PL239308B1 - Pochodna kwasu usninowego, sposób otrzymywania pochodnej kwasu usninowego i medyczne wykorzystanie pochodnej kwasu usninowego w terapii nowotworów oraz zastosowanie do indukcji stresu związanego z retikulum endoplazmatycznym - Google Patents

Pochodna kwasu usninowego, sposób otrzymywania pochodnej kwasu usninowego i medyczne wykorzystanie pochodnej kwasu usninowego w terapii nowotworów oraz zastosowanie do indukcji stresu związanego z retikulum endoplazmatycznym Download PDF

Info

Publication number
PL239308B1
PL239308B1 PL436476A PL43647620A PL239308B1 PL 239308 B1 PL239308 B1 PL 239308B1 PL 436476 A PL436476 A PL 436476A PL 43647620 A PL43647620 A PL 43647620A PL 239308 B1 PL239308 B1 PL 239308B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
usnic acid
acid derivative
cells
nhpyusnc
compound
Prior art date
Application number
PL436476A
Other languages
English (en)
Other versions
PL436476A1 (pl
Inventor
Anna Herman-Antosiewicz
Tristan Reekie
Mariola Gimła
Kamil Ryś
Agnieszka Pyrczak-Felczkowska
Anna Pawlik
Malinowska Marcelina
Aleksandra Hać
Beata Guzow-Krzemińska
Beata Guzowkrzemińska
Original Assignee
Gdanski Univ Medyczny
Univ Australian National
Univ Gdanski
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Gdanski Univ Medyczny, Univ Australian National, Univ Gdanski filed Critical Gdanski Univ Medyczny
Priority to PL436476A priority Critical patent/PL239308B1/pl
Publication of PL436476A1 publication Critical patent/PL436476A1/pl
Publication of PL239308B1 publication Critical patent/PL239308B1/pl

Links

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Przedmiotem wynalazku jest nowy związek, pochodna kwasu usninowego otrzymana na drodze syntezy chemicznej. Wynalazek dotyczy również zastosowania medycznego związku wobec nowotworów pochodzących z różnych tkanek. Związek stanowi również środek do zastosowania jako środek in vitro w badaniach biologii komórek do indukcji stresu związanego z retikulum endoplazmatycznym, jako odczynnik do zastosowania in vitro do badań laboratoryjnych nad molekularnym mechanizmem odpowiedzi na ten stres.
Choroby nowotworowe stanowią jedną z czołowych przyczyn zgonów ludzi na całym świecie, stąd ciągle poszukuje się skutecznych form zapobiegania im i ich leczenia. W działania te wpisuje się opracowanie nowych leków opartych na strukturze znanych związków pochodzenia naturalnego. Porosty są bogatym źródłem substancji o potencjalnym działaniu przeciwnowotworowym.
Zespół naukowy wynalazku posiada długoletnie doświadczenie w dziedzinie chorób nowotworowych i poszukiwaniu związków naturalnych o oczekiwanym działaniu biologicznym. Obecnie skupił prace badawcze nad kwasem usninowym, który występuje w postaci dwóch enancjomerów: kwas (+) usninowy oraz kwas (-) usninowy, różniących się położeniem grupy metylowej w pozycji 9b. Wykazuje on szereg interesujących właściwości, m.in. aktywność przeciwbakteryjną, przeciwwirusową, przeciwgrzybiczą, a także cytostatyczną i cytotoksyczną względem komórek nowotworowych - zarówno w modelach in vitro, jak i in vivo, co opisano w Ingolfsdottir K: Usnic acid. Phytochemistry 2002, 61(7):729-736; Araujo AA, de Melo MG, Rabelo TK, Nunes PS, Santos SL, Serafini MR, Santos MR, Quintans-Junior LJ, Gelain DP: Review of the biological properties and toxicity of usnic acid. Natural Product Research 2015, 29(23):2167-2180; Galanty A, Pasko P, Podolak I: Enantioselective activity of usnic acid: a comprehensive review and future perspectives. Phytochemistry Reviews 2019, 18; Luzina OA, Salakhutdinov NF: Biological activity of usnic acid and its derivatives: Part 2. Effects on higher organisms. Molecular and physicochemical aspects. Russian Journal of Bioorganic Chemistry 2016, 42:249-268.
Opisane w literaturze działanie cytotoksyczne UA objawia się głównie przy stosunkowo wysokich jego stężeniach. Dla przykładu, wartości IC50 po 72-godzinnym traktowaniu (+)-UA komórek nowotworu jajnika (A2780), szyjki macicy (HeLa), piersi (MCF-7 i SKBR-3), okrężnicy (HT29), białaczki (HL60 i Jurkat) wynosiły od 49 μM (HL60) do 199 μM (SKBR-3). Aby nieodwracalnie zahamować zdolność do podziałów tych komórek (tzw. klonogeniczność) traktowano je 200 μM kwasem (+) usninowym przez 48 godzin - Backorova M, Jendzelovsky R, Kello M, Backor M, Mikes J, Fedorocko P: Lichen secondary metabolites are responsible for induction of apoptosis in HT-29 and A2780 human cancer cell lines. Toxicology in vitro 2012, 26(3):462-468.
Niekorzystne jest również to, że związek ten nie jest selektywny w stosunku do komórek nowotworowych i tak dla przykładu IC50 dla komórek nowotworowych (MM98 i A431) wynosiło 23-72 μM, a dla prawidłowych keratynocytów (HaCaT) - bardzo podobnie, tj. 35-76 μM - Burlando B, Ranzato E, Volante A, Appendino G, Pollastro F, Verotta L: Antiproliferative effects on tumour cells and promotion of keratinocyte wound healing by different lichen compounds. Planta Medica 2009, 75(6):607-613. Jedynie odmienne wyniki opisano w Brisdelli F, Perlili M, Sellitri D, Piovano M, Garbarino JA, Nicoletti M, Bozzi A, Amicosante G, Celenza G: Cytotoxic activity and antioxidant capacity of purified lichen metabolites: an in vitro study. Phytotherapy Research 2013, 27(3):431-437, gdzie opisano komórki traktowane kwasem (+) usninowym izolowanym z Cladonia lepidophora. Wartości IC50, jakie wyznaczono w tej pracy dla komórek nowotworu piersi (MCF-7), szyjki macicy (HeLa) i okrężnicy wynosiły odpowiednio około 76, 24 i 18 μΜ, a dla prawidłowych embrionalnych fibroblastów myszy - powyżej 100 μM. Jednak szereg prac wskazuje na silne hepatotoksyczne działanie kwasu usninowego. Dla przykładu, w: Han D, Matsumaru K, Rettori D, Kaplowitz N: Usnic acid-induced necrosis of cultured mouse hepatocytes: inhibition of mitochondrial function and oxidative stress. Biochemical Pharmacology 2004, 67(3):439-451, traktowanie hepatocytów mysich kwasem usninowym już w stężeniu 5 μΜ spowodowało śmierć 98% komórek. Opisano też w: Da Silva Santos NP, Nascimento SC, W anderley MS, PontesFilho NT, da Silva JF, de Castro CM, Pereira EC, da Silva NH, Honda NK, Santos-Magalhaes NS: Nanoencapsulation of usnic acid: An attempt to improve antitumour activity and reduce hepatotoxicity. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 2006, 64(2): 154-160, uszkodzenie wątroby (rejony nekrotyczne w tych organach, podwyższony poziom transaminaz we krwi) u myszy, którym podano dootrzewnowo kwas usninowy w dawce 15 mg/kg/dzień przez 15 dni.
PL 239 308 Β1
Wynalazek obejmuje sposób otrzymania - syntezy chemicznej, nowego związku według wynalazku - pochodnej kwasu usninowego, nazywanego dalej jako NHPYUSNC (ang. NH pyrazole uśnie acid derivative, pochodna NH-pirazolowa kwasu usninowego) i pokazanego jako wzór 1 i jego zastosowanie medyczne oraz jako środek do badań in vitro. Na wzorze na schemacie 1 - gdzie pokazano sposób otrzymania - pokazano również kwas usninowy. Pochodna NHPYUSNC to syntetyczny związek (S)-7-acetylo-8,10-dihydroksy-3,9,10b-trimetylo-2,10b-dihydro-4/-/-benzofuro[2,3-g]indazol-4-on). Już w niskich stężeniach wykazuje on antyproliferacyjne działanie wobec komórek nowotworowych pochodzących z różnych organów, takich jak gruczoł sutkowy, płuco, wątroba, trzustka, szyjka macicy. Ponadto, związek ten wywołuje charakterystyczne zmiany w komórkach nowotworowych polegające na ich silnej wakuolizacji związanej ze stresem retikulum endoplazmatycznego. Ponieważ ten rodzaj stresu leży u podłoża wielu chorób (w tym chorób nowotworowych), a jego mechanizm nie jest do końca poznany, związek ten ma zastosowanie jako środek laboratoryjny in vitro do zastosowania w badaniach biologii komórek in vitro do indukcji tej charakterystycznej odpowiedzi fenotypowej.
Pochodna według wynalazku ma działanie antyproliferacyjne (hamuje podziały i indukuje śmierć komórek nowotworowych), ale i hamuje ich migrację (potencjalne działanie anty metastatyczne).
Wzór 1
Wynalazek pokazano na wzorze, schemacie, jak i w przykładzie. Na fig. 1-2 pokazano potwierdzenie otrzymania związku, zaś na fig. 3-7 pokazano wyniki opisanych badań potwierdzających aktywności związku według wynalazku.
Przykład
Kwas usninowy - Wzór 1
Schemat 1
Sposób otrzymywania nowego związku NHPYUSNC - schemat 1:
- do zawiesiny (+)-kwasu usninowego (1 równoważnik) w bezwodnym etanolu (roztwór o stężeniu 0.1 M) ogrzanej do wrzenia, dodawano hydrat hydrazyny (1,1 równoważnik) i mieszano pod chłodnicą zwrotną przez 18 godz.
po ochłodzeniu usunięto rozpuszczalnik z wykorzystaniem wyparki
PL 239 308 B1
- uzyskany osad był oczyszczony za pomocą chromatografii kolumnowej typu flash, gdzie fazę ruchomą stanowił octanu etylu w heksanie (3:7 - 1:1), uzyskując pożądany produkt w postaci żółtego krystalicznego ciała stałego (stopień czystości 78%).
Widmo 1H NMR zarejestrowano przy 300 MHz, natomiast widmo 13C NMR przy 75 MHz za pomocą spektrometru Bruker 300. Widma pokazano na fig. 1 i fig. 2. Przesunięcia chemiczne (δ) podano w częściach na milion (ppm), a jako wzorca wewnętrznego przy 0 ppm użyto tetrametylosilanu (TMS). Wszystkie stałe sprzężenia (J) podano w hercach, multipletowość sygnałów określano następująco: s (singlet), d (dublet), dd (dublet dubletów), t (tryplet), dt (dublet trypletów), q (kwartet), m (multiplet). Widma mas o niskiej i wysokiej rozdzielczości zostały zarejestrowane za pomocą spektrometru Bruker (USA) Daltronics BioApex II z jonizacją przez elektrorozpylanie (ESI) i 7T nadprzewodzącym magnesem 7T.
Identyfikacja otrzymanego związku:
NHPYUSNC [(S)-7-acetylo-8,10-dihydroksy-3,9,10b-trimetylo-2,10b-dihydro-4H-benzofuro[2,3-g]indazol-4-on)], masa molowa 340,335.
Właściwości: jasno żółte ciało stałe, o widmie:
1 HNMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 13.32 (s, 1H), 10.60 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 5.98 (s, 1H), 2.73 (s, 3H), 2.68 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.73 (s, 3H); 13CNMR(101 MHz, CDCI3) δ 200.96, 183.30, 181.29, 163.30, 157.27, 156.47, 156.20, 142.68, 111.95, 108.60, 105.77, 105.36, 102.10, 45.68, 33.52, 31.34, 10.87, 7.51; (+)-HRESIMS m/z 341.1141 [M+H]+(obliczono dla C18H17N2O5 341.1137).
Badania aktywności biologicznej związku będącego przedmiotem wynalazku.
Przetestowano działanie antyproliferacyjne substancji NHPYUSNC na wielu liniach nowotworowych pochodzących z nowotworów gruczołu sutkowego (linie MCF-7, T47D, SKBR-3, MDA MB 231 różniące się statusem receptorów dla estrogenu i czynników wzrostu), wątroby (HepG2), płuca (A549), szyjki macicy (linie HeLa, CaSki, ME 180, C-33A różniące się statusem receptorów dla czynników wzrostu i obecnością genomu HPV), trzustki (linie PANC-1 i MIA PaCa-2 różniące się m.in. statusem receptorów dla hormonów) oraz komórek prawidłowych z nabłonka gruczołu sutkowego (HB-2) i fibroblastów skóry (HDFa).
Testy cytotoksyczności MTT komórek traktowanych związkiem NHPYUSNC wykazały, że hamuje on żywotność badanych linii komórek nowotworowych w sposób zależny od użytego stężenia. Jednocześnie prawidłowe komórki były znacznie bardziej oporne na testowany związek, co pokazano na fig. 3 i w Tabeli 1.
Wykresy przedstawiają żywotności komórek (szacowanych względem kontroli, która stanowi 100%) wybranych linii nowotworowych w zależności od stężenia NHPYUSNC i czasu ekspozycji. Komórki nowotworowe gruczołu sutkowego HER2-dodatnie (SKBR-3), szyjki macicy (HeLa), płuca (A549), wątroby (HepG2) oraz prawidłowe komórki epitelialne gruczołu sutkowego (HB-2) i fibroblasty skóry (HFDa) były traktowane NHPYUSNC w stężeniu 50, 100, 250, 500 lub 1000 ng/ml, a trzustki (PANC-1 i MIA PaCa-2) - dodatkowo 2500 i 5000 ng/ml przez 24 lub 48 godzin. Następnie do pożywki dodano roztworu bromku 3-(4,5-dimetylotiazol-2-ilo)-2,5-difenylotetrazoliowego (MTT) do stężenia końcowego 1 mg/ml i inkubowano przez 3 godziny. Związek ten jest metabolizowany do formazanu jedynie przez aktywne metabolicznie, żywe komórki. Po zakończeniu inkubacji pożywkę usuwano, a powstałe na dnie dołków kryształy formazanu rozpuszczano w 100% DMSO. Absorbancję powstałego roztworu mierzono spektrofotometrycznie w czytniku płytek wielodołkowych przy fali o długości 570 nm oraz fali o długości 660 nm, służącej jako referencja.
Wartości IC50 dla wszystkich testowanych linii zestawiono w Tabeli 1. Warto podkreślić, że w badanym zakresie stężeń nie ustalono wartości IC50 w przypadku strukturalnie podobnego kwasu usninowego, co wskazuje na dużo silniejsze działanie cytotoksyczne związku NHPYUSNC.
PL 239 308 Β1
Tabela 1. Wartości ICso (pg/ml) dla NHPYUSNC po 24 i 48 godzinach ekspozycji względem linii komórek nowotworowych różnego pochodzenia oraz zdrowych komórek ludzkich; n. w. - nie wyznaczono w testowanym przedziale stężeń. Wartości te były wyznaczone na podstawie wyników testów MTT w programie GraphPad Prism.
Pochodzenie Linia komórkowa IC50 po 24 godz. IC50 po 48 godz.
Komórki nowotworowe
Gruczoł piersiowy MCF-7 0,46 0,5
T47D 0,35 0,24
SKBR-3 0,46 0,27
MDAMB 231 0,32 0,19
Płuco A549 0,34 0,41
Wątroba HepG2 0,30 0,29
Szyjka macicy HeLa 0,43 0,33
Ca Ski 0,53 0,51
ME 180 0,45 0,38
C-33A 0,56 0,44
Trzustka PANC-1 0,94 0,69
Mia PaCa-2 0,97 0,71
Komórki prawidłowe
Gruczoł piersiowy HB-2 n.w. 1.3
Skóra HDFa n w. 0,94
Testy toksykologiczne przy użyciu myszy szczepu BALB/c wykazały również, że pochodna NHPYUSNC jest mniej toksyczna dla zwierząt niż kwas (+) usninowy: MTD (maksymalna tolerowana dawka) dla NHPYUSNC została wyznaczona jako 400 mg/kg masy ciała, natomiast dla (+)- UA - 200 mg/kg masy ciała przy podaniu doustnym.
Mechanizm działania związku NHPYUSNC został dokładniej zbadany na modelu komórek raka piersi (stosunkowo wrażliwe na badany związek i istnieje dużo danych odnośnie działania kwasu usninowego) oraz komórek raka trzustki (były stosunkowo mniej wrażliwe niż komórki nowotworowe z innych narządów na badaną pochodną). Antyproliferacyjne działanie NHPYUSNC wiązało się z zahamowaniem cyklu podziałowego w fazie G0/G1, co pokazano w Tabeli 2 oraz śmiercią komórek nowotworu trzustki na drodze apoptozy lub nekrozy, co pokazano w Tabeli 3.
Komórki nowotworu trzustki (PANC-1 i MIA PaCa-2) traktowano związkiem NHPYUSNC lub kwasem usninowym w stężeniu 1 lub 5 pg/ml przez 24 (do badania wpływu na przebieg cyklu komórkowego) lub 48 godzin (do badania śmierci). Komórki po traktowaniu były zbierane. W celu analizy ich cyklu podziałowego, DNA barwione było odczynnikiem z zestawu Muse™ Celi Cycle Kit i dalsza analiza była przeprowadzona w cytometrze typu Muse Celi Analyzer. W badaniu rodzaju śmierci zebrane komórki były barwione odczynnikami z zestawu Muse ™ Annexin-V & Dead Celi Assay Kit. Ilość komórek apoptotycznych (Aneksyna V+/7-AAD· i Aneksyna V+/7-AAD+) lub nekrotycznych (Aneksyna V77-AAD+) była zliczana w cytometrze typu Muse™ Celi Analyzer.
PL 239 308 Β1
Tabela 2. NHPYUSNC powoduje zatrzymanie cyklu komórkowego w fazie G0/G1 w stopniu zależnym od jego stężenia. Komórki nowotworu trzustki traktowano DMSO (kontrola), kwasem usninowym lub związkiem NHPYUSNC w stężeniu 1 lub 5 μg/ml przez 24 godziny.
Faza cyklu [%]
Nazwa związku Stężenie S G2/M
G0/G1
PANC-I
Kontrola 43 4 1 19 4 1 36 ± 2
Kwas (i) 1 44 ±3 21 4 1 34 4 3
usninowy 5 43 ±3 19 ± 1 34 4 2
NHPYUSNC 1 48 ±2 19 ±3 32± 1
5 62 ±4 842 28 4 2
MIA PaCa-2
Kontrola 43 4 2 21 43 33 4 2
Kwas (+) 1 40 4 1 24 4 4 33 4 2
usninowy 5 40 4 3 25 4 3 314 2
NHPYUSNC 1 48 4 2 20 4 2 30 4 3
5 55 4 1 16 4 1 27 4 2
Tabela 3. NHPYUSNC powoduje śmierć komórek PANC-1 na drodze apoptozy i nekrozy, a komórek MIA PaCa-2 - na drodze apoptozy w znacznie większym stopniu niż kwas usninowy. Komórki traktowano DMSO (kontrola), kwasem usninowym lub związkiem NHPYUSNC przez 48 godzin.
komórki [?zo]
Nazwa związku Stężenie
[□g/ml] żywe apoptotyczne nekrotyczne
PANC-1
Kontrola 82 4 5 1443 543
Kwas (+) 1 75 4 5 23 4 5 340
usninowy 5 75 4 4 24±4 1 ± 1
NHPYUSNC 1 63 4 9 24 4 3 1346
5 61 42 27 4 5 1145
MIA PaCa-2
Kontrola 78 4 2 20 4 1 24 1
Kwas (+) 1 82 4 4 1844 1 4 0
usninowy 5 73 4 3 26 4 3 1 40
NHPYUSNC 1 46 ± 1 51 4 ] 3 4 1
5 23 4 3 74 4 2 24 1
PL 239 308 B1
Dodatkowo, NHPYUSNC znacznie hamował potencjał migracyjny komórek nowotworu trzustki. Na fig. 4 pokazane są zdjęcia komórek w momencie rozpoczynania eksperymentu (0 godz.) - z lewej strony oraz stan po 48 godzinach eksperymentu - zdjęcia z prawej strony. Kontrolę stanowiły komórki traktowane DMSO. Przedstawiono reprezentatywne wyniki z trzech niezależnych powtórzeń. Potencjał migracyjny badano za pomocą techniki „zarastania rany”. Na płytce pokrytej komórkami PANC-1 lub MIA PaCa-2 (95% konfluencji) wykonano rysę tipsem i po odpłukaniu usuniętych komórek, przyklejone do płytki komórki traktowano NHPYUSNC w stężeniu 1 lub 5 μg/ml przez 48 godzin lub DMSO (kontrola). Zdjęcia wykonano na początku eksperymentu oraz po ekspozycji na badany związek. Liniami zaznaczono granice występowania komórek.
Co ciekawe, komórki poddane działaniu badanego związku charakteryzowały się silną wakuolizacją cytoplazmy, zarówno komórek nowotworu trzustki, co pokazano na fig. 5, jak i nowotworu piersi, co pokazano na fig. 6. Wakuolizacja wskazuje na mechanizm działania badanego związku, może być bowiem związana z anomaliami takich organelli jak retikulum endoplazmatyczne (ER) czy mitochondria i towarzyszy różnym typom regulowanej śmierci komórki. Ponieważ komórki nowotworowe doświadczają stresu ER (z powodu m.in. nadmiernej produkcji białek czy niedotlenienia), dodatkowa aktywacja tej odpowiedzi jest dla nich często letalna. Na fig. 5 pokazano morfologię komórek nowotworu trzustki linii PANC-1 i MIA PaCa-2 zarejestrowaną w mikroskopie świetlnym (powiększenie x 200). Komórki były traktowane DMSO (kontrola) lub NHPYUSNC w stężeniu 1 lub 5 μg/ml przez 48 godzin.
Na fig. 6 pokazano wpływ NHPYUSNC na wakuolizację cytoplazmy komórek raka piersi, linii MCF-7 i SKBR-3. Morfologia komórek nowotworowych była rejestrowana w mikroskopie świetlnym (powiększenie x 100-górny panel i x 200-dolny panel) po 48-godzinnym traktowaniu DMSO (kontrola) lub NHPYUSNC w stężeniu 1 μg/ml.
Stres związany z ER jest często aktywowany przez terapeutyki, które powodują uwalnianie jonów Ca2+ z ER. Badany związek faktycznie powodował wzrost ilości jonów Ca2+ w cytoplazmie, co jest pokazane na fig. 7A. Co więcej, pochodziły one z ER, o czym świadczył fakt, że hamowanie receptorów IP3 znajdujących się na błonie ER przez 3-APB zapobiegało wzrostowi ilości Ca2+ w cytoplazmie oraz częściowo chroniło przed spadkiem żywotności komórek traktowanych NHPYUSNC. Takiego efektu nie wykazał BAPTA, chelator zewnątrzkomórkowych jonów Ca2+, co widać na fig. 7B-C. Związki indukujące stres ER poprzez stymulację uwalniania jonów Ca2+ z ER mogą być użyteczne w badaniu molekularnych mechanizmów tego procesu. Związek ten zatem może być wykorzystany jako induktor wypływu jonów wapnia z ER, a więc stresu ER.
Na fig. 7A pokazano, że NHPYUSNC zwiększa poziom jonów Ca2+ w cytoplazmie komórek MCF-7. Komórki były traktowane badanym związkiem w stężeniu 1, 1,5 lub 2 μg/ml przez 6 godzin, a następnie poziom wapnia oznaczono przy użyciu zestawu odczynników Fluo-4 Direct Assay Kit firmy Invitrogen według instrukcji producenta. Analiza statystyczna została przeprowadzona przy użyciu jednoczynnikowej analizy wariancji (one-way ANO) i testu post-hoc Dunnetta, gdzie b oznacza p<001, c - p<0,05. Fig. 7B pokazuje, że wzrost stężenia jonów Ca2+ w cytoplazmie zachodzi poprzez aktywację receptorów IP3R w ER. Eksperyment przeprowadzony by jak w (A), z tym że godzinę przed dodaniem do hodowli NHPYUSNC (w stężeniu 1, 1,5 lub 2 μg/ml) była ona traktowana inhibitorem IP3R (2-APB w stężeniu 30 μM) lub chelatorem zewnątrzkomórkowych jonów Ca2+ (BAPTA w stężeniu 10 μM). Fig. 7C pokazuje, że 2-APB, a nie BAPTA, częściowo zapobiega spadkowi żywotności komórek traktowanych NHPYUSNC. Komórki były traktowane DMSO (K) lub NHPYUSNC w obecności lub braku 2-APB (30 μM) lub BAPTA (10 μM). Po 24 godzinach ekspozycji na NHPYUSNC wykonano test żywotności MTT (jak w opisie do fig. 3). Analiza statystyczna w (B) i (C) została przeprowadzona przy użyciu jednoczynnikowej analizy wariancji (one-way ANOVA) i testu post-hoc Bonferroniego, gdzie a oznacza p<0,001.

Claims (4)

1. Pochodna kwasu usninowego stanowiąca związek (S)-7-acetylo-8,10-dihydroksy-3,9,10b-trimetylo-2,10b-dihydro-4/H-benzofuro[2,3-g]indazol-4-on pokazana we wzorze 1:
PL 239 308 Β1
2. Sposób otrzymywania pochodnej kwasu usninowego stanowiącego związek (S)-7-acetylo-8,10-dihydroksy-3,9,10b-trimetylo-2,10b-dihydro-4/-/-benzofuro[2,3-g]indazol-4-on pokazanej we wzorze 1:
H
polegający na tym, że do zawiesiny (+)-kwasu usninowego w rozpuszczalniku ogrzanej do wrzenia dodaje się hydrat hydrazyny mieszając, następnie usuwa się rozpuszczalnik, a osad oczyszcza się.
3. Zastosowanie pochodnej kwasu usninowego stanowiącej związek (S)-7-acetylo-8,10-dihydroksy-3,9,10b-trimetylo-2,10b-dihydro-4/-/-benzofuro[2,3-g]indazol-4-on, pokazanej we wzorze 1:
jako leku w terapii nowotworowej.
4. Zastosowanie pochodnej kwasu usninowego stanowiącej związek (S)-7-acetylo-8,10-dihydroksy-3,9,10b-trimetylo-2,10b-dihydro-4/-/-benzofuro[2,3-g]indazol-4-on we wzorze 1:
PL436476A 2020-12-24 2020-12-24 Pochodna kwasu usninowego, sposób otrzymywania pochodnej kwasu usninowego i medyczne wykorzystanie pochodnej kwasu usninowego w terapii nowotworów oraz zastosowanie do indukcji stresu związanego z retikulum endoplazmatycznym PL239308B1 (pl)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL436476A PL239308B1 (pl) 2020-12-24 2020-12-24 Pochodna kwasu usninowego, sposób otrzymywania pochodnej kwasu usninowego i medyczne wykorzystanie pochodnej kwasu usninowego w terapii nowotworów oraz zastosowanie do indukcji stresu związanego z retikulum endoplazmatycznym

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL436476A PL239308B1 (pl) 2020-12-24 2020-12-24 Pochodna kwasu usninowego, sposób otrzymywania pochodnej kwasu usninowego i medyczne wykorzystanie pochodnej kwasu usninowego w terapii nowotworów oraz zastosowanie do indukcji stresu związanego z retikulum endoplazmatycznym

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL436476A1 PL436476A1 (pl) 2021-08-09
PL239308B1 true PL239308B1 (pl) 2021-11-22

Family

ID=77560925

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL436476A PL239308B1 (pl) 2020-12-24 2020-12-24 Pochodna kwasu usninowego, sposób otrzymywania pochodnej kwasu usninowego i medyczne wykorzystanie pochodnej kwasu usninowego w terapii nowotworów oraz zastosowanie do indukcji stresu związanego z retikulum endoplazmatycznym

Country Status (1)

Country Link
PL (1) PL239308B1 (pl)

Also Published As

Publication number Publication date
PL436476A1 (pl) 2021-08-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5736576A (en) Method of treating malignant tumors with thyroxine analogues having no significant hormonal activity
de Oliveira et al. Synthesis of thiophene-thiosemicarbazone derivatives and evaluation of their in vitro and in vivo antitumor activities
US10765660B2 (en) Agent containing flavonoid derivatives for treating cancer and inflammation
Li et al. Discovery of novel vinyl sulfone derivatives as anti-tumor agents with microtubule polymerization inhibitory and vascular disrupting activities
Shang et al. Design, synthesis of novel celastrol derivatives and study on their antitumor growth through HIF-1α pathway
Kwak et al. Blood-brain barrier-permeable fluorone-labeled dieckols acting as neuronal ER stress signaling inhibitors
CZ2015227A3 (cs) Trifenylfosfoniové analogy biguanidu, způsob jejich přípravy a jejich použití jako léčiva
Nadysev et al. Aminomethylation of heliomycin: Preparation and anticancer characterization of the first series of semi-synthetic derivatives
Gao et al. Synthesis and potent antileukemic activities of 10-benzyl-9 (10H)-acridinones
Lin et al. Synthesis of aryl dihydrothiazol acyl shikonin ester derivatives as anticancer agents through microtubule stabilization
Tao et al. CT1-3, a novel magnolol-sulforaphane hybrid suppresses tumorigenesis through inducing mitochondria-mediated apoptosis and inhibiting epithelial mesenchymal transition
Zhu et al. Design, synthesis and biological evaluation of vinyl selenone derivatives as novel microtubule polymerization inhibitors
Jain et al. Synthesis and biological evaluation of 8-quinolinamines and their amino acid conjugates as broad-spectrum anti-infectives
Ma et al. Synthesis and biological evaluation of heterocyclic ring-fused dammarane-type ginsenoside derivatives as potential anti-tumor agents
CN104523664B (zh) 姜黄素类抗肿瘤药物及其应用
US10947249B2 (en) Nimbolide analogs as anti-cancer agents and preparation thereof
Gao et al. Design, synthesis and biological evaluation of novel bouchardatine analogs as potential inhibitors of adipogenesis/lipogenesis in 3T3-L1 adipocytes
US8637679B2 (en) Process for the isolation of organic compounds useful for the treatment of cancer
Karabulut et al. Synthesis of novel dimeric compounds containing triazole using click method and their selective antiproliferative and proapoptotic potential via mitochondrial apoptosis signaling
Razvi et al. Synthesis, screening and pro-apoptotic activity of novel acyl spermidine derivatives on human cancer cell lines
PL239308B1 (pl) Pochodna kwasu usninowego, sposób otrzymywania pochodnej kwasu usninowego i medyczne wykorzystanie pochodnej kwasu usninowego w terapii nowotworów oraz zastosowanie do indukcji stresu związanego z retikulum endoplazmatycznym
Bezu et al. In vivo Antimalarial Evaluation of Embelin and its Semi-Synthetic Aromatic Amine Derivatives.
Şahin et al. Cytotoxic and apoptotic effects of 1, 2-diborolanes with strong donor substitutes on human cancer cells
Fawzy et al. Synthesis, cytotoxicity evaluation, and molecular docking studies of novel pyrrole derivatives of khellin and visnagin via one-pot condensation reaction with curcumin
PL246172B1 (pl) Pochodna kwasu usninowego, sposób otrzymywania tej pochodnej, jej zastosowanie w terapii przeciwnowotworowej oraz jako odczynnika in vitro