PL242128B1 - Sposób oceny skuteczności sterylizacji radiacyjnej opakowań - Google Patents
Sposób oceny skuteczności sterylizacji radiacyjnej opakowań Download PDFInfo
- Publication number
- PL242128B1 PL242128B1 PL435262A PL43526220A PL242128B1 PL 242128 B1 PL242128 B1 PL 242128B1 PL 435262 A PL435262 A PL 435262A PL 43526220 A PL43526220 A PL 43526220A PL 242128 B1 PL242128 B1 PL 242128B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- test
- microorganisms
- packaging
- package
- radiation
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 56
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 title claims abstract description 51
- 230000005855 radiation Effects 0.000 title claims abstract description 50
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 title claims abstract description 50
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 59
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 46
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 35
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 claims description 28
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 20
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 19
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 18
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 18
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 14
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 14
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 12
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 5
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 claims description 4
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 claims description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 2
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 claims 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 12
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 12
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 11
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 6
- 238000011169 microbiological contamination Methods 0.000 description 6
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 3
- 241001225321 Aspergillus fumigatus Species 0.000 description 3
- 241001149955 Cladosporium cladosporioides Species 0.000 description 3
- 241000985530 Penicillium glabrum Species 0.000 description 3
- 241000192087 Staphylococcus hominis Species 0.000 description 3
- 229940091771 aspergillus fumigatus Drugs 0.000 description 3
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 3
- 229940094461 penicillium glabrum Drugs 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 2
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 2
- 241000192091 Deinococcus radiodurans Species 0.000 description 2
- 241001360526 Escherichia coli ATCC 25922 Species 0.000 description 2
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 2
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000187180 Streptomyces sp. Species 0.000 description 2
- 241001148470 aerobic bacillus Species 0.000 description 2
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012009 microbiological test Methods 0.000 description 2
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 2
- 241001156739 Actinobacteria <phylum> Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 1
- 241000579711 Deinococcus radiopugnans Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 description 1
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 description 1
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 description 1
- 244000203593 Piper nigrum Species 0.000 description 1
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 208000034809 Product contamination Diseases 0.000 description 1
- FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)-6-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5,6-trinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-3,5-dinitrooxy-6-(nitrooxymethyl)oxan-4-yl] nitrate Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O1)O[N+]([O-])=O)CO[N+](=O)[O-])[C@@H]1[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O[C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000009455 aseptic packaging Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012263 liquid product Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000006385 ozonation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000013094 purity test Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/22—Testing for sterility conditions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/02—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor using physical phenomena
- A61L2/08—Radiation
- A61L2/081—Gamma radiation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Wynalazek dotyczy sposobu oceny skuteczności sterylizacji radiacyjnej opakowań w oparciu o przeżywalność endemicznych mikroorganizmów testowych, wyizolowanych ze środowiska produkcyjnego.
Description
Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy sposobu oceny skuteczności sterylizacji radiacyjnej opakowań, w szczególności opakowań typu bag in box.
W procesie produkcji opakowań typu bag in box, przeznaczonych do przechowywania żywności, jednym z kluczowych problemów jest eliminacja zanieczyszczeń mikrobiologicznych. Opakowanie typu bag in box stanowi kombinacja opakowania foliowego i kartonowego, przeznaczona do pakowania i przechowywania różnorakich produktów płynnych i półpłynnych. Ze względu na specyfikę tego typu opakowań rutynowo wykorzystuje się sterylizację metodą radiacyjną. Proces sterylizacji powinien być regularnie walidowany ze względu na ryzyko związane z potencjalną obecnością mikroorganizmów w gotowym produkcie, co może stanowić duży problem dla producenta (np. likwidacja całej partii materiału skażonego mikrobiologicznie), a nawet ryzyko zdrowotne dla konsumentów.
Znane sposoby weryfikacji skuteczności sterylizacji radiacyjnej bazują na zastosowaniu organizmów wskaźnikowych, w szczególności o wysokiej odporności na promieniowanie. Z opisu KR101312613B1 znane jest zastosowanie biologicznego wskaźnika skuteczności sterylizacji radiacyjnej wybranego spośród Deinococcus radiodurans, Deinococcus radiopugnans lub rekombinowanego Deinococcus radiodurans z powodu ich wysokiej odporności na promieniowanie. W opisie ujawniono sposób oceny skuteczności sterylizacji polegający na umieszczeniu fiolki z liofilizowanymi mikroorganizmami w różnej odległości od źródła promieniowania, a następnie kultywacji zawartości fiolek na płytkach.
US8945837 opisuje wskaźnik sterylizacji, który zawiera pierwszy przedział z genetycznie modyfikowanym wskaźnikiem biologicznym i drugi przedział, zawierający substrat. Wskaźnik biologiczny zawiera gen, odpowiedni do wytwarzania enzymu wskaźnikowego z substratu z drugiego przedziału. Enzym wskaźnikowy i substrat enzymu są dobrane tak, że działanie enzymu wskaźnikowego na substrat daje wykrywalny sygnał. Po procesie sterylizacji kontaktuje się zawartość pierwszego przedziału z zawartością drugiego przedziału. Braku sygnału potwierdza skuteczność procesu sterylizacji.
US6942989 opisuje sposób oceny żywotności sporów po procesie sterylizacji przy użyciu techniki wielokątowego rozpraszania światła (ang. ultiangle light scattering - MALS), przy użyciu sporów B. subtilis i B. stearothermophilus. Po procesie sterylizacji ocenia się różnicę między sporami poddanymi sterylizacji i sporami kontrolnymi.
Z opisu WO2019215748A1 znany jest system i sposób sterylizacji i pakowania urządzenia medycznego. Sposób sterylizacji opiera się na zastosowaniu roztworu do sterylizacji, natomiast urządzenie medyczne jest w szczególności stentem i cewnikiem balonowym. Sposób sterylizacji i pakowania urządzenia medycznego polega na dwustopniowej sterylizacji, przy czym sterylizacja wstępna obejmuje sterylizację urządzenia roztworem do sterylizacji, natomiast sterylizacja końcowa obejmuje sterylizację urządzenia w pojemniku i opakowaniu np. przy użyciu gazu np. tlenku etylenu.
Z kolei patent EP2465544B1 ujawnia urządzenie do weryfikacji sterylizacji radiacyjnej, które bazuje na zastosowaniu co najmniej jednego dozymetru. W dokumencie ujawniono również, że dawka promieniowania w miejscu wskaźnikowym może nie być równa dawce w miejscu sterylizacji, dlatego należy wyznaczyć korelację między dawkami w obu miejscach.
Z opisu EP EP1708759A1 znane są sposób i urządzenie do sprawdzania dostarczanej dawki promieniowania w celu uzyskania sterylizacji komponentów, takich jak urządzenia medyczne. Urządzenie bazuje na zastosowaniu dozymetru, natomiast w przedmiotowym sposobie wyznacza się minimalną dawkę promieniowania, zapewniającą pożądany poziom zapewnienia sterylności (SAL), a następnie ustala się korelację między dawką promieniowania, dostarczoną w miejscu umieszczenia dozymetru, a dawką promieniowania w pożądanym miejscu. Na podstawie tej korelacji można następnie wyznaczać dawkę promieniowania, dostarczoną do konkretnego miejsca na podstawie zmierzonej przez dozymetr dawki, w miejscu jego umieszczenia.
Z opisu JPH0523377A znany jest sposób wytwarzania sterylnej gazy, która jest stosowana jako wyrób medyczny. Gazę pakuje się w materiał opakowaniowy, a następnie poddaje się sterylizacji promieniowaniem, np. promieniowaniem gamma. W celu weryfikacji sterylizacji można zastosować bakterie wskaźnikowe, które są znane ze swojej odporności na promieniowanie oraz dozymetr.
Ujawnione w odnalezionych dokumentach sposoby bazują w większości na wykorzystaniu wskaźników biologicznych lub urządzeń pomiarowych (dozymetrów), które wykluczają identyfikację rzeczywistego źródła zanieczyszczenia produktu. Zastosowanie wskaźników pokazuje jedynie jak dany organizm wskaźnikowy reaguje na dany sposób sterylizacji, natomiast nie uwzględnia faktu, że populację mikroorganizmów, występujących w obszarze produkcyjnym, charakteryzuje duża dynamika zmian, mają one odmienne źródła pochodzenia, różne właściwości i mogą się charakteryzować nabyciem wysokiej odporności na promieniowanie. Ponadto populacje mikroorganizmów endemicznych mogą się różnić w zależności od środowiska produkcji. Cytowane powyżej sposoby weryfikacji sterylizacji radiacyjnej, bazujące na zastosowaniu wskaźników, nie uwzględniają potencjalnego ryzyka dla powodzenia sterylizacji radiacyjnej ze strony populacji mikroorganizmów endemicznych, występujących w danym obszarze produkcyjnym.
Celem wynalazku było opracowanie nowego sposobu oceny skuteczności procesu radiacji w oparciu o przeżywalność endemicznych mikroorganizmów testowych, wyizolowanych ze środowiska produkcyjnego - powietrza, powierzchni roboczych i ścian zakładu produkcyjnego i materiałów używanych do produkcji opakowań np. folii i korków.
Sposób oceny skuteczności sterylizacji radiacyjnej opakowań, w szczególności opakowań typu bag in box, według wynalazku zawiera następujące kroki:
a) pobranie co najmniej jednej próbki materiału mikrobiologicznego z co najmniej fragmentu powierzchni opakowania przeznaczonego do sterylizacji radiacyjnej i/albo z powietrza wewnątrz zakładu produkcyjnego opakowań i/albo z co najmniej jednej powierzchni wewnątrz zakładu produkcyjnego opakowań, przy czym powierzchnia wewnątrz zakładu produkcyjnego opakowań jest wybrana spośród powierzchni ścian, podłóg, sufitu i powierzchni roboczych wewnątrz zakładu produkcyjnego opakowań,
b) przeniesienie materiału mikrobiologicznego pobranego w kroku a) na co najmniej jedno podłoże, odpowiednie do hodowli bakterii i/albo grzybów, oraz hodowla pobranego materiału mikrobiologicznego w celu uzyskania endemicznych mikroorganizmów zakładu produkcyjnego, należących do bakterii i/albo grzybów,
c) wyizolowanie czystych kultur endemicznych mikroorganizmów zakładu produkcyjnego, spośród wyhodowanych kolonii, które dominowały wśród endemicznych mikroorganizmów zakładu produkcyjnego, otrzymanych w kroku b)
d) identyfikacja przynależności systematycznej wyizolowanych czystych kultur endemicznych mikroorganizmów zakładu produkcyjnego z kroku c) oraz wybór od 3 do 10 izolatów spośród czystych kultur endemicznych mikroorganizmów zakładu produkcyjnego, które są znane jako biologicznie szkodliwe lub stwarzają potencjalne zagrożenie dla produktów na podstawie ich przynależności systematycznej
e) przygotowanie co najmniej pięciu zestawów testowych, przy czym pojedynczy zestaw testowy przygotowuje się poprzez przeniesienie na wspólne podłoże testowe, stanowiące wodę zestaloną agarem, co najmniej trzech izolatów wybranych w kroku d), przy czym pojedyncze wspólne podłoże testowe zawiera wszystkie wybrane izolaty, tworząc zestaw testowy
f) umieszczenie co najmniej pięciu zestawów testowych we wnętrzu opakowania zbiorczego, zawierającego co najmniej jedno opakowanie przeznaczone do sterylizacji radiacyjnej, przy czym zestawy testowe umieszcza się tak, że co najmniej jeden zestaw testowy jest umieszczony w odległości nie mniejszej niż 15 cm od najbliższej krawędzi opakowania zbiorczego
g) poddanie opakowania zbiorczego sterylizacji radiacyjnej
h) ocena przeżywalności izolatów z zestawów testowych po procesie sterylizacji radiacyjnej poprzez przeniesienie każdego z izolatów z każdego z zestawów testowych po sterylizacji radiacyjnej na podłoże hodowlane, odpowiednie do jego hodowli i hodowla izolatu, a następnie stwierdzenie wzrostu albo braku wzrostu izolatu.
Korzystnie, powierzchnia opakowania przeznaczonego do sterylizacji radiacyjnej jest powierzchnią zewnętrzną lub wewnętrzną opakowania lub korkiem do zamykania opakowania.
W kroku d) identyfikacji drobnoustrojów można dokonać metodą biochemiczną lub techniką spektrometrii mas MALDI TOF lub sekwencjonowaniem DNA, korzystnie sekwencjonowaniem nowej generacji NGS.
W kroku e) do zestawu testowego można dodać szczep Escherichia coli ATCC25922.
Jeśli w środowisku zakładu produkcyjnego opakowań zostanie stwierdzona obecność izolatu o nieoznaczonej przynależności systematycznej, można go dodać do zestawu testowego w kroku e).
Korzystnie, w kroku f) w opakowaniu zbiorczym umieszcza się miedzy 5 a 30 zestawów testowych.
W kroku a) próbkę materiału mikrobiologicznego z co najmniej fragmentu powierzchni opakowania przeznaczonego do sterylizacji radiacyjnej można pobrać przez wypłukiwanie.
Najlepiej gdy w kroku e) jako podłoże testowe stosuje się wodę destylowaną zestaloną agarem, przy czym stężenie agaru w podłożu testowym wynosi 15 g/L.
W kroku f) wszystkie zestawy testowe można rozmieścić w opakowaniu zbiorczym w taki sposób, aby wszystkie zestawy testowe znajdowały się w odległości co najmniej 15 cm od najbliższej krawędzi opakowania zbiorczego.
Wykorzystanie drobnoustrojów endemicznych, izolowanych ze środowiska produkcji jest nowatorską metodą walidacji skuteczności sterylizacji opakowań metodą radiacyjną. Populację mikroorganizmów występujących w obszarze produkcyjnym charakteryzuje duża dynamika zmian, mają one odmienne źródła pochodzenia, różne właściwości i mogą charakteryzować się wysoką odpornością na promieniowanie - co może być przyczyną skażenia produktu nawet po procesie radiacji. W przypadku wystąpienia zakażenia mikrobiologicznego w opakowaniu bag in box, zawierającym gotowy produkt, na podstawie przynależności systematycznej mikroorganizmu powodującego zakażenie możliwe jest wykluczenie powstania zakażenia na etapie sterylizacji radiacyjnej. Opracowana procedura może podlegać modyfikacji poprzez wprowadzanie jako organizmów testowych drobnoustrojów potencjalnie skażających opakowania, występujących w dowolnym zakładzie produkcyjnym, dając tym samym pewność ich eliminacji z produktu. Zaletą opracowanej metody jest możliwość wykorzystania różnych mikroorganizmów (bakterie, grzyby pleśniowe, drożdże, promieniowce) w zależności od potrzeb producenta i składu populacji drobnoustrojów izolowanych z zakładu.
Wynalazek przedstawiono w przykładach wykonania na rysunku, na którym: fig. 1 przedstawia schematycznie technikę posiewu redukcyjnego wybranej kolonii bakterii, rosnącej na pożywce TSA, fig. 2 przedstawia schematycznie technikę posiewu punktowego wybranej kolonii grzybów, rosnącej na pożywce MEA, fig. 3 przedstawia schemat przeniesienia krążków z organizmami testowymi na płytki z 1,5% agarem, przy czym 1 - Escherichia coli ATCC25922, 2 - Staphylococcus hominis, 3 - Bacillus licheniformis, 4 - Micrococcus luteus, 5 - Penicillium glabrum 6 - Cladosporium cladosporioides, 7 - Aspergillus fumigatus, 8 - Aspergillus niger, 9 - Streptomyces sp., 10 - Saccharomyces cerevisiae, fig. 4 przedstawia przygotowaną do radiacji szalkę z krążkami testowymi z fig. 3, fig. 5 przedstawia A) rozmieszczenie zestawów testowych w opakowaniu zbiorczym o małych gabarytach (600x800x320 mm), B) stos dziesięciu opakowań zbiorczych o małych gabarytach, umieszczonych na europalecie, przy czym stos ma wymiar (bez europalety) 1650 mm x 1210 mm x 810 mm, fig. 6 przedstawia A) rozmieszczenie zestawów testowych w opakowaniu zbiorczym o bardzo dużych gabarytach - 800 mm x 1200 mm x 760 mm, B) stos dwóch opakowań zbiorczych o bardzo dużych gabarytach, umieszczonych na europalecie, przy czym stos ma wymiar (bez europalety) 1645 mm x 1200 mm x 800 mm fig. 7 przedstawia przeniesienie krążka z szalki z fig. 4 na właściwą pożywkę, fig. 8 przedstawia wzrost mikroorganizmów testowych z zestawu kontrolnego (od lewej Penicillium glabrum, Saccharomyces cerevisiae), fig. 9 przedstawia brak wzrostu mikroorganizmów z zestawu poddanego radiacji (górny rząd, od lewej: Cladosporium cladosporioides, Escherichia coli, dolny rząd od lewej: Staphylococcus hominis, Saccharomyces cerevisiae).
P r z y k ł a d 1 a-b) Pobranie próbek materiału biologicznego i hodowla pobranego materiału mikrobiologicznego w celu uzyskania endemicznych mikroorganizmów zakładu produkcyjnego
Aby wybrać mikroorganizmy testowe, przeprowadzono badania czystości mikrobiologicznej powierzchni, powietrza i opakowań przez sterylizacją.
- Badania zanieczyszczenia mikrobiologicznego powietrza
Próbki bioaerozolu na każdym z badanych stanowisk pomiarowych pobierane były przy użyciu 6-stopniowego impaktora Andersena - model 10-710, Graseby- Andersen, Inc., Atlanta, GA, USA, w trzech powtórzeniach w każdym punkcie pomiarowym. Aparat umieszczano na wysokości 0,5-1,0 m nad podłogą lub gruntem (pomiary zewnętrzne) w celu pobrania próbek ze strefy z której najwięcej zanieczyszczeń może przedostawać się do produktu końcowego. Zastosowano 5-minutowy czas poboru aerozoli bakteryjnych i grzybowych. Próbki pobierano przy prędkości przepływu 28,3 dm^min’1. W ostatniej serii badań wykonano równoległe badania powietrza z wykorzystaniem aeroskopu MAS100 firmy Merck.
Do hodowli mikroorganizmów zastosowano następujące podłoża mikrobiologiczne: agar tryptozowo-sojowy (TSA LAB-AGARTM, Biomaxima) dla bakterii oraz agar słodowy (Malt Extract Agar, Biomaxima) dla grzybów (pleśniowych i drożdży).
Płytki z TSA inkubowano przez 24 godziny w temperaturze 35±2°C a następnie przez 72 godziny w 20±2°C. Płytki z MEA inkubowano 96 godzin w 25°C. Przedłużona inkubacja hodowli drobnoustrojów miała na celu umożliwienie wzrostu szczepom rosnącym wolno w niższym zakresie temperatur - jednak już od pierwszego (dla bakterii) i od trzeciego (dla grzybów) dnia inkubacji co 24 godziny zliczano wyrosłe kolonie mikroorganizmów. Po okresie inkubacji płytek przeprowadzono analizę ilościową wyrosłych mikroorganizmów. Stężenie bioaerozolu obliczono jako liczbę jednostek tworzących kolonie na metr sześcienny powietrza (jtk-m-3) osobno dla każdej z badanych grup mikroorganizmów.
Do celów analizy jakościowej (diagnostyki) izolowano dominujące szczepy bakterii i grzybów różniące się cechami makroskopowymi.
- Badania mikrobiologicznego zanieczyszczenia powierzchni
Ocenię mikrobiologicznego zanieczyszczenia powierzchni ścian i powierzchni roboczych (pionowych i poziomych) przeprowadzono metodą płytek kontaktowych. W tym celu wykorzystano płytki Count Tact typu Rodac o średnicy 55 cm firmy Biomaxima oraz aplikator Count Tact firmy Bio Merieux. Badanie wykonano zgodnie z procedurą firmy Bio Merieux oraz PN - ISO 18593:2005 i Nowaczyk i Merlak 2014. (Nowaczyk P., Merlak D. 2014. Badania mikrobiologiczne powierzchni - kryteria oceny i metodyka badań. Świat przemysłu kosmetycznego. 1, 64-67., PN - ISO 18593:2005 Mikrobiologia żywności i pasz.
Horyzontalne metody pobierania próbek z powierzchni z użyciem płytek kontaktowych i wymazów)
Do hodowli mikroorganizmów zastosowano następujące podłoża mikrobiologiczne: agar tryptozowo-sojowy (TSA LAB-AGARTM, Biomaxima) dla bakterii oraz agar słodowy (Malt Extract Agar, Biomaxima) oraz podłoże Sabouraud (Biomaxima) dla grzybów.
Płytki z TSA inkubowano przez 24 godziny w temperaturze 35±2°C a następnie przez 72 godziny w 20±2°C. Płytki z podłożami dla grzybów inkubowano 96 godzin w 25°C. Przedłużona inkubacja hodowli drobnoustrojów miała na celu umożliwienie wzrostu szczepom rosnącym wolno w niższym zakresie temperatur
- jednak już od pierwszego (dla bakterii) i od trzeciego (dla grzybów) dnia inkubacji co 24 godziny zliczano wyrosłe kolonie mikroorganizmów.
Wyniki badań zanieczyszczenia mikrobiologicznego powierzchni podano w przeliczeniu na powierzchnię płytki 25 cm2 (jtk-CT-1] (jtk = jednostki tworzące kolonie; CT = płytka kontaktowa Count Tact typu Rodac, średnica 55cm) [PN-A- 82055-19:2000, PN - ISO 18593:2005, Nowaczyk i Merlak 2014, Rozp. Min. Zdrowia 2015].
Do celów analizy jakościowej (diagnostyki) izolowano dominujące szczepy bakterii i grzybów różniące się cechami makroskopowymi.
- Badanie worków bag in box
Do badań zanieczyszczenia mikrobiologicznego worków wybrano partie opakowań wytworzonych w różnych terminach i różnych warunkach. Uwzględniono produkty wytworzone w różnych warunkach produkcyjnych.
Worki przeznaczone do badań mikrobiologicznych pobierano losowo w dniach kontroli czystości powietrza na hali produkcyjnej oraz w komorze tymczasowej przed lub po procesie ozonowania, metodą losową. Do badań dostarczono również worki wyprodukowane w innych terminach (przed dezynfekcją hali) oraz worki poddane procesowi sterylizacji.
W celu wykonania mikrobiologicznej analizy ilościowej zastosowano zmodyfikowaną metodę wypłukiwania (popłuczyn) [Żakowska i Stobińska 2000].
Podłoża oraz odczynniki przygotowano zgodnie z wytycznymi producenta na opakowaniach. Gotowe podłoża rozlano ilościowo na szalki polistyrenowe.
Badane worki napełniono roztworem jałowej soli fizjologicznej (0,85% roztwór wodny NaCl) w warunkach jałowych. Do każdego opakowania wlano przez kołnierz sól fizjologiczną o objętości odpowiadającej 10% pojemności worka. Następnie zamknięto wylot kołnierza zaworem. Napełnione worki wytrząsano w temperaturze pokojowej (22°C) przez 24 godziny w celu przeniesienia drobnoustrojów z wewnętrznej powierzchni do roztworu soli fizjologicznej. Po całodobowym wytrząsaniu, zawartość worka przefiltrowano przy użyciu zestawu do filtracji membranowej. Na nasadce z podstawą filtra umieszczono sączek membranowy (cellulose nitrate filter 0,45 μm, firmy Sartorius) i całość soli fizjologicznej z worka przelano do jałowego lejka zestawu do filtracji. Zawartość opakowania opróżniono poprzez odcięcie rogu worka, w celu uniknięcia wtórnego zakażenia mogącego pochodzić z zaworu. Po zakończeniu filtracji sączek membranowy umieszczono na szalce Petriego z odpowiednim podłożem. Dla każdej kolejnej próbki przeprowadzono tę samą procedurę. Analizę każdej partii worków wykonano każdorazowo minimum w trzech powtórzeniach dla każdej grupy mikroorganizmów. Do hodowli w warunkach
PL 242128 Β1 beztlenowych wykorzystano zestawy firmy Biomerieux. Analizy każdej partii wykonywano w trzech seriach. [Pepper i Gerba 2004; PN-EN ISO 9308-1:2004/AC:2009].
W ramach badań określano liczebność bakterii tlenowych i beztlenowych, grzybów (pleśni i drożdży), bakterii grupy coli oraz bakterii grupy coli typu fekalnego (Escherichia coli).
Tabela 1. Warunki hodowli drobnoustrojów izolowanych z worków
| Badana grupa mi kr oorganizm ów | Podłoże | Temperatura [°C] | Czas inkubacji [h] |
| Bakterie tlenowe | Agar krwawy (Biomaxima) TSA (Biomaxima) | 35±2 20±2 | 24 72 |
| Bakterie beztlenowe | Agar krwawy (Biomaxima) TSA (Biomaxima) | 35±2 20±2 | 24 72 |
| Grzyby (pleśnie i drożdże) | ME A (Biomaxima) | 25±2 | 96 |
| Bakterie grupy coli | Agar ENDO (Biomaxima) | 35±2 | 24 |
| Escherichia coli | ΤΒΧ (Biotnaxima) | 44 | 24 |
Przedłużona inkubacja hodowli drobnoustrojów miała na celu umożliwienie wzrostu szczepom rosnącym wolno w niższym zakresie temperatur-jednak już od pierwszego (dla bakterii) i od trzeciego (dla grzybów) dnia inkubacji co 24 godziny zliczano wyrosłe kolonie mikroorganizmów.
Po zakończeniu inkubacji, wyniki przeliczono i wyrażono w postaci liczby jednostek tworzących kolonie na 1 m2 wewnętrznej powierzchni worka.
Do celów analizy jakościowej (diagnostyki) izolowano dominujące szczepy bakterii i grzybów różniące się cechami makroskopowymi.
c) Wyizolowanie czystych kultur drobnoustrojów, które dominowały wśród wyhodowanych mikroorganizmów
Po przeprowadzeniu badania czystości mikrobiologicznej powierzchni, powietrza oraz opakowań wyizolowano czyste kultury drobnoustrojów, które dominowały wśród wyhodowanych mikroorganizmów. Bakterie, drożdże i promieniowce izolowano metodą powierzchniowych posiewów redukcyjnych na podłożu ogólnym do hodowli bakterii TSA - Trypticase-Soy-Agar (agar tryptozowo- sojowy) zgodnie z Fig. 1. W przypadku grzybów pleśniowych zastosowano posiew punktowy - zgodnie z Fig. 2.
d) Określenie przynależności systematycznej izolatów
Celem wstępnej identyfikacji wyhodowanych drobnoustrojów, wyizolowano czyste kultury z hodowli różniących się makroskopowo i wykonano preparaty, które umożliwiły określenie podstawowych cech mikroskopowych mikroorganizmów. W przypadku bakterii wykonano barwienie metodą Grama w celu oznaczenia przynależności systematycznej grzybów przygotowano preparaty przyżyciowe) [Grzybowski i Reiss 2001, Krzyściak i in. 2011]. Do celów diagnostycznych wyizolowano około 250 szczepów.
Dokładna identyfikacja drobnoustrojów została wykonana metodą spektroskopii masowej (MALDI TOF MS), z użyciem desorpcji/jonizacji laserowej, wspomaganej matrycą z analizatorem czasu przelotu, przy pomocy analizatora MALDI-TOF MS (Bruker Daltonik, Germany). Wykonywanie identyfikacji poprzedzał etap wstępnej ekstrakcji białek z użyciem etanolu i kwasu mrówkowego. W tym celu niewielką ilość 24 godzinnej hodowli badanego drobnoustroju zawieszano w 300 μl jałowej wody dejonizowanej, po czym dodawano 900 μl czystego etanolu (POCH, Polska) i dokładnie mieszano z użyciem worteksu. W kolejnym etapie próbkę wirowano przez 2 minuty przy obrotach 13000 rpm/min. Po odrzuceniu supernatantu, do uzyskanego osadu dodawano kolejno: 50 μl 70% wodnego roztworu kwasu mrówkowego i 50 μl acetonitrylu (Fluka Analytical), po czym dokładnie mieszano z użyciem worteksu. Po ponownym odwirowaniu (13000 rpm/min przez 2 min) pobierano 1 μl supernatantu, który nakładano na metalową płytkę i pozostawiano do wyschnięcia w temperaturze pokojowej. Następnie nakładano po 1 μl roztworu matrycy i pozostawiano do wyschnięcia w temperaturze pokojowej. Metalową płytkę z nałożonymi próbkami umieszczano w komorze pomiarowej aparatu MALDI Biotyper, usuwano powietrze celem uzyskania próżni i poddawano działaniu promienia laserowego. Pod jego wpływem dochodziło do desorpcji i jonizacji białek bakteryjnych, następnie zjonizowane peptydy przyspieszano w silnym polu elektrycznym i mierzono czas przelotu jonów (Tof; time of flight). W oparciu o otrzymywany rozkład peptydów według masy cząsteczkowej, ładunku oraz zróżnicowanego czasu przelotu, system MALDI-TOF MS automatycznie generował spektrometryczne widma pików odpowiadających jonom o różnym stosunku masy do ładunku oraz analizował ilość, intensywność i korelację pików, a także porównywał badane widmo z widmami referencyjnymi drobnoustrojów. Automatyczny pomiar widma i jego analiza porównawcza z widmami wzorcowymi drobnoustrojów były wykonane przez spektrometr masowy Ultraflextreme w połączeniu z programem MALDI-Biotyper 3.0 (Bruker Daltonik, Niemcy), zawierający w bazie danych 3672 profili drobnoustrojów. W oparciu o ten program określono również spektralny profil białkowy wybranego drobnoustroju. Prawdopodobieństwo poprawnej identyfikacji w systemie MALDI Biotyper 3.0 wyrażane było w postaci wskaźnika punktowego: 2,300-3,000 wiarygodna identyfikacja drobnoustroju do poziomu gatunku; 2,000-2,299 wiarygodna identyfikacja drobnoustroju do poziomu rodzaju oraz prawdopodobny wynik identyfikacji do poziomu gatunku; 1,700-1,999 wskazywała na prawdopodobny wynik identyfikacji do poziomu rodzaju; 0-1,699 to niewiarygodny wynik identyfikacji [Kosikowska i in. 2015, Singhal i in. 2015].
Kilkunastu izolatów nie udało się wiarygodnie zidentyfikować - były to głównie szczepy grzybów pleśniowych.
e) Przygotowanie zestawów testowych
Do zestawów testowych wybrano izolaty występujące powszechnie w środowisku produkcji i workach w trakcie prowadzonych badań, zaliczone do czynników biologicznie szkodliwych na stanowiskach pracy - Aspergillus fumigatus lub stwarzające potencjalne zagrożenie dla produktów (szczególnie soków) nalewanych do worków przez wielu odbiorców - Saccharomyces cerevisiae. Wybrano następujące izolaty:
Bakterie: Staphylococcus hominis, Bacillus licheniformis, Micrococcus luteus, Escherichia coli ATCC25922 - szczep wzorcowy powszechnie uznawany za wskaźnik złego stanu higienicznego
Promieniowce (actinobakterie): Streptomyces sp.
Grzyby:
- Pleśniowe: Penicillium glabrum, Cladosporium cladosporioides, Aspergillus niger, Aspergillus fumigatus
- Drożdże: Saccharomyces cerevisiae
Wybrane szczepy przesiano na odpowiednie pożywki metodą powierzchniową (murawą) i inkubowano zgodnie z parametrami zestawionymi w tab. 2 uwzględniając różne czasy hodowli.
PL 242128 Β1
Tabela 2. Zalecane warunki inkubacji drobnoustrojów testowych
| Badana grupa mikroorganizm ów | Podłoże* | Temperatura [°C] | Czas inkubacji [h] |
| Bakteri e | ISA (Trypticase Soy Agar - agar tryptozowo-soj owy) | 35±2 | 48 |
| Grzyby (pleśnie i drożdże) | ME A (Malt Extract Agar - agar maltozo wy) | 25±2 | 5 dni |
| Promieniowce | ACM (Actinomycetes Cultivation Medium — podłoże hodowlane dla promieniowców) | 25±2 | 7 dni |
* - można zastosować dowolne podłoże zapewniające wzrost mikroorganizmów testowych
Pożywki stosowane na każdym etapie testów rozlewano sterylnie na szalki Petriego ilościowo.
Na szalki o średnicy 90 mm wylano po 20 cm3 podłoża - wody zestalonej 1,5% agarem. Na tak przygotowane szalki naniesiono krążki średnicy 5 mm wycięte z hodowli na których wcześniej wykonano posiew w postaci murawy (Fig. 3 i 4). Zastosowanie ubogiego podłoża zapobiegło wzrostowi mikroorganizmów w czasie transportu materiału do/z radiacji i jednocześnie zapobiegło wysuszaniu naniesionych drobnoustrojów. Zastosowanie wspólnego podłoża testowego dla wszystkich szczepów jednocześnie miało na celu dostarczenie wszystkim szczepom z danego zestawu testowego tej samej dawki promieniowania podczas radiacji.
f) Umieszczenie zestawów testowych w opakowaniach zbiorczych, przeznaczonych do radiacji
Przygotowane zestawy testowe zaklejono parafilmem i dodatkowo włożono indywidualnie w woreczki strunowe w celu wykluczenia ewentualnej kontaminacji jałowionych opakowań i zabezpieczenia hodowli przed zakażeniem bądź uszkodzeniem.
Zestawy testowe przygotowano na 24 godziny przed planowaną radiacją (wysyłką do radiacji) a do czasu umieszczenia ich w opakowaniach zbiorczych przechowywano w temperaturze 4°C.
Umieszczając zestawy testowe w opakowaniach zbiorczych ustalono ich rozkład w kartonie, biorąc pod uwagę jego wielkość i uwzględniając różne płaszczyzny oraz odległości od źródła promieniowania w czasie procesu sterylizacji.
W opakowaniu zbiorczym o małych gabarytach umieszczono 9 zestawów testowych (Fig. 5A) przy czym jeden zestaw testowy znajdował się w połowie wysokości opakowania zbiorczego. W opakowaniu o bardzo dużych gabarytach umieszczono 27 zestawów testowych, przy czym 9 zestawów testowych zostało równomiernie rozmieszczonych na płaszczyźnie w połowie wysokości opakowania i wszystkie zestawy testowe znajdowały się w odległości nie mniejszej niż 15 cm od krawędzi opakowania (Fig. 6A). Opakowania zbiorcze umieszczono w stosach na europaletach (fig. 5B i 6B).
g) Poddanie opakowań zbiorczych sterylizacji radiacyjnej
Proces sterylizacji opakowań zbiorczych przeprowadzono przy użyciu metody z wykorzystaniem promieniowania gamma, którego źródłem był izotop kobaltu (Co6O). Założono dwa zakresy promieniowania jonizującego, które dozymetrycznie sprawdzono. Ilość pochłoniętego promieniowania gamma dla pierwszego zakresu wynosiła od 7 do 15 kGy (dawka dla produktów ultra clean), dla drugiego zakresu od 15 do 35 kGy (dawka standardowo dla opakowań do rozlewu aseptycznego).
h) Ocena przeżywalności mikroorganizmów po procesie radiacji
Po wyjęciu próbek biologicznych z opakowań zbiorczych, które zostały poddane radiacji, krążki z organizmami testowymi przeniesiono w sposób jałowy na odpowiadające danym drobnoustrojom pożywki hodowlane (Fig. 7) rozlane na szalki o małej średnicy (35, 55 mm). Stronę z hodowlą lekko dociskano do podłoża. Całość inkubowano zgodnie z warunkami przedstawionymi w tabeli 2. Jako kontroli użyto drobnoustrojów z zestawu testowego, który nie został poddany procesowi radiacji i był przechowywany w temperaturze pokojowej. Interpretacji wyniku dokonano w oparciu o wzrost/brak wzrostu mikroorganizmów z krążków po przeniesieniu ich na podłoże hodowlane. We wszystkich przypadkach organizmy testowe pochodzące z zestawu testowego kontrolnego wykazały wzrost (Fig. 8). Po skutecznej sterylizacji wszystkie organizmy testowe pochodzące z zestawów testowych poddanych procesowi radiacji nie wykazały wzrostu (Fig. 9).
Claims (9)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób oceny skuteczności sterylizacji radiacyjnej opakowań, w szczególności typu bag in box, znamienny tym, że zawiera następujące kroki:a) pobranie co najmniej jednej próbki materiału mikrobiologicznego z co najmniej fragmentu powierzchni opakowania przeznaczonego do sterylizacji radiacyjnej i/albo z powietrza wewnątrz zakładu produkcyjnego opakowań i/albo z co najmniej jednej powierzchni wewnątrz zakładu produkcyjnego opakowań, przy czym powierzchnia wewnątrz zakładu produkcyjnego opakowań jest wybrana spośród powierzchni ścian, podłóg, sufitu i powierzchni roboczych wewnątrz zakładu produkcyjnego opakowań,b) przeniesienie materiału mikrobiologicznego pobranego w kroku a) na co najmniej jedno podłoże, odpowiednie do hodowli bakterii i/albo grzybów, oraz hodowla pobranego materiału mikrobiologicznego w celu uzyskania endemicznych mikroorganizmów zakładu produkcyjnego, należących do bakterii i/albo grzybów,c) wyizolowanie czystych kultur endemicznych mikroorganizmów zakładu produkcyjnego, spośród wyhodowanych kolonii, które dominowały wśród endemicznych mikroorganizmów zakładu produkcyjnego, otrzymanych w kroku b)d) identyfikacja przynależności systematycznej wyizolowanych czystych kultur endemicznych mikroorganizmów zakładu produkcyjnego z kroku c) oraz wybór od 3 do 10 izolatów spośród czystych kultur endemicznych mikroorganizmów zakładu produkcyjnego, które są znane jako biologicznie szkodliwe lub stwarzają potencjalne zagrożenie dla produktów na podstawie ich przynależności systematyczneje) przygotowanie co najmniej pięciu zestawów testowych, przy czy pojedynczy zestaw testowy przygotowuje się poprzez przeniesienie na wspólne podłoże testowe, stanowiące wodę zestaloną agarem, co najmniej trzech izolatów wybranych w kroku d), przy czym pojedyncze wspólne podłoże testowe zawiera wszystkie wybrane izolaty, tworząc zestaw testowy.f) umieszczenie co najmniej pięciu zestawów testowych we wnętrzu opakowania zbiorczego, zawierającego co najmniej jedno opakowanie przeznaczone do sterylizacji radiacyjnej, przy czym zestawy testowe umieszcza się tak, że co najmniej jeden zestaw testowy jest umieszczony w odległości nie mniejszej niż 15 cm od najbliższej krawędzi opakowania zbiorczegog) poddanie opakowania zbiorczego sterylizacji radiacyjnejh) ocena przeżywalności izolatów z zestawów testowych po procesie sterylizacji radiacyjnej poprzez przeniesienie każdego z izolatów z każdego z zestawów testowych po sterylizacji radiacyjnej na podłoże hodowlane, odpowiednie do jego hodowli i hodowla izolatu, a następnie stwierdzenie wzrostu albo braku wzrostu izolatu.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że powierzchnia opakowania przeznaczonego do sterylizacji radiacyjnej jest powierzchnią zewnętrzną lub wewnętrzną opakowania lub korkiem do zamykania opakowania.
- 3. Sposób według zastrzeżenia 1 albo 2, znamienny tym, że w kroku d) identyfikacji drobnoustrojów dokonuje się metodą biochemiczną lub techniką spektrometrii mas MALDI TOF lub sekwencjonowaniem DNA, korzystnie sekwencjonowaniem nowej generacji NGS.
- 4. Sposób według zastrzeżenia 1 albo 2 albo 3, znamienny tym, że w kroku e) do zestawu testowego dodaje się szczep Escherichia coli ATCC25922.
- 5. Sposób według któregokolwiek z zastrz. od 1 do 4, znamienny tym, że w kroku e) do zestawu testowego dodaje się izolat o nieoznaczonej przynależności systematycznej, występujący w środowisku zakładu produkcyjnego.
- 6. Sposób według któregokolwiek z zastrz. od 1 do 5, znamienny tym, że w kroku f) w opakowaniu zbiorczym umieszcza się między 5 a 30 zestawów testowych.
- 7. Sposób według któregokolwiek z zastrz. od 1 do 6, znamienny tym, że w kroku a) próbkę materiału mikrobiologicznego z co najmniej fragmentu powierzchni opakowania przeznaczonego do sterylizacji radiacyjnej pobiera się przez wypłukiwanie.
- 8. Sposób według któregokolwiek z zastrz. od 1 do 7, znamienny tym, że w kroku e) jako podłoże testowe stosuje się wodę destylowaną zestaloną agarem, przy czym stężenie agaru w podłożu testowym wynosi 15 g/L.
- 9. Sposób według któregokolwiek z zastrz. od 1 do 8, znamienny tym, że w kroku f) wszystkie zestawy testowe umieszcza się tak, że podczas procesu sterylizacji wszystkie zestawy testowe są umieszczone w odległości nie mniejszej niż 15 cm od najbliższej krawędzi opakowania zbiorczego.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL435262A PL242128B1 (pl) | 2020-09-11 | 2020-09-11 | Sposób oceny skuteczności sterylizacji radiacyjnej opakowań |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL435262A PL242128B1 (pl) | 2020-09-11 | 2020-09-11 | Sposób oceny skuteczności sterylizacji radiacyjnej opakowań |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL435262A1 PL435262A1 (pl) | 2022-03-14 |
| PL242128B1 true PL242128B1 (pl) | 2023-01-16 |
Family
ID=80629052
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL435262A PL242128B1 (pl) | 2020-09-11 | 2020-09-11 | Sposób oceny skuteczności sterylizacji radiacyjnej opakowań |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL242128B1 (pl) |
-
2020
- 2020-09-11 PL PL435262A patent/PL242128B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL435262A1 (pl) | 2022-03-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1443973B1 (en) | Kits and methods for determining the effectiveness of sterilization or disinfection processes | |
| Thompson | Production and quality control of carrier-based legume inoculants | |
| CN106794271A (zh) | 使用耐灭菌剂调节物的生物灭菌指示器 | |
| US7326562B2 (en) | Biological indicator system to detect effectiveness of sterilization | |
| JP2012526996A (ja) | 試料内の微生物因子の迅速な同定および／または特徴付けのためのシステムおよび方法 | |
| AU777746B2 (en) | Methods, compositions and kits for biological indicator of sterilization | |
| US20030027242A1 (en) | Methods, compositions and kits for biological indicator of sterilization | |
| US5856118A (en) | Biological indicator and method | |
| PL242128B1 (pl) | Sposób oceny skuteczności sterylizacji radiacyjnej opakowań | |
| Fowotade et al. | Internal and external quality control in the medical microbiology laboratory | |
| AU722905B2 (en) | Indicator systems and material compression and insertion devices for preparing same | |
| US20020015977A1 (en) | Indicator system for determination of sterilization | |
| Richter et al. | The radiation resistance of ascospores and sclerotia of Pyronema domesticum | |
| Ley et al. | Radiation sterilization: microbiological findings from subprocess dose treatment of disposable plastic syringes | |
| CN113584115A (zh) | 一种定性检测硒元素的生物学方法 | |
| Borghesi et al. | Analysis of Four-Hours Active Sampling Using 90 mm Plates+ LTHT | |
| EP1485135A1 (de) | Verfahren zur prüfung einer sterilisierverpackungseinheit auf wirksamkeit gegen rekontamination | |
| CN116380587B (zh) | 一种含重金属及其化学形态的香菇基质标准物质制备方法 | |
| Wills | Gamma Sterilization–Process Development and Validation | |
| Sharif et al. | Microbial Assessment of Locally Compounded Herbals Tea Vended in Selected Markets Within Kaduna Metropolis | |
| Fayard et al. | Assessment of residual moisture and maintenance of sterility in surgical instrument sets after sterilization | |
| Mazariegos | Production of biopesticides by the columbian company Laverlam | |
| US20040106167A1 (en) | Methods for evaluating sterilization procedures using a biological indicator | |
| Konaç et al. | Comparison of SDR presumed by AAMI and the radioresistance distribution of the microbiolojical populations exist on the Turkish made single use syringes | |
| Mukhopadhayay et al. | Characterization Methods and Evaluation of Sterility |