PL224408B1 - Sposób otrzymywania koniugatów białko-klaster boru w roztworze - Google Patents
Sposób otrzymywania koniugatów białko-klaster boru w roztworzeInfo
- Publication number
- PL224408B1 PL224408B1 PL398380A PL39838012A PL224408B1 PL 224408 B1 PL224408 B1 PL 224408B1 PL 398380 A PL398380 A PL 398380A PL 39838012 A PL39838012 A PL 39838012A PL 224408 B1 PL224408 B1 PL 224408B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- boron
- cluster
- aqueous
- protein
- nido
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 22
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 21
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 10
- 150000004292 cyclic ethers Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000002152 aqueous-organic solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 4
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910052703 rhodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 9
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 8
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 7
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 7
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 7
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 7
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 7
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 150000001638 boron Chemical class 0.000 description 5
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 4
- JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N h2o hydrate Chemical compound O.O JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010021083 hen egg lysozyme Proteins 0.000 description 4
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YUXKOWPNKJSTPQ-AXWWPMSFSA-N (2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoic acid;(2s)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O.C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O YUXKOWPNKJSTPQ-AXWWPMSFSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 2
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- -1 m-maleimidobenzoyl Chemical group 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIYPCWKHSODVAP-UHFFFAOYSA-N 1-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)benzoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1=CC=CC(N2C(C=CC2=O)=O)=C1 DIYPCWKHSODVAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101100208721 Mus musculus Usp5 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- DHXVGJBLRPWPCS-UHFFFAOYSA-N Tetrahydropyran Chemical compound C1CCOCC1 DHXVGJBLRPWPCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002494 anti-cea effect Effects 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- CIZVQWNPBGYCGK-UHFFFAOYSA-N benzenediazonium Chemical class N#[N+]C1=CC=CC=C1 CIZVQWNPBGYCGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 108010087914 epidermal growth factor receptor VIII Proteins 0.000 description 1
- 229940082789 erbitux Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- AHHWIHXENZJRFG-UHFFFAOYSA-N oxetane Chemical compound C1COC1 AHHWIHXENZJRFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- WHMDPDGBKYUEMW-UHFFFAOYSA-N pyridine-2-thiol Chemical compound SC1=CC=CC=N1 WHMDPDGBKYUEMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- PDEFQWNXOUGDJR-UHFFFAOYSA-M sodium;2,2-dichloropropanoate Chemical compound [Na+].CC(Cl)(Cl)C([O-])=O PDEFQWNXOUGDJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania koniugatów białko-klaster boru, który charakteryzuje się tym, że addukt klasteru boru z cyklicznym eterem poddaje się reakcji z białkiem lub peptydem, przy czym reakcję prowadzi się w roztworze wodnym lub wodno-organicznym, korzystnie w temperaturze pokojowej.
Description
Przedmiotem wynalazku jest metoda syntezy koniugatów białek lub peptydów z klasterami boru, a także produkt tej reakcji oraz jego zastosowanie. Metoda obejmuje szczególnie zastosowanie pochodnych cyklicznych eterów klasterów boru do modyfikacji białek i peptydów w fazie ciekłej w środowisku wodnym lub wodno-organicznym.
Tworzenie koniugatów białek lub peptydów z lekami umożliwia potencjalną intensyfikację pozytywnych efektów terapeutycznych badanej substancji leczniczej, bądź rozszerzenie ich właściwości o inne czynniki, szczególnie istotne z punktu widzenia efektywności terapii. Wśród nich wymienia się nie tylko bezpośredni wpływ na parametry farmakodynamiczne oraz farmakokinetyczne działania związku terapeutycznego, ale również szerokie zastosowanie w celowanym dostarczaniu leków do miejsc zmienionych chorobowo [1] [2]. Obecnie terapie celowane stanowią szeroką i prężnie rozwij ającą się gałąź przemysłu farmaceutycznego, w której prym wiodą nośniki w postaci przeciwciał monoklonalnych [3] [4]. Przeciwciała monoklonalne są to białka wydzielane przez komórki plazmatyczne w przebiegu odpowiedzi immunologicznej typu humoralnego. Mają zdolność do swoistego rozpozn awania i wiązania się z antygenami w obrębie ściśle określonego epitopu. Potencjalne możliwości przeprowadzenia reakcji wiązania związku terapeutycznego z przeciwciałem mogą zostać przeprowadzone na podstawie reakcji na białkach lub peptydach modelowych, celem określenia mechanizmu reakcji chemicznej oraz jej swoistości względem odpowiednich grup funkcyjnych poszczególnych aminokwasów.
Wśród głównych białek modelowych wymienia się między innymi lizozym jaja kurzego oraz bydlęcy inhibitor trzustkowy trypsyny. Lizozym jaja kurzego jest termostabilnym zasadowym białkiem zawierającym 129 aminokwasów o masie cząsteczkowej 14,4 kDa. Stanowi naturalny enzym występujący w białku jaja o bezpośrednim działaniu przeciwbakteryjnym. Pozawala to na śledzenie potencjalnej utraty aktywności białka w kompleksie z lekiem poprzez utratę zdolności bójczych względem bakterii gram dodatnich. Grupę modelowych peptydów reprezentuje bydlęcy inhibitor trzustkowy trypsyny (BPTI - bovine pancreatic trypsin inhibitor). Należący do grupy proteaz serynowo-treoninowych, polipeptyd o masie cząsteczkowej 6,5 kDa, zawierający 16 różnych aminokwasów w całości złożony z 58 aminokwasów.
Przeciwciała monoklonalne i ich fragmenty, jak również inne białka modyfikowane klasterami boru mogące potencjalnie rozpoznawać w sposób selektywny komórki nowotworowe są od dawna przedmiotem zainteresowania jako nośniki boru dla BNCT [5] [6] [7] [8] [9].
Przykładem może być modyfikowane klasterem orto-karboranylowym przeciwciało przeciw antygenowi rakowo-płodowym (CEA) [10], modyfikowane borem białko EGF wiążące się ze swoim receptorem (EGFR) ulegającym nadekspresji w komórkach szeregu rodzajów nowotworów [11], modyfikowane borem chimeryczne przeciwciało Cetuximab (IMC-C225, Erbitux), wytwarzane przez ImCIone Systems, Inc. (New York, NY), rozpoznające zarówno dziką formę receptora EGFR jak i jego formę zmutowaną EGFRvlll [12].
W celu syntezy koniugatów białek i klasterów boru stosowano szereg metod, wszystkie polegały na reakcji reaktywnych donorów klasterów boru z białkami w fazie ciekłej, w temperaturach zbliżonych do fizjologicznych lub niższych np.:
1) Reakcja soli benzenodiazoniowej orto-karboranu z przeciwciałem anty-BSA, przeciwciałami przeciw wybranym ludzkim białkom zgodności tkankowej [13], czy też z przeciwciałem przeciw CEA IgG [10].
2) Przyłączanie do przeciwciał, modyfikowanych klasterem nido-ortokarboranylowym peptydów, na drodze transformacji ich C-końca w aktywny ester [14].
3) Przyłączanie do białek modyfikowanych klasterami boru dendrymerów na drodze kondensacji funkcjonalizowanego za pomocą estru m-maleimidobenzoilosulfosykcynoimidu (sulfo-MBS) dendrymeru oraz funkcjoanlizowanego za pomocą propinionianu N-sukcynoimidylo-3-(2-pirydylotiolu) (SPDP) przeciwciała IB16-6 skierowanego przeciw murine czerniakowi B16 [6] lub w przypadku terapeutycznego przeciwciała Cetuximab (IMC-C225) zmodyfikowanej wersji tej metody [8].
4) Reakcja aktywowanego kwasu karboksylowego lub jego acylofluorowej pochodnej zawierającego klaster nido-orto-karboranylowy z białkami takimi jak hemocyjanina KLH (KLH - keyhole limpet hemocyanin), albumina surowicy bydlęcej (BSA) czy też albumina jaja kurzego (Ova) [15].
Nieoczekiwanie okazało się, że możliwe jest wykorzystanie do syntezy koniugatów białek lub peptydów z klasterami boru metody opartej na zastosowaniu klasterów boru sfunkcjonalizowanych
PL 224 408 B1 cyklicznymi eterami oraz reakcji prowadzonej w fazie ciekłej w środowisku wodnym lub wodnoorganicznym.
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania koniugatów białko-klaster boru charakteryzujący się tym, że addukt klasteru boru z cyklicznym eterem poddaje się reakcji z białkiem lub pept ydem, przy czym reakcję prowadzi się w roztworze wodnym lub wodno-organicznym, korzystnie w temperaturze pokojowej.
Jako addukt klasteru boru z cyklicznym eterem należy rozumieć addukt klasteru boru z pierścieniowym związkiem organicznym zawierającym wiązania eterowe, w których atom tlenu połączony jest z dwoma atomami węgla pierścienia węglowego. Całkowita ilość atomów węgla w pierścieniu cyklicznego eteru wynosi od 2 do 5, z uwzględnieniem występowania pomiędzy nimi jedynie wiązań jedynie jednokrotnych (nasyconych). Ponadto, każdy z atomów węgla cyklicznego eteru może zawierać podstawniki alifatyczne (liniowe i rozgałęzione), jak i aromatyczne.
Korzystnie, addukt klasteru boru z cyklicznym eterem jest adduktem z pierścieniami: dioksanu, tetrahydropiranu, tetrahydrofuranu, oksetanu lub oksiranu.
Korzystnie, klaster boru jest grupą 7,8-dikarba-nido-undekaboranową (nido-karboranylową), closo-dodekaboranową lub ich podstawionymi na atomie węgla lub boru pochodnymi.
Korzystnie, grupa metanokarboranowa zawiera atom metalu (Me) wybrany spośród dla Co, Fe, Cr, Rh.
Jako roztwór wodno-organiczny można stosować dowolny wodny roztwór znanego polarnego rozpuszczalnika organicznego mieszającego się z wodą umożliwiającego jednocześnie rozpuszczenie hydrofobowego adduktu klasteru boru z cyklicznym eterem. W szczególności może to być roztwór acetonitrylu, alkoholu, DMF lub DMSO.
Dla lepszego wyjaśnienia istoty wynalazku niniejszy opis zawiera następujące figury:
figura 1, na której przedstawione zostały ogólne wzory chemiczne przykładowych klasterów boru. A1 - klaster nido-karboranylowy; A2 - metalokarboran; A3 - klaster closo-dodekaboranowy.
figura 2, na której przedstawione zostały wyniki syntezy koniugatu lizozymu z klasterem nidokarboranylowym (ZL-0998). A1, A2 - natywny lizozym, widmo MS-TOF przed i po dekonwolucji; B1, B2 - zmodyfikowane lizozym, widmo MS-TOF, przed i po dekonwolucji.
P r z y k ł a d 1
Modyfikacja lizozymu jaja kurzego klasterem nido-karboranylowym (fig. A1)
Dioksan-nido-karboran (0,05 mg, 227 nmol) rozpuszczono w dimetyloformamidzie (DMF) z niewielkim dodatkiem wody bądź wody amoniakalnej i inkubowano przez 8h w temperaturze pokojowej. Lizozym jaja kurzego (0,1 mg, 6,8 nmol) rozpuszczono w buforze fosforanowym (100 mM, pH = 7,4). Połączono lizozym i dioksan-nido-karboran uzyskując finalnie wzajemny stosunek molowy wynoszący 1:33. Mieszaninę reakcyjną inkubowano w temperaturze pokojowej ciągle mieszając przez 60 minut. Do analizy LC-MS, otrzymane produkty rozcieńczono w fazie nośnej (CH3CN:H2O 10:90) dla uzyskania końcowego stężenia białka 0,1mg/ml. Otrzymany produkt reakcji oczyszczony został przy użyciu chromatografii SEC (size exlusion chromatography).
P r z y k ł a d 2
Modyfikacja inhibitora proteaz serynowo-treoninowych (BPTI) klasterem nido-karboranylowym (fig. A1)
Dioksan-nido-karboran (0,05 mg, 227 nmol) rozpuszczono w dimetyloformamidzie (DMF) z niewielkim dodatkiem wody bądź wody amoniakalnej i inkubowano przez 8 h w temperaturze pokojowej. BPTI (0,2 mg, 30,7 nmol) rozpuszczono w buforze fosforanowym (100 mM, pH = 7,4). Połączono BPTI i dioxan-nido-karboran uzyskując finalnie wzajemny stosunek molowy wynoszący 1:7,4. Mieszaninę reakcyjną inkubowano w temperaturze pokojowej ciągle mieszając przez 60 minut. Do analizy LC-MS, otrzymane produkty rozcieńczono w fazie nośnej (CH3CN:H2O 10:90) dla uzyskania końcowego stężenia białka 1 mg/ml. Otrzymany produkt reakcji oczyszczony został przy użyciu chromatografii SEC (size exlusion chromatography).
P r z y k ł a d 3
Modyfikacja lizozymu jaja kurzego klasterem metalokarboranowym (fig. A2)
Dioksan-metalokarboran (0,045 mg, 109 nmol) rozpuszczono w dimetyloformamidzie (DMF) z niewielkim dodatkiem wody, bądź wody amoniakalnej i inkubowano przez 8 h w temperaturze pokojowej. Lizozym jaja kurzego (0,1 mg, 6,8 nmol) rozpuszczono w buforze fosforanowym (100 mM, pH = 7,4). Połączono lizozym i dioxan-metalokarboran uzyskując finalnie wzajemny stosunek molowy wy4
PL 224 408 B1 noszący 1:25, przy zawartości rozpuszczalnika organicznego powyżej 50% objętości roztworu. Mieszaninę reakcyjną inkubowano w temperaturze pokojowej ciągle mieszając przez 60 minut. Do analizy LC-MS, otrzymane produkty rozcieńczono w fazie nośnej (CH3CN:H2O 10:90) dla uzyskania końcowego stężenia białka 0,1mg/ml. Otrzymany produkt reakcji oczyszczony został przy użyciu chromatografii SEC (size exlusion chromatography).
P r z y k ł a d 4
Modyfikacja inhibitora proteaz serynowo-treoninowych (BPTI) klasterem metalokarboranowym (fig. A2)
Dioksan-metalokarboran (0,045 mg, 109 nmol) rozpuszczono w dimetyloformamidzie (DMF) z niewielkim dodatkiem wody, bądź wody amoniakalnej i inkubowano przez 8 h w temperaturze pokojowej. BPTI (0,2 mg, 30,7 nmol) rozpuszczono w buforze fosforanowym (100 mM, pH = 7,4). Połączono BPTI i dioxan-metalokarboran uzyskując finalnie wzajemny stosunek molowy wynoszący 1:5,6. Przy zawartości rozpuszczalnika organicznego powyżej 50% objętości roztworu. Mieszaninę reakcyjną inkubowano w temperaturze pokojowej ciągle mieszając przez 60 minut. Do analizy LC-MS, otrzymane produkty rozcieńczono w fazie nośnej (CH3CN:H2O 10:90) dla uzyskania końcowego stężenia białka 0.1mg/ml. Otrzymany produkt reakcji oczyszczony został przy użyciu chromatografii SEC (size exlusion chromatography).
Bibliografia
1. Kańska U., Omar M. S., Budzyńska R., Nevozhay D., Jagiełło M., Opolski A., Boratyński J.
Antileukemic activity of glycated fibrinogen-methotrexate conjugates. Anticancer Res. 2005, 25 (3B): 2229-34.
2. Boratyński J., Opolski A., Wietrzyk J., Górski A., Radzikowski C. Cytotoxic and antitumor effect of fibrinogen-methotrexate conjugate. Cancer Lett. 2000,148 (2):189-95.
3. Sharkey R. M., Govindan S. V., Cardillo T. M., Goldenberg D. M. Epratuzumab-SN-38: a new antibody-drug conjugate for the therapy of hematologic malignancies. Mol. Cancer Ther. 2012, 11 (1): 224-34.
4. Ricart A. D. Antibody-drug conjugates of calicheamicin derivative: gemtuzumab ozogamicin and inotuzumab ozogamicin. Clin, Cancer Res. 2011,17 (20): 6417-27.
5. Abraham R., Muller R., Gabel D. Boronated antibodies for neutron capture therapy. Strahlenther Onkol. 1989, 165 (2-3): 148-51.
6. Barth R. F., Adams D. M., Soloway A. H., Alam F., Darby M. V. Boronated starburst dendrimer- monoclonal antibody immunoconjugates: evaluation as a potential delivery system for neutron capture therapy. Bioconjug Chem. 1994, 5 (1): 58-66.
7. Liu L., Barth R. F., Adams D. M., Soloway A. H., Reisfeld R. A. Critical evaluation of bispecific antibodies as targeting agents for boron neutron capture therapy of brain tumors. Anticancer Res. 1996, 16( 5A): 2581-7.
8. Wu G., Barth R. F., Yang W., Chatterjee M., Tjarks W., Ciesielski M. J., Fenstermaker R. A.
Site-specific conjugation of boron-containing dendrimers to anti-EGF receptor monoclonal antibody cetuximab (IMC-C225) and its evaluation as a potential delivery agent for neutron capture therapy. Bioconjug Chem. 2004, 15 (1): 185-94.
9. Novick S., Quastel M. R., Marcus S., Chipman D., Shani G., Barth R. F., Soloway A. H.
Linkage of boronated polylysine to glycoside moieties of polyclonal antibody; boronated antibodies as potential delivery agents for neutron capture therapy. Nucl. Med. Biol. 2002, 29 (2): 159-67.
10. Mizusawa E., Dahlman H. L., Bennett S. J., Goldenberg D. M., Hawthorne M. F. Neutron-capture therapy of human cancer: in vitro results on the preparation of boron-labeled antibodies to carcinoembryonic antigen. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1982, 79 (9): 3011-4.
11. Carlsson J., Gedda L., Gronvik C., Hartman T., Lindstrom A., Lindstrom P., Lundqvist H., Lovqvist A., Malmqvist J., Olsson P. Strategy for boron neutron capture therapy against tumor cells with over-expression of the epidermal growth factor-receptor. Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 1994, 30 (1): 105-15.
12. Yang W., Barth R. F., Wu G., Bandyopadhyaya A. K., Thirumamagal B. T., Tjarks W., Binns P. J., Riley K., Patel, H., Coderre J. A., Ciesielski M. J., Fenstermaker R. A. Boronated epidermal growth factor as a delivery agent for neutron capture therapy of EGF receptor positive gliomas. Appl. Radiat. Isot. 2004, 61 (5): 981-5.
PL 224 408 B1
13. Hawthorne M. F., Wiersema R. J., Takasugi M. Preparation of tumor-specific boron compounds. 1. In vitro studies using boron-labeled antibodies and elemental boron as neutron targets.
J. Med. Chem. 1972, 15 (5): 449-52.
14. Paxton R. J., Beatty B. G., Varadarajan A., Hawthorne M. F. Carboranyl peptide-antibody conjugates for neutron-capture therapy: preparation, characterization and in vivo evaluation. Bioconjug Chem. 1992, 3 (3): 241-7.
15. Pak R. H., Primus F. J., Rickard-Dickson K. J., Ng L. L., Kane R. R., Hawthorne M. F.
Preparation and properties of nido-carborane-specific monoclonal antibodies for potential use in boron neutron capture therapy for cancer. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995, 92 (15): 6986-90.
Claims (3)
1. Sposób otrzymywania koniugatów białko-klaster boru, znamienny tym, że addukt klasteru boru z cyklicznym eterem poddaje się reakcji z białkiem lub peptydem, przy czym reakcję prowadzi się w roztworze wodnym lub wodno-organicznym, korzystnie w temperaturze pokojowej.
2. Sposób według zastrzeżenia 1, znamienny tym, że klaster boru jest grupą 7,8-dikarba-nidoundekaboranową (nido-karboranylową), closo-dodekaboranową lub ich podstawionymi na atomie węgla lub boru pochodnymi.
3. Sposób według zastrzeżenia 1, znamienny tym, że grupa metanokarboranowa zawiera atom metalu (Me) wybrany spośród dla Co, Fe, Cr, Rh.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL398380A PL224408B1 (pl) | 2012-03-09 | 2012-03-09 | Sposób otrzymywania koniugatów białko-klaster boru w roztworze |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL398380A PL224408B1 (pl) | 2012-03-09 | 2012-03-09 | Sposób otrzymywania koniugatów białko-klaster boru w roztworze |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL398380A1 PL398380A1 (pl) | 2013-09-16 |
| PL224408B1 true PL224408B1 (pl) | 2016-12-30 |
Family
ID=49156152
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL398380A PL224408B1 (pl) | 2012-03-09 | 2012-03-09 | Sposób otrzymywania koniugatów białko-klaster boru w roztworze |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL224408B1 (pl) |
-
2012
- 2012-03-09 PL PL398380A patent/PL224408B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL398380A1 (pl) | 2013-09-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7753372B2 (ja) | 重水素化カンプトテシン系誘導体及びその抗体薬物複合体 | |
| EP4227310A1 (en) | Camptothecin derivative and ligand-drug conjugate thereof | |
| TWI237022B (en) | Novel acyl-dipeptide-like compounds bearing an accessory functional side chain spacer, a method for preparing the same and pharmaceutical compositions containing such products | |
| Wang et al. | Targeted delivery of paclitaxel to EphA2-expressing cancer cells | |
| KR102097876B1 (ko) | 항체-약물 접합체 중의 공유결합 링커 및 이의 제조방법 및 사용방법 | |
| JP5814366B2 (ja) | 抗癌性誘導体、この調製および治療への使用 | |
| JP2020531474A (ja) | トル様受容体７（ｔｌｒ７）アゴニストとしての６−アミノ−７，９−ジヒドロ−８ｈ−プリン−８−オン誘導体 | |
| JP2020531472A (ja) | 免疫刺激因子トル様受容体７（ｔｌｒ７）アゴニストとしての、６−アミノ−７，９−ジヒドロ−８ｈ−プリン−８−オン誘導体 | |
| JP2020531469A (ja) | 三環式基を有するトル様受容体７（ｔｌｒ７）アゴニスト、そのコンジュゲート、ならびにそれらの方法および使用 | |
| JP2020531468A (ja) | 免疫刺激因子トル様受容体７（ｔｌｒ７）アゴニストとしての６−アミノ―７，９−ジヒドロ−８ｈ−プリン−８−オン誘導体 | |
| Gazvoda et al. | Palladium-mediated incorporation of carboranes into small molecules, peptides, and proteins | |
| AU2022232674B2 (en) | Anti-her2 antibody-immune agonist conjugate and applications thereof | |
| JPS63166897A (ja) | 免疫グロブリンコンジュゲート | |
| Endo et al. | In vitro cytotoxicity of a human serum albumin-mediated conjugate of methotrexate with anti-MM46 monoclonal antibody | |
| US10654873B2 (en) | Cytotoxic agents and conjugates thereof | |
| Umemoto et al. | Preparation and in vitro cytotoxicity of a methotrexate‐anti‐MM46 monoclonal antibody conjugate via an oligopeptide spacer | |
| Shajari et al. | Production and conjugation of truncated recombinant diphtheria toxin to VEGFR-2 specific nanobody and evaluation of its cytotoxic effect on PC-3 cell line | |
| US9486535B2 (en) | Methods of making and using nanostructures | |
| PL224408B1 (pl) | Sposób otrzymywania koniugatów białko-klaster boru w roztworze | |
| EP1661584A1 (en) | Use of conjugates of amatoxins and phallotoxins with macromolecules for cancer and inflammation therapy | |
| Zhou et al. | Kaleidoscope megamolecules synthesis and application using self-assembly technology | |
| Edwards | Targeting potential of antibody conjugates | |
| US20240398970A1 (en) | B7-h3 targeting antibody-drug conjugate, and preparation method therefor and use thereof | |
| Zubareva et al. | Chitosan nanoparticles targeted to the tumor-associated ganglioside GD2 | |
| El-Zaria et al. | New strategy for synthesis of mercaptoundecahydrododecaborate derivatives via click chemistry: possible boron carriers and visualization in cells for neutron capture therapy |