PL441895A1 - Sposób bioochrony bulw ziemniaka sadzeniaka przed rozwojem fitopatogenów grzybowych - Google Patents

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest sposób bioochrony bulw ziemniaka sadzeniaka przed rozwojem fitopatogenów grzybowych, który charakteryzuje się tym, że ziemniaki traktuje się zawiesiną komórek drożdży z kladu Metschnikowia pulcherrima o gęstości 10⁶ - 10⁷ jtk/ml w postaci kąpieli przez zanurzenie ziemniaków w czasie 5 - 10 minut, a proces namnażania komórek drożdży prowadzi się w temp. 20 - 30°C w czasie 12 - 48 godz. po zaszczepieniu serwatki czystą kulturą drożdży z kladu Metschnikowia pulcherrima w ilości inokulum 5 - 10% v/v, które inkubowano w temperaturze 20 - 30°C w czasie 12 - 48 godz., przy czym stosuje się kwaśną serwatkę pochodzącą z produkcji przemysłowej suplementowaną 1,25 - 5 g/l ekstraktem drożdżowym, 2,5 - 10 g/l peptonem i 5 - 10 g/l glukozą.

Description

Sposób bioochrony bulw ziemniaka sadzeniaka przed rozwojem fitopatogenów grzybowych.

Przedmiotem wynalazku jest sposób bioochrony bulw ziemniaka sadzeniaka przed rozwoJem fitopatogenów grzybowych. Sposób wedlug wynalazku jest przeznaczony dla ekologicznego rolnictwa, jako biologiczna metoda zaprawiania hulw ziemniaka sadzeniaka przed okresem przechowywania w okresie jesienno-zimowym w celu ochrony przed fitopatogcnami.

Infekcje fitopatogcnami grzybowymi moga spowodowac obnizenie plonu bulw Liemniaków, szczególnie odmian wrazliwych (np. lmpre!)ja) nawet o 70%.

Ochrona ziemniaka przed chorobami powodowanymi przez patogenne grzyby wymaga zabiegów ochrony roslin m. in. zaprawiania preparatami.

Obecnie na rynku krajowym dostepne sa preparaty zawierajace fungicydy, które w swoim skladzie zawieraja czynne substancje chemiczne o dzialaniu przeciwgrzybowym. Ich formulacjc oparte sa na antygrzybowych substancjach czynnych (np. fluazynam. cymoksanil, propincb, difcnokonaLOl, mandipropamid, mankozcb, wodorotlenek miedzi, siarczan miedzi, chlorotalonil. cyjaLofamid, ametoktradyna, fluopikolid. chlorowodorek propamokarbu, piraklostrobina. folpet i in.). Udowodniono jednak. ze dlugoterminowe stosowanie fungicydów powoduje degradacje srodowiska naturalnego. zachwianie naturalnych biocenoz oraz wzrost opornosci fitopatogenów na stosowane zwiazki chemiczne. Srodki chemiczne stosowane do ochrony roslin charakteryzuja sie niska hiodegradowalnoscia w srodowisku naturalnym, kumulacja w komórkach organizmów zywych, np. w ziemniakach i moga przechodzic od koncowego ogniwa w lancuchu zywienia do organizmów zwierzat i czlowieka. Fungicydy stosowane w ochronie sadzeniaków wplywaja równiez na zaburzenie równowagi biologicznej w naturalnych biocenozach.

Alternatywa dla fungicydów sa substancje naturalnego pochodzenia które wykazuja aktywnosc przeciwdrobnoustrojowa wobec fitopatogenów. Ponadto srodki chemiczne oparte na fungicydach przeznaczone sa przede wszystkim PL 441895 A1 2/15dostosowania na polu w CLasic uprawy ziemniaka, nic ma zas metod stosowanych podczas magaLynowania ziemniaków sadzeniaków. Natomiast podstawa produkcji Ldrowych ziemniaków sad.Leniaków jest profilaktyka w postaci eliminowania zródel zakazenia. uprawa odmian o podwyzszonej odpornosci, ale przede wszystkim prawidlowe przechowywanie zdrowych ziemniaków.

Trudnosci utrzymania zdrowego ziemniaka w czasie jego przechowywania wynikaja z faktu zmieniajacego sie klimatu, w szczególnosci podwyzszonych temperatur w sezonie jesienno - zimowym. co szczególnie dotyka malych i srednich producentów. którzy przechowuja sadzeniaki tradycyjnymi metodami.

W warunkach podwyzszonej temperatury i wilgotnosci zarazone bulwy ziemniaków ulegaja zniszczeniu w ciagu kilkunastu dni. a choroba dotyka do 20% magazynowanych ziemniaków. Gospodarstwa zajmujace sie uprawa ekologiczna. w tym przypadku nie posiadaja zadnych rozwiazan ochrony ziemniaka przed fitopatogenami.

Znane sa drozdze z kladu Metschnikml'ia pulcherrzma.

Niniejszy wynalazek rozwiazuje problem ekologicznego sposobu ochrony bulw ziemniaka sadzeniaka przed rozwojem fitopatogcnów, bez koniecznosci stosowania srodków chemicznych, mogacych powodowac degradacje srodowiska naturalnego. zachwianie naturalnych biocenoz oraz wzrost opornosci fitopatogenów na zastosowane zwiazki chemiczne.

Sposób hioochrony hulw ziemniaka sadzeniaka przed rozwoJem fitopatogenów grzybowych charakteryzuje sie tym. ze ziemniaki traktuje sie zawiesina komórek drozdzy z kladu Metschnzko,via pulcherrima o gestosci 10 6 - 10 7 jtk/ml w postaci kapieli przcL zanurzenie ziemniaków w czasie 5-1 O minut. a proces namnazania komórek drozdzy prowadzi sie w temp. 20-30°C w czasie 12-48 godz. po zaszczepieniu serwatki czysta kultura drozdzy z kladu Metschnikowia pulcherrima w ilosci inokulum 5-10 % v/v, które inkubowano w temperaturze 20- °C w czasie 12-48 godz., przy czym stosuje sie kwasna serwatke pochodzaca z produkcji przemyslowej suplementowana 1,25-5 g/1 ekstraktem drozdzowym, 2,5- g/1 peptonem i 5-10 g/1 glukoza.

PL 441895 A1 3/15Korzystnie drozdze przechowuje sie na agarze YPG (1 % ekstraktu drozdzowego. 2% peptonu. 2% glukozy) w temp. 4°C po ich namnozeniu w temp. 20-30°C przez czas 24-72 godziny.

Sposób wedlug wynalazku jest rozwiazaniem ekologicznym. przyczynia sie do przywrócenia równowagi biologicznej i ochrony srodowiska naturalnego.

Sposób stosowany do zaprawiania sadzeniaków wplywa pozytywnie na rozwój systemu korzeniowego. a w konsekwencji rozwój roslin i zwiekszone plony podczas uprawy ziemniaka.

Sposób wedlug wynalazku ilustruja ponizsze pr,,:yklady z powolaniem sie na rysunek, na którym Fig. 1 przedstawia wykres ilustrujacy aktywnosc przeciwdrobnoustrojowa przykladowych drozdzy z kladu Metschnikowia pulcherrima wyizolowanych z polskich upraw ekologicznych bez stosowania fungicydów w tescie in vitro; Fig 2 wykres ilustrujacy plon biomasy hodowli drozdzy M. p11lrherrima, w podlozach serwatkowych o róznym poz10m1e suplementacji. Fig. 3 wykres ilustrujacy dynamike wzrostu drozdzy M. pulcherrima w bioreaktorze w pozywce serwatkowej; Fig. 3 Al i Bl pr,,:edstawiaja próby kontrolne inhibicji infekcji ziemniaka prLeL Alternaria :mlani (A) i Fusarium sambucinum (B). a Fig.3 A2 i B2 - próby z naniesiona hodowla drozdzy z kladu M. pulcherrima na podlozu serwatkowym.

Przyklad 1.

Drozdze M. pulchcrrima wyizolowano z owoców z polskich upraw ekologicznych. Drozdze przechowywano na podlozu agarowym YPG (1 % ekstraktu drozdzowego, 2% peptonu. 2% glukoLy) w temperaturze 4 °C po uprzedniej inkubacji drozdzy w temp. 20°C przez 24 godz.

Ocene dzialania przeciwdrobnoustrojowego drozdzy z kladu Metschnikowia pulcherrima w warunkach in vitro na fitopatogeny ziemniaka przeprowadzono metoda dyfuzyjna-agarowa. Szczepy z kladu M. pulcherrima hodowano na pozywce YPG przez 12 godzin w temperaturze 20°C na wytrzasarce (Unimax, Heidolph, Niemcy) przy 160 rpm. Uprzednio przygotowane zawiesiny fitopatogenów (106 jtk/rnL) w ilosci 100 µI przenoszono na agar PDA. Nastepnie, PL 441895 A1 4/15za pomoca sterylnego korkobora, w plytkach agarowych wycieto studzienki o srednicy 10 mm, do których wprowadzono 250 µl hodowli drozdzy izolatów z kladu M. pulcherrima. Plytki inkubowano w temp. 25°C przez 2-5 dni, w zaleznosci od rodzaju fitopatogenu. Srednice stref zahamowania wzrostu patogenów mierzono w mm. Na Fig. I przedstawiono strefy zahamowania wzrostu patogenów przez szczepy drozdzy M. pulrherrima.

Hodowle szczepu drozdzy M. pulrhcrrimo prowadzono w reaktorze szklanym LPP Equipment o objetosci calkowitej SL. W reaktorze, sterylizowano 3L pozywki, która zaszczepiono 150 ml inokulum (57a ). Inokulum stanowila hodowla drozdzy w serwatce kwasnej suplemcntowanej 1,25 g/1 ekstraktu drozdzowego. 2.5 g/1 peptonu i 5 g/1 glukozy, inkubowana w temp. 20°C przez czas 12 godz. Hodowle w reaktorze prowadzono w kwasnej serwatce suplementowanej 1.25 g/1 ekstraktu drozdzowego. 2.5 g/1 peptonu i 5 g/1 glukozy w reaktorze w temperaturze 20°C w czasie 12 godzin przy predkosciach mieszadla: 200 rpm.

Na Fig.2 przedstawiono dynamike wzrostu izolatu drozdzy z kladu M. pulclzerrima na suplcmcntowanym serwatce \V reaktorze w calym 96-godzinnym cyklu hodowli.

Testy przeciwdrobnoustrojowe in situ na sadzeniakach przeprowadzono po ich kapieli w zawiesinie komórek po 12-godz. hodowli drozdzy z kladu M. pu/cherrima o gestosci 1 (f' jtk/ml w kwasne serwatce suplementowanej 1.25 g/1 ekstraktu drozdzowego. 2,5 g/1 peptonu i 5 g/1 glukozy. w której zanurzono ziemniaki na 5 minut i nastepnie pozostawiono do wyschniecia. Nastepnie ziemniaki traktowano fitopatogenami poprzez naciecia skalpelem, do których wprowadzono 20 µl kazdej zawiesiny fitopatogcnów grzybowych. Próbe kontrolna stanowily ziemniaki traktowane tylko patogenami. Ziemniaki inkubowano w temp. ±5°C przez 14 dni. Dla porównania sprawdzono aktywnosc hamowania wzrostu fitopatogenów przez hodowle drozdzy z kladu M. pulcherrima w pozywce referencyjnej YPG. Procent porazenia fitopatogenem mierzono w porównaniu do kontroli zgodnie Iz równaniem: Inhibicja (%) = (C - T) / C x 100 PL 441895 A1 /15gdzie: C - % inwazji filopalogcnu na ziemniakach kontrolnych, T - % inwazji fitopatogenu na ziemniakach traktowanych drozdzami M. pulcherrima wyizolowanych z kwiatów truskawki na podlozu serwatkowym/ na podlozu YPG.

Procent porazonej powierzchni mierzono po przecieciu sadzeniaków na pól.

Test przeprowadzono w trzech powtórzeniach. Wyniki przedstawiono w taheli 1.

Tahela 1. Inhihicja porazenia sadzeniaków fitopatogenami [%] przez hodowle;: izolatu drozdzy 11 d M 1 1 l l dl . YPG Z ~ a ll . pu e 1errt111a w pozvwce serwat wwe1 w porownanm l o po oza Fito patogen Pozywka hodowlana serwatkowa YPG Fusarium oxysporum 30±10 30±5 Fusarium sambw:irmm 100±0 80±10 Altenwria altemata 100±0 80±5 Altenwria so/ani 100±0 90±5 Altemaria tenuissima 100±0 95±5 Co/letotrichum coccodes 100±0 100±0 Rhizactonia solani 50±5 60±5 Phoma exiiuc, 100±0 80±5 Komórki drozdzy z kladu Metsrhnikowia pulrherrima namnozone na podlozu serwatkowym hamowaly wzrost fitopatogenów grzybowych na ziemniaku podczas jego przechowywania: Fusarzum oxysporum, Fusariwn sambucznum, Alternaria allemata, Altemaria solani, Altemaria tenuissima.

Colletotrichum coccodes, Rhizoctonia solani, Plwma exigua.

Przyklad 2.

Drozdze M. pulcherrima wyizolowano z owoców z polskich upraw ekologicznych. Drozdze przechowywano na podlozu agarowym YPG (1 % ekstraktu drozdzowego, 2% peptonu, 2% glukozy) w temperaturze 4°C po uprzedniej inkubacji drozdzy w temp. 25°C przez 48 godz.

PL 441895 A1 6/15Ocene dzialania pu:eciwdrobnoustrojowego drozdzy z kladu Melschnikmvia pulcherrima w warunkach in vitro na fitopatogeny ziemniaka przeprowad,wno metoda dyfuzyjna-agarowa. Szczepy z kladu M. pulcherrima hodowano na pozywce YPG przez 24 godziny w temperaturze 25°C na wytrzasarce (Unimax. Heidolph. Niemcy) przy 160 rpm. Uprzednio przygotowane zawiesiny fitopatogenów (106jtk/mL) w ilosci 100 µl przenoszono na agar PDA. Nastepnie. za pomoca sterylnego korkohora, w plytkach agarowych wycieto studzienki o srednicy 10 mm, do których wprowadzono 250 µI hodowli drozdzy - izolatów z kladu M. pulcherrima. Plytki inkubowano w temp. 25°C przez 2-5 dni. w zaleznosci od rodzaju fitopatogenu. Srednice stref zahamowania wzrostu patogenów mierzono w mm. Na Fig. 1 przedstawiono strefy zahamowania wzrostu patogenów przez szczepy drozdzy M. pulcherrima.

Hodowle szczepu drozdzy M. pulcherrinw prowadzono w reaktorze szklanym LPP Equipment o objetosci calkowitej 5L. W reaktorze, sterylizowano 3L pozywki, która zaszczepiono 225 ml inokulum (7.5% ). Jnokulum stanowila hodowla drozdzy w serwatce kwasnej suplcmentowanej 2,5 g/1 ekstraktu drozdzowego. 5 g/1 peptonu i 7,5 g/1 glukozy, inkubowana w temp. 25°C przez czas 24 godz. Hodowle w reaktorze prowadzono w kwasnej serwatce suplementowanej 2.5 g/1 ekstraktu drozdzowego. 5 g/1 peptonu i 7 .5 g/1 glukozy w reaktorze w temperaturze 25°C w czasie 24 godzin przy predkosciach mieszadla: 200 rpm.

Na Fig. 2 przedstawiono dynamike wzrostu izolatu drozdzy z kladu M. p11lrherrima na suplcmentowanej serwatce w reaktorze w calym 96-godzinnym cyklu hodowli.

Testy przeciwdrobnoustrojowe in situ na sadzeniakach przeprowadzono po ich kapieli w zawiesinie komórek po 24-godz. hodowli drozdzy z kladu M. pulcherrima o gestosci 10 6 jtk/ml w kwasne serwatce suplementowanej 2,5 g/1 ekstraktu drozdzowego, 5 g/1 peptonu i 7,5 g/1 glukozy, w której zanurzono ziemniaki na 7 minut i nastepnie pozostawiono do wyschniecia. Nastepnie ziemniaki traktowano fitopatogenami poprzez naciecia skalpelem, do których wprowadzono 20 µI kazdej zawiesiny fitopatogenów grzybowych. Próbe kontrolna stanowily ziemniaki traktowane tylko patogenami. Ziemniaki inkubowano w temp. ±5°C przez 14 dni. Dla porównania sprawdzono aktywnosc hamowania wzrostu PL 441895 A1 7/15fitopatogcnów prLcz hodowle drozdzy z kladu M. pulcherrima w pozywce referencyjnej YPG. Procent porazenia fitopatogenem mierLOno w porównaniu do kontroli Lgodnie Iz równaniem: Inhibicja(%)= (C - T) / C x 100 gdzie: C -~ inwazji fitopatogcnu na ziemniakach kontrolnych, T - % inwazji fitopatogcnu na ziemniakach traktowanych drozdzami M. pulcherrima wyiLOlowanych z kwiatów truskawki na podlozu serwatkowym/ na podlozu YPG.

Procent porazonej powierzchni mierzono po przecieciu sadzeniaków na pól. Test przeprowadzono w trzech powtórzeniach. Wyniki przedstawiono w tabeli 1.

Tahela I. lnhihicja porazenia sadzeniaków fitopatogenami I o/,: I przez hodowle izolatu clrozclzy z kladu M. pulrharima w pozywce serwatkowej w porÓ\vnaniu do podloza YPG.

Fitopatogen Pozywka hodowlana serwatko wa YPG Fusuriurn oxysporum 30±10 30±5 Fusuriwn sambucinwn 100±0 80±10 Alterrwria alterrwtu 100±0 80±5 Altenwria soluni 100±0 90±5 Altenwria tenuissirnu 100±0 95±5 Colletotridzutn coccodes 100±0 100±0 Rhizoctoniu solllni 50±5 60±5 Phomu exigull 100±0 80±5 Komórki drozdzy z kladu Metschnikowia pulcherrima namnozone na podlozu serwatkowym hamowaly wzrost fitopatogenów grzybowych na ziemniaku podczas jego przechowywania: Fusarium oxysporum, Fusarium sambucinum, Alternaria alternata, Alternaria solani, Alternaria tenuissima, Colletotrichum coccodes, Rhizoctonia solani, Phoma exigua.

PL 441895 A1 8/15Przyklad 3.

Drozdze M. pulcherrima wyimlowano z owoców z polskich upraw ekologicznych. Drozdze przechowywano na podlozu agarowym YPG (1 % ekstraktu drozdzowego. 2% peptonu, 2% glukozy) w temperaturze 4"C po uprzedniej inkubacji drozdzy w temp. 30"C przez 72 godz.

Ocene dzialania przeciwdrobnoustrojowego drozdzy z kladu Metschnikmvia pulcherrima w wanmkach in vitro na fitopatogeny ziemniaka przeprowadzono metoda dyfuzyjna-agarowa. Szczepy z kladu M. pulcherrima hodowano na pozywce YPG przez 48 godzin w temperaturze 30°C na wytrzasarce (Unimax, Heidolph. Niemcy) przy 160 rpm. Uprzednio przygotowane zawiesiny fitopatogenów (10 6 jtk/mL) w ilosci 100 µl przenoszono na agar PDA. Nastepnie, za pomoca sterylnego korkobora. w plytkach agarowych wycieto studzienki o srednicy 1 O mm. do których wprowadzono 250 p I hodowli drozdzy - izolatów z kladu M. p11lcherrima. Plytki inkubowano w temp. 25°C przez 2-5 dni, w zaleznosci od rodzaju fitopatogenu. Srednice stref zahamowania wzrostu patogenów mierzono w mm. Na Fig. 1 przedstawiono strefy zahamowania wzrostu fitopatogenów przez szczepy drozdzy M. pulcherrima.

Hodowle szczepu drozdzy M. pulcherrinw prowadzono w reaktorze szklanym LPP Equipment o objetosci calkowitej 5L. W reaktorze. sterylizowano 3L pozywki. która zaszczepiono 300 ml inokulum ( 10%). lnokulum stanowila hodowla drozdzy w serwatce kwasnej suplementowanej 5 g/1 ekstraktu drozdzowego. 10 g/1 peptonu i 10 g/1 glukozy, inkubowana w temp. 30°C przez czas 48 godz. Hodowle w reaktorze prO\vadzono w kwasnej serwatce suplementowanej 5 g/1 ekstraktu drozdzowego, 10 g/1 peptonu i 10 g/1 glukozy w reaktorze w temperaturze 30°C w czasie 48 godzin przy predkosciach mieszadla: 200 rpm. Na Fig.2 przedstawiono dynamike wzrostu izolatu drozdzy z kladu M. pulcherrima na suplementowanej serwatce w reaktorze w calym 96-godzinnym cyklu hodowli.

Testy przeciwdrobnoustrojowe in situ na sadzeniakach przeprowadzono po ich kapieli w zawiesinie komórek po 48-godz. hodowli drozdzy z kladu PL 441895 A1 9/15M. pulcherrima o gestosci 10 7 jtk/ml w kwasne serwatce suplcmcntowancj 5 g/1 ekstraktu drozdzowego. 10 g/1 peptonu i 10 g/1 glukoLy, w której zanurLOno Liemniaki na 10 minut i nastepnie poLOstawiono do wyschniecia. Nastepnie Liemniaki traktowano fitopatogenami poprzez naciecia skalpelem. do których wprowadzono 20 µ I kazdej zawiesiny fitopatogenów grzyhowych. Próhe kontrolna stanowily ziemniaki traktowane tylko patogenami. Ziemniaki inkubowano w temp. ±5°C przez 14 dni. Dla porównania sprawdzono aktywnosc hamowania wzrostu fitopatogcnów przez hodowle drozdzy z kladu M. pulcherrima w pozywce referencyjnej YPG. Procent porazenia fitopatogcncm mierzono w porównaniu do kontroli zgodnie IL równaniem: Inhibicja(%)= (C -T) / C x 100 gdzie: C - * inwazji fitopatogenu na ziemniakach kontrolnych.

T - % . .. mwazJt fitopatogcnu na ziemniakach traktowanych drozdzarni M. pukhcrrima wyizolowanych z kwiatów truskawki na podlozu scrwatkowym/ na podlozu YPG.

Procent porazonej powicrLchni mierzono po prLccieciu sadLcniaków na pól. Test przeprowadLOno w trzech powtórLeniach. Wyniki przedstawiono w tabeli 1.

Tabela l. Inhibicja porazenia sadzeniaków fitopatogenami I "/o I przez hodowle izolatu drozdzy z kladu i'vl. puld1erri11w w pozywce senvatkowej w porównaniu do podloza YPG.

Fitopatogen Pozywka hodowlana serwatko wa YPG Fusuriwn oxyspontm 30±10 30±5 Fusuriwn sun1buci1wn1 100±0 80±10 Altemaria altemata 100±0 80±5 Altemaria solani 100±0 90±5 Altemaria tenuissima 100±0 95±5 Colletotrichum coccodes 100±0 100±0 Rhizoctonia solani 50±5 60±5 Phoma exigua 100±0 80±5 PL 441895 A1 /15Komórki drozdzy z kladu Metschnikmria pulcherrinw namnozone na podlozu serwatkowym hamowaly w.aost filopalogenów grzybowych na ziemniaku podczas jego przechowywania: Fusarium oxysporum, Fusarium sambucimmz, Alternaria alternata, Alternaria solani, Alternaria tenuissima, Colletotrichum cncrndes, Rhiznctmzia .wlani, Phnma exigua.

PL 441895 A1 11/15Zastrzezenia patentowe 1. Sposób bioochrony bulw ziemniaka sadLeniaka przed rozwo.1em fitopatogenów grzybowych znamienny tym, ze ziemniaki traktuje sie zawiesina komórek drozdzy z kladu Metsrhniknwia pu/rherrima o gestosci 6 - 10 7 jtk/ml w postaci kapieli przez zanurzenie ziemniaków w czasie 5-10 minut, a proces namnazania komórek drozdzy prowadzi sie w temp. 20-30°C w czasie 12-48 godz. po zasLczcpieniu serwatki czysta kultura drozdzy z kladu Metschnikowia pulcherrima w ilosci inokulum 5-10 7a v/v, które inkubowano w temperaturLe 20-30°C w CLasie 12-48 godz., przy czym stosuje sie kwasna serwatke pochodzaca z produkcji przemyslowej suplernentowana I .25-5 g/1 ekstraktem drozdzowym, 2.5- I O g/1 peptonem i 5- I O g/1 glukoza. 2. Sposób wedlug zastrz. 1 znamienny tym, ze drozdze przechowuje sie na agarze YPG (1 % ekstraktu drozdzowego, 29c peptonu, 29c glukozy) w temp. 4°C po ich namnozeniu w temp. 20-30°C przez czas 24-72 godziny.

PL 441895 A1 12/1520 18 16 l4 12 8 6 4 2 o - r' =i ~ ,...

Ol) o - 8H ,zczep '\'f. pnlC'herrima vr'.l:iz0Iow:1ny z oworÓ'w jablka aCTep ,t. pulr-hertinrn w:rizolowany x kwi:1tó1Y trnsk:nYki Fo - Fumrium o:xysporwn A.t-Alln·1wrUt teuui:,.sima 8 7,8 7,6 7,4 7,2 7 6,8 6,6 6,4 6,2 6 o 10 Fs - Fusariwn .rnm1Jud11wll ta - Aiternn.rirt alter11ata G:· -l-olletotrichumcoccolles fu Rhi:,,odo11itt.,0Umi Fig. 1 • 30 40 50 60 70 czas hodowli[godz] Fig. 2 A, -Alternnria ~olm1f Pt"' - Pltoma t'.xigua 80 90 100 PL 441895 A1 13/15Al B1 Fig. 3 .......

........ ••••• A2 B2 PL 441895 A1 14/15al. Niepodleglosci 188/192 00-950 Warszawa, skr, poczt, 203 URZAD PATENTOWY RZECZYPOSPOLITEJ POLSKIEJ tel.: (+48) 22 579 OS SS I fax: (+48) 22 579 00 01 e-mail: kontakt@uprp.gov.pl I www,uprp.gov.pl SPRAWOZDANIE O STANIE TECHNIKI DO ZGLOSZENIA NR P,--1---1-1895 Klasyfikacja zgloszenia: AOlP 3/00. AOlG 7/06, AOlC 1/08, AOlN 63/32 Podklasy w któ0 eh prowadzono poszukiwania: AO lP: AO 1 G: AO l C. AO lN Ba,-:y komputerowe\\ któ1ycl1 pro\, ad,-:ono poszukiwania: EPODOC. WPI, Espaccnct, bazy UPRP, Google Scholar Kategoria dokumentu Dokwncnt) - L podana idcnty fikacja Odniesienie do zastrL A A Stcgli11ska. N. Jaranmvska. L Tokarski, ,.Wlasciwosci mllagonistycwc bakterii 1-2 fermentacji mlekowej oraz drozdzy Metschniko\\ ia Sp. wobec W) branych fitopatogenów ziemniaka sadzeniaka··. XI Se~ia Magistrantów i Doktorantów Lódzkiego Srodowiska Chemików. 2.Hl6.2020. skiypt/streszczenie. str. IO A M. Kordo\\ska-Wiater. .. Drozdze jako czymriki ochrony biologicznej roslin". 1-2 Postepy Mikrobiologii. 201 I. 50(2). HP-I 19 A D. Sarayanaknrnar. D. Spadaro. A. Garibaldi. M. L. Gnllino ... Detection of 1-2 cnzyrnatic actiYity and partia! scqnencc of a chitinasc gcnc in l\fotsc hnikmvia pulcherrima strain MACHl used as post-harvest biocontrol agent", European Journal of Plant Pathology, vol. 123, 2009, 183-193 A JP 2005060287 A (TAKASAKI KASEI KK. [JP]) 10-03-2005 1-2 D Dalszy ciag "-ykazn dokumentów na nast9pncj stronic A- dokument okreslajacv ogólny stan techniki. którv nie jest uwazanv za posiada1acv szczególne znaczenie.

E - dokument stanomacy "czesmeJsze zgloszeme lub patent. ale opubl!kowany w lub po dacie zgloszema.

L - doh.ument. który moL.e podda" ac w watpfo, osc zastrzegane piervvszemlv\ o(-\Va). lub prL.ytoczon:'- w celu ustalenia daly pubhkacji innego cytowanego dokumentu lub L.. imie~o 1:iL..Czcgólncgo pO\\ udu, O - dokument oclnm,1.ac:· si~ clo ujawnienia ustnego pr 1.e'I "f.astoso,.\ ;inie. ,., ystnv ie nie hlh uj;n.n1ienie w innJ sposób, P - dokument opublikmvm1y przed dnt[l 7gfoszenia. ale p07.nie_j ni7. 7f"IStrze_gan::i d::ita pienvs7enstw::i.

T- dokument póiniejszv. opublikowany po dacie zgloszenia lub w dacie pierwszenstwa i niebedacy w konflikcie ze zgloszeniem. ale c\lowanv w celu 1.rozumienia zasad lub team lezacych u podstaw wynalazku.

X - doh.ument o SL..czegoln: m LHaczeuiu: z.astrLegany wynalaL..eh. nie moze byc U\\ az<.lll) La HO\\ y lub 11.ie moL..e byc uwazany La posiada1ac: poLiom \\ y 1ialaLcz:, jeL.elJ ten dol..wHcnt br~Ul)' jest pod uwa~~ samodzidnic, Y -dokument o s1.c1cg(llnym 1.11ac·1.cniu: 'f.:Jstr1cgany ,vynal;u.ck nic mo'/.c b)'c un-;ri:rny 1.a posiacl:1jqcy" po'f.iom wynal;i1.c1y". je-i.cli ten clok11mc11t 1.ostanie polqc1.011y" ·1. jednym 111b kilkoma te,20 typ11 clokument1mi. a tc1kie pol[!czenie becl7.ie OC7:"'Wiste dla zn::iwcy. & - dokument ualezacy do tej samej rodzim patentowej.

Sprawozdanie wykonal/-a: Monika Szymanska Ekspert Data: 27.02.2023 Uwagi do zgloszenia Podpis: /podpisano kwalifikowanym podpisem elektronicznym/ Pismo wydane w formie dokumentu elektronicznego Sprawozdanie zostalo wykonane w oparciu o wersje zastrzezen patentowych z dnia O 1.08.2022 r.

PL 441895 A1 /15

Claims (2)

Zastrzezenia patentowe

1. Sposób bioochrony bulw ziemniaka sadLeniaka przed rozwo.1em fitopatogenów grzybowych znamienny tym, ze ziemniaki traktuje sie zawiesina komórek drozdzy z kladu Metsrhniknwia pu/rherrima o gestosci 10 6 - 10 7 jtk/ml w postaci kapieli przez zanurzenie ziemniaków w czasie 5-10 minut, a proces namnazania komórek drozdzy prowadzi sie w temp. 20-30°C w czasie 12-48 godz. po zasLczcpieniu serwatki czysta kultura drozdzy z kladu Metschnikowia pulcherrima w ilosci inokulum 5-10 7a v/v, które inkubowano w temperaturLe 20-30°C w CLasie 12-48 godz., przy czym stosuje sie kwasna serwatke pochodzaca z produkcji przemyslowej suplernentowana I .25-5 g/1 ekstraktem drozdzowym, 2.5- I O g/1 peptonem i 5- I O g/1 glukoza.

2. Sposób wedlug zastrz. 1 znamienny tym, ze drozdze przechowuje sie na agarze YPG (1 % ekstraktu drozdzowego, 29c peptonu, 29c glukozy) w temp. 4°C po ich namnozeniu w temp. 20-30°C przez czas 24-72 godziny.2/1520 18 16 l4 12 10 8 6 4 2 o - r' =i ~ ,... Ol) o - 8H ,zczep '\'f. pnlC'herrima vr'.l:iz0Iow:1ny z oworÓ'w jablka aCTep ,t. pulr-hertinrn w:rizolowany x kwi:1tó1Y trnsk:nYki Fo - Fumrium o:xysporwn A.t-Alln·1wrUt teuui:,.sima 8 7,8 7,6 7,4 7,2 7 6,8 6,6 6,4 6,2 6 o 10 Fs - Fusariwn .rnm1Jud11wll ta - Aiternn.rirt alter11ata G:· -l-olletotrichumcoccolles fu Rhi:,,odo11itt.,0Umi Fig. 1 • 20 30 40 50 60 70 czas hodowli[godz] Fig. 2 A, -Alternnria ~olm1f Pt"' - Pltoma t'.xigua 80 90 1003/15Al B1 Fig. 3 ....... ........ ••••• A2 B24/15al. Niepodleglosci 188/192 00-950 Warszawa, skr, poczt, 203 URZAD PATENTOWY RZECZYPOSPOLITEJ POLSKIEJ tel.: (+48) 22 579 OS SS I fax: (+48) 22 579 00 01 e-mail: kontakt@uprp.gov.pl I www,uprp.gov.pl SPRAWOZDANIE O STANIE TECHNIKI DO ZGLOSZENIA NR P,--1---1-1895 Klasyfikacja zgloszenia: AOlP 3/00. AOlG 7/06, AOlC 1/08, AOlN 63/32 Podklasy w któ0 eh prowadzono poszukiwania: AO lP: AO 1 G: AO l C. AO lN Ba,-:y komputerowe\\ któ1ycl1 pro\, ad,-:ono poszukiwania: EPODOC. WPI, Espaccnct, bazy UPRP, Google Scholar Kategoria dokumentu Dokwncnt) - L podana idcnty fikacja Odniesienie do zastrL A A Stcgli11ska. N. Jaranmvska. L Tokarski, ,.Wlasciwosci mllagonistycwc bakterii 1-2 fermentacji mlekowej oraz drozdzy Metschniko\\ ia Sp. wobec W) branych fitopatogenów ziemniaka sadzeniaka··. XI Se~ia Magistrantów i Doktorantów Lódzkiego Srodowiska Chemików. 2.Hl6.2020. skiypt/streszczenie. str. IO A M. Kordo\\ska-Wiater. .. Drozdze jako czymriki ochrony biologicznej roslin". 1-2 Postepy Mikrobiologii. 201 I. 50(2). HP-I 19 A D. Sarayanaknrnar. D. Spadaro. A. Garibaldi. M. L. Gnllino ... Detection of 1-2 cnzyrnatic actiYity and partia! scqnencc of a chitinasc gcnc in l\fotsc hnikmvia pulcherrima strain MACHl used as post-harvest biocontrol agent", European Journal of Plant Pathology, vol. 123, 2009, 183-193 ATAKASAKI KASEI KK. [JP]) 10-03-2005 1-2 D Dalszy ciag "-ykazn dokumentów na nast9pncj stronic A- dokument okreslajacv ogólny stan techniki. którv nie jest uwazanv za posiada1acv szczególne znaczenie. E - dokument stanomacy "czesmeJsze zgloszeme lub patent. ale opubl!kowany w lub po dacie zgloszema. L - doh.ument. który moL.e podda" ac w watpfo, osc zastrzegane piervvszemlv\ o(-\Va). lub prL.ytoczon:'- w celu ustalenia daly pubhkacji innego cytowanego dokumentu lub L.. imie~o 1:iL..Czcgólncgo pO\\ udu, O - dokument oclnm,1.ac:· si~ clo ujawnienia ustnego pr 1.e'I "f.astoso,.\ ;inie. ,., ystnv ie nie hlh uj;n.n1ienie w innJ sposób, P - dokument opublikmvm1y przed dnt[l 7gfoszenia. ale p07.nie_j ni7. 7f"IStrze_gan::i d::ita pienvs7enstw::i. T- dokument póiniejszv. opublikowany po dacie zgloszenia lub w dacie pierwszenstwa i niebedacy w konflikcie ze zgloszeniem. ale c\lowanv w celu 1.rozumienia zasad lub team lezacych u podstaw wynalazku. X - doh.ument o SL..czegoln: m LHaczeuiu: z.astrLegany wynalaL..eh. nie moze byc U\\ az<.lll) La HO\\ y lub 11.ie moL..e byc uwazany La posiada1ac: poLiom \\ y 1ialaLcz:, jeL.elJ ten dol..wHcnt br~Ul)' jest pod uwa~~ samodzidnic, Y -dokument o s1.c1cg(llnym 1.11ac·1.cniu: 'f.:Jstr1cgany ,vynal;u.ck nic mo'/.c b)'c un-;ri:rny 1.a posiacl:1jqcy" po'f.iom wynal;i1.c1y". je-i.cli ten clok11mc11t 1.ostanie polqc1.011y" ·1. jednym 111b kilkoma te,20 typ11 clokument1mi. a tc1kie pol[!czenie becl7.ie OC7:"'Wiste dla zn::iwcy. & - dokument ualezacy do tej samej rodzim patentowej. Sprawozdanie wykonal/-a: Monika Szymanska Ekspert Data: 27.02.2023 Uwagi do zgloszenia Podpis: /podpisano kwalifikowanym podpisem elektronicznym/ Pismo wydane w formie dokumentu elektronicznego Sprawozdanie zostalo wykonane w oparciu o wersje zastrzezen patentowych z dnia O 1.08.2022 r.5/15