PL34021B1 - Sposób przeróbki trzustek ssaków, zwlaszcza bydla rogatego i swin - Google Patents

Description

Wynalazek dotyczy sposobu otrzymywania proteolitycznych enzymów^ które ponizej nazy¬ wa sie. wprost enzymami, z trzustek ssaków, zwlaszcza bydla rogatego i swin, oraz otrzymy¬ wanie insuliny z tych samych gruczolów.Otrzymywanie insuliny z gruczolów trzustko¬ wych ssaków, zwlaszcza bydla rogatego i swin, przeprowadza sie w ten sposób, ze rozdrobnio- . ne gruczoly traktuje sie odpowiednimi srodkami ekstrahujacymi, zdolnymi do rozpuszczania in¬ suliny w warunkach, Tv których enzymy obecne w trzustkach nie powoduja przechodzenia insu¬ liny w stan nieczynny. Jako odpowiednie srod¬ ki ekstrahujace znane sa woda, alkohol etylowy i metylowy, w dalszym ciagu opisu zwane wprost .alkoholami, aceton lub-mieszaniny tych substan¬ cji z dodatkiem lub bez dodatku kwasów, - alka¬ liów lub soli.W gruczolach wyjetych ze z\vierzat natych¬ miast po zarznieciu enzymy sa nieczynne. Enzy¬ my te jednak przechodza szybko w stan czynny, o ile gruczoly nie zostana zamrozone do tempe-. ratury ponizej. 0°C. Do otrzymywania wiec mozli¬ wie najwiekszej wydajnosci insuliny stosuje sie zawsze swieze lub dobrze zakonserwowane gru¬ czoly, to jest gruczoly szybko zamrozone, w któ¬ rych enzymy sa w stanie calkowicie lub prawie calkowicie nieczynnym.Dotychczas uwazano powszechnie, ze alkotiol lub aceton' opóznia dzialanie enzymów, a nawet iz niszczy enzymy. Wobec tego pozostalosc od¬ dzielona przy otrzymywaniu insuliny uwazano jako nie nadajaca sie do otrzymywania enzymów z gruczolów trzustkowych.Wynalazek opiera sie na nowyfn spostrzeze¬ niu, iz enzymy nie ulegaja zniszczeniu podczas traktowania ich alkoholem lub acetonem uzyty¬ mi do otrzymywania insuliny, lecz ze zostaja o- sadzone, co jest zalezne od stezenia uzytego al¬ koholu lub acetonu. To osadzanie sie zalezy jed¬ nak równiez od- stosunku ilosci cieczy do ilosci substancji podlegajacej ekstrakcji (stosunek ekstrakcji). Zaleznie od stosunku ekstrakcji na¬ lezy stosowac stezenie alkoholu lub acetonu od2Q ^,60% objetosciowych, przy czym 20% ob¬ jetosciowych stosuje sie przy malym stosunku ekstrakcji, ar.60% objetosciowych przy. duzym stosunku elistrakcji. Przy zachowaniu tych wa¬ runków w pozostalosci oddzielonej przy otrzy¬ mywaniu insuliny wykrytosrzeczywiscie enzymy.Wsród licznych substancji oddzielonych przy oczyszczaniu insuliny enzymów nie wykryto. Ten wynik zadowalajacy nalezy przypisac oczywisr cie tej okolicznosci, iz uzyto rozpuszczalnika, który w Warunkach . powyzszych dniala jedno¬ czesnie*, jako srodek osadzajacy enzymy. Te o- statnie wskutek tego pozostaja w stanie nieroz- puszezonym w pozostalosci oddzielonej przy o-, trzymywaniu insuliny i nie mozna ich zaktywo- wac dopóki gruczoly te nie zostana przerobione ponownie.W celu otrzymania czynnego preparatu eu- zymowego z pozostalosci otrzymanej po ekstrak¬ cji insuliny nalezy ^wiec, w mysl wynalazku ni¬ niejszego, tylko rozpuscic enzymy.Zgodnie z powyzszym pozostalosci gromadzace sie podczas znanego- wytwarzania insuliny z roz¬ drobnionych swiezych lub konserwowanych gru¬ czolów przez traktowanie tych ostatnich.zakwaszo¬ nym alkoholem lub acetonem, po oddzieleniu cie¬ czy poddaje sie ekstrakcji enzymowej za pomo¬ ca wodnego osrodka, przy czym w cieczy ekstra¬ hujacej powstalej ze zmieszaTiia wodnego osrod¬ ka z alkoholem lub acetonem, pozostalym w gru¬ czolach po ekstrakcji insuliny, stezenie alkoho¬ lu lub acetonu winno byc mniejsze od 60% obje¬ tosciowych, najkorzystniej mniejsze Od 20% ob¬ jetosciowych. Alkohol lub aceton o stezeniu mniejszym, od stosowanego przy wyciaganiu in¬ suliny jest srodkiem rozpuszczajacym enzymy -i przeprowadzajacym je w stan czynny.W celu dalszego* wyjasnienia wplywu steze¬ nia alkoholu lub acetonu nalezy zaznaczyc, iz przy uzyciu alkoholu etylowego przjy stosunku ekstrakcji 7 : 1 osadzanie enzymów zaczyna sie w przyblizeniu przy 30% objetosciowych alko¬ holu. Ilosci dajace sie w praktyce zmierzyc o- trzymuje sie przy okolo 40% objetosciowych al¬ koholu. W tym przypadku podczas ekstrakcji in¬ suliny trzeba stosowac stezenie alkoholu etylo¬ wego równe okolo 40% objetosciowych, podczas gdy przy ekstrakcji enzymów stezenie alkoholu winno byc nizsze-, od 30% objetosciowych.Wydajnosc enzymów zalezy w pierwszym rzedzie od stezenia alkoholu lub, acetonu. Przy stezeniu równym 20 —60% objetosciowych al¬ koholu lub acetonu i wiekszym • zaleznie od sto¬ sunku ekstrakcji enzymy pozostaja w. stanie nie- rozpuszczonym, ponizej zas wspomnianego ste¬ zenia enzymy zaczynaja sie rozpuszczac.' Ogól¬ nie biorac wydajnosc enzymów wzrasta bardzo w miare zmniejszenia'sie stezenia alkoholu l^ub acetonu-. Równiez czas ekstrakcji odgrywa role, to jest przy skróconym czasie otrzymuje si£ zmniejszona wydajnosc.Dobrze jest stosowac jako rozpuszczalnik en¬ zymów wode, przy*czym wykryto, ze ekstrakcja za pomoca; wody w ciagu 24 godzin daje dobre wydajnosci enzymów przy stosunku ekstrakcji 7:1.Korzystnie jest po ekstrakcji insuliny usunac czesc alkoholu lub acetonu zawartego w pozo¬ stalosci, np, przez odciskanie, a pózniej poddac pozostalosc ekstrakcji enzymowej. W,mten sposób osiaga sie bardziej stezone roztwory en- zyiriowe i.lepsze Warunki odzyskania uzytego al¬ koholu lub acetonu.Gdy do ekstrakcji insuliny siosuje sie roz¬ twór, kwasu w alkoholu, np. kwasu chlorowodo¬ rowego, fosforowego, mlekowego lub octowego, wówczas enzymy wyciaga Sie z pozostalosci gru¬ czolów za pomoca wody.Gdy do ekstrakcji insuliny stosuje sie doda¬ tek kwasu siarkowego, stwierdzono, ze nie moz¬ na wyciagac enzymów bezposrednio nawet wów¬ czas, gdy stezenie alkoholu lub acetonu wynosi okolo 0%, gdyz czas trwania ekstrakcji jest wte¬ dy zbyt dlugi i ilosc'srodka ekstrahujacego jest zbyt wielka. W tym przypadku ekstrakcja daje dobre wyniki, gdy stosuje sie jako srodek eks¬ trahujacy roztwór mocznika, powyzej 50% kwas octowy, 85% kwas mrówkowy lub ciekly fenol.Wykryto, ze mozna równiez stosowac" zwykla ekstrakcje za pomoca wody, jesli piózloistalosc podczas wyqi.aga.nia enzymów poddaje sie ogrze¬ waniu w ciagu krótkiego czasu do temperatury, np. 100°C, Podczas ekstrakcji' enzympw nalezy stosowac roztwór o wartosci pH = 1 — 7, najkorzystniej 1 — 4.Ponizsze przyklady wyjasniaja blizej sposób wedlug wynalazku.Przyklad I. 1 kg swiezych dobrze zakon¬ serwowanych trzustek rozdrabnia sie i wycia¬ ga w ciagu 3 godzin za pomoca 4 litrów 80%- wego alkoholu etylowego, do którego dodano 30 cm3 stezonego kwasu chlorowodorowego. Prze¬ sacz przerabia sie dalej na insuline w sposób zwykly, podczas gdy pozostalosc poddaje sie ekstrakcji enzymowej w ciagu 24 godzin za po¬ moca 7 litrów wody, po czym ciecz odwirowuje sie i otrzymuje z niej enzymy. Otrzymuje sie wydajnosc równa 10 milionom jednostek Fuld- Gross'a.P r zy klad II. 1 kg swiezych lub dobrze za-- konserwowanych trzustek rozdrabnia sie i wy¬ ciaga w ciagu 4 godzin za pomoca 6 litrów 80%-^wego acetonu, do którego dodano 35 cm3 stezo¬ nego kwasu chlorowodorowego. Przesacz przera¬ bia sie dalej na insuline w sposób'zwykly. Po- ^soSjtalpsc poddaje sie ekstrakcji enzymoiwej w ciagu 24 godzin za pomoca 7 litrów wody, po czym odwirowuje sie i z cieczy tej otrzymuje en¬ zymy. Osiaga sie wydajnosc okolo 10 milionów, jednostek Fuld-Gross'a.Przyklad III. 1 kg swiezych lub dobrze zakonserwowanych trzustek rozdrabnia sie i wy¬ ciaga w ciagu 3 godzin za pomoca 2 litrów 80<»/n- wego alkoholu etylowego, do którego dodano 10 cm3 stezonego kwasu siarkowego. Ciecz odwiro¬ wuje sie i przerabia w- sposób zwykly na insuli¬ ne, podczas gdy pozostalosc poddaje 'sie ekstrak¬ cji enzymowej za pomoca 3 litrów 33 wodneao roztworu mocznika w ciagu 2 .godzin.Po odwirowaniu cieczy otrzymuje sie z niej en¬ zymy.Przyklad IV. 1 kg swiezych lub dobrze zakonserwowanych trzustek rozdrabnia sie i wy¬ ciaga w ciagu 8 godzin za pomoca Q Mrów 80%-wego alkoholu etylowego, do którego doda¬ no 10 cm3 kwasu siarkowego. Ciecz odwirowuje sie i przerabia na insuline w' sposób zwykly, .podczas gdy pozostalosc po odcisnieciu s miesza sie z 4 litrami wody, do której dodano 20 cm3 stezonego kwasu chlorowodorowego, " ogrzewa szybko do 100°C i natychmiast potem ochladza.Po odwirowaniu cieczy otrzymuje sie z niej en¬ zymy. Osiaga sie wydajnosc w przyblizeniu wy¬ noszaca okolo 9 milionów jednostek Fuld-Gross^. PL

Claims (6)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób przeróbki trzustek , ssaków-, zwlasz¬ cza bydla rogatego i swin, znamienny tym, ze. z rozdrobnionych swiezych lub dobrze za¬ konserwowanych gruczolów wyfciaga sie przy pomocy alkoholu lub acetonu w- sposób znany insuline, a pozostalosci gruczolów poddaje sie ekstrakcji enzymowej za pomoca wodnego osrodka,, którego ilosc dobiera sie tak,, aby w. cieczy ekstrahujacej, powstalej Ze zmieszania wodnego osrodka z alkoholem lub acefoneni pozostalym w gruczolach po ekstrakcji insta liny, stezenie alkoholu lub acetonu bylo mniej¬ sze od '60 mniejsze od 20
2. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym,. ze cze^c alkoholu lub acetonu, zawartego* w po¬ zostalosci, usuwa sie z niej przed ekstrakcja enzymowa, np. przez odciskanie.
3. 3. Sposób wedlug zastrz. 1 i 2, znamienny tym, ze jako srodek wyciagajacy enzymy stosu¬ je sie wode zakwaszona.
4. 4. L, Sposób wedlug zastrz. 1 — 3, znamienny tymi, ze w przypadku stosowania do ekstrakcji in¬ suliny alkoholu lub^ acetonu, zawierajacego kwas siarkowy, pozostalosc podczas* wycia¬ gania enzymów poddaje sie ogrzewaniu w ciagu krótkiego czasu.
5. 5. Sposób wedlug zastrz, 1, 2, znamienny tym^ ze w przypadku stosowania do ekstrakcji in¬ suliny alkoholu lub acetonu, zawierajacego- kwas siarkowy, enzymy wyciaga sie z pozo¬ stalosci .za pomoca' stezonego .. wodnego roz¬ tworu, mocznika, stezonego kwasu octowego, stezonego kwasu mrówkowego lub cieklego fenolu.
6. 6. Sposób wedlug zastrz. 1 — 4, znamienny tym, ze do ekstrakcji enzymów stosuje sie roztwór o wartosci pH =1 — 7, najkorzystniej 1—4. N o v o Terapeutfisk Laboratorium A/S. Zastepca: inz. W. Zakrzewski ; rzecznik patentowym B.Z.G. — 150 zam. 148/16^2^ 3 1Y-50. T-1-15192—16.P-51 PL