PL248983B1 - Sposób wytwarzania formulacji leczniczej klotrimazolu z amfifilowym kopolimerem i jej zastosowanie w terapii przeciwnowotworowej i skojarzonej terapii przeciwnowotworowej z nifuratelem - Google Patents

Sposób wytwarzania formulacji leczniczej klotrimazolu z amfifilowym kopolimerem i jej zastosowanie w terapii przeciwnowotworowej i skojarzonej terapii przeciwnowotworowej z nifuratelem

Info

Publication number
PL248983B1
PL248983B1 PL445173A PL44517323A PL248983B1 PL 248983 B1 PL248983 B1 PL 248983B1 PL 445173 A PL445173 A PL 445173A PL 44517323 A PL44517323 A PL 44517323A PL 248983 B1 PL248983 B1 PL 248983B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
clotrimazole
copolymer
poly
formulation
glyceryl
Prior art date
Application number
PL445173A
Other languages
English (en)
Other versions
PL445173A1 (pl
Inventor
Monika Gosecka
Mateusz Gosecki
Małgorzata Urbaniak
Barbara Klajnert-Maculewicz
Anna Janaszewska
Monika Marcinkowska
Original Assignee
Centrum Badan Molekularnych I Makromolekularnych Polskiej Akademii Nauk
Univ Lodzki
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centrum Badan Molekularnych I Makromolekularnych Polskiej Akademii Nauk, Univ Lodzki filed Critical Centrum Badan Molekularnych I Makromolekularnych Polskiej Akademii Nauk
Priority to PL445173A priority Critical patent/PL248983B1/pl
Priority to PCT/PL2024/050039 priority patent/WO2024253550A1/en
Publication of PL445173A1 publication Critical patent/PL445173A1/pl
Publication of PL248983B1 publication Critical patent/PL248983B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4174—Arylalkylimidazoles, e.g. oxymetazolin, naphazoline, miconazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A61K31/422—Oxazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0034—Urogenital system, e.g. vagina, uterus, cervix, penis, scrotum, urethra, bladder; Personal lubricants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Wynalazek rozwiązuje zagadnienie sposobu wytwarzania formulacji leczniczej amfifilowego kopolimeru nieliniowego na bazie polieterów z hydrofobowym rdzeniem wzbogaconym w ugrupowania alkilowe lub aromatyczne i hydrofilową powłoką zawierającą grupy diolowe, z trudno rozpuszczalnym w wodzie klotrimazolem oraz zastosowanie tej formulacji w terapii przeciwnowotworowej i skojarzonej terapii przeciwnowotworowej z nifuratelem w formie roztworu wodnego lub w formie hydrożelu na przykładzie raka szyjki macicy.

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania formulacji leczniczej klotrimazolu z amfifilowym kopolimerem i jej zastosowanie w terapii przeciwnowotworowej i skojarzonej terapii przeciwnowotworowej z nifuratelem, na przykładzie raka szyjki macicy.
Rak szyjki macicy jest złośliwym nowotworem nabłonkowym, który powstaje w szyjce macicy [1]. Jest jedną z najczęstszych przyczyn zgonów wśród kobiet na całym świecie [2]. Chemioterapia stanowi jedną z głównych metod leczenia raka szyjki macicy. Stosowanie pojedynczego środka terapeutycznego nie jest jednak skuteczne w leczeniu tego nowotworu, dlatego niejednokrotnie konieczne jest stosowanie terapii skojarzonej [3]. Jako terapie pierwszego rzutu zaleca się różne kombinacje cisplatyny, paklitakselu, bewacyzumabu, karboplatyny, topotekanu i gemcytabiny [4-5]. Leki te zostały zatwierdzone przez Food and Drug Administration (FDA) do leczenia raka szyjki macicy [6]. Leki stosowane w konwencjonalnej chemioterapii nie są selektywne wobec komórek nowotworowych, co oznacza, że zarówno komórki nowotworowe, jak i komórki prawidłowe, są jednocześnie zabijane przez leki przeciwnowotworowe, co prowadzi do poważnych skutków ubocznych [7-10].
Ze względu na wysoką toksyczność leków stosowanych w chemioterapii, nieodzowne jest włączenie leczenia wspomagającego, czyli zabezpieczającego przed skutkami ubocznymi chemioterapii. Niestety wiele leków spośród tych dopuszczonych do leczenia wspomagającego również wywołuje liczne i poważne skutki uboczne [8-10]. W przypadku stosowania wysokodawkowej chemioterapii niejednokrotnie, konieczne jest przeprowadzenie przeszczepu szpiku kostnego. Oprócz braku selektywności wobec komórek nowotworowych, stosowane w chemioterapii leki skutkują wykształceniem zjawiska oporności wielolekowej 30MDR (ang. multidrug resistance), które jest jedną z głównych przyczyn niepowodzenia systemowej terapii przeciwnowotworowej [11-16].
Dlatego tak ważne jest wynalezienie terapii, która byłaby skuteczna i jednocześnie selektywna wobec komórek nowotworowych raka szyjki macicy, a zastosowanie małej dawki terapeutycznej umożliwiłoby uniknięcie niepożądanych efektów ubocznych.
Klotrimazol jest hydrofobowym lekiem stosowanym w terapiach przeciwgrzybiczych, którego działanie opiera się na zaburzeniu pompy wapniowej, transportu Ca2+ w komórce oraz hamowaniu syntezy ergosterolu, co prowadzi do uszkodzenia błony komórkowej grzyba [17]. Klotrimazol jest rutynowo stosowany w leczeniu zakażeń skóry wywołanych przez dermatofity, drożdże, pleśnie i inne szczepy grzybów [18], w tym również w leczeniu zapalenia sromu i pochwy. Ze względu na słabą rozpuszczalność klotrimazolu w wodzie (0,49 mg/L) [19] wykazuje zarówno niską biodostępność, jak i skuteczność terapeutyczną, przez co jest zaliczany do leków klasy II w systemie klasyfikacji biofarmaceutycznej (BCS). W terapiach miejscowych zaledwie 0,5% klotrimazolu jest wchłaniane, co zmniejsza jego skuteczność [20].
Działanie przeciwgrzybicze klotrimazolu ujawniają np. patenty US4775678A i EP0007595B1. Patent US4775678A opisuje sposób wytwarzania preparatu emulsji typu olej w wodzie w postaci kremu lub lotionu zawierającego różne ilości klotrimazolu, petrolatum, alkohol cetearylowy, glikol propylenowy i ceteth-20, z lub bez innych dodatkowych składników. Patent EP000759B1 opisuje formulację klotrimazolu w formie kremu, żelu na bazie poli(kwasu akrylowego).
Klotrimazol, oprócz działania przeciwgrzybiczego, wykazuje również właściwości przeciwnowotworowe [21-24]. Badania te potwierdziły silne działanie leku na żywotność komórek nowotworowych ssaków poprzez wpływ na enzymy glikolityczne związane z cytoszkieletem i hamowanie glikolizy komórkowej i produkcji ATP [21-22], oraz że klotrimazol może być antagonistą kalmoduliny (CaM) [23]. Marinho-Carvalho i wsp. wykazali na przykład, że lek hamował glikolizę komórkową poprzez bezpośrednie hamowanie fosfofruktokinazy (PFK) i EC 2.7.1.11 - kluczowego enzymu regulacyjnego szlaku glikolitycznego i białka wiążącego kalmodulinę [24]. W porównaniu do komórek prawidłowych, komórki nowotworowe wykazują zwiększoną szybkość glikolizy [25] a ich mitochondria metabolizują (oprócz pirogronianu) glutaminę, co umożliwia szybszą syntezę lipidów i aminokwasów niezbędnych do budowy błon i białek [26]. Ta glikolityczna preferencja komórek nowotworowych jest nazywana efektem Warburga [27].
Klotrimazol działa bezpośrednio na enzymy glikolityczne, a tym samym wpisuje się w efekt Warburga [28], co pokazały wyniki testów względem komórek nowotworowych oraz jego niewielkiego wpływu na komórki prawidłowe. Niestety, klotrimazol nie sprawdził się w chemioterapii ze względu na niską rozpuszczalność w mediach hydrofitowych [29].
Terapie przeciwnowotworowe wymagają nowych strategii chemioterapeutycznych. Chociażby dlatego, że rak szyjki macicy, jedna z najbardziej agresywnych form raka u kobiet i czwarty co do częstości występowania nowotwór na świecie, jest oporny na konwencjonalną chemioterapię [30]. Skuteczna terapia, zwłaszcza we wczesnych stadiach choroby, może decydować o efektywności leczenia. Ze względu na korzystny efekt Warburga obserwowany dla klotrimazolu, kluczowe znaczenie dla zwiększenia potencjału leku w terapiach przeciwnowotworowych może mieć zwiększenie jego rozpuszczalności w środowisku wodnym.
Celem wynalazku jest przezwyciężenie wskazanych niedogodności wynikających ze stanu techniki. Cel ten został osiągnięty przez opracowanie rozwiązania formulacyjnego, sposobu jego wytwarzania oraz produktu otrzymanego tym sposobem, umożliwiającego otrzymanie formulacji leczniczej klotrimazolu o dużej selektywności wobec komórek nowotworowych na przykładzie komórek raka szyjki macicy HeLa, zwiększonej rozpuszczalności i biodostępności w warunkach wodnych.
Stosowane w niniejszym opisie i zastrzeżeniach patentowych terminy, jeśli występują, mają następujące znaczenia:
„Formulacja lecznicza” lub „formulacja” odnosi się do preparatu, który jest w takiej postaci, która pozwala na to, że aktywność biologiczna składnika aktywnego w nim zawartego jest skuteczna i który nie zawiera dodatkowych komponentów, które są niedopuszczalnie toksyczne dla osobnika, któremu formulacja będzie podawana.
„Terapia” lub „leczenie” odnosi się do stosowania leku zawierającego nowe związki według wynalazku o wzorze (I), do leczenia choroby lub stanu chorobowego i obejmuje zapobieganie chorobie lub stanowi hamowanie choroby lub stanu, eliminowanie choroby lub stanu i/lub łagodzenie jednego lub większej liczby objawów choroby lub stanu.
“PBGE-PGGE” odnosi się do kopolimeru z hydrofobowym rdzeniem z poli(eteru benzylowo-glicydylowego) i hydrofilową powłoką z poli(eteru glicerylowo-glicerylowego).
“PEBut-PEO-HbPGL” odnosi się do poli(1,2-epoksybutan)-poli(tlenek etylenu)-hiperrozgałęzionego poliglicydolu.
“NIF” oznacza nifuratel.
“CLOT” oznacza klotrimazol.
“LEK” oznacza klotrimazol, nifuratel.
W tym celu zademonstrowano, że enkapsulacja klotrimazolu w strukturze nieliniowych kopolimerów amfifilowych o hydrofobowym rdzeniu zbudowanym z poli(1,2-epoksybutanu) lub poli(eteru benzylowo-glicydylowego) i hydrofilowej powłoce zbudowanej z poli(eteru glicerylowo-glicerylowego) lub poliglicydolu skutkuje zwiększeniem biodostępności leku, co jest widoczne jako jego zwiększona aktywność wobec komórek nowotworowych przy zmniejszonej dawce. Nasze poprzednie przedsięwzięcia poświęcone poprawie biodostępności klotrimazolu w warunkach wodnych wykazały, że enkapsulacja leku w przypadku niektórych nośników polimerowych na bazie kopolimerów amfifilowych skutkowała redukcją jego selektywności, tzn. zaburzeniem efektu Warburga typowym dla klotrimazolu nieenkapsulowanego [31]. Wobec tego, zabieg mający na celu poprawę biodostępności klotrimazolu z jednoczesnym zachowaniem jego selektywności jest niezbędny.
Według wynalazku, kopolimery o topologii nieliniowej na przykładzie kopolimeru amfifilowego o topologii gwiaździstej (trzyramiennego kopolimeru) z rdzeniem z poli(eteru benzylowo-glicydylowego) lub pol i(1,2-epoksybutanu) i powłoką z poli(eteru glicerylowo-glicerylowego) oraz kopolimer z wyszczególnionym rdzeniem trzyramiennym hydrofobowym i powłoce zbudowanej z hiperrozgałęzionego poliglicydolu, przy czym hydrofilowa część jest wystarczająco odseparowana od hydrofobowego rdzenia wskutek użycia linkera przedłużającego hydrofobowe segment zbudowanego z polimeru tlenku etylenu o DPn = 30 ± 5 są odpowiednim nośnikiem klotrimazolu w środowisku wodnym prowadząc do otrzymania formulacji do wytwarzania formulacji leczniczej o selektywnym działaniu przeciwnowotworowym na przykładzie leczenia raka szyjki macicy.
Istotą wynalazku jest sposób wytwarzania formulacji leczniczej klotrimazolu zaenkapsulowanego w strukturze kopolimeru, charakteryzujący się tym, że kopolimer na bazie polieteru z hydrofobowym rdzeniem zbudowanym z poli(eteru benzylowo-glicydylowego) i hydrofilową powłoką z ugrupowaniami diolowymi z poli(eteru glicerylowo-glicerylowego) oraz klotrimazol rozpuszcza się w metanolu, roztwory miesza się ze sobą, i pozostawia w temperaturze 50°C do odparowania metanolu, po czym mieszaninę zawiesza się w dejonizowanej wodzie i przefiltrowuje się.
Korzystnie w sposobie według wynalazku po przefiltrowaniu przeprowadza się liofilizację.
Istotą wynalazku jest również sposób wytwarzania formulacji leczniczej klotrimazolu z kopolimerem amfifilowym w postaci hydrożelu, charakteryzujący się tym, że miesza się ze sobą roztwory wodne kopolimeru na bazie polieteru z hydrofobowym rdzeniem zbudowanym z poli(eteru benzylowo-glicydylowego) i hydrofilową powłoką z ugrupowaniami diolowymi z poli(eteru glicerylowo-glicerylowego) z zaenkapsulowanym klotrimazolem i kopolimerem akrylamidowym wzbogaconym w kwas borowy. Jako kwas borowy stosuje się korzystnie kwas 2-akryloamidofenyloborowy.
Istotą wynalazku jest zastosowanie formulacji leczniczej klotrimazolu enkapsulowanego w strukturze kopolimeru amfifilowego w formie roztworu wodnego, przy czym kopolimer zawiera hydrofobowy rdzeń zbudowany z poli(eteru benzylowo-glicydylowego) i hydrofilową powłokę z ugrupowaniami diolowymi z poli(eteru glicerylowo-glicerylowego), w terapii przeciwnowotworowej, korzystnie w terapii raka szyjki macicy, przy czym formulacja wykazuje selektywne działanie wobec komórek nowotworowych.
Istotą wynalazku jest zastosowanie formulacji leczniczej klotrimazolu enkapsulowanego w strukturze kopolimeru amfifilowego w formie hydrożelu, przy czym kopolimer zawiera hydrofobowy rdzeń zbudowany z poli(eteru benzylowo-glicydylowego) i hydrofilową powłokę z ugrupowaniami diolowymi z poli(eteru glicerylowo-glicerylowego) poddany usieciowaniu kopolimerem akrylamidowym wzbogaconym w kwas borowy, w terapii przeciwnowotworowej, korzystnie w terapii raka szyjki macicy, przy czym formulacja wykazuje selektywne działanie wobec komórek nowotworowych.
Istotą wynalazku jest zastosowanie formulacji leczniczej kopolimeru amfifilowego z klotrimazolem oraz nifuratelem w formie hydrożelu, przy czym kopolimer zawiera hydrofobowy rdzeń zbudowany z poli(eteru benzylowo-glicydylowego) i hydrofilową powłokę z ugrupowaniami diolowymi z poli(eteru glicerylowo-glicerylowego), który poddaje się usieciowaniu kopolimerem akrylamidowym wzbogaconym w kwas borowy, w skojarzonej terapii przeciwnowotworowej, korzystnie w terapii raka szyjki macicy, przy czym formulacja wykazuje selektywne działanie wobec komórek nowotworowych.
Zaletą rozwiązania według wynalazku jest to, że zapewnia:
(1) rozpuszczalność klotrimazolu, leku trudno rozpuszczalnego w wodzie, (2) zachowanie selektywnego działania leku wobec komórek nowotworowych oraz (3) zachowanie wysokiej efektywności przeciwnowotworowej przy obniżeniu stosowanej dawki, co w efekcie pozwoli uniknąć ogólnoustrojowych efektów ubocznych towarzyszących obecnie stosowanym terapiom przeciwnowotworowym, jak i zapobiegnie występowaniu zjawiska oporności wielolekowej, które jest jedną z głównych przyczyn niepowodzenia systemowej terapii przeciwnowotworowej.
Przeprowadzono wyczerpujące badania zmierzające do określenia struktury kopolimerów zapewniających nie tylko zwiększoną rozpuszczalność klotrimazolu w konstrukcie polimerowym, i co za tym idzie zwiększoną biodostępność leku, ale stwierdzono też, że dwukomponentowa formulacja lekowa złożona z kopolimeru oraz klotrimazolu charakteryzuje się doskonałym działaniem pod tym względem. Wykonano również badania zmierzające do określenia wyczerpującej charakterystyki kopolimerów przy użyciu spektroskopii magnetycznego rezonansu jądrowego 1D i 2D oraz formulacji kopolimer-lek z zastosowaniem spektroskopii magnetycznego rezonansu jądrowego 1D. Stwierdzono, iż w uzyskanej formulacji lek związany jest z kopolimerem na zasadzie oddziaływań niespecyficznych. Enkapsulacja leku w strukturze kopolimeru została potwierdzona przy użyciu protonowego rezonansu jądrowego oraz dynamicznego rozproszenia światła. W dodatku, badania in vitro oprócz zwiększenia biodostępności leku, potwierdziły utrzymanie jego selektywności.
Stwierdzono selektywne działanie formulacji kopolimer-lek wobec komórek nowotworowych na przykładzie komórek raka szyjki macicy HeLa (CRM-CCL-2-ATCC). Toteż oczekuje się, iż formulacja nieliniowego kopolimeru amfifilowego z klotrimazolem będzie doskonałym lekiem przeznaczonym do leczenia nowotworów na przykładzie raka szyjki macicy. W dodatku, platforma hydrożelowa wytworzona na bazie kopolimer-lek wykazuje również selektywne, przeciwnowotworowe działanie na komórki nowotworowe, co zostało przedstawione na przykładzie komórek raka szyjki macicy HeLa (CRM-CCL-2-ATCC). Zarówno wodna zawiesina kopolimeru z lekiem, jak również hydrożel wywiera oczekiwane działanie przy podaniu do komórek raka szyjki macicy. Z uzyskanych wartości IC50 jasno wynika, iż lek zaenkapsulowany w strukturze kopolimeru działa skuteczniej w porównaniu do wolnego leku, przy czym, co istotne pomimo enkapsulacji, lek zachowuje swoją selektywność wobec komórek nowotworowych z jednoczesną obniżoną toksycznością wobec komórek prawidłowych (tj. nienowotworowych HMEC-1-CRL-3243-ATCC).
PL 248983 Β1
Wynalazek zilustrowany został na schemacie 1, w przykładach wykonania 1 -9, tabelach 1 -6 oraz na rysunku, na którym:
Fig. 1 przedstawia działanie czystego hydrożelu PBGE-PGGE_1 oraz formulacji hydrożelu PBGE-PGGE_1 z klotrimazolem;
Fig. 2 przedstawia porównanie aktywności formulacji hydrożelu PBGE-PGGE_1 z klotrimazolem, z nifuratelem oraz z klotrimazolem i nifuratelem.
Struktury kopolimerów gwiaździstych z wyróżnionym rdzeniem z poli(eteru benzylowo-glicydylowego) i powłoki z poli(eteru glicerylowo-glicerylowego), na przykładzie trzyramiennego kopolimeru oraz kopolimeru o hydrofobowym rdzeniu z trzyramiennego poli(epoksybutanu) przedłużonego polimerowym linkerem z poli(tlenku etylenu) o DPn = 30 ± 5, z kowalencyjnie związaną hydrofilową powłoką zbudowaną z hiperrozgałęzionego poliglicydolu, stosowane do otrzymania formulacji kopolimer-klotrimazol zostały przedstawione na Schemacie 1.
'•-,.,Οί*
Schemat 1
Opis syntezy kopolimerów został przeprowadzony według procedury opisanej w literaturze [31-32]. Charakterystykę wytworzonych kopolimerów trzyramiennych PBGE-PGGE i PEBut-PEO-HbPGL podano w Tabeli 1.
Sposób wytwarzania formulacji amfifilowego kopolimeru z klotrimazolem oraz z inną substancją czynną na przykładzie nifuratelu, został przedstawiony odpowiednio w przykładzie 1 i przykładzie 2.
Tabela 1
Kopolimer Liczba jednostek konstytucyjnych rdzenia w przeliczeniu na ramię* Sumaryczna liczba merów powłoki (GGE lub Gl)* kopolimeru amfifilowego* M„/M„ (GPCDMf)
PEBut-PEO-HbPGL 15 jcdn. EBut 127 11 800 1,246
PBGE-PGGE 1 15 jcdn. BGE 84 20 000 1.10
PBGE-PGGE 3 15 jedn. BGE 360 60 800 1,15
*Przeliczone w oparciu o 'HNMR
Przykład 1
Rozpuszczanie klotrimazolu w strukturze nieliniowego kopolimeru amfifilowego
Przygotowano roztwór podstawowy klotrimazolu o stężeniu 5 mg/ml w metanolu. 100 mg kopolimeru amfifilowego wg Tabeli 1 rozpuszczono w 5 ml metanolu. Do roztworu kopolimeru dodano roztworu klotrimazolu w objętości w zakresie od 2,7 do 6,9 ml.
PL 248983 Β1
Roztwór kopolimeru z lekiem mieszano przez 30 min. Następnie pozostawiono do całkowitego odparowania metanolu w temperaturze 50°C. Mieszaninę polimeru z lekiem zawieszono w dwóch porcjach dejonizowanej wody po 15 ml i przesączono przez hydrofobowy filtr strzykawkowy 0,45 pm z PTFE (PureLand). Wodny roztwór zliofilizowano i ilość zaenkapsulowanego leku w strukturze kopolimeru określono na podstawie spektroskopii 1H NMR w DMSO przy użyciu wzorca wewnętrznego (dimetyloformamid). Pojemność enkapsulacji leku w strukturze nieliniowych kopolimerów amfifilowych została podana w Tabeli 2.
Tabela 2
Kopolimer Formulacja kopolimer-lek Pojemność enkapsulacji [lH£ leku/g polimeml
PEBut-PEO-HbPGL PEBut-PEO-HbPGL CLOT A 311,00
PEBut-PEO-HbPGL CLOT B 188,00
PBGE-PGGEJ PBGE-PGGE 1 CLOT A 173,04
PBGE-PGGE 1 CLOT B 58,65
PBGE-PGGE 1 CLOT C 338,76
PBGE-PGGE 1 NIF 129,70
PBGE-PGGE3 PBGE-PGGE 3 CLOT A 17.76
PBGE-PGGE 3 CLOT B 28,65
Przykład 2
Rozpuszczanie nifuratelu w strukturze nieliniowego kopolimeru amfifilowego
Przygotowano roztwór podstawowy nifuratelu o stężeniu 0,40 mg/ml w metanolu. 200 mg kopolimeru amfifilowego na bazie polieteru rozpuszczono w 10 ml metanolu. Do roztworu kopolimeru dodano roztworu nifuratelu w objętości 26 ml. Roztwór kopolimeru z lekiem mieszano przez 30 min. Następnie pozostawiono do całkowitego odparowania metanolu w temperaturze 50°C. Mieszaninę polimeru z lekiem zawieszono w dwóch porcjach dejonizowanej wody po 15 ml i przesączono przez hydrofobowy filtr strzykawkowy 0,45 pm z PTFE (PureLand). Wodny roztwór zliofilizowano i ilość zaenkapsulowanego leku w strukturze kopolimerze określono na podstawie spektroskopii 1H NMR w DMSO przy użyciu wzorca wewnętrznego (dimetyloformamid). Pojemność enkapsulacji leku w strukturze nieliniowego kopolimeru amfifilowego została podana powyżej w Tabeli 2.
Przykład 3
Wytworzenie hydrożelu na bazie formulacii kopolimer-lek o sumarycznej frakcji wagowej polimerów równej 17,25 wt% i stężeniu klotrimazolu 2,64-10-5 mola leku/q hydrożelu
Formulacja klotrimazolu z kopolimerem PBGE-PGGE_1 (0,0161 g) o wydajności załadowania 33,97 mg CLOT/g żelu, została rozpuszczona w 181 μΙ wody dejonizowanej z czystym PBGE-PGGE_1 (0,0125 g). W drugim naczyniu kopolimer poli(akrylamid-kwas-2-akrylamidofenyloborowy) o relacji molowej akrylamidu do kwasu-2-akrylamidofenyloborowego wynosił 90/10 (M = 65 600, Μ /M = 1,55) w ilości 0,042 g został rozpuszczony w 140 μΙ wody dejonizowanej. Następnie, zawartość dwóch naczyń została zmieszana, co skutkowało wytworzeniem hydrożelu. Stężenie klotrimazolu w żelu wynosiło 2,64-10-5 mola leku/g hydrożelu.
Przykład 4
Wytworzenie hydrożelu na bazie formulacii kopolimer-lek o sumarycznej frakcji wagowej polimerów równej 17,25 wt% i stężeniu nifuratelu 1,44-10-5 mola leku/g hydrożelu
Formulacja nifuratelu z kopolimerem PBGE-PGGE_1 (0,0141 g) o wydajności załadowania 35,04 mg NIF/g żelu, została rozpuszczona w 181 μΙ wody dejonizowanej z czystym PBGE-PGGE_1 (0,0125 g). W drugim naczyniu kopolimer poli(akrylamid-kwas-2-akrylamidofenyloborowy) o relacji molowej akrylamidu do kwasu-2-akrylamidofenyloborowego wynosił 90/10 (M = 65 600, M/M = 1,55) w ilości 0,042 g został rozpuszczony w 140 μΙ wody dejonizowanej. Następnie, zawartość dwóch naczyń została zmieszana, co skutkowało wytworzeniem hydrożelu. Stężenie nifuratelu wynosiło 1,44-10-5 mola leku/g hydrożelu.
Przykład 5
Wytworzenie hydrożelu na bazie formulacii kopolimer PBGE-PGGE 1-lek o sumarycznej frakcji wagowej polimerów równej 17,25 wt% i stężeniu klotrimazolu 2,88-10-5 mola leku/g hydrożelu i stężeniu nifuratelu 1,54-10-5 mola leku/g hydrożelu
PL 248983 Β1
Formulacja klotrimazolu z kopolimerem PBGE-PGGE_1 (0,0161 g) o wydajności załadowania 33,97 mg CLOT/g żelu, z formulacja nifuratelu z kopolimerem PBGE-PGGE_1 (0,0141 g) o wydajności załadowania 35,04 mg NIF/g żelu, zostały rozpuszczone w 181 μΙ wody dejonizowanej. W drugim naczyniu kopolimer poli(akrylamid-kwas-2-akrylamidofenyloborowy) o relacji molowej akrylamidu do kwasu-2-akrylamidofenyloborowego wynosił 90/10 (M = 65 600, Μ /M = 1,55) w ilości 0,042 g został rozpuszczony w 140 μΙ wody dejonizowanej. Następnie, zawartość dwóch naczyń została zmieszana, co skutkowało wytworzeniem hydrożelu. Stężenie klotrimazolu w żelu wynosiło 2,64-10-5 mola leku/g hydrożelu i stężenie nifuratelu wynosi 1,44-10-5 mola leku/g hydrożelu.
Przykład 6
Działanie roztworu wodnego formulacji leczniczej klotrimazolu i nieliniowego kopolimeru amfifilowego z wyróżnionym rdzeniem z polKeteru benzylowo-glicydylowego) i powłoka z polKeteru glicerylowo-glicerylowego) (Przykład 1) na przykładzie kopolimeru trzyramiennego polegające na selektywnym zwiększeniu śmiertelności komórek raka szyjki macicy w porównaniu do samego klotrimazolu
Komórki nowotworowe raka szyjki macicy HeLa (CRM-CCL-2-ATCC) hodowano i przesiewano w butelkach hodowlanych (Nunclon™ Delta Surface do hodowli komórek adherentnych firmy Thermo Scientific Nunc) w podłożu DMEM (11966025 firmy Gibco Thermo Scientific) uzupełnionym 10% wołową surowicą płodową (F9665 FBS Sigma-Aldrich). Komórki nienowotworowe HMEC-1 (CRL-3243 - ATCC) hodowano i przesiewano w butelkach hodowlanych (Nunclon™ Delta Surface do hodowli komórek adherentnych firmy Thermo Scientific Nunc) w podłożu MCDB 131 (10372019 firmy Gibco Thermo Scientific) uzupełnionym 10% wołową surowicą płodową (F9665 FBSSigma-Aldrich), hydrokortyzonem (1 μgml-1), L-glutaminą (10 mM) i nabłonkowym czynnikiem wzrostu (10 ng-ml-1). Komórki wysiewano na 96 dołkowe transparentne płytki w gęstości 3 χ 104 komórek na dołek. Po 24 godzinach inkubacji w odpowiednim podłożu dodawano do komórek klotrimazol oraz odpowiednie formulacje tego leku w kopolimerach, przygotowane w roztworze buforowym PBS, w zakresie stężeń od 1 μΜ do 500 μΜ. Następnie komórki inkubowano w czasie odpowiednio 24 h i 48 h.
Do tak potraktowanych komórek dodawano odczynnik MTT [bromek 3-(4,5-dimetylotiazol-2-ilo)-2,5-difenylotetrazoliowy] i prowadzono inkubację przez 3 godziny.
Dalsze postępowanie prowadzono według tak zwanej „metody MTT”, w której stosuje się kolorymetrię opartą na reakcji redukcji żółtego MTT do błękitnego formazanu, w wyniku czego uzyskuje się wartość poziomu żywotności komórek [21].
Wpływ wolnego i zaenkapsulowanego klotrimazolu w strukturze gwiaździstych kopolimerów poli(eter benzylowo-glicydylowy)-poli(eter glicerylowo-glicerylowy) na żywotność komórek raka szyjki macicy (HeLa) i nienowotworowych komórek śródbłonka mikronaczyniowego (HMEC-1) na podstawie porównania wartości ICso przedstawiono w Tabeli 3.
Tabela 3
Stężenie leku [μΜ] HeLa HMEC-1
24 h 48 h 24 h 48 h
Klotrimazol 127,42 ±7,11 97,33 ± 6,46 >500 >500
PEBut-PEOHbPGL CLOT A 78,80 ± 4,77 148,41 ± 1,68 >500 >500
PEBut-PEOHbPGL CLOT B 92,57 ± 4,35 77,31 ± 3,54 >500 202,64 ± 3,54
PBGE- PGGE 1 CLOT A 38,29 ± 6,19 16,35 ± 6,03 225,03 ± 4,45 26,58 ± 5,44
PBGEPGGE 1 CLOT B 32,74 ± 1,15 38,40 ± 3,13 228,10 ± 4.75 49,95 ± 2,82
PBGE- PGGE 3 CLOT A 49,31 ± 4,53 30,42 ± 6,02 146,74 ± 4.26 >500
PBGE- PGGE 3 CLOT B 41,14 ± 7,17 39,85 ± 6,55 219,02 ± 5,20 199,71 ± 4,55
PL 248983 Β1
Klotrimazol rozpuszczony w strukturze nieliniowych kopolimerów amfifilowych jest rozpuszczalny w środowisku wodnym, działa efektywniej na komórki raka szyjki macicy HeLa niż wolny lek i jednocześnie wykazuje obniżoną toksyczność wobec nienowotworowych komórek HMEC-1 - selektywne działanie wobec komórek nowotworowych.
Przykład 7
Działanie roztworu wodnego formulacii leczniczej klotrimazol-kopolimer P(BGE-GGE) 1 w skojarzonej terapii przeciwnowotworowej z nifuratelem (Przykład 2 i 3) polegające na selektywnym zwiększeniu śmiertelności komórek raka szyjki macicy w porównaniu do samego i zaenkapsulowanego klotrimazolu oraz w porównaniu do samego i zaenkapsulowanego nifuratelu
Komórki nowotworowe raka szyjki macicy HeLa (CRM-CCL-2 - ATCC) hodowano i przesiewano w butelkach hodowlanych (Nunclon™ Delta Surface do hodowli komórek adherentnych firmy Thermo Scientific Nunc) w podłożu DMEM (11966025 firmy Gibco Thermo Scientific) uzupełnionym 10% wołową surowicą płodową (F9665 FBS Sigma-Aldrich). Komórki nienowotworowe HMEC-1 (CRL-3243-ATCC) hodowano i przesiewano w butelkach hodowlanych (Nunclon™ Delta Surface do hodowli komórek adherentnych firmy Thermo Scientific Nunc) w podłożu MCDB 131 (10372019 firmy Gibco Thermo Scientific) uzupełnionym 10% wołową surowicą płodową (F9665 FBS Sigma-Aldrich), hydrokortyzonem (1 pg-ml·1), L-glutaminą (10 mM) i nabłonkowym czynnikiem wzrostu (10 ng-ml·1). Komórki wysiewano na 96 dołkowe transparentne płytki w gęstości 3 χ 104 komórek na dołek. Po 24 godzinach inkubacji w odpowiednim podłożu dodawano do komórek klotrimazol oraz odpowiednią formulację tego leku w kopolimerze, w i bez obecności innej biologicznie aktywnej substancji nifuratelu, przygotowane w roztworze buforowym PBS, w zakresie stężeń od 1 μΜ do 500 μΜ. Następnie komórki inkubowano w czasie odpowiednio 24 h i 48 h.
Do tak potraktowanych komórek dodawano odczynnik MTT [bromek 3-(4,5-dimetylotiazol-2-ilo)-2,5-difenylotetrazoliowy] i prowadzono inkubację przez 3 godziny.
Dalsze postępowanie prowadzono według tak zwanej „metody MTT”, w której stosuje się kolorymetrię opartą na reakcji redukcji żółtego MTT do błękitnego formazanu, w wyniku czego uzyskuje się wartość poziomu żywotności komórek [21].
Z porównania wartości ICso zestawionych w Tabeli 4 jasno wynika, iż leki zaenkapsulowane w strukturze kopolimeru działają skuteczniej w przypadku raka szyjki macicy (HeLa), natomiast ich toksyczność względem komórek nienowotworowych (HMEC-1) jest mniejsza, co oznacza, iż zastosowanie układu kopolimeru zachowuje selektywność działania charakterystyczną dla zaenkapsulowanego klotrimazolu (opisane w Przykładzie 6). Równoczesne podanie klotrimazolu i biologicznie aktywnej substancji nifuratelu, zaenkapsulowanych w strukturze kopolimerów PBGE-PGGE_1 wykazuje istotny synergizm działania tych substancji (Tabela 4). O istotnym synergizmie mówimy, gdy łączny efekt działania dwóch związkówjest wyraźnie większy od sumy efektów ich samodzielnego działania. Na podstawie wyników uzyskanych tak zwaną „metodą MTT” wyznaczono współczynnik interakcji związków CDI (ang. coefficient drug interaction) zdefiniowany jako iloraz stosunku absorbancji komórek traktowanych kombinacją dwóch związków w odniesieniu do kontroli i stosunku absorbancji komórek traktowanych pojedynczym związkiem w odniesieniu do kontroli. Wartość CDI < 0,7 wskazuje na istotny synergizm [22].
Tabela 4
Stężenie leku [μΜ] HeLa HMEC-1
24 h 48 h 24 h 48 h
Klotrimazol 127,42 ±7,11 97,33 ± 6,46 >500 >500
PBGEPGGE_1_CLOT_ C >500 286,89 ± 3,27 389,22 ± 4,75 166,07 ± 2,28
Nifuratel 339,41 ± 6,62 103,09 ± 6,84 315,47 ± 5,97 116,11 ± 5,45
PBGE- PGGE 1 NIF 6,91 ± 5,71 20,34 ± 5,24 >500 118,99 ± 2,90
PBGEPGGE_1_CLOT_ C/ PBGEPGGE 1 NIF 65,27 ± 5,53 45,58 ± 3,77 >500 123,85 ± 1,63
PL 248983 Β1
Przykład 8
Działanie hydrożelu na bazie formulacji klotrimazolu i amfifilowego kopolimeru gwiaździstego z wyróżnionym rdzeniem z polKeteru benzylowo-glicydylowego) i powłoka z polKeteru glicerylowo-glicerylowego) (Przykład 4) na przykładzie kopolimeru trzyramiennego polegające na selektywnym zwiększeniu śmiertelności komórek raka szyjki macicy
Komórki nowotworowe raka szyjki macicy HeLa (CRM-CCL-2-ATCC) hodowano i przesiewano w butelkach hodowlanych (Nunclon™ Delta Surface do hodowli komórek adherentnych firmy Thermo Scientific Nunc) w podłożu DMEM (11966025 firmy Gibco Thermo Scientific) uzupełnionym 10% wołową surowicą płodową (F9665 FBS Sigma-Aldrich). Komórki nienowotworowe HMEC-1 (CRL-3243-ATCC) hodowano i przesiewano w butelkach hodowlanych (Nunclon™ Delta Surface do hodowli komórek adherentnych firmy Thermo Scientific Nunc) w podłożu MCDB 131 (10372019 firmy Gibco Thermo Scientific) uzupełnionym 10% wołową surowicą płodową (F9665 FBS Sigma-Aldrich), hydrokortyzonem (1 pg-ml·1), L-glutaminą (10 mM) i nabłonkowym czynnikiem wzrostu (10 ng-ml·1). Komórki wysiewano na 12 dołkowe transparentne płytki, z umieszczonym separatorem ibidi (Cat.No:81176), w gęstości 3 χ 105 komórek na dołek. Po 24 godzinach inkubacji w odpowiednim podłożu dodawano do komór separatora odpowiednią formulację klotrimazolu w kopolimerze, przygotowane w roztworze buforowym PBS. Następnie komórki inkubowano w czasie 24 h. Efekty działania formulacji monitorowano pod mikroskopem Nikon ECLIPSE E200 (Fig. 1).
Jak widać na załączonych zdjęciach komórki kontrolne obu linii dzieliły się swobodnie, pokrywając wolną (po usunięciu separatora) powierzchnię na płytce. Czysty żel nie wpływał na szybkość podziałów komórek ani na ich morfologię. Zastosowanie żelu z klotrimazolem, po 24 godzinach inkubacji, prowadziło do śmierci komórek nowotworowych HeLa (martwe komórki można zaobserwować jako oderwane od podłoża kuliste kształty) i spowalniało podział komórek nienowotworowych HMEC-1 powodując śmierć mniejszej ich puli niż w przypadku komórek nowotworowych, co potwierdza selektywne działanie leku zaenkapsulowanego w hydrożelu. Porównując uzyskane wyniki z wartościami ICso z Tabeli 4 można zauważyć zwiększenie toksycznej efektywności działania leku w formie hydrożelu w porównaniu z wodnym roztworem tej formulacji względem komórek nowotworowych HeLa.
Korzystając z programu ImageJ [33] dokonano oceny powierzchni zajmowanej przez komórki i wyznaczono przyrost lub ubytek komórek spowodowany podaniem żelu z klotrimazolem. Porównując powierzchnie zajęte przez komórki zestawione w Tabeli 5 można zauważyć po 24 h hodowli (1) przyrost ilości komórek kontrolnych, niczym nie taktowanych, w linii komórek nowotworowych HeLa o 26,70%, w linii komórek nienowotworowych HMEC-1 o 64,37%, (2) przyrost ilości komórek traktowanych czystym żelem PBGE-PGGE_1 w linii HeLa o 26,10%, w linii HMEC-1 o 45,53%, oraz (3) spadek ilości komórek traktowanych hydrożelem na bazie PBGE-PGGE_1 wzbogaconym w klotrimazol w linii HeLa o 50,29%, w linii HMEC-1 o 3,31%, co świadczy (1) o braku wpływu czystego żelu na wzrost komórek oraz (2) selektywnym działaniu formulacji żelowej wzbogaconej o klotrimazol.
Tabela 5
Powierzchnia zajęta przez komórki Powierzchnia całkowita % powierzchni zajętej przez komórki w odniesieniu do powierzchni całkowitej
HeLa kontrola t = 0 h 44039,00 ± 22,16 83666,00 ± 17,10 52,64 ± 0,03
HeLa kontrola t = 24 h 57844,00 ±25,19 86733,00 ±2,17 66,69 ± 0,03
HMEG1 kontrola t = 0 h 44893,00 ± 18,78 85408,00 ± 14,20 52,56 ± 0,02
HMEC-1 kontrola t = 24 h 73163,00 ±7,53 84680,00 ± 7,26 86,40 ± 0,01
PL 248983 Β1
HeLa czysty żel t = 0 h 49752,00 ± 25,19 86216,00 ±27,57 57,71 ± 0,03
HeLa czysty żel t = 24 h 63022,00 ± 26,75 86610,00 ± 25,85 72,77 ± 0,03
HMEC-1 czysty żel t = 0 h 47970,00 ± 19,92 86217,00 ± 15,38 55,64 ± 0,02
HMEC-1 czysty żel t = 24 h 69272,00 ± 7,50 85552,00 ± 7,37 80,97 ± 0,01
HeLa żel z klotrimazolem t = 0 h 35453,00 ± 23,81 86534,00 ± 17,48 40,97 ± 0,03
HeLa żel z klotrimazolem t = 24 h 17544,00 ±24,37 86141,00 ± 19,41 20,37 ± 0,03
HMEC-1 żel z klotrimazolem t = 0 h 42344,00 ± 15,36 86139,00 ± 13,79 49,16 ± 0,02
HMEC-1 żel z klotrimazolem t = 24 h 40802,00 ± 8,52 85848,00 ± 8,45 47,53 ± 0,01
Przykład 9
Działanie hydrożelu na bazie formulacji kopolimer PBGE-PGGE-lek o różnej frakcji wagowej polimerów i stężeniu klotrimazolu i nifuratelu (Przykład 5) na przykładzie kopolimeru PBGE-PGGE polegające na selektywnym zwiększeniu śmiertelności komórek raka szyjki macicy
Komórki nowotworowe raka szyjki macicy HeLa (CRM-CCL-2-ATCC) hodowano i przesiewano w butelkach hodowlanych (Nunclon™ Delta Surface do hodowli komórek adherentnych firmy Thermo Scientific Nunc) w podłożu DMEM (11966025 firmy Gibco Thermo Scientific) uzupełnionym 10% wołową surowicą płodową (F9665 FBS Sigma-Aldrich). Komórki nienowotworowe HMEC-1 (CRL-3243-ATCC) hodowano i przesiewano w butelkach hodowlanych (Nunclon™ Delta Surface do hodowli komórek adherentnych firmy Thermo Scientific Nunc) w podłożu MCDB 131 (10372019 firmy Gibco Thermo Scientific) uzupełnionym 10% wołową surowicą płodową (F9665 FBS Sigma-Aldrich), hydrokortyzonem (1 pg-ml·1), L-glutaminą (10 mM) i nabłonkowym czynnikiem wzrostu (10 ng-ml·1). Komórki wysiewano na 12 dołkowe transparentne płytki, z umieszczonym separatorem ibidi (Cat.No:81176), w gęstości 3 x 105 komórek na dołek. Po 24 godzinach inkubacji w odpowiednim podłożu dodawano do komór separatora odpowiednią formulację klotrimazolu i nifuratelu w kopolimerze, przygotowane w roztworze buforowym PBS. Następnie komórki inkubowanowczasie4 h. Efekty działania formulacji monitorowano pod mikroskopem Nikon ECLIPSE E200 (Fig. 2).
Jak widać na załączonych zdjęciach komórki kontrolne obu linii dzieliły się swobodnie, pokrywając wolne (po usunięciu separatora) powierzchnie na płytce. Czysty żel nie wpływał na szybkość podziałów komórek ani na ich morfologię. Zastosowanie żelu z klotrimazolem czy nifuratelem, po 24 godzinach inkubacji, prowadziło do śmierci większości komórek nowotworowych HeLa (martwe komórki można zaobserwować jako oderwane od podłoża kuliste kształty) i spowalniało podział komórek nienowotworowych HMEC-1 powodując śmierć mniejszej ich puli niż w przypadku komórek nowotworowych, co
PL 248983 Β1 potwierdza selektywne działanie leku zaenkapsulowanego w hydrożelu. Zastosowanie terapii skojarzonej żelu z klotrimazolem i nifuratelem powodowało w ciągu 24 godzin inkubacji śmierć wszystkich komórek nowotworowych linii HeLa i tylko części komórek nienowotworowych linii HMEC-1. Zatem żel zawierający oba leki był bardziej cytotoksyczny dla komórek nowotworowych nienowotworowych niż nienowotworowych, co potwierdza jego selektywne działanie. Ponadto można stwierdzić, iż żel zawierający oba leki działał efektywniej niż żele zawierające pojedyncze leki a porównując wartości ICso dla wodnych formulacji (Tabela 4 (Przykład 7) również efektywniej niż jego odpowiednia wodna formulacja.
Korzystając z programu ImageJ [33] dokonano oceny powierzchni zajmowanej przez komórki i wyznaczono przyrost lub ubytek komórek spowodowany podaniem żelu z klotrimazolem, nifuratelem oraz oboma lekami. Porównując wyniki z Tabeli 6 można zauważyć po 24 h hodowli (1) przyrost ilości komórek kontrolnych, niczym nie taktowanych, w linii komórek nowotworowych HeLa o 26,70%, w linii komórek nienowotworowych HMEC-1 o 64,37%, (2) spadek ilości komórek traktowanych hydrożelem na bazie PBGE-PGGE_1 wzbogaconym w klotrimazol w linii HeLa o 50,29%, w linii HMEC-1 o 3,31%, (3) spadek ilości komórek traktowanych hydrożelem na bazie PBGE-PGGE_1 wzbogaconym w nifuratel w linii HeLa o 52,10%, wzrost w linii HMEC-1 o 73,30%, (2) spadek ilości komórek traktowanych hydrożelem na bazie PBGE-PGG_1 wzbogaconym w oba leki w linii HeLa o 99,43%, wzrost w linii HMEC-1 o 9,36%, co świadczy (1) selektywnym działaniu formulacji żelowej wzbogaconej o klotrimazol, nifuratel i na leki oraz (2) o zwiększeniu efektywności działania żelu wzbogaconego o oba leki w porównaniu z żelami zawierającymi pojedyncze leki.
Tabela 6
Powierzchnia zajęta przez komórki Powierzchnia całkowita % powierzchni zajętej przez komórki w odniesieniu do powierzchni całkowitej
HeLa kontrola t = 0 h 44039,00 ± 22,16 83666,00 ± 17,10 52,64 ± 0,03
HeLa kontrola t = 24 h 57844,00 ±25,19 86733,00 ±2,17 66,69 ± 0,03
HMEC-1 kontrola t = 0 h 44893,00 ± 18,78 85408,00 ± 14,20 52,56 ± 0,02
HMEC-1 kontrola t = 24 h 73163,00 ±7,53 84680,00 ± 7,26 86,40 ± 0,01
HeLa czysty żel t = 0 h 49752,00 ±25,19 86216,00 ±27,57 57,71 ± 0,03
HeLa czysty żel t = 24 h 63022,00 ± 26,75 86610,00 ± 25,85 72,77 ± 0,03
HMEC-1 czysty żel t = 0 h 47970,00 ± 19,92 86217,00 ± 15,38 55,64 ± 0,02
HMEC-1 czysty żel t = 24 h 69272,00 ± 7,50 85552,00 ± 7,37 80,97 ± 0,01
HeLa żel z klotrimazolem t = 0 h 35453,00 ± 23,81 86534,00 ± 17,48 40,97 ± 0,03
PL 248983 Β1
HeLa żel z klotrimazolem t = 24 h 17544,00 + 24,37 86141,00+ 19,41 20,37 ± 0,03
HMEC-1 żel z klotrimazolem t = 0 h 42344,00 ± 15,36 86139,00+ 13,79 49,16 ± 0,02
HMEC-1 żel z klotrimazolem t = 24 h 40802,00 ± 8,52 85848,00 + 8,45 47,53 ± 0,01
HeLa żel z nifuratelem t = 0 h 45241,00 ± 22,86 85705,00 ± 20,52 52,79 ± 0,03
HeLa żel z nifuratelem t = 24 h 21748,00 ± 31,15 86013,00 ± 27,36 25,28 ± 0,04
HMEC-1 żel z nifuratelem t = 0 h 42380,00 ± 20,21 85955,00 ± 17,52 49,30 ± 0,02
HMEC-1 żel z nifuratelem t = 24 h 73103,00 ± 16,26 85556,00 ± 18,61 85,44 ± 0,02
HeLa żel z klotrimazolem i nifuratelem t = 0 h 43878,00 ± 23,02 87320,00 ± 21,49 50,25 ± 0,03
HeLa żel z klotrimazolem i nifuratelem t = 24 h 244,00 ± 20,83 85904,00 ± 34,96 0,28 ± 0,02
HMEC-1 żel z klotrimazolem i nifuratelem t = 0 h 39848,00 ± 20,48 86142,00 ± 15,86 46,26 ± 0,02
HMEC-1 żel z klotrimazolem i nifuratelem t = 24 h 43132,00 ± 12,47 85264,00 ± 12,12 50,59 ± 0,01
Literatura
1. Koh, W. J.; Abu-Rustum, N. R.; Bean, S.; Bradley, K.; Campos, S. M.; Cho, K. R.; Chon, H. S.; Chu, C.; Clark, R.; Cohn, D.; Crispens, M. A.; Damast, S.; Dorigo, O.; Eifel, P. J.; Fisher, C. M.; Frederick, P.; Gaffney, D. K.; Han, E.; Huh, W. K.; Lurain, J. R.; Mariani, A.; Mutch, D.; Nagel, C.; Nekhlyudov, L.; Fader, A. N.; Remmenga, S. W.; Reynolds, R. K.; Tillmanns, T.; Lieda, S.; Wyse, E.; Yashar, C. M.; McMillian, N. R.; Scavone, J. L., Cervical Cancer, Version 3.2019, NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology. J Natl Compr Canc Netw 2019, 17 (1), 64-84.
2. Luo, C. L.; Liu, Y. Q.; Wang, P.; Song, C. H.; Wang, K. L; Dai, L. P.; Zhang, J. YYe, H„ The effect of quercetin nanoparticle on cervical cancer progression by inducing apoptosis, autophagy and anti-proliferation via JAK2 suppression. Biomed Pharmacother 2016, 82, 595-605.
3. Li, F. F.; Zhao, C. Q.; Wang, L. L., Molecular-targeted agents combination therapy for cancer: Developments and potentials. Int J Cancer 2014,134 (6), 1257-1269.
4. Rosen, V. M.; Guerra, I.; McCormack, M.; Nogueira-Rodrigues, A.; Sasse, A.; Munk, V. C.; Shang, A. J., Systematic Review and Network Meta-Analysis of Bevacizumab Plus First-Line Topotecan-Paclitaxel or Cisplatin-Paclitaxel Versus Non-YBevacizumab-Containing Therapies in Persistent, Recurrent, or Metastatic Cervical Cancer. Int J Gynecol Cancer 2017, 27 (6), 1237-1246.
5. Wang, J. J., Combination Treatment of Cervical Cancer Using Folate-Decorated, pH-Sensitive, Carboplatin and Paclitaxel Co-Loaded Lipid-Polymer Hybrid Nanoparticles. Drug Des Dev Ther2020, 14, 823-832.
6. https://www. cancer.gov/about-cancer/treatment/drugs/cervical#2,
7. Ramzy, L.; Nasr, M.; Metwally, A. A.; Awad, G. A. S., Cancer nanotheranostics: A review of the role of conjugated ligands for overexpressed receptors. Eur J Pharm Sci 2017,104, 273-292.
8. Wang, C. W.; Chen, C. L.; Wang, C. K.; Chang, Y. J.; Jian, J. Y.; Lin, C. S.; Tai, C. J.; Tai, C. J., Cisplatin-, Doxorubicin-, and Docetaxel-Induced Cell Death Promoted by the Aqueous Extract of Solanum nigrum in Human Ovarian Carcinoma Cells. Integr Cancer Ther 2015, 14 (6), 546-555.
9. Fung-Kee-Fung, M.; Oliver, T.; Elit, L.; Oza, A.; Hirte, H. W.; Bryson, P., Optimal chemotherapy treatment for women with recurrent ovarian cancer. Curr Oncol 2007, 14 (5), 195-208.
10. Coleman, R. L.; Monk, B. J.; Sood, A. K.; Herzog, T. J., Latest research and treatment of advanced-stage epithelial ovarian cancer. Nat Rev Clin Oncol 2013, 10(4), 211-24.
11. Sangrajrang, S.; Fellous, A., Taxol resistance. Chemotherapy 2000, 46(5), 327-24.
12. Shen, D. W.; Pouliot, L. M.; Hall, M. D.; Gottesman, M. M., Cisplatin resistance: a cellular self-defense mechanism resulting from multiple epigenetic and genetic changes. Pharmacol Rev 2012, 64(3), 706-21.
13. Ranasinghe, R.; Mathai, M. L.; Zulli, A., Cisplatin for cancer therapy and overcoming chemoresistance. Heliyon 2022, 8(9), e10608.
14. Esparza-Lopez, J.; Longoria, O.; De la Cruz-Escobar, E. N.; Garibay-Diaz, J. C.; Leon-Rodriguez, E.; Ibarra-Sanchez, M. D., Paclitaxel resistance is mediated by NF- kappa B on mesenchymal primary breast cancer cells. Oncol Lett 2022, 23(2).
15. Klejewski, A.; Swierczewska, M.; Zaorska, K.; Brazert, M.; Nowicki, M.; Zabel, M.; Januchowski, R., New and Old Genes Associated with Topotecan Resistance Development in Ovarian Cancer Cell Lines. Anticancer Res 2017, 37(4), 1625-1636.
16. Zhou, J. B.; Kang, Y.; Chen, L.; Wang, H.; Liu, J. Q.; Zeng, S.; Yu, L. S., The Drug-Resistance Mechanisms of Five Platinum-Based Antitumor Agents. Front Pharmacol 2020, 11.
17. Aktas, H.; Fluckiger, R.; Acosta, J. A.; Savage, J. M.; Palakurthi, S. S.; Halperin, J. A., Depletion of intracellular Ca2+ stores, phosphorylation of eIF2alpha, and sustained inhibition of translation initiation mediate the anticancer effects of clotrimazole. Proc Natl Acad Sci USA 1998, 95 (14), 8280-5.
18. Burgess, M. A.; Bodey, G. P., Clotrimazole (Bay b 5097): in vitro and clinical pharmacological studies. Antimicrob Agents Chemother 1972, 2(6), 423-6.
19. Saadatfar, F.; Shayanfar, A.; Rahimpour, E.; Barzegar-Jalali, M.; Martinez, F.; Bolourtchian, M.; Jouyban, A., Measurement and correlation of clotrimazole solubility in ethanol plus water mixtures at T = (293.2 to 313.2) K. J Mol Liq 2018, 256, 527-532.
20. Kareem, F.; Bhayo, A. M.; Imran, M.; Shah, M. R.; Khan, K. M.; Malik, M. I., Enhanced therapeutic efficacy of clotrimazole by delivery through polyethylene oxide)- block-poly(epsilon-caprolactone) copolymer-based micelles. J Appl Polym Sci 2019, 136(28).
21. Penso, J.; Beitner, R., Detachment of glycolytic enzymes from cytoskeleton of Lewis lung carcinoma and colon adenocarcinoma cells induced by clotrimazole and its correlation to cell viability and morphology. Mol Genet Metab 2002, 76(3), 181-188.
22. Penso, J.; Beitner, R., Clotrimazole and bifonazole detach hexokinase from mitochondria of melanoma cells. Eur J Pharmacol 1998, 342(1), 113-7.
23. Hegemann, L.; Toso, S. M.; Lahijani, K. I.; Webster, G. F.; Uitto, J., Direct Interaction of Antifungal Azole-Derivatives with Calmodulin - a Possible Mechanism for Their Therapeutic Activity. J Invest Dermatol 1993,100 (3), 343-346.
24. Marinho-Carvalho, M. M.; Zancan, P.; Sola-Penna, M., Modulation of 6-phosphofructo-1-kinase oligomeric equilibrium by calmodulin: Formation of active dimmers. Mol Genet Metab 2006, 87(3), 253-261.
25. Fauvel, B.; Yasri, A., Antibodies directed against receptor tyrosine kinases. Current and future strategies to fight cancer. Mabs-Austin 2014, 6(4), 838-851.
26. Parks, S. K.; Chiche, J.; Pouyssegur, J., Disrupting proton dynamics and energy metabolism for cancer therapy. Nat Rev Cancer 2013, 13(9), 611-623.
27. Warburg, O., Origin of Cancer Cells. Science 1956, 123 (3191), 309-314.
28. Furtado, C. M.; Marcondes, M. C.; Sola-Penna, M.; de Souza, M. L. S.; Zancan, P., Clotrimazole Preferentially Inhibits Human Breast Cancer Cell Proliferation, Viability and Glycolysis. Plos One 2012, 7(2).
29. Prabagar, B.; Yoo, B. K.; Woo, J. S.; Kim, J. A.; Rhee, J. D.; Piao, M. G.; Choi, H. G.; Yong, C. S., Enhanced bioavailability of poorly water-soluble clotrimazole by inclusion with betacyclodextrin. Arch Pharm Res 2007, 30(2), 249-254.
30. Porras, G. O. R.; Nogueda, J. C.; Chacon, A. P., Chemotherapy and molecular therapy in cervical cancer. Rep Pract Oncol Radi 2018, 23 (6), 533-539.
31. Gosecki, M.; Ziemczonek, P.; Gosecka, M.; Urbaniak, M.; Wielgus, E.; Marcinkowska, M.; Janaszewska, A.; Klajnert-Maculewicz, B., Cross-linkable star-hyperbranched unimolecular micelles for the enhancement of the anticancer activity of clotrimazole. J Mater Chem B 2023.
32. M. Gosecka, M. G., M. Urbaniak, b. Klajnert-Maculewicz, A. Janaszewska, M. Marcinkowska, Sposób wytwarzania kopolimeru amfifilowego, jego formulacji leczniczej oraz jej zastosowanie. 2023, 356182.
33. Schneider, C. A.; Rasband, W. S.; Eliceiri, K.W.; NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nature Method. 2012, 9(7), 671-5.

Claims (7)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Sposób wytwarzania formulacji leczniczej klotrimazolu zaenkapsulowanego w strukturze kopolimeru, znamienny tym, że kopolimer na bazie polieteru z hydrofobowym rdzeniem zbudowanym z poli(eteru benzylowo-glicydylowego) i hydrofilową powłoką z ugrupowaniami diolowymi z poli(eteru glicerylowo-glicerylowego) oraz klotrimazol rozpuszcza się w metanolu, roztwory miesza się ze sobą, i pozostawia w temperaturze 50°C do odparowania metanolu, po czym mieszaninę zawiesza się w dejonizowanej wodzie i przefiltrowuje się.
  2. 2. Sposób wytwarzania formulacji leczniczej klotrimazolu zaenkapsulowanego w strukturze kopolimeru według zastrz. 1, znamienny tym, że po przefiltrowaniu przeprowadza się liofilizację.
  3. 3. Sposób wytwarzania formulacji leczniczej klotrimazolu z kopolimerem amfifilowym w postaci hydrożelu, znamienny tym, że miesza się ze sobą roztwory wodne kopolimeru na bazie polieteru z hydrofobowym rdzeniem zbudowanym z poli(eteru benzylowo-glicydylowego) i hydrofilową powłoką z ugrupowaniami diolowymi z poli(eteru glicerylowo-glicerylowego) z zaenkapsulowanym klotrimazolem i kopolimerem akrylamidowym wzbogaconym w kwas borowy.
  4. 4. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że jako kwas borowy stosuje się kwas 2-akryloamidofenyloborowy.
  5. 5. Formulacja lecznicza klotrimazolu enkapsulowanego w strukturze kopolimeru amfifilowego w formie roztworu wodnego, przy czym kopolimer zawiera hydrofobowy rdzeń zbudowany z poli(eteru benzylowo-glicydylowego) i hydrofilową powłokę z ugrupowaniami diolowymi z poli(eteru glicerylowo-glicerylowego) do zastosowania w terapii przeciwnowotworowej, korzystnie w terapii raka szyjki macicy, przy czym formulacja wykazuje selektywne działanie wobec komórek nowotworowych.
  6. 6. Formulacja lecznicza klotrimazolu enkapsulowanego w strukturze kopolimeru amfifllowego w formie hydrożelu, przy czym kopolimer zawiera hydrofobowy rdzeń zbudowany z poli(eteru benzylowo-glicydylowego) i hydrofilową powłokę z ugrupowaniami diolowymi z poli(eteru glicerylowo-glicerylowego) poddany usieciowaniu kopolimerem akrylamidowym wzbogaconym w kwas borowy, do zastosowania w terapii przeciwnowotworowej, korzystnie w terapii raka szyjki macicy, przy czym formulacja wykazuje selektywne działanie wobec komórek nowotworowych.
  7. 7. Formulacja lecznicza kopolimeru amfifilowego z klotrimazolem oraz nifuratelem w formie hydrożelu, przy czym kopolimer zawiera hydrofobowy rdzeń zbudowany z poli(eteru benzylowo-glicydylowego) i hydrofilową powłokę z ugrupowaniami diolowymi z poli(eteru glicerylowo-glicerylowego), który poddaje się usieciowaniu kopolimerem akrylamidowym wzbogaconym w kwas borowy do stosowania w skojarzonej terapii przeciwnowotworowej, korzystnie w terapii raka szyjki macicy, przy czym formulacja wykazuje selektywne działanie wobec komórek nowotworowych.
PL445173A 2023-06-07 2023-06-07 Sposób wytwarzania formulacji leczniczej klotrimazolu z amfifilowym kopolimerem i jej zastosowanie w terapii przeciwnowotworowej i skojarzonej terapii przeciwnowotworowej z nifuratelem PL248983B1 (pl)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL445173A PL248983B1 (pl) 2023-06-07 2023-06-07 Sposób wytwarzania formulacji leczniczej klotrimazolu z amfifilowym kopolimerem i jej zastosowanie w terapii przeciwnowotworowej i skojarzonej terapii przeciwnowotworowej z nifuratelem
PCT/PL2024/050039 WO2024253550A1 (en) 2023-06-07 2024-06-07 The method of preparation of the medicinal formulation of clotrimazole with amphiphilic copolymer and its application in anticancer therapy and combined anticancer therapy with nifuratel.

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL445173A PL248983B1 (pl) 2023-06-07 2023-06-07 Sposób wytwarzania formulacji leczniczej klotrimazolu z amfifilowym kopolimerem i jej zastosowanie w terapii przeciwnowotworowej i skojarzonej terapii przeciwnowotworowej z nifuratelem

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL445173A1 PL445173A1 (pl) 2024-12-09
PL248983B1 true PL248983B1 (pl) 2026-02-16

Family

ID=92295479

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL445173A PL248983B1 (pl) 2023-06-07 2023-06-07 Sposób wytwarzania formulacji leczniczej klotrimazolu z amfifilowym kopolimerem i jej zastosowanie w terapii przeciwnowotworowej i skojarzonej terapii przeciwnowotworowej z nifuratelem

Country Status (2)

Country Link
PL (1) PL248983B1 (pl)
WO (1) WO2024253550A1 (pl)

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009123934A2 (en) * 2008-03-29 2009-10-08 Emory University Branched multifunctional nanoparticle conjugates and their use

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GOSECKA M, JAWORSKA-KRYCH D, GOSECKI M, WIELGUS E, MARCINKOWSKA M, JANASZEWSKA A, KLAJNERT-MACULEWICZ B: "Biomacromolecules. 2022 Oct 10;23(10):4203-4219", SELF-HEALABLE, INJECTABLE HYDROGEL WITH ENHANCED CLOTRIMAZOLE SOLUBILIZATION AS A POTENTIAL THERAPEUTIC PLATFORM FOR GYNECOLOGY, DOI: 10.1021/acs.biomac.2c00691. Epub 2022 Sep 7 *
GOSECKI M, ZIEMCZONEK P, GOSECKA M, URBANIAK M, WIELGUS E, MARCINKOWSKA M, JANASZEWSKA A, KLAJNERT-MACULEWICZ B: "Journal of Materials Chemistry B 2023, 11, 5552-5564", CROSS-LINKABLE STAR-HYPERBRANCHED UNIMOLECULAR MICELLES FOR THE ENHANCEMENT OF THE ANTICANCER ACTIVITY OF CLOTRIMAZOLE, DOI: https://doi.org/10.1039/D2TB02629E Publ. 21 Feb 2023 *
Y.G. BACHHAV 1, K. MONDON 1, Y.N. KALIA, R. GURNY, M. MÖLLER: "Journal of Controlled Release 153 (2011) 126–132", NOVEL MICELLE FORMULATIONS TO INCREASE CUTANEOUS BIOAVAILABILITY OF AZOLE ANTIFUNGALS *
ZIEMCZONEK, P.; GOSECKA, M.; GOSECKI, M.; MARCINKOWSKA, M.; JANASZEWSKA, A.; KLAJNERT-MACULEWICZ, B.: "Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, No. 8386", STAR-SHAPED POLY(FURFURYL GLYCIDYL ETHER)-BLOCK-POLY(GLYCERYL GLYCEROL ETHER) AS AN EFFICIENT AGENT FOR THE ENHANCEMENT OF NIFURATEL SOLUBILITY AND FOR THE FORMATION OF INJECTABLE AND SELF-HEALABLE HYDROGEL PLATFORMS FOR THE GYNAECOLOGICAL THERAPIES *

Also Published As

Publication number Publication date
PL445173A1 (pl) 2024-12-09
WO2024253550A1 (en) 2024-12-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Li et al. Exosome-liposome hybrid nanoparticle codelivery of TP and miR497 conspicuously overcomes chemoresistant ovarian cancer
Hong et al. Improving the anticancer effect of afatinib and microRNA by using lipid polymeric nanoparticles conjugated with dual pH-responsive and targeting peptides
Shi et al. Dual drugs (microRNA-34a and paclitaxel)-loaded functional solid lipid nanoparticles for synergistic cancer cell suppression
Yu et al. Smart doxorubicin nanoparticles with high drug payload for enhanced chemotherapy against drug resistance and cancer diagnosis
Hasegawa et al. Intracellular targeting of the oncogenic MUC1-C protein with a novel GO-203 nanoparticle formulation
Andey et al. Cationic lipid guided short-hairpin RNA interference of annexin A2 attenuates tumor growth and metastasis in a mouse lung cancer stem cell model
Zhu et al. Glycyrrhetinic acid-modified TPGS polymeric micelles for hepatocellular carcinoma-targeted therapy
Vartak et al. Susceptibility of lung carcinoma cells to nanostructured lipid carrier of ARV-825, a BRD4 degrading proteolysis targeting chimera
Jia et al. Self-assembled fluorescent hybrid nanoparticles-mediated collaborative lncRNA CCAT1 silencing and curcumin delivery for synchronous colorectal cancer theranostics
Yang et al. Enhancing the therapeutic effect via elimination of hepatocellular carcinoma stem cells using Bmi1 siRNA delivered by cationic cisplatin nanocapsules
Tu et al. miRNA-218-loaded carboxymethyl chitosan-Tocopherol nanoparticle to suppress the proliferation of gastrointestinal stromal tumor growth
Wang et al. Magnolol-loaded cholesteryl biguanide conjugate hydrochloride nanoparticles for triple-negative breast cancer therapy
Cheriyan et al. A CARP-1 functional mimetic loaded vitamin E-TPGS micellar nano-formulation for inhibition of renal cell carcinoma
Kim et al. Theranostic potential of biodegradable polymeric nanoparticles with paclitaxel and curcumin against breast carcinoma
Bariwal et al. Nanoparticulate delivery of potent microtubule inhibitor for metastatic melanoma treatment
Lv et al. A polymeric nanocarrier that eradicates breast cancer stem cells and delivers chemotherapeutic drugs
Li et al. Combinatorial miRNA-34a replenishment and irinotecan delivery via auto-fluorescent polymeric hybrid micelles for synchronous colorectal cancer theranostics
Vahedi et al. Synergistic anticancer effects of co-delivery of linc-RoR siRNA and curcumin using polyamidoamine dendrimers against breast cancer
Fang et al. Enhanced lymphatic delivery of nanomicelles encapsulating CXCR4-recognizing peptide and doxorubicin for the treatment of breast cancer
Fang et al. ZEB1 knockdown mediated using polypeptide cationic micelles inhibits metastasis and effects sensitization to a chemotherapeutic drug for cancer therapy
US9415011B1 (en) Method for treatment of liver cancer and inhibition of metastasis with CXC-chemokine-receptor 4-targeted nanoparticle
KR102407261B1 (ko) 나노 항암제형 및 그 제조 방법
Riehle et al. Combination Nanopreparations of a Novel Proapoptotic Drug–NCL-240, TRAIL and siRNA: Riehle et al.
PL248983B1 (pl) Sposób wytwarzania formulacji leczniczej klotrimazolu z amfifilowym kopolimerem i jej zastosowanie w terapii przeciwnowotworowej i skojarzonej terapii przeciwnowotworowej z nifuratelem
Pina et al. Transferrin Receptor 1-targeted polymersomes therapy for Colorectal Cancer