PL81994B1 - - Google Patents

Description

Uprawniony z patentu: Vsesojuzny Ordena Lenina Institut Experimentalnoi Veterinarii, Moskwa (Zwiazek Socjalistycznych Republik Radzieckich) Sposób wytwarzania srodka do profilaktyki trychofitozy roslego bydla rogatego Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia nowego srodka stosowanego do profilaktyki trychofitozy roslego bydla rogatego.Trychofitoza roslego bydla rogatego prowadzi do ogromnych strat ekonomicznych w wiekszosci kra¬ jów o rozwinietej przemyslowej hodowli bydla.Masowa infekcja mlodego roslego bydla rogatego prowadzi do dlugotrwalej choroby, do konieczno¬ sci zastosowania drogich, silnie dzialajacych srod¬ ków leczniczych, do zahamowania rozwoju mlo¬ dych, i do obnizenia przyrostu wagi. Zaklócone zostaja terminy sprzedazy przez gospodarstwa (fer¬ my) zwierzat rasowych, gwaltownie zmniejsza sie jakosc surowca garbarskiego. Ludnosc wiejska za¬ raza sie od chorych zwierzat.W literaturze brak jest danych o srodkach, za¬ pobiegajacych skutecznie tej chorobie.Sposób wytwarzania srodka do profilaktyki try¬ chofitozy roslego bydla rogatego wedlug wynalazku polega na tym, ze immunogenna kulture Trichp- hyton faviforme hoduje sie na stalej lub cieklej pozywce w temperaturze 26—28°C w ciagu 12—15 dni, az do optymalnego nagromadzenia mikroko- nidii wyzej wymienionej kultury, po czym biomase oddziela sie, homogenizuje az do uzyskania oddziel¬ nych komórek mikroorganizmu, a nastepnie wy¬ dziela produkt koncowy. Wydzielenie produktu kon¬ cowego prowadzi sie na drodze rozcienczenia otrzy¬ manej zawiesiny oddzielnych komórek mikroorga¬ nizmu za pomoca sterylnego roztworu fizjologiczne- 2 go do stezenia 6—9 milionów w 1 mililitrze. Ewen¬ tualnie wydzielenie produktu koncowego prowadzi sie na drodze liofilowego suszenia zawiesiny od¬ dzielnych komórek mikroorganizmu. 5 W sposobie wedlug wynalazku, dla zahamowa¬ nia wzrostu ubocznej mikroflory, do roztworu fi¬ zjologicznego dodaje sie penicyline i streptomycyne w ilosci 100 jednostek kazdego z antybiotyków na 1 ml roztworu. io Srodek, otrzymywany sposobem wedlug wynalaz¬ ku, stanowi ciecz koloru bialego lekko opalizuja¬ cego. Podczas przechowywania srodka powstaje osad, który latwo rozbija sie przy wstrzasaniu. Fla¬ kony, zawierajace nierozbijajacy sie osad, majace 15 uszkodzone zamkniecie, jak równiez odkryte, a nie wykorzystane w pelni w dniu immunizacji, nie nadaja sie do zastosowania i podlegaja unieszkod¬ liwieniu przez poddanie wrzeniu w ciagu jednej godziny. 20 Srodek przechowuje sie w temperaturze 4—8°C.Stosuje sie go profilaktycznie do immunizacji mlo¬ dych osobników roslego bydla rogatego i doroslych zwierzat w celu wytworzenia u nich niewrazli- wosci na zarazenie sie trychofitoza (grzybica strzy- 25 gaca).Srodek ten jest nieszkodliwy w zastosowaniu i nie powoduje jakichkolwiek ubocznych reakcji.Pod koniec miesiaca od momentu immunizacji u zaszczepionych zwierzat tworzy sie kierunkowa 30 odpornosc na rzeczywiste i doswiadczalne zaraze- 8199481994 5 tf Fermy tego rejonu zostaly uwolnione w pelni od grzybicy strzygacej. Nastepnie stosowano srodek w warunkach gospodarstw jednego okregu jedno¬ stki administracyjnej, gdzie corocznie rodzilo sie do 400 tysiecy sztuk cielat, a ilosc chorujacych na trychofitoze kazdego roku siegala 25—30 tysiecy sztuk cielat. Wydzielono okolo 5000 litrów srodka gospodarstwom tego okregu i z poczatkiem roku 1970 przystapiono do kolejnej immunizacji cielat jednomiesiecznych. Srodek wprowadzono domie¬ sniowo po 5 ml srodka dla kazdego cielecia dwu¬ krotnie z przerwa 10—14 dniowa. Pod koniec 1970 r. wszystkie fermy, posród których bylo wie¬ cej niz 660 zakazonych grzybica strzygaca, zostaly uwolnione od tej infekcji i z gospodarstw zostaly zdjete ograniczenia sprzedazy zarodowej, a wydat¬ ki na leczenie chorych na trychofitoze zostaly wy¬ eliminowane.Nizej podane przyklady ilustruja przedmiot wy¬ nalazku.Przyklad I. Przygotowanie 3—4 tysiecy dawek koncowego produktu. Posiew kultury, wytwarzanie i rozlew srodka prowadzi sie w boksach, z za¬ chowaniem regul scislej sterylnosci. Jako pozywke dla hodowania kultury grzyba Trichophyton favi- forme stosowano agar brzeczkowy (pH=6,4—6,8).W celu otrzymania materialu posiewowego 12—15 dniowa kulture grzyba, hodowana na aga¬ rze brzeczkowym w butlach Roux o objetosci 1,3—1,5 litra, przemywa sie 200 ml roztworu fizjo¬ logicznego. Otrzymana zawiesine posiewa sie w no¬ wych butlach Roux (po 5—7 ml). Po 4—5 dniach zauwaza sie wzrokowo wzrost kultury na agarze brzeczkowym. Z kazdej z 4 butli Roux zdejmuje sie mase grzybowa i umieszcza sie ja na wystery- lizowanych plytkach Petriego. Z plytek kulture przenosi sie za pomoca lopatki do homogenizatora o objetosci 1,5—2 litrów, zalewa sie 500—700 ml roztworu fizjologicznego, zakrywa sie korkiem i ho¬ mogenizuje w ciagu 15—20 minut. Po homogeni¬ zacji zawiesine kultury zlewa sie do kolby. Do 15 litrowej sterylnej toutli wlewa sie, przez dwu¬ warstwowy filtr z gazy, 5 litrów sterylnego roz¬ tworu fizjologicznego. Nastepnie przez sterylny trójwarstwowy filtr przesacza sie do tej samej butli zawiesine kulturowa, okresowo rozcienczajac ja roztworem fizjologicznym. W celu zapobiezenia za¬ nieczyszczen bakteryjnych dodaje sie antybiotyki takie, jak penicyline i streptomycyne w ilosci 100 jednostek kazdego antybiotyku na 1 ml srodka.Okreslenie gestosci masy grzybowej prowadzi sie wedlug optycznego wzorca zmetnienia. Zawiesine rozciencza sie roztworem fizjologicznym wedlug optycznego Wzorca zmetnienia az do stezenia 1—1,5 miliardów komórek na 1 ml sterylnego roztworu fizjologicznego, co odpowiada przy odczycie w ka¬ merze pomiarowej 6—9 milionów komórek w 1 ml zawiesiny. Srodek rozlewa sie do butelek i zakry¬ wa kolpaczkami. Z czterech butli Roux otrzymuje sie 3-^4 tysiace jednorazowych dawek (5 ml). Ba¬ danie na stwierdzenie braku utworzonej mikroflo¬ ry prowadzi sie na drotize wysiewu na pozywki z butli i wybiórczo z butelek.W celu wykrycia ubocznej flory bakteryjnej jako piozywki stosuje sie agar miesno-peptonowy, bulion miesno-peptonowy, pozywke Kitt-Tarozziego, a w celu wykrycia ubocznych plesniaków stosuje sie probówki z pozywka Capka i agarem brzeczko¬ wym. Okres badania wynosi 10 dni.Nieszkodliwosc srodka bada sie na drodze do¬ miesniowego wprowadzenia trzem królikom w da¬ wce 3 ml kazdemu (ciezar królika 2,5—3 kg). Srod¬ ki, w których stwierdzono zanieczyszczenia ubocz¬ na mikroflora odrzuca sie jako braki. Srodki, które powoduja zdechniecie jednego z trzech królików lub powiklania w miejscu wprowadzenia (wrzód), bada sie powtórnie na nieszkodliwosc, biorac do badania podwójna ilosc zwierzat i wysiewów na pozywkach. W przypadku zdechniecia jednego z królików lub stwierdzenia obecnosci ubocznej mikroflory, uwaza sie dany srodek za nie nadajacy sie do immunizacji. Równoczesnie z wprowadze¬ niem srodka królikom przeprowadza sie badanie aktywnosci. Jako kryterium oceny aktywnosci srod¬ ka przyjmuje sie tworzenie u królików w miejscu wprowadzenia srodka po 7—14 dniach ograniczo¬ nego gruzolka (6X6 mm), z nastepnym luszczeniem i szybkim gojeniem sie utworzonego ogniska.Przyklad II. Przygotowanie srodka liofilizo¬ wanego. Jako pozywke stosuje sie agar brzeczko- wy. Agar brzeczkowy sporzadza sie z nie- ochmielonej, uprzednio wysterylizowanej brzeczki piwnej, rozcienczajac ja czysta woda wodociago¬ wa do zawartosci 7% wagowych weglowoda¬ nów wedlug Balinga i doprowadzajac przy tym jej pH do 6,8—7,0, a nastepnie dodajac do niej 2% wagowych agar — agaru. Roztwór podgrzewa sie do rozpuszczenia agar — agaru, rozlewa sie po 300 ml w butle Roux (1,3—1,5) i sterylizuje sie w ciagu 30 minut pod cisnieniem 0,5 atm. Po ste¬ rylizacji pH agaru brzeczkowego wynosi 6,4—6,8.Otrzymywanie materialu posiewowego i wyjscio¬ wej kultury w butlach Roux prowadzi sie sposo¬ bem, opisanym w przykladzie I.W celu przygotowania 10 tysiecy dawek srodka liofilizowanego bierze sie 20—22 butli Roux z wy¬ hodowana immunogeniczna kultura. Wszystkie ope¬ racje przeprowadza sie w boksie w warunkach pelnej sterylnosci. Butle Roux z kultura odkrywa sie nad plonacymi palnikami spirytusowymi. Z po¬ wierzchni pozywki zdejmuje sie biomase i umiesz¬ cza na sterylnych plytkach Petriego. Nastepnie wprowadza sie do wysterylizowanego homogeniza¬ tora o pojemnosci 1,5 litra, biomase zebrana z Czte¬ rech butli Roux i tam równiez wlewa sie 500 ml sterylnego roztworu wodnego, zawierajacego 10% wagowych sacharozy i 2% wagowych zelatyny. Ho- mogenizator zakrywa sie pokrywka i sterylna bi¬ bula pergaminowa. W celu unikniecia zanieczysz¬ czenia (skazenia) caly proces zbierania biomasy i umieszczenia jej w homogenizatorze prowadzi sie przy zapalonym palniku spirytusowym. Homogeni- zator wlacza sie na 15—20 minut, w celu otrzy¬ mania zawiesiny odrebnych komórek mikroorga¬ nizmu. Shomogenizowana biomase grzybowa zlewa sie do kolby, doprowadzajac stezenie komórek roz¬ tworem sacharozo-zelatynowym do 120—140 milio¬ nów mikrokonidii w 1 ml, przy czym antybioty¬ ków nie dodaje sie.Przygotowana zawiesine rozlewa sie do . steryl- 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 6081 994 9 10 ze tkanki), prowadzi sie powtórne badanie na pod¬ wojonej liczbie zwierzat i próbe na obecnosc ubocz¬ nej mikroflory na drodze wysiewu z 5% butelek wypuszczonej serii. W przypadku zdechniecia jed¬ nego z królików lub stwierdzenia obecnosci ubocz¬ nej mikroflory, dana serie uwaza sie za nieprzy¬ datna do immunizacji. Przeznaczony do stosowania srodek przechowuje sie w chlodni w temperaturze +4°C h8°C. PL PL

Claims (4)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania srodka do profilaktyki trychofitozy roslego bydla rogatego, znamienny tym, ze immuinogenna kulture Trichophytan favifor- me hoduje sie na stalej lub cieklej pozywce w temperaturze 26—28°C w ciagu 12—15 dni, az do optymalnego nagromadzenia sie mikrokonidii wy¬ mienionej powyzej kultury, po czym biomase od¬ dziela sie i homogenizuje az do uzyskania oddziel¬ nych komórek mikroorganizmu, a nastepnie wy¬ dziela sie produkt koncowy. 5

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze wydzielenie koncowego produktu prowadzi sie na drodze rozcienczenia zawiesiny oddzielnych komó¬ rek mikroorganizmu sterylnym roztworem fizjolo¬ gicznym do stezenia 6—9 milionów w 1 ml.

3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze wydzielenie koncowego produktu prowadzi sie na drodze liofilowego suszenia zawiesiny oddzielnych komórek mikroorganizmu.

4. Sposób wedlug zastrz. 1 i 2, znamienny tym, ze dla zahamowania wzrostu ubocznej mikroflory do roztworu fizjologicznego dodaje sie penicyline i streptomycyne w ilosci 100 jednostek kazdego z antybiotyków na 1 ml roztworu. 10 15 PL PL