PL83113B1 - - Google Patents

Description

Uprawniony z patentu: Merck and Co. Inc., Rahway, New Jersey (Stany Zjednoczone Ameryki) Sposób wytwarzania zwiazków karbamyloksylowych Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania zwiazków karbamyilolksylowych. W iszczególinosci wynalazek odnosi sie do sposobu 'wytwarzania 3- -karbamyloksymetylocefalosporyny o wzorze 2 lub odpowiedniego zwiazku typu A2, w którym R' ozna¬ cza atoim wodoru lub grupe acylowa, a R1 ozna¬ cza aitoim wodoru lub grupe acylowa, oraz jej soli lub estru.Chociaz w literaturze naukowej opisano N-pod- stawiione 3-karbamy(loksymetyloce£alosporyny, nie znano dotychczas zadnej metody otrzymywania nie podstawionych 3^karbamylokisymetylocefalosporyn.Znane w chemii isposoby otrzymywania 34karbamy- loksymetylowyoh pochodnych nie byly odpowiednie dla otrzymywania 3-karbamyloksymetylocefalospo- ryn, poniewaz dawaly w rezultacie laktonizaje zwiazku oefalospyryny matomiaslt nie dawaly po¬ zadanego zwiazku karbamyloksymetylowego.Sposób wedlug wynalazku pozwala wniknac tych niedogodnosci.Sposób wedlug wynalazku dotyczy wytwarzania zwiazków karbamyloksylliawyich, szczególnie przepro¬ wadzania 3-hyidroksymetylocefalosporyny o wzorze 1 do 3-karbaimyloksymetyllooefalosporyny o wzorze 2, lub odpowiedniego zwiazku typu A2, w którym R' i R1 maja wyzej podane znaczenia, przez reak¬ cje alkohidlu 3-hydroksymetylowego z izocyjania¬ nem bromosulfonylowym lub z izocyjanianem chlo- rosulfonylowym i hydrolize otrzymanego produktu reakcji. 2 Zgodnie ze sposobem wedlug wynalazku alkohole mozna przeprowadzic w odpowiedni zwiazek kar- bamyloksylowy na drodze reakcji z izocyjanianem halosulfonylowym i hydrolize produktów tej reak- 5 cji. Do przeprowadzenia tej reakcji mozna uzyc zarówno izocyjanianu bromosulfonyilowego jak i izocyjanianu ohlorosuMonylowego, lecz wiskazane jest uzycie raczej drugiego z tych zwiazków jako latwiej dostepnego. Reakcje przeprowadza sie bez- io posrednio pomiedzy alkoholem i izocyjanianem halosulfonylowym, najlepiej w polarnym, organicz¬ nym rozpuszczalniku4 takim jak: acetonitryl lub sulfotlenek dwumetylu i nastepnie produkty reak¬ cji poddaje sie hydrolizie. 15 W celu osiagniecia maksymalnych wydajnosci pozadanego produktu w reakcji, pozadany jest zwy¬ kle nadmiar izocyjanianu halosulfonylowego. Reak¬ cje te przeprowadza sie zwykle w temperaturach od okolo 0° do 100°C. Dokladne warunki przepro- 20 wadzania reakcji tym sposobem podane beda w dalszej czesci dotyczacej poszczególnych alkoholi poddawanych reakcji. Hydroliza produktu reakcji zachodzi najefektywniej w roztworze wodnym w kwasowym zakresie wartosci pH. 25 Sposobem wedlug wynalazku otrzymuje sie po¬ chodne cefalosporyny z podstawnikiem 3Hkarbamy- loksymetylowym.Zwiazki cefalosporyny o ogólnym rwizorze 1, w którym R' oznacza atom wodoru lub rodnik acylo- 30 wy i Rt oznacza atom wodoru lub podstawnik ta- 83113 iV 3 Tu jak grupa metoilraylowa, lufo CKipowiadajacych im zwiazków A* .przeprowadza sie w odpowiednie zwiazki 3-karbamylofl^ymetyiowe. Grupa acylowa R' moze zawierac grupe alifatyczna, aromatyczna lub heterocykliczna, aromatyczno alifatyczna lub heterocykiiczno alifatyczna kwasu karboksylowego lub ^podstawionej grupy siulfonylowej, talkiej jak grupa fenylosulhfonylowa, etylosulfonylowa, bezylo- sulfonylowa, 2,5-dwumetylofenylosuMonylowa, 4- -cMorofenylosuifonyiowa, 4-metoksyfenyiosulfony- lowa ii podobne.Z uwagi na dzialanie praeciwbakteryjne, najle¬ psze podsltawniilki acyiowe wyraza ogólny wzór 3 — w którym Ri0 i Rn maja ponizej podane znaczenie.R10 oznacza atom wodoru, chlorowca, grupe anili¬ nowa, guanidynowa, fosfoniowa, hydroksylowa, tetrazoliiowa, karboksylowa, sulfonowa luib sailifa- minowa, Ru oozacza grupe fenylowa, podstawiona grupe fenylowa, monocykliczna luib heterocykliczna, 5-cio lub 6-cio czlonowa grupe pierscieniowa za¬ wierajaca w pierscieniu jeden luib wiecej atomów tlenu, atom siarki lub azotu, podstawione grupy heterocykliczne, grupe fenylosiarkowa, heterocy¬ kliczne lub podstawione heterocykliczne tio grupy lub grupe cyjanowa. Podstawnikami moga byc: atom chlorowca, grupa karboksymetylowa, guani¬ dynowa, guanidynometylowa, karboksyamidomety- lowa, aminometyilowa, nitrowa, metoksylawa lub metylowa.Przykladami tych preferowanych podstawników moga byc: grupa fenyloacetylowa, 2-fenylo-2-3Tar- boksyaoetylowa, 3-bromofenyioacetylowa, p-amino- metyiofenyloacetylowa, 4-fcanboksylomatylofenylo- acetylowa, 4^hydroksytfenyiLoacetylowa, 4-karbofksy- amidometylcrfenyloacetyiowa, 2-furyloaoetylowa, 5- -nJLtrofuryloacetylowa, 3-furyloaoetylowa, 2-tienylo- aoetylowa, 5-chlorotienyloacetylowa, 5-metoksytie- nyloacetylowa. a-guanidyno-2ntienyloacetylowa, 2- -tienylo-2Hkarboksyloacetylowa, 3-tienyloacetylowa, 4nmetyloitienyloacetylowa, 3-i^o-,tiazoHiloaceltylowa, 4nmert;oiksyiizotiaizOlMoacert;ylowa, 4-izotiazoliloacetylo- wa, 3^lnetyloizo^alzolyiiloaceiyllowa, 5-izotiaizoliloace- tylowa, S-chliofl^jlizatiazolilbacetylowa, 3-metylo-l,2,5- Klrcydia wa, 3^meiylo-l,2,5-tiadiajzoMo-47aiCeityilawa, 3-chloro- -l,2,5Htialdi'azolillo-4-aicetyloWa, 3-nietokisy-l,2,5Hti'a- diazoiilo-4-acetylofenyloMoacelyiowia, 4^pirydylotio- acetylowa, cyjahoacetylowa, tetrazoliloacetylowa a- -fluorofenyloacetylowa, D-fenyloglicylowa, 3-hydro- ksy-D-fenyloglicylowa, 2-tienyloglicylowa, 3-tieny- loglicylowa, fenylomalonylowa, 3-chlorofenyloma- lonylowa, 2-tienyilomalonylowa, 3-tienylomalonylo- wa, a-fosforofenyloacetylowa, a-sulfaminofenylo- acetylowa, a-hydroksyfenyloacetylowa, a-terazolilo- fenyloacetylowa, i a-sulfofenyloacetylowa.Sposób wedlug wynalazku jest specjalniei uzy¬ teczny do przeprowadzenia pochodnych 3-hydroksy- metylowych cefalosporyny, zwlaszcza odpowiednich pochodnych 7-metoksylowych, w których R10 i Ru (z kwasu karboksylowego) oznaczaja atom wodoru lub grupe karboksylowa i Rn oznacza grupe feny¬ lowa, tienylowa lub furylowa, w pochodne 3-kar- bonyloksymetylowe wykazujace wzmozona aktyw¬ nosc antybiotyczna. 113 4 Nowe pochodne cefalosporyny otrzymuje sie przez reakcje cefalosporyn lub 7-metoksycefalosporyn po-« siadajacych podstawnik 3-hydrok6yimeltyliowy, albo sól luib ester flakich cefalosporyn z izocyjanianem 5 halosufonylowym i nastepnie hydrolize otrzymanych produktów reakcji w sposób powyzej * opisany. Jesli poddawana reakcji cefalosporyna zawiera inne podstawniki reagujace z izocyjanianem, takie jak innie grupy hydroksylowe lub aminowe, podstaw- l0 niki te zabezpiecza sie grupami takimi jiak grupa trójbulylokarbonylowia, CHterobutylokarbonylowa, N^ójcMoroetoksyikarbonylowa i podobne, które usuwa sie po podstawieniu grupy karbamyloksy- lowej.¦Na przyklad, kwas 7-trójaimlinocefalosforynowy poddaje sie reakcji z aoetyloestraza z drzewa cy¬ trynowego i otrzymuje sie kwas 7ntrójaminodeza- oetylocefaloispiorynowy, który po reakcji z izocyja¬ nianem halosulifonyiowym i hydrolizie produktów reakcji daje zwiazek 3-kadbamylofcsymetyiowy. 20 Po usunieciu, znanymi w chemii sposobami grupy zabezpieczajacej, otrzymuje sie kwas 3-karbamylo- k^ynietylo-7-animocefemo-3-ika^bokisylowy-4, 'który mlozna acyiowac iznanymi metodami iw celu otrzy¬ mania kwasów 3-kairbaniyloksyimetylo-7-acyloami- docefemo-3-!kairboiksylowyioh-4. 3^karbamyloiksymet3^ocefaloapoiryny otrzymane zgodnie ze siposobem wedlug wynalazku sa czynny¬ mi amtybiotjHkami, aktyiwnymi w malych dawkach przeciw róznym patogennym drobnoustrojom Gram- -dodatnim i Gram-ujemnym takim jak Staphylo- coccus aureus, Streptococcus pyogenes, Proteus vulgaris, Escherichia coli i podobne.Te nowe cefalosporyny sa zaltem uzyteczne w leczeniu infekcji u ludzi i zwierzat. Moga byc one uzywane .takze w postaci rozcienczonej w wodzie, o stezeniu mniejszym niz 100 czesci antybiotyku na milion roztworu, do usuwania .podatnych na te antybiotyki organizmów ze sprzetu farmaceutycz¬ nego, medycznego i dentystycznego, oraz do wydzie- 10 lenia takich drobnoustrojów z mieszanin mikroor- ganizmów.Podobne ponizej przyklady ilustruja sposób we¬ dlug wynalazku.Przyklad I. Kwas 3-karbamyloksymetylo-7- -(2-tienyioacetamiido)-cefemo-3-karboksylowy-4. Do zawiesiny 0,2 g soli potasowej kwasu 3-hydroksy- metylo-7-'(2-tienyloaoetam'ido)Hcefemo-3Hkajrboksy wego-4 w 5 ml acetonitrylu ochlodzonej do tempe- raltury 0°C i utrzymywanej w atmosferze aaotu, do¬ daje sie 0,15 ml izocyjanianu chllorosulfonylowego.Mieszanine reakcyjna miesza sie w ciagu 70 minut i nastepnie odparowuje sie pod zmniejszonym cis¬ nieniem ido sucha.Otrzymana pozostaLosc umieszcza sie w 10 ml octanu etylu i 10 ml n buforu fosforowego. W war¬ stwie wodnej doprowadza sie pH do okolo 1,6 i miesza sie w ciagu 2,5 godziny w (temperaturze pokojowej. |0 Nastepnie przy pomiocy wodnego roztworu siar¬ czanu trójpotasowego doprowadza sie pH do okolo 8 i oddziela warstwe wodna. Warstwe organiczna ponownie ekstrahuje sie 10 ml buforu fosforanowe¬ go przy pH 8. W polaczonych, zebranych warstwach iR wodnych dcprowadza sie pH do wartosci 2,1 przy83113 pomocy kwasu solnego i ekstrahuje sie je dwu¬ krotnie octanem etylowym.Warstwy octanu etylowego suszy sie nad siar¬ czanem sodowym i odparowuje pod zmniejszonym cisnieniem. Otrzymuje sie 0,055 g pozostalosci, która przemywa sie eterem i uzyskuje kwas 3-karbamy- loksymetylo-7- (2-tienyloacetamido) -cefemo-(3-kar- boksylowy-4) w postaci jasnozóltego osadu.Sól potasowa kwasu 3-hydroksymetylo-7-(2-tieny¬ loacetamido)-cefemo-3-karboksylowego-4 uzyta jako substancje wyjsciowa otrzymuje sie z soli sodowej kwasu 7-(2-tienyloacetamido)-cefalosporynowego przez inkubacje w stalej temperaturze z acetylo- esteraza z drzewa cytrynowego w sposób zgodny z metodami dobrze znanymi w chemii.Przyklad II. Kwas 3-hydroksymetylo-7-(t- -butyloksykarbonylo)amino-cefemo-3-karboksylo- wy-4. Kwas 7-aminocefalosporynowy poddaje sie reakcji znanymi metodami z azydkiem t-butylo- karbonylowym w celu otrzymania pochodnej N- -(t-butyloksykarbonylowej). Nastepnie pochodna poddaje sie dzialaniu acetyloesterazy z drzewa cy¬ trynowego w wodnym buforze fosforanowym przy pH 6,5—7 w ciagu 15 godzin. Nastepnie wydziela sie powstaly kwas 3-hydroksymetylo-7-(t-butylo- ksykarbonylo)amino-cefemo-3-karboksylowy-4 z mieszaniny reakcyjnej.Kwas 3-karbamyloksymetylo-7-(t-butyloksykarbo- nylo)amino-cefemo-3-karboksylowy-4.Kwas 3-hydroksymetylo-7-(t-butyloksykarbonylo) amino-cefemo-3-karboksylowy-4 poddaje sie reakcji z izocyjanianem chlorosulfonylowym, otrzymany produkt reakcji hydrolizuje sie i kwas 3-karbamy- loksymetylo-7-(t-butyloksykarbonylo) amino-cefemo- -3-karboksylowy-4 odzyskuje sie zgodnie z proce¬ dura bpisana w przykladzie 1.Kwas 3-karbamyloksymetylo-7-amino-cefemo-3- -karboksylowy-4. 0,5 g kwasu 3-karbamyloksymetylo-7-(t-butylo¬ ksykarbonylo)amino-cefemo-3-karboksylowego-4 w 3,5 ml anizolu miesza sie w ciagu 5 minut w tem¬ peraturze 0°C z 2 ml kwasu trójfluorooctowego.Otrzymana mieszanine reakcyjna odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem i uzyskuje sie wy¬ mieniony w tytule kwas, który oczyszcza sie dalej przez krystalizacje z octanu etylowego.Przyklad III. Kwas 7-(t-butyloksykarbony¬ lo)aminocefalosporanowy. 27,2 g tj. 0,1 mola kwasu 7-aminocefalosporanowego rozpuszcza sie w 250 ml wody i przy pomocy 15% wodorotlenku sodowego doprowadza sie pH roztworu do wartosci 8,7. Do energicznie mieszanego roztworu wkrapla sie 16 g tj. 0,11 mola azydku t-butyloksykarbonylowego i miesza w ciagu ponad 1 godziny utrzymujac pH roztworu okolo 8,7 przy pomocy stabilizatora pH.Na koniec reakcji wskazuje ustalenie sie pH mie¬ szaniny reakcyjnej przy stalej wartosci równej 8,7., Przy pomocy kwasu fosforowego, obniza sie pH roztworu do 2 i trzykrotnie ekstrahuje porcjami po 500 ml octanu etylu. Ekstrakt przemywa sie dwukrotnie woda, suszy i odparowuje. Uzyskuje sie wymieniony w tytule kwas.Sól potasowa kwasu 3-hydroksymetylo-7-(t-bu- tyloksykarbonylo)amino-cefemo-3-karboksylowego-4. 18,5 g kwasu 7-(t-butyloksykarbonylo)aminoce- falosporanowego rozpuszcza sie w 1000 ml prepa¬ ratu zawierajacego acetyloesteraze z drzewa cy¬ trynowego. Utrzymuje sie temperature 30°C i pH 5 w granicach 6,5—6,8 przez dodawanie 1 n NaOH.Gdy juz pH roztworu utrzymuje sie dalej samo¬ rzutnie w powyzszych granicach, mieszanine reak¬ cyjna miesza sie dalej w ciagu 2 godzin, nastepnie zakwasza do pH 2 i ekstrahuje trzykrotnie porcja- 10 mi po 500 ml octanu etylowego. Ekstrakt octanu etylowego przemywa sie dwukrotnie woda i na¬ stepnie ekstrahuje woda zawierajaca taka ilosc kwasnego weglanu potasowego, by utrzymywac pH 7,5. 15 Faze wodna wymraza sie i pozostalosc krystali¬ zuje z mieszaniny metanol-izopropanol uzyskujac wymieniony w tytule zwiazek.Kwas 3-karbamyloksymetylo-7- (t-butyloksykarbo¬ nylo)amino-cefemo-3-karboksylowy-4. 20 5 g soli potasowej kwasu 3-hydroksymetylo-7-(t- -butyloksykarbonylo)amino-cefemo-3-karboksylo- wego-4 zdyspergowanego w 150 ml acetonitrylu chlodzi sie do 0°C utrzymujac w atmosferze azotu i wkrapla sie 3,75 ml izocyjanianu chlorosulfonylo- 25 wego w ciagu co najmniej 15 minut. W ciagu dal¬ szej godziny mieszanine miesza si e w temperatu¬ rze 0°C i nastepnie odparowuje do sucha pod zmniejszonym cisnieniem. Pozostalosc rozpuszcza sie 250 ml octanu etylowego i 250 ml 0,1 n buforu 30 fosforanowego o pH 2. Mieszanine miesza sie w temperaturze pokojowej w ciagu 2,5 godziny. Na¬ stepnie przy pomocy roztworu fosforanu trójpota¬ sowego zwieksza sie pH warstwy wodnej do 8.Mieszanine wstrzasa sie, oddziela warstwe orga- 35 niczna i przemywa znowu buforem fosforanowym o pH 8. W polaczonych warstwach wodnych do¬ prowadza sie pH do 2 i ekstrahuje trzykrotnie porcjami po 200 ml octanu etylowego. Ekstrakt przemywa sie jeszcze woda, suszy nad MgS04 i od- 40 parowuje uzyskujac wymieniony w tytule zwiazek.Kwas 3-karbamyloksymetylo-7-amino-cefemo-3- -karboksylowy-4. 1,5 g kwasu 3-karbamyloksymetylo-7-(t-butyloksy¬ karbonylo)amino-cefemo-3-karboksylowego-4 w 15 45 ml anizolu i 25 ml kwasu trójfluorooctowego mie¬ sza sie w temperaturze 0°C w ciagu 10 minut.Otrzymana mieszanine reakcyjna odparowuje sie pod - cisnieniem 0,1 mm w temperaturze 30°C Do¬ daje sie 5 ml anizolu i odparowuje pod cisnieniem 50 1 mm w temperaturze 30°C. Pozostalosc rozpuszcza sie w 20 ml wody i przez dodanie 0,1 n NaOH doprowadza sie pH do 7,5. Wodny roztwór ekstra¬ huje sie trzykrotnie porcjami po 10 ml. CH2C12; doprowadza sie pH do 2,5 przez ostrozne dodanie 55 zywicy. Dowex 50 jonów H+. Stala pozostalosc od¬ sacza sie, a filtrat wymraza sie uzyskujac w wy¬ niku wymieniony w tytule zwiazek.Kwas 3-karbamyloksymetylo-7-(D-a-azydofenylo- acetylo)amino-cefemo-3-karboksylowy-4. 60 0,271 g kwasu 3-karbamyloksymetylo-7-aminoce- femo-3-karboksylowego-4 zdyspergowanego w 2 ml wody i 3 ml acetonu ochlodza sie do temperatury 0°C i dodajac trójetyloamine doprowadza sie pH mieszaniny do wartosci 8. Nastepnie dodaje sie es 0,200 pirydyny i nastepnie wkrapla sie w ciagu 583113 8 minut 0,200 g chlorku D-a-azydófenyloacetylowego.Mieszanine reakcyjna miesza sie w ciagu 20 minut w temperaturze 0°C. Aceton usuwa sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem a pozostalosc wlewa sie do 10 ml buforu fosforanowego o pH 8 i ekstrahuje sie trzykrotnie porcjami po 8 ml octanu etylowego.W fazie wodnej pH doprowadza sie do 2 i ekstra¬ huje trzy razy porcjami po 15 ml octanu etylowego.Ekstrakt octanowoetylowy suszy sie, odparowuje i uzyskuje wymieniony w tytule zwiazek. Po kry¬ stalizacji z mieszaniny octanu etylowego — i eteru uzyskuje sie oczyszczony produkt.Kwas karbamyloksymetylo-7-(D-a-aminofenyloa- cetylo)amino-cefemo-3-karboksylowy-4. 0,300 g kwasu 3-karbamyloksymetylo-7-(D-a-azy- dofenyloacetylo)amino-cefemo-3-karboksylowego-4 rozpuszcza sie w 10 ml MeOH i 2 ml H20. Do mieszaniny dodaje sie 0,300 g katalizatora Bolhof- fera 10% Pd/c i redukuje sie H2 pod cisnieniem 40 funtów w ciagu 2 godzin. Katalizator odsacza sie* a filtrat odparowuje sie uzyskujac wymieniony w tytule zwiazek. Otrzymany wolny kwas prze¬ prowadza sie w sól z metalami alkalicznymi, taka jak na przyklad sól sodowa lub potasowa lub w sól aminowa, na drodze reakcji ze stechiometry- czna iloscia zasady w roztworze wodnym i liofili¬ zacje otrzymanego roztworu.Przyklad TV. Kwas karbamyloksymetylo-7- -metoksy-7- (2-tienyloacetamido) -cefemo-3-karbo- ksylowy-4. Do zawiesiny 0,3 g soli potasowej kwa¬ su 3-hydroksymetylo-7-metoksy-7- (2-tienyloacetami¬ do)-cefemo-3-karboksylowego-4 w 7,5 ml acetoni- trylu, ochlodzonej do temperatury 0ÓC i utrzymy¬ wanej w atmosferze azotu, dodaje sie 0,25 ml izo¬ cyjanianu chlorosulfonylowego. Otrzymana miesza¬ nine reakcyjna miesza sie w ciagu 1,5 godziny i nastepnie odparowuje pod zmniejszonym cisnie¬ niem do sucha. Otrzymana pozostalosc rozpuszcza sie w 15 mr octanu etylowego i 10 ml 0,1 n buforu fosforanowego, doprowadza sie pH warstwy wodnej do okolo 1,6 i mieszanine miesza w ciagu 3 godzin w temperaturze pokojowej. Nastepnie doprowadza sie, przy pomocy wodnego roztworu siarczanu trój- potasowego, wartosc pH warstwy wodnej do okolo 8 i warstwe oddziela sie. Warstwe organiczna po¬ nownie ekstrahuje sie 15 ml buforu fosforanowego o pH 8. Polaczone warstwy wodne zakwasza sie kwasem solnym do pH 20,0 i ekstrahuje dwukrot¬ nie 10 ml octanu etylowego. Ekstrakty octanu ety¬ lenowego suszy sie nad siarczanem sodowym i od¬ parowuje pod zmniejszonym cisnieniem az do uzyskania pozostalosci zawierajacej wymieniony w tytule zwiazek.W ten sam sposób mozna otrzymac odpowiednie pochodne 3-karbamyloksymetylowe, gdy podda sie reakcji sole potasowe kwasów: 3-hydroksymetylo- -7-metoksy-7-(2-furyloacetamrdo) -cefemo-3-karbo- ksylowego-4, 3-hydroksymetylo-7-metoksy-7- (2-tia- nafteno-2-acetamido)-cefemo-3-karboksylowego-4, 3-hydroksymetylo-7-(2-tienylo-2-karboksyacetami- do)-cefemo-3-karboksylowego-4 i 3-hydroksymety- lo-7-(2-fenylo-2-karboksyacetamido)-cefemo-3-kar- boksylowego-4 z izocyjanianem chlorosulfonylowym i otrzymany produkt reakcji hydrolizuje sie w sposób poprzednio opisany.Uzyte w tym przykladzie zwiazki wyjsciowe otrzymuje sie z odpowiednich zwiazków 3-aceto- ksymetylowych przez inkubacje z acetyloesteraza i drzewa cytrynowego zgodnie z poznana procedura. 5 Sole kwasu 7-metoksy-7-(2-tienyloacetamido)-ce- . falosporynowego, kwasu 7-metoksy-7-(2-furyloace- tamido)cefalosporynowego i kwasu 7-metoksy-7- -2-tianafteno-2-acetamido)cefalosporynowego wy¬ twarza sie zgodnie ze sposobami opisanymi w opi- 10 sie patentowym brytyjskim zgloszonym 30 kwie¬ tnia 1971 r. pod numerami 29158/70, 33415/70, 46556/70, 58731/70, 3296/71, 3297/71, 3298/71, 4179/71, 4479/71, 4480/71 i 5588/71.Tak wiec, sól potasowa kwasu 3-hydroksymety- 15 lo-7-metoksy-7-(2-tienyloacetamido)-cefemo-3-kar- boksylowego-4 otrzymuje sie w nastepujacy sposób: Ester benzhydrylowy kwasu 7-aminocefalospory¬ nowego. Do mieszanki papki 6,8 g tj. 0,025 mola kwasu 7-aminocefalosporynowego w 300 ml nieza- 20 wierajacego nadtlenku dioksanu w temperaturze pokojowej, dodaje sie 4,3 g tj. 0,022 mola mono¬ hydratu kwasu p-toluenosulfonowego. Klarowny roztwór zateza sie pod próznia i przeplukuje dwu¬ krotnie dioksanem. 25 Pozostalosc rozpuszcza sie w 300 ml dioksanu w pokojowej temperaturze i wkrapla sie w ciagu 15 minut roztwór 10 g tj. 0,05 mola dwufenylodia- zometanu w 25 ml dioksanu. Roztwór nabiera ko¬ loru wina; w ciagu dalszych 30 minut miesza sie 30 go, a nastepnie dodaje sie 25 ml MEOH dla znisz¬ czenia nadmiaru 02CN2. Mieszanine zateza sie pod próznia i pozostalosc rozdziela sie do 200 cm3 CH2C12 i 200 ml wody zawierajacej 10 g K2HP04 o pH 8,5. Warstwe organiczna przemywa sie woda, 35 suszy nad Na2S04 i zateza pod próznia az do uzys¬ kaniaoleju. » Olej miesza sie ze 100 ml eteru w ciagu 1 godzi¬ ny. Osad odsacza sie, przemywa woda z eterem i suszy do stalej wagi. Uzyskaje sie 4,7 g estru 40 benzhydrylowego kwasu 7-aminocefalosporynowego o tt. 126—128°C. ' Ester benzhydrylowy kwasu 7-diazocefalospory- nowego. Do mieszanej mieszaniny 1,6 g NaNOg, 30 ml wody i 40 ml CH2C12 w temperaturze 0°C do- 45 daje sie 880 mg tj. 0,002 mola esteru benzhydrylo¬ wego a nastepnie w ciagu kilku minut roztwór 760 mg tj. 0,004 mola kwasu p-toluenosulfonowego w 5 ml wody. Mieszanine miesza sie w temperatu¬ rze 0°C w ciagu 20 minut, nastepnie odbiera sie 50 warstwe organiczna, przemywa jeden raz porcja 10 ml wody z lodem, suszy nad Na2S04 w tempe¬ raturze 0°C, filtruje i zateza pod próznia w tem¬ peraturze pokojowej. Uzyskuje sie 900 mg estru benzyhydrylowego kwasu 7-diazocefalosporynowego 55 w postaci szkla.Ester benzhydrylowy kwasu 7-bromo-7-azydoce- falosporynowego. Do roztworu 900 mg estru ben¬ zhydrylowego kwasu 7-diazocefalosporynowego w 20 ml eH2Cl2 i 10 ml CH8N02 w temperaturze w 60 granicach od 0° do 10 °C dodaje sie cala ilosc Et3N+HN3" a nastepnie roztwór BrN8, potem 50 ml wody, po czym dodaje sie stalego NaHCOs az do uzyskania pH 8.Warstwe organiczna oddziela sie i ekstrahuje dwa 65 razy porcjami po 20 ml wddy, suszy nad Na2S04 \9 i zateza pod próznia. Uzyskuje sie 900 mg wymie¬ nionego w tytule zwiazku.Przygotowanie roztworu BrN8. Do 8 ml CH2C12 w temperaturze 0°C dodaje sie 2,66 g tj. 0,04 mola NaN3, nastepnie 0, 65 g tj. 0,0042 mola bromu. Do "tej mieszaniny wkrapla sie w czasie mieszania 2 ml stezonego kwasu solnego. Mieszanine miesza sie w ciagu 3 godzili w temperaturze 0°C.Warstwe organiczna dekantuje sie i ekstrahuje sie warstwa wodna jeden raz porcja 5 ml CH2C12.Polaczone warstwy organiczne przechowuje sie w temperaturze —10°C.Przygotwanie roztworu Et8N+HN3". Do papki 1,5 g NaN8 w 5 ml wody i 10 ml Cl^Cla w temperatu¬ rze —10°C wkrapla sie przy temperaturze w gra¬ nicach od —10°C do 0°C 4 ml 50% H2S04.Warstwe organiczna zlewa sie z wodnej pasty.Ekstrakt wodny przemywa sie jeden raz 5 cm3 CH2C12. Polaczone warstwy organiczne suszy sie nad CaCl2. Zdekantowany roztwór HNS doprowa¬ dza sie przy pomocy Et8N do pH 7 i przechowuje w temperaturze —10°C.Ester benzhydrylowy kwasu 7-metoksy-7-azydo- cefalosporynowego. Do roztworu 400 mg tj. 0,00072 moli bromoazydku w 30 ml metanolu dodaje sie 150 mg tj. 0,0008 mola AgBF4. Mieszanine miesza sie w ciemnosci w ciagu 2,5 godziny.Mieszanine zateza sie pod próznia i pozostalosc przefiltrowuje sie z 50 ml CH2C12. Filtrat ekstra¬ huje sie dwukrotnie nasyconym roztworem NaHCÓ3, dwukrotnie woda, suszy nad bezwodnym MgSQ4 i zateza pod próznia. Uzyskuje sie 300 mg kryszta¬ lów o tt. 145—148°C z wydajnoscia 83%.Ester benzhydrylowy kwasu 7-metoksy-7-amino- cefalosporynowego. 1,0 g estru benzhydrylowego kwasu 7-azydo-7-metoksycefalosporynowego rozpu¬ szcza sie w 100 ml dioksanu, dodaje 1,0 g tlenku platynowego i mieszanine reakcyjna miesza sie w atmosferze wodoru pod cisnieniem atmosferycznym w ciagu 1 godziny. Dodaje sie ponownie 1,0 g tlen¬ ku platynowego, mieszanine reakcyjna umieszcza sie ponownie w atmosferze wodoru i miesza w cia¬ gu 3 godzin, az do calkowitego przereagowania azydku, co oznacza sie przy pomocy analizy w pod¬ czerwieni. Rozpuszczalnik usuwa sie pod zmniejszo¬ nym cisnieniem pozostalosc umieszcza w 50 ml chloroformu i filtruje sie przez Silikazel G w chlo¬ roformie umieszczonym na 60 ml lejku ze spieczo¬ nego szkla. Osad eluuje sie chloroformem tak dlu¬ go az zbieze sie 200 ml chloroformu. Chloroform usuwa sie pod zmniejszonym cisnieniem i uzyskuje sie 0,632 g estru benzhydrylowego kwasu 7-meto- ksy-7-aminocefalosporynowego, który acyluje sie bezposrednio, bez dalszego oczyszczania.Ester benzhydrylowy kwasu 7-metoksy-7-(2-tie- nyloacetamido)cefalosporynowego. 0,632 g estru benzhydrylowego kwasu 7-metoksy-7-aminocefalo- sporynowego umieszcza sie w 25 ml chlorku mety¬ lenowego i ochladza do temperatury 0°C, wkrapla sie 0,6 ml chlorku 2-tienyloacetylowego w ciagu 30 sekund a 60 sekund pózniej dodaje sie 0,6 ml pirydyny. Mieszanine reakcyjna miesza sie w tem¬ peraturze 0°C w ciagu 15 minut i wylewa na po¬ kruszony lód. Mieszanine wstrzasa sie, oddziela sie 113 10 * warstwe organiczna i przemywa jednorazowo 20 ml wody, jednorazowo 20 ml 5% kwasnego weglanu sodowego i jeszcze raz 20 ml wody. Chlorek mety¬ lenu suszy sie i odparowuje do sucha. Otrzymuje 5 sie 1,417 g surowego produktu, który umieszcza sie na kolumnie wypelnionej 60 g silikazelu pod ben¬ zenem. Kolumne eluuje sie benzenem podajac 100 ml frakcje, nastepnie 300 ml mieszaniny chlorku metylenowego i benzenu w stosunku 1 :1 w 3 frak- 10 ejach i 500 ml chlorku metylenowego w 5 frak¬ cjach.Produkt usuwa sie z kolumny przez eluacje 400 ml chloroformu w 4 frakcjach. Uzyskuje sie 0,592 g produktu, który umieszcza sie w 25 ml chlorku 15 metylenowego i miesza w temperaturze pokojowej z 20 ml wodnego roztworu 0,120 g kwasnego we¬ glanu sodowego w ciagu 0,5 godziny. Warstwy roz¬ dziela sie; warstwe organiczna przemywa sie woda, suszy i odparowuje do sucha, uzyskujac 0,420 wy- 20 mienionego w tytule zwiazku, który daje 1 pasmo w polu chromatografii cienkowarstwowej.Sól potasowa kwasu 7-metoksy-7-(2-tienyloaceta- mido)cefalosporynowego. 0,420 g estru benzhydry¬ lowego kwasu 7-metoksy-7-(2-tienyloacetamido)ce- 25 falosporynowego rozpuszcza sie w 3,5 ml anizolu i traktuje 10 ml kwasu trójfluorooctowego w tem¬ peraturze pokojowej w ciagu 10 minut. Kwas trój- fluorooctowy i anizol usuwa sie pod zmniejszonym cisnieniem utrzymujac temperature ponizej 40°C. 30 Pozostalosc umieszcza sie w 25 ml chloroformu i traktuje 20 ml wody zawierajacej 0,120 g kwas¬ nego weglanu potasowego. Mieszanine miesza sie w ciagu 0,5 godziny w temperaturze pokojowej, warstwe organiczna oddziela sie i przemywa woda, 35 Zebrane warstwy wodne przemywa sie dwukrotnie chlorkiem metylenowym i liofilizuje, uzyskujac 0,382 g wymienionego w tytule zwiazku w postaci brazowego proszku.Sól potasowa kwasu 3-hydroksymetylo-7-meto- 40 ksy-7-(2-tienyloactamido)-«efemo-3-karboksylowe- go-4.Traktujac sól potasowa kwasu 7-metoksy-7-(2- -tienyloacetamido)cefalosporynowego w roztworze wodnym o pH 6 acetyloesteraza otrzymana ze skó- 45 rek pomaranczowych, otrzymuje sie w wyniku kwas 3-hydroksymetylo-7-metoksy-7- (2-tienyloace- tamido)-cefemo-3-karboksylowy-4, który przepro¬ wadza sie w sól potasowa sposobem poznanym po¬ przednio. 50 Sól potasowa kwasu 3-hydroksymetylo-7-meto- ksy-7-(2-karboksy fenyloacetamido) -cefemo-3-karbo- ksylowego-4 otrzymuje sie w nastepujacy sposób: Ester benzhydrylowy kwasu 7-(2-karboksy-2-feny¬ loacetamido)-7-metoksycefalosporynowego. Do roz- 55 tworu 0,5 g estru benzhydrylowego kwasu 7-ami- no-7-metoksycefalosporynowego w 15 ml chlorku metylenowego dodaje sie chlorku benzhydrylofe- nylomalonylawego (sposób otrzymywania podany jest ponizej) oraz 0,5 ml pirydyny. Uzyskana mie- 60 szanine reakcyjna miesza sie w ciagu 30 minut i nastepnie dodaje sie 12 ml wody. Mieszanine wodna miesza sie w ciagu 5 minut i rozdziela sie warstwy. Czesc chlotrkowo-metylenowa przemywa sie 2,5 n HC1, woda, dwukrotnie wodnym roztwo- 65 rem kwasnego weglanu sodowego i nasyconym ¦•83113 11 12 ^chlorkiem sodowym. Warstwe rozpuszczalnika su¬ szy sie nad siarczanem magnezowym, filtruje i odparowuje w temperaturze ponizej 25°C pod zmniejszonym cisnieniem, otrzymujac 0,695 g wy¬ mienionego w tytule zwiazku. Oczyszcza sie go metoda chromatograficzna na 50 g obojetnego sili- kazelu eluujac chloroformem. Otrzymuje sie 400 mg produktu w postaci brazowego szkla.Uzywany poprzednio chlorek benzhydrylofenylo- malonylu otrzymuje sie w nastepujacy sposób. Do roztworu 19,25 g kwasu fenylomalonowego w 165 ml octanu etylowego dodaj£ sie roztwór 25 g dwu- fenylodwuazometanu w 100 ml octanu etylowego w ciagu 15 minut w temperaturze w granicach 15— 20°C. Roztwór miesza sie w ciagu dalszych 10 mi¬ nut i dodaje sie 500 ml wody, oraz wystarczajaca ilosc 50% wodorotlenku sodowego w temperaturze 15°C, by zalkalizowac mieszanine reakcyjna. War¬ stwe rozpuszczalnika oddziela sie od mieszaniny i ekstrahuje dwukrotnie wodnym roztworem kwas¬ nego weglanu sodowego. Polaczone roztwory wodne przemywa sie dwukrotnie octanem etylowym, chlo¬ dzi sie, zakwasza kwasem solnym i ekstrahuje trzykrotnie octanem etylowym. Ekstrakty przemy¬ wa sie dwukrotnie woda, raz nasyconym roztwo¬ rem chlorku sodowego i nastepnie suszy sie nad siarczanem magnezowym. Rozpuszczalnik odparo¬ wuje sie w temperaturze ponizej 25°C pod zmniej¬ szonym cisnieniem az do uzyskania oleju, który krystalizuje sie z 200 ml mieszaniny eteru z ete¬ rem naftowym w stosunku 1 :3, uzyskujac 20,9 g benzhydrylofenylomalonylu o tt. 119,5—122°C. Do papki 0,7 g tego monestru w 2,5 ml wody dodaje sie 2,10 ml 0,962 n wodorotlenku sodowego. Roz¬ twór miesza sie w ciagu 3 minut, filtruje i wy- mraza ortzymujac sól sodowa tego monoestru. Do tej soli dodaje sie 5 ml benzenu i papke traktuje sie w temperaturze 0°C w 1,5 ml chlorku oksalilu.Mieszanine utrzymuje sie w temperaturze 0°C w ciagu 10 minut i w temperaturze 25°C w ciagu 5 minut i nastepnie odparowuje sie w temperaturze ponizej 25°C pod zmniejszonym cisnieniem i pozo¬ stalosc zateza sie dwukrotnie w czterochlorku we¬ gla. Produkt zawarty w 5 ml czterochlorku wegla.Produkt zawarty w 5 ml czterochlorku wegla, filtruje sie bez dostepu wilgoci i zateza, otrzymu¬ jac chlorek benzhydrylofenylomalonylu.Sól dwupotasowa kwasu 7-(2-karboksy-2-fenylo- acetamido)-7-metoksycefalosporynowego. 400 mg estru benzhydrylowego kwasu 7-(2-karboksy-2-fe- nyloacetamido)-7-metoksycefalosporynowego trak¬ tuje sie w temperaturze 0°C, w ciagu 2 minut, 1,2 ml anizolu i 6 ml kwasu trójfluorooctowego. Pro¬ dukt reakcji wymraza sie, i destyluje z para wodna w niskiej temperaturze pod wysoka próznia, roz¬ ciencza anizolem i ponownie destyluje z para wo¬ dna w temperaturze 25°C. Pozostalosc skladajaca sie z wolnego kwasu umieszcza sie w 20 ml 1 mo- larnego roztworu kwasnego weglanu sodowego, przemywa czterokrotnie niewielkimi ilosciami chlorku metylenu zakwasza HC1, nasyconym NaCl i ekstrahuje cztery razy porcjami po 10 octanu ety¬ lowego. Ekstrakty przemywa sie dwukrotnie nasy¬ conym chlorkiem sodowym, suszy siarczanem ma¬ gnezowym, filtruje i odparowuje pod zmniejszo¬ nym cisnieniem, uzyskujac 218 mg kwasu 7-(2-kar- boksy-7-fenyloacetamido)-7-metoksycefalosporyno- wego w postaci zóltego syropu. Kwas ten rozpusz¬ cza sie w 5 ml wody zawierajacej 79 mg kwasne- 5 go weglanu potasowego i suszy przez wymrazanie.Osuszona pozostalosc rozpuszcza sie w 5 ml wody, przesacza i ponownie liofilizuje uzyskujac 182 mg wymienionego w tytule zwiazku.Sól dwupotasowa kwasu 3-hydroksymetylo-7-me- 10 toksy-7-(2-karboksy-2-fenyloacetamido)-cefemo-3- -karboksylowego-4. Na produkt, wymieniony w ty¬ tule dziala sie acetyloesteraza o pH 6 otrzymujac wymieniony w tytule zwiazek.W ten sam sposób mozna otrzymywac inne sole 15 kwasu 3-hydroksymetylo-7-metoksy-7-acyloamido- -cefemo-3-karboksylowego-4.Przyklad V. Ester benzhydrylowy kwasu 3- -karbamyloksy-7-a-metoksy-7-(D-5-amino-5-karbo- 20 ksypentanoamido)-cefemo-3-karboksylowego-4. Na lodowata, mieszana zawiesine 0,368 g soli potaso¬ wej estru benzhydrylowego kwasu 3-hydroksyme- tylo-7«-metoksy-7- (D-5-t-butyloksykarbonyloamino)- -5-karboksypentanoamido)-cefemo-3-karboksylowe- 25 go-4 w 5 ml suchego acetonitrylu dziala sie 0,15 ml izocyjanianu chlorosulfonylowego. Otrzymana mie¬ szanine miesza sie w ciagu 80 minut w atmosfe¬ rze azotu i nastepnie odparowuje pod próznia pra¬ wie do sucha. Pozostalosc rozpuszcza sie w miesza¬ ninie octanu etylowego i 0,1 n buforu fosforanowe¬ go w stosunku 1:1. Po doprowadzeniu pH do 1,5 przy pomocy 2,5 n kwasu solnego mieszanine mie¬ sza sie w ciagu 150 minut. Warstwe wodna od¬ dziela sie, rozciencza etanolem i traktuje pirydyna wkraplana do momentu, gdy pojawi sie osad i po¬ zostawia do ochlodzenia na noc w lodówce. Naste¬ pnie substancje stala przemywa sie zimnym etano¬ lem i eterem i suszy powietrzem. Uzyskuje sie wymieniony w tytule zwiazek w postaci bezposta¬ ciowego pudru. 40 Jednosodowa sól kwasu 3-karbamyloksy-7a-meto- ksy-7- (D-5-amino-karboksypentanoamido)-cefemo- -3-karbóksylowego-4. Mieszanine zawiesiny 0,256 g estru benzhydrylowego kwasu-3-karbamyloksy-7a- 45 -metoksy-7-(D-5-amino-5-karboksypentanoamido) - -cefemo-3-karboksylowego-4 przeprowadza sie do roztworu przez dodanie 5 ml kwasu trójfluoroocto¬ wego i 3 ml anizolu, i trzyma sie w ciagu 10 minut w temperaturze pokojowej, a nastepnie usuwa sie 50 Pod próznia kwas trójfluorooctowy i anizol. Pozo¬ stalosc rozpuszcza sie w 50 ml wody i przemywa dwoma porcjami chloroformu. Warstwe wodna roz¬ ciencza sie dalej woda, zakwasza rozcienczonym kwasem solnym do pH 2 i absorbuje na 50 ml zy- 55 wicy Dowex o wymiarach 50X2 (postac jonu wo¬ dorowego). Kolumne przemywa sie woda i naste¬ pnie eluuje 2% roztworem wodnym pirydyny az do chwili gdy pH efluentów z kolumny wzrosnie do pH 7. Eluat alkalizuje sie rozcienczonym wo- „ dorotlenkiem sodowym do pH 8 i zateza pod Ol) zmniejszonym cisnieniem w celu odpedzenia piry¬ dyny. Tak otrzymany produkt jest wymienionym w tytule zwiazkiem.Substancje wyjsciowa, ester benzhydrylowy kwa- 65 su 3-hydroksymetylo-7a-metoksy-7-(D-5-amino-5- 3513 -karboksypentanoamido)-cefemor3-karboksylowe- go-4 otrzymuje sie w nastepujacy sposób: Do 48 ml lodowatego eteru dwuetylowego doda¬ je sie 4,8 ml stezonego kwasu siarkowego i 48 ml swiezo przedestylowanego alkoholu benzylowego.Eter usuwa sie pod zmniejszonym cisnieniem i pozostalosc miesza sie i traktuje porcjami 7,83 g kwasu D-a-aminoadypinowego. Nastepnie miesza¬ nine utrzymuje sie w ciagu 24 godzin w tempera¬ turze pokojowej, potem rozciencza sie ja 100 ml absolutnego etanolu i 20 ml pirydyny. Po ochlodze¬ niu uzyskuje sie delikatny, bialy osad, który zbie¬ ra sie, przemywa etanolem i eterem i rekrystalizu- je z wrzacej wody zawierajacej kilka kropli piry¬ dyny. Uzyskuje sie analitycznie czysty ester benzy¬ lowy kwasu D-5-amino-pentananokarboksylowego-5.Do mieszanej zawiesiny 3,13 g estru benzylowe¬ go kwasu D-5-amino-pentananokarboksylowego-5 i 1,01 g tlenku magnezowego w 32 ml woc(y dodaje sie roztwór 3,58 g azydku t-butyloksykarbonylowe- go w 40 ml dioksanu.Mieszanine miesza sie w zamknietej kolbie w ciagu 66 godzin w temperaturze w granicach 45— 46°C, a nastepnie schladza sie. Mieszanine filtruje sie i filtrat zateza sie pod próznia odpedzajac dio¬ ksan. Wodna pozostalosc rozciencza sie 40 ml wo¬ dy nasyconej chlorkiem sodowym; przy pomocy kwasu cytrynowego doprowadza sie pH tej warstwy do pH 3 i ekstrahuje octanem etylowym. Pola¬ czone ekstrakty przemywa sie woda i suszy nad bezwodnym siarczanem magnezowym. Po odparo¬ waniu rozpuszczalnika pod zmniejszonym cisnie¬ niem otrzymuje sie ester benzylowy kwasu D-5-t- -butyloksykarbonyloamino-pentananokarboksylowe- go-5 w postaci klarownego oleju.Do mieszanego roztworu 2,70 g estru benzylowego kwasu D-5-t-butyloksykarbonyloamino-pentanano- karboksylowego-5, 2,32 g 2,2,2-trójchloroetanolu i 1,24 g pirydyny w 70 ml suchego chlorku metyle¬ nowego dodaje sie w jednej porcji 1,60 g dwucy- kloheksylokarbodwuimidu. Natychmiast pojawia sie delikatny, bialy osad; Mieszanine miesza sie w cia¬ gu 60 minut w temperaturze pokojowej w atmo¬ sferze azotu i nastepnie filtruje sie w celu usunie¬ cia dwucykloheksylomocznika. Filtrat przemywa sie 0,1 n kwasem solnym woda, 2% roztworem wo¬ dnym kwasnego weglanu sodowego, nasyconym roztworem wodnym chlorku sodowego i suszy nad bezwodnym siarczanem magnezowym. Po odparo¬ waniu rozpuszczalnika pozostaje mieszanina dwu¬ cykloheksylomocznika i jasno-zóltego oleju.Surowy produkt, w malej objetosci benzenu, wprowadza sie na kolumne zawierajaca 70 g sili- kazelu. Po eluacji benzenem i mieszaninami octanu -etylowego z benzenem otrzymuje sie czysty ester benzylowy kwasu D-5-t-butyloksykarbonyloamino- - (2,2,2-trójchloroetoksy)pantananokarbonylowego- 5 iv postaci klarownego oleju.Mieszanine 1,18 g estru benzylowego kwasu D-5- -t-butyloksykarbonyloamino-(2,2,2-trójchloroetoksy) pentananokarbonylowego-5 i 0,12 g wstepnie zrów¬ nowazonego 10% palladu na weglu w 40 ml abso¬ lutnego etanolu, miesza sie w atmosferze wodoru w temperaturze pokojowej. Po zaabsorbowaniu wo¬ doru w ilosci odpowiadajacej jednemu równowaz- 1113 14 - nikowi, mieszanine filtruje sie. Filtrat odparowuje sie uzyskujac klarowny olej. Surowy produkt oczy¬ szcza sie na drodze preparatywnej chromatografii cienkowarstwowej na silikazelu uzywajac do roz- 5 wijania mieszaniny pirydyny z eterem naftowym w stosunku 1 :2. Polaczone z kilku plytek mono- kwasowe pasma miesza sie w ciagu 15 minut z 5% roztworem wodnym kwasnego weglanu sodo¬ wego i nastepnie filtruje sie by usunac silikazel. 10 Filtrat zakwasza sie do pH 2,5 stezonym kwasem solnym i ekstrahuje octanem etylowym. Polaczone ekstrakty suszy sie nad bezwodnym siarczanem so¬ dowym i odparowuje pod zmniejszonym cisnieniem uzyskujac kwas D-5-t-butyloksykarbonyloamino-(2, 15 2,2-trójchloroetoksy)pentananokarbonylowego-5 w postaci klarownego oleju.Roztwór 1,14 g kwasu D-5-t-butyloksykarbony- loamino-(2,2,2-trójchloroetoksy)karbonylomaslowe- go pentananókarbonylowego-5 w 100 ml suchego 2Q benzenu chlodzi sie w lazni lodowej i miesza pod¬ czas dodawania 0,50 ml chlorku oksalilu i 0,10 ml dwumetyloformamidu. Uzyskany roztwór miesza sie w ciagu 60 minut w temperaturze ca 10°C w atmosferze azotu. Po odparowaniu rozpuszczalnika 25 i nadmiaru chlorku oksalilu pozostaje surowy chlo¬ rek kwasowy w postaci jasno-pomaranczowego oleju.Do mieszanego roztworu 0,650 g estru benzhy- drylowego kwasu 7a-metoksy-7-aminocefalospory- nowego w 15 ml chlorku metylenowego w tempe- 30 raturze 0°C wkrapla sie w ciagu 30 sekund roztwór 0,560 g chlorku D-5-t-butyloksykarbonyloamino-(2, 2,2-trójchloroetoksy)pentananokarbonylowego-5 w 10 ml suchego chlorku metylenowego, a w 60 se¬ kund pózniej 0,11 ml pirydyny. Mieszanine reak- 35 cyjna miesza sie w ciagu 30 minut w temperatu¬ rze 0°C, nastepnie wylewa na pokruszony lód. Mie¬ szanin^ wstrzasa sie, oddziela warstwe chlorku metylenowego i przemywa buforem fosforanowym o pH 2 i woda. Po osuszeniu nad bezwodnym siar- 40 czanem magnezowym chlorek metylenowy odparo¬ wuje sie pod próznia do uzyskania surowego pro¬ duktu w postaci kleistego oleju. Produkt poddaje sie oczyszczaniu chromatograficznemu na 40 g sili¬ kazelu uzywajac jako eluatu mieszaniny benzenu 45 z octanem etjdu w stosunku objetosciowym 1:1, uzyskujac ester benzhydrylowy kwasu 7ce-metoksy- -7- [D-5-t-butyloksykarbonyloamino-5- (2,2,2-trójchlo¬ roetoksy) -karbonylopentanoamido]cefalosporynowe- go w postaci klarownego oleju. 50 Roztwór 0,930 g estru benzhydrylowego kwasu 7a-metoksy-7-[D-5-t-butyloksykarbonyloamino-5- -(2,2,2^trój chloro)-karbonylopentanoamido] cefalo- sporynowego w 5 ml 90% wodnego roztworu kwa¬ su octowego ochladza sie do 0°C i miesza podczas 55 dodawania 0,500 g pylu cynkowego. Otrzymana mieszanine miesza sie w ciagu 2,5 godziny w tem¬ peraturze 0°C, nastepnie filtruje sie i filtrat odpa¬ rowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem do sucha.Pozostalosc rozpuszcza sie w chloroformie, prze- 6o mywa woda, solanka i suszy nad bezwodnym siar¬ czanem sodu. Po odparowaniu rozpuszczalnika pod zmniejszonym cisnieniem uzyskuje sie ester ben¬ zhydrylowy kwasu 7«-metoksy-7-(D-5-t-butyloksy- karbonyloamino-5-karboksypentanoamido)cefalospo- 65 rynowego w postaci zywicy.15 W dwuszyjnej, gruszkowatej 10 ml kolbie zaopa¬ trzonej w mieszadlo magnetyczne i elektrode szkla¬ na umieszcza sie 0,650 g estru benzhydrylowego kwasu 7a-metoksy-7-(D-5-t-butyloksykarbonyloami- no-5-karboksypentanoamido)cefalosporynowego i 1 ml H20. Mieszanine miesza sie na lazni olejowej utrzymujac temperature 30°C i dodaje sie za pomo¬ ca automatycznej biurety 0,5 n roztworu wodoro¬ tlenku sodu az do osiagniecia pH 6,6. Roztwór ace- tyloesterazy z drzewa cytrynowego (2 ml podstawo¬ wego roztworu, którego pH zostalo doprowadzone do 6,6 przy pomocy 0,5 n wodorotlenku sodu) ogrzewa sie do 30°C i dodaje do kolby. Mieszanine miesza sie podczas dodawania z automatycznej biu¬ rety 0,5 n wodorotlenku sodu, dodawanego dla utrzymania pH roztworu w pobliza 6,6. Po kilku godzinach dodawanie wodorotlenku sodowego prze¬ rywa sie i reakcja ustaje. Roztwór z enzymolizy chlodzi sie i traktuje 1 g sproszkowanego chlorku sodowego. Otrzymany roztwór zalewa sie 10 ml octanu etylowego i podczas mieszania zakwasza sie 2 n kwasem solnym do pH 2. Powstaje emul¬ sja, kfóra rozbija sie przepuszczajac przez lejek Buchnera. Warstwe octanu etylowego oddziela sie, przemywa woda, zalewa 5 ml wody i dodajac roz¬ tworu wodorotlenku potasowego doprowadza pH do 5,6. Warstwe wodna oddziela sie, liofilizuje i utrzy¬ muje surowa sól potasowa estru benzhydrylowego kwasu 3-hydroksymetylo-7a-metoksy-7-(D-5-t-buty- loksykarbonyloamino-5-karboksypentanoamido)-ce- femo-3-karboksylowego-4.Przyklad VI. Kwas 3-karbamyloksymetylo-7- -(2-tienyloacetamido)-cefemo-2-karboksylowy-4.Kwas ten otrzymuje sie Wedlug sposobu opisanego w przykladzie 1, uzywajac w miejsce zwiazku typu A3 zwiazku typu A2. Zwiazek typu A2 otrzymuje sie przez izomeryzacje estru kwasu 3-hydroksyftietylo- -7- (2-tienyloacetamido)-cefemo-3-karboksylowego-4 zasade taka jak pirydyna, nastepnie oddzielenie chromatograficzne zwiazku typu A2 i rozszczepie^ nie grupy estrowej zgodnie z metodami podanymi w tym wynalazku. W ten sam sposób mozna otrzy¬ mywac inne zwiazki A2-3-hydroksymetylocefalospo- ryny i przeksztalcac je w odpowiednie pochodne A2—3-karbamyloksymetylowe. Jako przyklady ta¬ kich pochodnych mozna wymienic kwas 3-karba- myloksymetylo-7- (2-karboksy-fenyloacetamido)-ce- femo-2-karboksylowy-4, kwas 3-karbamyloksymety- lo-7- (2-fenyloacetamido)-cefemo-2-karboksylowy i kwas 3-karbamyloksymetylo-7-(2-furyloacetamido) - -cefemo-2-karboksylowy-4.Zwiazki typu A2 mozna izomeryzowac do odpo¬ wiednich zwiazków typu A3 zgodnie ze sposobem poznanym w tym wynalazku.Otrzymywane podanym sposobem, nowe pocho¬ dne 3-karbamyloksymetylocefalosporyny o wzorze 2, w którym R' oznacza atom wodoru lub grupe acylowa, oraz ich sole i estry sa cennymi antybio¬ tykami uzytecznymi do róznych, omówionych po¬ przednio celów. Chociaz do tych celów uzywane sa zwykle sole, oczywiscie równiez. estry tych cefa- losporyn sa niezwykle uzyteczne W terapii ludzi i zwierzat. Szczególnie uzyteczne sa takie estry, które sa przeksztalcane biologicznie w wolny kwas lub jego sól. 113 16 Jako przyklad takich estrów moga sluzyc estry „nizsza grupa alkoksy-nizsza grupa alkilowa", ta¬ kie jak: metoksymetyIowy, metóksyetylowy i po¬ dobne; estry aryloksy-mniejsza grupa alkilowa ta- 5 kie jak: benzyloksymetylowy, benzyloksyetylowy i podobne; estry aryloksy — nizsza grupa alkilowa takie jak: fenyloksymetylowy, fenyloksyetyIowy i podobne, oraz estry acyloksy — nizsza grupa al¬ kilowa, takie jak: acetoksymetylowy, piwolinoksy- metylowy, piwalinoksyetylowy, propionyloksymety- lowy, butyryloksymetylowy, izobutyryloksymetylo- wy, benzoiloksymetylowy i podobne. Termin „niz¬ sza grupa alkilowa" oznacza grupy alkilowe o lan¬ cuchu prostym lub rozgalezionym skladajace sie z 1—5 atomów wegla.Estry te otrzymuje sie latwo na drodze estryfi- kacji wolnych kwasów 3-karbamyloksymetylocefa- losporynowych odpowiednim halogenkiem nizszej grupy alkilowej zgodnie ze znanymi w chemii me¬ todami. Tak wiec, ester metoksymetylowy i feny- 20 loksymetylowy otrzymuje sie latwo na drodze reak¬ cji eteru chlorometylometylowego lub a-chloroani- zolu z wolnym kwasem w obecnosci nosnika kwa¬ sowego lub na drodze reakcji soli pochodnej cefa- losporyny z halogenkiem alkilowym.Podobnie, estry acyloksy — nizsza grupa alkilo¬ wa otrzymuje sie latwo na drodze reakcji kwasu cefalosporynowego lub jego soli z estrem chloro- metylowym lub bromometylowym odpowiedniego kwasu. Metody otrzymywania takich estrów sa do- 30 brze znane w chemii. Podane ponizej przyklady zilustruja sposoby otrzymywania specjalnie labil- nych estrów.Przyklad VII. Ester metoksymetylo-3-karba- myloksymetylo-7p- (2-tienyloacetamido) -cefemo-3- -karboksylowy-4.Do roztworu 0,25 g soli cykloheksyloaminowej kwasu 3-karbamyloksymetylo-7|3-(2-tienyloacetami¬ do)-cefemo-3-karboksylowego-4 w 5 ml chlorku metylenu w atmosferze azotu dodaje sie w ciagu 40 15 minut 0,03 ml eteru chlorometylometylowego w 1,5 ml chlorku metylenu, utrzymujac temperature mieszaniny reakcyjnej okolo 5°C. Po zakonczeniu reakcji mieszanine filtruje sie i filtrat przemywa sie 2 ml wody zawierajacej 25 mg kwasnego we- 45 glanu sodowego. Warstwe chlorku metylenu suszy sie nad siarczanem sodu, filtruje i zateza, uzysku¬ jac wymieniony w tytule zwiazek.Przykad VIII. Ester fenyloksymetylo-3-karba- myloksymetylo-7|3- (2-furyloacetamido)-cefemo-3- -karboksylowy-4.Postepujac zgodnie z procedura opisana w przy¬ kladzie VII, sól potasowa kwasu 3-karbamyloksy- metylo-7(3- (2-furyloacetamido) -cefemo-3-karboksy- lowego-4 poddaje sie reakcji z a-chloroanizolem uzyskujac w wyniku zwiazek wymieniony w ty¬ tule.W ten sam sposób inne kwasy 3-karbamyloksy- metylo-7-acylamido-cefemo-3-karboksylowe-4, takie jak pochodna 7-(2-tienyloacetoamidowa) mozna 60 przeprowadzic w estry fenyloksymetylowe.Przyklad IX. Ester acetoksymetylo-3-karba- myloksymetylo-7|3-fenyloacetamido-cefemo-3-karbo- ksylowy-4. 65 Mieszanine 1 g soli potasowej kwasu 3-karba-83113 17 18 myloksymetylo-7p-fenyloacetamido-cefemo-3-karbo- ksylowego-4, 1,5 ml octanu bromometylowego i 20 ml acetonu ogrzewa sie pod chlodnica zwrotna w ciagu 1 godziny. Po ochlodzeniu zawiesine filtruje sie i filtrat odparowuje pod próznia, uzyskujac zwiazek wymieniony w tytule.Podobnie inne 3-karbamyloksymetylo-7-acyloami- docefalosporyny mozna przeprowadzic w odpowie¬ dnie estry acetoksymetylowe. PL PL

Claims (8)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania zwiazków karbamyloksy- lowych, zwlaszcza przeprowadzania 3-hydroksyme- tylocefalosporyny o wzorze 1 do 3-karbamyloksy- metylocefalosporyny o wzorze 2 lub odpowiedniego zwiazku typu A2, w którym R' oznacza atom wo¬ doru lub grupe acylowa, a R1 oznacza atom wodo¬ ru lub grupe metoksylowa, lub jej soli albo estru, znamienny tym, ze poddaje sie reakcji 3-hydroksy- metylocefalosporyne z izocyjanianem bromosulfo- nylowym lub z izocyjanianem chlorosulfonylowym i hydrolizuje sie otrzymany produkt reakcji.

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze stosuje sie zwiazek o wzorze 1, w którym grupa acylowa oznaczana przez R' posiada ogólny wzór 3, w którym R10 oznacza atom wodoru chlorowca, grupe guanidynowa, fosforanowa, hydroksylowa, tetrazolilowa, karboksylowa, sulfonowa lub sulfa- minowa i Rn oznacza grupe fenylowa, podstawiona fenylowa, monocykliczna lub heterocykliczna 5-cio lub 6-cio czlonowa grupe pierscieniowa zawiera¬ jaca w pierscieniu jeden lub wiecej atomów tlenu, atom siarki lub azotu, podstawione grupy hetero¬ cykliczne, grupe fenylosiarkowa, heterocykliczna lub podstawiona heterocykliczna tio grupe lub gru¬ pe cyjanowa, przy czym takimi podstawnikami sa atom chlorowca, grupa karboksymetylowa, guani¬ dynowa, guanidynometylowa, karboksyamidomety- 5 Iowa, aminometylowa, nitrowa, metoksylowa lub metylowa.

3. Sposób wedlug zastrz. 3, znamienny tym, ze stosuje sie izocyjanian o wzorze 3, w którym grupa acylowa oznaczana przez R' posiada ogólny wzór 10 3, w którym R10 oznacza atom wodoru lub grupe karboksylowa, Rn oznacza grupe fenylowa, tieny- lowa lub furylowa i Rx oznacza grupe metoksylo¬ wa.

4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze is jako pochodna cefalosporyny stosuje sie kwas 3- -hydroksymetylo-7-(2-tienyloacetamido)-cefemo-3- -karboksylowy-4 lub sól tego kwasu.

5. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako pochodna cefalosporyny stosuje sie kwas 3- 20 hydroksymetylo-7-metoksy-7-(2-tienyloacetamido)- -cefemo-3-karboksylowy-4 lub sól tego kwasu.

6. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako pochodna cefalosporyny stosuje sie kwas 3- -hydroksymetylo-7-metoksy-(2-tienylo-2-karboksy- acetamido)-cefemo-3-karboksylowy-4 lub sól tego kwasu.

7. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako pochodna cefalosporyny stosuje sie kwas 3- -hydroksymetylo-7-metoksy-(2-fenyloacetamido)- -cefemo-3-karboksylowy-4 lub sól tego kwasu.

8. Sposób wedlug zastrz. 3, znamienny tym, ze jako pochodna cefalosporyny stosuje sie kwas 3- -hydroksymetylo-7-metoksy-(2-fenylo-2-karboksy- 45 acetamido)-cefemo-3-karboksylowy-4 lub sól tego kwasu. 83113 H Ri R'— k- /S^ 0^—Ny^ch2oh C00H Wzór 1 R'—N O \j Ri P^l /CH2OCONH2 COOH Wzór Z O R11R10CHC Wzór 3 Cena 10 zl LDA — Zaklad 2, Typo — zam. 836/76 — 105 egz. PL PL