Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowego antybiotyku, oznaczonego ponizej symbo¬ lem SL 21429.Wedlug wynalazku nowy antybiotyk wytwarza sie w ten sposób, ze hoduje sie w pozywce szczep grzyba gatunku Chaetomium globosum Kunze ex Fries i antybiotyk wydziela sie z brzeczki pofer¬ mentacyjnej w znany sposób, np. przez ekstrakcje lub adsorpcje i oczyszcza.Stosowany w sposobie wedlug wynalazku nowy szczep Chaetomium globosum Kunze ex Fries wy¬ izolowano z próbki gleby w miejscowosci Kusnacht w Szwajcarii f jego próbke zdeponowano w United States Departement of Agriculture (Northern Utili- zation Research and Development Division), Peoria, 111, St. Zjedn, Am. pod numerem NRRL 3877.Nowy szczep grzyba gatunku Chaetomium globo¬ sum Kunze ex Fries rozwija sie w pozywce wyciag slodowy — wyciag drozdzowy — agar w tempera¬ turze 12—37°C, korzystnie 27° i tworzy w tej po¬ zywce biala do jasnoszarej grzybnie powietrzna i jasna grzybnie substratowa. Po kilku dniach in¬ kubacji tworzy sie ciemne, przewaznie oliwkowo- brazowe otoczenie. Odwrotna strona kolonii oraz podloze zabarwia sie brazowym pigmentem.W kulturze czystej, np. na agarze slodowym grzyb tworzy latwo owocniki w temperaturze 12—30°C i przy wyzszych temperaturach w ciagu 8—10 dni.Sa one zaleznie od warunków hodowli koloru zie¬ lonego do oliwkowozielonego i w koncu czesto u 1S ciemnobrazowego. Owocniki sa kuliste i maja sred¬ nice 200—300 \i. Na szczycie maja okraglawe o- tworki. Peridie ich sklada sie z meandrycznie zrosnietych, brazowych komórek. Jest ono dosc gruboscienne. Z najbardziej zewnetrznej warstwy wyrastaja wokól otworu liczne, po bokach nieco mniej liczne brazowo-zielone wloski. Przy podsta¬ wie maja one grubosc do 4,5 \i, stopniowo zwezaja sie do 3 [x i sa wyraznie faliste. Powierzchnia ich jest pokryta licznymi kolcami i wystepuja prze¬ grody w calej dlugosci. Z wewnetrznej osnowy o toczni wyrastaja trzonkowe zarodnie workowe w postaci maczugowatej, o wymiarach 50—70X12— —15 \i. Sa one otoczone delikatna scianka i przed dojrzewaniem uwalniaja po 8 zarodników worko¬ wych. Zarodniki workowe sa jednokomórkowe, mniej lub bardziej o ksztalcie cytryny z nieco za¬ ostrzonymi koncami o przekroju niedokladnie ku¬ listym, lecz eliptycznym. Poczatkowo sa bezbarwne, pózniej czerwonawe i ostatecznie ciemnobrazowe. Z jednej strony zaopatrzone sa w widoczny wyraz¬ nie otwór zarodnikowy i maja dlugosc 9—12 [x, przewaznie 10—llji i szerokosc 6—9\i, przewaznie 7,5—8,5[a.Szczep NRRL 3877 Chaetomium globosum Kunze ex Fries odpowiada pod wzgledem morfologicznym i fizjologicznym opisanemu przez: L. M. Ames w „A Monograph of the Chaetomiaceae" The United States Army Research and Development Series, nr 2, 1961, pp 26—27. ifcózni sie on od tego wyraznym 84 5783 84 578 4 zielonym zabarwieniem owocników powodowanym barwa wlosków.Nowy szczep NRRL 3877 mozna hodowac na róz¬ nych pozywkach, zawierajacych zwykle substan¬ cje odzywcze dla grzybów. Grzyb wykorzystuje substancje odzywcze zwykle wykorzystywane przez mikroorganizmy, rozwijajace sie saprofitycznie na zródlach wegla, np. glikoze, sacharoze, skrobie, lak¬ toze, dekstryne itp., jako zródla wegla i jako zródlo azotu organiczne i nieorganiczne zwiazki, zawierajace azot, np. pepton lub wyciagi drozdzo¬ we lub miesne, siarczan amonu, azotan amonu i aminokwasy, oraz zwykle sole mineralne i pier¬ wiastki sladowe.Nowy antybiotyk SL 21429 mozna wytworzyc w sposób polegajacy na tym, ze posiewa sie ciekla pozywke zawiesina zarodników nowego szczepu Chaetomium gjobosufn i inkubuje sie przez 6—12 4jni, korzystnie 40 dni w temperaturze 12—37°C, korzystnie Z7?C przy wartosci pH=5,7—6,0. Ho¬ dowle mozna prowadzic w warunkach aerobowych jako hodowle powierzchniowa lub glebinowa z wstrzasaniem, lub w fermentatorach z gazowaniem powietrzem lub tlenem przy jednoczesnym mie¬ szaniu. Po wytworzeniu sie maksymalnej ilosci antybiotyku brzeczke saczy sie i antybiotyk izolu¬ je z przesaczu kultury lub grzybni w zwykly spo¬ sób przez ekstrakcje i/lub adsorpcje.Nowy antybiotyk mozna wydzielic z surowego ekstraktu na drodze chromatograficznej, przez kry¬ stalizacje lub za pomoca rozdzielania przeeiwpra- dowego.Najbardziej korzystny sposób polega na ekstrak¬ cji przesaczu chlorkiem etylenu lub równiez innym rozpuszczalnikiem organicznym, np. benzenem, chloroformem, octanem butylu, chlorkiem metyle¬ nu, butanolem lub octanem etylu. Nastepnie usu¬ wa sie rozpuszczalnik z wyciagów np. przez desty¬ lacje, a pozostalosc, w celu wydzielenia antybioty¬ ku, oczyszcza sie chromatograficznie na srodkach adsorbujacych takich, jak tlenki glinu, zel krze¬ mionkowy, krzemian magnezu itp., rozdzielanie w przeciwpradzie i/lub krystalizacje.Nowy antybiotyk SL 21429 ma cenne wlasciwos¬ ci farmakologiczne i mozna go zatem stosowac jako lek.Nowy antybiotyk SL 21429 ma dzialanie hamu¬ jace obrzek, co stwierdzono w próbach na zwie¬ rzetach {obrzek lap u szczurów, powodowany bra- dykinina). Stosowane dawki zaleza oczywiscie od sposobu podawania i leczonego obiektu. Na ogól uzyskano u zwierzat doswiadczalnych zadowalajace wyniki przy dawce 0,1—10 mg/kg.W miare potrzeby dawki te mozna podzielic na 2—3 czesci lub tez podawac w postaci o przedlu¬ zonym dzialaniu.Ponadto nowy antybiotyk SL 21429 ma dzialanie zapobiegajace owrzodzeniu, jak wykazaly to wy¬ niki z wrzodem wywolanym u szczurów fenylobu- tazonem oraz metoda Shaya. Stosowane dawki moga oczywiscie wahac sie w zaleznosci od sposobu podawania i leczonego obiektu, Na ogól uzyskano Tl zwierzat doswiadczalnych zadowalajace wyniki przy dawce 0,1—10 mg/kg. W miare potrzeby daw¬ ke; te mozna podzielic na 2—3 czesci lub podawac w postaci o przedluzonym dzialaniu. Oprócz tego nowy antybiotyk SL 21429 ma dzialanie immuno- supresyjne na odpornosc komórkowa. W tescie Target celi destruction [Immunology 18, 501 /1970/] nowy antybiotyk po podaniu in vitro hamuje roz¬ klad komórek Targeta za pomoca uczulonych ko¬ mórek sledziony. Przy dawce, wynoszacej 1 mg/litr, nastepuje 100%-owe zahamowanie procesu. Dla wiekszych zwierzat ssacych dawka dzienna nowego ia antybiotyku SL 21429 wynosi okolo 10—100 mg.Przy podawaniu per os dawki czastkowe zawieraja okolo 4—50 mg antybiotyku oraz stale lub ciekle nosniki Antybiotyk SL 21429, wytworzony sposobem we- dlug wynalazku, mozna stosowac jako lek sam, za¬ równo w postaci krystalicznej lub bezpostaciowej, lub jako surowy koncentrat lub w postaci prepara¬ tu do podawania doustnego, dojelitowego lub poza¬ jelitowego.W nizej podanym przykladzie, który objasnia sposób wedlug wynalazku i nie ogranicza jego za¬ kresu, temperature podano w stopniach Celsju¬ sza.Przyklad. Do fermentatora wprowadza sie 10 litrów pozywki, zawierajacej na 1 litr 50,0 g maltozy, 10,0 g maki fasolowej, 1,0 g peptonu, 0,5 g ekstraktu drozdzowego, 0,5 g KHgPO^ 0,5 g MgSQ4 • 7H20, 0,5 g Cai(NOs)2, 0,1 g NaCl, 0,05 g FeS04 • 7H20, 0,01 g ZnCl2, 0,01 g MnCl2 • 411*0, 0,005 g CuS04 • 5H20, 0,005 g CoCl2 • OHjO i wode odmineralizowana, posiewa sie ja zawiesina zarod¬ ników szczepu NRRL 3877 i inkubuje sie przy wartosci pH=5,7 i napowietrzaniu (1,0 litr po- wietrza/minute/1 litr pozywki) i mieszajac (300 obrotów/minute) przez 10 dni w temperaturze 27°.Brzeczke saczy sie, przy. czym otrzymuje okolo 9 litrów przesaczu hodowli i okolo 1 kg grzybni.Przesacz hodowli ekstrahuje sie trzykrotnie 9 litrami chlorku etylenu. Nastepnie fazy organicz- 40 ne przemywa sie dwukrotnie woda porcjami po 4 litry, osusza sie siarczanem sodu i odparowuje do sucha. Po odtluszczeniu za pomoca eteru nafto¬ wego surowy wyciag chromatografuje sie na zelu krzemionkowym Merck 0,05—0,2 mm i nowy anty- 45 biotyk SL 21429 eluuje sie mieszanina chloroform- metanol (98:2) i w celu oczyszczenia przekrystali- zowuje sie z eteru, octanu etylu i dwukrotnie z chloroformu.Dodatkowo czysty antybiotyk SL 21429 mozna u- 50 zyskac z grzybni, która traktuje sie trzykrotnie 1 litrem 90% metanolu w homogenizatorze Ultra- turrax. Tak traktowana grzybnie odsacza sie, odde- stylowuje sie metanol z przesaczu i wodny roztwór 55 ekstrahuje sie trzykrotnie 0,5 litra chlorku etyle¬ nu. Wyciagi w chlorku etylenu przemywa sie 0,3 litra wody, osusza sie siarczanem sodu i odparo¬ wuje do sucha. Tak otrzymany surowy wyciag od¬ tluszcza sie tak, jak i przesacz hodowli, i nastepnie chromatografuje sie, przy czym otrzymuje sie no- «• wy antybiotyk SL 21429.Zawiesine zarodników, stosowana do posiewu, otrzymuje sie w sposób nizej podany. Pozywke, zawierajaca na 1 litr 20 g cerelozy, 2 g peptonu, 2 g ekstraktu slodowego, 2 g ekstraktu drozdzo- « wego, 2 g KH2P04, 2 g MgS04 • 7H^O, 15 g agaru-84 578 -agaru i odmkieralizowana wode zaszczepia sie szczepem NRKL 3877 i inkuibuje sie przez 12 dni w temperaturze 27°C. Gesta warstwe grzybni, rozwi¬ nieta na tej pozywce, dysperguje sie w roztworze fizjologicznym soli kuchennej.Nowy antybiotyk SL 21429 ma nastepujaca cha¬ rakterystyke: zólte krysztaly topiace sie w tem¬ peraturze 172—182°C z utworzeniem nowych kry¬ sztalów o temperaturze topnienia 238°C (rozklad), Skrecalnosc wlasciwa (a) *° =—376° (c=0,78 w pi¬ rydynie) Analiza elementarna: C=73,l°/o, H=6,8%, N=5,3%, O=15,1Vi.Widmo w ultrafiolecie: maksimum przy 221 nm (log e'= 1,96), 274 nm (log e'=1,16), 280 nm (log e'=l,l6), 290 nm (log £'~1,09) (w metanotfi) (figura 1).Widmo w podczerwieni: miedzy innymi pasma przy 3450, 2920, 1695, 1620 cm~i (w KBr) (figura 2).Widmo magnetycznego rezonansu jadrowego (w sulfotlenku 'dwumetylowym) (figura 3). 6C0 Fig. 284 578 1C-5C y.¦A_- v/v_AJ"fr\a /v W< Fig. 3 Bltk 1538/76 r. 105 egz. A4 Cena 10 zl PLThe subject of the invention is a method for the production of a new antibiotic, denoted below by the symbol SL 21429. According to the invention, a new antibiotic is produced in that a fungal strain of the species Chaetomium globosum Kunze ex Fries is cultivated in culture medium and the antibiotic is released from the fermentation broth in the method, e.g. by extraction or adsorption, and purification. The new strain of Chaetomium globosum Kunze ex Fries used in the method according to the invention was isolated from a soil sample in Kusnacht, Switzerland, and its sample was deposited with the United States Department of Agriculture (Northern Utilization Research). and Development Division), Peoria, 111, St. United, Am. under number NRRL 3877. A new strain of the fungus Chaetomium globosum Kunze ex Fries grows in malt extract - yeast extract - agar at a temperature of 12-37 ° C, preferably 27 ° and forms a white to light gray in this medium aerial mycelium and light substrate mycelium. After a few days of incubation a dark, mostly olive-brown environment is formed. The reverse side of the colony and the substrate turn a brown pigment. In pure culture, e.g. on malt agar, the fungus easily forms fruiting bodies at a temperature of 12-30 ° C and at higher temperatures within 8-10 days. They depend on the conditions of growing the color of green light green to olive green and finally often dark brown 1S. The fruiting bodies are spherical and have a diameter of 200-300 µm. There are round holes at the top. Their peridies consist of meandering brown cells. It is quite thick-walled. From the outermost layer, numerous brown-green hairs grow around the opening, slightly less numerous on the sides. At the base, they are up to 4.5 µm thick, gradually taper to 3, and are clearly wavy. Their surface is covered with numerous spikes and there are partitions along their entire length. From the inner carcass of the lupus arise molar sacral sporangia in the form of a club, with dimensions of 50-70X12-15-15. They are surrounded by a delicate wall and release 8 saccular spores each before maturation. Bag spores are single-celled, more or less lemon-shaped, with slightly pointed ends, not perfectly spherical but elliptical in cross section. Initially colorless, later reddish and finally dark brown. On the one hand, they are provided with a clearly visible spore opening and are 9-12 [x] long, usually 10 [mu] l long and 6-9 [mu] wide, usually 7.5-8.5 [a. NRRL 3877 Chaetomium globosum Kunze ex Fries corresponds morphologically and physiologically to that described by: LM Ames in "A Monograph of the Chaetomiaceae" The United States Army Research and Development Series, No. 2, 1961, pp 26-27. If it differs from that in expressive 84 5783 84 578 The new strain NRRL 3877 can be grown on various nutrients, usually containing nutrients for fungi. The fungus uses nutrients normally used by microorganisms that grow saprophytically on carbon sources, e.g. glucose, sucrose , starches, lactose, dextrins and the like, as sources of carbon and as nitrogen source, organic and inorganic nitrogen-containing compounds, e.g. peptone or yeast or meat extracts, ammonium sulphate, ammonium nitrate and amino acids , and usually mineral salts and trace elements. The new antibiotic SL 21429 can be prepared by sowing a liquid medium in a suspension of spores of a new strain of Chaetomium gjobosufn and incubating for 6-12 4 days, preferably 40 days at 12- 37 ° C, preferably Z7 ° C with a pH value of 5.7-6.0. Cultivation can be carried out aerobically as a shake surface or soil culture, or in fermenters with air or oxygen gassing with simultaneous agitation. After the maximum amount of antibiotic has been produced, the wort is sucked and the antibiotic is isolated from the effluent of the culture or mycelium in the usual way by extraction and / or adsorption. The new antibiotic can be separated from the crude extract by chromatography, crystallization or by separation. The most preferred method consists in extracting the filtrate with ethylene chloride or also with another organic solvent, for example benzene, chloroform, butyl acetate, methylene chloride, butanol or ethyl acetate. The solvent is then removed from the extracts, for example by distillation, and the residue, in order to isolate the antibiotic, is purified by chromatography on adsorbing agents such as aluminum oxides, silica gel, magnesium silicate, etc., countercurrent separation and / or crystallization. The new antibiotic SL 21429 has valuable pharmacological properties and can therefore be used as a medicament. The new antibiotic SL 21429 has an anti-edema effect, which has been found in animal trials (swelling in rats, caused by diarrhea). - dykinin). The doses used, of course, depend on the method of administration and the subject to be treated. In general, satisfactory results have been obtained in experimental animals at doses of 0.1-10 mg / kg. If necessary, these doses can be divided into 2-3 parts or given in a long-acting form. In addition, the new antibiotic SL 21429 has a preventive effect. ulceration as demonstrated by the phenylbutazone-induced ulcer results and the Shay method. The applied doses may of course vary depending on the method of administration and the treated object. In general, satisfactory results were obtained for the experimental animals at a dose of 0.1-10 mg / kg. Dosage as needed; these can be divided into 2-3 parts or given as a prolonged action. In addition, the new antibiotic SL 21429 has an immunosuppressive effect on cellular immunity. In the Target celi destruction test [Immunology 18, 501 (1970)], a new antibiotic, when administered in vitro, inhibits the degradation of Target cells with sensitized spleen cells. At a dose of 1 mg / liter, the process is 100% inhibited. For larger suckling animals the daily dose of the new and a SL 21429 antibiotic is about 10-100 mg. When administered orally, the partial doses contain about 4-50 mg of the antibiotic and solid or liquid carriers. The SL 21429 antibiotic, prepared according to the invention, can be used as the drug itself, either in crystalline or amorphous form, or as a raw concentrate or in the form of a preparation for oral, enteral or parenteral administration. The following example, which illustrates the method of the invention and does not limit its scope, temperature is given in degrees Celsius. 10 liters of nutrient medium is introduced into the fermentor, containing 50.0 g of maltose, 10.0 g of bean flour, 1.0 g of peptone, 0.5 g of yeast extract, 0.5 g of KHgPO ^ 0.5 g of MgSQ4 per liter • 7H20, 0.5 g Cai (NOs) 2, 0.1 g NaCl, 0.05 g FeS04 • 7H20, 0.01 g ZnCl2, 0.01 g MnCl2 • 411 * 0, 0.005 g CuSO4 • 5H20, 0.005 g CoCl2 · OH10 and demineralised water, the spore suspension of strain NRRL 3877 is seeded and incubated at pH = 5.7 and aerated (1.0 liter air / minute / 1 liter of nutrient solution) and stirred (300 revolutions / minute) for 10 days at 27 °. The broth is sucked, at. this gives about 9 liters of culture feed and about 1 kg of mycelium. The culture feed is extracted three times with 9 liters of ethylene chloride. The organic phases are then washed twice with water, 4 liters each, dried with sodium sulphate and evaporated to dryness. After degreasing with petroleum ether, the crude extract is chromatographed on 0.05-0.2 mm Merck silica gel, and the new antibiotic SL 21429 is eluted with chloroform-methanol (98: 2) and recrystallized for purification. from ether, ethyl acetate and twice from chloroform. In addition, the pure antibiotic SL 21429 can be obtained from the mycelium, which is treated three times with 1 liter of 90% methanol in an Ultra turrax homogenizer. The mycelium treated in this way is filtered off, the methanol is distilled off from the filtrate and the aqueous solution is extracted three times with 0.5 liters of ethylene chloride. The ethylene chloride extracts are washed with 0.3 liters of water, dried with sodium sulphate and evaporated to dryness. The thus obtained crude extract is degreased, as is the culture effluent, and then chromatographed, whereby the novel antibiotic SL 21429 is obtained. The spore suspension used for the inoculation is obtained as follows. The nutrient solution, containing per 1 liter of cerelose, 2 g of peptone, 2 g of malt extract, 2 g of yeast extract, 2 g of KH2P04, 2 g of MgSO4 • 7H ^ O, 15 g of agar-84 578 -agar and demineralized water inoculated with strain NRKL 3877 and incubated for 12 days at 27 ° C. The dense layer of mycelium, developed on this nutrient, is dispersed in a physiological solution of table salt. The new antibiotic SL 21429 has the following characteristics: yellow crystals melting at 172-182 ° C with the formation of new crystals at a temperature of melting point 238 ° C (decomposition), Specific conductivity (a) * ° = -376 ° (c = 0.78 in pyridine) Elemental analysis: C = 73.1%, H = 6.8%, N = 5.3%, O = 15.1Vi. Ultraviolet spectrum: maximum at 221 nm (log e '= 1.96), 274 nm (log e' = 1.16), 280 nm (log e '= l , I6), 290 nm (log '~ 1.09) (in methanol) (Figure 1). Infrared spectrum: including bands at 3450, 2920, 1695, 1620 cm ~ and (in KBr) (Figure 2) The spectrum of nuclear magnetic resonance (in dimethyl sulfoxide) (figure 3). 6C0 Fig. 284 578 1C-5C y.¦A_- v / v_AJ "fr \ a / v W <Fig. 3 Bltk 1538/76 r. 105 copies A4 Price PLN 10 PL