PL237886B1 - Zastosowanie pochodnej styrylochinazolinonu - Google Patents
Zastosowanie pochodnej styrylochinazolinonu Download PDFInfo
- Publication number
- PL237886B1 PL237886B1 PL421717A PL42171717A PL237886B1 PL 237886 B1 PL237886 B1 PL 237886B1 PL 421717 A PL421717 A PL 421717A PL 42171717 A PL42171717 A PL 42171717A PL 237886 B1 PL237886 B1 PL 237886B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- derivative
- activity
- derivatives
- compound
- cells
- Prior art date
Links
- UHMKDTNXMRGQEA-UHFFFAOYSA-N 4-(2-phenylethenyl)-1H-quinazolin-2-one Chemical class O=c1nc(C=Cc2ccccc2)c2ccccc2[nH]1 UHMKDTNXMRGQEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 15
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 claims description 9
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 claims description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 abstract 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 abstract 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 abstract 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 abstract 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 abstract 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 abstract 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 abstract 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 34
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 12
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- FIEYHAAMDAPVCH-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-1h-quinazolin-4-one Chemical compound C1=CC=C2NC(C)=NC(=O)C2=C1 FIEYHAAMDAPVCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 4
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- AVRPFRMDMNDIDH-UHFFFAOYSA-N 1h-quinazolin-2-one Chemical group C1=CC=CC2=NC(O)=NC=C21 AVRPFRMDMNDIDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- IUNJCFABHJZSKB-UHFFFAOYSA-N 2,4-dihydroxybenzaldehyde Chemical compound OC1=CC=C(C=O)C(O)=C1 IUNJCFABHJZSKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAVREABSGIHHMO-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxybenzaldehyde Chemical compound OC1=CC=CC(C=O)=C1 IAVREABSGIHHMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003727 ADP Glo Kinase Assay Methods 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 101000823316 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase ABL1 Proteins 0.000 description 2
- 239000005517 L01XE01 - Imatinib Substances 0.000 description 2
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100022596 Tyrosine-protein kinase ABL1 Human genes 0.000 description 2
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 2
- HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N benzaldehyde Chemical class O=CC1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- KTUFNOKKBVMGRW-UHFFFAOYSA-N imatinib Chemical compound C1CN(C)CCN1CC1=CC=C(C(=O)NC=2C=C(NC=3N=C(C=CN=3)C=3C=NC=CC=3)C(C)=CC=2)C=C1 KTUFNOKKBVMGRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002411 imatinib Drugs 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- SMQUZDBALVYZAC-UHFFFAOYSA-N salicylaldehyde Chemical compound OC1=CC=CC=C1C=O SMQUZDBALVYZAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- AIVRDUVZOFTAGC-UHFFFAOYSA-N 2-(2-phenylethenyl)quinazoline Chemical class N=1C=C2C=CC=CC2=NC=1C=CC1=CC=CC=C1 AIVRDUVZOFTAGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 4-substituted quinoline Chemical class 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010052360 Colorectal adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 101100503636 Danio rerio fyna gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108091008606 PDGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000011653 Platelet-Derived Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000002490 Rad51 Recombinase Human genes 0.000 description 1
- 108010068097 Rad51 Recombinase Proteins 0.000 description 1
- 108700025695 Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000015098 Tumor Suppressor Protein p53 Human genes 0.000 description 1
- 108010078814 Tumor Suppressor Protein p53 Proteins 0.000 description 1
- LJZKBSPEMLUGJR-ZHACJKMWSA-N [2-[(e)-2-(4-oxo-1h-quinazolin-2-yl)ethenyl]phenyl] acetate Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1\C=C\C1=NC(=O)C2=CC=CC=C2N1 LJZKBSPEMLUGJR-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- ZHUPHEPBXUSENX-MDZDMXLPSA-N [3-[(E)-2-(4-oxo-3H-quinazolin-2-yl)ethenyl]phenyl] acetate Chemical compound C(C)(=O)OC=1C=C(C=CC=1)/C=C/C1=NC2=CC=CC=C2C(N1)=O ZHUPHEPBXUSENX-MDZDMXLPSA-N 0.000 description 1
- MJQNZBVRYQLUSS-CSKARUKUSA-N [3-acetyloxy-4-[(e)-2-(4-oxo-1h-quinazolin-2-yl)ethenyl]phenyl] acetate Chemical compound CC(=O)OC1=CC(OC(=O)C)=CC=C1\C=C\C1=NC(=O)C2=CC=CC=C2N1 MJQNZBVRYQLUSS-CSKARUKUSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 150000003934 aromatic aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000001046 green dye Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 102000037979 non-receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 108091008046 non-receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 1
- QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N para-ethylbenzaldehyde Natural products CCC1=CC=C(C=O)C=C1 QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003246 quinazolines Chemical class 0.000 description 1
- 125000002943 quinolinyl group Chemical group N1=C(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 102000009076 src-Family Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010087686 src-Family Kinases Proteins 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Abstract
Przedmiotem zgłoszenia są pochodne styrylochinazolinonu o wzorze 1, gdzie R1-R5 oznaczają atom wodoru lub atom halogenu lub grupę hydroksylową lub grupę acylową lub rozgałęzioną grupę alkoksylową zawierającą od jednego do czterech atomów węgla lub grupę nitrową oraz zastosowanie przedmiotowych pochodnych.
Description
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie pochodnej styrylochinazolinonu do wytwarzania leków przeciwnowotworowych.
Znane są z WO2005/115145 pochodne chinoliny i chinazoliny będące inhibitorami kinaz proteinowo-tyrozynowych (PTK) związanych z angiogenezą komórek rakowych. Aktywność opisywanych w tym zgłoszeniu związków polegała na hamowaniu czynników wzrostu receptorów kinaz, które regulują rozwój naczyń krwionośnych. Działanie opisanych układów jest nieodwracalne a więc polega na silnym i trwałym wiązaniu do odpowiednich receptorów. Opis wynalazku zezwala na obecność podstawników w pozycji 2 szkieletu chinoliny lecz nie obejmuje pochodnych 2-styrylochinazolinowych.
W opisie patentowym WO2006/040522 ujawniono układy chinoliny modyfikowane w położeniu 4- podstawionym pirazolem. Według opisu związki mogą stanowić środki ograniczające proliferację komórek rakowych poprzez mechanizm hamowania PDGF receptorów kinaz.
WUS 9216177 przedstawiono 2-styrylochiazolinonyjako inhibitory rekombinazy RAD51. Związki takie mogą być wartościowymi składnikami leków przeciwnowotworowych. Ujawnione w opisie zostały przede wszystkim pochodne modyfikowane w pozycji N3 pierścienia chinazolinonu.
Szeroka grupa pochodnych chinazolinonu oraz ich zastosowanie do wytwarzania leków przeciwnowotworowych znana jest z opisu WO2006/125555. Jednakże ujawnione tam związki nie posiadają ugrupowania 2-styrylochinazolinonu. Badania skoncentrowane na poszukiwaniu nowych związków zawierających układ styrylochinazolinonu doprowadziły do opracowania pochodnych będących silnymi inhibitorami kinaz białkowych. Takie związki mogą stanowić aktywne składniki leków przeciwnowotworowych.
Istotę wynalazku stanowi zastosowanie pochodnej styrylochinazolinonu o wzorze 1, do wytwarzania leku służącego do modulowania aktywności kinaz białkowych, korzystnie do leczenia nowotworów wykazujących ekspresję kinaz tyrozynowych, szczególnie korzystnie nowotworu okrężnicy.
Poniżej przedstawiono przykład związku opisanego wynalazkiem (pochodna 3) oraz jego zastosowanie, a dodatkowo dla porównania pokazano pochodne podobne (pochodna 1 i 2) jednak o gorszych właściwościach niż pochodna według wynalazku. W przykładzie 1 przedstawiono otrzymywanie oraz opis właściwości związku opisanego wynalazkiem.
W przykładzie 2 przedstawiono sposób modulowania aktywności kinaz białkowych oraz wyniki uzyskane dla związków z przykładu 1. W przykładach 3 i 4 przedstawiono aktywność związku objętego wynalazkiem wobec linii komórek nowotworowych, a w przykładzie 5 cytotoksyczność wobec komórek normalnych. W przykładzie 6 przedstawiono sposób weryfikacji podatności nowotworów na działanie leków modulujących aktywność kinaz białkowych. Dla porównania oraz podkreślenia zalet wynalazku przedstawiono również bliskie analogi (pochodne 1 i 2) związku będącego przedmiotem wynalazku. Zgodnie z danymi przedstawionymi w przykładach 1-6 można stwierdzić, że pomimo zbieżności strukturalnej pochodnych 1,2 charakterystyka ich aktywności biologicznej jest znacząco odmienna. Zwłaszcza w zakresie aktywności przeciwnowotworowej gdzie pochodna będąca przedmiotem wynalazku wykazuje aktywność wyższą od jej analogów oraz od powszechnie stosowanego leku (imatynibu). Z uwagi na podobieństwo strukturalne, warto podkreślić, nie istnieje możliwość przewidzenia ani wymodelowania takich zależności.
Przykład 1
Ogólna metoda syntezy związków z przykładu 1 przebiega według poniższego schematu.
AqO/AcOH
Wszystkie pochodne otrzymano umieszczając w naczyniu reakcyjnym 20 mL 25% (v/v) roztworu bezwodnika octowego w 80% kwasie octowym, 2-metylo-4(3H)-chinazolon oraz odpowiedni aldehyd aromatyczny (pochodna benzaldehydu). Roztwór mieszano, ogrzewając w temperaturze 130°C do momentu pojawienia się obfitego osadu, a jeżeli osad nie wypadł, reakcję przerywano w momencie pojawienia się słomkowej barwy roztworu. Pozostałości medium reakcyjnego usuwano pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowe produkty oczyszczano przez krystalizację z etanolu.
PL 237 886 Β1 o
Pochodna 1.
2-[(E)-2-(2-acetoksyfenylo)etenylo]-4(3H)chinazolon. Związek otrzymano w reakcji 0,81 g 2-metylo-4(3H)chinazolonu i 0,61 g 2-hydroksybenzaldehydu, uzyskując wydajność 6,51 g (43%) białego osadu, t.top=229-235°C. Strukturę związku potwierdzono na podstawie spektroskopii 1H NMR (400 MHz, DMSO - d6) δ (ppm) 12.48 (s, 1H), 8.12 (dd, J = 7.9, 1.1, 1H), 7.92 (d, J = 16.4, 1H), 7.83 (d, J = 8, 1H), 7.82 (td, J = 8.28, 1.4, 1H), 7.70 (d, J = 7.8 1H), 7.50 (td, J = 7.7, 1.1,1 H), 7.47 (td, J =7.8, 1.4, 1H), 7.37 (td, J = 7.7, 0.7, 1H), 7.23 (dd, J = 8.0, 1.0, 1H), 7.03 (d, J = 16.3, 1H), 2.43 (s, 3H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ (ppm) 169.76, 162.27, 151.65, 149.42, 149.34, 134.95, 132.04, 131.12, 128.17, 128.08, 127.79, 126.99, 126.89, 126.33, 124.01, 121.67,21.43;
o
Pochodna 2.
2-[(E)-2-(2,4-diacetoksyfenylo)etenylo]-4(3H)chinazolon. Związek otrzymano w reakcji 1,60 g 2-metylo-4(3H)chinazolonu i 1,38 g 2,4-dihydroksybenzaldehydu uzyskując wydajność 0,58 g (16%) brunatnego osadu, t.top=233°C. Strukturę związku potwierdzono na podstawie spektroskopii 1H NMR (400 MHz, DMSO - d6) δ (ppm) 12.48 (s, 1H), 8.12 (dd, J = 7.9, 1.0, 1H), 7.89 (d, J = 16.4, 1H), 7.88 (d, J = 8.5, 1H), 7.82 (ddd, J = 8.4, 7.2, 1.3, 1H), 7.70 (d, J = 8.1, 1H), 7.50 (ddd, J = 8.2, 7.2, 0.9, 1H), 7.18 (dd, J = 8.6, 2.3, 1H), 7.14 (d, J = 2.3, 1H), 7.02 (d, J = 16.3, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.30 (s, 3H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ (ppm) 169.52, 169.28, 162.28, 152.03, 151.63, 149.71,149.32, 134.95, 131.36, 128.79, 127.77, 126.89, 126.33, 125.89, 123.98, 121.66, 120.73, 117.74, 21.39, 21.28;
o
Pochodna 3.
2-[(E)-2-(3-acetoksyfenylo)etenylo]-4(3H)chinazolon. Związek otrzymano w reakcji 1,60 g 2-metylo-4(3H)chinazolonu i 1,20 g 3-hydroksybenzaldehydu uzyskując wydajność 1,45 g (48%) białego osadu, t.top=239°C. Strukturę związku potwierdzono na podstawie spektroskopii 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm) 12.33 (s, 1H), 8.12 (ddd, J = 7.9, 1.4, 0.5, 1H), 7.94 (d, J = 16.2, 1H), 7.82 (ddd, J = 8.3, 7.0, 1.4, 1H), 7.69 (d, J = 8.0, 1H), 7.56 (d, J = 7.6, 1H), 7.51 (t, J = 8, 1H), 7.50 (ddd, J = 8.4, 6.6, 1.0, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.19 (ddd, J = 7.8, 2.1,1.1,1 H), 7.03 (d, J = 16.2, 1H), 2.31 (s, 3H; 13C NMR (125 MHz, DMSO - d6) δ (ppm) 169.66, 162.16, 151.67, 151.47, 149.40, 137.69, 137.07, 135.04, 130.64, 127.68, 126.86, 126.36, 125.69, 123.63, 122.69, 121.64, 121.02, 21.38;
Przykład 2
Oznaczanie hamowania kinazy białkowej.
Przykładowa procedura pomiaru inhibicji niereceptorowych kinaz tyrozynowych przy pomocy testów Kinase Selectivity Profiling Systems (Promega) oraz ADP-Glo Kinase Assay (Promega). Przed przystąpieniem do badania rozpuszczono związki w DMSO, a następnie przygotowano roztwory w stężeniu 0,5 μΜ w 1X Kinase Reaction Buffer (40 mM Tris - pH 7,5; 20 mM MgCh; 0,1 mg/mL BSA; 50 μΜ DTT), w którym końcowe stężenie DMSO wynosiło 5%. Następnie każdą kinazę (ABL1; BRK; BTK; CSK; FYN A; LCK; LYN B; SRC) z 8-dołkowego paska rozpuszczono w 95 μί 2,5X Kinase Reaction Buffer, a 8-dołkowe paski zawierające substraty w 15 μί 100 μΜ ATP. Test na inhibicję kinaz tyrozynowych przeprowadzono na białej płytce 384-dołkowej, w tym celu przeniesiono roztwory związków w ilości 1 μί, a następnie dodano po 2 μί wcześniej przygotowanych roztworów kinaz oraz substratów i inkubowano przez 1 h w temperaturze pokojowej. Aktywność kinaz wykrywano przy pomocy testu ADPGlo Kinase Assay. W metodzie tej dodano 5 μί odczynnika ADP- Glo™ Reagent do każdej studzienki,
PL 237 886 Β1 po czym płytkę wymieszano na wytrząsarce przez 2 minuty i inkubowano 40 minut w temperaturze pokojowej. Następnie, dodano 10 μί odczynnika Kinase Detection Reagent, ponownie mieszano i inkubowano 30 minut w temperaturze pokojowej. Wartość luminescencji odczytano przy użyciu wielodetekcyjnego czytnika płytek Synergy 4, Bio Tek.
Wyniki, w postaci procentowej wartości zahamowania aktywności kinazy przedstawiono w tabeli 1.
T a b e I a 1 Hamowanie kinaz przez pochodne z przykładu 1.
| Nr pochodnej z przykładu 1 | struktura | Kinazy białkowe z przykładu 3 | |||||||
| ABL1 | BR K | BT K | CS K | FY N A | LC K | LY N B | SR C | ||
| 1 | 0 ί^'ΐ'ΝΙΙ OAc | 0 | 29,72 | 50,53 | 14,35 | 0 | 0 | 0 | 40,43 |
| 2 | O OAc ^-^OAc | 30,01 | 0 | 0 | 63,98 | 19,38 | 0 | 24,83 | 51,08 |
| 3 | O | 14,81 | 36,11 | 0 | 0 | 0 | 0 | 5,62 | 0,64 |
Przykład 3
Aktywność przeciwnowotworowa pochodnych styrylochinazolinonu wobec nowotworów jelita grubego.
Aktywność antyproliferacyjną badanych związków oznaczono wobec komórek ludzkiego raka jelita HCT 116 +/+ (linia komórek p53 pozytywnych). Komórki wysiano w ilości 9 tysięcy na dołek (wraz z 100 μL/dołek medium DMEM) i pozostawiono na 24 godziny w temperaturze 37°C; 5% CO2. Związki rozpuszczone w minimalnej ilości DMSO podawano w stężeniach umożliwiających wyznaczenie krzywej aktywności. Przykładowa aplikacja związku - rozpuszczenie związku w DMSO w celu przygotowania roztworów o następujących stężeniach: 25 μΜ, 10 μΜ, 5 μΜ, 2,5 μΜ, 0,5 μΜ, 0,1 μΜ. Końcowa objętość w dołkach wynosiła 200 μί. Tak przygotowane komórki poddano inkubacji w czasie 72 h, po czym przeprowadzono ocenę żywotności komórek w teście MTS. Do każdej studzienki w płytce 96 dołkowej dodano 20 μί roztworu MTS (5 mg/mL) i inkubowano przez 1 h. Wartości absorbancji odczytano przy użyciu spektrofotometru przy długości fali 490 nm. Wyniki testów w postaci średniej wraz z odchyleniem zostały przedstawione w tabeli 2 w przeliczeniu na wartości IC50. Jako związek referencyjny zastosowano imatynib.
Przykład 4
Aktywność przeciwnowotworowa pochodnych chinazolinonu wobec nowotworów jelita grubego z delecją genu supresorowego TP53.
Aktywność antyproliferacyjną badanych związków oznaczono wobec komórek ludzkiego raka jelita HCT 116-/- (linia komórek z delecją genu p53). Komórki wysiano w ilości 9 tysięcy na dołek (wraz z 100 μL/dołek medium DMEM) i pozostawiono na 24 godziny w temperaturze 37°C; 5% CO2. Związki rozpuszczone w minimalnej ilości DMSO podawano w stężeniach umożliwiających wyznaczenie krzywej aktywności. Przykładowa aplikacja związku - rozpuszczenie związku w DMSO w celu przygotowania roztworów o następujących stężeniach: 25 μΜ, 10 μΜ, 5 μΜ, 2,5 μΜ, 0,5 μΜ, 0,1 μΜ. Końcowa objętość w dołkach wynosiła 200 μί. Tak przygotowane komórki poddano inkubacji w czasie 72 h, po czym przeprowadzono ocenę żywotności komórek w teście MTS. Do każdej studzienki w płytce 96 dołkowej dodano 20 μί roztworu MTS (5 mg/mL) i inkubowano przez 1 h. Wartości absorbancji odczytano przy użyciu spektrofotometru przy długości fali 490 nm. Wyniki testów w postaci średniej wraz z odchyleniem zostały przedstawione w tabeli 2 w przeliczeniu na wartości IC50.
PL 237 886 B1
W analogiczny sposób jak w przykładach 3 i 4 można oznaczyć aktywność przeciwnowotworową na dowolnych wyizolowanych komórkach nowotworów zwierzęcych w szczególności ludzkich.
Pochodna służy do wytwarzania leku służącego do modulowania aktywności kinaz białkowych, do leczenia nowotworów wykazujących ekspresję kinaz tyrozynowych, w postaci nowotworu okrężnicy.
P r z y k ł a d 5
Cytotoksyczność związków z przykładu 1 względem normalnych komórek ludzkich.
Cytotoksyczność związków oznaczono wobec ludzkich fibroblastów (linia komórek NHDF). Komórki wysiano w ilości 9 tysięcy na dołek (wraz z 100 μL/dołek medium DMEM) i pozostawiono na 24 godziny w temperaturze 37°C; 5% CO2. Związki rozpuszczone w minimalnej ilości DMSO podawano w stężeniach umożliwiających wyznaczenie krzywej aktywności. (Przykładowa aplikacja związku - rozpuszczenie związku w DMSO w celu przygotowania roztworów o następujących stężeniach: 25 μΜ, 10 μΜ, 5 μΜ, 2,5 μΜ, 0,5 μΜ, 0,1 μM). Końcowa objętość w dołkach wynosiła 200 μΕ. Tak przygotowane komórki poddano inkubacji w czasie 72 h, po czym przeprowadzono ocenę żywotności komórek w teście MTS. Do każdej studzienki w płytce 96 dołkowej dodano 20 μΕ roztworu ΜΤ8 (5 mg/mL) i inkubowano przez 1 h. Wartości absorbancji odczytano przy użyciu spektrofotometru przy długości fali 490 nm. Wyniki testów w postaci średniej wraz z odchyleniem są przedstawione w tabeli 2 (w przeliczeniu na wartości IC50).
PL 237 886 Β1
Tabela 2. Aktywność przeciwnowotworowa pochodnych z przykładu 1
| Pochodna | Struktura | Aktywność przykłady 3-5 | ||
| HCT11 6 +/+ [μΜ] | HCT11 6 -/- [μΜ] | NHD F [μΜ] | ||
| 1 | O OAc | >25 | 17,24 ± 0,72 | >25 |
| 2 | 0 OAc ^^^^OAc | >25 | 22,98 ± 1,06 | >25 |
| 3 | CĆU^«. | 15,33 ± 1,04 | 9,287 ± 1,347 | >25 |
| 1MT | Q d 0 z T ω | 44,55 ± 2,41 | 51,21 ± 4,09 | >25 |
Przykład 6
Oznaczanie podatności nowotworu na działanie pochodnej opisanej wynalazkiem. Oznaczanie podatności wykonano jako wyznaczenie poziomu ekspresji genów kinaz z rodziny SRC (CSK; FYN A; LCK; LYN B; SRC) przy pomocy metody Real-Time PCR (RT-PCR). Oznaczenia przeprowadzono na ludzkich liniach komórkowych: raka jelita grubego (HCT 116), gruczolakoraka jelita grubego (Caco-2), raka piersi (MCF-7), raka płuc (A549) oraz prawidłowych fibroblastów (NHDF). Przed przystąpieniem do właściwej części oznaczenia, komórki wysiano na 3 cm szalkach Petriego w ilości 500 tys./1 mL medium DMEM i inkubowano przez 24 godziny w temperaturze 37°C; 5% CO2. Po tym czasie, z komórek wyizolowano RNA przy pomocy odczynnika TRIzol Reagent (Ambion), oczyszczono i zmierzono w spektrofotometrze typu NanoDrop. Następnie, 5 μg wyizolowanego RNA poddano procesowi odwrotnej transkrypcji do cDNA przy pomocy GoScript™ Reverse Transcriptase kit (Promega) oraz Oligo(dT)23 Primers (Sigma). Otrzymany produkt wykorzystano do reakcji Real-Time PCR, którą przeprowadzono wtermocyklerze CTX96 Touch™ Real-Time PCR Detection System (Biorad). Wtym celu, przygotowano mieszaninę reakcyjną w objętości 20 μί. Przykładowo mieszaninę reakcyjną sporządzono z master mixu - 2X PowerUp™ SYBR® Green Master Mix (Applied Biosystems), który zawierał dinukleotydy (dNTPs), polimerazę (Dual-Lock Tag DNA Polymerase) oraz barwnik SYBR Green, po czym dodano
PL 237 886 Β1 pary starterów w ilości 0,5 μΜ, 1 μί matrycy cDNA oraz uzupełniono sterylną wodą do końcowej objętości. Przykładowe pary starterów podano w tabeli 3. Gotową mieszaninę reakcyjną umieszczono w termocyklerze i przeprowadzono reakcję RT-PCR, składającą się z następujących etapów:
- początkowa denaturacja w 95°C przez 120 sekund,
- denaturacja w 95°C przez 15 sekund, przyłączanie starterów przez 30 sekund (temperatura specyficzna dla zaprojektowanych par starterów), wydłużanie matrycy w temperaturze 72°C przez 60 sekund; etap ten składa się z 40 cykli,
- pomiar krzywych topnienia w zakresie temperaturowym 65°C-95° (2-5 sekund na każde 0,5°C), celem weryfikacji otrzymanych produktów podczas reakcji RT-PCR.
Otrzymane dane analizowano porównując ekspresję badanych genów do referencyjnego genu podstawowego metabolizmu - β-aktyny przy pomocy standardowej metody 2 ΔΔσΓ wprowadzonej przez Livak i Schmittgen.
Tabela 3. Zaprojektowane pary starterów.
| Gen | Forward primer (5'—G') | Reverse primer (5—>3') |
| CSK | GGCTCTACATCGTCACTGA G | CTCAGACACCAGCACATTG |
| FYN A | GTAGTCATGGCAACCCGCT A | ACAACCCCCACCCTCATTTC |
| LCK | AGCTTTTCTGTGGCTGGTG A | CATTTCGGATGAGCAGCGTG |
| LYNB | GCGAGCGGGAAATATGGG AT | AGATTCTGGAACTGGTTGAGT CT |
| SRC | CCTCGTGCGAGAAAGTGA G | TGGCGTTGTCGAAGTCAG |
| β-aktyna | CTCGCCTTTGCCGATCC | GCTGGGGTGTTGAAGGTCTC |
Tabela 4. Względna ekspresja kinaz w badanych komórkach nowotworowych.
| Komórki | Ekspresja kinaz | ||||
| SRC | CSK | FYNA | LYNB | LCK | |
| HCT116 p53 +/+ | 0,997561 | 3,597657 | 5,872974 | 5,536789 | 1,385958 |
| HCT116p53 -/- | 0,448602 | 2,745799 | 3,57869 | 3,213361 | 4,957144 |
| MCF-7 | 0,057369 | 1,222902 | 0,367766 | 0,477916 | 0,047678 |
| A549 | 1,024934 | 0,871319 | 0,259529 | 0,605141 | 0,014632 |
Otrzymane wyniki wskazują w prosty sposób jak można określić rodzaj nowotworu podatny na modulowanie kinaz białkowych. Zgodnie z danymi przedstawionymi w tabeli 4 zwiększona ekspresja
PL 237 886 Β1 może dotyczyć zarówno jednego enzymu lub całej grupy w konkretnych komórkach. Jednocześnie, zgodnie z obowiązującym podejściem większa ogólna zależność skutkować może większą efektywnością substancji wpływającej na profil aktywności kinaz.
Claims (1)
1. Zastosowanie pochodnej styrylochinazolinonu o wzorze 1, do wytwarzania leku służącego do modulowania aktywności kinaz białkowych, korzystnie do leczenia nowotworów wykazujących ekspresję kinaz tyrozynowych, szczególnie korzystnie nowotworu okrężnicy.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL421717A PL237886B1 (pl) | 2017-05-26 | 2017-05-26 | Zastosowanie pochodnej styrylochinazolinonu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL421717A PL237886B1 (pl) | 2017-05-26 | 2017-05-26 | Zastosowanie pochodnej styrylochinazolinonu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL421717A1 PL421717A1 (pl) | 2018-12-03 |
| PL237886B1 true PL237886B1 (pl) | 2021-06-14 |
Family
ID=64460774
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL421717A PL237886B1 (pl) | 2017-05-26 | 2017-05-26 | Zastosowanie pochodnej styrylochinazolinonu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL237886B1 (pl) |
-
2017
- 2017-05-26 PL PL421717A patent/PL237886B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL421717A1 (pl) | 2018-12-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Khalifa et al. | Topo II inhibition and DNA intercalation by new phthalazine-based derivatives as potent anticancer agents: design, synthesis, anti-proliferative, docking, and in vivo studies | |
| El-Naggar et al. | Eco-friendly sequential one-pot synthesis, molecular docking, and anticancer evaluation of arylidene-hydrazinyl-thiazole derivatives as CDK2 inhibitors | |
| Rzymski et al. | SEL120-34A is a novel CDK8 inhibitor active in AML cells with high levels of serine phosphorylation of STAT1 and STAT5 transactivation domains | |
| Hu et al. | Synthesis and biological evaluation of novel thiazolidinone derivatives as potential anti-inflammatory agents | |
| Alkahtani et al. | Synthesis and biological evaluation of benzo [d] imidazole derivatives as potential anti-cancer agents | |
| Jobson et al. | Cellular inhibition of checkpoint kinase 2 (Chk2) and potentiation of camptothecins and radiation by the novel Chk2 inhibitor PV1019 [7-nitro-1H-indole-2-carboxylic acid {4-[1-(guanidinohydrazone)-ethyl]-phenyl}-amide] | |
| RS52739B (sr) | Jedinjenja korisna za inhibiciju chk1 | |
| Halim et al. | Synthesis and biological evaluation of halogenated phenoxychalcones and their corresponding pyrazolines as cytotoxic agents in human breast cancer | |
| US20100086518A1 (en) | Treatment of melanoma | |
| Jin et al. | Ethyl 2-(benzylidene)-7-methyl-3-oxo-2, 3-dihydro-5H-thiazolo [3, 2-a] pyrimidine-6-carboxylate analogues as a new scaffold for protein kinase casein kinase 2 inhibitor | |
| Ismail et al. | Design, synthesis, and biological evaluation of novel 7 H-[1, 2, 4] Triazolo [3, 4-b][1, 3, 4] thiadiazine inhibitors as antitumor agents | |
| Batran et al. | Design, synthesis, and molecular modeling of quinoline‐based derivatives as anti‐breast cancer agents targeting EGFR/AKT signaling pathway | |
| Seif et al. | Design and synthesis of novel hexahydrobenzo [4, 5] thieno [2, 3‐d] pyrimidine derivatives as potential anticancer agents with antiangiogenic activity via VEGFR‐2 inhibition, and down‐regulation of PI3K/AKT/mTOR signaling pathway | |
| Li et al. | Inhibitor of the human telomerase reverse trancriptase (hTERT) gene promoter induces cell apoptosis via a mitochondrial-dependent pathway | |
| Geng et al. | Antitumor activity of a 5-hydroxy-1 H-Pyrrol-2-(5 H)-one-based synthetic small molecule in vitro and in vivo | |
| PT1636215E (pt) | Furazanobenzimidazoles | |
| WO2019038683A1 (en) | COMPOUNDS TARGETING BRCA1 BRCT TANDEM DOMAINS, COMPOSITIONS AND RELATED METHODS | |
| Nazari et al. | Synthesis and evaluation of in vitro cytotoxic effects of triazol/spiroindolinequinazolinedione, triazol/indolin-3-thiosemicarbazone and triazol/thiazol-indolin-2-one conjugates | |
| Li et al. | Development of a novel thymidylate synthase (TS) inhibitor capable of up-regulating P53 expression and inhibiting angiogenesis in NSCLC | |
| Yang et al. | Synthesis and bioactivity of 4-alkyl (aryl) thioquinazoline derivatives | |
| Radwan et al. | Synthesis, and docking studies of some fused-quinazolines and quinazolines carrying biological active isatin moiety as cell-cycle inhibitors of breast cancer cell lines | |
| Zhan et al. | PKCα is involved in the progression of kidney carcinoma through regulating netrin-1/UNC5B signaling pathway | |
| Malarz et al. | Styrylquinazoline derivatives as ABL inhibitors selective for different DFG orientations | |
| Haneen et al. | Novel pyrano [2, 3-c] pyrazolopyrimidines as promising anticancer agents: Design, synthesis, and cell cycle arrest of HepG2 cells at S phase | |
| Singh et al. | A gain of function mutation in AKT1 increases hexokinase 2 and diminishes oxidative stress in meningioma |