PL217161B1 - Zastosowanie rekombinowanego białka lub przeciwciał rozpoznających to białko do (54) wytwarzania kompozycji wykorzystywanej w profilaktyce lub leczeniu zwierząt, zwłaszcza gospodarskich - Google Patents

Abstract

Wynalazek dotyczy wykorzystania białka Hsp60 Histophilus somni do wytwarzania kompozycji stosowanej, zwłaszcza u zwierząt gospodarskich, w celu wzbudzania odporności przeciw drobnoustrojom patogennym i pasożytom. Wynalazek może znaleźć zastosowanie w praktyce terenowej, ponieważ umożliwia ograniczenie liczby potrzebnych szczepień. Ponadto zmniejsza ryzyko pojawienia się niekorzystnych efektów ubocznych, występujących przy stosowaniu szczepionek opartych na całych drobnoustrojach.

Description

Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie rekombinowanego białka lub przeciwciał rozpoznających to białko do wytwarzania kompozycji wykorzystywanej w profilaktyce lub leczeniu zwierząt, zwłaszcza gospodarskich.

Białko to może zostać wykorzystywane jako antygen w rutynowych szczepieniach profilaktycznych, w celu podniesienia statusu odpornościowego zwierząt oraz jako antygen, w celu uzyskania surowicy odpornościowej, która może być podawana chorym zwierzętom jako preparat leczniczy.

Rodzina białek szoku cieplnego stanowi grupę białek o bardzo konserwatywnym planie budowy, który został zachowany między bardzo odległymi filogenetycznie organizmami (McMullin TW., Hallberg RL.: A high evolutionary conserved mitochondrial protein is structurally related to the protein encoded by the Escherichia coli groEL gene. Mol Cell Biol. 8(1):337-80, (1988).

Dostępne dane literaturowe dostarczają licznych informacji na temat możliwości wykorzystania białek szoku cieplnego, w tym HSP 60, w immunoprofilaktyce swoistej. Większość autorów koncentruje się na wykorzystaniu HSP 60 w zapobieganiu wystąpienia choroby wywołanej przez drobnoustrój, od którego ten antygen pochodzi. Yamaguchi H., Osaki T., Kai M., Taguchi H., Kamiya S.: Immune response against a cross-protective epitope on the heat shock protein 60 homologue of Helicobacter pylori. Infect. Immun. 68, 3448-3454 (2000) udowodnili ochronny efekt immunizacji myszy peptydem hsp60 Helicobacter pylori, na kolonizację żołądka myszy przez te bakterie. Blander i Horwitz (Blander S.J., Horwitz M.A.: Major cytoplasmic membrane protein of Legionella pneumophila, a genus common antigen and member of the hsp 60 family of heat shock proteins, induces protective immunity In guinea pig model of Legionnaires' Disease. J.Clin. Invest. 91, 717-723 (1993)) z kolei wykazali, że szczepienie świnek morskich hsp60 Legionella pneumophila chroni je przed zakażeniem doświadczalnym.

Johansen H.K., Norgaard A., Andersen L.P., Jansen P., Nielsen H., Hoiby N.: Cross-reactive antigens shared by Pseudomonas aeruginosa, Helicobacter pylori, Campylobacter jejuni and Haemophilus influenzae may cause false positive titers of antibody to H.pylori. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2, ss. 149-155 (1995) stwierdzili reaktywność krzyżową antygenu Hsp60 z licznymi bakteriami, co utrudniało diagnostykę zakażeń poprzez możliwość powstawania wyników fałszywie dodatnich.

Istotą wynalazku jest zastosowanie rekombinowanego białka szoku cieplnego Hsp 60 Histophilus somni lub przeciwciał rozpoznających to białko, uzyskanych z surowicy zwierząt immunizowanych tym białkiem do wytwarzania kompozycji do profilaktyki lub leczenia zwierząt, zwłaszcza gospodarskich, polegającego na indukcji krzyżowej odporności przeciwko drobnoustrojom patogennym, przy czym kompozycja antygenowa zawiera nie mniej niż 1 jag tego białka.

Wynalazek jest bliżej objaśniony w przykładzie wykonania.

P r z y k ł a d: Po izolacji genomowego DNA z komórek bakteryjnych Histophilus somni namnożonych na agarze czekoladowym w warunkach atmosfery wzbogaconej w CO2, przeprowadza się reakcję

PCR. Jako sekwencje startowe wykorzystuje się oligonukleotydy z miejscami restrykcyjnymi dla enzymów NcoI i BamHI. Po ligacji genu z plazmidem Pet-22b(+) transformuje się kompetentne komórki Escherichia coli BL21 pLysS. Ekspresję białka prowadzi się w hodowli płynnej przez stymulację za pomocą IPTG, po uzyskaniu przez bakterie fazy logarytmicznego wzrostu. Otrzymane białko Hsp 60 z komórek bakteryjnych Histophilus somni izoluje się w warunkach denaturacyjnych na kolumnie NiNTA.

Uzyskany antygen podaje się zwierzętom podskórnie w dawce nie niższej niż 1 mikrogram, z dodatkiem adiuwantu. W celu wzbudzenia wyższego pułapu odporności czynnej szczepienie powtarza się po 2-4 tygodniach.

Claims (1)

1. Zastosowanie rekombinowanego białka szoku cieplnego Hsp 60 Histophilus somni lub przeciwciał rozpoznających to białko, uzyskanych z surowicy zwierząt immunizowanych tym białkiem, do wytwarzania kompozycji do profilaktyki lub leczenia zwierząt, zwłaszcza gospodarskich, polegającego na indukcji krzyżowej odporności przeciwko drobnoustrojom patogennym, przy czym kompozycja antygenowa zawiera nie mniej niż 1 mikrogram tego białka.