PL236775B1 - Sposób wykonania podłoża transportowego dla żywych larw pasożytów, zwłaszcza Trichinella spp - Google Patents

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest sposób wykonania podłoża transportowego dla żywych larw pasożytów, zwłaszcza Trichinella spp.

Trichinella spp jest jednym z najgroźniejszych pasożytów człowieka, wywołującym włośnicę, która może mieć ciężki przebieg, kończący się nawet śmiercią osoby zakażonej włośniem.

Włośnica jest spowodowana spożyciem mięsa, w którym znajdują się żywe larwy włośni. Zapobieganie włośnicy polega przede wszystkim na przerwaniu jej łańcucha epidemiologicznego. W tym celu mięso przeznaczone do konsumpcji a pozyskane od gatunków podatnych na zarażenie takich jak świnie, dziki, konie, nutrie poddawane jest badaniu na obecność włośni przy użyciu metody wytrawiania wspomaganego mieszadłem magnetycznym. Badania te wykonywane są w laboratoriach, odpowiedzialnych za bezpieczeństwo żywności, systematycznie biorących udział w testach sprawdzających ich kompetencje.

Metodologia przygotowania próbek do badań biegłości polega na wyizolowaniu włośni z tkanki mięśniowej i dodaniu znanej liczby larw do mięsa mielonego, W takich warunkach włośnie mogą przeżyć maksymalnie 5-8 dni, gdyż są typowymi beztlenowcami i niewielki dostęp tlenu powoduje ich zamieranie.

Celem wynalazku jest opracowanie podłoża zapewniającego larwom włośni środowisko odżywcze, ograniczające dostęp tlenu co pozwala na kilkutygodniowe utrzymanie żywych larw poza żywicielem.

Istota rozwiązania według wynalazku polega na tym, że przygotowuje się podłoże na bazie żelatyny ze skór wieprzowych otrzymanej w procesie kwaśnym typu A o pH od 3,8 do 5,0 i twardości 300 Bloom, W tym celu żelatynę rozpuszcza się na gorąco w temperaturze od 55 do 65°C w zbuforowanej wodzie peptonowej tworząc roztwór o zawartości od 7 do 9 % wagowych żelatyny i temperaturze krzepnięcia 43-44°C. Płynne podłoże doprowadza się do temperatury 45° i zalewa płytki Pietriego na wysokość od 6 do 8 mm, po czym pozostawia w warunkach jałowych do zakrzepnięcia. Następnie na jałowo wycina się w podłożu studzienki. W tym samym czasie przygotowuje się izobaty larw włośni przez wytrawianie tkanki mięsnej i wyizolowane larwy przepłukuje się jałowym płynem fizjologicznym, po czym oczyszczone larwy zawieszone w płynie fizjologicznym umieszcza w płytce Pietriego i pod mikroskopem przenosi do wcześniej przygotowanego podłoża. Larwy umieszcza się na dnie studzienek w postaci kropli. Tak umieszczone larwy w podłożu zalewa się ostrożnie ostudzonym roztworem żelatyny. Larwy zabezpieczone w ten sposób mogą być przechowywane przez okres około 3 tygodni w temp. od 4 do 8°C.

Korzystnie studzienki w podłożu mają głębokość od 5 do 6 mm.

Korzystnie larwy przenosi się do podłoża: mikropipetą z przezroczystą końcówką, co umożliwia ich liczenie.

Zaletą rozwiązania opisanego wynalazku jest uzyskanie larw zabezpieczonych przed wpływem środowiska i odtworzenie warunków zbliżonych do komórki mięśniowej. Opisane podłoże może mieć zastosowanie w transporcie żywych larw jak również w badaniach międzylaboratoryjnych czy też badaniach biegłości. Opracowane podłoże jest ponadto przejrzyste co pozwala na dokładną kontrolę liczby przesyłanych larw włośni.

Podłoże może mieć również zastosowanie do przechowywania i transportu larw Anisakis Simple oraz Pseudoterranowa decipiens.

Rozwiązanie według wynalazku zostało przedstawione w przykładzie wykonania.

Przygotowuje się podłoże na bazie żelatyny ze skór wieprzowych otrzymanej w procesie kwaśnym typu A o pH 3,8-5,0 i twardości 300 Bloom. W tym celu żelatynę rozpuszcza się na gorąco w temperaturze 60°C w zbuforowanej wodzie peptonowej tworząc roztwór o zawartości 8% wagowych żelatyny i temperaturze krzepnięcia 43-44°C. Płynne podłoże doprowadza się do temperatury 45° i zalewa płytki Pietriego na wysokość od 6 do 8 mm, po czym pozostawia w warunkach jałowych do zakrzepnięcia na około 24 h. Następnie jałowym korkoborem wycina się w podłożu studzienki o głębokości od 5 do 6 mm w tym samym czasie przygotowuje się izobaty larw włośni przez wytrawianie tkanki mięsnej i wyizolowane larwy przepłukuje się jałowym płynem fizjologicznym, po czym oczyszczone larwy zawieszone w płynie fizjologicznym umieszcza w płytce Pietriego i pod mikroskopem przenosi mikropipetą z przezroczystą końcówką do wcześniej przygotowanego podłoża. Larwy umieszcza się na dnie studzienek w postaci kropli. Tak umieszczone larwy w podłożu zalewa się ostrożnie ostudzonym roztworem żelatyny. Larwy zabezpieczone w ten sposób mogą być przechowywane przez okres około 3 tygodni w temp. od 4 do 8°C.

Claims (3)

1. Zastrzeżenia patentowe

   1. Sposób wykonania podłoża transportowego dla żywych larw Trichinella spp, znamienny tym, że przygotowuje się podłoże na bazie żelatyny ze skór wieprzowych otrzymanej w procesie kwaśnym typu A o pH 3,8-5,0 i twardości 300 Bloom i tym celu żelatynę rozpuszcza się na gorąco w temperaturze od 55 do 65°C w zbuforowanej wodzie peptonowej tworząc roztwór o zawartości od 7 do 9% wagowych żelatyny i temperaturze krzepnięcia 43-44°C, po czym płynne podłoże doprowadza się do temperatury 45° i zalewa płytki Pietriego na wysokość od 6 do 8 mm i pozostawia w warunkach jałowych do zakrzepnięcia, a następnie na jałowo, wycina się w podłożu studzienki, przy czym tym samym czasie przygotowuje się izobaty larw włośni przez wytrawianie tkanki mięsnej i wyizolowane larwy przepłukuje się jałowym płynem fizjologicznym, a następnie oczyszczone larwy zawieszone w płynie fizjologicznym umieszcza w płytce Pietriego i pod mikroskopem przenosi się do wcześniej przygotowanego podłoża oraz umieszcza się na dnie studzienek w postaci kropli, po czym tak umieszczone larwy w podłożu zalewa się ostrożnie ostudzonym roztworem żelatyny i zabezpieczone w ten sposób larwy mogą być przechowywane przez okres około 3 tygodni w temp. od 4 do 8°C.
2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że studzienki w podłożu mają głębokość od 5 do 6 mm.
3. 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że larwy przenosi się do podłoża mikropipetą z przezroczystą końcówką, co umożliwia ich liczenie.