PL62788B1 - - Google Patents

Description

Opublikowano: 31.111.1971 62788 KI. 30 h, 14 MKP C 12 k, 1/08 UKD Wspóltwórcy wynalazku: Stanislaw Grabiec, Jerzy Rozbicki Wlasciciel patentu: Polska Akademia Nauk (Zaklad Parazytologii), War¬ szawa (Polska) Sposób utrwalania drobnoustrojów i Przedmiotem wynalazku jest sposób utrwalania drobnoustrojów.Stosowane dotychczas metody przechowywania drobnoustrojów na stalym podlozu przy ciaglym, okresowym przeszczepianiu kultur sa bardzo klo¬ potliwe i powoduja czesto komórkowa degeneracje oraz utrate ich pierwotnych cech. Stosowany ostat¬ nio do tego celu sposób suszenia ze stanu glebokie¬ go zamrozenia wymaga korzystania ze skompliko¬ wanych aparatur liofilizacyjnych, przy czym szcze¬ gólnie trudny do przeprowadzenia jest sam pro¬ ces, zamrazania mikroorganizmów. W tym celu uzywa sie suchego lodu lub korzysta sie ze specjal¬ nych dwustopniowych sprezarek zamrazalniczych dajacych temperatury ponizej —50° C a nawet sto¬ suje sie skroplony gaz, jak na przyklad plynny azot lub skroplone powietrze. Zarówno zestalony dwutlenek wegla jak i plynny azot czy powietrze wymagaja specjalnych pojemników, nie pozwalaja¬ cych jednak na dluzsze przechowywanie tych czyn¬ ników, których dostawa powoduje dodatkowe tech¬ niczne trudnosci.Celem wynalazku jest opracowanie sposobu utr¬ walania drobnoustrojów na drodze sublimacyjnej dehydratacji umozliwiajacy unikniecie wspomnia¬ nych niedogodnosci.Stwierdzono, ze cel ten osiaga sie, jezeli ciekla kulture drobnoustrojów nanosi sie w cienkiej war¬ stwie na bibule, korzystnie zlozona w formie har¬ monijki, po czym bibule umieszcza sie w szklanym 30 pojemniku, który nastepnie przylacza sie przez wy- lapywacz par, zawierajacy substancje absorpcyjna do pompy prózniowej wytwarzajacej cisnienie od l.KH —1.10"2 mm Hg, nastepnie z pojemnika ewa¬ kuuje sie powietrze, co powoduje gwaltowne paro¬ wanie cieklego podloza, po czym po wysuszeniu kultury pojemnik zatapia sie.Wedlug wynalazku stosuje sie cienka, szybkopa- rujaca warstwe podloza nasyconego drobnoustro¬ jami, przy czym warstwa ta musi posiadac bardzo rozwinieta powierzchnie. Dla uzyskania zwiekszonej powierzchni parowania stosuje sie na przyklad zwinieta harmonijkowo bibule chromato¬ graficzna typu Whatman nasaczona kultura drob¬ noustrojów w odpowiedniej ilosci, na przyklad 0,1— 0,5 ml. Gwaltowna ewakuacja powietrza przy po¬ mocy dyfuzyjnej pompy rteciowej, lub innej wy¬ twarzajacej próznie rzedu 1.10"5 mm Hg, powoduje szybkie parowanie, w wyniku czego kultura nanie¬ siona na bibule szybko zamraza sie, przy czym zamrozenie to jest typu „szklistego". Przy tatfim postepowaniu, jakkolwiek pewna mala czesc ko¬ mórek ulega rozsadzeniu przez krysztalki lodu, to jednak wiekszosc ich ulega zamrozeniu z zachowa¬ niem swoistej struktury nie powodujac zadnych zmian wegetatywnych.Przedostaniu sie pary do pompy zapobiega umieszczony przed jej wylotem specjalny wylapy- wacz par zawierajacy substancje absorpcyjne na przyklad w postaci zelu krzemowego z odpowied- 62 7883 nim barwnym wskaznikiem stopnia wilgotnosci lub w postaci pieciotlenku fosforu.Poniewaz temperatura suszonego materialu wy¬ równuje sie z temperatura otoczenia — calkowite wysuszenie poddanej temu zabiegowi kultury drob¬ noustrojów latwe jest do uchwycenia.Stopien wysuszenia naniesionych kultur spraw¬ dza sie na przyklad metoda jonizacji za pomoca in- duktora Tesla. Jonizowanie gazów wewnatrz po¬ jemnika powoduje rozmaite ich zabarwienie w za¬ leznosci od ich zawartosci, zas w przypadku wyso¬ kiej prózni rzedu 10~5—10"6 mm Hg nastepuje fluo- rescencja scianek szklanego naczynia. Przy zawil¬ goceniu kultury poddanej suszeniu wystepuje przy jonizacji charakterystyczne zabarwienie dla zjoni- zowanej pary wodnej.Do tego celu sluzy przedstawione na rysunku urzadzenie do utrwalania drobnoustrojów opisanym wyzej sposobem, skladajace sie z komory ewakua¬ cyjnej 1, w której umieszcza sie probówke 2, za¬ wierajaca we wnetrzu zwiniete skrawki bibuly 3 nasaczonej kultura drobnoustrojów, przy czym ko¬ mora ewakuacyjna 1 jest podlaczona poprzez próz¬ niowy szlif 4 do wylapywacza par 5, w której znaj¬ duje sie substancja absorpcyjna 6, na przyklad zel krzemowy. Wylapywacz par 5 wraz z komora ewa¬ kuacyjna 1 jest podlaczony, przy zachowaniu wa¬ runków najkrótszej drogi czasteczek ewakuowane¬ go gazu, poprzez prózniowy szlif 4 do dyfuzyjnej pompy prózniowej 7.Po prózniowym zatopieniu probówki 2, w której wnetrzu umieszczono drobnoustroje utrwalone w wyzej podany sposób — uzyskuje sie mozliwosc przechowywania kultur w temperaturze pokojowej przez okres dowolnie dlugi. Dla sprawdzenia czy wysuszony przechowywany material nie ulegl zni¬ szczeniu (na przyklad przez pekniecie lub niewlas¬ ciwe zatopienie probówki), umieszcza sie we wne¬ trzu probówki 2 krysztalki zelu krzemowego z barwnym wskaznikiem wilgotnosci.Sposób bedacy przedmiotem wynalazku jest szcze¬ gólnie przydatny w praktyce laboratoryjnej ze wzgledu na latwa rehydratacje wysuszonego mate¬ rialu mikrobiologicznego. Po otwarciu probówki 2 wydobywa sie za pomoca jalowej pensety bibule 3 z wysuszona kultura drobnoustrojów i calosc prze¬ nosi sie bezposrednio do plynnego podloza dla za¬ szczepienia pozywki.Sposób wedlug wynalazku ilustruja ponizsze przy¬ klady.Przyklad I. 0,5 ml dwudziestogodzinnej bu¬ lionowej hodowli Staphylococcus albus przeniesiono przy pomocy jalowej pipety na harmonijkowo zwi¬ nieta bibule Whatoian 3 o wymiarach 3 x 10 cm 788 4 znajdujaca sie w jalowej probówce. Po umieszcze¬ niu probówki w komorze ewakuacyjnej urzadzenie podlaczono do olejowej pompy dyfuzyjnej. Do czasu otrzymania prózni wysokosci 1 • 10—5 mm Hg, g elastyczne zlacze gumowe pomiedzy urzadzeniem a pompa pozostalo zamkniete w ciagu 15 minut. Po tym czasie polaczenie miedzy pompa a urzadzeniem otwarto i w ciagu 30 minut prowadzono proces dehydratacji. io Po zakonczeniu procesu ponownie zamknieto ela¬ styczne zlacze i po otwarciu urzadzenia wyjeto pro¬ bówke, w której wnetrzu znajdowala sie naniesio¬ na na bibule kultura Staphylococcus albus. Nastep¬ nie przy uzyciu pompy prózniowej zatopiono otwar- 15 ta koncówke probówki.Wysuszone w ten sposób bakterie przechowywano w ciagu 2 lat w temperaturze pokojowej, po czym sprawdzono przy pomocy induktora Tesla utrzy¬ mywanie sie prózni w probówce. Probówke po na- 20 cieciu nozykiem do ciecia szkla umieszczono w uprzednio umytej 70% alkoholem etylowym gumo¬ wej rurce, w której w drugim koncu znajduje sie tampon z wyjalowionej waty. Po zalamaniu na¬ cietej koncówki probówki powietrze dostalo sie do 25 srodka probówki poprzez tamponowy filtr z waty.Przy pomocy jalowej pipety nawilgocono bibule jalowym roztworem soli fizjologicznej. Po 15 minu¬ tach nastapila calkowita rehydratacja kultury, która posiano przy pomocy platynowej ezy na pozywke 30 stala, celem sprawdzenia czystosci przechowywa¬ nego szczepu.Przykladu. Identycznie jak w przykladzie I postapiono przy uzyciu zamiast bakterii drozdzy Saceharomyces Cerevisiae, a jako podloze zastoso- 35 wano wyjalowiona brzeczke niechmielona. Po 2 latach przechowywania, po uprzednim sprawdzeniu utrzymywania sie prózni w zatopionej probówce postepowano tak samo jak w przykladzie I. PL PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób utrwalania drobnoustrojów na drodze sub¬ limacyjnej dehydratacji, znamienny tym, ze ciekla 45 kulture drobnoustrojów nanosi sie w cienkiej war¬ stwie na bibule, korzystnie zlozona w formie har¬ monijki, po czym bibule umieszcza sie w szklanym pojemniku, który nastepnie przylacza sie przez wy¬ lapywacz par, zawieraj.acy substancje absorpcyjna 50 do pompy prózniowej wytwarzajacej cisnienie 1 • 10—6 — 1 • 10—2 mm Hg, nastepnie z pojemnika ewakuuje sie powietrze, co powoduje gwaltowne parowanie cieklego podloza, po czym po wysuszeniu kultury pojemnik zatapia sie.KI. 30 h, 14 62 788 MKP C 12 k, 1/08 PL PL