PL206271B1 - Method for modification of bio-membranes - Google Patents
Method for modification of bio-membranesInfo
- Publication number
- PL206271B1 PL206271B1 PL366960A PL36696004A PL206271B1 PL 206271 B1 PL206271 B1 PL 206271B1 PL 366960 A PL366960 A PL 366960A PL 36696004 A PL36696004 A PL 36696004A PL 206271 B1 PL206271 B1 PL 206271B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- solution
- membrane
- bio
- membranes
- washed
- Prior art date
Links
- 239000012528 membrane Substances 0.000 title claims description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 27
- 238000012986 modification Methods 0.000 title claims description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 title claims description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 21
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 21
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 13
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 4
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 3
- -1 polycyclic phenols Chemical class 0.000 claims description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 2
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 71
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 26
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 20
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 10
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 8
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 7
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 7
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 7
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 5
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 5
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 5
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 5
- 229920005597 polymer membrane Polymers 0.000 description 5
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N pyrogallol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1O WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 3
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 2
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 2
- 229940079877 pyrogallol Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 229920000298 Cellophane Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 229920000767 polyaniline Polymers 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000003911 water pollution Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Opis wynalazkuDescription of the invention
Przedmiotem wynalazku jest sposób modyfikacji bio-membran polifenolowych, przeznaczonych do stosowania w analizie laboratoryjnej, sensoryce, biotechnologiach, procesach technologicznych z dziedziny chemii, technologii ż ywnoś ci i inż ynierii ś rodowiska.The subject of the invention is a method of modification of polyphenolic bio-membranes, intended for use in laboratory analysis, sensory technology, biotechnology, technological processes in the field of chemistry, food technology and environmental engineering.
Z polskiego opisu patentowego nr 204 512 znany jest sposób wytwarzania bio-membran polifenolowych, na bazie błony wiskozowej, polegający na tym, że proces polimeryzacji substancji fenolowych prowadzi się na granicy dwu roztworów, utworzonej przy pomocy półprzepuszczalnej błony. Jeden z roztworów zawiera enzym peroksydazę, a drugi zawiera substraty dla tego enzymu, tworzące polimer w wyniku reakcji enzymatycznej. Półprzepuszczalna błona pozwala na dyfuzję cząsteczek substratów i ich stopniowy kontakt z enzymem, lecz uniemożliwia jednoczesne wymieszanie zawartości obu roztworów i zajście reakcji polimeryzacji w całej masie.Polish patent specification No. 204 512 describes a method of producing polyphenolic bio-membranes based on a viscose film, where the polymerization process of phenolic substances is carried out at the boundary of two solutions, formed by a semi-permeable membrane. One of the solutions contains the enzyme peroxidase, and the other contains substrates for this enzyme, forming a polymer by the enzymatic reaction. The semi-permeable membrane allows diffusion of substrate molecules and their gradual contact with the enzyme, but prevents simultaneous mixing of the contents of both solutions and the entire mass of the polymerization reaction from taking place.
Według tego sposobu, jako enzym, stosuje się peroksydazy roślinne z chrzanu, soi, ziemniaka, zarówno o wysokiej liczbie czystości Reinheitzahl'a równej RZ=3,0, jak i preparaty tylko częściowo oczyszczone o liczbie czystości RZ=0,3.According to this method, plant peroxidases from horseradish, soybean and potato, both with a high Reinheitzahl purity number equal to RZ = 3.0, and only partially purified preparations with a purity number RZ = 0.3, are used as the enzyme.
Substratami enzymu są jedno lub wielopierścieniowe fenole, mogące zawierać podstawniki o charakterze grup acylowych, aminowych albo karboksylowych. Korzystnym substratem są również pochodne fenolowe o jednym albo kilku pierścieniach aromatycznych, zawierające jedną albo więcej grup fenolowych, korzystnie z podstawnikami o charakterze alifatycznym, w postaci grup aminowych, karboksylowych, albo mieszaniny tych związków.The substrates for the enzyme are monocyclic or polycyclic phenols which may contain acyl, amino or carboxyl substituents. Phenolic derivatives having one or more aromatic rings, containing one or more phenolic groups, preferably with substituents of an aliphatic nature, in the form of amino, carboxyl groups, or mixtures of these compounds, are also a preferred substrate.
Proces polimeryzacji prowadzi się w roztworach o pH od 3,0 do 9,0, korzystnie w zakresie pH od 5,0 do 7,0, w temperaturze od 0 do 45°C, korzystnie w zakresie 15 do 25°C, przy stężeniach substratu od 0,01 do 50 milimoli, korzystnie w zakresie 0,1 do 5 milimoli.The polymerization process is carried out in solutions with a pH of 3.0 to 9.0, preferably in the pH range of 5.0 to 7.0, at a temperature of 0 to 45 ° C, preferably in the range of 15 to 25 ° C, at concentrations of the substrate from 0.01 to 50 millimoles, preferably in the range 0.1 to 5 millimoles.
Znane membrany według wynalazku mogą służyć jako elementy jonowymienne, selekcjonujące cząsteczki zgodnie z ich rozmiarem, jako powierzchnie do immobilizacji makrocząsteczek, jako powierzchnie w bioreaktorach, bio-sensorach i stosowane jako półprzepuszczalne przegrody oddzielające część roboczą urządzenia od makrocząsteczek znajdujących się w otoczeniu, które mogłyby zakłócać przebieg reakcji oddziałując na bio-cząsteczki biorące bezpośredni udział w reakcji.Known membranes according to the invention can serve as ion exchange elements, selecting molecules according to their size, as surfaces for the immobilization of macromolecules, as surfaces in bioreactors, bio-sensors and as semi-permeable partitions separating the working part of the device from the surrounding macromolecules that could interfere with the course of the reaction affecting the bio-molecules directly involved in the reaction.
Dzięki zastosowaniu glutaraldehydu, możliwe jest przytwierdzanie makrocząsteczek biologicznych do podłoża zawierającego grupy funkcyjne -NH2 poprzez immobilizację bio-molekuł wiązaniami kowalencyjnymi (S. Costa, T.Z. Tzanov, A. Paar, M. Gudelj, G.M. Gubitz and A. Cavaco-Paulo, Enzyme and Microbial Technology, 2001, vol. 28).Thanks to the use of glutaraldehyde, it is possible to attach biological macromolecules to the substrate containing the -NH2 functional groups by immobilizing the bio-molecules with covalent bonds (S. Costa, TZ Tzanov, A. Paar, M. Gudelj, GM Gubitz and A. Cavaco-Paulo, Enzyme and Microbial Technology, 2001, vol. 28).
Znany jest sposób wykorzystania aldehydu glutarowego w celu sprzęgania ze sobą enzymów, jak również innych bio-molekuł zawierających grupę aldehydową począwszy od mono i oligomerów (S. Canofeni, S. Di Sario, J. Mela, R. Pilloton, Analytical letters 27 (9) 1994).There is a known method of using glutaraldehyde to couple together enzymes, as well as other bio-molecules containing an aldehyde group, starting from mono and oligomers (S. Canofeni, S. Di Sario, J. Mela, R. Pilloton, Analytical letters 27 (9 ) 1994).
Istnieje również możliwość zastosowania aldehydu glutarowego w biosensorach DNA przez tworzenie koniugatów DNA - glutaraldehyd - polianilina (SENSPOL: European Network on Sensors for Monitoring Water Pollution Newsletter No. 8 June 2003).It is also possible to use glutaraldehyde in DNA biosensors by creating DNA - glutaraldehyde - polyaniline conjugates (SENSPOL: European Network on Sensors for Monitoring Water Pollution Newsletter No. 8 June 2003).
Znane jest wykorzystanie aldehydu glutarowego jako czynnika wiążącego enzymy na błonie nylonowej, celofanowej oraz tworzącego ich agregaty (K. Mosbach, J.G. London, Methods in Enzymology vd XLIV Immobilized Enzymes; G.P. Chandrika, Current Opinion in Biotechnology, 1999, vol. 10, p. 331-335).It is known to use glutaraldehyde as a binding agent for enzymes on nylon, cellophane membranes and their aggregates (K. Mosbach, JG London, Methods in Enzymology vd XLIV Immobilized Enzymes; GP Chandrika, Current Opinion in Biotechnology, 1999, vol. 10, p. 331-335).
Znane jest tworzenie membran enzymatycznych poprzez kopolimeryzację nałożonych na nylonową błonę składników mieszaniny złożonej z albuminy surowicy krwi, enzymu i aldehydu glutarowego (T.Z. Tzanov, J. Andreaus, G.M. Gubitz, A. Cavaco-Paulo, Physic of life, 6 (3) 2003).It is known to create enzymatic membranes by copolymerizing the components of a mixture of serum albumin, enzyme and glutaraldehyde applied to a nylon membrane (TZ Tzanov, J. Andreaus, GM Gubitz, A. Cavaco-Paulo, Physic of life, 6 (3) 2003) .
Istota wynalazkuThe essence of the invention
Według wynalazku, sposób modyfikacji bio-membran polega na tym, iż powierzchnia nowo utworzonej membrany polifenolowej zostaje inkrustowana makrocząsteczkami biologicznymi poprzez immobilizację tych makrocząsteczek wiązaniami kowalencyjnymi na powierzchni polimeru fenolowego, przy pomocy związku sprzęgającego, którym jest aldehyd glutarowy o stężeniu od 0,01% do 50%.According to the invention, the method of modification of bio-membranes consists in the fact that the surface of the newly formed polyphenolic membrane is encrusted with biological macromolecules by immobilizing these macromolecules with covalent bonds on the surface of the phenolic polymer, with the use of a coupling compound which is glutaraldehyde with a concentration from 0.01% to 50%.
Korzystne rezultaty według wynalazku osiąga się wówczas, gdy stężenie aldehydu glutarowego wynosi od 5% do 25% w temperaturze od 0 do 45°C, najlepiej w zakresie 15 do 25°C.The preferred results according to the invention are achieved when the concentration of glutaraldehyde is 5% to 25% at a temperature of 0 to 45 ° C, preferably in the range 15 to 25 ° C.
Immobilizowane są makrocząsteczki biologiczne korzystnie enzymy (peroksydaza, oksydaza glukozy lub inne enzymy) oraz immunoglobuliny.Biological macromolecules, preferably enzymes (peroxidase, glucose oxidase or other enzymes) and immunoglobulins are immobilized.
Proces immobilizacji prowadzono na półprzepuszczalnych membranach polifenolowych, wytwarzanych z fenoli jedno lub wielopierścieniowych z podstawnikami o charakterze grup aminowych orazThe immobilization process was carried out on semi-permeable polyphenolic membranes, made of single or multi-ring phenols with amino groups and
PL 206 271 B1 pochodnych fenolowych o jednym lub kilku pierścieniach aromatycznych, zawierających jedną albo więcej grup fenolowych, korzystnie z podstawnikami w postaci grup aminowych.Phenolic derivatives with one or more aromatic rings containing one or more phenolic groups, preferably with amino substituents.
W celu zapewnienia odpowiednich warunków dla procesu sprzęgania makrocząsteczek biologicznych na powierzchni błony, proces immobilizacji prowadzi się w roztworach buforowych o pH od 3,0 do 9,0, korzystnie w zakresie pH od 5,5 do 7,5, w temperaturze od 0 do 45°C, korzystnie w zakresie 15 do 25°C oraz stężeniu od 0,0 1M do 1,5M, korzystnie w zakresie od 0,05 do 0,5M.In order to ensure appropriate conditions for the coupling process of biological macromolecules on the membrane surface, the immobilization process is carried out in buffer solutions with a pH of 3.0 to 9.0, preferably in the pH range of 5.5 to 7.5, at a temperature of 0 to 45 ° C, preferably in the range 15 to 25 ° C, and at a concentration of 0.01M to 1.5M, preferably in the range of 0.05 to 0.5M.
Modyfikację powierzchni biosensorów według wynalazku przeprowadza się w dwóch etapach. W pierwszym etapie nawilż oną wcześ niej bł onę aktywuje się buforowanym roztworem aldehydu glutarowego przez okres kilku godzin, a następnie nadmiar aldehydu usuwa się przez kilkukrotne przemywanie roztworem buforowym. W drugim etapie zaktywowaną wcześniej błonę inkubuje się z roztworem makrocząsteczek biologicznych przez noc, a następnie przemywa kilkukrotnie buforowanym roztworem soli. Grupy aldehydowe niepodstawione przez enzym blokuje się przez traktowanie błony roztworem dietanoloaminy lub odpowiednich amin, aminokwasów i białek.The surface modification of the biosensors according to the invention is carried out in two stages. In the first step, the previously moistened film is activated with a buffered glutaraldehyde solution for a period of several hours, and then the excess aldehyde is removed by washing several times with the buffer solution. In the second step, the previously activated membrane is incubated overnight with a solution of biological macromolecules and then washed several times with buffered saline. The aldehyde groups not substituted by the enzyme are blocked by treating the membrane with a solution of diethanolamine or appropriate amines, amino acids and proteins.
Sposobem według wynalazku uzyskuje się powierzchnię zawierającą aktywne biologicznie makrocząsteczki zespolone z półprzepuszczalną membraną polifenolową, gdzie ilość oraz aktywność immobilizowanych na powierzchni błony związków, jest uzależniona w znacznej mierze od stężenia związku sprzęgającego, stężenia ligandu, rodzaju buforu stosowanego podczas immobilizacji oraz chemicznego charakteru błony macierzystej.By the method according to the invention, a surface containing biologically active macromolecules associated with a semi-permeable polyphenol membrane is obtained, where the amount and activity of the compounds immobilized on the surface of the membrane depends to a large extent on the concentration of the coupling compound, the concentration of the ligand, the type of buffer used during the immobilization and the chemical nature of the mother membrane.
Skuteczność sprzęgania unieruchamianych na powierzchni błony enzymów oceniano przez pomiar spektrofotometryczny przy długości fali λ=400 nm mierząc ilość powstającego produktu w czasie. Aktywność oksydazy glukozy mierzono na podstawie iloś ci nadtlenku wodoru powstającego wskutek enzymatycznego rozkładu znajdującej się w roztworze glukozy, który wraz z pirogallolem stanowi substrat reakcji peroksydazy dając produkt barwny.The efficiency of conjugation of the enzymes immobilized on the surface of the membrane was assessed by spectrophotometric measurement at the wavelength λ = 400 nm by measuring the amount of product formed over time. Glucose oxidase activity was measured on the basis of the amount of hydrogen peroxide formed as a result of enzymatic decomposition of glucose present in the solution, which, together with pyrogallol, is a substrate for the peroxidase reaction to give a color product.
Aktywność peroksydazy mierzono na podstawie ilości produktu barwnego powstającego wskutek enzymatycznej reakcji tego enzymu przy udziale pirogallolu i nadtlenku wodoru stanowiących substraty reakcji peroksydazy.The peroxidase activity was measured on the basis of the amount of the color product formed as a result of the enzymatic reaction of this enzyme with the participation of pyrogallol and hydrogen peroxide as substrates of the peroxidase reaction.
Membrany według wynalazku mogą służyć jako powierzchnie w bioreaktorach, bio-sensorach i mogą być stosowane jako aktywne bio-chemicznie pół przepuszczalne przegrody oddzielają ce część roboczą urządzenia od makrocząsteczek znajdujących się w otoczeniu, które mogłyby zakłócać przebieg reakcji oddziałując na bio-cząsteczki biorące bezpośredni w niej udział.The membranes according to the invention can serve as surfaces in bioreactors, bio-sensors and can be used as bio-chemically active semi-permeable partitions separating the working part of the device from the surrounding macromolecules, which could interfere with the course of the reaction by affecting bio-molecules directly in her share.
P r z y k ł a d 1P r z k ł a d 1
Membranę z polimeru benzydyny przemywano wodą destylowaną i buforem fosforanowym (pH = 7,5), a nastę pnie naniesiono na powierzchnię membrany roztwór 25% aldehydu glutarowego doprowadzając pH roztworu do wartości 7,5 przy pomocy 1M roztworu Na2HPO4. Membranę z roztworem wytrząsano przez noc w temperaturze 37°C. Następnie przemywano 10 ml 0,2 buforu fosforanowego (pH = 7,5) i tak aktywowaną błonę przechowywano w temperaturze 4°C do czasu sprzęgania z enzymem.The benzidine polymer membrane was washed with distilled water and phosphate buffer (pH = 7.5), and then a 25% glutaraldehyde solution was applied to the membrane surface, adjusting the pH of the solution to 7.5 with 1M Na2HPO4 solution. The membrane with the solution was shaken overnight at 37 ° C. Subsequently, it was washed with 10 ml of 0.2 phosphate buffer (pH = 7.5) and the thus activated membrane was stored at 4 ° C until conjugation with the enzyme.
Sporządzono roztwór enzymu peroksydazy w wodzie redestylowanej (1 mg/ml), który umieszczono na powierzchni membrany. Całość inkubowano przez noc w 4°C delikatnie mieszając. Następnie powierzchnię przemyto roztworem 0.1M buforu octanowego (pH = 5,5) i 0,05M buforu octanowego (pH = 5,5) z 1M NaCl. Na powierzchni błony umieszczono 100 mM roztwór dietanoloaminy (pH = 7,5) i inkubowano w temperaturze pokojowej przez ok. 4 godziny. Przemywano roztworem 1xPBS (pH =A solution of the peroxidase enzyme in redistilled water (1 mg / ml) was prepared and placed on the surface of the membrane. This was incubated overnight at 4 ° C with gentle agitation. The surface was then washed with a solution of 0.1M acetate buffer (pH = 5.5) and 0.05M acetate buffer (pH = 5.5) with 1M NaCl. A 100 mM diethanolamine solution (pH = 7.5) was placed on the surface of the membrane and incubated at room temperature for ca. 4 hours. Washed with 1xPBS solution (pH =
7,5) i przechowywano w temperaturze 4°C z udziałem 0,02% roztworu NaN3.7.5) and stored at 4 ° C with 0.02% NaN3 solution.
P r z y k ł a d 2P r z k ł a d 2
Membranę z polimeru benzydyny przemywano wodą destylowaną i buforem fosforanowym (pH = 7,5), a następnie naniesiono na powierzchnię membrany roztworu 15% aldehydu glutarowego doprowadzając pH roztworu do wartości 7,5 przy pomocy 1M roztworu Na2HPO4. Membranę z roztworem wytrząsano przez noc w temperaturze 37°C. Następnie przemywano 10 ml 0,2 buforu fosforanowego (pH = 7,5) i tak aktywowaną błonę przechowywano w temperaturze 4°C do czasu sprzęgania z enzymem.The benzidine polymer membrane was washed with distilled water and phosphate buffer (pH = 7.5), and then applied to the membrane surface with a 15% glutaraldehyde solution, adjusting the pH of the solution to 7.5 with 1M Na2HPO4 solution. The membrane with the solution was shaken overnight at 37 ° C. Then it was washed with 10 ml of 0.2 phosphate buffer (pH = 7.5) and the thus activated membrane was stored at 4 ° C until conjugation with the enzyme.
Sporządzono roztwór oksydazy glukozy w wodzie redestylowanej (6 mg/ml), który umieszczono na powierzchni membrany. Całość inkubowano przez noc w 4°C delikatnie mieszając. Następnie powierzchnię przemyto roztworem 0,2M buforu fosforanowego (pH = 7,5) i 0,05M buforu fosforanowego (pH = 7,5) z 1M NaCl. Na powierzchni błony umieszczono 100 mM roztwór dietanoloaminy (pH = 7,5) i inkubowano w temperaturze pokojowej przez ok. 4 godziny. Przemywano roztworem 1xPBS (pH =A solution of glucose oxidase in redistilled water (6 mg / ml) was prepared and placed on the membrane surface. This was incubated overnight at 4 ° C with gentle agitation. The surface was then washed with a solution of 0.2M phosphate buffer (pH = 7.5) and 0.05M phosphate buffer (pH = 7.5) with 1M NaCl. A 100 mM diethanolamine solution (pH = 7.5) was placed on the surface of the membrane and incubated at room temperature for ca. 4 hours. Washed with 1xPBS solution (pH =
7,5) i przechowywano w temperaturze 4°C z udziałem 0,02% roztworu NaN3.7.5) and stored at 4 ° C with 0.02% NaN3 solution.
PL 206 271 B1PL 206 271 B1
P r z y k ł a d 3P r z k ł a d 3
Membranę z polimeru benzydyny przemywano wodą destylowaną i buforem fosforanowym (pH = 7,5), a nastę pnie naniesiono na powierzchnię membrany roztworu 5% aldehydu glutarowego doprowadzając pH roztworu do wartości 7,5 przy pomocy 1M roztworu Na2HPO4. Membranę z roztworem wytrząsano przez noc w temperaturze 37°C. Następnie przemywano 10 ml 0,2 buforu fosforanowego (pH = 7,5) i tak aktywowaną błonę przechowywano w temperaturze 4°C do czasu sprzęgania z enzymem.The benzidine polymer membrane was washed with distilled water and phosphate buffer (pH = 7.5) and then applied to the membrane surface with a 5% glutaraldehyde solution adjusting the pH of the solution to 7.5 with 1M Na2HPO4 solution. The membrane with the solution was shaken overnight at 37 ° C. Subsequently, it was washed with 10 ml of 0.2 phosphate buffer (pH = 7.5) and the thus activated membrane was stored at 4 ° C until conjugation with the enzyme.
Sporządzono roztwór złożony z dwóch enzymów peroksydazy (1 mg/ml) i oksydazy glukozy (6 mg/ml) w wodzie redestylowanej, który umieszczono na powierzchni membrany. Całość inkubowano przez noc w 4°C delikatnie mieszając. Następnie powierzchnię przemyto roztworem 0,2M buforu fosforanowego (pH=7,5) i 0,05M buforu fosforanowego (pH = 7,5) z 1M NaCl. Na powierzchni błony umieszczono 100 mM roztwór dietanoloaminy (pH = 7,5) i inkubowano w temperaturze pokojowej przez ok. 4 godziny. Przemywano roztworem 1xPBS (pH = 7,5) i przechowywano w temperaturze 4°C z udział em 0,02% roztworu NaN3.A solution of the two enzymes peroxidase (1 mg / ml) and glucose oxidase (6 mg / ml) was prepared in redistilled water and placed on the surface of the membrane. This was incubated overnight at 4 ° C with gentle agitation. The surface was then washed with a solution of 0.2M phosphate buffer (pH = 7.5) and 0.05M phosphate buffer (pH = 7.5) with 1M NaCl. A 100 mM diethanolamine solution (pH = 7.5) was placed on the surface of the membrane and incubated at room temperature for ca. 4 hours. It was washed with 1xPBS solution (pH = 7.5) and stored at 4 ° C with 0.02% NaN3 solution.
P r z y k ł a d 4P r z k ł a d 4
Membranę polimerów benzydyny i aniliny przemywano wodą destylowaną i buforem fosforanowym (pH = 7,5), a następnie naniesiono na powierzchnię membrany roztworu 5% aldehydu glutarowego doprowadzając pH roztworu do wartości 7,5 przy pomocy 1M roztworu Na2HPO4. Membranę z roztworem wytrzą sano przez noc w temperaturze 37°C. Nastę pnie przemywano 10 ml 0,2 buforu fosforanowego (pH = 7,5) i tak aktywowaną błonę przechowywano w temperaturze 4°C do czasu sprzęgania z enzymem.The membrane of benzidine and aniline polymers was washed with distilled water and phosphate buffer (pH = 7.5), and then applied to the membrane surface with a 5% glutaraldehyde solution, adjusting the pH of the solution to 7.5 with 1M Na2HPO4 solution. The membrane with the solution was shaken overnight at 37 ° C. Subsequently, it was washed with 10 ml of 0.2 phosphate buffer (pH = 7.5) and the thus activated membrane was stored at 4 ° C until conjugation with the enzyme.
Sporządzono roztwór składający się z peroksydazy (1 mg/ml) i oksydazy glukozy (6 mg/ml) w wodzie redestylowanej, który umieszczono na powierzchni membrany. Cało ść inkubowano przez noc w 4°C delikatnie mieszając. Następnie powierzchnię przemyto roztworem 0,2M buforu fosforanowego (pH = 7,5) i 0,05M buforu fosforanowego (pH = 7,5) z 1M NaCl. Na powierzchni błony umieszczono 100 mM roztwór dietanoloaminy (pH = 7,5) i inkubowano w temperaturze pokojowej przez ok. 4 godziny. Przemywano roztworem 1xPBS (pH = 7,5) i przechowywano w temperaturze 4°C z udziałem 0,02% roztworu NaN3.A solution consisting of peroxidase (1 mg / ml) and glucose oxidase (6 mg / ml) in redistilled water was prepared and placed on the surface of the membrane. It was incubated overnight at 4 ° C with gentle agitation. The surface was then washed with a solution of 0.2M phosphate buffer (pH = 7.5) and 0.05M phosphate buffer (pH = 7.5) with 1M NaCl. A 100 mM diethanolamine solution (pH = 7.5) was placed on the surface of the membrane and incubated at room temperature for ca. 4 hours. It was washed with 1xPBS solution (pH = 7.5) and stored at 4 ° C with 0.02% NaN3 solution.
P r z y k ł a d 5P r z k ł a d 5
Membranę z polimerów benzydyny i aniliny przemywano wodą destylowaną i buforem fosforanowym (pH = 7,5), a następnie naniesiono na powierzchnię membrany roztworu 25% aldehydu glutarowego doprowadzając pH roztworu do wartości 7,5 przy pomocy 1M roztworu Na2HPO4. Membranę z roztworem wytrzą sano przez noc w temperaturze 37°C. Nastę pnie przemywano 10 ml 0,2 buforu fosforanowego (pH = 7,5) i tak aktywowaną błonę przechowywano w temperaturze 4°C do czasu sprzęgania z enzymem.The membrane of benzidine and aniline polymers was washed with distilled water and phosphate buffer (pH = 7.5), and then applied to the membrane surface with a 25% glutaraldehyde solution, adjusting the pH of the solution to 7.5 with 1M Na2HPO4 solution. The membrane with the solution was shaken overnight at 37 ° C. Subsequently, it was washed with 10 ml of 0.2 phosphate buffer (pH = 7.5) and the thus activated membrane was stored at 4 ° C until conjugation with the enzyme.
Sporządzono roztwór enzymu peroksydazy w wodzie redestylowanej (1 mg/ml), który umieszczono na powierzchni membrany. Całość inkubowano przez noc w 4°C delikatnie mieszając. Następnie powierzchnię przemyto roztworem 0,1M buforu octanowego (pH = 5,5) i 0,05M buforu octanowego (pH = 5,5) z 1M NaCl. Na powierzchni błony umieszczono 100 mM roztwór dietanoloaminy (pH = 7,5) i inkubowano w temperaturze pokojowej przez ok. 4 godziny. Przemywano roztworem 1xPBS (pH =A solution of the peroxidase enzyme in redistilled water (1 mg / ml) was prepared and placed on the surface of the membrane. This was incubated overnight at 4 ° C with gentle agitation. The surface was then washed with a solution of 0.1M acetate buffer (pH = 5.5) and 0.05M acetate buffer (pH = 5.5) with 1M NaCl. A 100 mM diethanolamine solution (pH = 7.5) was placed on the surface of the membrane and incubated at room temperature for ca. 4 hours. Washed with 1xPBS solution (pH =
7,5) i przechowywano w temperaturze 4°C z udziałem 0,02% roztworu NaN3.7.5) and stored at 4 ° C with 0.02% NaN3 solution.
P r z y k ł a d 6P r z k ł a d 6
Membranę z polimeru benzydyny przemywano wodą destylowaną i buforem fosforanowym (pH = 7,5), a następnie naniesiono na powierzchnię membrany roztworu 10% aldehydu glutarowego doprowadzając pH roztworu do wartości 7,5 przy pomocy 1M roztworu Na2HPO4. Membranę z roztworem wytrząsano przez noc w temperaturze 37°C. Następnie przemywano 25 ml 0,2 buforu fosforanowego (pH = 7,5) i tak aktywowaną błonę przechowywano w temperaturze 4°C do czasu sprzęgania z enzymem.The benzidine polymer membrane was washed with distilled water and phosphate buffer (pH = 7.5), and then applied to the membrane surface with a 10% glutaraldehyde solution, adjusting the pH of the solution to 7.5 with 1M Na2HPO4 solution. The membrane with the solution was shaken overnight at 37 ° C. Subsequently, it was washed with 25 ml of 0.2 phosphate buffer (pH = 7.5) and the thus activated membrane was stored at 4 ° C until conjugation with the enzyme.
Sporządzono roztwór immunoglobuliny wirusa X w 0,05M buforze fosforanowym (pH = 7,5), który umieszczono na powierzchni membrany. Całość inkubowano przez noc w 4°C delikatnie mieszając. Następnie powierzchnię przemyto roztworem 0,2M buforu fosforanowego (pH = 7,5) i 0,05M buforu fosforanowego (pH = 7,5) z 1M NaCl. Na powierzchni błony umieszczono 100 mM roztwór dietanoloaminy (pH = 7,5) i inkubowano w temperaturze pokojowej przez ok. 4 godziny. Przemywano roztworem 1xPBS (pH = 7,5) i przechowywano w temperaturze 4°C z udziałem 0,02% roztworu NaN3.A solution of virus X immunoglobulin in 0.05M phosphate buffer (pH = 7.5) was prepared and placed on the membrane surface. This was incubated overnight at 4 ° C with gentle agitation. The surface was then washed with a solution of 0.2M phosphate buffer (pH = 7.5) and 0.05M phosphate buffer (pH = 7.5) with 1M NaCl. A 100 mM diethanolamine solution (pH = 7.5) was placed on the surface of the membrane and incubated at room temperature for ca. 4 hours. It was washed with 1xPBS solution (pH = 7.5) and stored at 4 ° C with 0.02% NaN3 solution.
PL 206 271 B1PL 206 271 B1
P r z y k ł a d 7P r z k ł a d 7
Membranę z polimeru benzydyny przemywano wodą destylowaną i buforem fosforanowym (pH = 7,5), a następnie naniesiono na powierzchnię membrany roztworu 25% aldehydu glutarowego doprowadzając pH roztworu do wartości 7,5 przy pomocy 1M roztworu Na2HPO4. Membranę z roztworem wytrząsano przez noc w temperaturze 37°C. Następnie przemywano 10 ml 0,2 buforu fosforanowego (pH = 7,5) i tak aktywowaną błonę przechowywano w temperaturze 4°C do czasu sprzęgania z enzymem.The benzidine polymer membrane was washed with distilled water and phosphate buffer (pH = 7.5), and then applied to the membrane surface with a 25% glutaraldehyde solution, adjusting the pH of the solution to 7.5 with 1M Na2HPO4 solution. The membrane with the solution was shaken overnight at 37 ° C. Subsequently, it was washed with 10 ml of 0.2 phosphate buffer (pH = 7.5) and the thus activated membrane was stored at 4 ° C until conjugation with the enzyme.
Sporządzono roztwór immunoglobuliny wirusa Y w 0,05M buforze fosforanowym (pH = 7,5), który umieszczono na powierzchni membrany. Całość inkubowano przez noc w 4°C delikatnie mieszając. Następnie powierzchnię przemyto roztworem 0,2M buforu fosforanowego (pH = 7,5) i 0,05M buforu fosforanowego (pH = 7,5) z 1M NaCl. Na powierzchni błony umieszczono 100 mM roztwór dietanoloaminy (pH = 7,5) i inkubowano w temperaturze pokojowej przez ok. 4 godziny. Przemywano roztworem 1xPBS (pH = 7,5) i przechowywano w temperaturze 4°C z udziałem 0,02% roztworu NaN3.Virus Y immunoglobulin solution in 0.05M phosphate buffer (pH = 7.5) was prepared and placed on the membrane surface. This was incubated overnight at 4 ° C with gentle agitation. The surface was then washed with a solution of 0.2M phosphate buffer (pH = 7.5) and 0.05M phosphate buffer (pH = 7.5) with 1M NaCl. A 100 mM diethanolamine solution (pH = 7.5) was placed on the surface of the membrane and incubated at room temperature for ca. 4 hours. It was washed with 1xPBS solution (pH = 7.5) and stored at 4 ° C with 0.02% NaN3 solution.
Claims (8)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL366960A PL206271B1 (en) | 2004-04-05 | 2004-04-05 | Method for modification of bio-membranes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL366960A PL206271B1 (en) | 2004-04-05 | 2004-04-05 | Method for modification of bio-membranes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL366960A1 PL366960A1 (en) | 2005-10-17 |
| PL206271B1 true PL206271B1 (en) | 2010-07-30 |
Family
ID=36645141
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL366960A PL206271B1 (en) | 2004-04-05 | 2004-04-05 | Method for modification of bio-membranes |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL206271B1 (en) |
-
2004
- 2004-04-05 PL PL366960A patent/PL206271B1/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL366960A1 (en) | 2005-10-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bayramoğlu et al. | Covalent immobilisation of invertase onto a reactive film composed of 2-hydroxyethyl methacrylate and glycidyl methacrylate: properties and application in a continuous flow system | |
| Abd El-Ghaffar et al. | Chitosan and its amino acids condensation adducts as reactive natural polymer supports for cellulase immobilization | |
| Arica | Epoxy‐derived pHEMA membrane for use bioactive macromolecules immobilization: Covalently bound urease in a continuous model system | |
| Bora et al. | Photoreactive cellulose membrane—A novel matrix for covalent immobilization of biomolecules | |
| Reiss et al. | Determination of BOD-values of starch-containing waste water by a BOD-biosensor | |
| Guedidi et al. | Effect of enzyme location on activity and stability of trypsin and urease immobilized on porous membranes by using layer-by-layer self-assembly of polyelectrolyte | |
| US3843446A (en) | Preparation of enzymatically active membranes | |
| FR2609723A1 (en) | PROCESS FOR THE PREPARATION OF AN IMMOBILIZED ENZYME OR MICROORGANISM | |
| US3977941A (en) | Protein-enzyme complex membranes | |
| Mehrabi et al. | Polydopamine-functionalized polyethersulfone membrane: A paradigm advancement in the field of α-amylase stability and immobilization | |
| Cochrane et al. | Application of tris (hydroxymethyl) phosphine as a coupling agent for alcohol dehydrogenase immobilization | |
| Pundir et al. | Activation of polyvinyl chloride sheet surface for covalent immobilization of oxalate oxidase and its evaluation as inert support in urinary oxalate determination | |
| Akgöl et al. | Poly (hydroxyethyl methacrylate‐co‐glycidyl methacrylate) reactive membrane utilised for cholesterol oxidase immobilisation | |
| CN109182324B (en) | Shell-core structure immobilized enzyme and preparation method and application thereof | |
| US4601981A (en) | Enzymatically active protein-enzyme complex membranes | |
| Alkan et al. | Immobilization of urease in conducting thiophene-capped poly (methyl methacrylate)/pyrrole matrices | |
| Bagal-Kestwal et al. | Development of dip-strip sucrose sensors: Application of plant invertase immobilized in chitosan–guar gum, gelatin and poly-acrylamide films | |
| US20090068673A1 (en) | Utilization of compatible solutes to improve the performance of the techniques using immobilized biologic materials | |
| Yurekli et al. | Catalytic performances of chemically immobilized urease under static and dynamic conditions: A comparative study | |
| JPS5974984A (en) | Preparation of immobilized enzyme or microorganism | |
| RU2054481C1 (en) | Method of immobilized enzyme preparing | |
| Yabuki et al. | Choline-sensing electrode based on polyethylene glycol-modified enzyme and mediator | |
| Veesar et al. | Application of immobilized α-amylase onto functionalized calix [4] arene for the degradation of starch | |
| Okamoto et al. | Fibrin membrane endowed with biological function. V. Multienzyme complex of uricase, catalase, allantoinase and allantoicase | |
| JPS63304000A (en) | Immobilization method for biological substances |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20110405 |