PL222280B1 - Diarylowe estry, pochodne fosfonowego analogu glutaminy, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie - Google Patents

Diarylowe estry, pochodne fosfonowego analogu glutaminy, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie

Info

Publication number
PL222280B1
PL222280B1 PL398757A PL39875712A PL222280B1 PL 222280 B1 PL222280 B1 PL 222280B1 PL 398757 A PL398757 A PL 398757A PL 39875712 A PL39875712 A PL 39875712A PL 222280 B1 PL222280 B1 PL 222280B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
hours
methyl
derivatives
trityl
ester
Prior art date
Application number
PL398757A
Other languages
English (en)
Other versions
PL398757A1 (pl
Inventor
Józef Oleksyszyn
Marcin Sieńczyk
Ewa Pietrusewicz
Maciej Walczak
Original Assignee
Politechnika Wroclawska
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Politechnika Wroclawska filed Critical Politechnika Wroclawska
Priority to PL398757A priority Critical patent/PL222280B1/pl
Publication of PL398757A1 publication Critical patent/PL398757A1/pl
Publication of PL222280B1 publication Critical patent/PL222280B1/pl

Links

Abstract

Wynalazek zapewnia diarylowe estry, pochodne fosfonowego analogu glutaminy oraz ich peptydowe pochodne o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza grupę, benzyloksykarbonylową albo resztę peptydową składającą się z jednego lub dwóch aminokwasów, R oznacza wodór, etyl, tert-butyl, O-metyl, S-metyl i chlor. Wynalazek dotyczy także sposobu wytwarzania diarylowych estrów, pochodnych fosfonowych analogu glutaminy o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza grupę benzyloksykarbonylową albo resztę peptydową składającą się z jednego lub dwóch aminokwasów, R oznacza wodór, etyl, tert-butyl, O-metyl, S-metyl i chlor charakteryzujący się tym, że otrzymuje się ester metylowy kwasu bursztynowego, a następnie otrzymuje się 3-karboksy-N-trytylopropionamid, w którym redukuje się grupę estrową przy użyciu borowodorku litu i następnie znaną metodą Swerna utlenia się grupę hydroksylową do aldehydu i otrzymuje się związek w postaci 4-N-trytyloamidobutanalu, który poddaje się reakcji z fosforynem triarylowym i z karbaminianem benzylu, w acetonitrylu z dodatkiem katalizatora soli miedzi (II) kwasu trójfluorometanosulfonowego i otrzymuje się pochodne diarylowych estrów z grupą amidową zablokowaną trytylem. Wynalazek dotyczy również zastosowania diarylowych estrów, pochodnych fosfonowego analogu glutaminy o wzorze ogólnym 1, jako środka zwalczającege chorobotwórcze działanie szczepów Staphylococcus aureus.

Description

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 222280 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 398757 (51) Int.Cl.
C07F 9/40 (2006.01) A61P 31/00 (2006.01) (22) Data zgłoszenia: 06.04.2012
Diarylowe estry, pochodne fosfonowego analogu glutaminy, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie
(73) Uprawniony z patentu: POLITECHNIKA WROCŁAWSKA, Wrocław, PL
(43) Zgłoszenie ogłoszono: 19.11.2012 BUP 24/12 (72) Twórca(y) wynalazku:
(45) O udzieleniu patentu ogłoszono: JÓZEF OLEKSYSZYN, Siechnice, PL MARCIN SIEŃCZYK, Wrocław, PL EWA PIETRUSEWICZ, Wrocław, PL MACIEJ WALCZAK, Wrocław, PL
29.07.2016 WUP 07/16 (74) Pełnomocnik: rzecz. pat. Anna Meissner
PL 222 280 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są diarylowe estry, pochodne fosfonowego analogu glutaminy i ich peptydowe pochodne, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie w medycynie.
Znany jest z polskiego opisu patentowego PL 215209 wynalazek dotyczący nowych pochodnych diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza grupę benzyloksykarbonylową (Cbz) lub dipeptyd składający się z proliny i waliny, w którym grupa aminowa waliny jest zablokowana przez grupę t-butyloksykarbonylową (Boc) lub 4-metoksybenzoilową, R oznacza podstawnik analogiczny do łańcucha bocznego waliny, norwaliny, norleucyny lub kwasu 2-ammobutanowego (Abu). X1, X2, X4 i X5 oznaczają wodór, natomiast X3 oznacza wodór lub związek wybrany z grupy obejmującej merkaptometyl (S-metyl). 1,1,3,3-tetrametyIobutyl, karboksymetyl lub tertbutyl. Przedmiotem wynalazku są także sposoby wytwarzania związków o wzorze ogólnym 1. Sposób wytwarzania pochodnych diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza Cbz, R oznacza łańcuch boczny waliny, norwaliny i kwasu 2-aminobutylowego, X1, X2, X4 i X5 oznaczają wodór, natomiast X3 oznacza karboksymetyl, polega na tym, że fosforyn triarylowy, otrzymany z fenolu tri-p-karboksymetylowego oraz chlorku fosforu (III) w acetonitrylu, poddaje się amidoalkilowaniu przy użyciu karbaniinianu, fosforynu tri-p-karboksymetylu oraz aldehydu, takiego jak aldehyd 11-butylowy, aldehyd izobutylowy i aldehyd propylowy w lodowatym kwasie octowym jako rozpuszczalniku. Wynalazek dotyczy ponadto zastosowania pochodnych diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych jako nieodwracalnych inhibitorów LNE w preparatach przeciwzapalnych, w leczeniu arteriosklerozy, powikłań reumatycznych oraz jako nowych leków anty rakowych, przydatnych w leczeniu nowotworów piersi i płuc.
Z polskiego zgłoszenia patentowego P. 385481 znane są diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych przedstawionych ogólnym wzorem 1, w którym W oznacza grupę benzyloksykarbonylową albo resztę peptydową składającą się z jednego, dwu lub trzech aminokwasów, R1 oznacza, podstawnik analogiczny do łańcucha bocznego naturalnych aminokwasów, w szczególności leucyny, fenyloalaniny. X1, X2, X4 i X5 są takie same lub rożne i oznaczają metyl, etyl, benzyl, O-metyl i S-metyl. Przedmiotem wynalazku jest również zastosowanie nowych diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych jako inhibitorów chymotrypsyny, enzymów chymotrypsyno-podobnych i subtylizyny. Przedmiotem wynalazku jest też sposób wytwarzania tych związków, który polega na tym, że w pierwszym etapie otrzymuje się fosforyn triarylowy, który następnie poddaje się reakcji am idoalkilowania i w otrzymanym estrze N-benzyloksykarbonylowym kwasu 1-aminofosfonowego odblokowuje się grupę aminową, a następnie sprzęga się go z N-zablokowanymi aminokwasami karboksylowymi lub dipeptydami, otrzymując peptydowe pochodne estrów diarylowych kwasów 1 -aminoalkanofosfonowych.
Istotą wynalazku są diarylowe estry, pochodne fosfonowego analogu glutaminy oraz ich pept ydowe pochodne o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza grupę benzyloksykarbonylową (Cbz), łańcuch boczny leucyny lub dipeptyd składający się z kwasu glutaminowego i leucyny. R oznacza podstawnik na pierścieniu fenylowym, którymi są wodór, etyl, tert-butyl, O-metyl, S-metyl i chlor.
Istotą rozwiązania według wynalazku jest również sposób wytwarzania diarylowych estrów pochodnych fosfonowego analogu glutaminy oraz ich peptydowych pochodnych o wzorze ogólnym l, w którym W oznacza grupę benzyloksykarbonylową (Cbz), łańcuch boczny leucyny lub dipeptyd składający się z kwasu glutaminowego i leucyny, R oznacza podstawnik na pierścieniu fenylowym, którymi są wodór, etyl, tert-butyl, O-metyl, S-metyl i chlor polegający na tym, że z bezwodnika kwasu bursztynowego i metanolu w temperaturze wrzenia (~65°C) otrzymuje się ester metylowy kwasu bursztynowego, przy czym reakcję prowadzi się przez 3 godziny i pod ciśnieniem atmosferycznym a następnie po 24 godzinach, w temperaturze pokojowej, pod ciśnieniem atmosferycznym i w obecności acetonitrylu oraz z zastosowaniem czynnika sprzęgającego HBTU, otrzymuje się 3-karboksy-N-trytylopropinoamid, w którym redukuje się grupę estrową przy użyciu borowodorku litu w bezwodnym tetrahydrofuranie przez 30 minut, w temperaturze pokojowej i następnie utlenia się grupę hydroksylową do aldehydu i otrzymuje się związek o wzorze 2 w postaci 4-N-trytyloaminobutanolu, gdzie reakcję prowadzi się przez 2 godziny w temperaturze -60°C w bezwodnym tlenku metylenu i pod ciśnieniem atmosferycznym, który poddaje się reakcji z fosforynem trialowym przez 2 godziny w temperaturze 90°C i z karbaminianem benzylu przez 24 godziny w temperaturze pokojowej pod ciśnieniem atmosferyc znym, w acetonitrylu z dodatkiem katalizatora soli miedzi (11) kwasu trójfluorometanosulfonowego otrzymując pochodne diarylowe estrów z grupą amidową zablokowaną trytylem.
PL 222 280 B1
Korzystnie z pochodnych diarylowych estrów z grupą amidową zablokowaną trytylem usuwa się grupę trytylową przy użyciu mieszaniny kwas trifluorooctowy i triizopropylosilian w stosunku 100:5/v:v, przy czym proces prowadzi się przez dwie godziny w temperaturze pokojowej.
Korzystnie z pochodnych diarylowych estrów z grupą amidową zablokowaną trytylem odblokowuje się co najmniej faz hydrogenolitycznie grupę benzyloksykarbonylową, przy czym proces prowadzi się przez 4 godziny w atmosferze ochronnej azotu, w temperaturze pokojowej i pod ciśnieniem atmosferycznym, a następnie estry sprzęga się co najmniej raz N-zablokowanymi aminokwasami karboksylowymi i usuwa się grupę trytylową przy użyciu mieszaniny kwas trifluorooctowy i triizopropylosilian w stosunku 100:5/v:v., przy czym proces prowadzi się przez 2 godziny w temperaturze pokojowej, i otrzymuje się odpowiednie dipeptydowe lub trójpeptydowe pochodne diarylowych estrów.
Istotą wynalazku są także diarylowe estry pochodne fosfonowego analogu glutaminy oraz ich peptydowe pochodne o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza grupę benzyloksykarbonylową (Cbz). łańcuch boczny leucyny lub dipeptyd składający się z kwasu glutaminowego i leucyny, R oznacza podstawnik na pierścieniu fenylowym, którymi są wodór, etyl, tert-butyl, O-metyl, S-metyl i chlor do zastosowania jako lek przeciwbakteryjny.
P r z y k ł a d 1. Sposób otrzymywania 4-N-trytyloamidobutanalu przedstawionego wzorem 2 prowadzi się w czterech etapach.
Etap 1. Synteza estru metylowego kwasu bursztynowego.
Do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 0,2 mola bezwodnika bursztynowego i 140 ml metanolu. Reakcje prowadzi się przez 3 godziny w temperaturze wrzenia metanolu. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem odparowuje się lotne rozpuszczalniki mieszaniny reakcyjnej, aż do uzyskania białego proszku. Nazwa: ester metylowy kwasu bursztynowego, Symbol: HOOC-CH2-CH2-COOH, Wydajność: 99%. R 0,52 (CHCĄAcOEt/ 4:1/v:v), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]):5 2,6-2,66 (m, 4H, 2xCH2), 3,70 (s, 3H, CH3), 11,14 (s, 1H, OH), ESI-MS: m/z 155,0320/155,0300 (M+Na)+.
Etap 2. Synteza 3-karboksy-N-trytylopropionamidu.
Do kolby okrągłodennej odważa się 45,2 mmola estru metylowego kwasu bursztynowego i 41,28 mmola trytyloaminy. Następnie całość rozpuszcza się w 50 ml acetonitrylu i dodaje 14,28 ml trójetyloaminy oraz 43,3 mmola HBTU. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie całość umieszcza się w rozdzielaczu, zalewa solanką i ekstrahuje dwukrotnie octanem etylu (2x50 ml). Połączone frakcje organiczne przemywa się 5% NaHCO3 (2x50 ml), solanką (50 ml), 5% KHSO4 (2x50 ml), solanką (50 ml) i suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu. Po odsączeniu środka suszącego, lotne rozpuszczalniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem, aż do uzyskania białego produktu. Nazwa: 3-karbometoksy-N-trytytopropionamid, Symbol: Trt-NHCO(CH2)2COOCH3, Wydajność: 30%. Rf, 0,58 (CHCh:AcOEt/4:1/v:v). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCk δ [ppm]): 2,45-2,72 (m, 4M, 2xCH2), '3,65 (s, 3H, CH3), 6,83 (s, 1 H, NH), 7,15-7,36 (m, 15H, Ar-H), ESI-MS: m/z 396,1576/396,1594 (M+Na)+.
Etap 3. Synteza 4-hydroksy-N-trytylbutanamidu.
Do kolby okrągłodennej odważa się 13 mmola 3-karbometoksy-N-trytyIopropionamidu i zalewa się 80 ml THF. Do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 0,13 mola LiBH4 i intensywnie miesza przez około 30 minut w temperaturze pokojowej. Następnie dodaje się około 120 ml EtOH i po 24 godzinach całość zalewa sie 5% kwasem cytrynowym, aż do momentu gdy mieszanina reakcyjna zrobi się klarowna. Odparowuje się EtOH i THF pod zmniejszonym ciśnieniem, a warstwę wodną ekstrahuje się chloroformem (3x100 ml). Połączone frakcje organiczne przemyto wodą (2x100 ml) i solanką (2x100 ml) i suszono nad bezwodnym siarczanem magnezu. Po odsączeniu środka suszącego odparowano lotne składniki mieszaniny i otrzymano produkt w postaci białego osadu. Nazwa: 4-hydroksy-Ntrytylbutanamid. Symbol: Trt-NHCO-(CH2)3-OH, Wydajność: 98%. Rf: 0,51 (CHCh:MeOH/9:1/v:v), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCK δ [ppm]): δ 83-87 (m, 2H, CH2), 2,434 (t, J=6,6Hz, 2H, CH2), 3,58-3,61 (m, 2H, CH2), 6,84 (s, 1H, NH), 7,19-7,30 (m, 15H, Ar-H). ESI-MS: m/z 368,1626/368,1612 (M+Na)+.
Etap 4. Synteza 4-N-trytyloamidobutanalu.
Do kolby okrągłodennej zaopatrzonej w wkraplacz odmierza się 0,1 mola chlorku oksalilu i rozcieńcza się go w 40 ml bezwodnego dichlorometanu. Mieszaninę schładza się do temperatury -60°C i powoli wkrapla roztwór DMSO (0,27 mola) w 50 ml bezwodnego dichlorometanu. Po około 10 minutach dodaje się 0,061 mola 4-hydroksy-N-trytylobutanamidu rozpuszczonego w 60 ml bezwodnego dichlorometanu. Po 2 godzinach reakcję przerywa się wkraplając 2 ml trójetyloaminy. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się nasycony roztwór chlorku amonu i ogrzewa do temperatury pokojowej.
PL 222 280 B1
Całość przenosi się do rozdzielacza. Oddziela warstwę organiczną, a warstwę wodną ekstrahuje się dichlorometanem (4x50 ml). Połączone frakcje organiczne przemywa sie 5% kwasem cytrynowym (50 ml), wodą (50 ml), solanką (50 ml) i suszy nad bezwodnym siarczanem magnezu. Po odsączeniu środka suszącego lotne składniki mieszaniny reakcyjnej odparowuje się na wyparce rotacyjnej otrz ymując produkt w postaci białego osadu. Nazwa: 4-N-trytyloamidobutanal, Symbol: Trt-NHCO-(CH2)2-CHO, Wydajność: 81%, R 0,42 (CHCl3:AcOEt/4:1/v:v), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCL δ [ppm]): 2,6-2,75 (m, 4H, 2xCH2), 6,97 (s, 1M, NH), 7,21-7,26 (m, 15H, Ar-H), 9,79 (s, 1H, COH), ESI-MS: m/z 366,1469/366,1468 (M+Na)+.
P r z y k ł a d 2. Sposób otrzymywania estru difenylowego kwasu l-N-(benzyloksykarbonylo)amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego przedstawionego wzorem 3 prowadzi się w 3 etapach.
Etap 1.
Do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 33 mmola fenolu i 10 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 10 minut. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 11 mmoli chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez dwie godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio do reakcji syntezy estrów diarylowych pochodnych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych.
Etap 2.
Do kolby okrągłodennej zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne odważa się 0,05 mola karbaminaniu benzylu, 0,05 mola fosforynu triarylowego i 0,05 mola 4-N-trytyloamidobutanalu. Całość rozpuszcza się w 30-50 ml bezwodnego dichlorometanu i dodaje 10% molowych katalizatora soli miedzi II kwasu trifluorometanosulfonowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 12-24 godziny. Następnie lotne składniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w 100 ml metanolu i umieszcza w temperaturze -20°C w celu krystalizacji. Nazwa: ester difenylowy kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-(Trt)GlnP-(OC6,H5)2, Wydajność; 75%, Rf: 0,38 (CHCl3:AcOEt/4:1/v;v), Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 17,47s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 2,58 (t, J=5,79 Hz, 2H, CH2), 2,83 (t, J=6,6 Hz, 2H, CH2), 4,71-4,83 (m, 1H, CHP), 5,18 (s, 1H, NH), 5,11-5,18 (s, 2H, CH2), 7,18-7,37 (m, 30H, Ar-H). EST-MS; m/z 733,2443/733,2125 (M+Na)+.
Etap 3.
Grupę trytylową usuwa się przy użyciu mieszaniny: kwas trifluorooctowy i triizopropylosilan w stosunku 100:5/v:v. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez około 2 godziny. Lotne rozpuszczalniki usuwa się na wyparce rotacyjnej, a powstały produkt oczyszcza się metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC: aparat WATERS 2489 zaopatrzony w kolumnę C18 WATERS Spherisorb Semi-Prep (20x250 mm) i detektor UV-Vis (liniowy gradient prowadzono od 0 do 100% B przez 50 minut (A: woda+0,1% TFA, B: 80% acetonitrylu w A). Nazwa: ester difenylowy kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Gln -(OCa H5)2, Wydajność: 80%, Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3 δ [ppm]): 17,16s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCL, δ [ppm]); 1,25-1,29 (m, 2H, CH2), 2,41 (t, 2=03 Hz, 2H, CH2), 4,46-4,53 (m, 1H, CHP), 5,11 (s, 2H, NH2), 5,12 (s, 2H, CH2), 5,22 (s, 1H, NH), 7,10-7,37 (m, 15H, Ar-H), ESI-MS:m/z 491,1348/491,1375 (M+Na)\HPLC: 38 minuta.
P r z y k ł a d 3. Sposób otrzymywania estru di-p-metylosuIfidofenylowego kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego przedstawionego wzorem 4 prowadzi się w 3 etapach.
Etap 1.
Do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 33 mmola p-metyIosulfidofenolu i 10 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu Całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 10 minut. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 1 1 mmoli chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez dwie godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio do reakcji syntezy estrów diarylowych pochodnych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych.
Etap 2.
Do kolby okrągłodennej zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne odważa się 0,05 mola karbaminaniu benzylu, 0,05 mola fosforynu tri-p-metylosulfidoarylowego i 0,05 mola 4-N-trytyloamidobutanalu.
PL 222 280 B1
Całość rozpuszcza się w 30-50 ml bezwodnego dichlorometanu i dodaje 10% molowych katalizatora soli miedzi II kwasu trifluorometanosulfonowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 12-24 godziny. Następnie lotne składniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem na w yparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w 100 ml metanolu i umieszcza w temperaturze -20°C w celu krystalizacji. Nazwa: ester di-p-metvlosulfidofenvlowv kwasu 1-N-(benzvloksvkarbanvlu)-amino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-(Trt)Gln -(OC6H4-4-S-CH3)2, Wydajność: 32%. R: 0,42 (CHCl3:AcOEt/4:1/v.v), Widmo 31P NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 17,50s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 2,47 (s, 6H, 2xCH3), 2,58 (t, J=5,79Hz, 2H, CH2), 2,80 (t, J=5,79 Hz, 2H, CH2), 5,00-5,18 (m, 1H, CHP), 5,19 (s, 1H, NH), 5,20 (s, 2H, CH2), 6,20 (s, 1H, NH), 7,18-7,37 (m, 28H, Ar-H). ESI-MS: m/z 825,2198/825,2197 (M+Na)+.
Etap 3.
Do kolby okrągłodennej odważa się 0,1 mola esteru di-p-metylosulfidofenylowego kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i następie dodaje się mieszaninę: kwas trifluorooctowy i triizopropylosilan w stosunku 100:5/v:v. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez około 2 godziny. Lotne rozpuszczalniki usuwa się na wyparce rotacyjnej, a powstały produkt oczyszcza się metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC aparat: WATERS 2489 zaopatrzony w kolumnę C18 WATERS Spherisorb Semi-Prep (20x250 mm) i detektor UV-Vis (liniowy gradient prowadzono od 0 do 100% B przez 50 minut (A: woda+0,1% TFA, B: 80% acetonitrylu w A). Nazwa: ester di-p-metvlosulfidofenvlowv kwasu 1-N-(benzvloksvkarbonylo)-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Gln -(OC6H4-4-S-CH3)2, Wydajność: 40%, Widmo 31P NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 17,27s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 1,58-1,65 (m, 2H, CH2), 2,51 (s, 6H, 2xCH3), 2,83-2,91 (m, 2H, CH2), 4,71-4,82 (m, 1H, CHP), 5,10 (s, 2H, NH2), 5,12 (s, 2H, CH2), 6,18 (s, 1H, NH), 7,28-7,57 (m, 13H, Ar-H). ESI-MS: m/z 583,1102/583,1133 (M+Na)+, HPLC: 39 minuta.
P r z y k ł a d 4. Sposób otrzymywania estru di-p-metoksyfenylowego kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego przedstawionego wzorem 5 prowadzi się w 3 etapach.
Etap 1.
Do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 33 mmola p-metoksyfenolu i 10ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 10 minut. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 11 mmoli chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez dwie godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio do reakcji syntezy estrów diarylowych pochodnych kwasów 1 -aminoalkanofosfonowych.
Etap 2.
Do kolby okrągłodennej zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne odważa się 0,05 mola karbaminaniu benzylu, 0,05 mola fosforynu tri-p-metoksyarylowego i 0,05 mola 4-N-trytyloamidobutanalu. Całość rozpuszcza się w 30-50 ml bezwodnego dichlorometanu i dodaje 10% molowych katalizatora soli miedzi II kwasu trifluorometanosulfonowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 12-24 godziny. Następnie lotne składniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w 100 ml metanolu i umieszcza w temperaturze -20°C w celu krystalizacji. Nazwa: ester di-p-metoksvfenvlowv kwasu 1-N-(benzvloksvkarbonvlo)-amino-3-N-(trvtvlo)-karboksvamido-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-(Trt)Gln -(OC6,H4-4-O-CH3)2. Wydajność: 27%, R: 0,19 (CHCh:AcOEt/4:1/v:v), Widmo 31P NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 17,59s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 2,12-2,60 (m, 2H, CH2), 2,43-2,93 (m, 2H, CH2), 3,77-3,84 (m, 6H, 2xCH3), 4,90-4,99 (m, 1H, CHP), 6,90 (s, 1H, NH), 5,82 (s, 2H, CH2), 6,24 (s, 1H, NH), 7,18-7,37 (m, 28 H, Ar-H). ESI-MS: m/z 793,2655/793,2154 (M+Na)+.
Etap 3.
Do kolby okrągłodennej odważa się 0,1 mola esteru di-p-metoksyfenylowego kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i następie dodaje się mieszaninę: kwas trifluorooctowy i triizopropylosilan w stosunku 100:5/v:v. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez około 2 godziny. Lotne rozpuszczalniki usuwa się na wyparce rotacyjnej, a powstały produkt oczyszcza się metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC aparat: WATERS 2489 zaopatrzony w kolumnę C18 WATERS Spherisorb Semi-Prep (20x250 mm) i detektor UV-Vis (liniowy gradient prowadzono od 0 do 100% B przez 50 minut (A: woda+0,1% TFA,
PL 222 280 B1
B: 80% acetonitrylu w A). Nazwa: ester di-p-metoksvfenvlowv kwasu 1-N-(benzvloksvkarbonvlo)-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Gln -(OC6H4-4-O-CH3)2, Wydajność: 40%. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 17,47s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 1,48-1,54 (m. 2H, CH2), 2,83-2,94 (m, 2H, CH2), 3,51 (s, 6H, 2xCH3), 4,77-4,92 (m, 1H, CHP), 5,09 (s, 2H, NH2), 5,12 (s, 2H, CH2), 6,23 (s, 1H, NH), 7,18-7,57 (m, 13H, Ar-H). ESI-MS: m/z 551,1559/551,0960 (M+Na)+, HPLC: 38,5 minuta
P r z y k ł a d 5. Sposób otrzymywania estru di-p-chlorofenylowego kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego przedstawionego wzorem 6 prowadzi się w 3 etapach.
Etap 1.
Do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 33 mmola p-chlorofenolu i 10 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 10 minut. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 11 mmoli chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez dwie godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio do reakcji syntezy estrów diarylowych pochodnych kwasów 1 -aminoalkanofosfonowych.
Etap 2.
Do kolby okrągłodennej zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne odważa się 0,05 mola karbaminianu benzylu, 0,05 mola fosforynu tri-p-chloroarylowego i 0,05 mola 4-N-trytyloamidobutanalu. Całość rozpuszcza się w 30-50 ml bezwodnego dichlorometanu i dodaje 10% molowych katalizatora soli miedzi II kwasu trifluorometanosulfonowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 12-24 godziny. Następnie lotne składniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w 100 ml metanolu i umieszcza w temperaturze -20°C w celu krystalizacji. Nazwa: ester di-p-chlorofenylowy kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-(Trt)Glnp-(OC6H4-4-Cl)2, Wydajność: 20%, Rf: 0,36 (CHCI3:AcOEt/4:1/v:v), Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 18,0s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 2,58-2,65 (m, 2H, CH2), 2,94-3,11 (m, 2H, CH2), 5,00-5,13 (m, 1H, CHP), 5,40 (s, 1H, NH), 5,10 (s, 2H, CH2), 6,19 (s, 1H, NH), 7,20-7,47 (m, 28H, Ar-H). ESI-MS: m/z 801,1664/801,1613 (M+Na)+
Etap 3.
Do kolby okrągłodennej odważa się 0,1 mola esteru di-p-chlorofenylowego kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i następnie dodaję się mieszaninę: kwas trifluorooctowy i triizopropylosilan w stosunku 100:5/v:v. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez około 2 godziny. Lotne rozpuszczalniki usuwa się na wyparce rotacyjnej, a powstały produkt oczyszcza się metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC aparat: WATERS 2489 zaopatrzony w kolumnę C18 WATERS Spherisorb Semi-Prep (20x250 mm) i detektor UV-Vis (liniowy gradient prowadzono od 0 do 100% B przez 50 minut (A: woda+0,1% TPA,
B: 80% acetonitrylu w A). Nazwa: ester di-p-chlorofenylowy kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)P
-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego. Symbol: Cbz-Gln -(OC6H4-4-Cl)2, Wydajność: 60%. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 17,37 s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 1,46-1,52 (m, 2H, CH2), 2,82-2,92 (m, 2H, CH2), 4,76-4,92 (m, 1H, CHP), 5,12 (s, 2H, NH2), 5,14 (s, 2H, CH2), 6,23 (s, 1H, NH), 7,13-7,57 (m, 13H, Ar-H). ESI-MS: m/z 559,0568/559,0574 (M+Na)+, HPLC: 35,5 minuta
Prz yk ła d 6. Sposób otrzymywania estru di-p-etylofenylowego kwasu 1-N-(benzyloksykarbonyIo)-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego przedstawionego wzorem 7 prowadzi się w 3 etapach.
Etap 1.
Do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 33 mmola p-etylofenolu i 10 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 10 minut. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 11 mmoli chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez dwie godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio do reakcji syntezy estrów diarylowych pochodnych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych.
PL 222 280 B1
Etap 2.
Do kolby okrągłodennej zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne odważa się 0,05 mola karbaminianu benzylu, 0,05 mola fosforynu tri-p-etyloarylowego i 0,05 mola 4-N-trytyloamidobutanalu. Całość rozpuszcza się w 30-50 ml bezwodnego dichlorometanu i dodaje 10% molowych katalizatora soli miedzi II kwasu trifluorometanosulfonowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 12-24 godziny. Następnie lotne składniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w 100 ml metanolu i umieszcza w temperaturze -20°C w celu krystalizacji. Nazwa: ester di-p-etvlofenvlowv kwasu 1-N-(benzvloksvkarbonvlo)-amino-3-N-(trvtvlo)karboksYamido-propanofosfonowego. Symbol: Cbz-(Trt)Gln -(OC6H4-4-CH2-CH3)2, Wydajność: 40%, Rf;48 (CHCł:AcOEt/4:1/v.v), Widmo 31P NMR (roztwór w CDCk δ [ppm]): 18,0s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCk δ [ppm]): 1,22-1,34 (m, 6H, 2xCH3), 253-2,63 (m, 2H, CH2), 2,55-2,61 (m, 4H, 2xCH2), 2,94-3,12 (m, 2H, CH2), 4,90-5,09 (m, 1H, CHP), 5,10 (s, 1H, NH), 5,11 (s, 2H, CH2), 6,15 (s, 1H, NH), 7,19-7,49 (m, 28H, Ar-H). ESI-MS: m/z 789,3069/789,3057 (M+Na)+.
Etap 3.
Do kolby okrągłodennej odważa się 0,1 mmola esteru di-p-etylofenylowego kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i następie dodaje się mieszaninę: kwas trifluorooctowy i triizopropylosilan w stosunku 100:5/v:v. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez około 2 godziny. Lotne rozpuszczalniki usuwa się na wyparce rotacyjnej, a powstały produkt oczyszcza się metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC aparat: WATERS 2489 Zaopatrzony W kolumnę C18 WATERS Spherisorb Semi-Prep (20x250 mm) i detektor UV-Vis (liniowy gradient prowadzono od 0 do 100% B przez 50 minut (A: woda+0,1% TFA. B: 80% acetonitrylu w A). Nazwa: esfer di-p-etvlofenvlowv kwasu 1-N-(benzvloksvkarbonvlo)-amino-3-(karboksvamido)-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Gln -(OC6H4-4-CH2-CH3)2, Wydajność: 55%, Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 17,97s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): (22 m, 6H, 2xCH3), 1,50-1,61 (m, 2H, CH2), 2,42-2,50 (m, 4H, 2xCH2), 2,82-2,91 (m, 2H, CH2), 4,86-4,99 (m, 1H, CHP), 5,11 (s, 2H, CH2), 5,12 (s, 2H, NH2), 6,29 (s, 1H, NH), 7,13-7,87 (m, 13H, Ar-H). ESI-MS: m/z 547,1974/547,3430 (M+Na)+ HPLC: 44 minuta.
P r z y k ł a d 7. Sposób otrzymywania estru di-p-t-butylofenylowego kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego przedstawionego wzorem 8 prowadzi się w 3 etapach.
Etap 1.
Do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 33 mmola p-t-butylofenolu i 10 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 10 minut. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 11 mmoli chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez dwie godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio do reakcji syntezy estrów diarylowych pochodnych kwasów 1-amino-alkanofosfonowych.
Etap 2.
Do kolby okrągłodennej zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne odważa się 0,05 mola karbaminianiu benzylu, 0,05 mola fosforynu tri-p-t-butyloarylowego i 0,05 mola 4-N-trytyloamidobutanalu. Całość rozpuszcza się w 30-50 ml bezwodnego dichlorometanu i dodaje 10% molowych katalizatora soli miedzi II kwasu trifluorometanosulfonowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 12-24 godziny. Następnie lotne składniki usuwa się pod zmniejszonym ciśnieniem na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w 100 ml metanolu i umieszcza w temperaturze -20°C w celu krystalizacji. Nazwa: ester di-p-t-butvlofenvlowv kwasu 1-N-(benzvloksvkarbonvlo)-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-(Trt)Gln -(OC6H4-4-CH-(CH3)3)2, Wydajność: 26%. Rf: 0,58 (CHCl3:AcOEt/4:l/v;v), Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 18,0 (s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 1,19 (s, 18H, 6xCH3), 2,54-2,61 (m, 2H, CH2), 2,94-3,09 (m, 2H, CH2), 4,98-5,11 (m, 1H, CHP), 5,12 (s, 1H, NH), 5,13 (s, 2H, CH2), 6,21 (s, 1H, NH), 7,22-7,48 (m, 28H, Ar-H). ESI-MS: m/z 845,3695/845,3921 (M+Na)+.
Etap 3.
Do kolby okrągłodennej odważa się 0,1 mmola estru di-p-t-butylofenylowego kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamidopropanofosfonowego i następnie dodaje się mieszaninę: kwas trifluorooctowy i triizopropylosilan w stosunku 100:5/v;v. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez około 2 godziny. Lotne rozpuszczalniki usuwa się na wyparce rota8
PL 222 280 B1 cyjnej, a powstały produkt oczyszcza się metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC aparat: WATERS 2489 zaopatrzony w kolumnę C18 WATERS Spherisorb Semi-Prep (20x250 mm) i detektor UV-Vis (liniowy gradient prowadzono od 0 do 100% B przez 50 minut (A: woda+0,1% TFA, B: 80% acetonitrylu w A). Nazwa: ester di-p-t-butvlofenvlowv kwasu 1-N-(benzvloksvkarbonvlo)-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Gln -(OC6H4-4-CH-(CH3)3)2, Wydajność: 35%, Widmo 31P NMR (roztwór w CDCk δ [ppm]): 17,57 (s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCh δ [ppm]): 1,421,53 (m, 18H, 6xCH3), 1,54-1,62 (m, 2H, CH2), 2,82-2,91 (m, 2H, CH2), 4,86-4,99 (m, 1H, CHP), 5,11 (s, 2H, CH2), 6,29 (s, 1H, NH), 7,13-7,87 (m, 13H, Ar-H), ESI-MS: m/z 603,2600/603,2612 (M+Na)+, HPLC: 44 minuta.
P r z y k ł a d 8. Sposób otrzymywania estru difenylowego kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego przedstawionego wzorem 9 prowadzi się w 3 etapach.
Etap 1.
W dwuszyjnej kolbie okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne i zestaw do hydr olizy umieszcza się 0,4 mmola estru difenylowego kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i rozpuszcza się w metanolu. Przez aparaturę przepuszcza się azot, dodaje się 10% Pd/C i ostrożnie przez układ przepuszcza się wodór. Przebieg reakcji monitoruje się za pomocą chromatografii TLC. Po zakończeniu reakcji (4 godziny) mieszaninę reakcyjną przesącza się przez żel krzemionkowy w celu usunięcia katalizatora. Metanol odparowuje się na wyparce rotacyjnej.
Etap 2.
Do kolby okrągłodennej odważa się 10 mmoli estru diarylowego kwasu 1-amino-3-N'-(trytylo)karboksyamido-propanofosfonowego oraz Cbz-Leu-OH (10 mmoli) a następnie oba składniki zalewa się absolutnym acetonitrylem (5 ml) i kolbę umieszcza się na mieszadle magnetycznym. Do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 20 mmoli trójetyloaminy i 12 mmoli heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yl-N-N-N'-N'-tetrametylouroniowego (HBTU). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie całość przenosi się do rozdzielacza i zalewa solanką (25 ml) i ekstrahuje trzykrotnie octanem etylu (po 50 ml). Połączone ekstrakty organiczne przemywa się kolejno: 5% NaHCO3 (2x25 ml), 5% KHSO4 (2x25 ml), solanką (2x25 ml) i suszy nad bezwodnym siarczanem sodu. Po odsączeniu środka suszącego odparowuje się rozpuszczalnik na wyparce rotacyjnej a otrzymany pr odukt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym. Nazwa: ester difenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Leu-(Trt)GlnP-(OC6H5)2, Wydajność: 70%. R: 0,31 (CHCl3:AcOEt/4:1/v;v), Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 17,60 (s), Widmo 1H NMR~ (roztwór w CDCl3Ą [ppm]): 1,05 (m, 6H, 2xCH3), 1,46-1,50 (m, 2H, CH2), 1,65-1,90 (m, 3H, CH2, CH), 2,04-2,18 (m, 2H, CH2), 4,70-4,73 (m, 1H, CH), 5,00-5,11 (m, 1H, CHP), 5,45 (s, 2H, CH2), 5,56 (s, 1H, NH), 6,18 (s, 1H, NH), 7,18-7,37 (m, 30H, Ar-H). ESI-MS: m/z 846.3284/846.3309 (M+Na)+.
Etap 3.
Do kolby okrągłodennej dodaje się ester difenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]]-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i mieszaninę: kwas trifluorooctowy triizopropylosilan w stosunku 100:5/v.v. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez około godziny. Lotne rozpuszczalniki usuwa się na wyparce rotacyjnej, a powstały produkt oczyszcza się metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC aparat: WATERS 2489 zaopatrzony w kolumnę G18 WATERS Spherisorb Semi-Prep (20x250 mm) i detektor UV-Vis (liniowy gradient prowadzono od 0 do 100% B przez 50 minut (A: woda+0,1% TFA, B: 80% acetonitrylu w A), Nazwa: ester difenvlowv kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Leu-GlnP-(OC6H5)2, Wydajność: 20%, Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3 δ [ppm]): 18,17 (40%) (s), 18,10 (60%) (s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCL δ [ppm]): 0,96-1,12 (m, 6H, 2xCH3),
1,24-1,35 (m, 2H, CH2), 1,65-1,90 (m, 3H, CH2, CH), 2,31-2,75 (m, 2H, CH2), 4,61-4,73 (m, 1H, CH), 4,99-5,11 (m, 1H, CHP), 5,15 (s, 2H, CH2), 6,28 (s, 1H, NH), 7,8-7,37 (m, 15H, Ar-H). ESI-MS: m/z 581,2369/581,2289 (M+H)+ HPLC: 41,7 minuta.
P r z y k ł a d 9. Sposób otrzymywania estru di-p-t-butylofenylowego kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego przedstawionego wzorem 10 prowadzi się w 3 etapach.
PL 222 280 B1
Etap 1.
W dwuszyjnej kolbie okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne i zestaw do hydrolizy umieszcza się 0,4 mmola estru di-p-t-butylofenylowego kwasu l-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i rozpuszcza się w metanolu. Przez aparaturę przepuszcza się azot, dodaje się 10% Pd/C i ostrożnie przez układ przepuszcza się wodór. Przebieg reakcji monitoruje się za pomocą chromatografii TLC. Po zakończeniu reakcji (4 godziny) mieszaninę reakcyjną przesącza się przez żel krzemionkowy w celu usunięcia katalizatora. Metanol odparowuje się na wyparce rotacyjnej.
Etap 2.
Do kolby okrągłodennej odważa się 10 mmoli estru di-p-t-butyloarylowego kwasu 1-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego oraz 10 mmoli Cbz-Leu-OHa następnie oba składniki zalewa się absolutnym acetonitrylem (5 ml) i kolbę umieszcza się na mieszadle magnetycznym. Do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 20 mmoli trójetyloaminy i 12 mmoli heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yl-N-N-N'-N-tetrametylouroniowego (HBTU). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie całość przenosi się do rozdzielacza i zalewa solanką (25 ml) i ekstrahuje trzykrotnie octanem etylu (po 50 ml). Połączone ekstrakty organiczne przemywa się kolejno: 5% NaHCO3 (2x25 ml), 5% KHSO4 (2x25 ml), solanką (2x25 ml) i suszy nad bezwodnym siarczanem sodu. Po odsączeniu środka suszącego odparowuje się rozpuszczalnik na wyparce rotacyjnej a otrzymany pr odukt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym. Nazwa: ester di-p-t-butylofenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]]-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Leu-GlnP-(OC6H4-4-CH(CH3)3)2, Wydajność: 10%, Rfi 0,09 (CHCl3:AcOEt/1:1/v;v), Widmo 31P NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 18,12 (s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 1,08-1,22 (m, 6H, 2xCH3), 1,25-1,32 (m, 18H, 6xCH3), 2,10-2,12 (m, 2H, CH2), 2,17 (m, 3H, CH2, CH), 2,12-2,19 (m, 2H, CH2), 5,10-5,15 (m, 1H, CHP), 5,19-5,21 (m, 1H, CH), 5,43 (s, 2H, CH2), 5,46 (s, 1H, NH), 7,27-7,39 (m, 28H, Ar-H), ESI-MS: m/z 958,4536/958,4534 (M+Na)+.
Etap 3.
Do kolby okrągłodennej dodaje ester di-p-t-butylofenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]]-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i mieszaninę: kwas trifluorooctowy triizopropylosilan w stosunku 100:5/v;v. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez około godziny. Lotne rozpuszczalniki usuwa się na wyparce rotacyjnej, a powstały produkt oczyszcza się metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC aparat: WATERS 2489 zaopatrzony w kolumnę C18 WATERS Spherisorb Semi-Prep (20x250 mm) i detektor UV-Vis (liniowy gradient prowadzono od 0 do 100% B przez 50 minut (A: woda+0,1% TFA, B: 80% acetonitrylu w A). Nazwa: ester di-p-t-butylofenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Leu-GlnP-(OC6H4-4-CH(CH3)3)2, Wydajność: 25%, Widmo 31P NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 17,27 (65%) (s), 17,32 (35%) (s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 0,93-0,98 (m, 18H, 6x CH3), 1,0-1,18 (m, 6H, 2xCH), 1,28-1,32 (m, 2H, CH2), 1,65-1,90 (m, 3H, CH2, CH), 2,30-2,74 (m, 2H, CH2), 4,62-4,74 (m, 1H, CH), 4,99-5,13 (m, 1H, CHP), 5,15 (s, 2H, CH2), 6,28 (s, 1H, NH), 7,28-7,46 (m, 13H, Ar-H), ESI-MS: m/z 716,3441/716,2955 (M+Na)+, HPLC: 42,9 minuta.
P r z yk ł a d 10. Sposób otrzymywania estru di-p-etylofenylowego kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego przedstawionego wzorem 11 prowadzi się w 3 etapach.
Etap 1.
W dwuszyjnej kolbie okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne i zestaw do hydr olizy umieszcza się 0,4 mmola estru di-p-etylofenylowego kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i rozpuszcza się w metanolu. Przez aparaturę przepuszcza się azot, dodaje się 10% Pd/C i ostrożnie przez układ przepuszcza się wodór. Przebieg reakcji monitoruje się za pomocą chromatografii TLC. Po zakończeniu reakcji (4 godziny) mieszaninę reakcyjną przesącza się przez żel krzemionkowy w celu usunięcia katalizatora. Metanol odparowuje się na wyparce rotacyjnej.
Etap 2.
Do kolby okrągłodennej odważa się 10 mmoli estru di-p-etylofenylowego kwasu 1-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego oraz 10 mmoli Cbz-Leu-OH a następnie oba składniki zalewa się absolutnym acetonitrylem (5 ml) i kolbę umieszcza się na mieszadle magnetycznym. Do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 20 mmoli trójetyloaminy i 12 mmoli heksafluorofosforanu O-benzo10
PL 222 280 B1 triazol-1-yl-N-N-N'-N-tetrametylouroniowego (HBTU). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie całość przenosi się do rozdzielacza i zalewa solanką (25 ml) i ekstrahuje trzykrotnie octanem etylu (po 50 ml). Połączone ekstrakty organiczne przemywa się kolejno: 5% NaHCO3 (2x25 ml), 5% KHSO4 (2x25 ml), solanką (2x25 ml) i suszy nad bezwodnym siarczanem sodu. Po odsączeniu środka suszącego odparowuje się rozpuszczalnik na wyparce rotacyjnej a otrzymany produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym. Nazwa: ester di-p-etylofenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo)]-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Leu-Gln -(OC6H4-4-CH(CH3)3)2, Wydajność: 15%, R: 0,08 (CDCl3/AcOEt/1:1/v.v), Widmo 31P NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 17,92 (s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCL δ [ppm]): 1,00-1,16 (m, 6H, 2x CH3), 1,19-1,29 (m, 6H, 2xCH2), 1,70-1,78 (m, 3H, CH2, CH), 1,95-2,04 (m, 2H, CH2), 2,12-2,19 (m, 2H, CH2), 2,53-2,57 (m, 4H, 2xCH2), 4,87-4,93 (m, 1H, CH), 5,05-5,18 (m, 1H, CHP), 5,43 (s, 2H, CH2), 5,64 (s, 1H, NH), 7,22-7,33 (m, 28H, Ar-H), ESI-MS: m/z 902,3910/902,5300 (M+Na)+.
Etap 3.
Do kolby okrągłodennej dodaje się ester di-p-etylofenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]]-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i mieszaninę: kwas trifluorooctowy triizopropylosilan w stosunku 100:5/v;v. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez około godziny. Lotne rozpuszczalniki usuwa się na wyparce rotacyjnej, a powstały produkt oczyszcza się metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC aparat: WATERS 2489 zaopatrzony w kolumnę C18 WATERS Spherisorb Semi-Prep (20x250 mm) i detektor UV-Vis (liniowy gradient prowadzono od 0 do 100% B przez 50 minut (A: woda+0,1% TFA, B: 80% acetonitrylu w A). Nazwa: ester di-p-etylofenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]-amino-3-karboksyamido)-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-GlnP-(OC6H4-4-CH2-CH3)2, Wydajność: 30%, Widmo 31P NMR roztwór w CDCK δ [ppm]): 17,47 (40%) (s), 17,32 (60%) (s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCK δ [ppm]): 1,001,16 (m, 6H, 2xCH3), 1,19-1,29 (m, 6H, 2xCH3), 1,70-1,78 (m, 3H, CH2, CH), 1,93-2,01 (m, 2H, CH2),
2,12-2,19 (m, 2H, CH2), 2,53-2,57 (m, 4H, 2xCH2), 4,87-4,93 (m, 1H, CH), 5,05-5,18 (m, 1H, CHP), 5,43 (s, 2H, CH2), 5,64 (s, 1H, NH), 7,25-7,35 (m, 13H, Ar-H), ESI-MS: m/z 660,2815/660,1813 (M+Na)+, HPLC: 40,2 minuta.
P r z y k ł a d 11. Sposób otrzymywania estru di-p-metoksyfenylowego kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-leucylo]-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego przedstawionego wzorem 12 prowadzi się w 3 etapach.
Etap1.
W dwuszyjnej kolbie okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne i zestaw do hydr olizy umieszcza się 0,4 mmola estru di-p-metoksyfenylowego kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i rozpuszcza się w metanolu. Przez aparaturę przepuszcza się azot, dodaje się 10% Pd/C i ostrożnie przez układ przepuszcza się wodór. Przebieg reakcji monitoruje się za pomocą chromatografii TLC. Po zakończeniu reakcji (4 godziny) mieszaninę reakcyjną przesącza się przez żel krzemionkowy w celu usunięcia katalizatora. Metanol odparowuje się na wyparce rotacyjnej.
Etap 2.
Do kolby okrągłodennej odważa się 10 mmoli estru di-p-metoksyfenylowego kwasu 1-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego oraz 10 mmoli Cbz-Leu-OH a następnie oba składniki zalewa się absolutnym acetonitrylem (5 ml) i kolbę umieszcza się na mieszadle magnetycznym. Do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 20 mmoli trójetyloaminy i 12 mmoli heksafluorofosforanu O-benzotriazol-yl-N-N-N'-N'-tetrametylouroniowego (HBTU). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie całość przenosi się do rozdzielacza i zalewa solanką (25 ml) i ekstrahuje trzykrotnie octanem etylu (po 50 ml). Połączone ekstrakty organiczne przemywa się kolejno: 5% NaHCO3 (2x25 ml), 5% KHSO4 (2x25 ml), solanką (2x25 ml) i suszy nad bezwodnym siarczanem sodu. Po odsączeniu środka suszącego odparowuje się rozpuszczalnik na wyparce rotacyjnej a otrzymany produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym. Nazwa: ester di-p-metoksyfenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]]-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Gln -(OC6H4-4-O-CH3)2, Wydajność: 20%, R: 0,52 (CHCh:AcOEt/4:1/v;v), Widmo 31P NMR (roztwór w CDCĘ, δ [ppm]):18,23 (s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCK δ [ppm]): 1,03-1,12 (m, 6H, 2xCH), 3,82 (m, 6H, 2xCH), 1,83-1,87 (m, 3H, CH2, CH), 2,162,19 (m, 2H, CH2), 2,25-2,30 (m, 2H, CH3), 4,57-4,62 (m, 1H, CH), 5,12-5,15 (m, 1H, CHP), 5,41 (s, 2H, CH2), 5,46 (s, 1H, NH), 7,13-7,36 (m, 28H, Ar-H), ESI-MS: m/z 906,3496/906,3804 (M+Na)+.
PL 222 280 B1
Etap 3.
Do kolby okrągłodennej dodaje się ester di-p-metoksyfenylowy kwasu 1-N-(benzyloksykarbonylo)-leucylo]]-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i mieszaninę: kwas trifluorooctowy i triizopropylosilan w stosunku 100:5/v;v. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez około 2 godziny. Lotne rozpuszczalniki usuwa się na wyparce rotacyjnej, a powstały produkt oczyszcza się metodą, wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC aparat: Varian ProStar 210 zaopatrzony w kolumnę Alltech C18 10U (22x250 mm) i detektor UV-Vis [liniowy gradient prowadzono od 20 do 100% B przez 40 minut (A: woda+0,05%TFA, B: acetonitryl+0,05%TFA). Nazwa: ester di-p-metoksyfenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]-amino-3-(karboksyamido)-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-GlnP-(OC6H4-4-O-CH3)2, Wydajność: 52%, Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 18,28 (s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 1,03-1,12 (m, 6H, 2xCH3), 1,83-1,87 (m, 3H, CH2, CH), 2,16-2,20 (m, 2H, CH2), 2,25-2,37 (m, 2H, CH2), 3,82-3,91 (m, 6H, 2xCH3), 4,57-4,64 (m, 1H, CH), 5,12-5,15 (m, 1H, CHP), 5,41 (s, 2H, CH2), 5,46 (s, 1H, NH), 7,13-7,36 (m, 13H, ArH), ESI-MS: m/z 664,2400/664,2412 (M+Na)+, HPLC: 23,6 minuta.
P r z y k ł a d 12. Sposób otrzymywania estru difenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)glutaminianylo-leucylo]-amino-3-karboksyamido-propanofosfonowego przedstawionego wzorem 13 prowadzi się w 3 etapach.
Etap 1.
W dwuszyjnej kolbie okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne i zestaw do hydr olizy umieszcza się 0,4 mmola estru difenylowego kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]]-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i rozpuszcza się w metanolu. Przez aparaturę przepuszcza się azot, dodaje się 10% Pd/C i ostrożnie przez układ przepuszcza się wodór. Przebieg reakcji monitoruje się za pomocą chromatografii TLC. Po zakończeniu reakcji (4 godziny) mieszaninę reakcyjną przesącza się przez żel krzemionkowy w celu usunięcia katalizatora. Metanol odparowuje się na wyparce rotacyjnej.
Etap 2.
Do kolby okrągłodennej odważa się 10 mmoli estru difenylowego kwasu 1 -N-leucylo-amino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego oraz 10 mmoli Cbz-Glu(t-Bu)-OH a następnie oba składniki zalewa się absolutnym acetonitrylem (5 ml) i kolbę umieszcza się na mieszadle magnetycznym. Do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 10 mmoli trójetyloaminy i 12 mmoli heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yl-N-N-N'-N'-tetrametylouroniowego (HBTU). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie całość przenosi się do rozdzielacza i zalewa solanką (25 ml) i ekstrahuje trzykrotnie octanem etylu (po 50 ml). Połączone ekstrakty organiczne przemywa się kolejno; 5% NaHCO3 (2x25 ml), 5% KHSO4 (2x25 ml), solanką (2x25 ml) i suszy nad bezwodnym siarczanem sodu. Po odsączeniu środka suszącego odparowuje się rozpuszczalnik na wyparce rotacyjnej a otrzymany produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym. Nazwa: ester difenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonyIo)-(O-t-butylo)glutaminianylo-leucylo]-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Glu(t-Bu)-Leu-Gln -(OC6H5)2, Wydajność: 47%, Rf: 0,62 (CHCh:MeOH/4:1/v.v), Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 18,47 (s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 0,97-1,15 (m, 6H, 2xCH3), 1,24-1,26 (m, 2H, CH2), 1,30-1,39 (m, 2H, CH2), 1,5 (s, 9H, 3x CH3), 1,65-1,90 (m, 3H, CH2, CH), 2,12-2,95 (m, 4H, 2xCH2),
4,24-4,32 (m, 1H, CH), 4,61-4,73 (m, 1H, CH), 4,99-5,11 (m, 1H, CHP), 5,15 (s, 2H, CH2), 6,28 (s, 1H, NH), 7,18-7,37 (m, 30H, Ar-H), ESI-MS: m/z 1031,4336/1031,4082 (M+Na)+.
Etap 3.
Do kolby okrągłodennej dodaje się ester difenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-(O-t-butylo)glutaminianylo-leucylo]-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i mieszaninę: kwas trifluorooctowy i triizopropylosilan w stosunku 100:5/v;v. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez około 2 godziny. Lotne rozpuszczalniki usuwa się na wyparce rotacyjnej, a powstały produkt oczyszcza się metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC aparat: WATERS 2489 zaopatrzony w kolumnę C18 WATERS Spherisorb Semi-Prep (20x250 mm) i detektor UV-Vis (liniowy gradient prowadzono od 0 do 100% B przez 50 minut (A: woda+0,1% TFA, B: 80% acetonitrylu w A). Nazwa: ester difenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-glutaminianylo-leucylo]-amino-3-karboksyamido-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Glu-Leu-Gln -(OC6H5)2, Wydajność: 45%, Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]):17,77 (s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 0,96-1,15 (m, 6H, 2xCH3), 1,20-1,25 (m, 2H, CH2), 1,28-1,39 (m, 2H, CH2), 1,66-1,90 (m, 3H, CH2, CH), 2,12-2,95 (m, 4H, 2xCH2), 4,14-4,42 (m, 1H CH), 4,71-4,73 (m, 1H, CH), 4,99-5,13 (m, 1H, CHP), 5,23 (s, 2H,
PL 222 280 B1
CH2), 6,48 (s, 1H, NH), 7,14-7,67 (m, 15H, Ar-H), ESI-MS: m/z 733,2615/733,3928 (M+Na)+, HPLC: 37,9 minuta.
P r z y k ł a d 13. Sposób otrzymywania estru di-p-etylofenylowego kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-glutaminianylo-leucylo]-amino-3-karboksyamido-propanofosfonowego przedstawionego wzorem 14 prowadzi się w 3 etapach.
Etap 1.
W dwuszyjnej kolbie okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne i zestaw do hydr olizy umieszcza się 0,4 mmola estru di-p-etylofenylowego kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-leucylo]]amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i rozpuszcza się w metanolu. Przez aparaturę przepuszcza się azot, dodaje się 10% Pd/C i ostrożnie przez układ przepuszcza się wodór. Przebieg reakcji monitoruje się za pomocą chromatografii TLC. Po zakończeniu reakcji (4 godziny) mieszaninę reakcyjną przesącza się przez żel krzemionkowy w celu usunięcia katalizatora. Metanol odparowuje się na wyparce rotacyjnej.
Etap 2.
Do kolby okrągłodennej odważa się 10 mmoli estru di-p-etylofenylowego kwasu 1-N-leucyloamino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego oraz Cbz-Glu(t-Bu)-OH (10 mmoli) a następnie oba składniki zalewa się absolutnym acetonitrylem (5 ml) i kolbę umieszcza się na mieszadle magnetycznym. Do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 20 mmoli trójetyloaminy i 12 mmoli heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yl-N-N-N'-N'-tetrametylouroniowego (HBTU). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie całość przenosi się do rozdzielacza i zalewa solanką (25 ml) i ekstrahuje trzykrotnie octanem etylu (po 50 ml). Połączone ekstrakty organiczne przemywa się kolejno: 5% NaHCO3 (2x25 ml), 5% KHSO4 (2x25 ml), solanką (2x25 ml) i suszy nad bezwodnym siarczanem sodu. Po odsączeniu środka suszącego odparowuje się rozpuszczalnik na wyparce rotacyjnej a otrzymany produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym. Nazwa: ester di-p-etvlofenvlowv kwasu 1-N-i(benzvloksvkarbonvlo)-(O-t-butvlo)glutaminianvloleucylo]-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Glu(t-Bu)-Gln -(OC6H4-4-CH2-(CH3)2, Wydajność: 30%, R: 0,53 (CHCh:MeOH/4:1/v:v), Widmo 31P NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 17,95 (s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 1,00-1,16 (m, 6H, 2xCH3), 1,19-1,29 (m, 6H, 2xCH3), 1,46 (s, 9H, 3xCH3), 1,70-1,78 (m, 3H, 3xCH), 1,95-2,04 (m, 2H, CH2),
2,12-2,19 (m, 2H, CH2), 2,37-2,43 (m, 2H, CH2), 2,53-2,57 (m, 4H, 2xCH2), 4,87-4,93 (m, 1H, CH), 5,05-5,18 (m, 1H, CHP), 5,43 (s, 2H, CH2), 5,64 (s, 1H, NH), 7,22-7,33 (m, 28H, Ar-H), ESI-MS: m/z 1087,4962/1087,2400 (M+Na)+.
Etap 3.
Do kolby okrągłodennej dodaje się ester di-p-etylofenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-(O-t-butylo)glutaminianylo-leucylo]-amino-3-N'-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i mieszaninę: kwas trifluorooctowy i triizopropylosilan w stosunku 100:5/v:v. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez około 2 godziny. Lotne rozpuszczalniki usuwa się na wyparce rotacyjnej, a powstały produkt oczyszcza się metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC aparat: Vartan ProSlar 210 zaopatrzony w kolumnę Alltech C18 10U (22x250 mm) i detektor UV-Vis [liniowy gradient prowadzono od 20 do 100% B przez 40 minut (A: woda+0,05%TFA. B: acetonitryl+0,05% TFA). Nazwa: ester di-p-etvlofenvlowv kwasu 1-N-i(benzvloksvkarbonvlo)-glutaminianvlo-leucvlol-amino-3-karboksvamido-propanofosfonowego, Symbol: Cbz-Glu-Leu-Gln -(OC6H4-4-CH2-CH3)2, Wydajność: 52%, Widmo 31P NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 17,97 (60%) (s), 17,85 (40%) (s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 1,00-1,16 (m, 6H, 2xCH3), 1,19-1,29 (m, 6H, 2x CH3), 1,69-1,78 (m, 5H, CH2, 3xCH), 1,95-2,04 (m, 2H, CH2), 2,12-2,19 (m, 2H, CH2), 2,37-3,45 (m, 2H, CH2), 2,53-2,57 (m, 4H, 2xCH2), 4,72-4,80 (m, 1H, CH), 4,87-4,93 (m, 1H, CH), 5,05-5,18 (m, 1H, CHP), 5,43 (s, 2H, CH2), 5,64 (s, 1H, NH), 7,22-7,33 (m, 13H, Ar-H), ESI-MS: m/z 789,3241/789,3109 (M+Na)+, HPLC: 23,3 minuta.
P r z y k ł a d 14. Sposób otrzymywania estru di-p-t-butylofenylowego kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-glutaminianylo-leucylo]-amino-3-karboksyamido-propanofosfonowego przedstawionego wzorem 15 prowadzi się w 3 etapach.
Etap 1.
W dwuszyjnej kolbie okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne i zestaw do hydr orolizy umieszcza się 0,4mmola estru di-p-t-butylofenylowego kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)leucylo]]-amino-3-N-(trytylo]-karboksyamido-propanofosfonowegoi rozpuszcza się w metanolu. Przez aparaturę przepuszcza się azot, dodaje się 10% Pd/C i ostrożnie przez układ przepuszcza się wodór.
PL 222 280 B1
Przebieg reakcji monitoruje się za pomocą chromatografii TLC. Po zakończeniu reakcji (4 godziny) mieszaninę reakcyjną przesącza się przez żel krzemionkowy w celu usunięcia katalizatora. Metanol odparowuje się na wyparce rotacyjnej.
Etap 2.
Do kolby okrągłodennej odważa się 10 mmoli estru di-p-t-butylofenylowego kwasu 1-N-leucyloamino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego oraz Cbz-Glu(t-Bu)-OH (10 mmoli) a następnie oba składniki zalewa się absolutnym acetonitrylem (5 ml) i kolbę umieszcza się na mieszadle magnetycznym. Do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 20 mmoli trójetyloaminy i 12 mmoli heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yl-AZ-A-W'-A'-tetrametylouroniowego (HBTU). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie całość przenosi się do rozdzielacza i zalewa solanką (25 ml) i ekstrahuje trzykrotne octanem etylu (po 50ml). Połączone ekstrakty organiczne przemywa się kolejno: 5% NaHCO3 (2x25 ml), 5% KHSO4 (2x25 ml), solanką (2x25 ml) i suszy nad bezwodnym siarczanem sodu. Po odsączeniu środka suszącego odparowuje się rozpuszczalnik na wyparce rotacyjnej a otrzymany produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym. Nazwa: ester di-p-t-butvlofenvlowv kwasu 1-N-i(benzvloksvkarbonvlo)-(O)-t-butvlo)glutaminianvlo-leucylo]-amino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego. Symbol: Cbz-Glu(t-Bu)Leu-Gln -(OC6H4-4-CH-(CH3)3)2, Wydajność: 53%, R 0,60 (CHCh:AcOEt/4:1/v: v). Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 18,12 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 1,08-1,22 (m, 6H, 2xCH3),
1,25-1,32 (m, 18H, 6xCH3), 1,44 (s, 9H, 3xCH3), 2,10-2,11 (m, 2H, CH2), 2,12-2,16 (m, 2H, CH2), 2,17-2,19 (m, 3H, CH2, CH), 2,53-2,57 (m, 4H, 2xCH2), 4,97-4,99 (m, 1H, CH), 5,10-5,15 (m, 1H, CHP), 5,19-5,23 (m, 1H, CH), 5,43 (s, 2H, CH2), 5,46 (s, 1H, NH), 7,27-7,39 (m, 28H, Ar-H). ESI-MS: m/z 1143,5588/1143,5712 (M+Na)+.
Etap 3.
Do kolby okrągłodennej dodaje się ester di-p-t-butylofenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-(O-t-butylo)glutaminianylo-leucylo]-amino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propartofosfonowego i mieszaninę: kwas trifluorooctowy i triizopropylosilan w stosunku 100:5/v:v. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez około 2 godziny. Lotne rozpuszczalniki usuwa się na wyparce rotacyjnej, a powstały produkt oczyszcza się metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC aparat: WATERS 2489 zaopatrzony w kolumnę C18 WATERS Spherisorb Semi-Prep (20x250 mm) i detektor UV-Vis (liniowy gradient prowadzono od 0 do 100% B przez 50 minut (A: woda+0,1% TFA, B: 80% acetonitrylu w A). Nazwa: ester di-p-t-butvlofenvlowv kwasu 1-N-i(benzvloksvkarbonvlo)-glutamininylo-leucylo]-amino-3-karboksyamido-propanofosfonowego. Symbol: Gbz-Glu-Leu-Gln -(OC6H4-4-CH-(CH3)3)2. Wydajność: 43%, Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 17,97 (30%) (s), 17,82 (70%) (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 0,95-1,1 (m, 18H, 6xCH3), 1,13-1,19 (m, 6H, 2xCH3), 1,20-125 (m, 2H, CH2), 1,28-1,39 (m, 2H, CH2), 1,66-1,90 (m. 3H, CH2, CH), 2,15-2,97 (m, 4H, 2xCH2), 4,14-4,42 (m, 1H, CH), 4,71-4,73 (m, 1H, CH), 4,99-5,13 (m, 1H, CHP), 5,23 (s, 2H, CH2), 7,24-7,77 (m, 13H, Ar-H), ESI-MS: m/z 845,3867/845,3774 (M+Na)+, HPLC: 40,8 minuta.
P rz yk ł a d 15. Sposób otrzymywania estru di-p-metoksyfenylowego kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-glutaminianylo-leucylo]-amino-3-karboksyamido-propanofosfonowego przedstawionego wzorem 16 prowadzi się w 3 etapach.
W dwuszyjnej kolbie okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne i zestaw do hydrorolizy umieszcza się 0,4 mmola estru di-p-metoksyfenylowego kwasu 1-N-[E(benzyloksykarbonylo)-leucylo]]-amino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i rozpuszcza się w metanolu. Przez aparaturę przepuszcza się azot, dodaje się 10% Pd/G i ostrożnie przez układ przepuszcza się wodór. Przebieg reakcji monitoruje się za pomocą chromatografii TLC. Po zakończeniu reakcji (4 godziny) mieszaninę reakcyjną przesącza się przez żel krzemionkowy w celu usunięcia katalizatora. Metanol odparowuje się na wyparce rotacyjnej.
Etap 2.
Do kolby okrągłodennej odważa się 10 mmoli estru di-p-metoksyfeny[owego kwasu 1-N-leucylo-amino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego oraz Cbz-Glu(t-Bu)-OH (10 mmoli) a następnie oba składniki zalewa się absolutnym acetonitrylem (5 ml) i kolbę umieszcza się na mieszadle magnetycznym, Do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 20 mmoli trójetyloaminy i 12 mmoli heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yl-N-N-W’-N'-tetrametylouroniowego (HBTU). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie całość przenosi się do rozdzielacza i zalewa sola nką (25 ml) i ekstrahuje trzykrotne octanem etylu (po 50 ml). Połączone ekstrakty organiczne przemywa się kolejno: 5% NaHCO3 (2x25 ml), 5% KHSO4 (2x25 ml), solanką (2x25 ml) i suszy nad bezwodnym
PL 222 280 B1 siarczanem sodu. Po odsączeniu środka suszącego odparowuje się rozpuszczalnik na wyparce rotacyjnej a otrzymany produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym. Nazwa: ester di-p-metoksvfenvlowv kwasu 1-N-tfbenzvloksvkarbonvlo)-(O-t-butvlo)glutaminianvlo-leucylo]-amino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego. Symbol: Cbz-Glu(t-Bu)-Leu-(Trt)Gln -(OC6H4-4-O-CH3)2. Wydajność: 56%, Rf; 0,38 (CHCh:MeOH/4:1/v.v), Widmo 31P NMR (roztwór w CDCK δ [ppm]): 17.89 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 1,03-1,12 (m, 6H, 2xCH3), 1,20-1,24 (m, 2H, CH2), 1,44 (s, 9H, 3xCH3), 3,82 (m, 6H, 2xCH3), 2,16 (m, 2H, CH2), 1,83-1,87 (m, 3H, CH2, CH), 2,12-2,19 (m, 2H, CH2), 2,25-2,50 (m, 2H, CH2), 4,23-4,31 (m, 1H, CH), 4,57-4,63 (m, 1H, CH), 5,12-5,15 (nt, 1H, CHP), 5,41 (s, 2H, CH2), 5,46 (s, 1H, NH), 7,23-7,39 (m, 28H, Ar-H). ESI-MS: m/z 1091,4547/1091,3879 (M+Na)+.
Etap 3.
Do kolby okrągłodennej dodaje się ester di-p-metoksyfenylowy kwasu 1-N-[(benzyloksykarbonylo)-(O-t-butylo)glutaminianylo-leucylo]-amino-3-N-(trytylo)-karboksyamido-propanofosfonowego i mieszaninę: kwas trifluorooctowy i triizopropylosilan w stosunku 100:5/v;v. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez około 2 godziny. Lotne rozpuszczalniki usuwa się na wyparce rotacyjnej, a powstały produkt oczyszcza się metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC aparat: Varian ProStar 210 zaopatrzony w kolumnę Alltech C18 10U (22x250 mm) i detektor UV-Vis [liniowy gradient prowadzono od 20 do 100% B przez 40 minut (A: woda+0,05% TFA, B: acetonitryl+0,05% TFA) Nazwa: ester di-p-metoksvfenvlowv kwasu 1-N-i(benzvloksvkarbonvlo)-glutaminianvloleucylo]-amino-3-karboksyamido-propanofosfonowego. Symbol: Cbz-GIu-Leu-Gln -(OC6H4-4-O-CH3)2. Wydajność: 65%, Rf; 0,38 (CHCl3:AcOEt/4:1/v.v). Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 17,89 (s), Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 1,03-1,12 (m, 6H, 2xCH3), 1,83-1,87 (m, 3H, CH2, CH), 2,12-2,16 (m, 2H, CH2), 2,17-2,19 (m, 2H, CH2), 2,25-2,54 (m, 4H, 2xCH2), 3,82-3,96 (m, 6H, 2xCH3), 4,57-4,62 (m, 1H, CH), 4,55-4,70 (m, 1H, CH), 5,12-5,15 (m, 1H, CHP), 5,41 (s, 2H, CH2), 5,46 (s, 1H, NH), 7,23-7,39 (m, 13H, Ar-H). ESl-MS: m/z 793,2826/73,2798 (M+Na)+. HPLC: 19,6 minuta.
Aktywność biologiczną estrów difenylowych fosfonowych analogów glutaminy i ich peptydowych pochodnych otrzymanych w przykładach 2-15 przebadano pod kątem zdolności do hamowania proteolitycznej aktywności proteazy SplB pochodzącej z bakterii S. aureus. Wszystkie badania sporządzono na czytniku mikropłytek Molecular Devices Spectramax Gemini XP. Wyznaczona wartość stałej Michaelisa (KM) (w warunkach eksperymentalnych) dla substratu Ac-Trp-Glu-Leu-GIn-ACC względem proteazy SplB wynosi 135 nM. Jako buforu użyto: 0,1M Tris-HCI, pH 7,6. Końcowe stężenia enzymu i substratu to odpowiednio 100 nM i 10 nM. Przy obliczaniu wartości K1 i k2 wykorzystano dwa modele inhibicji: model regresji hiperbolicznej i model klasycznej regresji liniowej. Uzyskane wartości K1 i k2 wyliczone dwiema metodami różniły się nieznacznie, dlatego podano ich uśrednioną wartość. Uzyskane wyniki przedstawiono w tabeli 1, 2 i 3.
Przykład R k2/K1[M'1s'1] SplB
2 H < 10
3 4-S-Metyl < 10
4 4-O-Metyl < 10
5 4-Cl < 10
6 4-Etyl < 10
7 4-t-Butyl < 10
Tab 1.
Wartości parametrów kinetycznych fosfonowych analogów glutaminy (Cbz-Glnp(OAr)2) względem proteazy SplB.
PL 222 280 B1
Przykład R k2/K1[M'1s'1] SplB
8 H < 10
9 4-t-Butyl < 10
10 4-Etyl < 10
11 4-O-Metyl;l < 10
Tab 2.
Wartości parametrów kinetycznych dipeptydowych fosfonowych analogów glutaminy względem proteazy SplB.
Przykład R k2/K1[M'1s'1] SplB
12 H 5,1x102
13 4-Etyl 1,4x103
14 4-f-Butyl 1,5x101
15 4-O-Metyl 1,4x103
Tab 3.
Wartości parametrów kinetycznych tripeptydowych fosfonowych analogów glutaminy względem proteazy SplB.

Claims (5)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Diarylowe estry, pochodne fosfonowego analogu glutaminy oraz ich peptydowe pochodne o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza grupę benzyloksykarbonylową, łańcuch boczny leucyny lub dipeptyd składający się z kwasu glutaminowego i leucyny, R oznacza podstawnik na pierścieniu fen ylowym, którymi są wodór, etyl, tert-butyl, O-metyl, S-metyl i chlor.
  2. 2. Sposób wytwarzania diarylowych estrów pochodnych fosfonowego analogu glutaminy oraz ich peptydowych pochodnych o wzorze ogólnym 1 , w którym W oznacza grupę benzyloksykarbonylową, łańcuch boczny leucyny lub dipeptyd składający się z kwasu glutaminowego i leucyny, R oznacza podstawnik na pierścieniu fenylowym, którymi są wodór, etyl, tert-butyl, O-metyl, S-metyl i chlor, znamienny tym, że z bezwodnika kwasu bursztynowego i metanolu w temperaturze wrzenia około (-65°C) otrzymuje się ester metylowy kwasu bursztynowego, przy czym reakcję prowadzi się przez 3 godziny i pod ciśnieniem atmosferycznym a następnie po 24 godzinach, w temperaturze pokojowej, pod ciśnieniem atmosferycznym i w obecności acetonitrylu oraz z zastosowaniem czynnika sprzęgającego HBTU, otrzymuje się 3-karboksy-N-trytylopropinoamid, w którym redukuje się grupę estrową przy użyciu borowodorku litu w bezwodnym tetrahydrofuranie przez 30 minut, w temperaturze pokojowej i następnie utlenia się grupę hydroksylową do aldehydu i otrzymuje się związek o wzorze 2 w postaci 4-N16
    PL 222 280 B1
    -trytyloaminobutanolu, gdzie reakcję prowadzi się przez 2 godziny w temperaturze -60°C w bezwodnym tlenku metylenu i pod ciśnieniem atmosferycznym, który poddaje się reakcji z fosforynem trialowym przez 2 godziny w temperaturze 90°C i z karbaminianem benzylu przez 24 godziny w temperaturze pokojowej pod ciśnieniem atmosferycznym, w acetonitrylu z dodatkiem katalizatora soli miedzi (II) kwasu trójfluorometanosulfonowego otrzymując pochodne diarylowe estrów z grupą amidową zablokowaną trytylem.
  3. 3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że z pochodnych diarylowych estrów z grupą amidową zablokowaną trytylem usuwa się grupę trytylową przy użyciu mieszaniny kwas trifluorooctowy i triizopropylosilian w stosunku 100:5/v:v, przy czym proces prowadzi się przez dwie godziny w temperaturze pokojowej.
  4. 4. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że z pochodnych diarylowych estrów z grupą amidową zablokowaną trytylem usuwa się grupę trytylową odblokowuje się co najmniej raz hydrogenolitycznie grupę benzyloksykarbonylową, przy czym proces prowadzi się przez 4 godziny w atmosferze ochronnej azotu, w temperaturze pokojowej i pod ciśnieniem atmosferycznym, a następnie estry sprzęga się co najmniej raz N-zablokowanymi aminokwasami karboksylowymi i usuwa się grupę grupę trytylową przy użyciu mieszaniny kwas trifluorooctowy i triizopropylosilian w stosunku 100:5/v:v., przy czym proces prowadzi się przez 2 godziny w temperaturze pokojowej, i otrzymuje się odpowiednie dipeptydowe lub trójpeptydowe pochodne diarylowych estrów.
  5. 5. Diarylowe estry pochodne fosfonowego analogu glutaminy oraz ich peptydowe pochodne o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza grupę benzyloksykarbonylową (Cbz), łańcuch boczny leucyny lub dipeptyd składający się z kwasu glutaminowego i leucyny, R oznacza podstawnik na pierścieniu fenylowym, którymi są wodór, etyl, tert-butyl, O-metyl, S-metyl i chlor do zastosowania jako lek przeciwbakteryjny.
PL398757A 2012-04-06 2012-04-06 Diarylowe estry, pochodne fosfonowego analogu glutaminy, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie PL222280B1 (pl)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL398757A PL222280B1 (pl) 2012-04-06 2012-04-06 Diarylowe estry, pochodne fosfonowego analogu glutaminy, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL398757A PL222280B1 (pl) 2012-04-06 2012-04-06 Diarylowe estry, pochodne fosfonowego analogu glutaminy, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL398757A1 PL398757A1 (pl) 2012-11-19
PL222280B1 true PL222280B1 (pl) 2016-07-29

Family

ID=47264011

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL398757A PL222280B1 (pl) 2012-04-06 2012-04-06 Diarylowe estry, pochodne fosfonowego analogu glutaminy, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie

Country Status (1)

Country Link
PL (1) PL222280B1 (pl)

Also Published As

Publication number Publication date
PL398757A1 (pl) 2012-11-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lejczak et al. Antibacterial activity of phosphono dipeptides related to alafosfalin
Cheng et al. Substrate-related phosphonopeptides, a new class of thrombin inhibitors
CA2953653C (en) Method for producing synthetic pentapeptide
PT1515983E (pt) Macrociclos de amida antibacterianos
EP0312502B1 (en) Dipeptides useful as plant growth regulators
AU2016351998A1 (en) Novel heterocycle-containing amino acid compound and use thereof
PL222280B1 (pl) Diarylowe estry, pochodne fosfonowego analogu glutaminy, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie
EP3071591B1 (en) Antimicrobial peptidomimetics
Kupczyk‐Subotkowska et al. Synthesis of phosphonic analogs of enkephalins: pentapeptides with COOH replaced by PO3H2 group
WO2013021355A1 (en) Functionalized calixarene derivatives for cell transfection
AU2018363696A1 (en) Method for the synthesis of cyclic depsipeptides
Lemmen et al. A synthesis of phospholipids using a phosphite-triester approach and uniformly cleavable β-halogenated protecting groups
Loseva et al. Synthesis of new guanidine-containing amphiphiles and their pyrene analog for liposomal delivery systems and visualization in target cells
Dziełak et al. A three-component Mannich-type condensation leading to phosphinic dipeptides—extended transition state analogue inhibitors of aminopeptidases
Jiménez-Andreu et al. Synthesis and biological activity of dehydrophos derivatives
DE3320175A1 (de) Aminosaeure- bzw. peptidderivate, verfahren zu deren herstellung und verwendung als arzneimittel
US6630501B1 (en) Phosphinic pseudo-peptides that may be used as matrix zinc metalloprotease inhibitors
Matveeva et al. Amino acids as suitable N-nucleophiles for the aza-Michael reaction of vinylphosphoryl compounds in water
Terenteva et al. Peptidomimetics based on thiacalixarene with L-tyrosine moieties: Antibacterial activity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus and degradation induced by binding to α-chymotrypsin
Nizamov et al. Proteinogenic amino acids in the synthesis of chiral salts of O, O-diterpenyl dithiophosphoric acids
AU782470B2 (en) Peptide derivatives and their pharmaceutically acceptable salts, processes for preparation of both, and use thereof
Pícha et al. Efficient synthesis of phosphonodepsipeptides derived from norleucine
RU2093520C1 (ru) N-ацильные производные биогенных аминов - модуляторы перекисного окисления липидов и способ их получения
US6686445B1 (en) Synthetic antineoplastic agents derived from dolastatin 15 and methods of making same
PL231880B1 (pl) Aminofenoksazonowe pochodne alkaloidów Cinchona oraz sposób ich wytwarzania