PL67973B1 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- PL67973B1 PL67973B1 PL126277A PL12627768A PL67973B1 PL 67973 B1 PL67973 B1 PL 67973B1 PL 126277 A PL126277 A PL 126277A PL 12627768 A PL12627768 A PL 12627768A PL 67973 B1 PL67973 B1 PL 67973B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- alanine
- arylamidase
- cleaved
- determination
- carboxylic acid
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 25
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N Carbamic acid Chemical compound NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- PXFUDSMGEYRNNC-LURJTMIESA-N l-alanine-4-nitroanilide Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 PXFUDSMGEYRNNC-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 5
- 150000001294 alanine derivatives Chemical class 0.000 claims description 4
- VCYBSQKYFOVMPG-UHFFFAOYSA-N 2-aminopropanehydrazide Chemical group CC(N)C(=O)NN VCYBSQKYFOVMPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- RQHPADKWNYTHOH-UHFFFAOYSA-N 2-amino-n-naphthalen-2-ylpropanamide Chemical compound C1=CC=CC2=CC(NC(=O)C(N)C)=CC=C21 RQHPADKWNYTHOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 claims description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- JBIJLHTVPXGSAM-UHFFFAOYSA-N 2-naphthylamine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(N)=CC=C21 JBIJLHTVPXGSAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 4
- VCYBSQKYFOVMPG-REOHCLBHSA-N (2s)-2-aminopropanehydrazide Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NN VCYBSQKYFOVMPG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 3
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N Alanine Chemical compound CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002704 Leucyl aminopeptidase Human genes 0.000 description 2
- 108010004098 Leucyl aminopeptidase Proteins 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 150000002614 leucines Chemical class 0.000 description 2
- AJDUTMFFZHIJEM-UHFFFAOYSA-N n-(9,10-dioxoanthracen-1-yl)-4-[4-[[4-[4-[(9,10-dioxoanthracen-1-yl)carbamoyl]phenyl]phenyl]diazenyl]phenyl]benzamide Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=C1C=CC=C2NC(=O)C(C=C1)=CC=C1C(C=C1)=CC=C1N=NC(C=C1)=CC=C1C(C=C1)=CC=C1C(=O)NC1=CC=CC2=C1C(=O)C1=CC=CC=C1C2=O AJDUTMFFZHIJEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000001043 yellow dye Substances 0.000 description 2
- ARRTYLNRZGBFSE-AWEZNQCLSA-N (2s)-2-(anilinodiazenyl)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NN=NC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 ARRTYLNRZGBFSE-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- MILCPGNMPRJGQM-NSHDSACASA-N (2s)-2-amino-n-(4-phenyldiazenylphenyl)propanamide Chemical compound C1=CC(NC(=O)[C@@H](N)C)=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1 MILCPGNMPRJGQM-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)benzaldehyde Chemical compound CN(C)C1=CC=C(C=O)C=C1 BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXZJHDNQDSVIDR-NSHDSACASA-N 4178-93-2 Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 AXZJHDNQDSVIDR-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- -1 alanine hydrazide Chemical class 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 150000003934 aromatic aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012954 diazonium Substances 0.000 description 1
- 150000001989 diazonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000006193 diazotization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004683 dihydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229950010030 dl-alanine Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- ALIFPGGMJDWMJH-UHFFFAOYSA-N n-phenyldiazenylaniline Chemical compound C=1C=CC=CC=1NN=NC1=CC=CC=C1 ALIFPGGMJDWMJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VIKNJXKGJWUCNN-XGXHKTLJSA-N norethisterone Chemical compound O=C1CC[C@@H]2[C@H]3CC[C@](C)([C@](CC4)(O)C#C)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VIKNJXKGJWUCNN-XGXHKTLJSA-N 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- CTRLRINCMYICJO-UHFFFAOYSA-N phenyl azide Chemical compound [N-]=[N+]=NC1=CC=CC=C1 CTRLRINCMYICJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Description
.IV.1967 Niemiecka Republika Demokratyczna Opublikowano: 25.VI.1973 67973 KI. 421,3/54 MKP GOln 33/16 Wspóltwórcy wynalazku: Reinhard Haschen, Wolfgang Farr, Dieter Rei- chelt, Norbert Rehfeld Wlasciciel patentu: VEB Arzneimittelwerk Dresden, Radebeul (Niemiecka Republika Demokratyczna) Sposób oznaczania enzymów Przedmiotem wynalazku jest sposób oznaczania enzymów, szczególnie przydatnych do ilosciowe¬ go, kolorymetrycznego oznaczania aryloamidazy kwasu aminokarboksylowego w surowicy krwi.Metody ilosciowego oznaczania aryloamidazy kwasu aminokarboksylowego, okreslanej czesto ja¬ ko tak zwana leucyno-aminopeptydaza, sa znane.W metodach tych jako substraty stosowane sa glównie p-nitroanilid leucyny, wzglednie (3-nafty- loamid leucyny.Wolna p-nitroanilina, wywiazujaca sie z p-nitro- anilidu leucyny moze byc, dzieki wlasnemu zól¬ temu zabarwieniu, bezposrednio oznaczona foto- metrycznie. Wykrycie wolnej (3-naftyloaminy, wy¬ wiazujacej sie z p-naftyloamidu leucyny moze na¬ stapic wskutek reakcji wymiany z sola dwuazo- niowa — czerwien kwasowa 3GL, naftyloetyle- nodwuamina po dwuazowaniu lub reakcji wymia¬ ny z p-N-N-dwumetyloaminobenzaldehydem. Ary- loamidaza kwasu aminokarboksylowego moze byc równiez oznaczana za pomoca L-alanino-4(fenylo- azo)-fenyloamidu. Wolna fenylo-azofenyloamina, wywiazujaca sie na skutek dzialania enzymu, wy¬ kazuje po zakwaszaniu czerwone zabarwienie, które po odwirowaniu oznacza sie kolorymetrycznie.Te znane metody wykazuja jednak wiele wad.Reagenty zawierajace N-podstawiona leucyne nie sa bowiem optymalne dla aryloamidazy kwasu aminokarboksylowego, pod wzgledem charaktery¬ styki i czulosci. Zastosowanie alanino-4(fenyloazo) 10 fenyloalaniny wymaga ponadto odwirowania przed pomiarem.Celem wynalazku jest opracowanie takiej me¬ tody oznaczania aryloamidazy kwasu aminokarbo¬ ksylowego, która z uwagi na swoja czulosc wy¬ krywania, moze miec zastosowanie w klinicznej diagnostyce przy schorzeniach watroby, trzustki, nerek i jelit.Stwierdzono, ze aryloamidaza kwasu aminokar¬ boksylowego posiada zdolnosc rozkladania zwiaz¬ ków alaniny, takich jak hydrazyd alaniny, (3-naftyloamid alaniny i p-nitroanilid alaniny, lepiej i w sposób bardziej charakterystyczny, anizeli zwiazki leucyny.Sposób bedacy przedmiotem wynalazku chara¬ kteryzuje sie tym, ze badany material, w którym oznacza sie aryloamidaze kwasu aminokarboksylo¬ wego, traktuje sie hydrazydem DL-alaniny, a od- szczepiona wskutek hydrolitycznego dzialania ary¬ loamidazy kwasu aminokarboksylowego, hydrazy¬ ne poddaje sie kondensacji z aromatycznym al¬ dehydem, w szczególnosci p-N-N-dwumetyloamino- benzaldehydem, przy czym powstaje zólty barwnik, wzglednie traktuje sie p-naftyloamidem DL-alani¬ ny, a wolna (3-naftyloamine, wywiazujaca sie wsku¬ tek dzialania aryloamidazy kwasu aminokarboksy¬ lowego, poddaje sie reakcji z aldehydem aroma¬ tycznym, przy czym powstaje zólty barwnik, wzgle¬ dnie traktuje sie p-nitroanilidem L-alaniny, a od- szczepiona, wskutek dzialania aryloamidazy kwa- 67 97367 973 4 su aminokarboksylowego, p-nitroaniline oznacza sie bezposrednio metoda kolorymetryczna. Hydrolize zwiazków alaniny aryloamidaza kwasu aminokar¬ boksylowego prowadzi sie w zaleznosci od warun¬ ków inkubacji przy pH= 6, 5—7, 5. W przypadku pierwszej i drugiej odmiany sposobu równoczesnie z kondensacja hydrazyny wzglednie (3-naftyloami- ny, przykladowo z p-dwumetyloaminobenzaldehy- dem, nastawia sie roztwór na kwasne pH tak, ze tworzy sie pomaranczowo-czerwona sól. Przez za¬ kwaszenie roztworu reakcja enzymatyczna zostaje przerwana. Ekstynkcje proporcjonalnych w stosunku do aktywnosci aryloamidazy kwasu aminokarboksy¬ lowego ilosci barwnej soli, oznacza sie przy dlugosci fali 455 wzglednie 450 milimikronów. Sposób wedlug wynalazku umozliwia szybkie i ilosciowe oznacza¬ nie "aryloamidazy kwasu aminokarboksylowego, na przeklad w surowicy krwi. Sposób ten ma ponadto te zaletef w "stosunku do znanych metod wykrywa¬ nia,'ze reakcjarjest w daleko idacym stopniu chara¬ kterystyczna.W stosunku do znanej metody oznaczania, w któ¬ rej jako substrat stosowany jest alanino-4-(fenylo- azo)-fenyloamid, sposób wedlug wynalazku daje te korzysc, ze hydrazyd alaniny daje sie latwiej syntetyzowac, a wiec jest ekonomiczniejszy, zas molarny wspólczynnik ekstynkcji jest okolo 4-5 razy wyzszy. Reakcja przy uzyciu |3-naftyloarnidu alaniny jest bardziej charakterystyczna, poniewaz pod wplywem enzymu ulega on latwiej rozkla¬ dowi. Molarny wspólczynnik ekstynkcji jest 5-cio krotnie wyzszy. (3-naftyloamid alaniny moze miec równiez zastosowanie w histochemii aryloamidazy kwasu aminokarboksylowego.W przypadku oznaczania przy uzyciu p-nitroani- lidu alaniny, wielkosc molarnego wspólczynnika ekstynkcji jest tego samego rzedu. Metode mozna stosowac jako tekst kinetyczny.W zadnej z podanych trzech metod nie wyste¬ puje zjawisko wytracania sie bialka i w zwiazku z tym nie zachodzi koniecznosc odwirowania przed pomiarem.Wynalazek objasniono blizej trzema przykladami.Przyklad I. Hydrazyd alaniny jako reagent. 0, 6 ml buforowego roztworu reagenta, skladajacego sie z 5 czesci 0,6 molarnego buforu trójetanolo- aminy o pH=7,15 i 1 czesci 224 milimolarnego wod¬ nego roztworu hydrazydu DL-alaniny, ogrzewa sie do temperatury 25°C i dodajac 0,1 ml surowicy lub roztworu enzymu poddaje przez okreslony okres czasu inkubacji (w przypadku surowicy okres in¬ kubacji wynosi 15 minut). Nastepnie dodaje sie 5 ml odczynnika wywolujacego zabarwienie, sklada¬ jacego sie z 1 czesci roztworu zawierajacego 4 g •p-N-N-dwumetyloaminobenzaldehydu w 100 ml 96%- wego etanolu lub metanolu i 17 czesci 0,1 normal¬ nego kwasu solnego i po uplywie 30 minut, w czasie których tworzy sie zabarwienie, przepro¬ wadza sie pomiar przy dlugosci fali 455 milimikro- na, w odniesieniu do odczynnika wywolujacego za¬ barwienie. Slepa próbe przeprowadza sie w spo¬ sób analogiczny z ta tylko róznica, ze stosowany roztwór enzymu dodaje sie po uprzednim dodaniu odczynnika.Przyklad II. [3-naftyloamid alaniny jako rea¬ gent. 1 ml 0,75 milimolarnego roztworu |3-nafty- loamidu DL-alaniny w 0,05 molarnym buforze fos¬ foranowym o pH=7,0, ogrzewa sie do temperatu¬ ry 25°C i dodajac 0,02 ml surowicy lub roztworu 5 enzymu poddaje przez okreslony czas inkubacji (w przypadku surowicy okres inkubacji wynosi 30 minut). Nastepnie dodaje sie 2 ml 0,4 normalnego kwasu solnego i 2 ml 4%-ego metanolowego roz¬ tworu p-N-N-dwumetyloaminobenzaldehydu i po io uplywie 10 minut, w czasie których wytwarza sie zabarwienie, przeprowadza sie pomiar przy dlu¬ gosci fali 450 milimikrona, w odniesieniu do ana¬ logicznie przeprowadzonej slepej próby, w której jednak roztwór enzymu dodaje sie po uprzednim 15 dodaniu kwasu solnego.Przyklad III. p-nitroanilid alaniny jako re¬ agent. 2 ml milimolcirnego roztworu p-nitroanili- du alaniny w 0,05 molarnym buforze fosforano¬ wym o pH=7,0, ogrzewa sie do temperatury 25°C, 20 dodaje sie 0,1 ml surowicy lub roztworu enzymu i dokonuje pomiaru przy dlugosci fali 405 mili¬ mikronów w odniesieniu do wody, a nastepnie pod¬ daje inkubacji przez okreslony okres czasu (w przypadku surowicy okres inkubacji wynosi 15 mi- 25 nut). Nastepnie ponownie wykonuje sie pomiar przy dlugosci fali 405 milimikronów.Sposób wedlug wynalazku ma te zalety, ze hyd¬ razyd alaniny ? stosowany jako reagent, jest lat¬ wy do syntetyzowania, a sama metoda jest ana- 30 logiczna do metody oznaczania aminopeptydazy leu- cyny, wymaga takich samych reagentów w jed¬ nakowym stezeniu, dzieki czemu moze byc stoso¬ wana do równoleglego oznaczania aminopeptydazy leucyny. Blad metodyczny wynosi 2,7% p-nitroani- 35 lid alaniny daje produkt rozkladu, który mozna bezposrednio oznaczac. Blad metody wynosi 4,8%. (3-naftyloamid alaniny jest reagentem ulegajacym rozkladowi, pod wplywem aryloamidazy kwasu aminokarboksylowego, z podwyzszona szybkoscia. do Metoda ta obarczona jest bledem wynoszacym 2% i stanowi doskonala mikrometode. PL PL
Claims (4)
1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób oznaczania enzymów, w szczególnosci 45 ilosciowego kolorymetrycznego oznaczania aryloa¬ midazy kwasu aminokarboksylowego znamienny tym, ze podstawione przez aryloamidaze kwasu aminokarboksylowego pochodne alaniny rozszczepia sie, a odszczepiony podstawnik przeksztalca na 50 drodze reakcji wymiany w barwnik, który oznacza sie kolorymetrycznie, wzglednie odszczepiony pod¬ stawnik oznacza sie bezposrednio kolorymetrycznie.
2. Sposób wedlug zastrz. 1 znamienny tym, ze jako charakterystyczny reagent przy ilosciowym 55 oznaczaniu aryloamidazy kwasu aminokarboksylo¬ wego metoda kolorymetryczna stosuje sie hydra¬ zyd DL-alaniny, (3-naftyloamid DL-alaniny lub p-nitroanilid L-alaniny.
3. Sposób wedlug zastrz. 1 i 2 znamienny tym, ze 60 hydrolize podstawionych przez aryloamidaze kwa¬ su aminokarboksylowego pochodnych alaniny pro¬ wadzi sie scisle przy pH=6,5 — 7,5.
4. Sposób wedlug zastrz. 1 znamienny tym, ze barwnik oznacza sie kolorymetrycznie przy pH 65 ponizej 7. ¦ Bltk 635/73 A4 120 egz. Cena zl 10,— PL PL
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL67973B1 true PL67973B1 (pl) | 1972-12-30 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fields | [38] The rapid determination of amino groups with TNBS | |
| Evangelista et al. | Enzyme-amplified lanthanide luminescence for enzyme detection in bioanalytical assays | |
| McClure et al. | Fluorescent probes for conformational states of proteins. II. The binding of 2-p-toluidinylnaphthalene-6-sulfonate to α-chymotrypsin | |
| Church et al. | An o-phthalaldehyde spectrophotometric assay for proteinases | |
| Swenson et al. | Sulfhydryl Groups in Relation to Aldolase Structure and Catalytic Activity1 | |
| EP0507930B1 (en) | Measurement of color reactions by monitoring a change of fluorescence | |
| US5132226A (en) | Method for the determination of maleimide groups | |
| US4675290A (en) | Assaying peptidase enzyme activity | |
| Sokolovsky et al. | Azocarboxypeptidase: functional consequences of tyrosyl and histidyl modification | |
| CA2245745C (en) | Hardness indicator | |
| Carmel et al. | A fluorimetric assay for angiotensin-I converting enzyme in human serum | |
| Qi et al. | Spectrophotometric determination of hydrazine, hydrazides, and their mixtures with trinitrobenzenesulfonic acid | |
| PL67973B1 (pl) | ||
| Peters et al. | A method of DNA quantitation for localization of DNA in metrizamide gradients | |
| Bagert et al. | On the role of histidine and tyrosine residues in E. coli asparaginase. Chemical modification and 1H-nuclear magnetic resonance studies | |
| de Freitas et al. | Thermodynamics of the binding of chymotrypsin with the black-eyed pea trypsin and chymotrypsin inhibitor (BTCI) | |
| US4155916A (en) | Fluorescence method for enzyme analysis which couples aromatic amines with aromatic aldehydes | |
| Pettersson | Structure and function of a cellulase from Penicillium notatum as studied by chemical modification and solvent accessibility | |
| US4229528A (en) | Fluorescence method for enzyme analysis which couples aromatic amines with aromatic aldehydes | |
| Anderson et al. | New colorimetric method for the detection and quantitation of proteolytic enzyme activity | |
| US3718433A (en) | Method of analyzing of ammonia,urea,and tyrosine | |
| Gossrau | Conventional Techniques for Membrane‐Bound Enzymes | |
| Porstmann et al. | Chromogenic substrates for enzyme immunoassay | |
| PL68367B1 (pl) | ||
| US5108733A (en) | Stabilized trinder reagent |