PL219802B1 - Zastosowanie kompozycji 3-bromopirogronianu do wytwarzania leku do zapobiegania i leczenia kryptokokozy - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kompozycji zawierającej 3-bromopirogronian (3-BP) do wytwarzania leku drugiego zastosowania w terapii kryptokokozy (cryptococcosis).

Aktualne możliwości terapii przeciwgrzybiczej, w tym terapii kryptokokozy są znacznie ograniczone, podczas gdy liczba poważnych inwazyjnych infekcji grzybiczych rośnie z roku na rok. Tylko w latach 1987-1996 śmiertelność w wyniku inwazyjnej aspergilozy wzrosła o 357%, a Aspergillus fumigatus wciąż pozostaje najczęstszym czynnikiem etiologicznym tego typu infekcji [Clin Infect Dis 2001; 33:641; Jpn J Med. Mycol 2007; 48:1]. Jednocześnie wśród pacjentów z zaburzoną odpornością Cryptococcus neoformans jest jednym z najczęstszych czynników mikrobiologicznych powodujących śmiertelność. Według statystyk każdego roku spośród 625 tysięcy chorych pacjentów na AIDS około jeden milion zapada na kryptokokozę mózgu prowadzącą do śmierci [AIDS 2009; 23:525]. Inny istotny problem w terapii infekcji grzybiczych wynika ze wzrostu prewalencji zakażeń gatunkami nonalbicans przy jednoczesnym wzroście liczby opornych szczepów. Podczas gdy prewalencja zakażeń gatunkami non-albicans w latach 1970-90 wynosiła 10-40%, w latach 1991-1998 gatunki te stanowiły już 35-65% wszystkich przypadków infekcji grzybiczych powodowanych przez gatunki z rodzaju Candida [J Hosp Infect 2002; 50:243]. Dlatego pożądane jest poszukiwanie nowych aktywnych środków przeciwgrzybiczych.

Autorzy wynalazku bazując na przedstawionej wcześniej i opatentowanej kompozycji przeciwnowotworowej leku pierwszego zastosowania zaproponowali kompozycję przeciwgrzybiczą, która cechuje się wysoką aktywnością wobec licznych patogennych gatunków grzybów oraz jest bezpieczna w stosowaniu u ludzi i zwierząt. Dodatkowo obecny w proponowanej kompozycji przeciwgrzybiczej 3-BP nie stanowi substratu dla białek błonowych z rodziny ABC transporterów [J Bioenerg Biomembr 2012; 44:155], dlatego w odróżnieniu od innych obecnie stosowanych leków przeciwgrzybiczych nie generuje fenotypów wielorakiej oporności i nie może być usuwany z komórki na tej drodze [Science 2008; 321:367; Clin Microbiol Rev 2009; 22:291].

Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kompozycji 3-bromopirogronianu (3-BP) składającej się z: wodnego, sterylnego roztworu 3-bromopirogronianu sporządzanego bezpośrednio przed zamierzonym użyciem; co najmniej jednego źródła węgla wybranego z grupy obejmującej: mannitol, erytritol, izomalt, laktitol, maltitol, sorbitol, ksylitol, dulcytol, rybitol, inozytol i glicerol, stabilizującego związek aktywny; roztworu buforowego wolnego od jonów potasu i wybieranego z grupy obejmującej: bufor cytrynianowy, bufor fosforanowy i bufor octanowy, zapewniającego odpowiednie pH w zakresie 5,58,0 do wytwarzania leku do zapobiegania i/lub leczenia kryptokokozy (cryptococcosis). Kompozycja wg wynalazku zawiera inhibitor syntezy DOPA-melaniny produkowanej przez Cryptococcus neoformans w warunkach indukcji, w tym w ustroju człowieka lub DHN-melaniny syntetyzowanej w sposób konstytutywny przez grzyby z rodziny Dematiaceae i/lub inhibitor syntezy glutationu (GSH). Inhibitor syntezy melaniny według wynalazku stanowi kwas para-aminobenzoesowy (PABA) stosowany w stężeniu 1-3 mM i/lub tricyklazol stosowany w stężeniu 0,1-0,2 mM do zastosowania synergistycznego z 3-BP. Inhibitor syntezy glutationu (GSH) według wynalazku stanowi BSO (buthionine sulfoximine) stosowany w stężeniu 1-10 mM, hamujący syntezę i obniżający poziom wewnątrzkomórkowego glutationu (GSH), do zastosowania synergistycznego z 3-BP. Kompozycja wg wynalazku służy do wytworzenia leku do zapobiegania i/lub leczenia kryptokokozy (cryptococcosis) skórnej, mózgu, opon mózgowych, ośrodkowego układu nerwowego (OUN), płuc i ogólnoustrojowej, której czynnikiem etiologicznym jest Cryptococcus neoformans u pacjentów: z HIV/AIDS lub po transplantacjach lub z immunosupresją lub z nowotworami powikłanymi infekcjami grzybiczymi.

Zastosowanie kompozycji 3-BP wg wynalazku obejmuje następujące drogi podania: doustną (per os), dożylną (intravenous), dokanałową (intrathecal), podskórną (subcutaneous), dopochwową (intravaginal), domięśniową (intramuscular), wziewną (inhalational), miejscową (topical), oraz postaci leku takie jak: tabletki, czopki, zawiesiny doustne, maści, kremy, lakiery, szampony oraz żele.

Działanie 3-BP polega na hamowaniu procesów oddychania tlenowego i beztlenowego, a w konsekwencji drastycznego obniżenia wewnątrzkomórkowego poziomu ATP, co w ostateczności prowadzi do śmierci komórki [Anticancer Res 2009; 29:4909]. Aktywność związku wynika z jego alkilujących i oksydacyjnych właściwości [J Bioenerg Biomembr 2012; 44:39; J Bioenerg Biomembr 2008; 40:607]. Jego selektywne działanie przeciwgrzybicze jest wynikiem różnej akumulacji oraz gatunkowo zróżnicowanego poziomu glutationu i melaniny w komórkach.

W kompozycji przeciwgrzybiczej zakłada się użycie odpowiedniego źródła węgla, stabilizującego 3-BP. Ponadto, kompozycja przeciwgrzybicza zawiera roztwór buforowy w proporcjach zapewniaPL 219 802 B1 jących przynajmniej częściowe odkwaszenie związku przeciwgrzybiczego oraz neutralizację ewentualnych produktów ubocznych jego metabolizmu. Zakłada się też możliwość włączenia do kompozycji dodatkowych składników w postaci znanych inhibitorów syntezy glutationu (GSH) między innymi BSO (buthionine sulfoximine) [Cancer Res 1989; 49:511-515] i/lub inhibitorów syntezy melaniny takich jak PABA [Brooks et al., US Patent no. 2010/0197612A1, 23.12.2010], i/lub tricyklazol [Enzyme Microb Tech 1996; 19:311-317] wykazujących działanie synergistyczne z 3-BP.

Obecnie 3-BP (i jego chemiczne pochodne) są objęte prawem patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki jako aktywne leki przeciwnowotworowe pierwszego zastosowania.

Przeprowadzona in vitro ocena biologicznej aktywności 3-BP wobec 110 szczepów z 32 różnych gatunków grzybów jednoznacznie wskazuje na przeciwgrzybiczą aktywność tego związku. Wykazano gatunkowo zróżnicowaną wrażliwość na ten związek oraz wynikającą z tego grzybobójczą lub wyłącznie grzybostatyczną aktywność. Ocenę przeciwgrzybiczej aktywności 3-bromopirogronianu wraz z określeniem najniższych stężeń hamujących (MIC) przeprowadzono zarówno w oparciu o zalecaną przez CLSI metodę mikrorozcieńczeń (M27-2A, M38-2A i M38-2P) jak też metodę seryjnych rozcieńczeń związku w podłożu (ang. spot tests) [Methods In Yeast Genetics: A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual, 2005].

3-bromopirogronian jako inhibitor produkcji energii komórkowej w znaczącym stopniu obniża poziom wewnątrzkomórkowego ATP. Dla C. neoformans wyraźny spadek ilości ATP obserwowano przy stężeniach 3-BP równych 1/8 i 1/16 wartości MIC. Uzyskane wyniki w doświadczeniach z użyciem znakowanego izotopowo 3-BP potwierdzają wysoki poziom jego akumulacji w komórkach

C. neoformans varietas neoformans. W przeciwieństwie do innych obecnie wykorzystywanych cytostatyków, związków grzybostatycznych i grzybobójczych, takich jak pochodne azolowe czy też amfoterycyna B, wykazano, że 3-BP nie jest substratem dla transporterów błonowych z rodziny białek ABC, co pozwala wykluczyć możliwość generowania fenotypu oporności na tej drodze.

W świetle obecnego stanu techniki: Chen Z., et al., Biochim Biophys Acta; 2009, 1787:553-560; Walter AZ., et al., J Pharm Sci. 1964; 53(11):1421-1422 oraz opis patentowy WO 2011/127200 A2 autorstwa Geschwind J-F. i Vali M. autorzy niniejszego zgłoszenia (P. 399978) wykazali nieoczywistość rozwiązań przedstawionych w tych dokumentach.

Aktualny stan wiedzy na temat przeciwgrzybiczej aktywności 3-bromopirogronianu stanowi licząca zaledwie 1,5 strony (A4) publikacja Walter AZ, Tellis AM. „3-bromopyruvic acid, highly selective antimicrobial agent against certain yeasts” J Pharm Sci. 1964; 53(11):1421-1422. Autorzy tej pracy ograniczyli badanie biologicznej aktywności 3-bromopirogronianu do niereprezentatywnej grupy grzybów (tylko 13 szczepów z rodzaju Candida oraz trzech z gatunków: Saccharomyces cerevisiae, Hansenula anomala i Geotrichum candidum). Należy podkreślić, że autorzy tej pracy nie uwzględnili w badaniach nad przeciwgrzybiczą aktywnością 3-BP żadnego z przedstawicieli gromady Basidiomycota (w tym gatunków z rodzaju Cryptococcus). W przeciwieństwie do autorów niniejszego zgłoszenia opisane w cytowanej publikacji wyniki uzyskano przy zastosowaniu niereferencyjnej metody (analiza pomiarów gęstości optycznej OD₆₂o_nm). Ponadto, testy wrażliwości komórek grzybów przeprowadzono w podłożu płynnym z glukozą (dekstrozą). W związku z represją glukozową białka Jenlp zaangażowanego w transport tego związku do komórek takie postępowanie należy uznać za nieprawidłowe a przedstawione w tej pracy wyniki są niedokładne.

Mechanizmy biologicznej aktywności 3-BP na poziomie molekularnym opisane w pierwszej części zgłoszenia są o wiele bardziej złożone niż pierwotnie zostało to opisane w pracy Chen Z., et al.: Role of mitochondria-associated hexokinase II in cancer cell death induced by 3-bromopyruvate. Biochim Biophys Acta; 2009, 1787:553-560. Przede wszystkim te opisane w niniejszym zgłoszeniu dotyczą modelu komórek patogennego grzyba Cryptococcus neoformans, dla którego wyznaczono minimalne stężenia bójcze związku. W przeciwieństwie do wspomnianej już publikacji w zgłoszeniu uwzględniono wyniki dotyczące selektywnej akumulacji 3-BP w komórkach taksonomicznie różnych grzybów. Wykazano też, że 3-BP nie stanowi substratu dla białek błonowych z rodziny ABC transporterów, co wyklucza mechanizm wielorakiej oporności. Ponadto, autorzy zgłoszenia wykazali bezpośredni związek między fenotypem wrażliwości komórek grzybów na 3-BP a wewnątrzkomórkowym stężeniem glutationu (GSH) oraz obecnością melaniny w ścianach komórkowych licznych gatunków grzybów. Było to podstawą do poszukiwania związków obniżających poziom lub hamujących syntezę glutationu (GSH) i/lub melaniny. W wyniku przeprowadzonych badań zaproponowano wykorzystanie BSO (sulfoksyminy butioniny) i PABA (kwasu para-aminobenzoesowego) jako związków przejawiających efekt synergistyczny z 3-bromopirogronianem.

PL 219 802 B1

Zgłoszenie patentowe P. 399978 w przeciwieństwie do opisu patentowego WO 2011/127200 A2 autorstwa Geschwind J-F. i Vali M., poparte jest wynikami rzetelnych badań. Niniejszy dokument nie jest oparty wyłącznie na domniemaniach i deklaracjach „a priori ze strony zgłaszających. Przede wszystkim zamieszczono wyniki konkretnych doświadczeń (spektrum działania, zakres aktywnych stężeń 3-BP, molekularny mechanizm działania) mających odzwierciedlenie w późniejszych publikacjach. Autorzy tego zgłoszenia zastrzegają wykorzystanie biologicznej aktywności 3-BP w wąskim zakresie obejmującym gatunki z rodzaju Cryptococcus. W tym kontekście jest to zasadnicza różnica w odniesieniu do opisu patentowego Geshwind J-F. i Vali M., w którym zastrzega się „a priori zbyt szerokie spektrum działania 3-BP obejmujące wszystkie bakterie Gram+ i Gram-, gatunkowo liczne spektrum grzybów i pasożytów. Tego typu założenia mają charakter bardziej spekulacyjny niż naukowy ponieważ nie wszystkie gatunki mikroorganizmów są wrażliwe na 3-BP. Możliwość zastosowania 3-bromopirogronianu w terapii infekcji grzybiczych została potraktowana bardzo powierzchownie i bez uzasadnienia. Autorzy opisu patentowego WO 2011/127200 A2 zastrzegają możliwość wykorzystania 3-BP w terapii (cytuję) „cryptococcus” oraz „nail fungus”. W tym aspekcie treść tego zgłoszenia dowodzi braku znajomości problematyki mykologicznej, co przejawia się użyciem błędnych merytorycznie terminów. Tak więc de facto autorzy tego opisu nie zastrzegli wykorzystania 3-bromopirogronianu w terapii kryptokokozy (cryptococcosis). Ponadto, w niniejszym zgłoszeniu zastrzeżono szczególną kompozycję przeciwgrzybiczną 3-BP do wytwarzania leku do zastosowania w terapii kryptokokozy (cryptococcosis), a nie tylko pojedynczy związek 3-BP.

W kontekście powyższej argumentacji zgłoszony przez nas wynalazek jest oryginalny i nowatorski.

Wynalazek niniejszy opisano w następujących przykładach. Prezentowane przykłady służą zobrazowaniu przedmiotowego rozwiązania.

P r z y k ł a d 1.

Ocenę przeciwgrzybiczej aktywności 3-bromopirogronianu wraz z określeniem minimalnych stężeń hamujących (MIC) przeprowadzono zarówno w oparciu o zalecaną przez CLSI metodę mikrorozcieńczeń (M27-2A, M38-2A i M38-2P) jak też metodę seryjnych rozcieńczeń związku w minimalnym podłożu syntetycznym SD (0,67% YNB, 2% glukoza lub sacharoza, 2% Bacto agar, pH 5,5). Wartości MIC wyznaczone metodą seryjnych rozcieńczeń związku w agarze dla badanych szczepów patogennych grzybów drożdżopodobnych z rodzajów Candida, Rhodotorula, Trichosporon, Geotrichum, dermatofitów z rodzajów Trichophyton, Microsporum i Epidermophyton oraz wybranych przedstawicieli Glomeromycota mieściły się w przedziale 1,8-3,6 mM. Wykazano znacznie wyższą wrażliwość w przypadku klinicznych szczepów Cryptococcus neoformans, a wśród gatunków z rodzaju Aspergillus znacznie wyższą wrażliwością cechowały się A. fumigatus i A. clavatus. Szczególnie wysoką skuteczność 3-BP obserwowano wobec klinicznych szczepów C. neoformans varietas neoformans. Wartości MIC wyznaczone dla tych szczepów w oparciu o metodę mikrorozcieńczeń (w płynnym podłożu RPMI 1640) mieściły się w przedziale 0,15-0,23 mM oraz 0,12-0,15 mM w przypadku metody seryjnych rozcieńczeń związku w agarze (Tabela 1). Ponadto przy stężeniach odpowiadających 2x i 4x wartości MIC związek wykazywał także działanie grzybobójcze, co było obserwowane odpowiednio po 24 i 50 godzinach inkubacji ze związkiem (Rycina 1).

T a b e l a 1. Wrażliwość 110 szczepów grzybów na 3-bromopirogronian (oceniana metodą seryjnych rozcieńczeń związku w agarze*).

Gatunki grzybów (liczba testowanych szczepów)	Wartości MIC w mM 3BP (źródło węgla#)
1	2
Cryptococcus neoformans varietas neoformans (4)	0,12-0,15 (Sacharoza)
Cryptococcus uniguttulatus (2)	2,4-3,6 (Sacharoza)
Candida lusitaniae (4)	2,4-3,6 (Sacharoza)
Candida guilliermondii (5)	2,4-3,6 (Sacharoza)
Candida famata (4)	2,4-3,6 (Sacharoza)
Rhodotorula glutinis (2)	2,4-3,0 (Glicerol + Etanol)

PL 219 802 B1 cd. tabeli 1

1	2
Rhodotorula rubra (3)	3,0-3,6 (Glicerol + Etanol)
Candida lipolytica (2)	1,8-2,4 (Glicerol + Etanol)
Candida krusei (5)	1,2-1,8 (Glicerol + Etanol)
Candida albicans (5)	2,4-3,6 (Galaktoza)
Candida glabrata (5)	2,4-3,6 (Trehaloza)
Candida tropicalis (3)	2,4-3,6 (Trehaloza)
Exophiala (Wangiella) dermatitidis (4)	8,4-9,6 (Sacharoza)
Aureobasidium pullulans (4)	7,2-8,4 (Sacharoza)
Trichophyton mentagrophytes var, mentagrophytes (2)	1,8-2,4 (Sacharoza)
Trichophyton rubrum (4)	1,8-2,4 (Sacharoza)
Trichophyton tonsurans (3)	1,8-2,4 (Sacharoza)
Microsporum canis (2)	3,0 (Sacharoza)
Microsporum gypseum (2)	3,0-3,6 (Sacharoza)
Cladosporium cladosporioides (6)	7,2-8,4 (Sacharoza)
Ulocladium chartarum (3)	6,0-7,2 (Sacharoza)
Alternaria tenuissima (2)	7,2-8,4 (Sacharoza)
Fusarium graminearum (2)	6,0-7,2 (Sacharoza)
Trichoderma viride (4)	7,2-8,4 (Sacharoza)
Absidia glauca (5)	1,8-3,0 (Sacharoza)
Rhizopus nigricans (4)	1,8-3,0 (Sacharoza)
Chaetomium globosum (3)	1,8-3,0 (Sacharoza)
Aspergillus clavatus (2)	7,2-8,4 (Sacharoza)
Aspergillus fumigatus (4)	6,0-7,2 (Sacharoza)
Fusarium oxysporum (4)	8,4-9,6 (Sacharoza)
Aspergillus niger (3)	22,8-24,0 (Sacharoza)
Penicillium chrysogenum (3)	22,8-24,0 (Sacharoza)

* Wrażliwość na 3-BP oceniana metodą seryjnych rozcieńczeń związku w agarze oraz w przypadku grzybów strzępkowych metodą pomiarów średnicy kolonii.

# Hodowla prowadzona na podłożu SD zawierającym wskazane źródło węgla.

PL 219 802 B1

Ryc. 1. Przeżywalność komórek C. neoformans w zależności od czasu i stężenia 3-BP

P r z y k ł a d 2.

Hamowanie wzrostu grzybów powodowane przez 3-BP zależy także od naturalnego, wewnątrzkomórkowego poziomu zredukowanego glutationu (GSH), którego ilość w oparciu o opisaną w literaturze przedmiotu metodę [Arch Biochem Biophys 1959, 82:70; Yeast 1997, 13:1347] oznaczono dla wybranych szczepów grzybów. W przypadku hodowli prowadzonych w podłożu pełnym, zawierającym pepton stwierdzano najwyższy poziom GSH wewnątrz komórek grzyba, który korelował z odpowiednio wyższymi wartościami MIC. Najniższy poziom GSH w komórkach hodowanych w pożywce minimalnej SD, bez aminokwasów towarzyszył najniższym wartościom MIC uzyskiwanym w przypadku doświadczeń przeprowadzanych w tym podłożu. Zastosowano jednoczesne podawanie kompozycji 3-bromopirogronianu (3-BP) składającej się z: wodnego, sterylnego roztworu 3-bromopirogronianu sporządzanego bezpośrednio przed zamierzonym użyciem; co najmniej jednego źródła węgla wybranego z grupy obejmującej: mannitol, erytritol, izomalt, laktitol, maltitol, sorbitol, ksylitol, dulcytol, rybitol, inozytol i glicerol, stabilizującego związek aktywny; roztworu buforowego wolnego od jonów potasu i wybieranego z grupy obejmującej bufor cytrynianowy, bufor fosforanowy i bufor octanowy, zapewniającego odpowiednie pH, w zakresie 5,5-8,0 razem z inhibitorem syntezy glutationu (GSH) takim jak BSO (buthionine sulfoximine) [Carcinogenesis 2006; 27:240; Oncol Rep 2009; 22:385] w celu osiągnięcia efektu synergistycznego i obniżenia wartości MIC.

W przypadku Exophiala dermatitidis czy też Aureobasidium pullulans obserwowano mniejszą wrażliwość na 3-BP wynikającą z ochronnej roli produkowanej w sposób konstytutywny DHNmelaniny. Podobną zależność zaobserwowano w przypadku Cryptococcus neoformans zdolnego do wytwarzania DOPA-melaniny w warunkach indukcji na podłożu CAA (agar z kwasem kawowym) [J Clin Microbiol 1975; 2:115]. Produkcja DOPA-melaniny jest swoista dla tego gatunku grzyba, wyróżnia go wśród innych z rodzaju Cryptococcus i stanowi istotny czynnik w patomechanizmie zakażenia [J Exp Med 1996; 184:377; Antimicrob Agents Ch 2002; 46:3394]. W oparciu o uzyskane wyniki

PL 219 802 B1 w doświadczeniach z kwasem para-aminobenzoesowym (PABA) oraz BSO sugeruje się jednoczesne wykorzystanie opisanej w zastrzeżeniu 1 zgłoszenia kompozycji przeciwgrzybiczej wraz z odpowiednim inhibitorem syntezy melaniny i/lub BSO w celu wytworzenia leku, który pozwoli osiągnąć efekt terapeutyczny przy znacznie niższych wartościach stężeń 3-bromopirogronianu (Tabela 2).

Ocenę wrażliwości badanych szczepów na 3-BP w połączeniu z inhibitorami (BSO, PABA) przeprowadzono na podłożach SD i CAA w oparciu o metodę seryjnych rozcieńczeń związku w agarze opisaną w przykładzie 1.

T a b e l a 2. Wpływ inhibitorów syntezy glutationu (BSO) i melaniny (PABA) na wrażliwość wybranych klinicznych szczepów C. neoformans na 3-bromopirogronian.

Wartości MIC mM 3-BP	Podłoże hodowlane
C. neoformans (4)*
0,12-0,15	SD + sacharoza
0,3-0,36	(CAA)
0,1-0,15	CAA + 3 mM PABA
0,08-0,1	CAA+ 10 mM BSO
0,05-0,07	CAA + 10 mM BSO + 3 mM PABA

* liczba testowanych szczepów

W podsumowaniu, biorąc pod uwagę niską toksyczność 3-BP wobec komórek ssaczych w porównaniu z nefrotoksycznym i hepatotoksycznym działaniem amfoterycyny B stosowanej obecnie w leczeniu kryptokokozy [Clin Microbiol Rev 1999; 12:501], 3-BP może stanowić alternatywę jako związek o właściwościach nie tylko grzybostatycznych ale także grzybobójczych. Ponadto, uwzględniając rosnący odsetek szczepów patogennych grzybów opornych na obecnie stosowane leki przeciwgrzybicze, a w szczególności azolowe, związek ten niebędący substratem dla ABC transporterów może stanowić istotny komponent do wytwarzania leków skutecznych również w terapii innych rodzajów infekcji grzybiczych. Przeprowadzone badania na modelu komórki prokariotycznej (Salmonella typhimurium - test Ames'a) oraz komórki eukariotycznej (Saccharomyces cerevisiae - indukcja cytoplazmatycznych mutantów oddechowych) nie wykazały mutagennego działania 3-BP (badania własne).

Claims (7)

1. Zastosowanie kompozycji 3-bromopirogronianu (3-BP) składającej się z: wodnego, sterylnego roztworu 3-bromopirogronianu (3-BP) sporządzanego bezpośrednio przed zamierzonym użyciem; co najmniej jednego źródła węgla wybranego z grupy obejmującej: mannitol, erytritol, izomalt, laktitol, maltitol, sorbitol, ksylitol, dulcytol, rybitol, inozytol i glicerol, stabilizującego związek aktywny; roztworu buforowego wolnego od jonów potasu i wybieranego z grupy obejmującej bufor cytrynianowy, bufor fosforanowy i bufor octanowy, zapewniającego odpowiednie pH w zakresie 5,5-8,0 do wytwarzania leku do zapobiegania i/lub leczenia kryptokokozy (cryptococcosis).

2. Zastosowanie kompozycji 3-BP według zastrz. 1, znamienne tym, że kompozycja ta zawiera związek chemiczny hamujący syntezę DOPA-melaniny produkowanej przez Cryptococcus neoformans w warunkach indukcji, w tym w ustroju człowieka i/lub inhibitor syntezy glutationu (GSH).

3. Zastosowanie związku chemicznego hamującego syntezę melaniny według zastrz. 2, znamienne tym, że stanowi go kwas para-aminobenzoesowy (PABA) stosowany w stężeniu 1-3 mM do zastosowania synergistycznego z 3-BP w zapobieganiu i/lub leczeniu kryptokokozy (cryptococcosis).

4. Zastosowanie związku chemicznego hamującego syntezę glutationu (GSH) według zastrz. 2, znamienne tym, że stanowi go BSO (buthionine sulfoximine) stosowany w stężeniu 1-10 mM, obniżający poziom wewnątrzkomórkowego glutationu (GSH) do zastosowania synergistycznego z 3-BP w zapobieganiu i/lub leczeniu kryptokokozy (cryptococcosis).

PL 219 802 B1

5. Zastosowanie kompozycji 3-BP według zastrz. 1 do zapobiegania i/lub leczenia kryptokokozy (cryptococcosis) skórnej, mózgu, opon mózgowych, ośrodkowego układu nerwowego (OUN), płuc i ogólnoustrojowej, której czynnikiem etiologicznym jest Cryptococcus neoformans.

6. Zastosowanie kompozycji 3-BP według zastrz. 1 do zapobiegania i/lub leczenia kryptokokozy (cryptococcosis) u pacjentów: z HIV/AIDS i/lub po transplantacjach i/lub z immunosupresją i/lub z nowotworami powikłanymi tego typu infekcją.

7. Zastosowanie kompozycji 3-BP według zastrz. 1 obejmujące następujące drogi podania: doustną (per os), dożylną (intravenous), dokanałową (intrathecal), podskórną (subcutaneous), dopochwową (intravaginal), domięśniową (intramuscular), wziewną (inhalational), miejscową (topical), oraz postaci leku takie jak: tabletki, czopki, zawiesiny doustne, maści, kremy, lakiery, szampony oraz żele.