PL240932B1 - New disulphonamide derivatives of 5-aniline-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazol[ 4,3-e][1,2,4]-triazine with anti-tumor properties, method for synthetizing them, pharmaceutical compositions that contain these derivatives and their first medical application - Google Patents

New disulphonamide derivatives of 5-aniline-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazol[ 4,3-e][1,2,4]-triazine with anti-tumor properties, method for synthetizing them, pharmaceutical compositions that contain these derivatives and their first medical application Download PDF

Info

Publication number
PL240932B1
PL240932B1 PL434721A PL43472120A PL240932B1 PL 240932 B1 PL240932 B1 PL 240932B1 PL 434721 A PL434721 A PL 434721A PL 43472120 A PL43472120 A PL 43472120A PL 240932 B1 PL240932 B1 PL 240932B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
amino
methyl
derivative according
novel derivative
derivatives
Prior art date
Application number
PL434721A
Other languages
Polish (pl)
Other versions
PL434721A1 (en
Inventor
Mariusz Mojzych
Zofia Bernat
Anna Bielawska
Krzysztof Bielawski
Anna SZYMANOWSKA
Anna Szymanowska
Katarzyna Kotwica-Mojzych
Original Assignee
Univ Medyczny W Bialymstoku
Univ Medyczny W Lublinie
Univ Przyrodniczo Humanistyczny W Siedlcach
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univ Medyczny W Bialymstoku, Univ Medyczny W Lublinie, Univ Przyrodniczo Humanistyczny W Siedlcach filed Critical Univ Medyczny W Bialymstoku
Priority to PL434721A priority Critical patent/PL240932B1/en
Publication of PL434721A1 publication Critical patent/PL434721A1/en
Publication of PL240932B1 publication Critical patent/PL240932B1/en

Links

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

PL 240 932 Β1

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku są nowe, disulfonamidowe pochodne 5-anilino-7-fenylo-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1, sposób ich wytwarzania oraz ich zastosowania związane z aktywnością przeciwnowotworową, cytotoksyczną i/lub cytostatyczną, w szczególności względem komórek nowotworowych, zwłaszcza komórek raka sutka, jak również kompozycje farmaceutyczne je zawierające.

Ze stanu techniki znane są sulfonamidowe pochodne układu 5-anilino-1,3-dimetylo-1/-/-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny wykazujące działanie przeciwnowotworowe [M. Mojzych, V. Subertova, A. Bielawska, K. Bielawski, V. Bazgier, K. Berka, T. Gucky, E. Fornal, V. Krystof, Eur. J. Med. Chem., 78, 217 (2014)], jak również znane są sposoby ich syntezy [Pat RP-219242-(2014)].

W patencie nr PL-198965 oraz w literaturze (M. Mojzych, A. Rykowski; Heterocycles, 2004, 63, 1829-1838) opisana jest synteza 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1/-/-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny będącej związkiem wyjściowym do syntezy nowych disulfonamidów opisanych wzorem ogólnym 1, natomiast w patencie nr PL-219242 opisana jest synteza i aktywność przeciwnowotworową sulfonamidów pochodnych 5-anilino-1,3-dimetylo-1/-/-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny. Pochodne te mają odmienną strukturę od pochodnych będących przedmiotem niniejszego zgłoszenia patentowego.

Celem niniejszego wynalazku było dostarczenie nowych związków nadających się do leczenia nowotworu, zwłaszcza raka sutka, w szczególności związków o działaniu cytotoksycznym, cytostatycznym i antyproliferacyjnym. Celem niniejszego wynalazku było także dostarczenie sposobu wytwarzania takich związków oraz kompozycji farmaceutycznych do leczenia nowotworu, zwłaszcza raka sutka.

Cele te zrealizowano przy pomocy rozwiązań przedstawionych w załączonych zastrzeżeniach patentowych.

Przedmiotem niniejszego wynalazku są nowe disulfonamidowe pochodne 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1 /-/-pirazolo[4,3-e][1,2,4]-triazyny o wzorze ogólnym 1:

w którym R oznacza podstawnik, będący jedną z wymienionych grup: A/-metylopiperazynową, pirolidynową, morfolinową, piperydynową, piperazynową, homopiperazynową, 2-morfolinoetyloaminową, 2-aminoetyloaminową, 2-aminoetanolową, 2-amino-2-metylo-1,3-propanodiolową, 2-amino-2-metylo-1-propanolową, (S)-(+)-1-amino-2-propanolową, (R)-(-)-1-amino-2-propanolową, (S)-(+)-2-amino-1-propanolową, (R)-(-)-2-amino-1-propanolową, (S)-(+)-2-amino-3-metylo-1-butanolową, (R)-(-)-2-amino-3-metylo-1 -butanolową, (S)-(+)-3-amino-1,2-propanediolową, (R)-(-)-2-amino-1,2-propanediolową, (S)-(+)-leucinolową, (R)-(-)-leucinolową, S-(+)-2-amino-1-butanolową, R-(-)-2-amino-1-butanolową, estru metylowego L-proliny i estru metylowego c/s-4-hydroksy-L-proliny.

Przedmiotem niniejszego wynalazku jest również sposób wytwarzania nowych disulfonamidowych pochodnych 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1/-/-pirazolo[4,3-e][1,2,4]-triazyny o wzorze ogólnym 1, innym niż sposoby wytwarzania znane dotychczas w stanie techniki.

Sposób wytwarzania disulfonamidowych pochodnych 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według niniejszego wynalazku polega na wprowadzeniu do 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny dwóch identycznych chiralnych podstawników sulfonamidowych. W pierwszym etapie syntezy znaną 5-anilino-1-fenylo-3-metylo1 /-/-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę przekształca się w odpowiednią 4-[1 -(4-(chlorosulfonylo)fenylo)-3

PL 240 932 B1 metylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]-triazyn-5-ylamino]benzeno-1-chlorosulfonu poprzez reakcję z kwasem chlorosulfonowym. W kolejnym etapie tak otrzymaną pochodną dichlorosulfonową poddaje się reakcji z odpowiednią aminą lub enancjomerem chiralnego aminoalkoholu bądź estru aminokwasu. Odpowiednia aminopochodna wybierana jest z grupy: N-metylopiperazyna, pirolidynowa, morfolina, piperydyna, piperazyna, homopiperazyna, 2-morfolinoetyloamina, 2-aminoetyloamina, 2-aminoetanolowa, 2-amino-2metylo-1,3-propanodiol, 2-amino-2-metylo-1-propanol, (S)-(+)-1-amino-2-propanol, (R)-(-)-1-amino-2propanol, (S)-(+)-2-amino-1-propanol, (R)-(-)-2-amino-1-propanol, (S)-(+)-2-amino-3-metylo-1-butanol, (R)-(-)-2-amino-3-metylo-1-butanol, (S)-(+)-3-amino-1,2-propanediol, (R)-(-)-2-amino-1,2-propanediol, (S)-(+)-leucinol, (R)-(-)-leucinol, S-(+)-2-amino-1-butanol, R-(-)-2-amino-1-butanol, ester metylowy L-proliny, i ester metylowy cis-4-hydroksy-L-proliny, w zależności od żądanego produktu końcowego sposobu wytwarzania według wynalazku. W wyniku tej reakcji otrzymuje się odpowiednią disulfonamidawą pochodną o ogólnym wzorze 1.

Otrzymaną tak nową pochodną disulfonamidową 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1 H-pirazolo-[4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku, można korzystnie oczyszczać chromatograficznie, na przykład z zastosowaniem chromatografii cieczowej kolumnowej.

Przykładowy sposób wytwarzania reprezentatywnej disulfonamidowej pochodnej 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku przedstawiono w przykładzie 1. Wzory stosowanych grup aminowych (podstawnik R w ogólnym wzorze 1) obecnych w nowych disulfonamidowych pochodnych 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku przedstawiono w załączonej Tabeli 1. W Tabeli 1 podano także odpowiednie temperatury topnienia i wydajności otrzymywania związków według wynalazku (związki numer 1 do 25).

Przedmiotem wynalazku jest ponadto wykorzystanie nowych pochodnych o wzorze ogólnym 1, otrzymanych według niniejszego wynalazku, do zastosowania jako lek do leczenia nowotworu, zwłaszcza do leczenia raka sutka.

Przedmiotem wynalazku jest również wykorzystanie nowych pochodnych o wzorze ogólnym 1, otrzymanych według niniejszego wynalazku, do zastosowania jako związki o działaniu cytotoksyczn ym, cytostatycznym i antyproliferacyjnym.

W wyniku przeprowadzonych prób i badań okazało się, że związki według wynalazku, o ogólnym wzorze 1, wykazują działania przeciwnowotworowe, cytotoksyczne, cytostatyczne i antyproliferacyjne względem komórek nowotworowych, w szczególności komórek raka sutka, i mogą być zatem stosowane jako leki, w szczególności leki do leczenia nowotworów, zwłaszcza raka sutka. Dzięki swoim właściwościom związki według wynalazku mogą być także stosowane jako środki cytostatyczne i/lub cytotoksyczne. Wyniki badań biologicznych dla związków według wynalazku przedstawiono w przykładach, w szczególności w Tabeli 2 (związki numer 1 do 25).

Przedmiotem wynalazku jest także kompozycja farmaceutyczna, charakteryzująca się tym, że jako substancję aktywną zawiera nowe disulfonamidowe pochodne 5-anilino-1fenylo-3-metylo-1Hpirazolo[4,3-e][1,2,4]-triazyny o wzorze ogólnym 1, otrzymywane według wynalazku. Substancjami dodatkowymi są farmaceutycznie akceptowalne nośniki, rozcieńczalniki lub zaróbka.

Disulfonamidowe pochodne 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-pirazolo[4,3-e][1,2,4]-triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku można stosować w zastosowaniach według wynalazku w. postaci kompozycji farmaceutycznych. Kompozycja farmaceutyczna według wynalazku zawiera, oprócz związku według wynalazku jako składnika aktywnego, farmaceutycznie akceptowalny nośnik, rozcieńczalnik lub zaróbkę. Są one znane specjalistom w dziedzinie niniejszego wynalazku i obejmują ciekłą lub nieciekłą bazę kompozycji. Określenie „akceptowalny” oznacza tu, że składniki stosowanej tu kompozycji farmaceutycznej mogą być zmieszane z farmaceutycznie aktywnym składnikiem jak tu zdefiniowano, czyli jednym i/lub więcej niż jednym związkiem według wynalazku i innym składnikiem w taki sposób, że nie wystąpi żadna interakcja, która mogłaby, w zwykłych warunkach stosowania, istotnie zmniejszyć farmaceutyczną skuteczność kompozycji. Stosowane farmaceutycznie akceptowalne nośniki, rozcieńczalniki i zaróbki muszą posiadać wystarczająco wysoką czystość i niską toksyczność, żeby czynić je odpowiednimi do podawania osobnikowi, który ma być leczony, jak wiadomo w dziedzinie niniejszego wynalazku. Kompozycję farmaceutyczną według wynalazku można wytwarzać w standardowy sposób. Sposoby wytwarzania kompozycji farmaceutycznych zawierających co najmniej jeden składnik aktywny i farmaceutycznie akceptowalny nośnik, rozcieńczalnik lub zaróbkę są znane w dziedzinie niniejszego wynalazku. Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku zawierające jako składnik aktywny co najmniej jeden związek według wynalazku można stosować do leczenia nowotworów, zwłaszcza raka sutka.

PL 240 932 B1

Oznaczanie aktywności przeciwnowotworowej nowozsyntetyzowanych disulfonamidowych pochodnych 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]-triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku przeprowadzono w warunkach in vitro.

Badania aktywności przeciwnowotworowej przeprowadzono zarówno z wykorzystaniem komórek estrogenozależnego raka sutka MCF-7 jak i komórek estrogenoniezależnego raka sutka MDA-MB-231. W skrócie, na obu liniach komórkowych przeprowadzono pomiar działania cytotoksycznego i cytostatycznego disulfonamidowych pochodnych 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1 H-pirazolo(4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku, a także oceniono ich wpływ, na biosyntezę DNA. Pomiar działania cytotoksycznego i cytostatycznego chiralnych pochodnych disulfonamidowych 5-anilino-1-fenylo3-metylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku wykonano metodą Carmichael’a, określając żywotność komórek przy użyciu soli tetrazolowej (MTT) w badaniu MTT. Jest to badanie kolorymetryczne, wykorzystujące aktywność oksydoredukcyjną mitochondriów komórek. W żywych komórkach, pod wpływem mitochondrialnej dehydrogenazy, zastosowany barwnik ulega przekształceniu z żółtej soli tetrazolowej do purpurowego formazanu. Przemiana ta nie zachodzi w martwych komórkach. Żywotność komórek inkubowanych w obecności badanych disulfonamidowych pochodnych 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku przedstawiano jako procent wartości kontrolnych. Badanie wpływu pochodnych disulfonamidowych 5-anilno-1-fenylo-3-metylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku na proces biosyntezy DNA przeprowadzono na liniach komórkowych raka sutka, poprzez pomiar wbudowywania [3H]-tymidyny do DNA badanych komórek nowotworowych. Dokładny, przykładowy opis oznaczania aktywności przeciwnowotworowej nowozsyntetyzowanych pochodnych disulfonamidowych 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku w warunkach in vitro przedstawiono w przykładzie 2. W Tabeli 2 zestawiono wyniki badania aktywności cytotoksycznej, cytostatycznej i antyproliferacyjnej pochodnych disulfonamidowych 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1 H -pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku.

Przeprowadzone badania wykazały, że pochodne 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku wykazują zarówno działanie cytostatyczne, jak i działanie cytostatyczne. Przeprowadzone badania wykazały także, iż pochodne disulfonamidowe 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku wykazują aktywność przeciwnowotworową, zarówno w przypadku komórek nowotworowych estrogenozależnego raka sutka (MCF-7), jak i w przypadku komórek nowotworowych estrogenoniezależnego raka sutka (MDA-MB-231). Przeprowadzone badania pokazują zatem, że pochodne disulfonamidowe 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku można stosować jako leki, zwłaszcza leki przeciwnowotworowe, do leczenia nowotworów, zwłaszcza raka sutka, zarówno estrogenozależnego jak i estrogenoniezależnego. Przeprowadzone badania pokazują również, że pochodne disulfonamidowe 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny o wzorze ogólnym 1 według wynalazku mogą być stosowane jak środki cytostatyczne, a także jako środki cytotoksyczne.

Niniejszy wynalazek zostanie poniżej zilustrowany za pomocą przykładów wykonania, które nie mają jednak w jakikolwiek sposób ograniczać zakresu ochrony wynalazku, jak zdefiniowano w zastrzeżeniach patentowych. O ile nie wskazano inaczej, stosowano znane i/lub komercyjnie dostępne urządzenia, metody, parametry, warunki reakcji, odczynnik i zestawy, takie jakie powszechnie stosuje się w dziedzinie, do której należy niniejszy wynalazek, i jakie są zalecane przez wytwórców odpowiednich odczynników i zestawów.

P r z y k ł a d 1

Sposób wytwarzania 4-[1-(4-(chlorosulfonylo)fenylo)-3-metylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]-triazyn-5-ylamino]benzeno-1 -chlorosulfonu

Do kolby zawierającej 3 ml kwasu chlorosulfonowego ochłodzonego w mieszaninie wody z lodem do temperatury 0-5°C dodano 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę (604 mg, 2 mmola). Początkowo reakcję prowadzono w temperaturze 0-5°C, a następnie w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Po zakończeniu reakcji mieszaninę reakcyjną wylano na wodę z lodem i ekstrahowano chlorkiem metylenu (4 x 50 ml). Połączone ekstrakty suszono nad bezwodnym MgSO4. Po odparowaniu chlorku metylenu na wyparce surowy produkt oczyszczono na kolumnie chromatograficznej, stosując chlorek metylenu jako eluent. Produkt otrzymuje się w postaci żółtego osadu.

PL 240 932 Β1

Wydajność 90%, żółty proszek, temperatura topnienia 265-267 ®C

Ή NMR (DMSO) δ. 2.60 (s, 3H), 7.57 (d, 2H, J = 8.7 Hz), 7.79 (d, 2H, J = 4.1Hz), 7.81 (d, 2H, J = 4.1Hz), 8.22 (d, 2H, J = 8 7 Hz) ”C NMR (DMSO) δ: 10.93, 117.49, 117.99, 126.28, 127.01, 13641, 138.42, 140.15, 142.04, 145.75, 146.11, 158.31.

Sposób wytwarzania disulfonamidów

Dichlorosulfon (100 mg, 0,28 mmol) rozpuszczono w bezwodnym acetonitrylu (5 ml) i dodano 3,5-krotny nadmiar odpowiedniej aminy lub chiralnego aminoalkoholu, lub pochodnych L-proliny (1 mmol). Reakcję prowadzono w temperaturze pokojowej do całkowitego zaniku substratu (kontrola TLC). Po zakończeniu reakcji rozpuszczalnik odparowano, a surowy produkt reakcji oczyszczono na kolumnie chromatograficznej, stosując jako eluent mieszaninę CH2Cl2/EtOH (25 : 1). Otrzymane w ten sposób sulfonamidy przedstawia Tabela 1.

ch.

Wydajność 66%, temperatura topnienia 300-305 °C.

Ή NMR (DMSO) C: 1.00 (dd, 6H, J,.= 6 2Hz, Λ = 2.4Hz), 2.58-2.80 (m, 7H), 3.57-3.65 (m, 2H, J = 6.2 Hz), 4.70 (bs, 2H), 7.41 (t, 1H, J = 6.2Hz), 7.67 (t, 1H, J = 6.2Hz), 7.78 (d, 2H. J = 9.1Hz), 8.05 (t, 3H, J = 91 Hz), 8.50 (d, 2H, J=9.1 Hz) 11.01 (s, 1H).

WC NMR (DMSO) ó: 10.98, 21.00. 50 15. 65.18, 117.97, 118.67, 127.84. 128.45. 132.89. 137.30, 141.10, 143.52, 146.52. 158.12;

Tabela 1. Pochodne disulfonamidowe 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1/-/-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny według wynalazku.

I_p. R Temp, topnienia (°C) Wydajność (%) 1 —\ —CH1 291-294 83 2 -o 332 58 3 — 364 60 4 — 330 80 5 —Η MH 338 75 6 278 55 7 —NH - CH, -CH.,—l/ )θ 244-248 68 8 —nhch2ch2nh3 240-243 42

PL 240 932 Β1

Lp. R Temp, topnienia CC) Wydajność (%) 9 —NHCH.CH?OH 295-300 55 10 CHjOH c Hj CH^OH 286 77 11 —N—|—CHjOH H CH, 252 67 12 H ~N OH 300-305 66 13 _H 298 54 14 HO 272 65 15 H H — PCH, HO 268 70 16 _{J H OH 255 53 17 H ΓΉ V CH, 280 70 18 H -N hc^Ą-oh H 298 63 19 H -N. ΗΟ^ζξ-Η OH 305-310 60 20 -Κ^,ΟΗ CH, 120-124 63 21 H __-u 250 63 22 H —N H.C.Ję OH H 272-276 57 23 H —N H 262 59 24 1 /? \ / Q*te 265-267 70 25 rM \___/ Ofcte HO 243-246 80

Przykład 2

Aktywność przeciwnowotworową, cytostatyczną, cytotoksyczną i antyproliferacyjną pochodnych disulfonamidowych 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1/-/-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny według wynalazku badano w warunkach in vitro w następujący sposób.

PL 240 932 B1

Komórki estrogenozależnego raka sutka MCF-7 (ATCC, Manassas, VA, USA) hodowano w pożywce DMEM (Dulbecco's Minimal Essential Medium) z dodatkiem 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS), 2 mmol/dm3 glutaminy, 50 U/cm3 penicyliny, 50 μg/cm3 streptomycyny w temperaturze 37°C, w atmosferze zawierającej 5% CO2. Następnie komórki liczono w hemocytometrze i przenoszono w ilości 1 x 106 komórek na „oczko” w 1 ml pożywki hodowlanej z butelek „Costar” (Sigma, USA), w których prowadzono hodowlę, do 6-oczkowych płytek „Nunc” (Wiesbaden, Niemcy). Do przenoszenia komórek wykorzystano bezwapniowy bufor fosforanowy z dodatkiem 0,05% trypsyny i 0,02% EDTA. Po 48 godzinach pożywkę hodowlaną wymieniono na pożywkę DMEM, która nie zawierała czerwieni fenolowej i płodowej surowicy bydlęcej (FBS). Tak przygotowane komórki inkubowano przez 24 godziny z badanymi związkami i stosowano do dalszych doświadczeń.

Komórki estrogenoniezależnego raka sutka MDA-MB-231 (ATCC, Manassas, VA, USA) hodowano w pożywce DMEM (Dulbecco's Minimal Essential Medium) z dodatkiem 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS), 2 mmol/dm3 glutaminy, 50 U/cm3 penicyliny, 50 μg/cm3 streptomycyny w temperaturze 37°C, w atmosferze zawierającej 5% CO2. Następnie komórki liczono w hemocytometrze i przenoszono w ilości 1 x 106 komórek na „oczko” w 1 ml pożywki hodowlanej z butelek „Costar” (Sigma, USA), w których prowadzono hodowlę, do 6-oczkowych płytek „Nunc” (Wiesbaden, Niemcy). Do przenoszenia komórek wykorzystano bezwapniowy bufor fosforanowy z dodatkiem 0,05% trypsyny i 0,02% EDTA. Po 48 godzinach pożywkę hodowlaną wymieniono na pożywkę DMEM, która nie zawierała czerwieni fenolowej i płodowej surowicy bydlęcej (FBS). Tak przygotowane komórki inkubowano przez 24 godziny z badanymi związkami i użyto do dalszych doświadczeń.

Pomiar cytotoksyczności badanych związków wykonano metodą Carmichael'a (J. Carmichael et al, Cancer Res., 1987, 47, 943-946), określając żywotność komórek przy użyciu soli tetrazolowej (MTT) w teście MTT. W żywych komórkach, pod wpływem mitochondrialnych dehydrogenaz, zastosowany barwnik ulega przemianie do purpurowego formazanu. Przemiana ta nie zachodzi w martwych komórkach. Komórki inkubowano 24 godziny w inkubatorze zapewniającym odpowiednie warunki, tj. w temperaturze 37°C, w atmosferze zawierającej 5% CO2 wraz z pożywką zawierającą różne stężenia badanych związków. Po 24-godzinnej inkubacji komórki płukano trzy razy (3 x 1 ml) PBS. Następnie dodano 1 ml PBS oraz 50 μl MTT o stężeniu 5 mg/cm3 PBS i kontynuowano inkubację przez 4 godziny. Po upływie wymaganego czasu podłoże usunięto, a do komórek dodano 1 ml 0,1 M kwasu solnego w absolutnym izopropanolu i komórki odstawiono na 10 minut. W tak przygotowanymi lizacie komórek mierzono absorbancję przy długości fali 630 nm. Wynik absorbancji uzyskany w hodowlach komórek kontrolnych przyjęto za 100%. Natomiast żywotność komórek inkubowanych w obecności badanych związków przedstawiono jako procent wartości kontrolnych. Poziom istotności p wyznaczono nieparametrycznym testem U Manna-Whitney’a za pomocą programu SigmaStat. Wyniki przy poziomie istotności p < 0,05 uznano za istotne statystycznie. Wartości IC50 (ang. inhibitory concentration 50 - stężenie powodujące 50-procentową redukcję przeżywalności komórek) dla linii MCF-7 i MDA-MB-231 wyznaczono na podstawę analizy zależności zastosowanych stężeń badanych związków i stopnia przeżywalności komórek.

Ponadto oceniono wpływ związków według wynalazku na proces biosyntezy DNA poprzez pomiar wbudowywania [3H]-tymidyny do DNA badanych komórek. Komórki inkubowano 24 godziny w inkubatorze zapewniającym odpowiednie warunki, tj. w temperaturze 37°C, w atmosferze zawierającej 5% CO2 wraz z pożywką zawierającą różne stężenia badanych związków. Badane związki dodano do pożywki hodowlanej i inkubowano przez 24 godziny. Po tym czasie pożywkę wymieniono na świeżą i do każdego oczka dodano 0,5 μCi [3H]-tymidyny (aktywność właściwa 6,7 Ci/mmol) i komórki dalej inkubowano przez 4 godziny w inkubatorze w atmosferze zawierającej 5% CO2, w temperaturze 37°C. Po tym czasie pożywkę usunięto, a powierzchnię komórek przemyto trzy razy (3 x 1 ml) 0,05 M Tris-HCI o pH 7,4, zawierającym 0,11 molowy NaCI. Następnie komórki przemyto dwa razy (2 x 1 ml) 5% roztworem kwasu trichlorooctowego (TCA) i rozpuszczono w 1 ml 0,1 molowego NaOH zawierającym 1% SDS Po 5 minutach uzyskany lizat komórkowy przenoszono do fiolek scyntylacyjnych zawierających 2 ml płynu scyntylacyjnego i mierzono radioaktywność. Intensywność biosyntezy DNA w komórkach kontrolnych, wyrażona w dpm radioaktywnej tymidyny wbudowanej do DNA badanych komórek, w przeliczeniu na 1 x 106 komórek przyjęto za 100%. Wartości z prób badanych wyrażono jako procent wartości kontrolnej. Poziom istotności p wyznaczono nieparametrycznym testem U Manna-Whitney’a za pomocą programu SigmaStat. Wyniki przy poziomie istotności p < 0,05 uznano za istotne statystycznie. Na podstawie otrzymanych wyników wyznaczono wartości IC50 (ang. inhibitory concentration 50 - stężenie hamujące o 50% wbudowywanie [3H]-tymidyny).

PL 240 932 Β1

W poniższej Tabeli 2 podano wyniki badania działania przeciwnowotworowego, cytostatycznego, cytotoksycznego i antyproliferacyjnego wobec komórek nowotworowych nowozsyntetyzowanych chiralnych pochodnych sulfonamidowych 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny według wynalazku.

Tabela 2. Cytotoksyczna i cytostatyczna aktywność nowych chiralnych pochodnych disulfonamidowych o wzorze ogólnym 1 po 24 godzinach inkubacji.

Lp. Stosowane grupy aminowe (podstawnik R w ogólnym wzorze 1) MTT, ICa (μΜ) PH]-tymidyna, IC» (pM) MCF-7 MDA-MB- 231 MCF-7 MDA-MB- 231 1 O Z φ 75,0 21,0 59,5 32,0 2 >100,0 65,0 >50,0 59,0 3 >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 4 nrozp. nrozp. nrozp. nrozp. 5 —MH >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 6 ę__^nh nrozp. nrozp. nrozp. nrozp. 7 —MiCH/łę— O >100,0 >100,0 >100,0 >100,0

PL 240 932 Β1

Lp. Stosowane grupy aminowe (podstawnik R w ogólnym wzorze 1) MTT, ICso (μΜ) fH] -tym idy na, IC« (μΜ) MCF-7 MDA-MB- 231 MCF-7 MDA-MB- 231 8 -NHCHjCHjNI-L, >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 9 —NHCbLCH^OH >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 10 CHjOH -rH CHaOH >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 11 CK, N--CH,OH H 2 CHj >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 12 H Ύ >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 13 H ’ H >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 14 -V*. HCT >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 15 h h HO >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 16 -n h 0H H^CH, >100,0 >100,0 >100,0 >100,0

PL 240 932 Β1

Lp. Stosowane grapy aminowe (podstawnik R w ogólnym wzorze 1) MTT, IC» (μΜ) pHJ-tymidyna, ICW (μΜ) MCF-7 MDA-MB- 231 MCF-7 MDA-MB- 231 17 ί zz U O z >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 18 H -kk HoJę-OH H >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 19 H _N OH >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 20 CHj 55,0 50,0 57,3 59,0 21 CH, 64,0 30,0 63,8 36,0 22 H —N HaC^JęOH H >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 23 H N H >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 24 1 P ,Ν.. \ OMe >100,0 >100,0 >100,0 >100,0 25 HO >100,0 >100,0 >100,0 >100,0

PL 240 932 Β1

Description of the invention

The subject of the invention is new disulfonamide derivatives of 5-anilino-7-phenyl-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazines of the general formula 1, their preparation process and their applications related to antitumor, cytotoxic and / or cytostatic, in particular towards neoplastic cells, especially breast cancer cells, as well as pharmaceutical compositions containing them.

Sulfonamide derivatives of the 5-anilino-1,3-dimethyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazine system showing antitumor activity are known from the prior art [M. Mojzych, V. Subertova, A. Bielawska, K. Bielawski, V. Bazgier, K. Berka, T. Gucky, E. Fornal, V. Krystof, Eur. J. Med. Chem., 78, 217 (2014)], as well as methods of their synthesis are known [Pat RP-219242- (2014)].

In the patent no PL-198965 and in the literature (M. Mojzych, A. Rykowski; Heterocycles, 2004, 63, 1829-1838) the synthesis of 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1 / - / - pyrazolo [ 4,3-e] [1,2,4] triazine being a starting compound for the synthesis of new disulfonamides described by the general formula 1, while patent No. PL-219242 describes the synthesis and antitumor activity of 5-anilino-1,3-dimethyl sulfonamides -1 / - / - pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazines. These derivatives have a structure different from the derivatives that are the subject of the present patent application.

The object of the present invention was to provide new compounds suitable for the treatment of cancer, especially breast cancer, in particular compounds with cytotoxic, cytostatic and antiproliferative activity. It was also an object of the present invention to provide a method for the preparation of such compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of cancer, especially breast cancer.

These aims have been achieved with the solutions set out in the appended claims.

The present invention relates to new disulfonamide derivatives of 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] -triazine of the general formula 1:

where R is a substituent being one of the following groups: N -methylpiperazine, pyrrolidine, morpholine, piperidine, piperazine, homopiperazine, 2-morpholinoethylamine, 2-aminoethylamine, 2-aminoethanol, 2-amino-2-methyl-1,3 -propanediol, 2-amino-2-methyl-1-propanol, (S) - (+) - 1-amino-2-propanol, (R) - (-) - 1-amino-2-propanol, (S) - (+) - 2-amino-1-propanol, (R) - (-) - 2-amino-1-propanol, (S) - (+) - 2-amino-3-methyl-1-butanol, ( R) - (-) - 2-amino-3-methyl-1-butanol, (S) - (+) - 3-amino-1,2-propanediol, (R) - (-) - 2-amino-1 , 2-propanediol, (S) - (+) - leucinol, (R) - (-) - leucinol, S - (+) - 2-amino-1-butanol, R - (-) - 2-amino-1 -butanol, L-proline methyl ester and c) s-4-hydroxy-L-proline methyl ester.

The present invention also relates to a process for the preparation of new 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] -triazine disulfonamide derivatives of the general formula I, than the production methods known in the art.

The process for the preparation of disulfonamide derivatives of 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazine of general formula 1 according to the present invention consists in introducing into 5-anilino-1-phenyl -3-methyl-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazines with two identical chiral sulfonamide substituents. In the first step of the synthesis, the known 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazine is converted into the corresponding 4- [1- (4- (chlorosulfonyl ) phenyl) -3

Methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] -triazin-5-ylamino] benzene-1-chlorosulfone by reaction with chlorosulfonic acid. In the next step, the dichlorosulfone derivative thus obtained is reacted with an appropriate amine or enantiomer of a chiral amino alcohol or an amino acid ester. The appropriate amino derivative is selected from the group: N-methylpiperazine, pyrrolidine, morpholine, piperidine, piperazine, homopiperazine, 2-morpholinoethylamine, 2-aminoethylamine, 2-aminoethanol, 2-amino-2-methyl-1,3-propanediol, 2-amino-2 -methyl-1-propanol, (S) - (+) - 1-amino-2-propanol, (R) - (-) - 1-amino-2-propanol, (S) - (+) - 2-amino-1 -propanol, (R) - (-) - 2-amino-1-propanol, (S) - (+) - 2-amino-3-methyl-1-butanol, (R) - (-) - 2-amino -3-methyl-1-butanol, (S) - (+) - 3-amino-1,2-propanediol, (R) - (-) - 2-amino-1,2-propanediol, (S) - ( +) - leucinol, (R) - (-) - leucinol, S - (+) - 2-amino-1-butanol, R - (-) - 2-amino-1-butanol, L-proline methyl ester, and cis-4-hydroxy-L-proline methyl ester, depending on the desired end product of the production process according to the invention. This reaction yields the corresponding disulfonamide derivative of general formula I.

The 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo- [4,3-e] [1,2,4] triazine disulfonamide derivative of the general formula 1 according to the invention obtained in this way can be advantageously purified by chromatography on example using column liquid chromatography.

An example of the preparation of a representative disulfonamide derivative of 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazine of the general formula 1 according to the invention is shown in Example 1. The formulas of the groups used amine (R substituent in general formula 1) present in the new disulfonamide derivatives of 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazine of general formula 1 according to The invention is also shown in the accompanying Table 1. Table 1 also lists the corresponding melting points and yields for the compounds of the invention (compounds Nos. 1 to 25).

The invention further relates to the use of the new derivatives of general formula 1, obtained according to the present invention, for use as a medicament for the treatment of cancer, in particular for the treatment of breast cancer.

The invention also relates to the use of the new derivatives of general formula 1, obtained according to the present invention, for use as compounds with cytotoxic, cytostatic and antiproliferative activity.

As a result of the tests and studies carried out, it has been found that the compounds according to the invention, of the general formula I, have antitumor, cytotoxic, cytostatic and antiproliferative effects on neoplastic cells, in particular breast cancer cells, and can therefore be used as medicaments, in particular medicaments for the treatment of cancers, especially breast cancer. Due to their properties, the compounds according to the invention can also be used as cytostatic and / or cytotoxic agents. The biological test results for the compounds according to the invention are shown in the examples, in particular in Table 2 (compounds Nos. 1 to 25).

The subject of the invention is also a pharmaceutical composition, characterized in that it contains as an active substance new disulfonamide derivatives of 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] -triazine of the general formula I obtained according to the invention. The additives are pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients.

The disulfonamide derivatives of 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] -triazine of the general formula 1 according to the invention can be used in the use according to the invention in the form of pharmaceutical compositions. The pharmaceutical composition of the invention contains, in addition to the compound of the invention as active ingredient, a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient. These are known to those skilled in the art of the present invention and include the liquid or non-liquid base of the composition. The term "acceptable" as used herein means that the components of the pharmaceutical composition as used herein may be admixed with a pharmaceutically active ingredient as defined herein, i.e., one and / or more compounds of the invention and the other ingredient in such a way that no interaction would occur which would occur. under ordinary conditions of use, significantly reduce the pharmaceutical efficacy of the composition. The pharmaceutically acceptable carriers, diluents and excipients used must be of sufficiently high purity and low toxicity to render them suitable for administration to the subject to be treated, as is known in the art of the present invention. The pharmaceutical composition according to the invention can be manufactured in conventional manner. Methods for preparing pharmaceutical compositions containing at least one active ingredient and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient are known in the art of the present invention. Pharmaceutical compositions according to the invention containing at least one compound according to the invention as active ingredient can be used for the treatment of tumors, especially breast cancer.

PL 240 932 B1

The determination of the antitumor activity of the newly synthesized 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] -triazine disulfonamide derivatives of the general formula 1 according to the invention was performed in vitro.

Tests of antitumor activity were carried out using both MCF-7 estrogen-dependent breast cancer cells and MDA-MB-231 estrogen-independent breast cancer cells. Briefly, the cytotoxic and cytostatic activity of the disulfonamide derivatives of 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo (4,3-e] [1,2,4] triazines of the general formula 1 was measured on both cell lines. according to the invention, and their influence on DNA biosynthesis was also assessed. of the general formula 1 according to the invention was carried out according to the Carmichael method, determining the viability of cells using tetrazole salt (MTT) in the MTT test. It is a colorimetric test using the oxidoreductive activity of the mitochondria of cells. from yellow tetrazole salt to purple formazan. This conversion does not occur in dead cells. Viability of cells incubated in the presence of test disulfonamide derivatives 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyr the azolo [4,3-e] [1,2,4] triazines of general formula 1 according to the invention are represented as percentage of the control values. The study of the effect of 5-anilno-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazines of the general formula 1 according to the invention on the process of DNA biosynthesis was investigated on the DNA biosynthesis process. breast, by measuring the incorporation of [ 3 H] -thymidine into the DNA of the cancer cells tested. A detailed, exemplary description of the determination of the antitumor activity of the newly synthesized disulfonamide derivatives 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazine of the general formula 1 according to the invention under the conditions in In vitro, is presented in Example 2. Table 2 summarizes the results of testing the cytotoxic, cytostatic and antiproliferative activity of 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] disulfonamide derivatives. triazines of general formula I according to the invention.

The tests carried out have shown that the 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazine derivatives of the general formula 1 according to the invention show both cytostatic and cytostatic effect. The conducted studies have also shown that 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazine disulfonamide derivatives of the general formula 1 according to the invention show antitumor activity, both in the case of estrogen-dependent breast cancer (MCF-7) neoplastic cells and in the case of estrogen-dependent breast cancer neoplastic cells (MDA-MB-231). The tests carried out thus show that the 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazine disulfonamide derivatives of the general formula 1 according to the invention can be used as medicaments, especially anti-tumor drugs, for the treatment of tumors, especially breast cancer, both estrogen-dependent and estrogen-dependent. The tests carried out also show that the 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazine disulfonamide derivatives of the general formula 1 according to the invention can be used as agents cytostatic, and also as cytotoxic agents.

The present invention will be illustrated below by means of exemplary embodiments which, however, are not intended to limit the protection scope of the invention in any way, as defined in the claims. Unless otherwise indicated, known and / or commercially available equipment, methods, parameters, reaction conditions, reagent and kits were used as are commonly used in the art to which this invention belongs and as recommended by the manufacturers of the respective reagents and kits. .

Example 1

Preparation method 4- [1- (4- (chlorosulfonyl) phenyl) -3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] -triazin-5-ylamino] benzene-1-chlorosulfone

5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4 ] triazine (604 mg, 2 mmol). The reaction was initially run at 0-5 ° C and then at room temperature for 2 hours. After completion of the reaction, the reaction mixture was poured into ice water and extracted with methylene chloride (4 x 50 ml). The combined extracts were dried over anhydrous MgSO4. After methylene chloride was evaporated on an evaporator, the crude product was purified by column chromatography using methylene chloride as the eluent. The product is obtained in the form of a yellow solid.

PL 240 932 Β1

Yield 90%, yellow powder, mp 265-267 ° C

Ή NMR (DMSO) δ. 2.60 (s, 3H), 7.57 (d, 2H, J = 8.7 Hz), 7.79 (d, 2H, J = 4.1Hz), 7.81 (d, 2H, J = 4.1Hz), 8.22 (d, 2H, J = 8 7 Hz) "C NMR (DMSO) δ: 10.93, 117.49, 117.99, 126.28, 127.01, 13641, 138.42, 140.15, 142.04, 145.75, 146.11, 158.31.

Method for the production of disulfonamides

Dichlorosulfone (100 mg, 0.28 mmol) was dissolved in anhydrous acetonitrile (5 ml) and a 3.5 fold excess of the appropriate amine or chiral amino alcohol or L-proline derivatives (1 mmol) was added. The reaction was carried out at room temperature until the starting material disappeared completely (TLC control). After completion of the reaction, the solvent was evaporated and the crude reaction product was purified by column chromatography using CH2Cl2 / EtOH (25: 1) as the eluent. The sulfonamides obtained in this way are shown in Table 1.

ch.

Yield 66%, mp 300-305 ° C.

Ή NMR (DMSO) C: 1.00 (dd, 6H, J,. = 62Hz, Λ = 2.4Hz), 2.58-2.80 (m, 7H), 3.57-3.65 (m, 2H, J = 6.2Hz), 4.70 (bs, 2H), 7.41 (t, 1H, J = 6.2Hz), 7.67 (t, 1H, J = 6.2Hz), 7.78 (d, 2H. J = 9.1Hz), 8.05 (t, 3H, J = 91 Hz), 8.50 (d, 2H, J = 9.1 Hz) 11.01 (s, 1H).

In C NMR (DMSO): 10.98, 21.00. 50 15.65.18, 117.97, 118.67, 127.84. 128.45. 132.89. 137.30, 141.10, 143.52, 146.52. 158.12;

Table 1. 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazine disulfonamide derivatives according to the invention.

I_p. R Temp, Melting (° C) Performance (%) 1 - \ - CH 1 291-294 83 2 -about 332 58 3 - 364 60 4 - 330 80 5 —Η MH 338 75 6 278 55 7 —NH - CH, -CH., - l /) θ 244-248 68 8 —Nhch 2 ch 2 nh 3 240-243 42

PL 240 932 Β1

No. R Temp, Melting CC) Performance (%) 9 —NHCH.CH ? OH 295-300 55 10 CHjOH c Hj CH2OH 286 77 11 —N— | —CH, OH H CH, 252 67 12 H ~ N OH 300-305 66 13 _H 298 54 14 HO 272 65 15 HH - PCH, HO 268 70 16 _ {JH OH 255 53 17 H ΓΉ V CH, 280 70 18 H -N hc ^ N-oh H. 298 63 19 H -N. ΗΟ ^ ζξ-Η OH 305-310 60 twenty -Κ ^, ΟΗ CH, 120-124 63 21 H __- u 250 63 22 H —N HCl OH H 272-276 57 23 H —N H. 262 59 24 1 /? \ / Q * te 265-267 70 25 rM \ ___ / Ofcte HO 243-246 80

Example 2

The antitumor, cytostatic, cytotoxic and antiproliferative activity of the disulfonamide derivatives of 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1 / - / - pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazines according to the invention was tested in vitro in the following way.

PL 240 932 B1

MCF-7 estrogen-dependent breast cancer cells (ATCC, Manassas, VA, USA) were grown in DMEM (Dulbecco's Minimal Essential Medium) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS), 2 mmol / dm 3 glutamine, 50 U / cm 3 penicillin , 50 μg / cm 3 streptomycin at 37 ° C, in an atmosphere containing 5% CO2. The cells were then counted in a hemocytometer and transferred at 1 x 106 cells per "eye" in 1 ml of culture medium from "Costar" bottles (Sigma, USA), in which they were grown, to 6-hole "Nunc" plates (Wiesbaden, Germany ). A calcium-free phosphate buffer supplemented with 0.05% trypsin and 0.02% EDTA was used for the transfer of cells. After 48 hours, the culture medium was changed to DMEM medium that did not contain phenol red and fetal bovine serum (FBS). The cells prepared in this way were incubated with the test compounds for 24 hours and used for further experiments.

MDA-MB-231 estrogen-independent breast cancer cells (ATCC, Manassas, VA, USA) were cultured in DMEM (Dulbecco's Minimal Essential Medium) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS), 2 mmol / dm 3 glutamine, 50 U / cm 3 penicillins, 50 μg / cm 3 streptomycin at 37 ° C, in an atmosphere containing 5% CO2. The cells were then counted in a hemocytometer and transferred at 1 x 106 cells per "eye" in 1 ml of culture medium from "Costar" bottles (Sigma, USA), in which they were grown, to 6-hole "Nunc" plates (Wiesbaden, Germany ). A calcium-free phosphate buffer supplemented with 0.05% trypsin and 0.02% EDTA was used for the transfer of cells. After 48 hours, the culture medium was changed to DMEM medium that did not contain phenol red and fetal bovine serum (FBS). The cells prepared in this way were incubated with the test compounds for 24 hours and used for further experiments.

The cytotoxicity of the test compounds was measured by the method of Carmichael (J. Carmichael et al, Cancer Res., 1987, 47, 943-946), determining the viability of the cells using the tetrazole salt (MTT) in the MTT test. In living cells, under the influence of mitochondrial dehydrogenases, the applied dye is transformed into purple formazan. This transformation does not take place in dead cells. Cells were incubated for 24 hours in an incubator that provided the appropriate conditions, ie at 37 ° C, in an atmosphere containing 5% CO2, along with a medium containing various concentrations of test compounds. After 24-hour incubation, cells were washed three times (3 x 1 ml) with PBS. Then 1 ml of PBS and 50 μl of MTT at a concentration of 5 mg / cm 3 PBS were added and the incubation continued for 4 hours. After the required time had elapsed, the medium was removed, and 1 ml of 0.1 M hydrochloric acid in absolute isopropanol was added to the cells and the cells were allowed to stand for 10 minutes. In the cell lysate prepared in this way, the absorbance was measured at a wavelength of 630 nm. The absorbance result obtained in the control cell cultures was taken as 100%. In contrast, the viability of cells incubated in the presence of the test compounds are shown as a percentage of the control values. The significance level p was determined by the non-parametric Mann-Whitney U test using the SigmaStat program. The results with a significance level of p <0.05 were considered statistically significant. IC50 values (inhibitory concentration 50) for lines MCF-7 and MDA-MB-231 were determined on the basis of the analysis of the relationship between the concentrations of the tested compounds and the degree of cell survival.

Moreover, the influence of the compounds according to the invention on the process of DNA biosynthesis was assessed by measuring the incorporation of [ 3 H] -thymidine into the DNA of the test cells. Cells were incubated for 24 hours in an incubator that provided the appropriate conditions, ie at 37 ° C, in an atmosphere containing 5% CO2, along with a medium containing various concentrations of test compounds. Test compounds were added to the culture medium and incubated for 24 hours. After this time, the medium was replaced with fresh medium and 0.5 μCi [ 3 H] -thymidine (specific activity 6.7 Ci / mmol) was added to each hole and the cells were further incubated for 4 hours in an incubator with 5% CO2 at temperature 37 ° C. After this time, the medium was removed and the cell surface was washed three times (3 x 1 ml) with 0.05 M Tris-HCl, pH 7.4 containing 0.11 molar NaCl. The cells were then washed twice (2 x 1 ml) with 5% trichloroacetic acid (TCA) and dissolved in 1 ml of 0.1 molar NaOH containing 1% SDS. After 5 minutes, the resulting cell lysate was transferred to scintillation vials containing 2 ml of scintillation fluid and measured. radioactivity. The intensity of DNA biosynthesis in control cells, expressed as dpm of radioactive thymidine incorporated into DNA of tested cells, in terms of 1 x 106 cells, was assumed to be 100%. The values of the test samples are expressed as a percentage of the control value. The significance level p was determined by the non-parametric Mann-Whitney U test using the SigmaStat program. The results with a significance level of p <0.05 were considered statistically significant. On the basis of the obtained results, the IC50 values (inhibitory concentration 50 ) were determined.

PL 240 932 Β1

The results of the study of the antitumor, cytostatic, cytotoxic and antiproliferative activity against neoplastic cells of newly synthesized chiral 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazines against neoplastic cells are given below in Table 2. according to the invention.

Table 2. Cytotoxic and cytostatic activity of the novel chiral disulfonamide derivatives of general formula 1 after 24 hours of incubation.

No. Amine groups used (R substituent in general formula 1) MTT, IC a (μΜ) PH] -thymidine, IC »(pM) MCF-7 MDA-MB- 231 MCF-7 MDA-MB- 231 1 O Z φ 75.0 21.0 59.5 32.0 2 > 100.0 65.0 > 50.0 59.0 3 > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0 4 item no. item no. item no. item no. 5 —MH > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0 6 ę __ ^ nh item no. item no. item no. item no. 7 —MiCH / łę— O > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0

PL 240 932 Β1

No. Amine groups used (R substituent in general formula 1) MTT, ICso (μΜ) fH] -th idi na, IC «(μΜ) MCF-7 MDA-MB- 231 MCF-7 MDA-MB- 231 8 -NHCHjCHjNI-L, > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0 9 —NHCbLCH ^ OH > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0 10 CHjOH -rH CH a OH > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0 11 CK, N - CH, OH H 2 CHj > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0 12 H Ύ > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0 13 H 'H > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0 14 -V *. HCT > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0 15 hh HO > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0 16 -nh OH H ^ CH, > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0

PL 240 932 Β1

No. Used amine groups (R substituent in general formula 1) MTT, IC »(μΜ) pHJ-thymidine, IC W (μΜ) MCF-7 MDA-MB- 231 MCF-7 MDA-MB- 231 17 ίz with UO from >100.0>100.0>100.0> 100.0 18 H -kk HoJę-OH H>100.0>100.0>100.0> 100.0 19 H _ N OH>100.0>100.0>100.0> 100.0 20 CHj 55.0 50.0 57.3 59.0 21 CH, 64.0 30.0 63.8 36.0 22 H —N HaC ^ LH H> 100 , 0>100.0>100.0> 100.0 23 HN H>100.0>100.0>100.0> 100.0 24 1 P, Ν .. \ OMe>100.0> 100.0 >100.0> 100.0 25 HO>100.0>100.0>100.0> 100.0

Claims (34)

PL 240 932 Β1PL 240 932 Β1 Lp. Stosowane grupy aminowe (podstawnik R w ogólnym wzorze 1) MTT, łC^(pM) pHJ-tymidyna, IC^ (pM)No. Applied amino groups (R substituent in general formula 1) MTT, ŁC ^ (pM) pH 1 -thymidine, IC 2 (pM) MCF-7 MDA-MB- 231 MCF-7 MDA-MB- 231MCF-7 MDA-MB- 231 MCF-7 MDA-MB- 231 26 Roskowityna (wzorzec) 28,5 31,0 31,4 43,026 Roscovitine (pattern) 28.5 31.0 31.4 43.0 Przeprowadzane badania wykazały, że badane chiralne pochodne disulfonamidowe 5-anilino-1 -fenylo-3-metylo-1/-/-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny według wynalazku wykazują silne działania przeciwnowotworowe, cytostatyczne, cytotoksyczne i antyproliferacyjne. Dla komórek estrogenozależnych raka piersi MCF-7 wartość ICso dla związku o najsilniejszych właściwościach hamujących wzrost komórek zmierzona metodą Carmichael’a wynosiła 5.2 pM (związek numer 20). Ponadto przeprowadzone badania wskazały, że badane chiralne pochodne disulfonamidowe 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny według wynalazku w znacznym stopniu obniżały przeżywalność komórek estrogenoniezależnego raka sutka (MDA-MB-231). W tym przypadku wartość ICso dla najsilniejszego związku wynosiła 21 pM (związek numer 1).The conducted research has shown that the tested chiral disulfonamide derivatives 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1 / - / - pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazines according to the invention show strong antitumor and cytostatic effects , cytotoxic and antiproliferative. For MCF-7 breast cancer estrogen dependent cells, the IC 50 value for the compound with the most potent cell growth inhibitory properties as measured by the Carmichael method was 5.2 pM (Compound # 20). Moreover, the conducted studies showed that the tested chiral disulfonamide derivatives 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazines according to the invention significantly decreased the survival of estrogen-independent breast cancer cells ( MDA-MB-231). In this case the IC 50 value for the strongest compound was 21 pM (Compound # 1). Przeprowadzone badania wykazały także, że wszystkie badane chiralne pochodne disulfonamidowe 5-anilino1-fenylo-3-metylo-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny według wynalazku hamują biosyntezę DNA w komórkach nowotworowych estrogenoniezależnego raka sutka (MDA-MB-231). Zaobserwowano, że wraz ze wzrostem stężenia testowanych związków maleje stopień wbudowywania [3H]-tymidyny do DNA badanych komórek nowotworowych. Wartość ICso dla związku, który w największym stopniu hamował wbudowywanie pH]-tymidynydo DNA komórek estrogenoniezależnego raka sutka (MDA-MB-231) wynosiła 32 pM (związek numer 1).The conducted studies also showed that all tested chiral disulfonamide derivatives 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazines according to the invention inhibit DNA biosynthesis in cancer cells of estrogen-independent breast cancer (MDA -MB-231). It was observed that the incorporation of [ 3 H] -thymidine into the DNA of the cancer cells tested decreases with the increase of the concentration of the tested compounds. The IC 50 value for the compound that most inhibited incorporation of pH] -thymidine into the DNA of estrogen-independent breast cancer cells (MDA-MB-231) was 32 pM (Compound # 1). Przeprowadzone badania wykazały, że nowe chiralne pochodne disulfonamidowe 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny według wynalazku wykazują wysoką aktywność przeciwnowotworową, cytostatyczną, cytotoksyczną i antyproliferacyjną w stosunku do komórek nowotworowych, raka sutka, a zatem mogą być stosowane w leczeniu nowotworów, w szczególność raka sutka.The conducted studies have shown that the new chiral disulfonamide derivatives 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazines according to the invention show high antitumor, cytostatic, cytotoxic and antiproliferative activity in against neoplastic cells, breast cancer, and therefore can be used in the treatment of neoplasms, in particular breast cancer. Zastrzeżenia patentowePatent claims 1. Nowe disulfonamidowe pochodne 5-anilino-7-fenylo-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazyny o ogólnym wzorze 1:1. New disulfonamide derivatives of 5-anilino-7-phenyl-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazine of general formula 1: Wzór 1Formula 1 PL 240 932 B1 w którym R oznacza grupę: N-metylopiperazynową, pirolidynową, morfolinową, piperydynową, piperazynową, homopiperazynową, 2-morfolinoetyloaminową, 2-aminoetyloaminową, 2-aminoetanoIową, 2-amino-2-metylo-1,3-propanodiolową, 2-amino-2-metylo-1-propanolową, (S)-(+)-1-amino-2-propanolową, (R)-(-)-1-amino-2-propanolową, (S)-(+)-2-amino-1-propanolową, (R)-(-)-2-amino-1-propanolową, (S)-(+)-2-amino-3-metylo-1-butanolową, (R)-(-)-2-amino-3-metylo-1-butanolową, (S)-(+)-3-amino-1,2-propanediolową, (R)-(-)-2-amino-1,2-propanediolową, (S)-(+)-leucinolową, (R)-(-)-leucinolową, S-(+)-2-amino-1-butanolową, R-(-)-2-amino-1-butanolową, ester metylowy L-proliny i ester metylowy cis-4-hydroksy- L-proliny.In which R is: N-methylpiperazine, pyrrolidine, morpholine, piperidine, piperazine, homopiperazine, 2-morpholinoethylamine, 2-aminoethylamine, 2-aminoethanol, 2-amino-2-methyl-1,3-propanediol, 2-amino-2-methyl-1-propanol, (S) - (+) - 1-amino-2-propanol, (R) - (-) - 1-amino-2-propanol, (S) - (+ ) -2-amino-1-propanol, (R) - (-) - 2-amino-1-propanol, (S) - (+) - 2-amino-3-methyl-1-butanol, (R) - (-) - 2-amino-3-methyl-1-butanol, (S) - (+) - 3-amino-1,2-propanediol, (R) - (-) - 2-amino-1,2- propanediol, (S) - (+) - leucinol, (R) - (-) - leucinol, S - (+) - 2-amino-1-butanol, R - (-) - 2-amino-1-butanol, L-proline methyl ester and cis-4-hydroxy-L-proline methyl ester. 2. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę N-metylopiperazynową.2. A novel derivative according to claim 1 The method of claim 1, wherein R is N-methylpiperazine. 3. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę pirolidynową.3. A novel derivative according to claim 1 The compound of claim 1, wherein R is a pyrrolidine group. 4. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę morfolinową.4. A novel derivative according to claim 1 3. The compound of claim 1, wherein R is morpholino. 5. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę piperydynową.5. A novel derivative according to claim 1 The process of claim 1, wherein R is piperidino. 6. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę piperazynową.6. A novel derivative according to claim 1, 3. The process of claim 1, wherein R is piperazine. 7. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę homopiperazynową.7. A novel derivative according to claim 1 The method of claim 1, wherein R is a homopiperazine group. 8. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę 2-morfolinoetyloaminową.8. A novel derivative according to claim 1 2. The composition of claim 1, wherein R is 2-morpholinoethylamino. 9. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę 2-aminoetyloaminową.9. A novel derivative according to claim 1 2. The process of claim 1, wherein R is 2-aminoethylamino. 10. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę 2-aminoetanolową.10. A novel derivative according to claim 1 2. The process of claim 1, wherein R is 2-aminoethanol. 11. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę 2-amino-2-metylo-1,3-propanodiolową.11. A novel derivative according to claim 1 2. The method of claim 1, wherein R is 2-amino-2-methyl-1,3-propanediol. 12. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę 2-amino-2-metylo1-propanolową.12. A novel derivative according to claim 1, 2. The process of claim 1, wherein R is 2-amino-2-methyl-1-propanol. 13. Nowa pochodna według, zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę (S)-(+)-1-amino-2-propanolową.13. A novel derivative according to claim 1, The method of claim 1, wherein R is (S) - (+) - 1-amino-2-propanol. 14. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę (R)-(-)-1-amino-2propanolową.14. A novel derivative according to claim 1, The method of claim 1, wherein R is (R) - (-) - 1-amino-2-propanol. 15. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę (S)-(+)-2-amino-1propanolową.15. A novel derivative according to claim 1, The method of claim 1, wherein R is (S) - (+) - 2-amino-1-propanol. 16. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę (R)-(-)-2-amino-1propanolową.16. A novel derivative according to claim 16, The method of claim 1, wherein R is (R) - (-) - 2-amino-1-propanol. 17. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę (S)-(+)-2-amino-3metylo-1-butanolową.17. A novel derivative according to claim 17 2. The process of claim 1, wherein R is (S) - (+) - 2-amino-3-methyl-1-butanol. 18. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę (R)-(-)-2-amino-3metylo-1-butanolową.18. A novel derivative according to claim 18, The method of claim 1, wherein R is (R) - (-) - 2-amino-3-methyl-1-butanol. 19. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę (S)-(+)-3-amino-1,2propanodiolową.19. A novel derivative according to claim 1 3. The method of claim 1, wherein R is (S) - (+) - 3-amino-1,2-propanediol. 20. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę (R)-(-)-3-amino-1,2propanodiolową.20. A novel derivative according to claim 1, 3. The method of claim 1, wherein R is (R) - (-) - 3-amino-1,2-propanediol. 21. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę (S)-(+)-leucinolową.21. A novel derivative according to claim 1, The method of claim 1, wherein R is (S) - (+) - leucinol. 22. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę (R)-(-)-leucinolową.22. A novel derivative according to claim 1, The method of claim 1, wherein R is (R) - (-) - leucinol. 23. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę S-(+)-2-amino-1butanolową.23. A novel derivative according to claim 1, 2. The process of claim 1, wherein R is S - (+) - 2-amino-1-butanol. 24. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę R-(-)-2-amino-1butanolową.24. A novel derivative according to claim 24 2. The process of claim 1, wherein R is R - (-) - 2-amino-1-butanol. 25. Nowa pochodna według-zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę estru metylowego L-proliny.25. A novel derivative according to claim 1 2. The process of claim 1, wherein R is L-proline methyl ester. 26. Nowa pochodna według zastrz. 1, znamienna tym, że R oznacza grupę estru metylowego cis-4-hydroksy-L-proliny.26. A novel derivative according to claim 1 3. The process of claim 1, wherein R is cis-4-hydroxy-L-proline methyl ester. 27. Sposób otrzymywania nowych pochodnych o ogólnym wzorze 1, znamienny tym, że 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-1 H-pirazolo[4,3-e][1,2,4]triazynę poddaje się reakcji z kwasem chlorosulfonowym początkowo w temperaturze 0-5°C, a następnie proces kontynuuje w temperaturze pokojowej przez 2 godziny i tak otrzymaną dichlorosuIfonową pochodną poddaje się reakcji z amoniakiem, aminami lub aminoalkoholami w bezwodnym: acetonitrylu i otrzymuje się nowe pochodne opisane wzorem ogólnym 1.27. A process for the preparation of new derivatives of general formula 1, characterized in that 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazolo [4,3-e] [1,2,4] triazine is reacted with with chlorosulfonic acid initially at 0-5 ° C, then the process is continued at room temperature for 2 hours and the dichlorosulfonic derivative thus obtained is reacted with ammonia, amines or amino alcohols in anhydrous acetonitrile to obtain new derivatives described by the general formula 1. PL 240 932 B1PL 240 932 B1 28. Sposób wytwarzania według zastrz. 27, znamienny tym, że ponadto otrzymaną pochodną disulfonamidową 5-anilino-1-fenylo-3-metylo-pirazoIo[4,3-e][1,2,4]triazyny oczyszcza się chromatograficznie, korzystnie z zastosowaniem chromatografii cieczowej.The production method according to claim 28 A process as claimed in 27, characterized in that the 5-anilino-1-phenyl-3-methyl-pyrazole [4,3-e] [1,2,4] triazine disulfonamide derivative obtained is further purified by chromatography, preferably by liquid chromatography. 29. Pochodne, jak określono w dowolnym z zastrz. od 1 do 26, do zastosowania jako lek.29. Derivatives as defined in any one of claims 1 to 26, for use as a medicament. 30. Pochodna, jak określono w dowolnym z zastrz. od 1 do 26, do zastosowania jako lek do leczenia nowotworu.30. A derivative as defined in any one of claims 1 to 26, for use as a medicament for treating cancer. 31. Pochodna, jak określono w dowolnym z zastrz. od 1 do 26, do zastosowania jako lek do leczenia raka sutka.31. A derivative as defined in any one of claims 1 to 26, for use as a medicament for treating breast cancer. 32. Pochodna, jak określono w dowolnym z zastrz. od 1 do 26, do zastosowania jako środek cytostatyczny.32. A derivative as defined in any one of claims 1-26, for use as a cytostatic agent. 33. Pochodna, jak określono w dowolnym z zastrz. od 1 do 26, do zastosowania jako środek cytotoksyczny.33. A derivative as defined in any one of claims 1 through 26, for use as a cytotoxic agent. 34. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera pochodną, jak określono w jednym z zastrz. 1 do 26, oraz farmaceutycznie akceptowalny nośnik, rozcieńczalnik lub zaróbkę.34. A pharmaceutical composition comprising a derivative as defined in any one of claims 1 to 4. 1 to 26, and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent, or excipient.
PL434721A 2020-07-17 2020-07-17 New disulphonamide derivatives of 5-aniline-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazol[ 4,3-e][1,2,4]-triazine with anti-tumor properties, method for synthetizing them, pharmaceutical compositions that contain these derivatives and their first medical application PL240932B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL434721A PL240932B1 (en) 2020-07-17 2020-07-17 New disulphonamide derivatives of 5-aniline-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazol[ 4,3-e][1,2,4]-triazine with anti-tumor properties, method for synthetizing them, pharmaceutical compositions that contain these derivatives and their first medical application

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL434721A PL240932B1 (en) 2020-07-17 2020-07-17 New disulphonamide derivatives of 5-aniline-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazol[ 4,3-e][1,2,4]-triazine with anti-tumor properties, method for synthetizing them, pharmaceutical compositions that contain these derivatives and their first medical application

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL434721A1 PL434721A1 (en) 2022-01-24
PL240932B1 true PL240932B1 (en) 2022-07-04

Family

ID=80111535

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL434721A PL240932B1 (en) 2020-07-17 2020-07-17 New disulphonamide derivatives of 5-aniline-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazol[ 4,3-e][1,2,4]-triazine with anti-tumor properties, method for synthetizing them, pharmaceutical compositions that contain these derivatives and their first medical application

Country Status (1)

Country Link
PL (1) PL240932B1 (en)

Also Published As

Publication number Publication date
PL434721A1 (en) 2022-01-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2020210312B2 (en) Certain chemical entities, compositions, and methods
EP3530656B1 (en) 2-substituted aromatic ring-pyrimidine derivative, and preparation and application thereof
JP6951767B2 (en) Heterocyclic compounds used as anti-cancer drugs
AU2018275277B2 (en) Pharmaceutically acceptable salt of EGFR inhibitor, crystal form thereof, preparation method therefor and application thereof
ES2909301T3 (en) Novel cyclin-dependent kinase CDK9 inhibitor
RU2662713C2 (en) Pyridopyrimidine compound, method for production, pharmaceutical composition and application of indicated compounds
AU2016302384A1 (en) N-(pyridin-2-yl)-4-(thiazol-5-yl)pyrimidin-2-amine derivatives as therapeutic compounds
EP3592745B1 (en) Pyrimidopyrimidinones useful as wee-1 kinase inhibitors
Mathew et al. Novel pyridopyrazine and pyrimidothiazine derivatives as FtsZ inhibitors
KR20080070079A (en) Pyrido-, pyrazo- and pyrimido-pyrimidine derivatives as mtor inhibitors
CN101250187B (en) Fatty amido substituted methylindole quinoline derivatives as well as preparation method and use thereof as anti-tumour drugs
CZ306598B6 (en) A method of preparation and purification of new and known polymorphs and dasatinib solvates
JP2010517989A (en) 5,6,7,8-tetrahydropteridine derivatives as HSP90 inhibitors
US20170015672A1 (en) Substituted pyrrolo[2,3-d]pyrimidines for selectively targeting tumor cells with fr-alpha and fr-beta type receptors
PL240932B1 (en) New disulphonamide derivatives of 5-aniline-1-phenyl-3-methyl-1H-pyrazol[ 4,3-e][1,2,4]-triazine with anti-tumor properties, method for synthetizing them, pharmaceutical compositions that contain these derivatives and their first medical application
WO2018081211A1 (en) Deuterated 7-cyclopentyl-n, n-dimethyl-2-((5-(piperazin-1-yl)pyridin-2-yl)amino)-7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimdine-6-carboxamide
CZ266991A3 (en) DERIVATIVES OF 6-|X-(2-HYDROXYETHYL)AMINOALKYL¨-5,11-DIOXO-5,6-DIHYDRO-11H-INDENO(1,2 -c)-ISOQUINOLINE AND PROCESS FOR PREPARING THEREOF
PL237895B1 (en) Chiral sulfonamide derivatives of 5-phenyl-7-methyl-pyrazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazine, method of their preparation, their uses and a pharmaceutical composition containing a chiral sulfonamide derivative of 5-phenyl-7-methyl-pyrazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazine
PL237894B1 (en) New sulfonamide derivatives of 5-phenyl-7-methyl-pyrazolo[4,3-e]tetrazolo[4,5-b][1,2,4]triazine, method of their preparation, their uses and a pharmaceutical composition containing them
WO2013144532A1 (en) 3 -cyano- 5 -arylamino-7 -cycloalkylaminopyrrolo [1, 5 -a] pyrimidine derivatives and their use as antitumor agents
CZ308158B6 (en) 2-Morpholino-3,4-dihydroquinazolin-4-one derivative with aromatic substituents at the 8- position, preparation and use
CA3039191A1 (en) Aziridinyl and amino dimeric naphthoquinone compounds and use for acute myeloid leukemia
CS271331B2 (en) Method of mitomycin&#39;s n7-amidino-substituted derivatives production
CA3068357C (en) New salt of n-(2,6-diethylphenyl)-8-({4-[4-(dimethylamino)piperidin-1-yl]-2-methoxyphenyl}amino)-1-methyl-4,5-dihydro-1h-pyrazolo[4,3-h]quinazoline-3-carboxamide, its preparation and formulations containing it
WO2017153521A1 (en) Pyridine derivatives and thier use in the treatment of cancer and hemoglobinopathies