazek dotyczy sposobu otrzymywania mutantów produkcyjnych, w szczególnosci prostego i szybkiego
sposobu selekcji mutantów promieniowca Streptomyces noursei var. polifungini o wielokrotnie zwiekszonej
zdolnosci do biosyntezy polifunginy.
Dotychczas znane metody selekcji mutantów produkcyjnych, zarówno grzybów, jak i promieniowców,
wytwarzajacych antybiotyki, polegaja na losowej selekcji klonów, otrzymywanych z zarodników poddanych
dzialaniu czynników mutagenicznych. Dla uzyskania mutantów o wyzszej zdolnosci wytwarzania antybiotyku
koniecznym jest przebadanie, metoda hodowli podpowierzchniowej, ilosci klonów rzedu 103-104.
Sposób ten jest bardzo uciazliwy i pracochlonny, gdyz wymaga wielokrotnych mutacji oraz selekcji
i jakkolwiek wprowadzono pewne modyfikacje (Stauffer J.F. i in. - Develop. Ind. Microbiol., 7 (1966), 104,
Sermonti G. — Cenetics of Antibiotic-producing Microorganisms, Wiley-lnterscience, London, New York, Sydney,
Toronto (1969); Woodruff H.B.- Genetics of Industrial Microorganisms, 1 st International Symposium (1970),
str. 102) nie zawsze uzyskuje sie oczekiwane wyniki we wzglednie krótkim czasie.
Wedlug zalozen teoretycznych, dotyczacych mechanizmu regulacji u drobnoustrojów biosyntezy metaboli¬
tów pierwszorzedowych, jednym ze sposobów otrzymywania szczepów produkcyjnych do biosyntezy aminokwa¬
sów jest indukowanie mutacji powrotnych u mutantów auksotroficznych, to jest niezdolnych do syntezy jednego
lub wiecej aminokwasów oraz selekcja rewertantów typu supresorowego (Cohen G.N. — Annual Reviev of
Microbiology (1965), str. 105).
W odniesieniu do antybiotyków, metabolitów drugorzedowych, których biosynteza u drobnoustrojów
kontrolowana jest prawdopodobnie przez podobne mechanizmy regulacji (Malek L. — Biogenesis of Antibiotic
Substances, Academic Press, New York, London (1965), str. 11; Demsin A.L.-Ad. Appl. Microbiol., 89
(1966), 1), sposób selekcji rewertantów nie zostal dotychczas wykorzystany do otrzymywania mutantów
produkcyjnych. Zasadnicza trudnoscia byl brak cech oraz podlozy selektywnych, które umozliwialyby szybki
wybór rewertantów.
W sposobie wedlug wynalazku trudnosc te ominieto, przyjmujac jako posrednia ceche selektywna róznice
intensywnosci wzrostu i wytwarzania spor miedzy mutantami, niezdolnymi do biosyntezy antybiotyku, a ich2 87 664
rewertantami, wytwarzajacymi znaczne ilosci antybiotyku. Mutanty, niezdolne do biosyntezy antybiotyku,
otrzymuje sie na drodze mutacji indukowanych. Do otrzymywania ich rewertantów, wytwarzajacych znaczne
ilosci antybiotyku, stosuje sie mutacje indukowane lub spontaniczne. W pierwszym przypadku, to jest mutacji
indukowanych, zawiesine spor mutantów nieaktywnych poddaje sie dzialaniu mutagenów takich, jak np. promie¬
nie UV, N-metylo-N'-nitro-N-nitrozoguanidyna i inne, nastepnie wysiewa sie na podloze sporulacyjne i w pierw¬
szym etapie selekcjonuje klony obficie zarodnikujace. Nastepnie sprawdza sie ich zdolnosc do wytwarzania
antybiotyku metoda hodowli podpowierzchniowej.
Korzystniejszym wariantem sposobu wedlug wynalazku jest wykorzystanie mutacji spontanicznych. Dla
otrzymania rewertantów uprzednio otrzymane mutanty, które calkowicie lub prawie calkowicie utracily
zdolnosc wytwarzania antybiotyku oraz charakteryzuja sie slabym wzrostem i slabym wytwarzaniem spor,
pasazuje sie na podlozu spiorulacyjnym. Po kazdym pasazu sprawdza sie jedynie makroskopowo charakter
wzrostu i stopien zarodnikowania, natomiast metoda hodowli podpowierzchniowej sprawdza sie tylko te
hodowle, które w kolejnym pasazu wykazuja dobry wzrost i obfite zarodnikowanie, co przyjeto jako wstepne
kryterium rewersji.
W sposobie wedlug wynalazku zarodniki promieniowca Streptomyces noursei van polifungini ATCC 21581
lub jego klonów poddaje sie dzialaniu czynników mutagenicznych, selekcjonuje mutanty niezdolne do
biosyntezy aktydionu, po czym sposród nich selekcjonuje slabo zarodnikujace mutanty, które calkowicie lub
prawie calkowicie utracily zdolnosc do biosyntezy polifunginy, pasazuje sie je i sposród nich selekcjonuje sie
dobrzs zarodnikujace rewertanty o wysokiej zdolnosci wytwarzania antybiotyku, które oczyszcza sie i stabilizuje.
Selekcje mutantów, niezdolnych do biosyntezy aktydionu, prowadzi sie metoda chromatograficzna.
Sposród mutantów, niezdolnych do biosyntezy aktydionu, selekcjonuje sie metoda oceny makroskopowej slabo
zarodnikujace mutanty, sposród których metoda hodowli podpowierzchniowej selekcjonuje sie mutanty, które
calkowicie lub prawie calkowicie utracily zdolnosc do biosyntezy polifunginy, a nastepnie pasazuje sie je na
skosach agarowych z pozywka ziemniaczana. <
Selekcje rewertantów prowadzi sie metoda oceny makroskopowej wzrostu i zarodnikowania, a nastepnie
dla szczepów dobrze zarodnikujacych sprawdza sie zdolnosc wytwarzania polifunginy metoda hodowli podpo¬
wierzchniowej. Wyselekcjonowane rewertanty oczyszcza sie metoda rozsiewu zarodników i selekcji wysokoak-
tywnych i stabilnych klonów.
Przyklad I. Otrzymywanie mutantów, niezdolnych do biosyntezy antybiotyku. Dla uzyskania
mutantów, niezdolnych do biosyntezy antybiotyków, stosowano szczep dziki lub wybrany klon promieniowca
Streptomyces noursei var. polifungini ATCC 21581, wytwarzajac polifungine. Przesaczona przez bibule chroma¬
tograficzna Whetman'a nr 2, zebrana z 14 dniowej hodowli na pozywce agarowej zawiesine spor, naswietlano
promieniami UV o dlugosci fali 2800 A. Czas i warunki naswietlania dobierano tak, aby uzyskac przezywnosc
rzedu do 0,1—1,0%. Naswietlona zawiesine wysiewano w odpowiednim stezeniu na pozywke agarowa na
plytkach Petrie'go tak, aby po 14 dniach inkubacji w temperaturze 28°C otrzymac ponizej 10 kolonii,
równomiernie rozmieszczonych na powierzchni agaru.
Wstepnym kryterium oceny efektywnosci dzialania mutagenu bylo okreslenie czestosci mutacji w kierun¬
ku utraty zdolnosci do wytwarzania aktydionu, antybiotyku wytwarzanego przez szczep dziki równolegle
z polifungina. W tym celu wykorzystano szybka metode chromatografii bibulowej wydzielonych przez kolonie
promieniowca do pozywki agarowej antybiotyków. Analize chromatograficzna prowadzono, jak nastepuje. Na
paski bibuly Whatman nr 1 nakladano w miejscu startu slupki agarowe, wyciete wraz z kolonia z hodowli
naswietlonych spor. Po okolo 30 minutach slupki agarowe usuwano, a paski bibuly umieszczano w komorze
chromatograficznej. Chromatogramy rozwijano w ukladzie octan etylu nasycony woda, w ciagu 6 godzin.
Stosowano chromatografie zstepujaca. Ghromatogramy po rozwinieciu wywolywano metoda bioautografii
wobec drobnoustroju testowego Saccharomyces ceravisiae ATCC 9763. Wartosc Rf dla aktydionu wynosila 0,85,
podczas gdy strefa zahamowania wzrostu, wywolana dzialaniem polifunginy, znajdowala sie w punkcie startu.
Do dalszych prac pozostawiono tylko te kolonie, które utracily zdolnosc wytwarzania aktydionu (brak strefy
zahamowania wzrostu o Rf 0,85).
W tablicy I przytoczono dane czestosci mutacji w kierunku utraty zdolnosci wytwarzania aktydionu pod
wplywem dzialania promieni UV. Czestosc mutacji klonu 13 R promieniowca Streptomyces noursei var.
polifungini ATCC 21581.87 664
Tablica!
•
Doswiadczenie
1
2
3
% przezycia
po dzialaniu
promieni UV
1
0,2
0,1
Ilosc przebadanych
kolonii
326
348
326
Ilosc znalezionych
mutantów
17
45
50
% mutantów
które utracily
zdolnosc wytwarzania
aktydionu
,1
12,9
,3
Zdolnosc wytwarzania polifunginy u mutantów tych sprawdzono metoda dwuetapowej hodowli podpow-
ierzchniowej. Zarodnikami z kolonii mutantów szczepiono skosy agarowe z pozywka z wyciagiem ziemniaczanym
i glukoza, po czym umieszczono je w termostacie o temperaturze 28°C na okres 14 dni.
Hodowle podpowierzchniowa etapu posiewowego prowadzono na pozywce plynnej w kolbach stozkowych
o objetosci 500 ml, zawierajacych po 50 ml pozywki o nastepujacym skladzie: glukoza czysta — 2,0%; azotan
amonowy cz. — 0,5%; WNK (wyciag namokowy kukurydzy) suchej masy — 1,0%; weglan wapniowy cz. — 0,5%,
woda wodociagowa — do 100%. Pozywke wyjalowiono w autoklawie przez przeciag 30 minut w temperaturze
117°C, a po ostudzeniu szczepiono zarodnikami mutantów z hodowli na skosach agarowych z pozywka
z wyciagiem ziemniaczanym i glukoza. Hodowle podpowierzchniowa etapu posiewowego prowadzono na trzesa-
wce obrotowej o 220 obrotach/minute, w pomieszczeniu termostatowym o temperaturze 28°C w ciagu 42 go¬
dzin.
Hodowle podpowierzchniowa etapu produkcyjnego prowadzono na pozywce plynnej w kolbach stozko¬
wych o objetosci 500 ml, zawierajacych po 30 ml pozywki o nastepujacym skladzie: olej sojowy surowy — 3,0%;
WNK 50% suchej masy— 1,0%; drozdze suszone browarnicze — 0,25%; siarczan amonowy techniczny — 0,4%;
weglan wapniowy techniczny — 0,8%; woda wodociagowa do 100%. Pozywke wyjalawiano w autoklawie przez
minut w temperaturze 117°C, a po ostudzeniu do kazdej kolby dodawano, w sposób jalowy, material
posiewowy z hodowli podpowierzchniowej etapu posiewowego w ilosci 5% w stosunku do ilosci pozywki
w kolbie. Hodowle etapu produkcyjnego prowadzono na trzesawce obrotowej o 220 obrotach/minute, w pomie¬
szczeniu termostatowym o temperaturze 28°C w ciagu 120 godzin. Zawartosc polifunginy w brzeczce okreslano
znana metoda spektrofotometryczna.
Postepujac zgodnie ze sposobem wedlug wynalazku, srednio dla uzyskania 20 mutantów, które utracily
zdolnosc wytwarzania polifunginy, wystarczalo przebadanie metoda hodowli podpowierzchniowej 100 mutan¬
tów, wyselekcjonowanych metoda chromatograficzna.
Przyklad 11/Otrzymywanie wysokoaktywnych i stabilnych klonów rewertantów. Dla otrzymania
rewertantów, wytwarzajacych znaczne ilosci polifunginy, stosowano mutanty, które calkowicie stracily zdolnosc
wytwarzania aktydionu, calkowicie lub prawie calkowicie utracily zdolnosc wytwarzania polifunginy oraz
charakteryzujace sie slabym wzrostem i slabym zarodnikowaniem. Mutanty takie pasazowano okolo 10-krotnie
na pozywce agarowej i po kazdym pasazu sprawdzano makroskopowo intensywnosc wzrostu i zarodnikowania.
Szczepy, które w kolejnym pasazu wykazywaly dobry wzrost i obfite zarodnikowanie, co jest wstepnym
kryterium rewersji, poddawano kontroli metoda dwuetapowej hodowli podpowierzchniowej, jak w przykladzie I.
Wyselekcjonowane w ten sposób rewertanty charakteryzowaly sie dobrym wzrostem, obfitym zarodnikowaniem
i wytwarzaly znaczne ilosci polifunginy. <
Otrzymane populacje szczepów rewertantów poddawano oczyszczaniu w celu otrzymania wysokowydaj-
nych jednorodnych klonów, które nastepnie stabilizowano.
Sposób postepowania przedstawiono przykladowo w tablicy II.
Tablica II
Ilosc
Sposób postepowania Szczepy i jego charakterystyka polifunginy
w j/ml
Klon 13R Streptomyces noursei var. polifungini
ATCC21581 wytwarzajacy aktydion, wykazujacy
1700087 664
4
dobry wzrost, obfite zarodnikowanie, niska czyn¬
nosc, ukladu enzymatycznego aktywujacego octan
i propian do acetylo-CoA i propionylo-CoA.
Mutacje indukowane - promienie UV, Mutant 851/26,nie wytwarzajacy aktydionu,wyka- 180
chromatografia kolonii, selek- zujacy slaby wzrost, slabe zarodnikowanie, wyso-
cja mutantów, nie wytwarzajacych ka czynnosc ukladu enzymatycznego, aktywujacego oc-
aktydionu tan i propionian do acetylo-CoA i propionylo-
-CoA przy znamiennie nizszej, niz u szczepu dzi¬
kiego, zdolnosci do syntezy malonianu i metylomalo-
t nianu.¦ .
Mutacja spontaniczna okolo10 Rewertant-R851/26, nie wytwarzajacy aktydionu, 34000
pasazy na pozywce agarowej, ma- wykazujacy bardzo dobry wzrost, obfite zarodni-
kroskopowa kontrola wzrostu i kowanie, wysoka czynnosc obu typów ukladów enzy-
zarodnikowania, kontrola wytwa- matycznych, aktywujacych jednostki budulcowe poli-
rzania polifunginy metodadwu- funginy
etapowej hodowli podpowierzch-
niowej, selekcja rewertantów
wysokoaktywnych. «
Oczyszczanie i stabilizacja re¬
wertantów - rozsiew zarodników
i izolowanie okolo 100 klonów,
3-krotne pasazowanie klonów na po¬
zywce agarowej, kontrola wytwarza¬
nia polifunginy metoda dwueta¬
powej hodowli podpowierzchnio-
wej, selekcja najbardziej aktyw¬
nego i stabilnego klonu.
Postepujac wedlug przedstawionej tabel; otrzymano 15 stabilnych klonów rewertantów o zwiekszonej
zdolnosci wytwarzania polifunginy, tj. wytwarzajacych 64000-74000 jednostek polifunginy w 1 ml hodowli.
Claims (6)
1. Sposób otrzymywania mutantów Streptomyces noursei var. polifungini o zwiekszonej zdolnosci wytwarzania polifunginy, znamienny tym, ze zarodniki promieniowca Streptomyces noursei var. polifungini ATCC 21581 lub jego klonów poddaje sie dzialaniu czynników mutagenicznych, selekcjonuje mutanty, niezdolne' do biosyntezy aktydionu, po czym sposród nich selekcjonuje slabo zarodnikujace mutanty, które calkowicie lub prawie calkowicie utracily zdolnosc do biosyntezy polifunginy, pasazuje sie je i sposród nich selekcjonuje dobrze zarodnikujace rewertanty, które oczyszcza sie i stabilizuje, a nastepnie selekcjonuje stabilne klony wysokoprodukcyjnych rewertantów.
2. Sposób wedlug zastrz. 1; znamienny tym, ze selekcje mutantów, niezdolnych do biosyntezy aktydionu, prowadzi sie metoda chromatograficzna. -
3. Sposób wedlug zastrz. 1; znamienny tym, ze selekcje slabo zarodnikujacych mutantów, które calkowicie lub prawie calkowicie utracily zdolnosc do biosyntezy polifunginy, prowadzi sie metoda hodowli podpowierzchniowej.
4. Sposób wedlug zastrz. 1; znamienny tym, ze pasazowanie slabo zarodnikujacych mutantów, które calkowicie lub prawie calkowicie utracily zdolnosc do biosyntezy polifunginy, prowadzi sie na skosach agarowych z pozywka ziemniaczana. >
5. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze selekcje dobrze zarodnikujacych rewertantów prowadzi sie metoda oceny makroskopowej wzrostu i zarodnikowania.
6. Sposób wedlug zastrz. 1; znamienny tym, ze oczyszczanie i stabilizacje rewertantów prowadzi sie metoda rozsiewu zarodników i selekcji wysokoaktywnych klonów w hodowli podpowierzchniowej, porównu¬ jac ich zdolnosc wytwarzania polifunginy z aktywnoscia szczepu wyjsciowego. Klon R851/26/77, nie wytwarzajacy aktydionu, wyka- 64000 zujacy duzy wzrost i obfite zarodnikowanie. Prac. Poligraf. UP PRL naklad 120+18 Cena 10 zl
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL16353073A PL87664B1 (pl) | 1973-06-22 | 1973-06-22 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL16353073A PL87664B1 (pl) | 1973-06-22 | 1973-06-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL87664B1 true PL87664B1 (pl) | 1976-07-31 |
Family
ID=19963149
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL16353073A PL87664B1 (pl) | 1973-06-22 | 1973-06-22 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL87664B1 (pl) |
-
1973
- 1973-06-22 PL PL16353073A patent/PL87664B1/pl unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Boyle et al. | Radiation-sensitive mutants of T4D I. T4y: A new radiation-sensitive mutant: Effect of the mutation on radiation survival, growth and recombination | |
| Legator et al. | The host-mediated assay, a practical procedure for evaluating potential mutagenic agents in mammals | |
| Lindegren et al. | Genetical mutants induced by ethyl methanesulfonate in Saccharomyces | |
| Gulani et al. | Assessment of process parameters influencing the enhanced production of prodigiosin from Serratia marcescens and evaluation of its antimicrobial, antioxidant and dyeing potentials | |
| de Man et al. | A medium for the cultivation of lactobacilli | |
| Eisenstark et al. | Mutation of Salmonella typhimurium by nitrosoguanidine | |
| Demain | Mutation and the production of secondary metabolites | |
| Sweet et al. | Accurate repair of ultraviolet-induced damage in Micrococcus radiodurans | |
| Butnick et al. | Mutants of Aspergillus nidulans blocked at an early stage of sporulation secrete an unusual metabolite | |
| RHAESE et al. | Studies on the control of development: accumulation of guanosine tetraphosphate and pentaphosphate in response to inhibition of protein synthesis in Bacillus subtilis | |
| PL87664B1 (pl) | ||
| Nakano et al. | MULTIPLE EFFECTS INDUCED BY UNSTABLE MUTATION IN STREPTOMYCES LA VENDULAE | |
| Eritt et al. | A screening method for autoregulators of anthracycline‐producing streptomycetes | |
| Harwood et al. | Mutation of the methane oxidizing bacterium, Methylococcus capsulatus | |
| MOMOSE et al. | Genetic and biochemical studies on 5′-nucleotide fermentation I. Nucleotide degrading ability of Bacillus subtilis and derivation of mutants devoid of this ability | |
| Al-Zarban et al. | Positive control of the L-rhamnose genetic system in Salmonella typhimurium LT2 | |
| D'Mello et al. | The action of sodium deoxycholate on Escherichia coli | |
| US5882915A (en) | Viridiol deficient mutant strains of the biocontrol agent trichoderma virens, process of making and using as biocontrol agent | |
| KR101655778B1 (ko) | 락토바실러스 플란타룸 k46 및 이를 포함하는 조성물 | |
| Yoshikawa et al. | Enhanced formation of isoamyl alcohol in Zygosaccharomyces rouxii due to elimination of feedback inhibition of α-isopropylmalate synthase | |
| Ray et al. | Polypeptide antibiotic-negative sporeformer mutants of Bacillus subtilis | |
| Machida et al. | Studies on the Accumulation of Orotic Acid by Escherichia coli K12 | |
| DE69929745T2 (de) | Neuer Bakteriophage, Verfahren zur Isolierung und dafür geeignetes universales Wachstumsmedium | |
| Sorenson et al. | Comparison of mutagenic and recombinogenic effects of some adenine analogues in Saccharomyces cerevisiae D7 | |
| EP0353689A2 (en) | Method of controlling foliar diseases caused by fungal pathogens with fungicidal bacteria and novel pure cultures of fungicidal bacteria |