PL216473B1 - Estry difenylowe pochodne kwasów 1-izotiocyjano-metanofosfonowych, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie - Google Patents
Estry difenylowe pochodne kwasów 1-izotiocyjano-metanofosfonowych, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanieInfo
- Publication number
- PL216473B1 PL216473B1 PL399050A PL39905012A PL216473B1 PL 216473 B1 PL216473 B1 PL 216473B1 PL 399050 A PL399050 A PL 399050A PL 39905012 A PL39905012 A PL 39905012A PL 216473 B1 PL216473 B1 PL 216473B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- mol
- mmol
- toluene
- flask
- ethyl acetate
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 35
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 32
- 125000006267 biphenyl group Chemical group 0.000 title claims description 22
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 28
- 239000002253 acid Substances 0.000 title description 7
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 title description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 153
- -1 2-methylthioethyl Chemical group 0.000 claims description 132
- QGJOPFRUJISHPQ-UHFFFAOYSA-N Carbon disulfide Chemical compound S=C=S QGJOPFRUJISHPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 84
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 claims description 58
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 claims description 58
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 58
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N phenylbenzene Natural products C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 58
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 21
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 14
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- YJMNLGBCRLOFMJ-UHFFFAOYSA-N OP1(OC1N=C=S)=O Chemical class OP1(OC1N=C=S)=O YJMNLGBCRLOFMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 9
- 125000001617 2,3-dimethoxy phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C(OC([H])([H])[H])C(OC([H])([H])[H])=C1[H] 0.000 claims description 6
- 125000004204 2-methoxyphenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C(OC([H])([H])[H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 6
- 125000001622 2-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C([H])=C(*)C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 claims description 6
- 125000003762 3,4-dimethoxyphenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(OC([H])([H])[H])=C(OC([H])([H])[H])C([H])=C1* 0.000 claims description 6
- 125000001255 4-fluorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1F 0.000 claims description 6
- 125000004861 4-isopropyl phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 125000004172 4-methoxyphenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(OC([H])([H])[H])=C([H])C([H])=C1* 0.000 claims description 6
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 6
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 6
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 6
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 claims description 6
- 125000001400 nonyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 125000003854 p-chlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1Cl 0.000 claims description 6
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 claims description 6
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 claims description 6
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 6
- 125000000286 phenylethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 6
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 234
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 234
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 132
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 90
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 82
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 76
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 76
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 66
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 52
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 30
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 26
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 26
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 26
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 26
- 238000001394 phosphorus-31 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 26
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 26
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 26
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 26
- 239000003039 volatile agent Substances 0.000 description 26
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 25
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 25
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 25
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 24
- 235000014443 Pyrus communis Nutrition 0.000 description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 14
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 12
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000283891 Kobus Species 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 3
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 3
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- MWSLDZGFBHKYLU-UHFFFAOYSA-N (3-diphenoxyphosphoryl-3-isothiocyanatopropyl)benzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1OP(C(CCC=1C=CC=CC=1)N=C=S)(=O)OC1=CC=CC=C1 MWSLDZGFBHKYLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 101000851058 Homo sapiens Neutrophil elastase Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical class C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 2
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 102000052502 human ELANE Human genes 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZBKFYXZXZJPWNQ-UHFFFAOYSA-N isothiocyanate group Chemical group [N-]=C=S ZBKFYXZXZJPWNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UUFQTNFCRMXOAE-UHFFFAOYSA-N 1-methylmethylene Chemical compound C[CH] UUFQTNFCRMXOAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(diethylamino)-3-(diethyliminiumyl)-3h-xanthen-9-yl]-5-sulfobenzene-1-sulfonate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZYSGIPNXRYFMGO-UHFFFAOYSA-N CC(C)C(N)(O1)P1(O)=O Chemical compound CC(C)C(N)(O1)P1(O)=O ZYSGIPNXRYFMGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PEBLHSQTJXOBNY-UHFFFAOYSA-N CCCC(N)(O1)P1(O)=O Chemical compound CCCC(N)(O1)P1(O)=O PEBLHSQTJXOBNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USZPCBZZTAYDAJ-UHFFFAOYSA-N COC1=CC(C(N)(O2)P2(O)=O)=CC(OC)=C1 Chemical compound COC1=CC(C(N)(O2)P2(O)=O)=CC(OC)=C1 USZPCBZZTAYDAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NTZCKCRHLXNEGZ-UHFFFAOYSA-N COC1=CC=C(C(N)(O2)P2(O)=O)C=C1 Chemical compound COC1=CC=C(C(N)(O2)P2(O)=O)C=C1 NTZCKCRHLXNEGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KUDBWFBRUHFZAY-UHFFFAOYSA-N COC1=CC=C(C(N=C=S)P(O)(O)=O)C=C1 Chemical compound COC1=CC=C(C(N=C=S)P(O)(O)=O)C=C1 KUDBWFBRUHFZAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100167062 Caenorhabditis elegans chch-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000012571 GlutaMAX medium Substances 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 235000019502 Orange oil Nutrition 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical class OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- OBESRABRARNZJB-UHFFFAOYSA-N aminomethanesulfonic acid Chemical compound NCS(O)(=O)=O OBESRABRARNZJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003217 anti-cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000035567 cellular accumulation Effects 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 230000002113 chemopreventative effect Effects 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000010502 orange oil Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 150000003585 thioureas Chemical class 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Description
Przedmiotem wynalazku są estry difenylowe pochodne kwasów 1-izotiocyjano-metanofosfonowych, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie przeciwnowotworowe.
W literaturze przedmiotu, m.in. w Psurski i współ. „Synthesis and antiproliferative activity of novel α- and e-dialkoxyphosphonylated isothiocyanates” Bioorg. and Medicinal Chemistry Letters 21 (2011) 4572- 4576”, opisane zostały estry dialkilowe kwasów 1-izotiocyjano-aralkilofosfonowe, które ze względu na wysoką reaktywność grupy izotiocyjanianowej znalazły zastosowanie w szeregu transformacji syntetycznych. Dla przykładu znalazły zastosowanie w reakcjach prowadzących do uzyskania tiomocznikowych pochodnych peptydów (m.in. Jing-Zi i współ. „Synthesis and in vitro study of pseudopeptide thioureas containing α-aminophosphonate moiety as potential antitumor agents” Eur. Journal of Med. Chemistry 45 (2010) 5108- 5112, które mogą być wartościowymi związkami wykazującymi aktywność biologiczną, w szczególności przeciwnowotworową. W literaturze opisano również syntezę szeregu Cbz (benzyloksykarbonylo)-zablokowanych, fosfonowych pochodnych aminokwasów, które jednakże nie wykazały aktywności antyproliferacyjnej (przeciwnowotworowej) w warunkach in vitro (Sieńczyk i współ. „Simple phosphonic inhibitors of human neutrophil elastase” Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 21 (2011) 1310-1314).
Ze stanu techniki wiadomo, iż grupa izotiocyjanianowa odpowiedzialna jest za szybką akumulację związków w komórkach eukariotycznych na drodze dyfuzji biernej (opisane m.in. w Zhang Y. Molecular mechanism of rapid cellular accumulation of anticarcinogenic isothiocyanates. Carcinogenesis.
2001; 22(3): 425-31) i szereg aktywności biologicznych (opisane m.in. w pracy przeglądowej Zhang Y. The molecular basis that unifies the metabolism, cellular uptake and chemopreventive activities of dietary isothiocyanates. Carcinogenesis. 2012; 33(1): 2-9.).
Ze stanu techniki wiadomo jest, iż estry difenylowe fosfonianów odpowiedzialne są za aktywność inhibitorową przeciwko proteazom serynowym opisane m.in. w Sieńczyk i współ. ,,Simple phosphonic inhibitors of human neutrophil elastase” Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 21 (2011) 1310-1314.
Z publikacji Psurski i współ. Synthesis and antiproliferative activity of novel α- and β-dialkoxyphosphonylated isothiocyanates” Bioorg. and Medicinal Chemistry Letters 21 (2011) 4572-4576) znany jest sposób wytwarzania estrów dialkilowych 1-izotiocyjano-aralkilofosfonianów, polegający na tym, że jako substratu użyto chlorowodorków estrów dialkilowych kwasów 1-amino-aralkilofosfonowych, który z wykorzystaniem disiarczku węgla w obecności aminy i tetrafluoroboran 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametyloaminiowy (TBTU) przekształcany jest w docelowy związek ester dialkilowy kwasu 1-izotiocyjano-aralkilofosfonowego.
W literaturze naukowej i patentowej nie są znane estry difenylowe pochodne kwasów 1-izotiocyjano-metanofosfonowych, jak również sposoby ich wytwarzania oraz zastosowanie.
Wynalazek dotyczy estrów difenylowych pochodnych kwasów 1-izotiocyjano-metanofosfonowych o wzorze ogólnym 1, w którym R1 oznacza wodór lub podstawniki: metylowy, etylowy, propylowy, izopropylowy, butylowy, izo-butylowy, sec-butylowy, pentylowy, nonylowy, 2-metylotioetylowy, fenylowy, benzylowy, fenyletylowy, 2-naftylowy, 2-metoksyfenylowy, 4-metoksyfenylowy, 3,4-dimetoksyfenylowy, 3,5-dimetoksyfenylowy, 2,3-dimetoksyfenylowy, 2-nitrofenylowy, 3-nitrofenylowy, 4-nitrofenylowy, 4-fluorofenylowy, 4-chlorofenylowy lub 4-izopropylofenylowy.
Wynalazek dotyczy również sposobu wytwarzania estrów difenylowych pochodnych kwasów 1-izotiocyjano-metanofosfonowych o wzorze ogólnym 1, w którym R1 oznacza wodór lub podstawniki: metylowy, etylowy, propylowy, izopropylowy, butylowy, izo-butylowy, sec-butylowy, pentylowy, nonylowy, 2-metylotioetylowy, fenylowy, benzylowy, fenyletylowy, 2-naftylowy, 2-metoksyfenylowy, 4-metoksyfenylowy, 3,4-dimetoksyfenylowy, 3,5-dimetoksyfenylowy, 2,3-dimetoksyfenylowy, 2-nitrofenylowy,
3-nitrofenylowy, 4-nitrofenylowy, 4-fluorofenylowy, 4-chlorofenylowy lub 4-izopropylofenylowy polegający na tym, że bromowodorek estru difenylowego pochodnej kwasu 1-amino-metanofosfonowego poddaje się reakcji z 10-15 ekwiwalentami molowymi disiarczku węgla w obecności 4-6 ekwiwalentów molowych N,N-diizopropyloetyloaminy w N,N-dimetyloformamidzie w temperaturze pokojowej, a następnie po 20-40 minutach powstały produkt pośredni rozkłada się do izotiocyjanianu, przy czym w reakcji wykorzystuje się 1,5 równoważnika molowego heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego.
Wynalazek zapewnia również zastosowanie estrów difenylowych pochodnych kwasów 1-izotiocyjano-metanoofosfonowych o wzorze ogólnym 1, w którym R1 oznacza wodór lub podstawniki: metyPL 216 473 B1 lowy, etylowy, propylowy, izo-propylowy, butylowy, izo-butylowy, sec-butylowy, pentylowy, nonylowy, 2-metylotioetylowy, fenylowy, benzylowy, fenyletylowy, 2-naftylowy, 2-metoksyfenylowy, 4-metoksyfenylowy, 3,4-dimetoksyfenylowy. 3,5-dimetoksyfenylowy, 2,3-dimetoksyfenylowy, 2-nitrofenylowy, 3-nitrofenylowy, 4-nitrofenylowy, 4-fluorofenylowy, 4-chlorofenylowy lub 4-izo-propylofenylowy w preparacie farmaceutycznym przeznaczonym do leczenia nowotworów płuc, piersi, jelita grubego ze szczególnym uwzględnieniem nowotworów opornych na doksorubicynę.
Podstawową zaletą wyróżniającą związki będące przedmiotem wynalazku spośród strukturalnie zbliżonych związków, jest obecność w jednej cząsteczce dwóch grup funkcyjnych wykazujących niezależnie od siebie aktywność biologiczną. Zaletą sposobu według wynalazku jest krótki czas reakcji (całość procesu przeprowadza się w około 1 godzinę), prostota procesu oczyszczania produktu, a także wysoka wydajność reakcji. Ponadto możliwość przeprowadzenia całości syntezy bez oczyszczania produktu pośredniego oraz brak konieczności kontrolowania temperatury układu reakcyjnego (poprzez ogrzewanie bądź chłodzenie) dodatkowo przyspiesza cały proces wytwarzania estrów difenylowych kwasów 1-izotiocyjanoaralkilofosfonowych.
Wynalazek został bliżej przedstawiony we wzorach strukturalnych oraz w przykładach jego realizacji.
P r z y k ł a d 1
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-metanofosfonowego związek o wzorze 2.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 516 mg (1,5 mmola, M=344,14 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-metanofosfonowego i rozpuszcza się w 10 cm3 N,N-dimetyIoformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 0,91 ml (10eq, 15 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 1,04 ml (4eq, 6 mmoli, M=129,24 g/mol , d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 40 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 853 mg (1,5eq, 2,25 mmola, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 40 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do 3 mieszaniny reakcyjnej dodaje się 20 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie 33 z 20 cm3 toluenu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 30 cm3 3 toluenu i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 33 cm3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconego roztworu chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie heksan : octan etylu, 1:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu heksan : octan etylu, 1:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 393 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjanometanofosfonowego z wydajnością 86% w postaci żółtawego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C14H12NO3PS Masa cząsteczkowa 305,29 g/mol
Rf (heksan : octan etylu, 1:1(v/v)): 0,64
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 8,88 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm], J [Hz]): 7,42 - 7,19 (m, 10H, Ar-H), 4,09 (d, J = 13,4 Hz, 2H, CH2V)
Widmo masowe (ESI, m/z); teoretyczna/znaleziona 306,0354/306,0354 [M+H]+
P r z y k ł a d 2
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(metylo)metanofosfonowego o wzorze 3.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 716 mg (2 mmole, M=358,17 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(metylo)metanofosfonowego i rozpuszcza się w 10 cm3 N,N-dimetyIoformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 1,81 ml (15eq, 30 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 1,41 ml (4eq, 8 mmoli, M=129,24 g/mol, d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 40 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1140 mg (1,5eq, 3 mmole, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 40 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 20 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 20 cm3 tolu3 enu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 30 cm3 toluenu 3 i i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się
PL 216 473 B1 cm3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconego roztworu chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 1:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy: octan etylu, 1:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 498 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(metylo)metanofosfonowego z wydajnością 78% w postaci żółtawego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C15H14NO3PS Masa cząsteczkowa 319,32 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 1:1(v/v)): 0,60
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 12.33 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm], J [Hz]): 7.46 - 7.08 (m, 10H, Ar-H), 4.28 - 4.16 (m, 1H,
CHP), 1.77 (dd, J = 17.6, 8.9 Hz, 3H, CH3)
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 320,0510/320,0511 [M+H]+
P r z y k ł a d 3
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(etylo)metanofosfonowego o wzorze 4.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 744 mg (2 mmole, M=372,19 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(etylo)metanofosfonowego i rozpuszcza się w 10 cm3 N,N-dimetyIoformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 1,45 ml (12eq, 24 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 2,11 ml (6eq, 12 mmoli, M=129,24 g/mol , d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 40 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1140 mg (1,5eq, 3 mmole, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 40 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie 3 do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 20 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie 33 z 20 cm3 toluenu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 30 cm3 3 toluenu i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 33 cm3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconego roztworu chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 592 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(etylo)metanofosfonowego z wydajnością 89% w postaci żółtego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C16H16NO3PS Masa cząsteczkowa 333,34 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v)): 0,31
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]); 11.62 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.42 - 6.77 (m, 10H, Ar-H), 4.11 - 4.00 (m, 1H,
CHP), 2.29 - 2.07 (m, 1H, CHA), 2.07 - 2.01 (m, 1H, CHB), 1.21 (dd,J=7.7, 7.0 Hz, 3H, CH3).
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 334,0667/334,0643 [M+H]+
P r z y k ł a d 4
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(propylo)metanofosfonowego o wzorze 5.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 965 mg (2,5 mmola, M=386,22 g/mol) bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(propylo)metanofosfonowego i rozpuszcza się w 15 3 cm3 N,N-dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 2,27 ml (15eq, 37,5 mmola, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 1,74 ml (4eq, 10 mmoli, M=129,24 g/mol , d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 30 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1420 mg (1,5eq, 3,75 mmoli, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mie3 szaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 33 cm3 toluenu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 30 cm3 3 toluenu i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje 33 się 30 cm3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconego roztworu chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluPL 216 473 B1 entu eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v) w efekcie uzyskuje się 702 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(propylo)metanofosfonowego z wydajnością 81% w postaci bezbarwnego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C17H18NO3PS Masa cząsteczkowa 347,37 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v)): 0,61
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 11,86 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.45 - 7.02 (m, 10H, Ar-H), 4.29 - 3.98 (m, 1H,
CHP), 2.13-1.94 (m, 2H, CH2), 1.86 - 1.64 (m, 1H, CHA 1.63 - 1.43 (m, 1H, CHB), 1.00 (t, J= 7.4 Hz, 3H, CH3)
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 348,0823/348,0814 [M+H]+
P r z y k ł a d 5
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(butylo)metanofosfonowego o wzorze 6.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 1000 mg (2,5 mmola, M=400,25 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(butylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 1,51 ml (10eq, 25 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) oraz 2,61 ml (6eq, 15 mmoli, M=129,24 g/mol, d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 25 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1420 mg (1,5eq, 3,75 mmoli, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 25 minut 3 w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odpa3 rowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 toluenu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozo33 stały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. 33
Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 40 cm3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v) w efekcie uzyskuje się 650 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(butylo)metanofosfonowego z wydajnością 72% w postaci żółtego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C18H20NO3PS Masa cząsteczkowa 361,40 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v)): 0,63
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 11,28 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]); 7.46 - 6.67 (m,10H, Ar-H), 4.19 - 4.06 (m, 1H, C HP),
2.16 - 1.90 (m, 2H, CH3CH2), 1.76 - 1.58 (m, 1H, CHA) 1.58 - 1.30 (m, 3H, CHB, CH3CH2CH2), 0.94 (t, J = 7.2 Hz, 3H, CH3).
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 362,0980/362,0974 [M+H]+
P r z y k ł a d 6
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(pentylo)metanofosfonowego o wzorze 7.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 818 mg (2 mmola, M=414,27 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(pentylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 1,21 ml (10eq, 20 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 1,41 ml (4eq, 8 mmoli, M=129,24 g/mol , d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 40 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1140 mg (1,5eq, 3 mmole, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 tolu3 enu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu 33 i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 40 cm3 3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v) w efekcie uzyskuje się 630 mg estru difenylowego kwasu 1-izo-tiocyjano(pentylo)metanofosfonowego z wydajnością 84% w postaci bezbarwnego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C19H22NO3PS Masa cząsteczkowa 375,42 g/mol
PL 216 473 B1
Rf (eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v)): 0,67
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 11,85 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.46 - 7.06 (m, 10H, Ar-H), 4.19 - 4.07 (m, 1H,
CHP), 2.20 - 1.89 (m, 2H, CHPCH2CH2), 1-81 - 1.41 (m, 3H, CHA, CH3CH2CH2), 1.41-1.22 (m, 3H, CHB, CH3CH2), 0.89 (t, J = 9.0 Hz, 3H, CH3).
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 398,0956/398,0999 [M+Na]+
P r z y k ł a d 7
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(nonylo)metanofosfonowego o wzorze 8.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 705 mg (1,5 mmola, M=470,38 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(nonylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 0,91 ml (10eq, 15 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 1,04 ml (4eq, 6 mmoli, M=129,24 g/mol , d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 30 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 853 mg (1,5eq, 2,25 mmola, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 tolu3 enu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu 33 i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 40 cm3 3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 581 mg estru difenyIowego kwasu 1-izo-tiocyjano(nonylo)metanofosfonowego z wydajnością 90% w postaci bezbarwnego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C23H30NO3PS Masa cząsteczkowa 431,53 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v)): 0,79
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 11,31 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.53 - 7.05 (m, 10H, Ar-H), 4.13 (m, 1H, CHP),
2.18 - 1.85 (m, 2H, CHAHB), 1.78 - 1.39 (m, 4H, CH3CH2CH2), 1.41 - 1.19 (m, 10H,
CH3CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2), 0.89 (t, J = 9 Hz, 3H, CH3)
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 454,1582/454,1596 [M+Na]+
P r z y k ł a d 8
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(izo-propylo)metanofosfonowego o wzorze 9.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 1351 mg (3,5 mmola, M=386,22 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(izo-propylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 2,12 ml (10eq, 35 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 2,42 ml (4eq, 14 mmoli, M=129,24 g/mol, d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 25 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 2980 mg (1,5eq, 7,8 mmola, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 25 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 tolu3 enu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu 33 i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 40 cm3 3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 995 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(izo-propylo)metanofosfonowego z wydajnością 82% w postaci żółtawego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C17H18NO3PS Masa cząsteczkowa 347,37 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v)): 0,36
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]); 11,15 (s)
PL 216 473 B1
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.44 - 7.09 (m,10H, Ar-H), 4.05 (dd, J = 15.6, 4.1
Hz, 1H, CHP), 2.64 - 2.42 (m, 1H, CHPCH), 1.22 (d, J = 7.1 Hz, 6H, 2xCH3)
Widmo masowe (ESI, m/z): teroretyczna/znaleziona 348,0823/348,0826 [M+H]+
P r z y k ł a d 9
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(sec-butylo)metanofosfonowego o wzorze 10.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 1200 mg (3mmole, M=400,25 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(5ec-butylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 20 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 2,35 ml (13eq, 39 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 3,10 ml (6eq, 18 mmoli, M=129,24 g/mol, d=0,742 g/ml)
N,N-diizopropyloetyIoaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 25 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1720 mg (1,5eq, 4,5 mmola, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 tolu3 enu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu 33 i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 40 cm3 3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 833 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(sec-butylo)metanofosfonowego z wydajnością 77% w postaci żółtego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C18H20NO3PS Masa cząsteczkowa 361,39 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v)): 0,46
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 11,26 (s, 1P, 64%), 11,71 (s, 1P, 36%)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.42 - 7.11 (m,10H, Ar-H), 4.14 (dd, J= 16.0, 4.0
Hz, 1H, CHP), 2.33 - 2,18 (m, 1H, CHA), 1.64 - 1,46 (m, 1H, CHB), 1.52 - 1.36 (m, 1H, CH), 1.21 (d, J 6.8 Hz, 3H, CHCH3), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 3H, CH2CH3)
Widmo masowe (ESI): 362,09798/362,10067 [M+H]+
P r z y k ł a d 10
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(izo-butylo)metanofosfonowego o wzorze 11.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się się 1600 mg (4mmole, M=400,25 g/mol) bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(izo-butylo)metanofosfonowego i rozpusz3 cza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 2,41 ml (10eq, 40 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 2,76 ml (4eq, 16 mmoli, M=129,24 g/mol, d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 25 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 2290 mg (1,5eq, 6 mmoli, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie 3 do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie 3 z 30 cm3 toluenu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się 33 w 40 cm3 toluenu i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie 33 ekstrahuje się 40 cm3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 1200 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(izo-butylo)metanofosfonowego z wydajnością 83% w postaci żółtego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C18H20NO3PS Masa cząsteczkowa 361,39 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 2:1 (v/v)): 0,70 Widmo 31 P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 12,25 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.42 - 7.00 (m,10H, Ar-H), 4.42 - 3.96 (m, 1H,
CHP), 2.12 - 1.88 (m, 2H, CHA, CH), 1.87 - 1.73 (m, 1H, CHB), 1.03 (d, J = 6.4 Hz, 3H, CH3), 0.94 (d, J = 6.0 Hz, 3H, CH3)
PL 216 473 B1
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczne/znalezione 362,09798/362,10358 [M+H]+
P r z y k ł a d 11
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(2-metylotioetylo)metanofosfonowego o wzorze 12.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 627 mg (1,5 mmola, M=418,28 g/mol) bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(2-metylotioetylo)metanofosfonowego 3 i rozpuszcza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 0,91 ml (10eq, 15 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 1,04 ml (4eq, 6 mmoli,
M=129,24 g/mol , d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się
853 mg (1,5eq, 2,25 mmola, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 40 minut w temperatu3 rze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparo3 wuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 toluenu powtarza się dwukrotnie, a następnie 3 pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu i przenosi się do rozdzielacza o objętości 33
100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 40 cm3 wody destylowanej, a następnie 3 dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 420 mg estru difenylowego kwasu 1-izo-tiocyjano-(2-metylotioetylo)metanofosfonowego z wydajnością 74% w postaci klarownego, żółtawego oleju. Wzór sumaryczny C17H18NO3PS2 Masa cząsteczkowa 379,43 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v)): 0,48
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 11,15 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.45 - 7.14 (m,10H, Ar-H), 4.63 - 4.33 (m, 1H,
CHP), 2.92 - 2.77 (m, 1H, CHA 2.75 - 2.59 (m, 1H, CHB), 2.40 - 2.21 (m, 2H, CH2), 2.10 (s, 3H, CH3) Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 402,03634/402,03688 [M+Na]+
P r z y k ł a d 12
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(fenylo)metanofosfonowego o wzorze 13.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 1050 mg (2,5 mmola, M=420,24 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(fenylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 1,51 ml (10eq, 25 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 1,74 ml (4eq, 10 mmoli, M=129,24 g/mol, d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 30 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1420 mg (1,5eq, 3,75 mmoli, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 tolu3 enu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu 33 i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 40 cm3 3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie heksan : octan etylu, 3:2(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu heksan : octan etylu, 3:2(v/v) w efekcie uzyskuje się 543 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano(fenylo)metanofosfonowego z wydajnością 57% w postaci brązowawego oleju. Wzór sumaryczny C20H16NO3PS Masa cząsteczkowa 381,38 g/mol
Rf (heksan : octan etylu, 3:2(v/v)): 0,65
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 8,18 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.62 - 6.75 (m, 15H, Ar-H), 5.36 (d, J= 18.5 Hz, 1H,
CHP)
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 382,0667/382,0687 [M+H]+
PL 216 473 B1
P r z y k ł a d 13
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(benzylo)metanofosfonowego o wzorze 14.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 868 mg (2 mmole, M=434,26 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(benzylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 1,21 ml (10eq, 20 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 1,41 ml (4eq, 8 mmoli, M=129,24 g/mol , d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyIoaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 40 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1140 mg (1,5eq, 3 mmole, M=379,3 g/mol) heksafluoro fosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 tolu3 enu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu 3 i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3 Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 33 cm3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v) w efekcie uzyskuje się 695 mg estru difenylowego kwasu 1-izotio-cyjano-(benzylo)metanofosfonowego z wydajnością 88% w postaci bezbarwnego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C21H18NO3PS Masa cząsteczkowa 395,41 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v)): 0,63
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]); 11,00 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.48 - 6.68 (m, 15H, Ar-H), 4.46 - 4.23 (m, 1H,
CHP), 3.54 - 3.40 (m, 1H, CHA), 3.28 - 3.12 (m, 1H, CHB)
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 418,0643/418,0660 [M+Na]+
P r z y k ł a d 14
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(2-fenyloetylo)metanofosfonowego o wzorze 15.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 1120 mg (2,5 mmola, M=448,29 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(fenyloetylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 2,26 ml (15eq, 37,5 mmola, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 1,74 ml (4eq, 10 mmoli, M=129,24 g/mol, d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 30 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1420 mg (1,5eq, 3,75 mmoli, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 toluenu 3 powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu i prze33 nosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 40 cm3 3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 808 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(2-fenyloetylo)metanofosfonowego z wydajnością 79% w postaci klarownego oleju. Wzór sumaryczny C22 H20NO3PS Masa cząsteczkowa 409,44 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v)): 0,36
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 11,71 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.42 - 6.69 (m, 15H, Ar-H), 4.21 - 3.95 (m, 1H,
CHP), 3.21 - 2.93 (m, 1H, CHA) 2.93 - 2.68 (m, 1H, CHB), 2.57 - 2.20 (m, 2H, CH2)
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 410,0980/410,0978 [M+H]+
PL 216 473 B1
P r z y k ł a d 15
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(2-naftylo)metanofosfonowego o wzorze 16.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 1880 mg (4 mmole, M=470,29 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(2-naftylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 2,42 ml (10eq, 40 mmola, M=76,14 g/mol, d=1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 2,79 ml (4eq, 16 mmola, M=129,24 g/mol, d=0,742 g/ml) diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 30 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 2280 mg (1,5eq, 6 mmoli, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reak33 cyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 toluenu 3 powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu i prze33 nosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 40 cm3 3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 1450 mg estru difenylowego kwasu 1-izo-tiocyjano-(2-naftylo)metanofosfonowego z wydajności 84% w postaci pomarańczowego, krystalicznego ciała stałego. Wzór sumaryczny C24H18NO3PS Masa cząsteczkowa 431,44 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v)): 0,48
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]); 8,09 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 8.09 - 6.87 (m, 17H, Ar-H), 5.53 (d, J= 18.5 Hz, 1H,
CHP)
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 454,0643/454,0627 [M+Na]+
P r z y k ł a d 16
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(2-metoksyfenylo)metanofosfonowego o wzorze 17.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 1350 mg (3 mmole, M=450,26 g/mol) bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(2-metoksyfenylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 3 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 1,82 ml (10eq, 30 mmola, M=76,14 g/mol, d=1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 2,1 ml (4eq, 12 mmola, M=129,24 g/mol, d=0,742 g/ml) diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 30 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1700 mg (1,5eq, 4,5 mmoli, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 tolu3 enu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu 33 i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 40 cm3 3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie heksan : octan etylu, 3:2(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu heksan : octan etylu, 3:2(v/v) w efekcie uzyskuje się 1070 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(2-metoksyfenylo)metanofosfonowego o z wydajnością 87% w postaci żółtego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C21H18NO4PS Masa cząsteczkowa 411,47 g/mol
Rf (heksan : octan etylu, 3:2(v/v)): 0,63
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7,81 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.73 - 6.86 (m, 14H, Ar-H), 5.99 (d, J = 18,8 Hz,
1H, CHP), 3,82 (s, 3H, CH3)
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 412,0772/412,0764 [M+H]+
PL 216 473 B1
P r z y k ł a d 17
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(4-metoksyfenylo)metanofosfonowego o wzorze 18.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 1575 mg (3,5 mmole, M=450,26 g/mol) bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(4-metoksyfenylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 3 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 2,11 ml (10eq, 35 mmola,
M=76,14 g/mol, d=1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 2,44 ml (4eq, 14 mmola, M= 129,24 g/mol, d=0,742 g/ml) diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 30 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1990 mg (1,5eq, 5,25 mmoli,
M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mie3 szaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie 33 z 30 cm3 toluenu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 3 toluenu i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje 33 się 40 cm3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie heksan : octan etylu, 3:2(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu heksan : octan etylu, 3:2(v/v) w efekcie uzyskuje się 1200 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(4-meto-ksyfenylo)metanofosfonowego z wydajnością 82% w postaci pomarańczowego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C21H18NO4PS Masa cząsteczkowa 411,47 g/mol
Rf (heksan : octan etylu, 3:2(v/v)): 0,40
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 8,39 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]); 7.59 - 6.65 (m, 14H, Ar-H), 5.28 (d, J = 18.0 Hz,
1H, CHP), 3.82 (s, 3H, CH3)
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 412,0772/412,0786 [M+H]+
P r z y k ł a d 18
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(3,4-dimetoksyfenylo)metanofosfonowego o wzorze 19.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 1680 mg (3,5 mmola, M=480,29 g/mol) bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(3,4-dimetoksyfenylo)metanofosfonowego i roz3 puszcza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 2,12 ml (10eq, 35 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 3,63 ml (6eq, 21 mmoli, M=129,24 g/mol , d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 20 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 2980 mg (1,5eq, 7,8 mmola, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 25 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym 3 etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odpa3 rowanie z 30 cm3 toluenu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się 33 w 40 cm3 toluenu i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie 33 ekstrahuje się 40 cm3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie octan etylu : eter naftowy, 2:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu octan etylu : eter naftowy, 2:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 1200 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(3,4-dimetoksyfenyIo)metanofosfonowego z wydajnością 77% w postaci żółtawego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C22H20NO5PS Masa cząsteczkowa 441,44 g/mol Rf (Octan etylu : eter naftowy, 2:1(v/v)): 0,60 Widmo 31 P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 8,36 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]); 7.41 - 6.80 (m, 13H, Ar-H), 5.27 (d, J = 18.2 Hz,
1H, CHP), 3.90 (s, 3H, CH3), 3.84 (s, 3H, CH3)
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 464,0698/464,0715 [M+Na]+
PL 216 473 B1
P r z y k ł a d 19
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(2,3-dimetoksyfenylo)metanofosfonowego o wzorze 20.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 1680 mg (3,5 mmola, M=480,29 g/mol) bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(2,3-dimetoksyfenylo)metanofosfonowego i roz3 puszcza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 2,12 ml (10eq, 35 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 2,42 ml (4eq, 14 mmoli, M=129,24 g/mol , d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 20 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 2980 mg (1,5eq, 7,8 mmola, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 25 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym 3 etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odpa3 rowanie z 30 cm3 toluenu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się 33 w 40 cm3 toluenu i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie 33 ekstrahuje się 40 cm3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 1190 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(2,3-dimetoksyfenylo)metanofosfonowego z wydajnością 73% w postaci żółtawego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C22H20NO5PS Masa cząsteczkowa 441,44 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v)): 0,52
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 8,62 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.38 - 6.82 (m, 13H, Ar-H), 5.93 (d, J = 18.6 Hz,
1H, CHP), 3.92 (s, 3H, CH3), 3.88 (s, 3H, CH3)
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 464,0698/464,0689 [M+Na]+
P r z y k ł a d 20
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(3,5-dimetoksyfenylo)metanofosfonowego o wzorze 21.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 1680 mg (3,5 mmola, M=480,29 g/mol) bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(3,5-dimetoksyfenylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 3 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 2,12 ml (10eq, 35 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 2,42 ml (4eq, 14 mmoli, M=129,24 g/mol, d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 25 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 2980 mg (1,5eq, 7,8 mmola, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do 3 mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie 3 z 30 cm3 toluenu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się 33 w 40 cm3 toluenu i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie eks33 trahuje się 40 cm3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 1260 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(3,5-dimetoksyfenylo)metanofosfonowego z wydajnością 82% w postaci żółtego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C22H20NO5PS Masa cząsteczkowa 441,44 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 2:1(v/v)): 0,33
Widmo 31 P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7,46 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]); 7.46 - 6.23 (m, 13H, Ar-H), 5.27 (d, J = 18.8 Hz,
1H, CHP), 3.76 (s, 6H, 2CH3)
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 464,0698/464,0715 [M+Na]+
PL 216 473 B1
P r z y k ł a d 21
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(4-nitrofenylo)metanofosfonowego o wzorze 22.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 930 mg (2 mmole, M=465,23 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(4-nitrofenylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 1,21 ml (10eq, 20 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 1,41 ml (4eq, 8 mmoli, M=129,24 g/mol, d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 40 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1140 mg (1,5eq, 3 mmole, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 tolu3 enu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu 33 i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 40 cm3 3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 1:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 1:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 570 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(4-nitrofenylo)metanofosfonowego z wydajnością 67% w postaci brązowawego oleju. Wzór sumaryczny C20H15N2O5PS Masa cząsteczkowa 426,38 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 1:1(v/v)): 0,58
Widmo 31 P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]); 6,76 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 8.49 - 6.36 (m, 14H, Ar-H), 5.51 (d, J= 19.7 Hz, 1H,
CHP)
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 427,0518/427,0516 [M+H]+
P r z y k ł a d 22
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(3-nitrofenylo)metanofosfonowego o wzorze 23.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 930 mg (2 mmole, M=465,23 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(3-nitrofenylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 1,21 ml (10eq, 20 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 1,41 ml (4eq, 8 mmoli, M=129,24 g/mol , d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 40 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1140 mg (1,5eq, 3 mmole, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reak33 cyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 toluenu 3 powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu i prze33 nosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 40 cm3 3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 1:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 1:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 604 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(3-nitrofenylo)metanofosfonowego z wydajnością 71% w postaci brązowawego oleju. Wzór sumaryczny C20H15N2O5PS Masa cząsteczkowa 426,38 g/mol
Rf (eter naftowy ; octan etylu, 1:1(v/v)): 0,65
Widmo 31 P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 6,80 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 8.48 - 6.73 (m, 14H, Ar-H), 5.51 (d, J= 18.9 Hz, 1H,
CHP)
Widmo masowe (ESI, m/z); teoretyczna/znaleziona 449,0337/449,0313 [M+Na]+
PL 216 473 B1
P r z y k ł a d 23
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(2-nitrofenylo)metanofosfonowego o wzorze 24.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 930 mg (2 mmole, M=465,23 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(2-nitrofenylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 15 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 1,21 ml (10eq, 20 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 1,41 ml (4eq, 8 mmoli, M=129,24 g/mol , d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 40 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1140 mg (1,5eq, 3 mmole, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 tolu3 enu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu 33 i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 40 cm3 3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 1:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 1:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 680 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(2-nitrofenylo)metanofosfonowego z wydajnością 80% w postaci żółtego, klarownego oleju. Wzór sumaryczny C20H15N2O5PS Masa cząsteczkowa 426,38 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 1:1(v/v)): 0,58
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]); 7,65 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]); 8.15 - 6.98 (m, 14H, Ar-H), 5.06 (d, 1H, CHP).
Widmo masowe (ESI, m/z); teoretyczna/znaleziona 449,0337/449,0339 [M+Na]+
P r z y k ł a d 24
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(4-izo-propylofenylo)metanofosfonowego o wzorze 25.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 1400 mg (3 mmole, M=462,08 g/mol) bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(4-izo-propylofenylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 15 cm dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 2,37 ml (13eq, 39 mmola, M=76,14 g/mol, d=1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 2,62 ml (5eq, 15 mmola, M= 129,24 g/mol, d=0,742 g/ml) diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 30 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1700 mg (1,5eq, 4,5 mmoli, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do 3 mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie 33 z 30 cm3 toluenu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 3 toluenu i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje 33 się 40 cm3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 1015 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(4-izo-propylofenylo)metanofosfonowego z wydajnością 80% w postaci żółtego oleju. Wzór sumaryczny C23H22NO3PS Masa cząsteczkowa 423,46 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 3:1(v/v)): 0,37
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.80 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3. δ [ppm]): 7.54 - 6.87 (m, 14H, Ar-H), 5.32 (d, J =18.2 Hz, 1H, CHP), 3.05 -2.80 (m, 1H, CH), 1,25 (d, 6H, 2CH3).
Widmo masowe (ESI, m/z); teoretyczna/znaleziona 446,09557/446,09222 [M+Na]+
P r z y k ł a d 25
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(4-chlorofenylo)fosfonowego o wzorze 26.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 1135 mg (2,5 mmola, M=454,68 g/mol) 3 bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(4-chlorofenylo)fosfonowego i rozpuszcza 15 cm3
PL 216 473 B1 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 1,51 ml (10eq, 25 mmoli, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 1,74 ml (4eq, 10 mmoli, M=129,24 g/mol , d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 30 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1420 mg (1,5eq, 3,75 mmoli, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym etapie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparowanie z 30 cm3 tolu3 enu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się w 40 cm3 toluenu 3 i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie ekstrahuje się 33 cm3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v) w efekcie uzyskuje się 890 mg estru difenylowego kwasu 1-izo-tiocyjano-(4-chlorofenylo)fosfonowego z wydajnością 86% w postaci żółtego oleju. Wzór sumaryczny C20H15CINO3PS Masa cząsteczkowa 415,83 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 1:2(v/v)): 0,67 Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7,67 (s)
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.57 - 6.88 (m, 14H, Ar-H), 5.33 (d, J= 18.6 Hz, 1H,
CHP)
Widmo masowe (ESI, m/z); teoretyczna/znaleziona 416,02770/416,02516 [M+H]+
P r z y k ł a d 26
Sposób wytwarzania estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(4-fluorofenylo)metanofosfonowego o wzorze 27.
3
Do kolby gruszkowej o pojemności 100 cm3 odważa się 1100 mg (2,5 mmola, M=438,23 g/mol) bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-amino-(4-fluorofenylo)metanofosfonowego i rozpuszcza 3 cm3 dimetyloformamidu (DMF). Następnie do kolby powoli dodaje się 1,66 ml (11eq, 27,5 mmola, M=76,14 g/mol, d = 1,26 g/ml) disiarczku węgla oraz 1,74 ml (4eq, 10 mmoli, M=129,24 g/mol , d=0,742 g/ml) N,N-diizopropyloetyloaminy (DIPEA). Reakcję prowadzi się przez 30 minut w temperaturze pokojowej na mieszadle magnetycznym. Następnie do kolby dodaje się 1420 mg (1,5eq, 3,75 mmoli, M=379,3 g/mol) heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3- tetrametylouroniowego (HBTU) i reakcję prowadzi się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej. W kolejnym eta3 pie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 30 cm3 toluenu i odparowuje na wyparce rotacyjnej. Odparo3 wanie z 30 cm3 toluenu powtarza się dwukrotnie, a następnie pozostały w kolbie olej rozpuszcza się 33 w 40 cm3 toluenu i przenosi się do rozdzielacza o objętości 100 cm3. Warstwę organiczną trzykrotnie 33 ekstrahuje się 40 cm3 wody destylowanej, a następnie dwukrotnie 30 cm3 nasyconym roztworem chlorku sodu. Warstwę organiczną suszy się następnie nad bezwodnym siarczanem magnezu, sączy i lotne składniki usuwa się na wyparce rotacyjnej. Pozostały olej rozpuszcza się w mieszaninie eter naftowy : octan etylu, 1:1(v/v) i przeprowadza się chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym z użyciem eluentu eter naftowy : octan etylu, 1:1(v/v) w efekcie uzyskuje się 878 mg estru difenylowego kwasu 1-izotiocyjano-(4-fluorofenylo)metanofosfonowego z wydajnością 88% w postaci pomarańczowego oleju. Wzór sumaryczny C20H15FNO3PS Masa cząsteczkowa 399,38 g/mol
Rf (eter naftowy : octan etylu, 1:1(v/v)): 0,68
Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7,92 (d, 1P, JPF = 5,45 [Hz])
Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 7.65 - 6.71 (m, 14H, Ar-H), 5.34 (d, J= 18.3 Hz, 1H,
CHP)
Widmo masowe (ESI, m/z): teoretyczna/znaleziona 422,03920/422,03581 [M+Na]+
P r z y k ł a d 27
Badanie aktywności antyproliferacyjnej estrów difenylowych kwasów 1-izotiocyjano-aralkilofosfonowych z wykorzystaniem linii nowotworowych ludzkiego raka płuc A549, gruczołu sutkowego MCF-7, jelita grubego LoVo oraz jelita grubego opornej na doksorubicynę LoVo/DX.
Roztwory wyjściowe testowanych związków przygotowane zostały jako 50 mM roztwory w dimetylosulfotlenku (DMSO). Linie komórkowe hodowane były w warunkach in vitro w odpowiednich dla danej linii medium hodowlanym: A549 - medium OptiMEM + RPMI 1640 + GlutaMAX medium suplementowane 5% surowicy wołowej, MCF-7 - medium Eagle z dodatkiem 2 mM roztworem L-glutaminy, 1,0 mM roztworem pirogronianu sodu, 10% surowicy wolowej i 0,8 mg/L insuliny, LoVo i LoVo/DX 16
PL 216 473 B1
Opti-MEM + RPMI 1640 suplementowane 2 mM roztworem L-glutaminy, 1,5 g/L roztworem wodorowęglanu sodu, 4,5 g/L glukozy, 1,0 mM pirogronianu sodu oraz 5% surowicą wołową i 100 μg/L doxorubicyny (tylko w medium dla linii LoVo DX). Ponadto wszystkie media hodowlane zawierały 100 jednostek/ml penicyliny i 100 μg/ml streptomycyny. Do odklejenia komórek od płytek hodowlanych używano 0,25% roztworu Trypsyna-EDTA. Następnie policzone komórki posiano na płytki 96-dołkowe w ilości 10 komórek/dołek (100 μL zawiesiny komórkowej 10 komórek/mL na dołek). Po 24 godzinnej inkubacji na płytki nanoszono roztwory testowanych związków przygotowywane poprzez rozcieńczanie wyjściowego roztworu w medium hodowlanym OR. Robocze stężenia wynosiły 100 μΜ, 50 μΜ, 25 μΜ, 12,5 μΜ dając ostatecznie stężenia 50 μΜ, 25 μΜ, 12,5 μΜ, 6,25 μΜ w dołkach testowych. Każde stężenie naniesiono w trzech powtórzeniach. Płytki były następnie inkubowane przez kolejne 72 godziny w inkubatorze (wilgotność >90%, temperatura 37°C, 5% stężenie CO2). Po tym czasie wykonano test SRB; do każdego z dołków dodano po 50 μL 50% roztworu kwasu trichlorooctowego i płytki inkubowano przez 1 godzinę w temperaturze 4°C. Następnie płytki wypłukano pod bieżącą wodą, osuszono i do każdego z dołków dodano po 50 μL 0,4%) roztworu sulforodaminy B w 1% kwasie octowym i inkubowano w ciemności przez 30 minut. Po tym czasie płytki wypłukano w 1% kwasie octowym, osuszono i do każdego z dołków dodano po 150 μL 10 mM roztworu Tris w wodzie dejonizowanej. Po 30 minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej odczytano absorbancję przy długości fali 540 nm. Analizę wyników wykonano poprzez porównanie absorbancji dołków traktowanych związkami w odpowiednich stężenia do dołków kontrolnych (nie traktowanych związkami). Następnie określono krzywą zależności procenta zahamowania proliferacji od stężenia i na jego podstawie określono wartość IC50 (stężenie powodujące zahamowanie wzrostu komórek w 50%). Test dla każdego ze związków powtórzony został co najmniej trzykrotnie.
| IC50 (μΜ) | ||||
| Wzór | A549 | MCF-7 | LoVo | LoVoDX |
| 2 | 34,5 | 26,7 | 10,9 | 11,2 |
| 3 | 47,8 | 28,4 | 10,4 | 10,9 |
| 4 | 48,1 | 33,1 | 11,2 | 13,3 |
| 5 | 49,1 | 35,5 | 9,5 | 11,5 |
| 6 | 46,8 | 44,9 | 10,2 | 9,9 |
| 7 | 67,1 | 66,2 | 12,7 | 54,2 |
| 8 | 72,9 | 69,1 | 70,1 | 71,6 |
| 9 | 34,1 | 59,7 | 12,8 | 15,0 |
| 10 | 37,6 | 13,9 | 9,7 | 11,1 |
| 11 | 38,9 | 52,6 | 9,2 | 11,5 |
| 12 | 73,1 | 54,6 | 9,1 | 10,6 |
| 13 | 14,4 | 14,7 | 8,7 | 7,2 |
| 14 | 18,4 | 15,4 | 9,7 | 9,2 |
| 15 | 34,8 | 78,9 | 17,1 | 12,7 |
| 16 | 17,5 | 77,2 | 21,1 | 7,6 |
| 17 | 16,8 | 75,5 | 14,8 | 7,3 |
| 18 | 18,7 | 77,6 | 11,2 | 7,8 |
| 19 | 18,6 | 68,2 | 40,7 | 7,4 |
| 20 | 21,7 | 74,5 | 23,8 | 8,0 |
| 21 | 17,7 | 73,1 | 11,0 | 7,3 |
| 22 | 66,1 | 66,1 | 75,9 | 69,2 |
| 23 | 80,1 | 80,1 | 70,1 | 48,1 |
| 24 | 97,4 | 99,4 | 98,4 | 99,7 |
| 25 | 45,7 | 54,8 | 55,5 | 19,6 |
| 26 | 46,8 | 52,3 | 10,3 | 11,5 |
| 27 | 44,9 | 32,8 | 8,2 | 10,4 |
PL 216 473 B1
P r z y k ł a d 28
Aktywność inhibitorowa otrzymanych w przykładach 1-26 pochodnych wobec ludzkiej elastazy netrofilowej.
Aktywność biologiczną przebadano pod kątem zdolności do hamowania proteolitycznej aktywności ludzkiej elastazy neutrofilowej. Wszystkie pomiary kinetyki enzymatycznej wykonano przy użyciu czytnika mikropłytek. Badania rozpoczęto od wyznaczania Km dla substratu w warunkach prowadzonych testów (temperatura 37°C, długość fali wzbudzenia 400 nm i emisji 505 nm, czas pomiaru 15 minut). Pomiaru dokonano przy różnych stężeniach substratu w zakresie stężeń od 10 μΜ do 500 μΜ przy stałym stężeniu enzymu 0,0025 U/ml (~4,5 nM). Wartość Km wynosiła 125 μΜ w podanych warunkach. Pomiary aktywności inhibitorowej wykonano przy różnych stężeniach inhibitorów w zakresie stężeń od 100 μΜ do 8,8 μΜ. W badaniach wykorzystano zsyntetyzowany przez autorów patentu substrat MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-AFC. Końcowe stężenie substratu wynosiło 40 μΜ. Wszystkie pomiary przeprowadzono w buforze o składzie: 0.1 M HEPES, 0.5 M NaCI, 0.03% Triton X-100 (pH 7.5). Do seryjnie rozcieńczonego badanego związku, w ilości 50 μΐ w każdym dołku, dodano 50 μΐ substratu i inkubowano tak przygotowaną płytkę w 37°C przez 30 minut. Po inkubacji reakcja została zainicjowana przez dodanie 100 μΐ enzymu. Płytkę umieszczono w spektrofluorymetrze i przeprowadzono pomiar. Na podstawie uzyskanych danych wyznaczono dla każdego rozcieńczenia badanego związku stałą pseudo pierwszego rzędu kobs.
[P] = vst + -η--1 [1 — e(_fc°6st:)] kobs
V1 - prędkość początkowa
Vs - prędkość w stanie ustalonym kobs - stała pseudo pierwszego rzędu [P] - stężenie produktów t - czas
Następnie wyznaczono stałą drugiego rzędu kinact/KI ^obs
Kinact/KI - stała drugiego rzędu [S] - stężenie substratów
KM - stała Michaelis-Menten
-1 -1
Uzyskane wyniki przedstawiono poniżej (wartości k2/Ki [M-1s-1]).
| Wzór | k2/K [M-1s-1] | Wzór | k2/K [M-1s-1] |
| 2 | 408 | 10 | 50 |
| 3 | 210 | 11 | 141 |
| 4 | 111 | 12 | 186 |
| 5 | 489 | 13 | 50 |
| 6 | 287 | 14 | 505 |
| 7 | 261 | 15 | 407 |
| 8 | 50 | 16-27 | 50 |
| 9 | 233 |
PL 216 473 B1
P r z y k ł a d 29
Aktywność inhibitorowa otrzymanych w przykładach 1-26 pochodnych wobec chymotrypsyny. Aktywność biologiczną przebadano pod kątem zdolności do hamowania proteolitycznej aktywności ludzkiej elastazy neutrofilowej. Wszystkie pomiary kinetyki enzymatycznej wykonano przy użyciu czytnika mikropłytek. Badania rozpoczęto od wyznaczania Km dla substratu w warunkach prowadzonych testów (temperatura 37°C, długość fali wzbudzenia 355 nm i emisji 460 nm, czas pomiaru 15 minut). Pomiaru dokonano przy różnych stężeniach substratu w zakresie stężeń od 5 μΜ do 500 μΜ przy stałym stężeniu enzymu 1,25 nM. Wartość Km wynosiła 125 μΜ w podanych warunkach. Pomiary aktywności inhibitorowej wykonano przy różnych stężeniach inhibitorów w zakresie stężeń od 100 μΜ do 2,2 μΜ. W badaniach wykorzystano zsyntetyzowany przez autorów patentu substrat MeO-SucAla-Ala-Pro-Phe-ACC. Końcowe stężenie substratu wynosiło 10 μΜ. Do każdej studzienki odmierzono 100 μΙ roztworu enzymu, 50 μΐ roztworu substratu i 50 μΐ roztworu inhibitora. Wszystkie pomiary przeprowadzono w buforze o składzie: 0.1 M HEPES, 0.5 M NaCl, 0.03% Triton X-100 (pH 7.5). Do seryjnie rozcieńczonego badanego związku, w ilości 50 μΐ w każdym dołku, dodano 50 μΐ substratu i inkubowano tak przygotowaną płytkę w 37°C przez 15 minut. Po inkubacji reakcja została zainicjowana przez dodanie 100 μΐ enzymu. Płytkę umieszczono w spektrofluorymetrze i przeprowadzono pomiar. Na podstawie uzyskanych danych wyznaczono dla każdego rozcieńczenia badanego związku stałą pseudo pierwszego rzędu kobs.
[P] = vst + A-- [1 — e(_fc°6st:)] kobs
V1 - prędkość początkowa
Vs - prędkość w stanie ustalonym kobs - stała pseudo pierwszego rzędu [P] - stężenie produktów t - czas
Następnie wyznaczono stałą drugiego rzędu kinact/KI wzorem vobs
Kinact/KI - stała drugiego rzędu
[S] - stężenie substratów
KM - stała Michaelis-Menten
-1 -1
Uzyskane wyniki przedstawiono poniżej (wartości k2/Ki [M-1s-1]).
| Wzór | k2/Ki [M1s1] | Wzór | k2/K [M1s1] |
| 2 | 125 | 15 | 215 |
| 3 | 60 | 16 | 580 |
| 4 | 50 | 17 | 100 |
| 5 | 50 | 18 | 1326 |
| 6 | 125 | 19 | 864 |
| 7 | 229 | 20 | 79 |
| 8 | 50 | 21 | 471 |
| 9 | 60 | 22 | 50 |
| 10 | 80 | 23 | 516 |
| 11 | 127 | 24 | 50 |
| 12 | 202 | 25 | 329 |
| 13 | 340 | 26 | 60 |
| 14 | 304 | 27 | 880 |
PL 216 473 B1
Claims (3)
1. Estry difenylowe pochodne kwasów 1-izotiocyjano-metanofosfonowych o wzorze ogólnym 1, w którym R1 oznacza wodór lub podstawniki: metylowy, etylowy, propylowy, izopropylowy, butylowy, izo-butylowy, sec-butylowy, pentylowy, nonylowy, 2-metylotioetylowy, fenylowy, benzylowy, fenyletylowy, 2-naftylowy, 2-metoksyfenylowy, 4-metoksyfenylowy, 3,4-dimetoksyfenylowy, 3,5-dimetoksyfenylowy, 2,3-dimetoksyfenylowy, 2-nitrofenylowy, 3-nitrofenylowy, 4-nitrofenylowy, 4-fluorofenylowy,
4-chlorofenylowy lub 4-izopropylofenylowy.
2. Sposób otrzymywania estrów difenylowych pochodnych kwasów 1-izotiocyjano-metanofosfonowych o wzorze ogólnym 1, w którym R1 oznacza wodór lub podstawniki: metylowy, etylowy, propylowy, izo-propylowy, butylowy, izo-butylowy, sec-butylowy, pentylowy, nonylowy, 2-metylotioetylowy, fenylowy, benzylowy, fenyletylowy, 2-naftylowy, 2-metoksyfenylowy, 4-metoksyfenylowy, 3,4-dimetoksyfenylowy, 3,5-dimetoksyfenylowy, 2,3-dimetoksyfenylowy, 2-nitrofenylowy, 3-nitrofenylowy, 4-nitrofenylowy, 4-fluorofenylowy, 4-chlorofenylowy lub 4-izo-propylofenylowy, znamiennym tym, że bromowodorek estru difenylowego pochodnej kwasu 1-izotiocyjano-metanofosfonowego poddaje się reakcji z 10-15 ekwiwalentami molowymi disiarczku węgla w obecności 4-6 ekwiwalentów molowych N,N-diizopropyloetyloaminy w N,N-dimetyIoformamidzie w temperaturze pokojowej, a następnie po
20-40 minutach powstały produkt pośredni rozkłada się do izotiocyjanianu, przy czym w reakcji używa się 1,5 równoważnika molowego heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazolo-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowego.
3. Zastosowanie estrów difenylowych pochodnych kwasów 1-izotiocyjano-metanofosfonowych o wzorze ogólnym 1, w którym R1 oznacza wodór lub podstawniki: metylowy, etylowy, propylowy, izopropylowy, butylowy, izo-butylowy, sec-butylowy, pentylowy, nonylowy, 2-metylotioetylowy, fenylowy, benzylowy, fenyletylowy, 2-naftylowy, 2-metoksyfenylowy, 4-metoksyfenylowy, 3,4-dimetoksyfenylowy, 3,5-dimetoksyfenylowy, 2,3-dimetoksyfenylowy, 2-nitrofenylowy, 3-nitrofenylowy, 4-nitrofenylowy, 4-fluorofenylowy, 4-chlorofenylowy lub 4-izo-propylofenylowy w preparacie farmaceutycznym przeznaczonym do leczenia nowotworów płuc, piersi, jelita grubego ze szczególnym uwzględnieniem nowotworów opornych na doksorubicynę.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL399050A PL216473B1 (pl) | 2012-04-30 | 2012-04-30 | Estry difenylowe pochodne kwasów 1-izotiocyjano-metanofosfonowych, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL399050A PL216473B1 (pl) | 2012-04-30 | 2012-04-30 | Estry difenylowe pochodne kwasów 1-izotiocyjano-metanofosfonowych, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL399050A1 PL399050A1 (pl) | 2012-12-03 |
| PL216473B1 true PL216473B1 (pl) | 2014-04-30 |
Family
ID=47264248
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL399050A PL216473B1 (pl) | 2012-04-30 | 2012-04-30 | Estry difenylowe pochodne kwasów 1-izotiocyjano-metanofosfonowych, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL216473B1 (pl) |
-
2012
- 2012-04-30 PL PL399050A patent/PL216473B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL399050A1 (pl) | 2012-12-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Duan et al. | Design, synthesis and antiproliferative activity studies of novel 1, 2, 3-triazole–dithiocarbamate–urea hybrids | |
| Deutsch et al. | Synthesis of congeners and prodrugs. 3. Water-soluble prodrugs of taxol with potent antitumor activity | |
| Manjula et al. | Synthesis and antitumor activity of optically active thiourea and their 2-aminobenzothiazole derivatives: A novel class of anticancer agents | |
| Hafez et al. | Synthesis of substituted thieno [2, 3-d] pyrimidine-2, 4-dithiones and their S-glycoside analogues as potential antiviral and antibacterial agents | |
| Artico et al. | 3, 4-Dihydro-2-alkoxy-6-benzyl-4-oxopyrimidines (DABOs): a new class of specific inhibitors of human immunodeficiency virus type 1 | |
| KR20010023937A (ko) | 신규 택산 유도체 | |
| Xu et al. | Synthesis and preliminary biological evaluation of 1, 2, 3-triazole-Jaspine B hybrids as potential cytotoxic agents | |
| Tan et al. | Synthesis and anticancer activities of thieno [3, 2-d] pyrimidines as novel HDAC inhibitors | |
| EP3978488A1 (en) | Zinc chelating compounds for use in the treatment of bacterial infection | |
| Li et al. | Synthesis and anti-tumor activity of nitrogen-containing derivatives of the natural product diphyllin | |
| Mathew et al. | Novel pyridopyrazine and pyrimidothiazine derivatives as FtsZ inhibitors | |
| Manta et al. | Unsaturated fluoro-ketopyranosyl nucleosides: Synthesis and biological evaluation of 3-fluoro-4-keto-β-D-glucopyranosyl derivatives of N4-benzoyl cytosine and N6-benzoyl adenine | |
| Idowu et al. | Design, synthesis and antitumor properties of glycosylated antitumor ether lipid (GAEL)-chlorambucil-hybrids | |
| Liu et al. | Phosphamide-containing diphenylpyrimidine analogues (PA-DPPYs) as potent focal adhesion kinase (FAK) inhibitors with enhanced activity against pancreatic cancer cell lines | |
| Dobrikov et al. | Enantiopure antituberculosis candidates synthesized from (−)-fenchone | |
| Davis et al. | Synthesis and biological evaluation of galactofuranosyl alkyl thioglycosides as inhibitors of mycobacteria | |
| Adeyemi et al. | Synthesis and antimalarial activity of N-benzylated (N-arylcarbamoyl) alkylphosphonic acid derivatives | |
| Holmgard et al. | Coumarin–azasugar–benzyl conjugates as non-neurotoxic dual inhibitors of butyrylcholinesterase and cancer cell growth | |
| CN102180845B (zh) | 含丁烯内酯结构的苄氨基二硫代甲酸酯类化合物、其制备方法及其用途 | |
| Yamada et al. | Preparation and characterization of novel 4-bromo-3, 4-dimethyl-1-phenyl-2-phospholene 1-oxide and the analogous phosphorus heterocycles or phospha sugars | |
| Kubota et al. | Synthesis of novel 4′-C-methyl-1′, 3′-dioxolane pyrimidine nucleosides and evaluation of its anti-HIV-1 activity | |
| EP3789384A1 (en) | Formamide compound, preparation method therefor and application thereof | |
| Turkmen et al. | Synthesis of sulfanilamide derivatives and investigation of in vitro inhibitory activities and antimicrobial and physical properties | |
| Ma et al. | Synthesis, anti-HIV and anti-oxidant activities of caffeoyl 5, 6-anhydroquinic acid derivatives | |
| Daumar et al. | Design, synthesis and in vitro drug release investigation of new potential 5-FU prodrugs |