PL211520B1 - Sposób wytwarzania środka hamującego krzepliwość krwi - Google Patents
Sposób wytwarzania środka hamującego krzepliwość krwiInfo
- Publication number
- PL211520B1 PL211520B1 PL380474A PL38047406A PL211520B1 PL 211520 B1 PL211520 B1 PL 211520B1 PL 380474 A PL380474 A PL 380474A PL 38047406 A PL38047406 A PL 38047406A PL 211520 B1 PL211520 B1 PL 211520B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- plant
- sodium
- potassium
- extraction
- solution
- Prior art date
Links
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 title claims description 73
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 266
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 claims description 222
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 204
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 192
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 173
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 156
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 142
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 133
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 110
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 74
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 71
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 66
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 61
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 58
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 49
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 46
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 45
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 43
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 40
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 37
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 36
- DMEGYFMYUHOHGS-UHFFFAOYSA-N heptamethylene Natural products C1CCCCCC1 DMEGYFMYUHOHGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 31
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical compound CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 29
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 27
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- DIOQZVSQGTUSAI-UHFFFAOYSA-N decane Chemical compound CCCCCCCCCC DIOQZVSQGTUSAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 21
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- BKIMMITUMNQMOS-UHFFFAOYSA-N nonane Chemical compound CCCCCCCCC BKIMMITUMNQMOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N Cyclopentane Chemical compound C1CCCC1 RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- POLCUAVZOMRGSN-UHFFFAOYSA-N dipropyl ether Chemical compound CCCOCCC POLCUAVZOMRGSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 18
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 1-Octanol Chemical compound CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- XXROGKLTLUQVRX-UHFFFAOYSA-N allyl alcohol Chemical compound OCC=C XXROGKLTLUQVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 15
- BBMCTIGTTCKYKF-UHFFFAOYSA-N 1-heptanol Chemical compound CCCCCCCO BBMCTIGTTCKYKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 14
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 14
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 13
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- CYTYCFOTNPOANT-UHFFFAOYSA-N Perchloroethylene Chemical group ClC(Cl)=C(Cl)Cl CYTYCFOTNPOANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- NBRKLOOSMBRFMH-UHFFFAOYSA-N tert-butyl chloride Chemical compound CC(C)(C)Cl NBRKLOOSMBRFMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229950011008 tetrachloroethylene Drugs 0.000 claims description 12
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 claims description 11
- WJTCGQSWYFHTAC-UHFFFAOYSA-N cyclooctane Chemical compound C1CCCCCCC1 WJTCGQSWYFHTAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000004914 cyclooctane Substances 0.000 claims description 11
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 11
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical compound CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N Trichloroethylene Chemical group ClC=C(Cl)Cl XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 claims description 10
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical class [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 10
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 10
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000008096 xylene Substances 0.000 claims description 10
- 240000000073 Achillea millefolium Species 0.000 claims description 9
- 235000007754 Achillea millefolium Nutrition 0.000 claims description 9
- 244000308505 Filipendula ulmaria Species 0.000 claims description 9
- 235000016622 Filipendula ulmaria Nutrition 0.000 claims description 9
- 244000307700 Fragaria vesca Species 0.000 claims description 9
- 244000042664 Matricaria chamomilla Species 0.000 claims description 9
- 235000007232 Matricaria chamomilla Nutrition 0.000 claims description 9
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N octane Chemical compound CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 9
- 235000009917 Crataegus X brevipes Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000013204 Crataegus X haemacarpa Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000009685 Crataegus X maligna Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000009444 Crataegus X rubrocarnea Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000009486 Crataegus bullatus Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000017181 Crataegus chrysocarpa Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000009682 Crataegus limnophila Nutrition 0.000 claims description 8
- 240000000171 Crataegus monogyna Species 0.000 claims description 8
- 235000004423 Crataegus monogyna Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000002313 Crataegus paludosa Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000009840 Crataegus x incaedua Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000004280 Sodium formate Substances 0.000 claims description 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 claims description 8
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 8
- 235000014134 echinacea Nutrition 0.000 claims description 8
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 claims description 8
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 claims description 8
- TVDSBUOJIPERQY-UHFFFAOYSA-N prop-2-yn-1-ol Chemical compound OCC#C TVDSBUOJIPERQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- HLBBKKJFGFRGMU-UHFFFAOYSA-M sodium formate Chemical compound [Na+].[O-]C=O HLBBKKJFGFRGMU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 235000019254 sodium formate Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 8
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 7
- 244000133098 Echinacea angustifolia Species 0.000 claims description 7
- 235000016970 Fragaria moschata Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000014828 Fragaria vesca ssp. americana Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000012660 Fragaria virginiana Nutrition 0.000 claims description 7
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- ABBQHOQBGMUPJH-UHFFFAOYSA-M Sodium salicylate Chemical compound [Na+].OC1=CC=CC=C1C([O-])=O ABBQHOQBGMUPJH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 240000000377 Tussilago farfara Species 0.000 claims description 7
- 235000004869 Tussilago farfara Nutrition 0.000 claims description 7
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 7
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000019524 disodium tartrate Nutrition 0.000 claims description 7
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 7
- WFIZEGIEIOHZCP-UHFFFAOYSA-M potassium formate Chemical compound [K+].[O-]C=O WFIZEGIEIOHZCP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 claims description 7
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 claims description 7
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 7
- LJCNRYVRMXRIQR-OLXYHTOASA-L potassium sodium L-tartrate Chemical compound [Na+].[K+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O LJCNRYVRMXRIQR-OLXYHTOASA-L 0.000 claims description 7
- HELHAJAZNSDZJO-OLXYHTOASA-L sodium L-tartrate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O HELHAJAZNSDZJO-OLXYHTOASA-L 0.000 claims description 7
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 claims description 7
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 claims description 7
- ZNCPFRVNHGOPAG-UHFFFAOYSA-L sodium oxalate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C([O-])=O ZNCPFRVNHGOPAG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 229940039790 sodium oxalate Drugs 0.000 claims description 7
- 239000001476 sodium potassium tartrate Substances 0.000 claims description 7
- 235000011006 sodium potassium tartrate Nutrition 0.000 claims description 7
- 229960004025 sodium salicylate Drugs 0.000 claims description 7
- 239000001433 sodium tartrate Substances 0.000 claims description 7
- 244000007021 Prunus avium Species 0.000 claims description 6
- 235000010401 Prunus avium Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000013992 Prunus padus Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000013647 Prunus pensylvanica Nutrition 0.000 claims description 6
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 235000016693 dipotassium tartrate Nutrition 0.000 claims description 6
- IRXRGVFLQOSHOH-UHFFFAOYSA-L dipotassium;oxalate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C(=O)C([O-])=O IRXRGVFLQOSHOH-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- AVTYONGGKAJVTE-OLXYHTOASA-L potassium L-tartrate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O AVTYONGGKAJVTE-OLXYHTOASA-L 0.000 claims description 6
- 239000001472 potassium tartrate Substances 0.000 claims description 6
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 6
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 6
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims description 6
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 244000307697 Agrimonia eupatoria Species 0.000 claims description 5
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 claims description 5
- 229960002635 potassium citrate Drugs 0.000 claims description 5
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 235000011082 potassium citrates Nutrition 0.000 claims description 5
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 claims description 5
- 241000086254 Arnica montana Species 0.000 claims description 4
- 241000220222 Rosaceae Species 0.000 claims description 4
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 4
- 229960004109 potassium acetate Drugs 0.000 claims description 4
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229960004249 sodium acetate Drugs 0.000 claims description 4
- 241001092459 Rubus Species 0.000 claims description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 claims description 3
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 claims description 3
- 235000000125 common agrimony Nutrition 0.000 claims description 3
- KRQUFUKTQHISJB-YYADALCUSA-N 2-[(E)-N-[2-(4-chlorophenoxy)propoxy]-C-propylcarbonimidoyl]-3-hydroxy-5-(thian-3-yl)cyclohex-2-en-1-one Chemical compound CCC\C(=N/OCC(C)OC1=CC=C(Cl)C=C1)C1=C(O)CC(CC1=O)C1CCCSC1 KRQUFUKTQHISJB-YYADALCUSA-N 0.000 claims description 2
- 235000016993 Agrimonia Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 claims description 2
- 244000074881 Conyza canadensis Species 0.000 claims description 2
- 235000004385 Conyza canadensis Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000016623 Fragaria vesca Nutrition 0.000 claims description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 206010037549 Purpura Diseases 0.000 claims description 2
- 241001672981 Purpura Species 0.000 claims description 2
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000607059 Solidago Species 0.000 claims description 2
- 241000405119 Virga Species 0.000 claims description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 claims description 2
- -1 filter Substances 0.000 claims description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 2
- 229960003975 potassium Drugs 0.000 claims description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 229960001790 sodium citrate Drugs 0.000 claims description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims 1
- 241000122938 Strongylus vulgaris Species 0.000 claims 1
- 241000249864 Tussilago Species 0.000 claims 1
- HRYZWHHZPQKTII-UHFFFAOYSA-N chloroethane Chemical compound CCCl HRYZWHHZPQKTII-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 229960003750 ethyl chloride Drugs 0.000 claims 1
- QCAWEPFNJXQPAN-UHFFFAOYSA-N methoxyfenozide Chemical compound COC1=CC=CC(C(=O)NN(C(=O)C=2C=C(C)C=C(C)C=2)C(C)(C)C)=C1C QCAWEPFNJXQPAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 claims 1
- 229960001860 salicylate Drugs 0.000 claims 1
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M salicylate Chemical compound OC1=CC=CC=C1C([O-])=O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 254
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 132
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 132
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 128
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 125
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 125
- 239000012223 aqueous fraction Substances 0.000 description 123
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 51
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 33
- 235000011837 pasties Nutrition 0.000 description 26
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 21
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 17
- 239000002045 hydroalcoholic fraction Substances 0.000 description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 13
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 10
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 10
- 230000008384 membrane barrier Effects 0.000 description 9
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 9
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 9
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 9
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 7
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 6
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 6
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 244000078534 Vaccinium myrtillus Species 0.000 description 6
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 6
- 235000021029 blackberry Nutrition 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 6
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 244000197975 Solidago virgaurea Species 0.000 description 5
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 5
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 5
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 5
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000000914 Solidago virgaurea Nutrition 0.000 description 4
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 4
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 4
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 4
- 239000000306 component Substances 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 4
- 230000006623 intrinsic pathway Effects 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000208983 Arnica Species 0.000 description 3
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- KTUQUZJOVNIKNZ-UHFFFAOYSA-N butan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CCCCO KTUQUZJOVNIKNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 3
- 239000001120 potassium sulphate Substances 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- LZDKZFUFMNSQCJ-UHFFFAOYSA-N 1,2-diethoxyethane Chemical compound CCOCCOCC LZDKZFUFMNSQCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001494 2-propynyl group Chemical group [H]C#CC([H])([H])* 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000233513 Brassica perviridis Species 0.000 description 2
- 235000008744 Brassica perviridis Nutrition 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000007866 Chamaemelum nobile Nutrition 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 2
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 2
- 206010014522 Embolism venous Diseases 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000736199 Paeonia Species 0.000 description 2
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 2
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 2
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 2
- 125000000746 allylic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000006624 extrinsic pathway Effects 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 2
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 208000004043 venous thromboembolism Diseases 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 description 1
- 240000008100 Brassica rapa Species 0.000 description 1
- 235000000540 Brassica rapa subsp rapa Nutrition 0.000 description 1
- 241001247435 Cerbera Species 0.000 description 1
- 240000004530 Echinacea purpurea Species 0.000 description 1
- 241001512723 Ecklonia Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 241000227647 Fucus vesiculosus Species 0.000 description 1
- 241001466453 Laminaria Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000123968 Paeonia anomala Species 0.000 description 1
- 241000124445 Paeonia lutea Species 0.000 description 1
- 235000006484 Paeonia officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 241001408429 Parameria Species 0.000 description 1
- 240000007685 Porana volubilis Species 0.000 description 1
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 1
- 241000206572 Rhodophyta Species 0.000 description 1
- 235000003657 Solidago canadensis Nutrition 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 208000035472 Zoonoses Diseases 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229950005499 carbon tetrachloride Drugs 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 1
- 230000007247 enzymatic mechanism Effects 0.000 description 1
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 1
- 238000003810 ethyl acetate extraction Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 1
- 239000002644 phorbol ester Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- QTHSIKGSKJMXJU-UHFFFAOYSA-N potassium 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid nitrate Chemical compound C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O.[N+](=O)([O-])[O-].[K+] QTHSIKGSKJMXJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009424 thromboembolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- 206010048282 zoonosis Diseases 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania środka hamującego krzepliwość krwi z surowców roślinnych.
Preparaty powszechnie używane, np. w profilaktyce i leczeniu żylnej choroby zakrzepowo-zatorowej, nadające się do hamowania krzepnięcia krwi, mają właściwości tzw. antykoagulacyjne. Stosowane są one u pacjentów ze zwiększonym ryzykiem powstania w sposób niekontrolowany w naczyniach krwionośnych zakrzepów, które prowadzą do żylnej choroby zakrzepowo-zatorowej kończyn dolnych, do zatorów pooperacyjnych, do zatorów u pacjentów z ryzykiem zatoru tętnicy płucnej, prowadzącego w efekcie do zawału serca oraz zatoru tętnicy głowowej, prowadzącego do udaru mózgu. Środki te przede wszystkim nie dopuszczają do powstawania zakrzepów poprzez hamowanie czynników krzepnięcia krwi, bądź upośledzanie funkcji płytek.
Zwykle tuż po przerwaniu ciągłości naczynia krwionośnego rozpoczyna się proces krzepnięcia krwi regulowany szeregiem enzymów, działających w kaskadzie enzymatycznej. Enzymy, zawarte w osoczu krwi, zaktywowane w wyniku uszkodzenia naczynia krwionoś nego, aktywują nastę pne, a te z kolei następne i poprzednie, nieaktywne, proces ten przebiega lawinowo. Jego celem jest niedopuszczenie do utraty nadmiernej ilości krwi, spowodowanie, aby straty były jak najmniejsze. Mechanizm krzepnięcia uruchamiany jest dwoma niezależnymi torami, zachodzą dwa różne procesy enzymatyczne. Po przerwaniu ciągłości naczynia, z uszkodzonej ściany wydzielane są pierwsze aktywatory krzepnięcia - zapoczątkowują one zewnątrzpochodny tor krzepnięcia krwi, tzn. pierwszy proces enzymatyczny. Składniki aktywowane w przepływającej w naczyniu krwi, uwalniane również z wnętrza płytek krwi, zapoczątkowują tor wewnątrzpochodny, tzn. drugi mechanizm enzymatyczny. Oba te procesy zbiegają się powodując aktywację czynnika krzepnięcia Xa, który powoduje przekształcenie się białka - fibrynogenu w fibrynę. Cząsteczki fibryny łącząc się ze sobą tworzą gęstą sieć lepkich nici, w których uwięzione zostają pozostałe składniki krwi. Tak powstaje zakrzep. Preparaty heparynowe przede wszystkim hamują proces krzepnięcia zachodzący torem wewnątrzpochodnym. W warunkach prawidłowej hemostazy zakrzepy nie powinny powstawać wewnątrz szczelnych, nieuszkodzonych naczyń krwionośnych. Jeżeli jednak dochodzi do tworzenia zakrzepu, mamy do czynienia ze stanem chorobowym, określanym mianem zakrzepicy. Powikłania zakrzepowe, spowodowane zachwianiem mechanizmów krzepnięcia krwi, stanowią istotny problem epidemiologiczny na świecie.
W tkankach roś linnych wystę pują substancje heparynopodobne, na przykł ad fukoidyna, znana jako środek przeciwzakrzepowy, mający jak wynika z publikacji Shimaoka M., Ikeda M., Taneaka N., lida T., Yoshiya I., Honda T., Fucoidin, a potent inhibitor of leukocyte rolling, prevents neutrophil influx into phorbol-ester-induced inflammatory sites in rabbit lungs, Am. J. Respir. Care Med., 1996, 153, 307-311, również właściwości przeciwinfekcyjne. Występuje ona w algach morskich, takich jak Fucus vesiculosus, Ecklonia curome oraz Laminaria brasiliensis. Karaginiany również będące substancjami heparyno-podobnymi, pozyskiwane są na skalę przemysłową na drodze ekstrakcji wodnej czerwonych alg morskich z klasy Rhodophyceae i wykorzystywane też jako dodatek do żywności, środek farmaceutyczny oraz komponent kosmetyczny, o czym piszą Kennedy J. F., White C. A., Bioactives carbohydrates, Ellis Harwood, Ltd., New York, 1983. Substancje o właściwościach antykoagulacyjnych wyizolowane zostały również z roślin wyższych, jak Filipendula ulmaria, Porana volubilis, Lisiea cerbera, Parameria laevigate oraz z pewnych odmian piwonii rosnących w Azji Środkowej (Paeonia anomala, Paeonia suffructicosa i Paeonia lutea).
Wyizolowane preparaty roślinne wykazują porównywalną aktywność, co preparaty handlowe, produkowane z materiału zwierzęcego. W przyszłości preparaty te mogą stać się roślinnym substytutem leków pochodzenia zwierzęcego, hamujących krzepnięcie krwi ludzkiej.
Znany jest, z polskiego zgłoszenia patentowego nr P. 351 697, sposób otrzymywania z części naziemnych przymiotna kanadyjskiego frakcji aktywnej, preparatu hamującego krzepliwość krwi ludzkiej, zawierającego substancje o charakterze polifenolowo-polisacharydowym. Sposób ten polega na sporządzaniu ekstraktu wodnego lub wodno-etanolowego o stężeniu 65%, z którego wydziela się frakcję aktywną na kolumnie wypełnionej celulozą i przemywa mieszaniną wody i kwasu organicznego, korzystnie mieszaniną kwasu octowego i wody w proporcji 1:50, a następnie mieszaniną wody i ketonu, korzystnie mieszaniną acetonu i wody w proporcji 1:50 i na końcu wodnym roztworem alkalicznym, korzystnie wodnym roztworem amoniaku, 0,1M. Proces wydzielania frakcji aktywnej prowadzi się też na kolumnie wypełnionej modyfikowanym dekstranem i przemywa alkoholem, a następnie mieszaniną wody i alkoholu.
PL 211 520 B1
Sposób otrzymywania środka hamującego krzepliwość krwi, o właściwościach antykoagulacyjnych według wynalazku polega na wykorzystaniu jako surowca zawierającego cukry oraz substancje fenolowe, rośliny wyższej, wybranej z rodziny roślin różowatych (Rosaceae), takiej jak wiązówka błotna (Filipendula ulmaria), czeremcha zwyczajna (Cerasus padu), poziomka pospolita (Fragaria vesca), krwiściąg lekarski (Sanguisohra officinalis), głóg dwuszyjkowy (Cartaegus laevigata), jeżyna fałdowana (Rubus plicalus), rzepik pospolity (Agrimonia eupatoriu) lub rośliny wybranej z rodziny roślin astrowatych (Asleraceae), obejmującej krwawnik pospolity (Achillea millefolium), jeżówkę purpurową (Echinacea purpura), przymiotno kanadyjskie (Conyza canadensis), arnikę górską (Arnica montana), nawłoć pospolitą (Solidago virga aura), rumianek pospolity (Matricaria chamomilla) oraz podbiał pospolity (Tussilago fanfara).
Zgodnie z wynalazkiem wykorzystuje się części rośliny, takie jak korzenie, ziele, liście, kwiaty, kwiatostany, owoce, nasiona lub ich mieszanki, korzystnie zebrane między miesiącem kwietniem a listopadem, świeże lub wysuszone, które poddaje się ekstrakcji wodą i/lub alkoholem, przy czym stosuje się alkohol niższy wybrany z grupy obejmującej metanol, etanol, 1-propanol, 2-propanol, 2-butanol, tertbutanol, izobutanol, alkohol allilowy, alkohol propargilowy i/lub alkohol wielowodorotlenowy, taki jak glikol etylenowy, glikol propylenowy, glikol dietylenowy, glicerol i/lub roztworem soli, wybranej z grupy obejmującej chlorek sodu, chlorek potasu, siarczan sodu, siarczan potasu, azotan sodu, azotan potasu, azotan amonu, fosforan sodu, fosforan potasu, węglan sodu, węglan potasu, mrówczan sodu, mrówczan potasu, mrówczan amonu, octan sodu, octan potasu, octan amonu, szczawian sodu, szczawian potasu, salicylan sodu, winian disodowy, winian sodowo-potasowy, winian dipotasowy, cytrynian sodu, cytrynian potasu i/lub wodnym roztworem alkalicznym, takim jak wodorotlenek sodu, wodorotlenek potasu, wodorotlenek wapnia, amoniak, hydrazyna, mocznik lub ich mieszaniny z solami, zobojętniając następnie do pH = 6,5-7,5 za pomocą wodnych roztworów kwasów, wybranych z grupy obejmującej kwas solny, kwas siarkowy, kwas azotowy i kwas fosforowy. Ekstrakcję prowadzi się w nieograniczonym czasie, w przedziale temperatur 5°C-170°C, ewentualnie mieszając. W przypadku każdej z 14 wyżej wymienionych roślin, materiał roślinny w postaci rozdrobnionej, ekstrahuje się w proporcji 0,20 do 0,25 części masowych materiału roślinnego na 10-20 części masowych rozpuszczalnika, roztworu lub mieszaniny rozpuszczalników i/lub roztworów zmieszanych w proporcjach części masowych składników, w zakresie od 100:1 do 1:50. Proces ekstrakcji powtarza się 1-10 razy, a otrzymane ekstrakty w razie konieczności zoboję tnia się do pH = 6,5-7,5 i zatęża.
W drugim etapie procesu, substancje o aktywnoś ci antykoagulacyjnej wobec krwi wyodrę bnia się z ekstraktów roślinnych na drodze ekstrakcji rozpuszczalnikami lub ich mieszaninami w układach dwufazowych, w proporcjach faz 1:1, w których pierwszą fazę stanowi uzyskany w pierwszym etapie ekstrakt roślinny, a drugą fazę stanowi rozpuszczalnik lub mieszanina rozpuszczalników organicznych, takich jak pentan, heksan, heptan, oktan, nonan, dekan, cyklopentan, cykloheksan, cykloheptan, cyklooktan, toluen, ksylen, eter dietylowy, eter dipropylowy, eter diizopropylowy, eter dibutylowy, chloroform, chlorek metylenu, dichloroetan, trichloroetylen, tetrachloroetylen, chlorek tertbutylu, 1-pentanol. izopentanol, heksanol, heptanol, oktanol, octan etylu. Proces ekstrakcji prowadzi się korzystnie w nieograniczonym czasie, w przedziale temperatur 15°C-150°C, mieszając, odrzucając po każdej ekstrakcji fazę rozpuszczalnika organicznego, powtarzając ten proces 1-10 razy. Następnie, uzyskany po ekstrakcji roztwór środka o właściwościach antykoagulacyjnych względem krwi suszy się do konsystencji proszku.
W kolejnym etapie sposobu, substancje o aktywności antykoagulacyjnej wobec krwi, wyodrębnia się z fazy stałej ekstraktu roślinnego w procesie ekstrakcji rozpuszczalnikami i/lub ich mieszaninami z fazy stałej ekstraktu. W tym celu do roślinnego ekstraktu w postaci stałej, dodaje się rozpuszczalnik lub mieszaninę rozpuszczalników organicznych, takich jak alkohol z grupy obejmującej metanol, etanol, 1-propanol, 2-propanol, 2-butanol, tertbutanol, izobutanol, alkohol allilowy, alkohol propargilowy, 1-pentanol, izopentanol, heksanol, heptanol, oktanol i/lub alkohol wielowodorotlenowy, taki jak glikol etylenowy, glikol propylenowy, glikol dietylenowy, glicerol lub ich mieszaniny i/lub pentan, heksan, heptan, oktan, nonan, dekan, cyklopentan, cykloheksan, cykloheptan, cyklooktan, toluen, ksylen, eter dietylowy, eter dipropylowy, eter diizopropylowy, eter dibutylowy, chloroform, chlorek metylenu, dichloroetan, trichloroetylen, tetrachloroetylen, chlorek tertbutylu, octan etylu lub ich mieszaniny, a ekstrakcję prowadzi się w nieograniczonym czasie, w przedziale temperatur 15°C-150°C, przy czym proporcja w częściach masowych użytego rozpuszczalnika w stosunku do ilości surowca roślinnego, użytego na początku całego procesu, zawiera się w zakresie od 1:1 do 20:1. Proces ekstrakcji prowadzi się w przedziale temperatur 15°C-150°C, mieszając, odrzucając po każdej ekstrakcji fazę
PL 211 520 B1 rozpuszczalnika organicznego, powtarzając ten etap 1-50. Pozostały po ekstrakcji nierozpuszczalny w rozpuszczalnikach organicznych osad oddziela się od cieczy, a nastę pnie suszy i otrzymuje środek o wł a ś ciwoś ciach antykoagulacyjnych względem krwi.
Korzystnie, substancje o aktywności antykoagulacyjnej wobec krwi, wyodrębnia się od pozostałych składników ekstraktu poprzez separację aktywnych substancji makrocząsteczkowych o masie > 5000 Da. Sposób ten polega na tym, że ekstrakt roślinny rozpuszcza się w wodzie i/lub w roztworze soli z grupy obejmującej chlorek sodu, chlorek potasu, siarczan sodu, siarczan potasu, azotan sodu, azotan potasu, azotan amonu, fosforan sodu, fosforan potasu, węglan sodu, węglan potasu, mrówczan sodu, mrówczan potasu, mrówczan amonu, octan sodu, octan potasu, octan amonu, szczawian sodu, szczawian potasu, salicylan sodu, winian disodowy, winian sodowo-potasowy, winian dipotasowy, cytrynian sodu, cytrynian potasu lub ich mieszaniny i/lub w roztworze alkalicznym takim jak wodorotlenek sodu, wodorotlenek potasu, wodorotlenek wapnia, amoniak, hydrazyna, mocznik lub ich mieszaniny i otrzymany roztwór ekstraktu roślinnego poddaje się procesowi sączenia przez barierę, która nie przepuszcza składników ekstraktu roślinnego o masie cząsteczkowej > 5000 Da w postaci sita molekularnego, sączka, membrany lub worka dializacyjnego. Otrzymany środek o właściwościach antykoagulacyjnych względem krwi, którego składnikami są substancje makrocząsteczkowe o masie > 5000 Da, suszy się do konsystencji proszku. Każdy otrzymany sposobem według wynalazku środek roślinny posiada właściwości antykoagulacyjne względem krwi. Produkt otrzymany w wyniku stosowania sposobu według wynalazku stanowi około 0,1-10% suchej masy roślinnej. Środki wyodrębnione sposobem, będącym przedmiotem wynalazku odznaczają się aktywnością biologiczną, podobną do heparyn zwierzęcych, uzyskiwanych z wątroby, jelit lub płuc, które są narządami najbogatszymi w heparynę i które stanowią znane źródło pozyskiwania heparyn do celów terapeutycznych.
Pomiary aktywności środka roślinnego otrzymanego według wynalazku wykonuje na wystandaryzowanym osoczu krwi ludzkiej, in vitro. Przeprowadzane są one dwoma standartowymi metodami: test aktywowanego czasu kefalinowego (APTT - activated partial ihromboplastin lime), polegający na pomiarze czasu krzepnięcia krwi torem wewnątrzpochodnym oraz test czasu protroinbinowego (PT - prothrombin lime), gdzie mierzony jest czas krzepnięcia krwi torem zewnątrzpochodnym. Są to standardowe metody, używane powszechnie w placówkach medycznych do monitorowania stanu zdrowia pacjentów poddawanych kuracji lekami zmniejszającymi krzepliwość krwi. Pomiary te pozwalają na kontrolę ilości podawanych leków, nie dopuszczając do ich przedawkowania oraz kontrolę czasu półtrwania leku w organizmie pacjenta.
Test aktywowanego czasu kefalinowego (APTT): do cytrynianowego osocza krwi ludzkiej, gdzie do 9 cm3 krwi dodaje się 1 cm3 3,8% cytrynianu sodu, odwirowuje 10 minut przy 5 tys. obr./min., a następnie w objętości 0,1 cm3 dodaje się 0,1 cm3 0,2M buforu boranowego oraz 0,1 cm3 kefalin i 0,1 cm3 chlorku wapniowego o stężeniu 25 mM i mierzy się czas krzepnięcia, do momentu pojawienia się białego, włóknistego fibrynowego skrzepu. Czas krzepnięcia osocza ludzkiego dla zdrowego pacjenta torem wewnątrzpochodnym zawiera się w przedziale 45-58 sekund. Aktywność antykoagulacyjną ocenia się w ten sposób, że zamiast 0,1 cm3 buforu boranowego dodaje się 0,1 cm3 roztworu badanego preparatu roślinnego o określonym stężeniu i mierzy się czas powstawania fibrynowego skrzepu. Pomiar ten wykonuje się tylko do 600 sekund. Jeżeli po ich upływie nie zachodzi proces krzepnięcia, uznaje się, że proces krzepnięcia został całkowicie zahamowany.
Test czasu protrombinowego (PT): do cytrynianowego osocza krwi ludzkiej, gdzie do 9 cm3 krwi dodaje się 1 cm3 3,8% cytrynianu sodu, odwirowuje 10 minut przy 5 tys. obr./min., a następnie w objętości 0,1 cm3 dodaje się 0,1 cm3 0,2M buforu boranowego oraz 0,1 cm3 tromboplastyny tkankowej, zmieszanej z 0,1 cm3 chlorku wapnia i mierzy się czas krzepnięcia, aż do momentu pojawienia się białego, włóknistego fibrynowego skrzepu. Czas krzepnięcia osocza ludzkiego dla zdrowego pacjenta torem zewnątrzpochodnym zawiera się w przedziale 11-14 sekund. Aktywność antykoagulacyjną ocenia się w ten sposób, że zamiast 0,1 cm3 buforu boranowego dodaje się 0,1 cm3 roztworu badanego preparatu o określonym stężeniu i mierzy się czas powstawania fibrynowego skrzepu. Pomiar ten wykonuje się tylko do 300 sekund. Jeżeli po ich upływie nie zachodzi proces krzepnięcia, uznaje się, że proces krzepnięcia został całkowicie zahamowany.
Wszystkie badane preparaty roślinne do badań na osoczu krwi ludzkiej przygotowuje się w postaci roztworów o stężeniu wyjściowym w krzepnącym układzie osocza ludzkiego równym 12,5 mg/cm3. Aby ocenić stężenie preparatu, przy którym zanika jego aktywność antykoagulacyjną, przygotowuje się kolejno 2-, 4-, 8-, 16-, 32-, 64- oraz 128-krotne rozcieńczenia wyjściowego roztworu. Za brak akPL 211 520 B1 tywności antykoagulacyjnej badanego preparatu roślinnego uznaje się moment, w którym czas krzepnięcia układu jest zbliżony do czasu kontrolnego.
Z przeprowadzonych badań wynika, że sposób według wynalazku umoż liwia proste wytwarzanie wysoce aktywnych substancji o właściwościach antykoagulacyjnych. z łatwo dostępnych surowców roślinnych. Użycie środków sporządzonych według wynalazku może zlikwidować problem zbyt długiego czasu półtrwania w organizmie pacjenta leków o właściwościach antykoagulacyjnych. Środek według wynalazku posiada potencjalne, praktyczne zastosowanie w lecznictwie, zwłaszcza w leczeniu i profilaktyce stanów zakrzepowo-zatorowych. Stosowane leki heparynowe, w większości produkowane przy dużych nakładach finansowych, niosą za sobą zagrożenie zarażenia chorobami odzwierzęcymi, takimi jak pryszczyca lub BSE. Surowce roślinne, stosowane w sposobie według wynalazku są równie skuteczne, lecz znacznie bardziej bezpieczne i tanie.
Przedmiot wynalazku jest zilustrowany w poniższych przykładach realizacji.
P r z y k ł a d 1
Zbiera się zakwitające części wiązówki błotnej, w okresie od czerwca do sierpnia, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 wody w temperaturze 100°C, przez 5 godzin, jeden raz mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zatęża się do połowy objętości. Do roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 pentanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 36°C, mieszając zawartość naczynia przez 5 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 2-krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 pentanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest eter dietylowy, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 34°C, przez 5 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji eterem dietylowym powtarza się 2-krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając organiczną. Następnie, frakcję wodną poddaje ekstrakcji tetrachlorometanem przez 6 godzin, 2-krotnie, w temperaturze 76°C, mieszając zawartość naczynia. W kolejnym etapie fazę wodną po rozdzieleniu od frakcji rozpuszczalnika organicznego poddaje ekstrakcji 1-pentanolem, w ilości 1000 cm3, przez 4 godziny, 3-krotnie, w temperaturze 130°C, mieszając zawartość naczynia. Frakcję wodną rozdziela się od rozpuszczalnika organicznego i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 12% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Tak otrzymany suchy, w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stał ej, wsypują c go do 300 cm3 1-propanolu i mieszają c zawartość naczynia w temperaturze 15°C przez 2 doby. Nierozpuszczalną w 1-propanolu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją 1-propanolu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 50 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w 1-propanolu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 6% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 100 cm3 wody, poddaje się procesowi dializy. W tym celu roztwór ekstraktu umieszcza się w worku dializacyjnym, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. Napełniony worek umieszcza się w naczyniu z wodą w ilości 3000 cm3, w którym swobodnie pływa. Proces dializy prowadzi się przez 15 dni, mieszając zawartość naczynia, wymieniając wodę w naczyniu, na początku raz na dobę, a po 5 dniach - co 2 doby. Po procesie dializy w worku pozostaje roztwór, który po odparowaniu do sucha do postaci proszku stanowi 1% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | 203,2 | 95,2 | 57,9 | 46,7 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | 72,1 | 26,6 | 16,2 | 12,7 |
PL 211 520 B1
P r z y k ł a d 2
Zbiera się kwiatostany czeremchy zwyczajnej, w okresie od maja do lipca, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 mieszaniny wody z metanolem uż ytych w proporcji 1:1, w temperaturze 80°C, przez 3 godziny, trzy razy. Następnie, frakcję wodno-alkoholową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór. Do roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 heksanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 68°C, mieszając zawartość naczynia przez 7 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodno-alkoholową odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 3-krotnie, dodając do frakcji wodno-alkoholowej kolejną porcję 1000 cm3 heksanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodno-alkoholowej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest eter dipropylowy, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 90°C, przez 6 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji eterem dipropylowym powtarza się 5-krotnie, zachowując frakcję wodno-alkoholową, a odrzucając organiczną. Następnie, frakcję wodno-alkoholową poddaje się ekstrakcji chloroformem przez 8 godzin, 3-krotnie, w temperaturze 62°C, mieszają c zawartość naczynia. W kolejnym etapie fazę wodno-alkoholową po rozdzieleniu od frakcji rozpuszczalnika organicznego poddaje ekstrakcji izopentanolem, w ilości 1000 cm3, przez 6 godzin, 3-krotnie, w temperaturze 130°C, mieszając zawartość naczynia. Frakcję wodną rozdziela się od alkoholu i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 15% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Tak otrzymany suchy, w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 metanolu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w metanolu cz ęść ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją metanolu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 20 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w metanolu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 2.5% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 55,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | 448,5 | 304,8 | 112,2 | 54,4 | 55,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 13,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | 117,3 | 77,4 | 38,5 | 18,1 | 14,2 |
P r z y k ł a d 3
Zbiera się owoce i nasiona głogu dwuszyjkowego, w okresie od września do listopada, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 mieszaniny wody i etanolu uż ytych w proporcji 50:1 w temperaturze 80°C, przez 5 godzin, cztery razy. Nastę pnie, frakcję wodno-alkoholową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór. Do roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 heptanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 98°C, mieszając zawartość naczynia przez 5 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodno-alkoholową odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 4-krotnie, dodając do frakcji wodno-alkoholowej kolejną porcję 1000 cm3 heptanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodno-alkoholowej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest eter diizopropylowy, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 68°C, przez 5 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji eterem diizopropylowym powtarza się 3-krotnie, zachowując frakcję wodno-alkoholową, a odrzucając organiczną. Następnie, frakcję wodno-alkoholową poddaje ekstrakcji chlorkiem metylenu przez 10 godzin, 2-krotnie, w temperaturze 40°C, mieszając zawartość naczynia. W kolejnym etapie fazę wodno-alkoholową po rozdzieleniu od frakcji rozpuszczalnika organicznego poddaje ekstrakcji heksanolem, w ilości 1000 cm3, przez 5 godzin, 2-krotnie, w temperaturze 150°C, mieszają c zawartość naczynia. Frakcję wodną rozdziela
PL 211 520 B1 się od alkoholu i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 25% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Tak otrzymany suchy, w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 1000 cm3 etanolu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 25°C przez 3 doby. Nierozpuszczalną w etanolu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją etanolu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 10 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w etanolu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 5% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 20 cm3 3% roztworu chlorku sodu i poddaje się procesowi sączenia na kolumnie wypełnionej sitami ii; molekularnymi, przepuszczającymi w pierwszej kolejności substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 10000 Da. W procesie sączenia kolumnę eluuje się roztworem 3% chlorku sodu w ilości
2000 cm3, odrzucając pierwszą, małocząsteczkową frakcję. Zbiera się frakcję o masie cząsteczkowej > 10000 Da, która po odparowaniu do sucha do postaci proszku stanowi 0,1% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 58,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | 164,6 | 154,8 | 86,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | 29,8 | 18,8 | 15,0 |
P r z y k ł a d 4
Zbiera się kwiaty, liście i owoce jeżyny fałdowanej, w okresie od maja do sierpnia, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 mieszaniny wody z 1-propanolem, użytych w proporcji 5:1 w temperaturze 100°C, przez 3 godziny, pięć razy, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję alkoholowo-wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór. Do roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 oktanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 125°C, mieszając zawartość naczynia przez 5 godzin. Następnie rozdziela się frakcję alkoholowo-wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 2-krotnie, dodając do frakcji alkoholowo-wodnej kolejną porcję 1000 cm3 oktanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji alkoholowo-wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest eter dibutylowy, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 140°C, przez 6 godzin, mieszając i zawartość naczynia. Proces ekstrakcji eterem dibutylowym powtarza się 4-krotnie, zachowując frakcję alkoholowo-wodną, a odrzucając organiczną. Następnie, frakcję alkoholowo-wodną poddaje ekstrakcji dichloroetanem przez 8 godzin, 4-krotnie, w temperaturze 60°C, mieszając zawartość naczynia. W kolejnym etapie fazę alkoholowo-wodną po rozdzieleniu od frakcji rozpuszczalnika organicznego poddaje ekstrakcji heptanolem, w ilości 1000 cm3, przez 7 godzin, 4-krotnie, w temperaturze 150°C, mieszając zawartość naczynia. Frakcję wodną rozdziela się od alkoholu i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 10% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Tak otrzy3 many ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 50 cm3 10% roztworu chlorku potasu i poddaje się procesowi sączenia na sączku, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej niniejszej niż 5000 Da. W procesie sączenia osad zebrany na sączku przepłukuje się jeszcze 10% roztworem chlorku potasu w ilości 500 cm3. Osad, który stanowią substancje o masie cząsteczkowej > 5000 Da, suszy się otrzymując środek w postaci proszku stanowiącego 1.2% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
PL 211 520 B1
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | 435,5 | 208,7 | 111,1 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 14,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | >138,6 | 38,6 | 20,6 | 16,4 | 14,0 |
P r z y k ł a d 5
Zbiera się kwiatostany i liście rzepiku pospolitego, w okresie od lipca do sierpnia, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 wody z 2-propanolem uż ytych w proporcji 2:1, w temperaturze 85°C, przez 7 godzin, jeden raz. Nastę pnie, frakcję alkoholowo-wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zatęża się do połowy objętości. Do roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 nonanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 100°C przez 10 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 5krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 nonanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest trichloroetylen, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 80°C, przez 6 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji trichloroetylenem powtarza się 10-krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając organiczną. W kolejnym etapie fazę wodną po rozdzieleniu 3 od frakcji rozpuszczalnika organicznego poddaje ekstrakcji oktanolem, w ilości 1000 cm3 przez 5 godzin, 6-krotnie, w temperaturze 150°C, mieszając zawartość naczynia. Frakcję wodną rozdziela się od alkoholu i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 22% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Tak otrzymany suchy, w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 1000 cm3 2-propanolu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 50°C przez 1 dobę. Nierozpuszczalną w 2-propanolu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją 2-propanolu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 15 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w 2-prpoanolu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany ś rodek roślinny stanowi 10% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 54,0 | >600,0 | 402,6 | 206,0 | 119,0 | 78,3 | 57,0 | 50,0 | 53,7 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | >300,0 | 276,6 | 83,2 | 30,8 | 20,7 | 14,6 | 13,2 | 13,0 |
P r z y k ł a d 6
Zbiera się korzenie i ziele krwawnika pospolitego, w okresie od lipca do września, które roz3 drabnia się. Surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 wody i 2-butanolu użytych w proporcji 10:1 w temperaturze 100°C, przez 3 godziny, dziesięć razy, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję alkoholowo-wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany
PL 211 520 B1 suchy, w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 dichloroetanu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w dichloroetanie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją dichloroetanu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 20 porcji dichloroetanu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w dichloroetanie osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 47% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 1000 cm wody i dodaje się 1000 cm3 dekanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 150°C, mieszając zawartość naczynia przez 6 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 5-krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 dekanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest tetrachloroetylen, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 120°C, przez 8 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji tetrachloroetylenem powtarza się 3-krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając organiczną. Następnie, frakcję wodną poddaje ekstrakcji octanem etylu przez 6 godzin, 6-krotnie, w temperaturze 77°C. W kolejnym etapie fazę wodną po rozdzieleniu od frakcji rozpuszczalnika organicznego rozdziela się od rozpuszczalnika i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany ś rodek roś linny stanowi 0,5% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w te ś cie APTT oraz w teś cie PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | >600,0 | >600,0 | >383,2 | >205,5 | 83,0 | 55,0 | 48,0 | 50,8 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,5 | >300,0 | >300,0 | 144,0 | 43,2 | 21,7 | 16,5 | 15,1 | 14,3 |
P r z y k ł a d 7
Zbiera się kwiaty i nasiona jeżówki purpurowej, w okresie od czerwca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 wody i tertbutanolu użytych w proporcji 1:1 w temperaturze 85°C, przez 10 godzin, jeden raz. Następnie, frakcję alkoholowo-wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując 3 roztwór. Do roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 cyklopentanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 45°C, mieszając zawartość naczynia przez 10 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję alkoholowo-wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 6-krotnie, dodając do frakcji alkoholowo-wodnej kolejną porcję 1000 cm3 cyklopentanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji alkoholowo-wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest chlorek tertbutylu, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 50°C, przez 10 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji chlorkiem tertbutylu powtarza się 10-krotnie, zachowując frakcję alkoholowo-wodną, a odrzucając organiczną. Następnie, frakcję alkoholowo-wodną rozdziela się od organicznej pozostałości i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 10% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Tak otrzymany suchy, w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 1000 cm3 2-butanolu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 80°C przez 2 doby. Nierozpuszczalną w 2-butanolu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją 2-butanolu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 10 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w 2-butanolu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 1% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 200 cm3 roztworu siarczanu sodu (5%) i poddaje się procesowi sączenia na membranie nanofiltracyjnej, przepuszczającej substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 8000 Da. Roztwór ekstraktu roślinnego
PL 211 520 B1 umieszcza się w module membranowym i po procesie sączenia przez barierę membrany zbiera się osad pozostały w module membranowym, stanowiący substancje o masie cząsteczkowej > 8000 Da, który po wysuszeniu do postaci proszku stanowi 0,2% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 55,5 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | 419,0 | 124,2 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | 58,0 | 27,1 | 15,8 |
P r z y k ł a d 8
Zbiera się kwiatostany przymiotna kanadyjskiego, w okresie od lipca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 wody i izobutanolu użytych w proporcji 50:1 w temperaturze 100°C, przez 4 godziny, trzy razy, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję alkoholowo-wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do objętości trzy razy mniejszej. Do 3 roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 cykloheksanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 80°C, mieszając zawartość naczynia przez 7 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 5-krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 cykloheksanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest octan etylu, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 15°C, przez 15 godzin. Proces ekstrakcji octanem etylu powtarza się 3-krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając organiczną. Frakcję wodną rozdziela się od rozpuszczalnika organicznego i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 35% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 59,0 | >600,0 | 503,8 | 276,4 | 132,6 | 70,8 | 50,4 | 45,0 | 51,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,5 | 283,8 | 66,2 | 27,4 | 19,1 | 15,7 | 15,0 | 14,2 | 14,8 |
P r z y k ł a d 9
Zbiera się kwiaty arniki górskiej, w okresie od maja do sierpnia, które rozdrabnia się. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 20003 cm wody z alkoholem allilowym użytych w proporcji 1:1, w temperaturze 90°C, przez 10 godzin, jeden raz. Następnie, frakcję alkoholowowodną zawierającą, ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór. Do 3 roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 cykloheptanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 115°C, mieszając zawartość naczynia przez 10 godzin. Następnie rozdziela się frakcję wodnoalkoholową odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 3-krotnie, dodając do frakcji wodno-alkoholowej kolejną porcję 1000 cm3 cykloheptanu, stosując takie same warunki eksPL 211 520 B1 trakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodno-alkoholowej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest eter dietylowy, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 25°C, przez 8 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji eterem dietylowym powtarza się 5-krotnie, zachowując frakcję wodno-alkoholową, a odrzucając organiczną. Frakcję wodno-alkoholową rozdziela się od rozpuszczalnika organicznego i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 45% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Tak otrzymany suchy, w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm tertbutanolu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 85°C przez 1 dobę. Nierozpuszczalną w tertbutanolu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją er/butanolu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 10 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w tertbutanolu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 11% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 100 cm3 2% roztworu siarczanu potasu poddaje się procesowi dializy. W tym celu roztwór ekstraktu umieszcza się w worku dializacyjnym, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 15000 Da. Napełniony worek umieszcza się w naczyniu z 2% roztworem siarczanu potasu w ilości 4000 cm3, w którym swobodnie pływa. Proces dializy prowadzi się przez 20 dni, mieszając zawartość naczynia, wymieniając 2% roztwór siarczanu potasu w naczyniu, na początku raz na dobę, a po 7 dniach - co 2 doby. Po procesie dializy w worku pozostaje roztwór, który po odparowaniu do sucha do postaci proszku stanowi 1,5% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,5 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | 589,0 | 258,0 | 102,2 | 65,4 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 14,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | 85,0 | 42,7 | 28,1 | 16,3 | 13,8 |
P r z y k ł a d 10
Zbiera się ziele nawłoci pospolitej, w okresie od czerwca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 wody z alkoholem propargilowym użytych w proporcji 100:1, w temperaturze 20°C, przez 5 godzin, pięć razy, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję alkoholowo-wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 chlorku metylenu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 15°C przez; 2 doby. Nierozpuszczalną w chlorku metylenu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją chlorku metylenu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 10 porcji chlorku metylenu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w chlorku metylenu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 50% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 1000 cm wody i dodaje się 1000 cm3 cyklooktanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 150°C przez 5 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 10-krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 cyklooktanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest 1-pentanol, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 50°C, przez 10 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji 1-pentanolem powtarza się 3-krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając organiczną. Frakcję wodną rozdziela się od alkoholu i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 1% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
PL 211 520 B1
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 57,0 | >600,0 | >600,0 | 594,6 | 480,0 | 199,3 | 80,6 | 50,4 | 37,2 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 13,0 | >300,0 | >300,0 | 64,6 | 38,2 | 30,0 | 20,3 | 18,0 | 13,6 |
P r z y k ł a d 11
Zbiera się kwiatostany rumianku pospolitego, w okresie od czerwca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 20003 cm wody i glikolu etylenowego użytych w proporcji 1:1 w temperaturze 170°C, przez 3 godziny, trzy razy. Następnie, frakcję glikolowo-wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, a otrzymany roztwór zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany suchy ekstrakt roś linny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm2 chloroformu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 3 doby. Nierozpuszczalną w chloroformie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją chloroformu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 20 porcji chloroformu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w chloroformie osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 47% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 20 cm3 5% roztworu azotanu sodu i sączy na kolumnie wypełnionej sitami molekularnymi, przepuszczającymi w pierwszej kolejności substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da.
W procesie sączenia kolumnę eluuje się 5% roztworem azotanu sodu w iloś ci 1500 cm3, odrzucając pierwszą, małocząsteczkową frakcję. Zbiera się frakcję o masie cząsteczkowej > 5000 Da, która po odparowaniu do sucha do postaci proszku stanowi 19% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 1000 cm wody i dodaje się 1000 cm3 toluenu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 110°C, mieszając zawartość naczynia przez 5 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 3
10-krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 toluenu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, 3 którym jest chlorek tertbutylu, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 50°C, przez 10 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji chlorkiem tertbutylu powtarza się 2 krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając organiczną. Frakcję wodną rozdziela się od rozpuszczalnika organicznego i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 8,5% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 55,0 | >600,0 | >600,0 | 522,2 | 364,4 | 138,2 | 62,2 | 46,2 | 37,6 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | >300,0 | 84,0 | 32,7 | 18,5 | 15,8 | 15,2 | 14,8 | 14,7 |
PL 211 520 B1
P r z y k ł a d 12
Zbiera się korzenie podbiału pospolitego, w okresie od maja do listopada, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 wody i glikolu propylenowego użytych w proporcji 10:1, w temperaturze 150°C, przez 2 godziny, dziesięć razy. Następnie, frakcję glikolowo-wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 2000 cm3 eteru dibutylowego i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w eterze dibutylowym część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją eteru dibutylowego, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 20 porcji eteru. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w eterze dibutylowym osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 42% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 50 cm3 1% roztworu azotanu potasu i sączy się na sączku, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 10000 Da. W procesie sączenia osad zebrany na sączku przepłukuje się jeszcze 1% roztworem azotanu potasu w ilości 500 cm3. Osad, który stanowią substancje o masie cząsteczkowej > 10000 Da, suszy się otrzymując środek w postaci proszku stanowiącego 24% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 1000 cm3 wody i dodaje się 1000 cm3 ksylenu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 140°C, mieszając zawartość naczynia przez 8 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję glikolowo-wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 5-krotnie, dodając do frakcji glikolowo-wodnej kolejną porcję 1000 cm3 ksylenu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji glikolowo-wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest heksanol, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 150°C, przez 5 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji heksanolem powtarza się 4-krotnie, zachowując frakcję glikolowo-wodną, a odrzucając heksanolową. Frakcję glikolowo-wodną rozdziela się od rozpuszczalnika organicznego i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 7% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | >600,0 | 281,2 | 161,8 | 78,2 | 51,6 | 40,0 | 39,8 | 41,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 13,0 | 25,9 | 18,3 | 15,8 | 14,1 | 13,4 | 13,2 | 13,0 | 12,7 |
P r z y k ł a d 13
Zbiera się ziele wiązówki błotnej, w okresie od czerwca do października, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 wody i glikolu dietylowego użytych w proporcji 5:1, w temperaturze 150°C, przez 3 godziny, pięć razy. Następnie, frakcję glikolowo-wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 200 cm3 roztworu azotanu amonu (2%) i poddaje się procesowi sączenia na membranie nanofiltracyjnej, przepuszczającej substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. Roztwór ekstraktu roślinnego umieszcza się w module membranowym i po procesie sączenia przez barierę membrany zbiera się osad pozostały w module membranowym, stanowiący substancje o masie cząsteczkowej > 5000 Da, który po wysuszeniu do postaci proszku stanowi 50% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Tak otrzymany suchy, w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 tertbutanolu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 85°C przez 1 dobę. Nierozpuszczalną w tertbutanolu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją tertbutanolu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się
PL 211 520 B1 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w tertbutanolu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 14% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 53,0 | >600,0 | 130,4 | 29,0 | 26,1 | 36,8 | 47,0 | 48,6 | 48,9 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 13,0 | 177,0 | 66,2 | 29,5 | 19,7 | 15,6 | 14,1 | 13,4 | 14,8 |
P r z y k ł a d 14
Zbiera się owoce i kwiaty czeremchy zwyczajnej, w okresie od maja do sierpnia, które się suszy i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 wody i glicerolu użytych w proporcji 1:1, w temperaturze 150°C, przez 4 godziny, pięć razy. Następnie, frakcję glicerolowo-wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, a otrzymany roztwór zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 100 cm3 10% roztworem fosforanu sodu poddaje się dializie. W tym celu roztwór ekstraktu umieszcza się w worku dializacyjnym, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 15000 Da. Napełniony worek umieszcza się w naczyniu z 10% roztworem fosforanu sodu w ilości 2500 cm3, w którym swobodnie pływa. Dializę prowadzi się przez 15 dni, mieszając zawartość naczynia, wymieniając 10% roztwór fosforanu sodu w naczyniu, na początku raz na dobę, a po 5 dniach - co 2 doby. Po procesie dializy w worku pozostaje roztwór, który po odparowaniu do sucha do postaci proszku stanowi 48% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu, po czym suchy, w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 izobutanolu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 15°C przez 2 doby. Nierozpuszczalną w izobutanolu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją izobutanolu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 50 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w izobutanolu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 25% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | >600,0 | 535,3 | 262,7 | 111,7 | 61,0 | 40,0 | 38,8 | 39,8 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,0 | 97,6 | 33,1 | 20,3 | 16,0 | 14,1 | 14,0 | 13,2 | 13,0 |
P r z y k ł a d 15
Zbiera się liście i kwiaty poziomki pospolitej, w okresie od lipca do sierpnia, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 metanolem w temperaturze 65°C, przez 6 godzin, trzy razy, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję alkoholową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, a otrzymany roztwór zagęszcza się do konsystencji pasty, po czym ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 20 cm3 5% roztworu fosforanu potasu
PL 211 520 B1 i sączy się na kolumnie wypełnionej sitami molekularnymi, przepuszczającymi w pierwszej kolejności substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 12000 Da. W procesie sączenia kolumnę eluuje się 5% roztworem fosforanu potasu w ilości 3000 cm3, odrzucając pierwszą, małocząsteczkową frakcję.
Zbiera się frakcję o masie cząsteczkowej > 12000 Da, która po odparowaniu do sucha do postaci proszku stanowi 41% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany, w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 300 cm3 alkoholu allilowego i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w alkoholu allilowym część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją alkoholu allilowego, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 50 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w alkoholu allilowym osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 13% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 58,0 | >600,0 | >600,0 | 322,5 | 120,0 | 64,5 | 42,8 | 19,4 | 39,8 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,5 | 178,4 | 32,0 | 20,7 | 16,0 | 14,3 | 13,9 | 13,0 | 12,8 |
P r z y k ł a d 16
Zbiera się kwiatostany krwiściągu lekarskiego, w okresie od sierpnia do października, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 20003 cm etanolem w temperaturze 78°C, przez 4 godziny, dziesięć razy. Następnie, frakcję alkoholową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, a otrzymany roztwór zagęszcza się. Otrzymany w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 alkoholu propargilowego i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 20°C przez 3 doby. Nierozpuszczalną w alkoholu propargilowym część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją alkoholu propargilowego, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 20 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w alkoholu propargilowym osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 46% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 50 cm3 15% roztworu węglanu sodu i sączy się na sączku, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 10000 Da. W procesie sączenia osad zebrany na sączku przepłukuje się jeszcze 15% roztworem węglanu sodu w ilości 300 cm3. Osad, który stanowią substancje o masie cząsteczkowej > 10000 Da, suszy się otrzymując środek w postaci proszku stanowiącego 18% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,5 | >600,0 | 130,4 | 29,0 | 26,1 | 36,8 | 47,0 | 48,6 | 48,9 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,5 | 283,8 | 66,2 | 27,4 | 19,1 | 15,7 | 15,0 | 14,2 | 14,8 |
PL 211 520 B1
P r z y k ł a d 17
Zbiera się owoce i kwiaty głogu dwuszyjkowego, w okresie od lipca do listopada, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 1-propanolu w temperaturze 98°C, przez 5 godzin, cztery razy. Następnie, frakcję alkoholową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 200 cm3 8% roztworu węglanu potasu i sączy się na membranie nanofiltracyjnej, przepuszczającej substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. Roztwór ekstraktu roślinnego umieszcza się w module membranowym i po sączeniu przez barierę membrany zbiera się osad pozostały w module membranowym, stanowiący substancje o masie cząsteczkowej > 5000 Da, który po wysuszeniu do postaci proszku stanowi 36% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 54,0 | >600,0 | 479,4 | 202,5 | 87,6 | 59,9 | 50,9 | 46,4 | 46,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 14,0 | 81,7 | 29,9 | 20,1 | 17,0 | 14,3 | 14,3 | 13,8 | 13,7 |
P r z y k ł a d 18
Zbiera się kwiaty, liście i owoce jeżyny fałdowanej, w okresie od maja do sierpnia, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 2-propanolu w temperaturze 50°C, przez 3 godziny, pięć razy, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję alkoholową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, a otrzymany roztwór zagęszcza się do konsystencji pasty. Po czym ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 100 cm3 2,5% roztworu mrówczanu sodu poddaje się procesowi dializy. W tym celu roztwór ekstraktu umieszcza się w worku dializacyjnym, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 10000 Da. Napełniony worek umieszcza się w naczyniu z 2,5% roztworem mrówczanu sodu w ilości 3000 cm3. Proces dializy prowadzi się przez 20 dni, mieszając zawartość, wymieniając 2,5% roztwór mrówczanu sodu w naczyniu, na początku raz na dobę, a po 6 dniach - co 2 doby. Pozostały po dializie roztwór, po odparowaniu do postaci proszku stanowi 50% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | 225,0 | 145,1 | 83,0 | 65,4 | 52,2 | 49,0 | 53,6 | 51,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,0 | 97,6 | 33,1 | 20,3 | 16,0 | 14,1 | 14,0 | 13,2 | 13,0 |
P r z y k ł a d 19
Zbiera się korzenie i ziele krwawnika pospolitego, w okresie od lipca do września, które roz3 drabnia się. Surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 2-butanolu w temperaturze 40°C, przez 3 godziny, dziesięć razy, mieszając zawartość. Następnie, frakcję alkoholową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości i zagęszcza się do konsystencji
PL 211 520 B1 pasty, po czym suchy ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 2000 cm3 glikolu etylenowego i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w glikolu etylenowym część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją glikolu etylenowego, powtarzając ekstrakcję i rozdzielanie. W sumie stosuje się 1 porcję glikolu. Otrzymany, nierozpuszczalny w glikolu etylenowym osad, suszy się. Otrzymany środek roślinny stanowi 37% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 54,0 | 347,0 | 265,1 | 95,0 | 75,3 | 51,2 | 56,0 | 53,6 | 52,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | >300,4 | 157,0 | 76,8 | 47,0 | 25,5 | 18,0 | 13,2 | 13,0 |
P r z y k ł a d 20
Zbiera się kwiaty i nasiona jeżówki purpurowej, w okresie od czerwca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 tertbutanolu w temperaturze 30°C, przez 10 godzin, jeden raz, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję alkoholową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 20 cm3 1% roztworu mrówczanu potasu i sączy się na kolumnie wypełnionej sitami molekularnymi, przepuszczającymi w pierwszej kolejności substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. W procesie sączenia kolumnę eluuje się 1% roztworem mrówczanu potasu w ilości 3000 cm3, odrzucając pierwszą, małocząsteczkową frakcję. Zbiera się frakcję o masie cząsteczkowej > 5000 Da, która po odparowaniu do postaci proszku stanowi 49% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,5 | 423,0 | 209,4 | 129,0 | 60,0 | 49,4 | 44,9 | 42,6 | 44,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,5 | 19,9 | 17,1 | 16,6 | 14,4 | 14,6 | 15,2 | 16,5 | 15,7 |
P r z y k ł a d 21
Zbiera się kwiatostany przymiotna kanadyjskiego, w okresie od lipca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 izobutanolu w temperaturze 100°C, przez 4 godziny, trzy razy. Następnie, frakcję alkoholową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 1000 cm3 oktanolu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 150°C przez 1 dobę. Nierozpuszczalną w oktanolu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją oktanolu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 5 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w oktanolu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek
PL 211 520 B1 rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 41% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 50 cm3 1,5% roztworu mrówczanu amonu i poddaje się procesowi sączenia na sączku, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 20000 Da. W procesie sączenia osad zebrany na sączku przepłukuje się jeszcze 1,5% roztworem mrówczanu amonu w ilości 1000 cm3. Osad, który stanowią substancje o masie cząsteczkowej > 20000 Da, suszy się otrzymując środek w postaci proszku stanowiącego 17% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 59,0 | >600,0 | 176,8 | 86,0 | 65,6 | 55,6 | 50,8 | 56,0 | 57,3 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | 60,0 | 25,0 | 15,0 | 13,0 | 11,4 | 11,0 | 11,6 | 11,3 |
P r z y k ł a d 22
Zbiera się kwiaty arniki górskiej, w okresie od maja do sierpnia, które rozdrabnia się. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 alkoholu allilowego w temperaturze 97°C, przez 10 godzin, jeden raz. Następnie, frakcję alkoholową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 200 cm3 0,5% roztworu octanu sodu i poddaje się procesowi sączenia na membranie nanofiltracyjnej przepuszczającej substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 10000 Da. Roztwór ekstraktu roślinnego umieszcza się w module membranowym i po procesie sączenia przez barierę membrany zbiera się osad pozostały w module membranowym, stanowiący substancje o masie cząsteczkowej > 10000 Da, który po wysuszeniu do postaci proszku stanowi 45% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 57,5 | >600,0 | >600,0 | 176,2 | 102,0 | 67,6 | 47,0 | 34,6 | 34,5 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,5 | 107,0 | 31,0 | 19,0 | 14,4 | 13,0 | 12,6 | 11,6 | 12,0 |
P r z y k ł a d 23
Zbiera się ziele nawłoci pospolitej, w okresie od czerwca do września, które suszy się i rozdrab3 nia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 alkoholu propargilowego w temperaturze 20°C, przez 5 godzin, pięć razy, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję alkoholową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 100 cm3 0,9% roztworu octanu potasu poddaje się procesowi dializy. W tym celu roztwór ekstraktu umieszcza się w worku dializacyjnym, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. Napełniony worek umieszcza się w naczyniu z 0,9% roztworem octanu potasu w ilości 3000 cm3,
PL 211 520 B1 w którym swobodnie pływa. Proces dializy prowadzi się przez 15 dni, mieszając zawartość naczynia, wymieniając 0,9% roztwór octanu potasu w naczyniu, na początku raz na dobę, a po 3 dniach - co 2 doby. Po procesie dializy w worku pozostaje roztwór, który po odparowaniu do sucha do postaci proszku stanowi 41% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 heptanolu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 125°C przez 2 doby. Nierozpuszczalną w heptanolu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją heptanolu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 10 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w heptanolu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 22% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 58,0 | >600,0 | >600,0 | 243,5 | 75,1 | 61,8 | 47,8 | 34,4 | 33,1 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,0 | 59,6 | 37,0 | 22,0 | 15,6 | 13,4 | 12,5 | 13,8 | 12,3 |
P r z y k ł a d 24
Zbiera się kwiatostany rumianku pospolitego, w okresie od czerwca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 glikolu etylenowego w temperaturze 10°C, przez 3 godziny, dziesięć razy, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję glikolową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, a otrzymany roztwór zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza 3 się w 20 cm3 1% roztworu octanu amonu i poddaje się sączeniu na kolumnie wypełnionej sitami molekularnymi, przepuszczającymi w pierwszej kolejności substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. W procesie sączenia kolumnę eluuje się 1% roztworem octanu amonu w ilości 2000 cm3, odrzucając pierwszą, małocząsteczkową frakcję. Zbiera się frakcję o masie cząsteczkowej > 5000 Da, która po odparowaniu do sucha do postaci proszku stanowi 37% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 heksanolu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w heksanolu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją heksanolu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 30 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w heksanolu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 19% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | >600,0 | >600,0 | 136,0 | 102,0 | 53,0 | 44,0 | 43,0 | 49,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 13,0 | 105,0 | 42,6 | 18,6 | 14,6 | 13,4 | 12,2 | 12,2 | 12,6 |
PL 211 520 B1
P r z y k ł a d 25
Zbiera się liście podbiału pospolitego, w okresie od maja do listopada, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 glikolu propylenowego w temperaturze 5°C, przez 24 godziny, pięć razy, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję glikolową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, a otrzymany roztwór zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 1000 cm3 izopentanolu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w izopentanolu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją izopentanolu, powtarzając ekstrakcję i rozdzielanie. W sumie stosuje się 25 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w izopentanolu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 42% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 50 cm3 1,5% roztworu szczawianu sodu i poddaje się sączeniu na sączku, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. W procesie sączenia osad zebrany na sączku przepłukuje się jeszcze 1,5% roztworem szczawianu sodu w ilości 1000 cm3. Osad, który stanowią substancje o masie cząsteczkowej > 5000 Da, suszy się otrzymując środek w postaci proszku stanowiącego 18% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 55,0 | >600,0 | >600,0 | 167,8 | 73,4 | 60,0 | 56,6 | 58,6 | 71,8 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | 91,8 | 37,8 | 19,8 | 13,8 | 14,0 | 14,2 | 13,6 | 14,4 |
P r z y k ł a d 26
Zbiera się ziele wiązówki błotnej, w okresie od czerwca do października, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 glikolu dietylowego w temperaturze 150°C, przez 3 godziny, dwa razy. Następnie, frakcję glikolową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 1000 cm3 1-pentanolu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 25°C przez 2 doby. Nierozpuszczalną w 1-pentanolu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją 1-pentanolu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 20 porcji alkoholu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w 1-pentanolu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 48% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 54,0 | >600,0 | 177,0 | 72,0 | 55,0 | 41,0 | 40,0 | 61,0 | 56,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,0 | 54,0 | 28,4 | 16,2 | 14,4 | 13,5 | 13,0 | 14,2 | 12,2 |
PL 211 520 B1
P r z y k ł a d 27
Zbiera się owoce czeremchy zwyczajnej, w okresie od maja do lipca, które się suszy i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 glicerolu w temperaturze 170°C, przez 4 godziny, pięć razy. Następnie, frakcję glicerolową, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 200 cm3 0,5% roztworu szczawianu potasu i poddaje się procesowi sączenia na membranie nanofiltracyjnej, przepuszczającej substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 10000 Da. Roztwór ekstraktu roślinnego umieszcza się w module membranowym i po procesie są czenia przez barierę membrany zbiera się osad pozostał y w module membranowym, stanowiący substancje o masie cząsteczkowej > 10000 Da, który po wysuszeniu do postaci proszku stanowi 37% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 50,0 | >600,0 | >600,0 | 156,5 | 84,4 | 87,6 | 68,6 | 6,6 | 47,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | 94,4 | 36,4 | 20,4 | 16,9 | 15,4 | 14,5 | 14,6 | 14,0 |
P r z y k ł a d 28
Zbiera się ziele poziomki pospolitej, w okresie od maja do października, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 10% wodnego roztworu chlorku sodu w temperaturze 80°C, przez 5 godzin, dwa razy. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który odparowuje się do konsystencji pasty. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 1000 cm3 eteru diizopropylowego i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 50°C przez 2 doby. Nierozpuszczalną w eterze diizopropylowym część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją eteru diizopropylowego, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 20 porcji eteru. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w eterze diizopropylowym osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 49% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 1000 cm3 wody i dodaje się 1000 cm3 dekanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 100°C, mieszając zawartość naczynia przez 8 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 6-krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 dekanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest dichloroetan, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 60°C, przez 8 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji dichloroetanem powtarza się 4-krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając organiczną. Następnie frakcję wodną poddaje ekstrakcji octanem etylu przez 5 godzin, 5-krotnie, w temperaturze 50°C, mieszając zawartość naczynia. W kolejnym etapie fazę wodną po rozdzieleniu od frakcji rozpuszczalnika organicznego rozdziela się od rozpuszczalnika i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 12% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 54,0 | >600,0 | >600,0 | 394,2 | 142,8 | 90,0 | 69,0 | 53,8 | 54,4 |
PL 211 520 B1 cd tabeli
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,0 | >300,0 | 50,0 | 23,4 | 16,0 | 14,3 | 13,9 | 13,0 | 12,8 |
P r z y k ł a d 29
Zbiera się kwiaty i owoce poziomki pospolitej, w okresie od maja do października, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 5% wodnego roztworu chlorku potasu w temperaturze 70°C, przez 5 godzin, dwa razy. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór. Do roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 heksanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 60°C, mieszając zawartość naczynia przez 10 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 10-krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 heksanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest heksanol, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 150°C, przez 6 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji heksanolem powtarza się 3-krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając heksanolową. Frakcję wodną rozdziela się od rozpuszczalnika organicznego i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 35% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | >600,0 | 289,5 | 144,0 | 108,1 | 95,4 | 92,2 | 61,4 | 60,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 13,0 | 57,4 | 32,6 | 24,6 | 17,8 | 14,8 | 13,9 | 13,4 | 13,5 |
P r z y k ł a d 30
Zbiera się kwiatostany i liście krwiściągu lekarskiego, w okresie od sierpnia do października, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 10% wodnego roztworu siarczanu sodu w temperaturze 80°C, przez 4 godziny, dziesięć razy. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się. Do roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 chloroformu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 62°C, mieszając zawartość naczynia przez 6 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 8-krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 chloroformu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest eter dipropylowy, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 90°C, przez 5 godzin, mieszając zawartość. Ekstrakcję eterem dipropylowym powtarza się 6-krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając eterową. Frakcję wodną rozdziela się od rozpuszczalnika organicznego i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 43% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Otrzymany w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 trichloroetylenu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 25°C przez 2 doby. Nierozpuszczalną w trichloroetylenie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją trichloroetylenu, powtarzając ekstrakcję i rozdzielanie. W sumie stosuje się 30 porcji trichloroetylenu. Otrzymuje się nierozpuszczalny w trichloroetylenie osad, który suszy się.
PL 211 520 B1
Otrzymany środek roślinny stanowi 2% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 52,0 | >600,0 | >600,0 | 298,0 | 179,0 | 86,0 | 61,0 | 48,0 | 56,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | >300,0 | 145,0 | 20,5 | 18,6 | 16,6 | 14,0 | 14,8 | 14,2 |
P r z y k ł a d 31
Zbiera się owoce i liście głogu dwuszyjkowego, w okresie od września do listopada, które roz3 drabnia się. Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 5% wodnego roztworu siarczanu potasu w temperaturze 60°C, przez 5 godzin, cztery razy, mieszając zawartość naczynia.
Następnie frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości. Tak 3 otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 100 cm3 0,5% roztworu salicylanu sodu poddaje się dializie. W tym celu roztwór ekstraktu umieszcza się w worku dializacyjnym, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 15000 Da. Napełniony worek umieszcza się w naczyniu 3 z 0,5% roztworem salicylanu sodu w ilości 4000 cm3, w którym swobodnie pływa. Dializę prowadzi się przez 20 dni, mieszając zawartość, wymieniając 0,5% roztwór salicylanu sodu w naczyniu, na początku raz na dobę, a po 7 dniach - co 2 doby. Roztwór po dializie, po odparowaniu do postaci proszku, stanowi 47% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 57,0 | >600,0 | 290,5 | 137,0 | 100,4 | 94,3 | 89,0 | 61,4 | 56,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 13,0 | 204,0 | 132,6 | 57,8 | 27,8 | 14,4 | 13,0 | 12,4 | 13,5 |
P r z y k ł a d 32
Zbiera się kwiaty i owoce jeżyny fałdowanej, w okresie od maja do sierpnia, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 20% wodnego roztworu azotanu sodu w temperaturze 95°C, przez 3 godziny, pięć razy. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, a otrzymany roztwór zagęszcza się do konsystencji pasty. Otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 1000 cm3 eteru diizopropylowego i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 50°C przez 2 doby. Nierozpuszczalną w eterze diizopropylowym część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją eteru diizopropylowego, powtarzając ekstrakcję i rozdzielanie. W sumie stosuje się 20 porcji eteru. Otrzymuje się nierozpuszczalny w eterze diizopropylowym osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 33% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
PL 211 520 B1
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | >600,0 | 308,0 | 75,0 | 60,0 | 59,0 | 59,0 | 61,0 | 58,4 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | >300,0 | >300,0 | 23,6 | 14,6 | 13,0 | 12,4 | 12,4 | 11,8 |
P r z y k ł a d 33
Zbiera się kwiatostany rzepiku pospolitego, w okresie od lipca do sierpnia, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 2% wodnego roztworu azotanu potasu w temperaturze 60°C, przez 7 godzin, jeden raz, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości i zagęszcza.
3
Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 20 cm3 2% roztworu winianu disodowego i sączy się na kolumnie wypełnionej sitami molekularnymi, przepuszczającymi w pierwszej kolejności substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. W procesie sączenia kolumnę eluuje się 2% roztworem winianu disodowego w ilości 2000 cm3, odrzucając pierwszą, małocząsteczkową frakcję. Zbiera się frakcję o masie cząsteczkowej > 5000 Da, która po odparowaniu do postaci proszku stanowi 29% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 57,0 | >600,0 | 236,2 | 70,2 | 49,4 | 50,4 | 49,4 | 50,2 | 49,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,5 | >300,0 | 105,0 | 22,2 | 15,4 | 13,6 | 12,8 | 13,0 | 12,0 |
P r z y k ł a d 34
Zbiera się korzenie i ziele krwawnika pospolitego, w okresie od lipca do września, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 10% wodnego roztworu fosforanu sodu w temperaturze 90°C, przez 3 godziny, dziesięć razy. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, a otrzymany roztwór zagęszcza się do konsystencji pasty.
3
Otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 eteru dipropylowego i mieszając zawartość naczynia w temp. pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w eterze dipropylowym część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją eteru dipropylowego, powtarzając ekstrakcję i rozdzielanie. W sumie stosuje się 15 porcji eteru. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w eterze dipropylowym osad, który suszy się. Otrzymany środek roślinny stanowi 47% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
PL 211 520 B1
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 58,0 | 420,0 | 116,0 | 78,0 | 72,0 | 73,8 | 66,6 | 75,2 | 67,4 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | 30,4 | 23,6 | 17,0 | 15,2 | 14,2 | 13,6 | 13,8 | 13,2 |
P r z y k ł a d 35
Zbiera się kwiaty, nasiona i korzenie jeżówki purpurowej, w okresie od czerwca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 25% wodnego roztworu fosforanu potasu w temperaturze 90°C, przez 10 godzin, jeden raz. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się.
3
Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 50 cm3 1,5% roztworu winianu sodowo-potasowego i sączy się na sączku, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. W procesie sączenia osad zebrany na sączku przepłukuje się 1,5% roztworem winianu sodowo-potasowego w ilości 500 cm3. Osad, który stanowią substancje o masie cząsteczkowej > 5000 Da, suszy się otrzymując środek w postaci proszku stanowiącego 43% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | 206,7 | 158,0 | 120,0 | 93,2 | 67,6 | 71,0 | 74,0 | 70,5 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 13,0 | 37,2 | 30,0 | 20,0 | 16,0 | 14,8 | 13,2 | 13,0 | 13,4 |
P r z y k ł a d 36
Zbiera się ziele przymiotna kanadyjskiego, w okresie od lipca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 30% wodnego roztworu węglanu sodu w temperaturze 95°C, przez 4 godziny, trzy razy. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, a otrzymany roztwór zagęszcza się do konsystencji pasty.
3
Otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 eteru dietylenowego i mieszając zawartość naczynia w temp. pokojowej przez 1 dobę. Nierozpuszczalną w eterze dietylenowym część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją eteru dietylenowego, powtarzając ekstrakcję i rozdzielanie. W sumie stosuje się 30 porcji eteru. Otrzymany nierozpuszczalny w eterze dietylenowym osad suszy się. Otrzymany środek roślinny stanowi 44% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
PL 211 520 B1
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 54,0 | >600,0 | 117,7 | 97,4 | 83,2 | 72,4 | 58,6 | 60,2 | 57,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,0 | >300,0 | 69,0 | 21,0 | 14,9 | 15,2 | 14,5 | 14,6 | 14,8 |
P r z y k ł a d 37
Zbiera się kwiaty i liście arniki górskiej, w okresie od maja do sierpnia, które rozdrabnia się. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 5% wodnego roztworu węglanu potasu w temperaturze 90°C, przez 10 godzin, jeden raz. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, a otrzymany roztwór zagęszcza do konsystencji pasty. Otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 200 cm3 5% roztworu winianu dipotasowego i sączy się na membranie nanofiltracyjnej, przepuszczającej substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 10000 Da.
Roztwór ekstraktu roślinnego umieszcza się w module membranowym i po sączeniu przez barierę membrany zbiera się osad pozostały w module membranowym, stanowiący substancje o masie cząsteczkowej > 10000 Da, który po wysuszeniu stanowi 36% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,5 | >600,0 | 227,4 | 131,0 | 88,8 | 76,0 | 74,0 | 72,0 | 57,8 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | 28,6 | 17,6 | 15,2 | 14,4 | 13,8 | 14,0 | 13,6 | 14,2 |
P r z y k ł a d 38
Zbiera się ziele nawłoci pospolitej, w okresie od czerwca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 15% wodnego roztworu mrówczanu sodu w temperaturze 40°C, przez 5 godzin, pięć razy, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty.
Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 ksylenu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 140°C przez 2 doby. Nierozpuszczalną w ksylenie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją ksylenu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 20 porcji ksylenu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w ksylenie osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 45% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
PL 211 520 B1
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 57,0 | >600,0 | 341,3 | 162,0 | 101,0 | 80,7 | 80,4 | 74,1 | 72,3 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,5 | 48,6 | 28,4 | 18,2 | 15,1 | 14,3 | 14,5 | 14,0 | 13,4 |
P r z y k ł a d 39
Zbiera się kwiatostany rumianku pospolitego, w okresie od czerwca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 10% wodnego roztworu mrówczanu potasu w temperaturze 70°C, przez 3 godziny, trzy razy. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 2000 cm3 toluenu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 110°C przez 2 doby. Nierozpuszczalną w toluenie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją toluenu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 2 porcje toluenu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w toluenie osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 43% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 55,0 | >600,0 | 98,2 | 77,4 | 76,8 | 83,6 | 80,4 | 78,8 | 74,3 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 14,0 | 80,0 | 22,2 | 14,8 | 12,6 | 12,6 | 12,6 | 12,4 | 12,4 |
P r z y k ł a d 40
Zbiera się korzenie podbiału pospolitego, w okresie od maja do listopada, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 10% wodnego roztworu mrówczanu amonu w temperaturze 50°C, przez 4 godziny, dziesięć razy. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się 3 procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 cyklooktanu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w cyklooktanie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją cyklooktanu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 20 porcji cyklooktanu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w cyklooktanie osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 38% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
PL 211 520 B1
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | 287,4 | 153,2 | 126,0 | 103,2 | 99,6 | 88,6 | 89,4 | 85,4 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 13,0 | 35,0 | 20,8 | 15,4 | 14,6 | 14,6 | 14,0 | 14,3 | 14,4 |
P r z y k ł a d 41
Zbiera się ziele krwiściągu lekarskiego, w okresie od sierpnia do października, które suszy się 3 rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 30% wodnego roztworu octanu sodu w temperaturze 70°C, przez 4 godziny, dziesięć razy. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty.
Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 200 cm3 tetrachloroetylenie i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez doby. Nierozpuszczalną w tetrachloroetylenie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją tetrachloroetylenu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 50 porcji tetrachloroetylenu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w tetrachloroetylenie osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 38,5% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,5 | 584,0 | 135,0 | 70,2 | 56,0 | 47,6 | 46,8 | 42,0 | 29,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,5 | 52,2 | 28,0 | 17,2 | 15,4 | 14,4 | 13,8 | 13,3 | 13,6 |
P r z y k ł a d 42
Zbiera się owoce i nasiona głogu dwuszyjkowego, od września do listopada. Surowiec po rozdrobnieniu odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 10% wodnego roztworu octanu potasu w temperaturze 80°C, przez 5 godzin, cztery razy. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się, a otrzymany roztwór zagęszcza.
3
Otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 100 cm3 roztworu cytrynianu sodu i poddaje się dializie. W tym celu 5% roztwór ekstraktu umieszcza się w worku dializacyjnym, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 10000 Da.
Napełniony worek umieszcza się w naczyniu z 5% roztworem cytrynianu sodu w ilości 2500 3 cm3. Dializę prowadzi się przez 15 dni, wymieniając 5% roztwór cytrynianu sodu, na początku raz na dobę. a po 4 dniach - co 2 doby. Roztwór po dializie po odparowaniu do proszku stanowi 44% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
PL 211 520 B1
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 53,0 | >600,0 | >600,0 | 229,0 | 86,0 | 49,4 | 47,4 | 41,4 | 52,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,0 | 13,6 | 12,6 | 13,0 | 13,0 | 13,4 | 12,3 | 12,4 | 11,9 |
P r z y k ł a d 43
Zbiera się kwiaty, liście i owoce jeżyny fałdowanej, w okresie od maja do sierpnia, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 20% wodnego roztworu octanu amonu w temperaturze 50°C, przez 4 godziny, pięć razy. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty.
Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 cykloheptanu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 3 doby. Nierozpuszczalną w cykloheptanie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją cykloheptanu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 5 porcji cykloheptanu.
Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w cykloheptanie osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 42% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 54,0 | >600,0 | 80,6 | 73,3 | 78,2 | 76,3 | 73,4 | 72,2 | 72,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | >300,0 | 35,2 | 19,4 | 14,4 | 12,6 | 11,8 | 12,2 | 12,0 |
P r z y k ł a d 44
Zbiera się ziele rzepiku pospolitego, w okresie od lipca do sierpnia, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 5% wodnego roztworu szczawianu sodu w temperaturze 95°C, przez 7 godzin, jeden raz, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty.
3
Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 20 cm3 2% roztworu cytrynianu potasu i poddaje się procesowi sączenia na kolumnie wypełnionej sitami molekularnymi, przepuszczającymi w pierwszej kolejności substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. W procesie sączenia kolumnę eluuje się 2% roztworem cytrynianu potasu w ilości 2000 cm3, odrzucając pierwszą, małocząsteczkową frakcję.
Zbiera się frakcję o masie cząsteczkowej > 5000 Da, która po odparowaniu do sucha do postaci proszku stanowi 38% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
PL 211 520 B1
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 55,0 | >600,0 | 80,6 | 73,3 | 78,2 | 76,3 | 73,4 | 72,2 | 72,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 14,0 | 48,7 | 36,4 | 17,2 | 14,4 | 13,4 | 12,7 | 12,8 | 12,5 |
P r z y k ł a d 45
Zbiera się korzenie krwawnika pospolitego, w okresie od lipca do września, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 10% wodnego roztworu szczawianu potasu w temperaturze 90°C, przez 3 godziny, dziesięć razy. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty.
Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 chlorku tertbutylu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 30°C przez 3 doby. Nierozpuszczalną w chlorku tertbutylu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją chlorku tertbutylu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 20 porcji chlorku tertbutylu.
Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w chlorku tertbutylu osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 43% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | >600,0 | >600,0 | 243,5 | 75,1 | 61,8 | 47,8 | 34,4 | 33,1 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,5 | 45,5 | 26,5 | 18,2 | 16,0 | 14,4 | 13,8 | 13,6 | 13,0 |
P r z y k ł a d 46
Zbiera się kwiaty jeżówki purpurowej, w okresie od czerwca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 5% wodnego roztworu salicylanu sodu w temperaturze 50°C, przez 10 godzin, jeden raz, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty.
3
Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 50 cm3 0,05M roztworu wodorotlenku sodu i poddaje się procesowi sączenia na sączku, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da.
W procesie sączenia osad zebrany na sączku przepłukuje się jeszcze 0,05M roztworem wodorotlenku sodu w ilości 500 cm3 Osad, który stanowią substancje o masie cząsteczkowej > 5000 Da, suszy się otrzymując środek w postaci proszku stanowiącego 41% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
PL 211 520 B1
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | >600,0 | 161,8 | 94,9 | 89,2 | 84,0 | 75,5 | 79,2 | 78,8 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,0 | 55,0 | 30,4 | 19,4 | 15,4 | 14,0 | 13,8 | 13,7 | 14,2 |
P r z y k ł a d 47
Zbiera się ziele przymiotna kanadyjskiego, od lipca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 15% wodnego roztworu winianu disodowego w temperaturze 95°C, przez 4 godziny, trzy razy. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się, a otrzymany roztwór zagęszcza się do konsystencji pasty.
Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 300 3 cm3 cykloheksanu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w cykloheksanie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją cykloheksanu, powtarzając ekstrakcję i rozdzielanie.
W sumie stosuje się 50 porcji cykloheksanu. Otrzymuje się nierozpuszczalny w cykloheksanie osad, który suszy się. Otrzymany środek roślinny stanowi 46% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 53,0 | >600,0 | 161,8 | 94,9 | 89,2 | 84,0 | 75,5 | 79,2 | 78,8 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 13,0 | 39,8 | 30,0 | 18,5 | 16,8 | 16,0 | 15,9 | 15,3 | 14,5 |
P r z y k ł a d 48
Zbiera się kwiaty i liście arniki górskiej, w okresie od maja do sierpnia, które rozdrabnia się. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 10% wodnego roztworu winianu sodowo-potasowego w temperaturze 40°C, przez 10 godzin, jeden raz. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór.
Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 cyklopentanu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 15°C przez 3 doby. Nierozpuszczalną w cyklopentanie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją cyklopentanu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania.
W sumie stosuje się 20 porcji cyklopentanu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w cyklopentanie osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 41% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
PL 211 520 B1
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,5 | >600,0 | >600,0 | 243,5 | 75,1 | 61,8 | 47,8 | 34,4 | 33,1 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,5 | 59,6 | 37,0 | 22,0 | 15,6 | 13,4 | 12,5 | 13,8 | 12,3 |
P r z y k ł a d 49
Zbiera się kwiatostany nawłoci pospolitej, w okresie od czerwca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec w ilości 200 g i poddaje się ekstrakcji 2000 cm3 25% wodnego roztworu winianu dipotasowego w temperaturze 20°C, przez 5 godzin, pięć razy, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 dekanu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w dekanie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją dekanu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 20 porcji dekanu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w dekanie osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 49% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | >600,0 | >600,0 | 229,0 | 86,0 | 49,4 | 47,4 | 41,4 | 52,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,0 | >300,0 | 145,0 | 20,5 | 18,6 | 16,6 | 14,0 | 14,8 | 14,2 |
P r z y k ł a d 50
Zbiera się ziele rumianku pospolitego, w okresie od czerwca do września, które suszy się i rozdrabnia. Suchy surowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 15% wodnego roztworu cytrynianu sodu w temperaturze 70°C, przez 3 godziny, trzy razy. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 50 cm3 0,5M wodnego roztworu mocznika z dodatkiem 2 g węglanu sodu i poddaje się procesowi sączenia na sączku, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. W procesie sączenia osad zebrany na sączku przepłukuje się jeszcze roztworem alkalicznym w ilości 500 cm3. Osad, który stanowią substancje o masie cząsteczkowej > 5000 Da, suszy się otrzymując środek w postaci proszku stanowiącego 41% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 1000 cm3 nonanu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 80°C przez 1 dobę. Nierozpuszczalną w nonanie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją nonanu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 20 porcji nonanu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w nonanie osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 19,5% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
PL 211 520 B1
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 57,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | 307,7 | 92,4 | 61,4 | 50,2 | 44,2 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 14,0 | >300,0 | >300,0 | 153,2 | 23,6 | 16,8 | 15,4 | 14,4 | 14,4 |
P r z y k ł a d 51
Zbiera się liście podbiału pospolitego, w okresie od maja do listopada, które rozdrabnia się. Su3 rowiec odważa się w ilości 200 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 5% wodnego roztworu cytrynianu potasu w temperaturze 100°C, przez 2 godziny, dziesięć razy, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję wodną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 oktanu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 3 doby. Nierozpuszczalną w oktanie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją oktanu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 20 porcji oktanu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w oktanie osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 29% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 200 cm3 1M wodnego roztworu amoniaku z dodatkiem 3 g mrówczanu amonu i poddaje się procesowi sączenia na membranie nanofiltracyjnej, przepuszczającej substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. Roztwór ekstraktu roślinnego umieszcza się w module membranowym i po procesie sączenia przez barierę membrany zbiera się osad pozostały w module membranowym, stanowiący substancje o masie cząsteczkowej > 5000 Da, który po wysuszeniu do postaci proszku stanowi 11% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 58,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | 307,7 | 92,4 | 61,4 | 50,2 | 44,2 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | >300,0 | >300,0 | 185,6 | 37,6 | 19,1 | 15,9 | 14,2 | 13,2 |
P r z y k ł a d 52
Zbiera się kwiatostany i liście wiązówki błotnej, w okresie od czerwca do października, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 0,1M wodnego roztworu wodorotlenku sodu w temperaturze 100°C, przez 5 godzin, dwa razy. Następnie, frakcję alkaliczną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zobojętnia się do pH = 7,2 za pomocą roztworu 0,1M kwasu solnego. Ekstrakt zagęszcza się do trzy razy mniejszej objętości. Do roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 heptanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 98°C, mieszając zawartość naczynia przez 5 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 6-krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 heptanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest
PL 211 520 B1 eter dipropylowy, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 60°C, przez 8 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji eterem dipropylowym powtarza się 7-krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając organiczną. Następnie, frakcję wodną poddaje ekstrakcji chloroformem przez 5 godzin, 5-krotnie, w temperaturze 45°C, mieszając zawartość naczynia. W kolejnym etapie fazę wodną po rozdzieleniu od frakcji rozpuszczalnika organicznego poddaje ekstrakcji 1-pentanolem, w ilości 1000 cm3, przez 8 godzin, 5-krotnie, w temperaturze 100°C, mieszając zawartość naczynia. Frakcję wodną rozdziela się od alkoholu i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 18% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 50 cm3 0,2M wodnego roztworu wodorotlenku wapnia z dodatkiem 5 g chlorku sodu i poddaje się procesowi sączenia na sączku, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 15000 Da. W procesie sączenia osad zebrany na sączku przepłukuje się jeszcze roztworem alkalicznym w ilości 500 cm3. Osad, który stanowią substancje o masie cząsteczkowej > 15000 Da, suszy się otrzymując środek w postaci proszku stanowiącego 7% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Tak otrzymany suchy, w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 heptanu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w heptanie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją heptanu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 15 porcji heptanu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w heptanie osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 1,1% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 54,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | 560,0 | 170,8 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 13,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | 58,0 | 27,2 | 19,2 | 15,2 |
P r z y k ł a d 53
Zbiera się owoce czeremchy zwyczajnej, w okresie od maja do lipca, które się suszy i rozdrabnia. Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 0,1M wodnego roztworu wodorotlenku potasu w temperaturze 80°C, przez 5 godzin, trzy razy. Następnie, frakcję alkaliczną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zobojętnia się 4 do pH = 7,0 za pomocą roztworu 0,1M kwasu siarkowego. Ekstrakt zagęszcza się do dwukrotnie mniejszej objętości. Do roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 cykloheptanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 110°C, mieszając zawartość naczynia przez 7 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 4-krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 cykloheptanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest tetrachloroetylen, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 120°C, przez 5 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji tetrachloroetylenem powtarza się 3-krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając organiczną. Następnie, frakcję wodną poddaje ekstrakcji eterem dibutylowym przez 6 godzin, 2-krotnie, w temperaturze 140°C, mieszając zawartość naczynia. W kolejnym etapie fazę wodną po rozdzieleniu od frakcji rozpuszczalnika organicznego poddaje ekstrakcji mieszaniną oktanolu z chloroformem w proporcjach 3:2, w ilości 1000 cm3, przez 5 godzin, 5-krotnie, w temperaturze 60°C, mieszając zawartość naczynia. Frakcję wodną rozdziela się od organicznej i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 10% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
PL 211 520 B1
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 52,0 | >600,0 | >600,0 | 167,5 | 79,3 | 47,8 | 45,9 | 44,3 | 41,8 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,0 | >300,0 | 111,0 | 35,2 | 20,8 | 17,0 | 15,2 | 15,6 | 14,6 |
P r z y k ł a d 54
Zbiera się ziele poziomki pospolitej, w okresie od maja do października, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 0,5M wodnego roztworu wodorotlenku wapnia w temperaturze 90°C, przez 10 godzin, jeden raz, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję alkaliczną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zobojętnia się do pH = 6,8 za pomocą roztworu 0,5M kwasu azotowego. Ekstrakt zagęszcza się do konsystencji pasty. Do roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 heptanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 98°C, mieszając zawartość naczynia przez 5 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 6-krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 heptanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest eter dipropylowy, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 60°C, przez 8 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji eterem dipropylowym powtarza się 7-krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając organiczną. Następnie, frakcję wodną poddaje ekstrakcji chloroformem przez 5 godzin, 5-krotnie, w temperaturze 45°C, mieszając zawartość naczynia. W kolejnym etapie fazę wodną po rozdzieleniu od frakcji rozpuszczalnika organicznego poddaje ekstrakcji 1-pentanolem, w ilości 1000 cm3, przez 8 godzin, 5-krotnie, w temperaturze 100°C, mieszając zawartość naczynia. Frakcję wodną rozdziela się od alkoholu i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 11% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Tak otrzymany suchy, w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 heksanu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 60°C przez 1 dobę. Nierozpuszczalną w heksanie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją heksanu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 10 porcji heksanu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w heksanie osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 3,8% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 20 cm3 0,05M wodnego roztworu wodorotlenku potasu z dodatkiem 4 g octanu | potasu i poddaje się procesowi sączenia na kolumnie wypełnionej sitami molekularnymi, przepuszczającymi w pierwszej kolejności substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. W procesie sączenia kolumnę eluuje się roztworem alkalicznym w ilości 2000 cm3, odrzucając pierwszą, małocząsteczkową frakcję. Zbiera się frakcję o masie cząsteczkowej > 5000 Da, która po odparowaniu do sucha do postaci proszku stanowi 0,2% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 54,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | 187,2 | 136,6 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | 205,0 | 54,4 | 30,6 | 21,2 | 19,2 |
PL 211 520 B1
P r z y k ł a d 55
Zbiera się kwiaty i owoce poziomki pospolitej, w okresie od maja do października, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 1M wodnego roztworu amoniaku w temperaturze 100°C, przez 8 godzin, dwa razy. Następnie, frakcję alkaliczną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zobojętnia się do pH = 6,5 za pomocą roztworu 0,3M kwasu fosforowego. Ekstrakt zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 100 cm3 0,1M roztworu wodorotlenku wapnia poddaje się procesowi dializy. W tym celu roztwór ekstraktu umieszcza się w worku dializacyjnym, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 10000 Da. Napełniony worek umieszcza się w naczyniu z 0,3M roztworem wodorotlenku wapnia w ilości 3000 cm3, w którym swobodnie pływa. Proces dializy prowadzi się przez 20 dni, mieszając zawartość naczynia, wymieniając roztwór wodorotlenku wapnia w naczyniu, na początku raz na dobę, a po 4 dniach - co 2 doby. Po procesie dializy w worku pozostaje roztwór, który po odparowaniu do sucha do postaci proszku stanowi 37% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | 354,0 | 43,6 | 25,0 | 39,6 | 25,0 | 22,4 | 50,0 | 47,4 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 13,0 | 59,4 | 26,0 | 18,6 | 14,4 | 13,8 | 14,2 | 13,6 | 14,2 |
P r z y k ł a d 56
Zbiera się kwiatostany i liście krwiściągu lekarskiego, w okresie od sierpnia do października, które suszy się i rozdrabnia. Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 2M wodnego roztworu hydrazyny w temperaturze 50°C, przez 10 godzin, jeden raz. Następnie, frakcję alkaliczną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zobojętnia się do pH = 7,0 za pomocą roztworu 0,05M kwasu solnego. Ekstrakt zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 200 cm3 0,1M roztworu wodorotlenku potasu i poddaje się procesowi sączenia na membranie nanofiltracyjnej, przepuszczającej substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 10000 Da. Roztwór ekstraktu roślinnego umieszcza się w module membranowym i po procesie sączenia przez barierę membrany zbiera się osad pozostały w module membranowym, stanowiący substancje o masie cząsteczkowej > 10000 Da, który po wysuszeniu do postaci proszku stanowi 26% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 57,0 | >600,0 | >600,0 | 167,5 | 79,3 | 47,8 | 45,9 | 44,3 | 41,8 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 14,0 | >300,0 | 58,3 | 30,8 | 21,2 | 16,2 | 15,7 | 15,2 | 15,2 |
PL 211 520 B1
P r z y k ł a d 57
Zbiera się owoce i liście głogu dwuszyjkowego, w okresie od września do listopada, które rozdrabnia się. Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 2M wodnego roztworu mocznika w temperaturze 70°C, przez 8 godzin, dwa razy, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję alkaliczną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zobojętnia się do pH 7,5 za pomocą roztworu 0,05M kwasu siarkowego. Ekstrakt zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 100 cm3 0,3M roztworu wodorotlenku wapnia poddaje się procesowi dializy. W tym celu roztwór ekstraktu umieszcza się w worku dializacyjnym, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 10000 Da. Napełniony worek umieszcza się w naczyniu z 0,3M roztworem wodorotlenku wapnia w ilości 3000 cm3, w którym swobodnie pływa. Proces dializy prowadzi się przez 20 dni, mieszając zawartość naczynia, wymieniając roztwór wodorotlenku wapnia w naczyniu, na początku raz na dobę, a po 4 dniach - co 2 doby. Po procesie dializy w worku pozostaje roztwór, który po odparowaniu do sucha do postaci proszku stanowi 40% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,5 | 398,6 | 100,6 | 44,0 | 39,2 | 40,7 | 37,4 | 39,0 | 39,1 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 11,5 | 87,6 | 35,0 | 22,3 | 16,4 | 16,2 | 16,4 | 14,2 | 15,1 |
P r z y k ł a d 58
Zbiera się korzenie podbiału pospolitego, w okresie od maja do listopada, które rozdrabnia się.
3
Surowiec odważa się w ilości 250 g i poddaje ekstrakcji 2000 cm3 0,1M wodnego roztworu wodorotlenku sodu temperaturze dodatkiem 20 g węglanu sodu w temperaturze 80°C, przez 6 godzin, dwa razy. Następnie, frakcję alkaliczną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zobojętnia się do pH = 7,2 za pomocą roztworu 0,1M kwasu siarkowego. Ekstrakt zagęszcza się do konsystencji pasty. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się procesowi ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 300 cm3 pentanu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w pentanie część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją pentanu, powtarzając proces ekstrakcji i rozdzielania. W sumie stosuje się 40 porcji pentanu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w pentanie osad, który suszy się w celu usunięcia resztek rozpuszczalnika. Otrzymany środek roślinny stanowi 36,5% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | >600,0 | 140,0 | 55,4 | 48,0 | 45,0 | 44,6 | 46,0 | 43,8 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 14,0 | 91,7 | 48,2 | 23,6 | 18,0 | 15,1 | 14,6 | 15,0 | 14,6 |
PL 211 520 B1
P r z y k ł a d 59
Zbiera się ziele krwiściągu lekarskiego, od sierpnia do października, które suszy się i rozdrabnia. Surowiec w ilości 250 g i poddaje się ekstrakcji 2000 cm3 0,1M wodnego roztworu wodorotlenku potasu z dodatkiem 40 g octanu potasu w temperaturze 50°C, przez 8 godzin, trzy razy, mieszając zawartość naczynia. Następnie, frakcję alkaliczną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zobojętnia się do pH = 7,0 za pomocą roztworu 0,1M kwasu solnego. Ekstrakt zagęszcza się do konsystencji pasty. Otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 100 cm3 0,1M wodnego roztworu wodorotlenku sodu z dodatkiem 3 g węglanu sodu poddaje się dializie. W tym celu roztwór ekstraktu umieszcza się w worku dializacyjnym, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. Napełniony worek umieszcza się w naczyniu z roztworem alkalicznym w ilości 4000 cm3. Proces dializy prowadzi się przez 15 dni, mieszając zawartość naczynia, wymieniając roztwór alkaliczny w naczyniu, na początku raz na dobę, a po 5 dniach - co 2 doby. Po dializie w worku pozostaje roztwór, który po odparowaniu do sucha do postaci proszku stanowi 48% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Tak otrzymany suchy ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 glicerolu i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w glicerolu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją glicerolu, powtarzając ekstrakcję i rozdzielanie. W sumie stosuje się 20 porcji glicerolu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w glicerolu osad, który suszy się. Otrzymany środek roślinny stanowi 16% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 58,0 | >600,0 | 410,0 | 176,8 | 112,0 | 66,2 | 51,0 | 47,4 | 46,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | 128,5 | 33,0 | 15,8 | 15,0 | 14,5 | 13,8 | 13,6 | 13,8 |
P r z y k ł a d 60
Zbiera się owoce i nasiona głogu dwuszyjkowego, od września do listopada. Surowiec po rozdrobnieniu w ilości 250 g i poddaje się ekstrakcji 2000 cm3 0,4M wodnego roztworu wodorotlenku wapnia z dodatkiem 50 g chlorku sodu w temperaturze 100°C, przez 5 godzin, trzy razy. Następnie, frakcję alkaliczną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się, otrzymując roztwór, który zobojętnia się do pH = 6,9 za pomocą roztworu 0,5M kwasu fosforowego i odparowuje do konsystencji pasty. Otrzy3 many suchy ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 octanu etylu i mieszając zawartość naczynia w temp. pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w octanie etylu część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją octanu etylu, powtarzając ekstrakcję i rozdzielanie. W sumie stosuje się 20 porcji octanu etylu. Otrzymany nierozpuszczalny w octanie etylu osad, suszy się. Otrzymany środek roślinny stanowi 42% ogólnej, suchej masy użytego na 3 początku ekstraktu. Otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 200 cm3 5% roztworze mocznika i suszy się na membranie nanofiltracyjnej, przepuszczającej substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 10000 Da. Roztwór ekstraktu roślinnego umieszcza się w module membranowym i po sączeniu przez barierę membrany zbiera się osad pozostały w module membranowym, stanowiący substancje o masie cząsteczkowej > 10000 Da, który po wysuszeniu do postaci proszku stanowi 34% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 1000 cm3 wody i dodaje się 1000 cm3 chlorku metylenu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 40°C, mieszając zawartość przez 10 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 10-krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 chlorku metylenu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji 3 wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest eter dipropylowy, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 20°C, przez 12 godzin, mieszając zawartość naczynia. Ekstrakcję
PL 211 520 B1 eterem dipropylowym powtarza się 5-krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając organiczną. Następnie, frakcję wodną poddaje ekstrakcji chloroformem przez 10 godzin, 5-krotnie, w temperaturze 25°C. W kolejnym etapie fazę wodną po rozdzieleniu od frakcji rozpuszczalnika organicznego poddaje ekstrakcji octanem etylu, w ilości 1000 cm3, przez 10 godzin, 5-krotnie, w temperaturze 15°C. Frakcję wodną rozdziela się od octanu etylu i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 3,8% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 54,5 | >600,0 | 529,0 | 142,4 | 117,4 | 64,8 | 49,4 | 43,2 | 43,0 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 13,0 | 200,0 | 43,9 | 22,6 | 16,6 | 15,0 | 14,3 | 14,3 | 14,1 |
P r z y k ł a d 61
Zbiera się kwiaty, liście i owoce jeżyny fałdowanej, od maja do sierpnia, które suszy się i rozdrabnia. Surowiec w ilości 250 g i poddaje się ekstrakcji 2000 cm3 1,5M wodnego roztworu amoniaku z dodatkiem 30 g mrówczanu amonu w temperaturze 50°C, przez 10 godzin, cztery razy. Następnie, frakcję alkaliczną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się, otrzymując roztwór, który zobojętnia się do pH = 6,8 za pomocą roztworu 0,1M kwasu azotowego. Ekstrakt zagęszcza się zmniejszając jego objętość o połowę. Do roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 eteru dietylowego. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 30°C, mieszając zawartość naczynia przez 10 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 10-krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 eteru dietylowego, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest cyklooktan, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 150°C, przez 8 godzin, mieszając zawartość naczynia. Proces ekstrakcji cyklooktanem powtarza się 3-krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając organiczną. Następnie, frakcję wodną poddaje ekstrakcji chloroformem przez 10 godzin, 2-krotnie, w temperaturze 60°C. W kolejnym etapie fazę wodną po rozdzieleniu od frakcji rozpuszczalnika organicznego poddaje ekstrakcji mieszaniną heksanolu z octanem etylu w proporcjach 1:1, w ilości 1000 cm3, przez 10 godzin, 4-krotnie, w temperaturze 70°C. Frakcję wodną rozdziela się od organicznej i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 15% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 50 cm3 0,5% roztworze hydrazyny i sączy się na sączku, przepuszczającym substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. W procesie sączenia osad zebrany na sączku przepłukuje się jeszcze 0,5% roztworem hydrazyny w ilości 500 cm3. Osad, który stanowią substancje o masie cząsteczkowej > 5000 Da, suszy się otrzymując środek w postaci proszku stanowiącego 9% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm3 glikolu dietylenowego i mieszając zawartość naczynia w temperaturze 150°C przez 2 doby. Nierozpuszczalną w glikolu dietylenowym część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją glikolu dietylenowego, powtarzając ekstrakcję i rozdzielanie. W sumie stosuje się 40 porcji glikolu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w glikolu dietylenowym osad, który suszy się. Otrzymany środek roślinny stanowi 1,3% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
PL 211 520 B1
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 56,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | 561,0 | 384,8 | 195,0 | 90,2 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,5 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | 203,0 | 57,0 | 40,1 | 29,4 | 25,8 |
P r z y k ł a d 62
Zbiera się ziele rzepiku pospolitego, od lipca do sierpnia, które suszy się i rozdrabnia. Surowiec w ilości 250 g i poddaje się ekstrakcji 2000 cm3 1M wodnego roztworu mocznika z dodatkiem 40 g węglanu sodu w temperaturze 100°C, przez 6 godzin, dwa razy. Następnie, frakcję alkaliczną, zawierającą ekstrakt roślinny odsącza się od roślinnych pozostałości, otrzymując roztwór, który zobojętnia się do pH = 6,6 za pomocą roztworu 0,1M kwasu solnego. Do roztworu ekstraktu roślinnego dodaje się 1000 cm3 heptanu. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 98°C, mieszając zawartość naczynia przez 5 godzin. Następnie, rozdziela się frakcję wodną odrzucając fazę rozpuszczalnika organicznego. Proces powtarza się 6-krotnie, dodając do frakcji wodnej kolejną porcję 1000 cm3 heptanu, stosując takie same warunki ekstrakcji. Po oddzieleniu od frakcji organicznej frakcji wodnej, dodaje się do niej drugi rozpuszczalnik, którym jest eter dipropylowy, w ilości 1000 cm3. Ekstrakcję prowadzi się w temperaturze 60°C, przez 8 godzin, mieszając zawartość naczynia. Ekstrakcję eterem dipropylowym powtarza się 7-krotnie, zachowując frakcję wodną, a odrzucając organiczną. Następnie, frakcję wodną poddaje ekstrakcji chloroformem przez 5 godzin, 5-krotnie, w temperaturze 45°C. W kolejnym etapie fazę wodną po rozdzieleniu od frakcji rozpuszczalnika organicznego poddaje ekstrakcji 1-pentanolem, w ilości 1000 cm3, przez 8 godzin, 5-krotnie, w temperaturze 100°C, mieszając. Frakcję wodną rozdziela się od alkoholu i odparowuje do konsystencji proszku. Otrzymany środek roślinny stanowi 11% ogólnej, suchej masy użytego w tym procesie ekstraktu. Tak otrzymany ekstrakt roślinny rozpuszcza się w 20 cm3 3% roztworu amoniaku i sączy się na kolumnie wypełnionej sitami molekularnymi, przepuszczającymi w pierwszej kolejności substancje o masie cząsteczkowej mniejszej niż 5000 Da. W procesie sączenia kolumnę eluuje się 3% roztworem amoniaku w ilości 2000 cm3, odrzucając pierwszą, małocząsteczkową frakcję. Zbiera się frakcję o masie cząsteczkowej > 5000 Da, która po odparowaniu do sucha do postaci proszku stanowi 7% ekstraktu roślinnego użytego na początku procesu. Otrzymany w formie proszku, ekstrakt roślinny poddaje się ekstrakcji z fazy stałej, wsypując go do 500 cm glikolu propylenowego i mieszając zawartość naczynia w temperaturze pokojowej przez 2 doby. Nierozpuszczalną w glikolu propylenowym część ekstraktu oddziela się od cieczy i ponownie zalewa się porcją glikolu propylenowego, powtarzając ekstrakcję i rozdzielanie. W sumie stosuje się 20 porcji glikolu. Ostatecznie otrzymuje się nierozpuszczalny w glikolu propylenowym osad, który suszy się. Otrzymany środek roślinny stanowi 2,1% ogólnej, suchej masy użytego na początku ekstraktu. Otrzymany środek roślinny hamuje krzepliwość krwi, co wykazano w teście APTT oraz w teście PT.
| TEST APTT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 58,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | >600,0 | 366,7 | 208,0 | 92,0 | 70,4 |
| TEST PT | ||||||||
| Próba kontr. | Pomiar czasu krzepnięcia (s) dla środka o stężeniu 12,5 mg/ml oraz jego kolejnych rozcieńczeń | |||||||
| 1/1 | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | 1/128 | |
| 12,0 | >300,0 | >300,0 | >300,0 | 77,0 | 42,0 | 31,1 | 27,0 | 23,8 |
PL 211 520 B1
Claims (3)
1. Sposób otrzymywania środka hamującego krzepliwość krwi z surowców roślinnych, znamienny tym, że rozdrobnione korzenie i/lub ziele, i/lub liście, i/lub kwiaty, i/lub kwiatostany, i/lub owoce, i/lub nasiona roślin wyższych, wybranych z rodziny roślin różowatych (Rosaceae), takiej jak wiązówka błotna (Filipendula ulmaria), czeremcha zwyczajna (Cerasus padu), poziomka pospolita (Fragaria vesca), krwiściąg lekarski (Sanguisohra officinalis), głóg dwuszyjkowy (Cartaegus laevigata), jeżyna fałdowana (Rubus plicalus), rzepik pospolity (Agrimonia eupatoriu) lub rośliny wybrane z rodziny roślin astrowatych (Asleraceae), obejmującej krwawnik pospolity (Achillea millefolium), jeżówkę purpurową (Echinacea purpura), przymiotno kanadyjskie (Conyza canadensis), arnikę górską (Arnica motana), nawłoć pospolitą (Solidago virga aura), rumianek pospolity (Matricaria chamomilla) oraz podbiał pospolity (Tussilago fanfara), w ilości 0,20 do 0,25 części masowych, poddaje się ekstrakcji wodą i/lub alkoholem niższym, i/lub alkoholem wielowodorotlenowym, i/lub roztworem soli, i/lub wodnym roztworem alkalicznym, stosując 10-20 części masowych rozpuszczalnika roztworu lub mieszaniny rozpuszczalników i/lub roztworów zmieszanych w proporcjach części masowych składników, w zakresie od 100:1 do 1:50, przy czym jako alkohol niższy stosuje się metanol, etanol, 1-propanol, 2-propanol, 2-butanol, tertbutanol, izobutanol, alkohol allilowy, alkohol propargilowy, jako alkohol wielowodorotlenowy glikoletylenowy, glikol propylenowy, glikol dietylenowy, glicerol, jako roztwór soli stosuje się roztwór soli wybranej z grupy obejmującej chlorek sodu, chlorek potasu, siarczan sodu, siarczan potasu, azotan sodu, azotan potasu, azotan amonu, fosforan sodu, fosforan potasu, węglan sodu, węglan potasu, mrówczan sodu, mrówczan potasu, mrówczan amonu, octan sodu, octan potasu, octan amonu, szczawian sodu, szczawian potasu, salicylan sodu, winian disodowy, winian sodowo-potasowy, winian dipotasowy, cytrynian sodu, cytrynian potasu, a jako wodny roztwór alkaliczny stosuje się roztwór związku wybranego z grupy obejmującej wodorotlenek sodu, wodorotlenek potasu, wodorotlenek wapnia, amoniak, hydrazynę, mocznik lub ich mieszaniny z solami, ekstrakcję powtarza się 1-10 razy, w przedziale temperatur 5°C-170°C, następnie w razie konieczności zobojętnia się środowisko do pH = 6,5-7,5 i otrzymane surowe ekstrakty roślinne zatęża się, a w drugim etapie z otrzymanych ekstraktów wyodrębnia się substancje o aktywności antykoagulacyjnej wobec krwi, na drodze ekstrakcji rozpuszczalnikami w układach dwufazowych, w proporcjach objętościowych faz 1:1, w których pierwszą fazę stanowi ekstrakt roślinny w postaci cieczy, uzyskany w pierwszym etapie, a drugą fazę stanowi rozpuszczalnik lub mieszanina rozpuszczalników organicznych takich jak pentan, heksan, heptan, oktan, nonan, dekan, cyklopentan, cykloheksan, cykloheptan, cyklooktan, toluen, ksylen, eter dietylowy, eter dipropylowy, eter diizopropylowy, eter dibutylowy, chloroform, chlorek metylenu, dichloroetan, trichloroetylen, tetrachloroetylen, chlorek tertbutylu, 1-pentanol, izopentanol, heksanol, heptanol, oktanol, octan etylu, przy czym proces ekstrakcji w drugim etapie prowadzi się w nieograniczonym czasie, w przedziale temperatur 15°C-150°C, korzystnie mieszając, odrzucając po każdej ekstrakcji fazę rozpuszczalnika organicznego, powtarzając ten proces 1-10 razy, następnie uzyskany w drugim etapie po ekstrakcji roztwór środka o właściwościach antykoagulacyjnych względem krwi suszy się do konsystencji proszku i/lub poddaje się ekstrakcji z fazy stałej ekstraktu roślinnego rozpuszczalnikami, takimi jak alkohol z grupy obejmującej metanol, etanol, 1-propanol, 2-propanol, 2-butanol, tertbutanol, izobutanol, alkohol allilowy, alkohol propargilowy 1-pentanol, izopentanol, heksanol, heptanol, oktanol i/lub alkohol wielowodorotlenowy, taki jak glikol etylenowy, glikol propylenowy, glikol dietylenowy, glicerol lub ich mieszaniny, i/lub pentan, heksan, heptan, oktan, nonan, dekan, cyklopentan, cykloheksan, cykloheptan, cyklooktan, toluen, ksylen, eter dietylowy, eter dipropylowy, eter diizopropylowy, eter dibutylowy, chloroform, chlorek metylenu, dichloroetan, trichloroetylen, tetrachloroetylen, chlorek tertbutylu, octan etylu lub ich mieszaniny, przy czym ekstrakcję prowadzi się, przy zachowaniu proporcji części masowych rozpuszczalnika w stosunku do ilości części masowych surowca roślinnego, użytego na początku całego procesu, w zakresie od 1:1 do 20:1, podczas procesu miesza się reagenty, odrzucając po każdej ekstrakcji fazę rozpuszczalnika organicznego, powtarzając proces ekstrakcji 1-50 razy, a otrzymany środek o właściwościach antykoagulacyjnych względem krwi oddziela się od cieczy i suszy i/lub poddaje się separacji aktywnych substancji makrocząsteczkowych o masie > 5000 Da od pozostałych składników ekstraktu.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w celu wyodrębnia substancji roślinnych o masie > 5000 Da od pozostałych składników ekstraktu, rozpuszcza się ekstrakt w wodzie i/lub w roztworze soli z grupy obejmującej chlorek sodu, chlorek potasu, siarczan sodu, siarczan potasu, azotan sodu, azotan potasu, azotan amonu, fosforan sodu, fosforan potasu, węglan sodu, węglan potasu,
PL 211 520 B1 mrówczan sodu, mrówczan potasu, mrówczan amonu, octan sodu, octan potasu, octan amonu, szczawian sodu, szczawian potasu, salicylan. sodu, winian disodowy, winian sodowo-potasowy, winian dipotasowy, cytrynian sodu, cytrynian potasu lub ich mieszaniny i/lub w roztworze alkalicznym, takim jak wodorotlenek sodu, wodorotlenek potasu, wodorotlenek wapnia, amoniak, hydrazyna, mocznik lub ich mieszaniny, który poddaje się procesowi sączenia przez barierę, która nie przepuszcza składników ekstraktu roślinnego o masie cząsteczkowej > 5000 Da, w postaci sita molekularnego, sączka, membrany lub worka dializacyjnego, a otrzymany środek o właściwościach antykoagulacyjnych względem krwi, którego składnikami są substancje makrocząsteczkowe o masie > 5000 Da, suszy się do konsystencji proszku.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że proces ekstrakcji w drugim etapie prowadzi się w nieograniczonym czasie, w przedziale temperatur 15°C-150°C.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL380474A PL211520B1 (pl) | 2006-08-21 | 2006-08-21 | Sposób wytwarzania środka hamującego krzepliwość krwi |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL380474A PL211520B1 (pl) | 2006-08-21 | 2006-08-21 | Sposób wytwarzania środka hamującego krzepliwość krwi |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL380474A1 PL380474A1 (pl) | 2008-03-03 |
| PL211520B1 true PL211520B1 (pl) | 2012-05-31 |
Family
ID=43033929
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL380474A PL211520B1 (pl) | 2006-08-21 | 2006-08-21 | Sposób wytwarzania środka hamującego krzepliwość krwi |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL211520B1 (pl) |
-
2006
- 2006-08-21 PL PL380474A patent/PL211520B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL380474A1 (pl) | 2008-03-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101486931B1 (ko) | 해조류 추출물로부터 푸코이단을 정제하는 방법 | |
| Pawlaczyk et al. | Polyphenolic-polysaccharide compounds from selected medicinal plants of Asteraceae and Rosaceae families: Chemical characterization and blood anticoagulant activity | |
| US20090186851A1 (en) | Hemostatic material | |
| US20040170645A1 (en) | Seaweed extract composition for retardation of cardiovascular disorders and preservation of healthy cardiovascular function | |
| Zhao et al. | Preparation and characterization of tranexamic acid modified porous starch and its application as a hemostatic agent | |
| CN105920069B (zh) | 一种朝鲜蓟多酚的酵母微胶囊及其制备方法 | |
| He et al. | Multifunctional Bletilla striata polysaccharide/copper/peony leaf sponge for the full-stage wound healing | |
| Khan | Anticoagulant and thrombolytic activities of leaf extract of mangifera indica in smokers | |
| CN105126152A (zh) | 一种明胶壳聚糖复合止血粉 | |
| FR2491074A1 (fr) | Complexe de sulfate de chondroitine et d'un agent complexant | |
| US20040208893A1 (en) | Seaweed extract composition for treatment of diabetes and diabetic complications | |
| Zhang et al. | Fabrication and hemostasis evaluation of a carboxymethyl chitosan/sodium alginate/Resina Draconis composite sponge | |
| KR100882462B1 (ko) | 제주산 홍조류의 효소적 추출물을 이용한 항혈액응고성설페이티드 갈락탄조성물 | |
| KR20050076104A (ko) | 심혈관계 질환 개선 조성물 | |
| PL211520B1 (pl) | Sposób wytwarzania środka hamującego krzepliwość krwi | |
| RU2033173C1 (ru) | Способ получения препарата из медицинской пиявки, обладающего антитромботическим, тромболитическим, антиатеросклеротическим и гипотензивным действием | |
| Chen et al. | Preparation of a modified silk-based gel/microsphere composite as a potential hepatic arterial embolization agent | |
| WO2021098701A1 (zh) | 红肉苹果产品在抑制血栓形成方面的应用 | |
| AU2009290466B2 (en) | Composition of thrombolytic agent and anti thrombosis and also its production method | |
| KR20070038487A (ko) | 뇌혈전,심근경색,당뇨의예방치료의성분을함유하는복합조성물 | |
| EP4360638B1 (en) | Application of sulfate gluco-galacto-oligosaccharide in preparation of anticoagulant and/or antithrombotic drug | |
| WO2004103280A2 (en) | Seaweed extract composition for treatment of diabetes and diabetic complications | |
| KR101972080B1 (ko) | 섬말나리 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물 | |
| Ohkura | Potential applications of Chinese herbal medicines with hemostatic properties | |
| US2921000A (en) | Thromboplastin |