PL181746B1

PL181746B1 - Method of obtaining modified p-chiral analogues of nucleotides

Info

Publication number: PL181746B1
Application number: PL31024895A
Authority: PL
Inventors: Wojciech J Stec; Lucyna Wozniak
Original assignee: Pan Ct Badan Molekularnych I M
Priority date: 1995-09-01
Filing date: 1995-09-01
Publication date: 2001-09-28
Also published as: PL310248A1

Abstract

Sposób wytwarzania modyfikowanych P-chiralnych analogów nukleotydów o ogólnym wzorze 1 (la+lb), w którym R1 oznaczagrupę blokującą korzystnie 4,4'-dimetoksytrytyl lub 9-fenyloksanten-9-yl, R2 oznacza atom wodoru lub grupę alkoksylową korzystnie metoksylową R4 oznacza grupę blokującą korzystnie acetylową t-butylodimetylosililową lub grupę 5'-O-metanofosfomanową nukleotydu, a B' oznacza N-zablokowanązasadę purynową lub pirymidynową korzystnie wybranąz grupy obejmującej Tyminę, Uracyl, Adeninę, Cytozynę i Guaninę, z wykorzystaniem związków o wzorze ogólnym 2, znamienny tym, że mieszaninę diastereoizomerów nukleozydo 3'-O-metanofosfonotioanilidu o wzorze ogólnym 2 (2a+2b), w którym R1, R2 i B'mająpodane wyżej znaczenie, poddaje się reakcji w wodorkiem sodowym lub l,8-diazabicyklo-[5 4 0]-undek-7-enem (DBU) i dwutlenkiem węgla, a następnie alkiluje się otrzymany przejściowo kwas nukleozydo 3'-0-metanotiofosfonowy (sól sodowa lub DBU-niowa) o wzorze 7(7a+7b) za pomocą odczynnika alkilującego o wzorze 4 w którym R3 oznacza grupę alkilową lub alkiloarylową aX oznacza atom chloru, bromu lubjodu, a otrzymany produkt o ogólnym wzorze 5 (5a+5b) poddaje się reakcji kondensacji z alkoholem o ogólnym wzorze 6 gdzie R2 i R4 mają wyżej podane znaczenieA method of producing modified P-chirals nucleotide analogs of general formula I (Ia + Ib), wherein R1 is a blocking group preferably 4,4'-dimethoxytrityl or 9-phenylxanthen-9-yl, R2 is hydrogen or an alkoxy group, preferably a methoxy group, R4 is a blocking group, preferably an acetyl t-butyldimethylsilyl group or a 5'-O-methanophosphoman group nucleotide and B 'is an N-blocked purine base or pyrimidine, preferably selected from the group consisting of Thymine, Uracil, Adenine, Cytosine and Guanine with the use of compounds of general formula II, characterized in that mixture of nucleoside diastereoisomers 3'-O-methanophosphonothioanilide of general formula 2 (2a + 2b) where R1, R2 and B 'are as defined above, and are reacted in sodium hydride or 1,8-diazabicyclo- [5,40] -undec-7-ene (DBU) and carbon dioxide then alkylated transiently obtained nucleoside acid is obtained 3'-O-methanothiophosphonic (sodium or DBU-nium salt) o formula 7 (7a + 7b) with an alkylating reagent of o Formula 4 wherein R3 is an alkyl or alkylaryl group aX is chlorine, bromine or iodine and was obtained the product of general formula 5 (5a + 5b) is reacted condensation with an alcohol of general formula 6 where R2 and R4 have the meaning given above

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania modyfikowanych P-chiralnych analogów nukleotydów o ogólnym wzorze 1 (la+lb), w którym R¹ oznacza grupę blokującą, korzystnie 4'-dimetokstrytylową (DMT) lub 9-fenyloksanten-9-ylową (Px), R² oznacza atom wodoru lub grupę alkoksylową, korzystnie metoksylową, R⁴ oznacza grupę blokującą, korzystnie acetylową, t-butylodimetylosililową lub grupę 5'-O-metanofosfonianową nukleotydu, a B' oznaczaThe invention relates to a process for the preparation of modified P-chiral nucleotide analogues of the general formula 1 (Ia + 1b), in which R ¹ is a blocking group, preferably 4'-dimethoxstrythyl (DMT) or 9-phenylxanthen-9-yl (Px), R ² is hydrogen or an alkoxy group, preferably methoxy, R ⁴ is a blocking group, preferably acetyl, t-butyldimethylsilyl or the nucleotide 5'-O-methane phosphonate, and B 'is

181 746181 746

N-zablokowaną zasadę purynową lub pirymidynową, korzystnie wybraną z grupy obejmującej Tyminę, Uracyl, Adeninę, Cytozynę i Guaninę, z wykorzystaniem jako substratów do syntezy mieszanin diastereomerycznych, ewentualnie rozdzielonych na diastereoizomery [Rp] i [Sp] S^O-R^nukleozydo-S^O-metanofosfonotio-anilidów o wzorze ogólnym 2 (2a+2b), w którym R¹, R² i B' mają podane wyżej znaczenie.An N-blocked purine or pyrimidine base, preferably selected from the group consisting of Thymine, Uracil, Adenine, Cytosine and Guanine, using diastereomeric mixtures, optionally separated into [Rp] and [Sp] SO2Nucleoside-S diastereoisomers as substrates for the synthesis of 6 O-methanephosphonothioanilides of the general formula 2 (2a + 2b) in which R ¹ , R ² and B 'are as defined above.

Stereogenność atomu fosforu oraz zróżnicowanie wszystkich czterech ligandów otaczających atom fosforu w oligofnukleozydo-^S^metanofosfonianach] (Me-Oligo) powodują, że w przypadku niestereospecyficznej syntezy oligomeru o długości n zasad, w wyniku kolejnych niestereospecyficznych reakcji wzrostu łańcucha nukleotydowego tworzy się 2^^-1) diastereoizomerów.The stereogeneity of the phosphorus atom and the differentiation of all four ligands surrounding the phosphorus atom in the (Me-Oligo) oligophnucleoside (Me-Oligo) cause that in the case of non-stereospecific synthesis of an n-base-length oligomer, 2 ^ ^{- 1} ) diastereoisomers.

Stwierdzono, że łańcuchy P-homochiralne [Rp] i [Sp] Me-Oligo, w których konfiguracja absolutna na wszystkich intemukleotydowych atomach fosforu jest albo [Rp] albo [Sp], oraz łańcuchy niestereoregulame wykazują zróżnicowane własności fizykochemiczne, a także zróżnicowanie zdolności do tworzenia adduktów z oligonukleotydami o komplementarnej sekwencji.It was found that P-homochiral [Rp] and [Sp] Me-Oligo chains, in which the absolute configuration on all intemucleotide phosphorus atoms is either [Rp] or [Sp], and non-stereoregulame chains exhibit different physicochemical properties, as well as creating adducts with oligonucleotides of complementary sequence.

Wykazano, że okta(tymidylometanofosfoniany), w których sześć spośród siedmiu wiązań metanofosfonianowych ma zdefiniowaną konfigurację na atomie fosforu i wysoką czystość diastereomeryczną, otrzymane w wyniku niestereospecyficznej kondensacji odpowiednich diastereoizomerycznie czystych tetramerów, wykazują znaczące różnice temperatur mięknięcia Tm, świadczące o zróżnicowanej trwałości kompleksów izomerycznych oktamerów metanofosfonianowych z matrycą kwasu pentadekadeoksyadenylowego (Z.J.Leśnikowski, M Jaworska, W.J.Stec, 1990. Octa(thymidine methanophosphonates) of Partially Defined Stereochemistry: Synthesis and Effect of Chirality at Phosphorus on Binding to Pentadecadeoxyriboadenylic Acid. Nuci. Acids Res., 1990,18, 2109). Wykorzystane w tych badaniach Me-Oligo o zdefiniowanej konfiguracji na atomie fosforu uzyskano w wyniku stereokontrolowanej reakcji pomiędzy akty-; wowaną za pomocą odczynnika Grignarda grupą 5'-hydroksylową odpowiednio blokowanego nukleozydu i izomerycznie czystym O-p-nitrofenylometanofosfonianem odpowiednio blokowanego nukleozydu (Z.J.Leśnikowski, M. Jaworska, W.J.Stec, 1991. Stereospecific Synthesis of P-chiral Di(2'-O-Deoxyribonucleoside)methanephosphonates. Nucleosides & Nucleotides, 10, 733; Z.J.Leśnikowski, M.Jaworska Maślanka, W.J.Stec, 1988, Stereoselective Synthesis of P-homochiral Thymidine Methylphosphonates, Nuci.Acid Res., 16,11675). Taka metoda pozyskiwana Me-Ohgo o zdefiniowanej chiralności wymaga jednak długich czasów reakcji i, jak dotychczas, zaprezentowano jedynie jej stosowalność do syntezy tetramerów tymidylowych oraz heteromerycznych struktur heksamerowych.It has been shown that octa (thymidylmethane phosphonates) in which six of the seven methanophosphonate bonds have a defined configuration on the phosphorus atom and high diastereomeric purity, obtained as a result of non-stereospecific condensation of corresponding diastereoisomerically pure tetramers, show significant differences in the softening point Tm of the isomeric complexes with different octamer stability. methanophosphonates with a pentadecadeoxyadenylic acid matrix (ZJLeśnikowski, M Jaworska, WJStec, 1990. Octa (thymidine methanophosphonates) of Partially Defined Stereochemistry: Synthesis and Effect of Chirality at Phosphorus on Binding to Pentadecadeoxyriboadenylic Acid. 1990, Nuciic Acid. 2109). Me-Oligo with a defined configuration on the phosphorus atom used in these studies was obtained as a result of a stereocontrolled reaction between act-; 5'-hydroxyl group of a suitably blocked nucleoside and isomerically pure Op-nitrophenylmethanphosphonate of a suitably blocked nucleoside using Grignard's reagent (ZJLeśnikowski, M. Jaworska, WJStec, 1991. Stereospecific Synthesis of P-chiral Di (2'-O-Deoxyribonucleoside) methanephosphonates. Nucleosides & Nucleotides, 10, 733; ZJ Leśnikowski, M. Jaworska Maślanka, WJStec, 1988, Stereoselective Synthesis of P-homochiral Thymidine Methylphosphonates, Nuci.Acid Res., 16, 11675). However, this method of obtaining Me-Ohgo with defined chirality requires long reaction times and, so far, only its applicability for the synthesis of thymidyl tetramers and heteromeric hexamer structures has been presented.

Próby otrzymania diastereoizomerycznie czystych dinukleozydo(3',5')-metanofosfonianów w wyniku reakcji pomiędzy metylodichlorofosfinąi zablokowanymi odpowiednio w pozycjach 5'- lub 3'-nukleozydami, prowadzone w niskich temperaturach (-80°C), pozwoliły na uzyskanie odpowiednich dinukleozydo^.S^-metanofosfonianów o znaczącej przewadze diastereoizomerów o konfiguracji [Rp]. (T.Loschner, J.Engels, 1989. One Pot Rp-Diastereoselective Synthesis of Dinucleoside Methylphosphonates Using Methyldichlorophosphine, Tetrahedron Lett., 30(41), 5587; (J.W.Engels, T.Loschner, A.Frauendorf, 1991, Diastereoselectięe Synthesis o Thymidine Methylphosphonate Dimers, Nucleosides & Nucleotides, 10,347). Stosując tę metodę nie można jednak otrzymać dłuższych stereoregulamych łańcuchów Me-Oligo, ponieważ tworzące się przejściowo w wyniku kolejnych reakcji kondensacji 3'-O-P-chloro-metanofosfoniny nukleozydów są, nawet w niskich temperaturach, konfiguracyjnie nietrwałe.Attempts to obtain diastereoisomerically pure (3 ', 5') methanophosphonates dinucleoside by reaction between methyldichlorophosphine and blocked 5'- or 3'-nucleosides, respectively, carried out at low temperatures (-80 ° C), allowed to obtain the corresponding dinucleosides. S 1 -methanophosphonates with a significant predominance of diastereoisomers of the [Rp] configuration. (T.Loschner, J.Engels, 1989. One Pot Rp-Diastereoselective Synthesis of Dinucleoside Methylphosphonates Using Methyldichlorophosphine, Tetrahedron Lett., 30 (41), 5587; (JWEngels, T.Loschner, A.Frauendorf, 1991, Diastereoselectięe Synthesis o Thymidine Methylphosphonate Dimers, Nucleosides & Nucleotides, 10,347). However, using this method, it is not possible to obtain longer stereoregulamic Me-Oligo chains, because the nucleoside 3'-OP-chloro-methanophosphonine formed temporarily as a result of successive condensation reactions are, even at low temperatures, , configuration labile.

Inna opisana ostatnio metoda stereokontrolowanej syntezy Me-Oligo, polegająca na zastosowaniu monomerów rozdzielonych na diastereoizomery 5'-DMT-O-nukleozydo-3'-O-(Se-metylometanoselenofosfonianów), pozwala na otrzymanie diastereometrycznie czystych pentamerów Me-Oligo w roztworze. Katalizatorami tej reakcji są sole litu oraz 1,8-diazabicyklo-[5.4.0]-undek-7-en (DBU) (L.A.Woźniak, J.Pyzowski, M.Wieczorek, W.J.Stec, 1994, New Stereospecific Method of Synthesis of DinucleosideP^Methanephosphonates, J.Org.Chemistry, 119, 5843; L.A Woźniak, J.Pyzowski. W.J.Stec, 1994, Anticodic Agents: Novel StereospeAnother recently described method of stereocontrolled synthesis of Me-Oligo, which uses monomers separated into diastereoisomers 5'-DMT-O-nucleoside-3'-O- (Se-methylmethaneselenophosphonates), allows to obtain diastereometrically pure Me-Oligo pentamers in solution. Catalysts for this reaction are lithium salts and 1,8-diazabicyclo- [5.4.0] -undec-7-ene (DBU) (LAWoźniak, J. Pyzowski, M.Wieczorek, WJStec, 1994, New Stereospecific Method of Synthesis of DinucleosideP ^ Methanephosphonates, J.Org.Chemistry, 119, 5843; LA Woźniak, J. Pyzowski. WJStec, 1994, Anticodic Agents: Novel Stereospe

181 746 cifie Route to Stereoregular Oligo(nucleosidemethanephosphonate)s, First International Antisense Conference of Japan, Kyoto, Abstrakt P2-18). Me-Oligo zawierające n-chiralnych wiązań intemukloetydowych występują w postaci 2ⁿ izomerów. Metody chromatograficzne pozwalają na efektywny rozdział diastereoizomerów krótkich oligonukleotydów, szczególnie dimerów. Diastereoizomerycznie czyste dinukleozydo^S^-metanofosfoniany mogą być z powodzeniem wbudowywane do łańcuchów oligonukleotydów zawierających naprzemiennie internukleotydowe wiązania metanofosfonianowe o zdefiniowanej konfiguracji na atomie fosforu [Rp] oraz wiązania fosfodiestrowe lub tiofosforanowe. Tak otrzymane związki, nazywane chimerami, łącząkorzystnie znane własności antysensowe tiofosforanów i odporność na działanie egzonukleaz spowodowaną obecnością wiązań metanofosfonianowych na obu 5'- i 3'- końcach łańcucha.181 746 cifie Route to Stereoregular Oligo (nucleosidemethanephosphonate) s, First International Antisense Conference of Japan, Kyoto, Abstract P2-18). Me-Oligos containing n-chiral intemucletid bonds exist as 2 ⁿ isomers. Chromatographic methods allow for efficient diastereoisomers of short oligonucleotides, especially dimers, to separate diastereoisomers. Diastereoisomerically pure dinucleoside 3 N -methane phosphonates can be successfully incorporated into oligonucleotide chains containing alternating internucleotide methanophosphonate linkages of defined configuration on the phosphorus atom [Rp] and phosphodiester or phosphorothioate linkages. The compounds so obtained, called chimeras, advantageously combine the known antisense properties of phosphorothioates and resistance to exonuclease action due to the presence of methane phosphonate bonds at both the 5 'and 3' ends of the chain.

Z wszystkich dotychczas opublikowanych prac wynika, że metanofosfonianowe analogi oligonukleotydów o konfiguracji [Rp] na matanofosfonianowym atomie fosforu tworzą termodynamicznie trwalsze heterodupleksy z komplementarnymi kwasami nukleinowymi niż ich izomery [Sp] o tej samej sekwencji. W konsekwencji, izomery [Rp] są chętniej używane jako substraty do badań aktywności biologicznej, m.in. do konstrukcji cząstek o budowie chimerycznej. Wobec wysokiego stopnia inhibicji biosyntezy wybranych białek, zaobserwowanej w wyniku działania oligonukleotydów o budowie chimerycznej i zawierających intemukleotydowe wiązania o konfiguracji [Rp]-, oczywista jest celowość poszukiwania nowych metod [Rp]-stereoselektywnej syntezy dinukleozydo^S^-metanofosfonianów (L. Arnold, 1994, The Development of Oligonucleotides Containing Chirally pure Methylphos-phonates as Therapeutic Agents, First International Antisense Conference of Japan, Kyoto, Abstrakt OP-31; C.Giachetti, B.D.Brown, B. Y.Tseng, M.E.Harper, 1994, Biological Efficiacy of High Affinity Methylphosphonate-Containing Oligomers in Celi Culture, First International Antisense Conference of Japan, Kyoto, Abstrakt P2-22; M.Reynolds, D.A.Schwartz, T.A.Riley, M.Meaghefi, RI.Hogrefe, J.A.Jaeger, A.Lebedev, L.J. Arnold jr., 1994, Synthesis and Biological Studies of Oligo-nucleotide Analogs Containing Rp-Chiral Methylophosphonate Linkages, First International Antisense Conference of Japan, Kyoto, Abstrakt PI-06).All the works published so far show that oligonucleotide methane analogs with the [Rp] configuration on the phosphorus mathanophosphonate atom form thermodynamically more stable heteroduplexes with complementary nucleic acids than their [Sp] isomers with the same sequence. Consequently, [Rp] isomers are more readily used as substrates for biological activity studies, incl. for the construction of chimeric particles. In view of the high degree of inhibition of the biosynthesis of selected proteins, observed as a result of the action of oligonucleotides of chimeric structure and containing intemucleotide bonds of the [Rp] - configuration, it is obvious that the search for new methods of [Rp] -stereoselective synthesis of dinucleoside ^ S ^ -methanophosphonates (L. Arnold, 1994, The Development of Oligonucleotides Containing Chirally pure Methylphos-phonates as Therapeutic Agents, First International Antisense Conference of Japan, Kyoto, Abstract OP-31; C. Giachetti, BDBrown, BYTseng, MEHarper, 1994, Biological Efficiacy of High Affinity Methylphosphonate-Containing Oligomers in Celi Culture, First International Antisense Conference of Japan, Kyoto, Abstract P2-22; M. Reynolds, DASchwartz, TARiley, M. Meaghefi, RI.Hogrefe, JAJaeger, A. Lebedev, LJ Arnold jr ., 1994, Synthesis and Biological Studies of Oligo-nucleotide Analogs Containing Rp-Chiral Methylophosphonate Linkages, First International Antisense Conference of Japa n, Kyoto, Abstract PI-06).

Z danych pochodzących z badań własnych autorów wynika, że 3'-O-metanofosfonoselenoanilidy mogły być uzyskane z dobrymi wydajnościami i rozdzielone na diastereizomery [Rp] i [Sp], lub bez takiego podziału poddane reakcji z silnymi zasadami i dwutlenkiem węgla, a następnie jodkiem metylu, dając w ten sposób 3'-O-(Se-metylo metanoselenofosfoniany), które mogą być łatwo podzielone na diastereoizomery. Te ostatnie, w stereospecyficznej katalizowanej obecności DBU/LiCi kondensacji z 5'-OH nukleozydami wytwarzają dinukleozydo (J^metanofosfoniany.The data from the authors' own research shows that 3'-O-methanophosphonoselenoanilides could be obtained with good yields and separated into [Rp] and [Sp] diastereomers, or without such division, reacted with strong bases and carbon dioxide, followed by iodide methyl, thus giving 3'-O- (Se-methyl methaneselenophosphonates) which can be easily divided into diastereoisomers. The latter, in stereospecific DBU / LiCi catalyzed condensation with 5'-OH nucleosides, produce dinucleoside (J, methane phosphonates.

Z wcześniejszych badań autorów wynika także, że procesy konwersji tioanilidów do tiokwasów fosforowych są stereospecyficzne.The authors' previous research also shows that the processes of conversion of thioanilides to phosphorus thio acids are stereospecific.

Omówione wyżej procesy nie modyfikują zasad pirymidynowych i purynowych.The processes discussed above do not modify the pyrimidine and purine bases.

Sposób wytwarzania P-chiralnych analogów nukleotydów o ogólnym wzorze 1 (la+lb), w którym R* oznacza grupę blokującą, korzystnie 4,4'-dimetoksytrytyl lub 9-fenyloksanten-9-yl, R² oznacza atom wodoru lub grupę alkoksylową, korzystnie metoksylową, R⁴ oznacza grupę blokującą, korzystnie acetylową, t-butylodimetylosililowąlub grupę 5'-O-metanofosfonianowąnukleotydu, aB' oznacza N-zablokowaną zasadę purynowąlub pirymidynową, korzystnie wybraną z grupy obejmującej Tyminę, Uracyl, Adeninę, Cytozynę i Guaninę, z wykorzystaniem związków o wzorze ogólnym 2, polega na tym, że mieszaninę diastereoizomerów nukleozydo 3'-O-metanofosfonotioanihdu o wzorze ogólnym 2 (2a+2b), w którym R¹, R² i B'mająpodane wyżej znaczenie, poddaje się reakcji w wodorkiem sodowym lub 1,8-diazabicyklo- -[5.4.0]-undek-7-enem (DBU) i dwutlenkiem węgla, a następnie alkiluje się otrzymany przejściowo kwas nukleozydo 3'-O-metanotiofosfonowy (sól sodowa lub DBU-niowa) o wzorze 7 (7a+7b) za pomocą odczynnika alkilującego o wzorze 4, w którym R³ oznacza grupę alkilową lub alkiloarylową, a X oznacza atom chloru, bromu lub jodu, a otrzymany produkt o ogólnym wzorze 5A method for preparing P-chiral nucleotide analogues of general formula 1 (la + lb) in which R represents a blocking group, preferably 4,4'-dimetoksytrytyl or 9-phenylxanthene-9-yl, R ² represents a hydrogen atom or an alkoxy group, preferably methoxy, R ⁴ is a blocking group, preferably acetyl, t-butyldimethylsilyl or a nucleotide 5'-O-methanophosphonate, and B 'is an N-blocked purine or pyrimidine base, preferably selected from the group consisting of Thymine, Uracil, Adenine, Cytosine and Guanine, using compounds of general formula 2, consists in that the mixture of diastereomers of nucleoside 3'-O-metanofosfonotioanihdu of formula 2 (2a + 2b), wherein R ^1, R ² and B'mająpodane hereinbefore defined, is reacted with sodium hydride in or 1,8-diazabicyclo- [5.4.0] -undec-7-ene (DBU) and carbon dioxide, followed by alkylation of the transiently obtained nucleoside 3'-O-methanothiophosphonic acid (sodium or DBU-sodium salt) of formula 7 (7a + 7b) with an alkylating reagent o Formula 4, where R ³ is an alkyl or alkylaryl group and X is chlorine, bromine or iodine, and the resulting product of general formula 5

181 746 (5a+5b) poddaje się reakcji kondensacji z alkoholem o ogólnym wzorze 6 gdzie R² i R⁴ mają wyżej podane znaczenie.181,746 (5a + 5b) is subjected to a condensation reaction with an alcohol of general formula 6 where R ² and R ⁴ are as defined above.

W sposobie według wynalazku reakcję kondensacji pomiędzy związkiem o ogólnym wzorze 51 alkoholem o wzorze 6 gdzie R² i R⁴ posiadają wyżej podane znaczenie, korzystnie prowadzi się w warunkach bezwodnych, w aprotonowym rozpuszczalniku organicznym, korzystnie acetonitrylu.In the process according to the invention, the condensation reaction between a compound of general formula 51 and an alcohol of formula VI wherein R ² and R ⁴ are as defined above, preferably carried out under anhydrous conditions, in an aprotic organic solvent, preferably acetonitrile.

W sposobie według wynalazku jako aktywator reakcji pomiędzy związkiem o ogólnym wzorze 5 i alkoholem o wzorze 6, stosuje się zasady, korzystnie trzeciorzędowe aminy, a najkorzystniej l,8-diazabicyklo-[5.4.0]-undek-7-en (DBU) i sole litu, korzystnie chlorek litu.The process according to the invention employs bases, preferably tertiary amines, and most preferably 1,8-diazabicyclo- [5.4.0] -undec-7-ene (DBU) as activator of the reaction between the compound of general formula 5 and the alcohol of formula VI. lithium salts, preferably lithium chloride.

Wariant realizacji sposobu wytwarzania P-chiralnych analogów nukleotydów o ogólnym wzorze 1 (la+lb), w którym R¹, R², R⁴ i B' mająwyżej podane znaczenie, według wynalazku polega na tym, że mieszaninę diastereoizomerów nukleozydo 3'-O-metanofosfonotioanilidu o wzorze ogólnym 2 (2a+2b), w którym R¹, R² B' mają podane wyżej znaczenie, poddaje się reakcji utlenienia za pomocą znanych środków utleniających, korzystnie za pomocą peroksymonosiarczanu potasowego lub nadtlenku wodoru, następnie otrzymany produkt o ogólnym wzorze 3 (3a+3b), w którym R¹, R² i B' mająwyżej podane znaczenie, poddaje się reakcji z wodorkiem sodowym lub DBU oraz dwusiarczkiem węgla, a otrzymany przejściowo kwas nukleozydo 3'-O-metanotiofosfonowy (sól sodowa lub DBU-niowa) o wzorze 7 (7a+7b) alkiluje się za pomocą odczynnika alkilującego o wzorze 4, w którym R³ oznacza grupę alkilową lub alkiloarylową, a X oznacza atom chloru, bromu lub jodu, a otrzymany produkt o ogólnym wzorze 5 (5a+5b) poddaje się reakcji kondensacji z alkoholem o ogólnym wzorze 6 gdzie R² i R⁴ mająwyżej podane znaczenie.Embodiment of a method for the preparation of P-chiral nucleotide analogues of general formula 1 (la + lb), wherein R ^1, R ^2, R ⁴ and B 'are as defined hereinbefore, according to the invention consists in that the mixture of diastereomers of nucleoside 3'-O -methanophosphonothioanilide of the general formula 2 (2a + 2b), in which R ¹ , R ² B 'are as defined above, is oxidized with known oxidizing agents, preferably with potassium peroxymonosulphate or hydrogen peroxide, then the product obtained with the general formula formula 3 (3a + 3b) wherein R ^1, R ² and B 'are as defined hereinbefore, is reacted with sodium hydride or DBU and carbon disulfide and the resulting acid transient nucleoside 3'-O-metanotiofosfonowy (sodium salt or DBU -nium) of formula 7 (7a + 7b) is alkylated with an alkylating reagent of formula 4 in which R ³ is an alkyl or alkylaryl group and X is chlorine, bromine or iodine and the resulting product of general formula 5 (5a + 5b) is reacted and condensation with an alcohol of general formula 6 wherein R ² and R ⁴ are as defined above.

W sposobie według wynalazku reakcję kondensacji pomiędzy związkiem o ogólnym wzorze 5 i alkoholem o wzorze 6 gdzie R² i R⁴ posiadają wyżej podane znaczenie, korzystnie prowadzi się w warunkach bezwodnych, w aprotonowym rozpuszczalniku organicznym, korzystnie acetonitrylu.In the process according to the invention, the condensation reaction between the compound of general formula 5 and the alcohol of formula 6 wherein R ² and R ⁴ are as defined above, preferably carried out under anhydrous conditions, in an aprotic organic solvent, preferably acetonitrile.

Sposób wytwarzania P-chiralnych analogów nukleotydów o ogólnym wzorze la, w którym R¹, R², R⁴ i B' mająwyżej podane znaczenie, według wynalazku polega na tym, że diastereoizomer nukleozydo 3'-O-metanofosfonotioanilidu o wzorze ogólnym 2a, w którym R¹, R² i B' mają podane wyżej znaczenie, poddaje się reakcji w wodorkiem sodowym lub 1,8-diazabicyklo-[5.4.0]-undek-7-enem (DBU) i dwutlenkiem węgla, a następnie alkiluje się otrzymany przejściowo kwas nukleozydo 3'-O-metanotiofosfonowy (sól sodowa lub DBU-niowa) o wzorze 7a za pomocą odczynnika alkilującego o wzorze 4, w którym R³ oznacza grupę alkilową lub alkiloarylową a X oznacza atom chloru, bromu lub jodu, a otrzymany produkt o ogólnym wzorze 5a poddaje się reakcji kondensacji z alkoholem o ogólnym wzorze 6 gdzie R² i R⁴ mająwyżej podane znaczenie.A method for preparing P-chiral nucleotide analogues of general formula Ia wherein R ^1, R ^2, R ⁴ and B 'are as defined hereinbefore, according to the invention consists in that the diastereomer nucleoside 3'-O-metanofosfonotioanilidu formula 2a wherein R ^1, R ² and B 'are as defined above, is reacted in a sodium hydride or 1,8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene (DBU) and carbon dioxide, and then the resulting alkylated transiently nucleoside 3'-O-methanothiophosphonic acid (sodium or DBU-iodine salt) of formula 7a with an alkylating reagent of formula 4 where R ³ is an alkyl or alkylaryl group and X is chlorine, bromine or iodine and the product obtained 5a is subjected to a condensation reaction with an alcohol of general formula 6 wherein R ² and R ⁴ are as defined above.

W sposobie według wynalazku reakcję kondensacji pomiędzy związkiem o ogólnym wzorze 5a i alkoholem o wzorze 6, korzystnie prowadzi się w warunkach bezwodnych, w aprotonowym rozpuszczalniku organicznym, korzystnie acetonitrylu, a jako aktywator ten reakcji stosuje się zasady, korzystnie trzeciorzędowe aminy, a najkorzystniej 1,8-diazabicyklo-[5.4.0]-undek-7-en (DBU) i sole litu, korzystnie chlorek litu.In the process according to the invention, the condensation reaction between the compound of general formula 5a and the alcohol of formula 6 is preferably carried out under anhydrous conditions in an aprotic organic solvent, preferably acetonitrile, and bases, preferably tertiary amines, and most preferably 1, are used as activator for the reaction. 8-diazabicyclo- [5.4.0] -undec-7-ene (DBU) and lithium salts, preferably lithium chloride.

Wariant realizacji sposobu wytwarzania P-chiralnych analogów nukleotydów o ogólnym wzorze la, w którym R¹, R², R⁴ i B' mająwyżej podane znaczenie, według wynalazku polega na tym, że diastereoizomer nukleozydo 3'-O-metanofosfonotioanilidu o wzorze ogólnym 2b, w którym R¹, R² i B' mająpodane wyżej znaczenie, poddaje się reakcji utlenienia za pomocą znanych środków utleniających, korzystnie peroksymonosiarczanu potasowego lub nadtlenku wodoru, następnie otrzymany produkt o ogólnym wzorze 3b, w którym R¹, R² i B' mają wyżej podane znaczenie, poddaje się reakcji z wodorkiem sodowym lub DBU oraz dwusiarczkiem węgla, a otrzymany przejściowo kwas nukleozydo 3'-O-metanotiofosfonowy (sól sodowa lub DBU-niowa) o wzorze 7a alkiluje się za pomocą odczynnika alkilującego o wzorze 4, w któEmbodiment of a method for the preparation of P-chiral nucleotide analogues of general formula Ia wherein R ^1, R ^2, R ⁴ and B 'are as defined hereinbefore, according to the invention consists in that the diastereomer nucleoside 3'-O-metanofosfonotioanilidu formula 2b wherein R ^1, R ² and B 'mająpodane the above meaning, is subjected to oxidation reaction by means of known oxidizing agents, preferably peroxymonosulfate potassium or hydrogen peroxide, and then the resulting product of general formula 3b, wherein R ^1, R ² and B' are as defined above, reacted with sodium hydride or DBU and carbon disulfide, and the transiently obtained nucleoside 3'-O-methanothiophosphonic acid (sodium or DBU-sodium salt) of formula 7a is alkylated with an alkylating reagent of formula 4 in who

181 746 rym R³ i X mają wyżej podane znaczenie, a otrzymany produkt o ogólnym wzorze 5a poddaje się reakcji kondensacji z alkoholem o ogólnym wzorze 6 gdzie R² i R⁴ mająwyżej podane znaczenie.R ³ and X are as defined above, and the obtained product of general formula 5a is condensed with an alcohol of general formula 6, where R ² and R ⁴ are as defined above.

W sposobie według wynalazku reakcję kondensacji pomiędzy związkiem o ogólnym wzorze 5a i alkoholem o wzorze 6, korzystnie prowadzi się w warunkach bezwodnych, w aprotonowym rozpuszczalniku organicznym, korzystnie acetonitrylu, a jako aktywator tej reakcji stosuje się zasady, korzystnie trzeciorzędowe aminy, a najkorzystniej 1,8-diazabicyklo-[5.4.0]-undek-7-en (DBU) i sole litu, korzystnie chlorek litu.In the process according to the invention, the condensation reaction between the compound of general formula 5a and the alcohol of formula 6 is preferably carried out under anhydrous conditions in an aprotic organic solvent, preferably acetonitrile, and bases, preferably tertiary amines, and most preferably 1, are used as activators for this reaction. 8-diazabicyclo- [5.4.0] -undec-7-ene (DBU) and lithium salts, preferably lithium chloride.

Sposób wytwarzania P-chiralnych analogów nukleotydów o ogólnym wzorze Ib, w którym R¹, R², R⁴ i B' mająwyżej podane znaczenie, według wynalazku polega na tym, że diastereoizomer nukleozydo 3'-O-metanofosfonotioanilidu o wzorze ogólnym 2b, w którym R¹, R² i B' mają podane wyżej znaczenie, poddaje się reakcji w wodorkiem sodowym lub 1,8-diazabicyklo-[5.4.0]-undek-7-enem (DBU) i dwutlenkiem węgla, a następnie alkiluje się otrzymany przejściowo kwas nukleozydo 3'-O-metanotiofosfonowy (sól sodowa lub DBU-niowa) o wzorze 7b za pomocą odczynnika alkilującego o wzorze 4, w którym R³ i X mająwyżej podane znaczenie, a otrzymany produkt o ogólnym wzorze 5b poddaje się reakcji kondensacji z alkoholem o ogólnym wzorze 6 gdzie R² i R⁴ mająwyżej podane znaczenie.A method for preparing P-chiral nucleotide analogues of general formula Ib wherein R ^1, R ^2, R ⁴ and B 'are as defined hereinbefore, according to the invention consists in that the diastereomer nucleoside 3'-O-metanofosfonotioanilidu formula 2b wherein R ^1, R ² and B 'are as defined above, is reacted in a sodium hydride or 1,8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene (DBU) and carbon dioxide, and then the resulting alkylated transiently nucleoside 3'-O-methanothiophosphonic acid (sodium or DBU-nium salt) of formula 7b with an alkylating reagent of formula 4, where R ³ and X are as defined above, and the resulting product of general formula 5b is condensed with an alcohol of general formula 6 where R ² and R ⁴ are as defined above.

W sposobie według wynalazku reakcję kondensacji pomiędzy związkiem o ogólnym wzorze 5b i alkoholem o wzorze 6, korzystnie prowadzi się w warunkach bezwodnych, w aprotonowym rozpuszczalniku organicznym, korzystnie acetonitrylu, a jako aktywator tej reakcji stosuje się zasady, korzystnie trzeciorzędowe aminy, a najkorzystniej 1,8-diazabicyklo-[5.4.0]-undek-7-en (DBU) i sole litu, korzystnie chlorek litu.In the process according to the invention, the condensation reaction between the compound of general formula 5b and the alcohol of formula 6 is preferably carried out under anhydrous conditions in an aprotic organic solvent, preferably acetonitrile, and bases, preferably tertiary amines, and most preferably 1, are used as activators for this reaction. 8-diazabicyclo- [5.4.0] -undec-7-ene (DBU) and lithium salts, preferably lithium chloride.

Wariant sposobu wytwarzania P-chiralnych analogów nukleotydów o ogólnym wzorze Ib, w którym R¹, R², R⁴ i B' mająwyżej podane znaczenie, według wynalazku polega na tym, że diastereoizomer nukleozydo 3'-O-metanofosfonotioanilidu o wzorze ogólnym 2a, w którym R¹, R² i B' mają podane wyżej znaczenie, poddaje się reakcji utleniania za pomocą znanych środków utleniających, korzystnie peroksymonosiarczanu potasowego lub nadtlenku wodoru, następnie otrzymany produkt o ogólnym wzorze 3a, w którym R¹, R² i B' mająwyżej podane znaczenie, poddaje się reakcji z wodorkiem sodowym lub DBU oraz dwusiarczkiem węgla, a otrzymany przejściowo kwas nukleozydo 3'-O-metanotiofosfonowy (sól sodowa lub DBU-niowa) o wzorze 7b alkiluje się za pomocą odczynnika alkilującego o wzorze 4, w którym R³ oznacza grupę alkilową lub alkiloarylową, a X oznacza atom chloru, bromu lub jodu, a otrzymany produkt o ogólnym wzorze 5b poddaje się reakcji kondensacji z alkoholem o ogólnym wzorze 6 gdzie R² i R⁴ mają wyżej podane znaczenie.Variant of the process for preparing P-chiral nucleotide analogues of general formula Ib wherein R ^1, R ^2, R ⁴ and B 'are as defined hereinbefore, according to the invention consists in that the diastereomer nucleoside 3'-O-metanofosfonotioanilidu of formula 2a, wherein R ¹ , R ² and B 'are as defined above, subjected to an oxidation reaction with known oxidizing agents, preferably potassium peroxymonosulfate or hydrogen peroxide, then the product obtained of general formula 3a, wherein R ¹ , R ² and B' are as defined above, are reacted with sodium hydride or DBU and carbon disulfide, and the transiently obtained nucleoside 3'-O-methanothiophosphonic acid (sodium or DBU-nium salt) of formula 7b is alkylated with an alkylating reagent of formula 4 in which R ³ is an alkyl or alkylaryl group and X is chlorine, bromine or iodine, and the resulting product of general formula 5b is subjected to a condensation reaction with an alcohol of general formula 6, where R ² and R ⁴ are meaning given above.

W sposobie według wynalazku reakcję kondensacji pomiędzy związkiem o ogólnym wzorze 5b i alkoholem o wzorze 6, korzystnie prowadzi się w warunkach bezwodnych, w aprotonowym rozpuszczalniku organicznym, korzystnie acetonitrylu, a jako aktywator tej reakcji stosuje się zasady, korzystnie trzeciorzędowe aminy, a najkorzystniej l,8-diazabicyklo-[5.4.0]-undek-7-en (DBU) i sole litu, korzystnie chlorek litu.In the process of the invention, the condensation reaction between the compound of general formula 5b and the alcohol of formula 6 is preferably carried out under anhydrous conditions in an aprotic organic solvent, preferably acetonitrile, and bases, preferably tertiary amines, and most preferably 1, are used as activators for this reaction. 8-diazabicyclo- [5.4.0] -undec-7-ene (DBU) and lithium salts, preferably lithium chloride.

Procesy konwersji związków o wzorze 2 (2a+2b) - patrz schemat 1 i schemat 2, pod wpływem NaH/CO₂ bądź NaH/CS₂ i następująca po nich reakcja alkilowania, są w pełni stereospecyficzne. Związki o wzorze 5 według schematu 1 i 2 otrzymuje się z wydajnością ok. 80%. Otrzymane niestereospecyficznie, np. z diastereoizomerycznych mieszanin 2 lub 3, mogą być łatwo oczyszczone i rozdzielone na diastereoizomery.The conversion processes of compounds of formula 2 (2a + 2b) - see scheme 1 and scheme 2, under the influence of NaH / CO ₂ or NaH / CS ₂ and the subsequent alkylation reaction, are fully stereospecific. Compounds of formula 5 according to Schemes 1 and 2 are obtained in a yield of about 80%. Obtained non-stereospecifically, e.g. from diastereomeric mixtures 2 or 3, they can be easily purified and separated into diastereoisomers.

Konwersja 2a (FAST) do 5a (SLOW) pozwala na wykorzystanie tego monomeru do stereospecyficznej kondensacji z 3'-O-blokowanym nukleozydem, prowadzącej do pożądanego do badań biologicznych diastereoizomeru [Rp]-dinukleozydo O^metanofosfonianu o wzorze 1.Conversion of 2a (FAST) to 5a (SLOW) allows this monomer to be used for stereospecific condensation with a 3'-O-blocked nucleoside, leading to the desirable bio-stereoisomer of [Rp] -dinucleoside of the O < 4 > methanophosphonate of formula 1.

Zaproponowana w zgłoszeniu metoda pozwala na wykorzystanie drugiego diastereoizomeru 2b do syntezy izomeru [Rp] o wzorze la. W tym celu związek o wzorze 2b (SLOW), który w reakcji z NaH/CO₂ i następczo z bromkiem benzylu prowadzi do izomeru FAST wzór 5b stanowiącego prekursor niechcianego [Sp] - wzór Ib, jest utleniany w zaproponowany sposób za pomocą znanych odczynników utleniających, korzystnie peroksymonosiarczanu potasowego lubThe method proposed in the application allows the use of the second diastereoisomer 2b for the synthesis of the [Rp] isomer of formula Ia. For this purpose, the compound of formula 2b (SLOW), which in the reaction with NaH / CO ₂ and then with benzyl bromide leads to the FAST isomer formula 5b, which is the precursor of the unwanted [Sp] - formula Ib, is oxidized in the proposed manner with the known oxidizing reagents , preferably potassium peroxymonosulfate or

181 746 nadtlenku wodoru, do odpowiedniego anilidu SLOW - wzór 3b. Anilid SLOW - wzór 3b poddany reakcji z silnymi zasadami (wodorek sodu, DBU) i dwusiarczkiem węgla, a następnie S-alkilowaniu za pomocą halogenku alkilowego (bromek benzylu, jodek metylu), tworzy SLOW wzór 5a, który jest substratem do syntezy dimerów [Rp] - wzór la (FAST) na drodze stereospecyficznej kondensacji z wzoru 6, katalizowanej DBU/LiCl.181 746 of hydrogen peroxide, to the corresponding SLOW anilide - formula 3b. Anilide SLOW - formula 3b reacted with strong bases (sodium hydride, DBU) and carbon disulfide, followed by S-alkylation with an alkyl halide (benzyl bromide, methyl iodide), creates SLOW formula 5a, which is a substrate for the synthesis of dimers [Rp ] - Formula Ia (FAST) by DBU / LiCl catalyzed stereospecific condensation from Formula 6.

Zaproponowana metoda pozwala na wykorzystanie obu izomerów o wzorze 2 do syntezy jednego, pożądanego produktu o wzorze 1 [dinukleozydo (S^S^metanofosfonianu] o przewidzianej z góry konfiguracji absolutnej na atomie fosforu.The proposed method allows the use of both isomers of formula 2 for the synthesis of one desired product of formula 1 [dinucleoside (S ^ S ^ methanophosphonate] with a predetermined absolute configuration on the phosphorus atom.

Należy podkreślić, że w ten sposób można otrzymać obydwa izomery o wzorach la i Ib tzn. zarówno [Rp], jak [Sp], bowiem w zależności od tego, który izomer ma być otrzymany, istnieje możliwość wykorzystania SLOW - wzór 2b do syntezy [Sp] - wzór Ib lub FAST - wzór 2a w celu otrzymania [Rp] - wzór la.It should be emphasized that in this way both isomers of the formulas Ia and Ib can be obtained, i.e. both [Rp] and [Sp], because depending on which isomer is to be obtained, it is possible to use SLOW - formula 2b for the synthesis [ Sp] - formula Ib or FAST - formula 2a to obtain [Rp] - formula la.

Utlenienie SLOW - wzór 2b do SLOW - wzór 3b pozwala uzyskać [Rp] - wzór la, a utlenienie FAST - wzór 2a do FAST - wzór 3a pozwala na otrzymanie [Sp] - wzór Ib.Oxidation SLOW - formula 2b to SLOW - formula 3b gives [Rp] - formula la, and oxidation FAST - formula 2a to FAST - formula 3a gives [Sp] - formula Ib.

Poniżej przedstawiono przykłady wykonania wynalazku.Embodiments of the invention are illustrated below.

Przykład I. Ogólny przepis na przygotowanie związku o wzorze 2.Example I. General recipe for the preparation of a compound of formula 2.

Do roztworu metylodichlorofosfmy (0.29 g, 2,5 mmol) w THF i trietyloaminy (0,55 g, 55 mmol), schłodzonego do 40°C, wkroplono roztwór odpowiedniego nukleozydu (1 mmol) w THF (10 ml). Po 30 minutach temperaturę reakcji podniesiono do pokojowej. Do tej mieszaniny dodano anilinę (0,28 g, 3 mmol) oraz siarkę elementarną. Po zakończeniu reakcji mieszaninę reakcyjną (rozcieńczoną chloroformem) ekstrhowano za pomocąbuforu węglanowego i oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym. Odpowiednie frakcje połączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem.To a solution of methyldichlorophosphine (0.29 g, 2.5 mmol) in THF and triethylamine (0.55 g, 55 mmol) cooled to 40 ° C, a solution of the appropriate nucleoside (1 mmol) in THF (10 ml) was added dropwise. After 30 minutes, the reaction temperature was raised to room temperature. To this mixture was added aniline (0.28 g, 3 mmol) and elemental sulfur. After completion of the reaction, the reaction mixture (diluted with chloroform) was extracted with a carbonate buffer and purified by column chromatography on silica gel. The appropriate fractions were combined and concentrated under reduced pressure.

Przykład II. [Rp, Sp]-3'-O-metanofosfonotioanilid 5'-O-DMT-tymidylowy wzór 2 B'=tymina.Example II. [Rp, Sp] -3'-O-methanophosphonothioanilide 5'-O-DMT-thymidyl formula 2 B '= thymine.

Otrzymany z 5'-O-DMT-tymidyny (0,540 g, 1 mmol) jak w przykładzie I. Ciało stałe o konsystencji zestalonej bezbarwnej piany; wydajność 93% (0,66 g); ^3IP NMR: 79,44; 79,58 ppm; FAB-MS [M-H]: 712,4.Prepared from 5'-O-DMT-thymidine (0.540 g, 1 mmol) as in Example 1. Solid, colorless foam solidified; 93% yield (0.66 g); ^3I P NMR: 79.44; 79.58 ppm; FAB-MS [MH]: 712.4.

Przykład III. [Rp, Sp]-3'-O-metanofosfonotioanilid 5'-O-DMT-N⁴benzoilo-2'-O-deoksycytydylowy wzór 2.Example III. [Rp, Sp] -3'-O-methanophosphonothioanilide 5'-O-DMT-N ⁴ benzoyl-2'-O-deoxycytidyl formula 2.

Otrzymany z 5'-O-DMT-N⁴-benzoilo-2'-O-deoksycytydyny (0,633 g, 1 mmol) jak w przykładzie I. Mieszanina diastereoizomerów w postaci bezbarwnego szkliwa. Wydajność 70% (0,56 g). ^3,P NMR(CH₂C1₂/C₆D₆): 79,38; 79,74 ppm.Prepared from 5'-O-DMT-N ⁴ -benzoyl-2'-O-deoxycytidine (0.633 g, 1 mmol) as in Example 1. Diastereoisomeric mixture as colorless glaze. 70% yield (0.56 g). ^3, P NMR (CH ₂ C ₁₂ / C ₆ D ₆ ): 79.38; 79.74 ppm.

Przykład IV. [Rp, Sp]-3'-O-metanofosfonotioanilid5'-O-DMT-N⁶-Benzoilo-2'-O-deoksyadenylowy wzór 2:Example IV. [Rp, Sp] -3'-O-methanophosphonothioanilide 5'-O-DMT-N ⁶ -Benzoyl-2'-O-deoxyadenyl formula 2:

Otrzymany z 5'-O-DMT-N⁶-Benzoilo-2'-O-deoksyadenozyny (0,657 g, 1 mmol) jak w przykładzie I. Mieszanina diastereoizomerów otrzymna jako bezbarwne ciało stałe o strukturze zestalonej piany; wydajność 75%; ^3IP NMR: 79,21; 79,60 ppm;Prepared from 5'-O-DMT-N ⁶ -Benzoyl-2'-O-deoxyadenosine (0.657 g, 1 mmol) as in Example I. A mixture of diastereoisomers obtained as a colorless solid with a solid foam structure; 75% efficiency; ^3I P NMR: 79.21; 79.60 ppm;

Przykład V. [Rp,Sp]-3'-O-metanofosfonotioanilid5'-O-DMT-N²-izobutyrylo-2'-O-deoksyguanylowy wzór 2:Example V [Rp, Sp] -3'-O-methanophosphonothioanilide 5'-O-DMT-N ² -isobutyryl-2'-O-deoxyguanyl formula 2:

Otrzymany z 5'-O-DMT-N²-izobutyrylo-2'-O-deoksyguanozyny (0,640 g; 1 mmol) jak w przykładzie I. Wyodrębniony w postaci mieszaniny diastereoizomerów jako bezbarwne szkliwo. Wydajność 98% (0,71 g). ³¹P NMR: 79,65; 79,72 ppm;Prepared from 5'-O-DMT-N ² -isobutyryl-2'-O-deoxyguanosine (0.640 g; 1 mmol) as in Example I. Isolated as a mixture of diastereoisomers as colorless glaze. Yield 98% (0.71 g). ³¹ P NMR: 79.65; 79.72 ppm;

Przykład VI. [Rp, Sp]-5'-O-DMT3'-O-meanofosfonotioanilid2'-O-metylourydylowy wzór 2:Example VI. [Rp, Sp] -5'-O-DMT3'-O-meanphosphonothioanilide 2'-O-methyluridyl formula 2:

Otrzymany z 5'-O-DMT-2'-O-metylourydyny (0,560 g, 1 mmol) jak w przykładzie I. Wyodrębniony w postaci mieszaniny diastreoizomerów postaci szkliwa bezbarwnego. Wydajność 85% (0,68 g). ³¹P NMR: 81,96 (SLOW-wzór 2a); 81,38 (FAST-wzór 2b) ppm.Prepared from 5'-O-DMT-2'-O-methyluridine (0.560 g, 1 mmol) as in Example I. Isolated as a mixture of diastereomers as a colorless glaze. Yield 85% (0.68 g). ³¹ P NMR: 81.96 (SLOW-formula 2a); 81.38 (FAST-formula 2b) ppm.

Przykład VII. Rozdział na diastereoizomery FAST i SLOW przeprowadzano na żelu krzemionkowym, stosując jako eluent chloroform z dodatkiem 10-20% heptanu.Example VII. Separation into the diastereoisomers FAST and SLOW was performed on silica gel, eluting with chloroform containing 10-20% heptane.

Czystość diasteromeryczną rozdzielonych izomerów FAST i SLOW sprawdzano metodą ³¹PNMR.The diasteromeric purity of the separated FAST and SLOW isomers was checked by the ³¹ PNMR method.

181 746181 746

Tabela 1Table 1

przykład; 2 ; B'. example; 2; B '. diastereoizomer* diastereoisomer * ^3IP NMR (ppm) ^3I P NMR (ppm) Il· B - tymina Il · B - thymine FAST SLOW FAST WORDS 79,44 79,58 79.44 79.58 III: B - cytozyna III: B - cytosine FAST SLOW FAST WORDS 79,38 79,74 79.38 79.74 IV: B-adenina IV: B-adenine FAST SLOW FAST WORDS 79,21 79,60 79.21 79.60 V: B-guanina V: B-guanine FAST SLOW FAST WORDS 79,65 79,72 79.65 79.72 VI: B-uracyl VI: B-uracil FAST SLOW FAST WORDS 81,38 81,96 81.38 81.96

♦mobilność na żelu (Kieselgel 60, 240-400 mesh) w układzie rozwijającym CHCh/MeOH (95:5 v/v).♦ mobility on gel (Kieselgel 60, 240-400 mesh) in a CHCh / MeOH development system (95: 5 v / v).

Przykład VIII. Metoda ogólna syntezy 3'-O-(S-benzylo metanotiofosfonianów) 5'-O-DMT-(N-blokowanych) nukleozydów wzór 5.Example VIII. General method for the synthesis of 3'-O- (S-benzyl methanothiophosphonates) 5'-O-DMT- (N-blocked) nucleosides formula 5.

Do roztworu związku o wzorze 2 (1 mmol) w suchym DMF (10 ml) dodano NaH (1,2 mmola). Roztwór mieszano do czasu, aż zakończyło się wydzielanie gazowego wodoru. Przez tak otrzymaną zawiesinę przepuszczono osuszony gazowy CO₂. Przebieg reakcji kontrolowano TLC. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodano bromek benzylu (5 mmoli). Po zakończeniu reakcji alkilowania rozpuszczalniki i nadmiar bromku benzylu oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość rozpuszczono w chloroformie. Roztwór ekstrahowano buforem węglanowym i po zatężeniu i osuszeniu warstwy organicznej produkt oczyszczano metodą chromatografii na żelu krzemionkowym.NaH (1.2 mmol) was added to a solution of the compound of formula 2 (1 mmol) in dry DMF (10 ml). The solution was stirred until evolution of hydrogen gas ceased. _{Dry CO 2} gas was passed through the suspension thus obtained. The course of the reaction was monitored by TLC. Then benzyl bromide (5 mmol) was added to the reaction mixture. After completion of the alkylation reaction, the solvents and excess benzyl bromide were distilled off under reduced pressure, and the residue was dissolved in chloroform. The solution was extracted with carbonate buffer and, after concentration and drying of the organic layer, the product was purified by silica gel chromatography.

Jeśli substratem do reakcji jest mieszanina diastereoizomerów o wzorach 2a i 2b wówczas podczas oczyszczania na żelu krzemionkowym następuje również rozdział na diastereoizomery o wzorach 5a (FAST) i 5b (SLOW). Eluen: chloroform z dodatkiem etanolu (0-5%).If the reactant is a mixture of diastereoisomers of the formulas 2a and 2b, then during the purification on silica gel, the diastereoisomers of the formulas 5a (FAST) and 5b (SLOW) are also separated. Eluene: chloroform with the addition of ethanol (0-5%).

Przykład IX. 3'-O-(S-benzylometanotiofosfonian) 5'-O-DMT-Tymidylowy, wzór 5a gdzie B'=tymina:Example IX. 3'-O- (S-benzylmethanothiophosphonate) 5'-O-DMT-Thymidyl, formula 5a where B '= thymine:

Otrzymany ze związku o wzorze 2, B-tymina (0,712 g; 1 mmola) jak w przykładzie VIIL Wydajność całkowita: 86% (0,55 g); ³¹P NMR: 56,44; 55,94 ppm.Prepared from the compound of formula II, B-thymine (0.712 g; 1 mmol) as in Example VIIL Overall yield: 86% (0.55 g); ³¹ P NMR: 56.44; 55.94 ppm.

Przykład X. 3'-O-(S-benzylo metanotiofosfonian) 5'-O-DMT-N⁴-Benzoilo-2'-O-deoksycytydylowy wzór 5, B -cytozyna:Example X. 3'-O- (S-benzyl methanothiophosphonate) 5'-O-DMT-N ⁴ -Benzoyl-2'-O-deoxycytidyl formula 5, B -cytosine:

Otrzymany ze związku o wzorze 2, B-cytozyna (1 mmol) jak w przykładzie VIII. Wydajność całkowita: 82%; ³¹P NMR (CDC1₃): 55,41; 55,21 ppm.Prepared from the compound of formula 2, B-cytosine (1mmol) as in Example VIII. Overall yield: 82%; ³¹ P NMR (CDCl ₃ ): 55.41; 55.21 ppm.

Przykład XI. 3'-O-(S-benzylometanotiofosfonian)5'-O-DMT-N⁶-Benzoilo-2'-O-deoksyadenylowy, wzór 5, B - adenina:Example XI. 3'-O- (S-benzylmethanothiophosphonate) 5'-O-DMT-N ⁶ -Benzoyl-2'-O-deoxyadenyl, formula 5, B - adenine:

Otrzymany ze związku o wzorze 2, B-adenina (1 mmol) jak w przykładzie VIII. Wydajność 75%; ³¹P NMR (CH₂C1₂/C₆D₆): 55,80; 55,53 ppm.Prepared from the compound of formula 2, B-adenine (1 mmol) as in Example VIII. 75% yield; ³¹ P NMR (CH ₂ C1 ₂ / C ₆ D _6): 55.80; 55.53 ppm.

Przykład XII. 3'-O-(S-benzylo metanotiofosfonian) 5-O-DMT- N⁴-Isobutyrylo-2'-O-deoksyguanidylowy wzór 5a, B-guanina:Example XII. 3'-O- (S-benzyl methanothiophosphonate) 5-O-DMT- N ⁴ -Isobutyryl-2'-O-deoxyguanidyl formula 5a, B-guanine:

Otrzymany ze związku o wzorze 2, B-guanina (1 mmol); wydajność 75%; ³¹P NMR (CDC1₃): 56,01; 55,85 ppm.Prepared from the compound of formula 2, B-guanine (1 mmol); 75% efficiency; ³¹ P NMR (CDCl ₃ ): 56.01; 55.85 ppm.

Przykład ΧΙΠ. Reakcja utlenienia 3'-O-metanofosfonotioanilidu 5'-O-DMT-tymidylowegowzór2b,do3'-O-metanofosfonoanilidu 5'-O-DMT-tymidylowegowzór3b,B'=tyminaz zastosowaniem peroksymonosiaczanu potasowego. Związek FAST - wzór 2a (0,072 g; 1 mmola) rozpuszczono w mieszaninie metanolu i tetrahydrofuranu i dodano wodny roztwór peroksymonosiarczanu potasowego (pH 6,7-7) (2 mmole). Po 10 minutach dodano 10% tiosiarczan sodowy i produkt ekstrahowano z mieszaniny reakcyjnej za pomocą chloroformu. Produkt o wzorze 3aExample ΧΙΠ. Oxidation of 3'-O-methanophosphonothioanilide 5'-O-DMT-thymidyl formula 2b, to 5'-O-methanophosphonoanilide 5'-O-DMT-thymidyl formula 3b, B '= thymine with potassium peroxymonosilicate. FAST compound - formula 2a (0.072 g; 1 mmol) was dissolved in a mixture of methanol and tetrahydrofuran and an aqueous solution of potassium peroxymonosulfate (pH 6.7-7) (2 mmol) was added. After 10 minutes, 10% sodium thiosulfate was added and the product was extracted from the reaction mixture with chloroform. Product of formula 3a

181 746 oczyszczano metodą chromatografii na żelu krzemionkowym. Otrzymano diastereomerycznie czysty FAST-wzór 3a z wydajnością 73% (0,047 g); ³¹PNMR(CDC1₃): 30,1 ppm. Spektroskopia masowa: FAB MS: 696,4.181,746 was purified by silica gel chromatography. Diastereomerically pure FAST-formula 3a was obtained in a yield of 73% (0.047 g); ³¹ pnmr (CDC1 _3): 30.1 ppm. Mass Spectroscopy: FAB MS: 696.4.

P r z y k 1 ad XIV. Analogicznie j ak w przykładzie XIII przeprowadzono konwersj ę SLOW - wzór 2b do SLOW - wzór 3b z wydajnością 70%; ³¹P NMR (CDC1₃): 29,89 ppm.Example 1 to XIV. Analogously to the example XIII, the conversion of SLOW - formula 2b to SLOW - formula 3b was performed with the efficiency of 70%; ³¹ P NMR (CDCl ₃ ): 29.89 ppm.

Przykład XV.Konwersja3'-O-metanofbsfonoanilidów5-O-DMT-tymidylowychwzór3, B-tymina do 3'-O-(S-benzylometanotiofosfonianów) tymidylowych wzór 5, B-tymina.Example XV Conversion of 3'-O-methanesphosphonanilides of 5-O-DMT-thymidyl formula 3, B-thymine to 3'-O- (S-benzylmethanothiophosphonate) thymidyl formula 5, B-thymine.

Związki o wzorze 3 (FAST lub SLOW) (50 mg) osuszono i rozpuszczono w THF (2 ml) z dodatkiem l,8-diazabicyklo-[5.4.0]undek-7-enu (DBU) (0,02 ml). Kontynuowano mieszanie przez 45 minut w temperaturze pokojowej, a następnie dodano disiarczek węgla (1 ml). Po 20 minutach dodano bromek benzylu (5 równoważników). Produkt oczyszczano w wyniku ekstrakcji (chloroform-woda) i chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym. Ze związku FAST - 3a otrzymano produkt FAST - 5b z wydajnością 65% (0,036 g). ³¹P NMR (CDC13): 56,85 ppm. Związek SLOW -3b przeprowadzono w SLOW -5a z wydajnością 70% (0,039 g). ³¹P NMR (CDC13): 55,38 ppm.Compounds of formula 3 (FAST or SLOW) (50 mg) were dried and dissolved in THF (2 ml) with 1,8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene (DBU) (0.02 ml). Stirring was continued for 45 minutes at room temperature and then carbon disulfide (1 ml) was added. After 20 minutes, benzyl bromide (5 eq.) Was added. The product was purified by extraction (chloroform-water) and silica gel column chromatography. From FAST-3a, the product FAST-5b was obtained in a yield of 65% (0.036 g). ³¹ P NMR (CDCl 3): 56.85 ppm. SLOW -3b was converted to SLOW -5a in a yield of 70% (0.039 g). ³¹ P NMR (CDCl 3): 55.38 ppm.

Przykład XVI. Ogólny przepis na otrzymywanie dinukleozydo (3',59-metanofosfonianów o wzorze la.Example XVI. General recipe for the preparation of the dinucleoside (3 ', 59-methanophosphonates of formula Ia.

Diastereomerycznie czyste [Sp] - wzór 5a (SLOW) (0,3 mmol) i 3'-O-acetylo(N-blokowane) - wzór 6 (0,1 mmol) osuszono i rozpuszczono w pirydynie (5 ml) z dodatkiem chlorku litu (0,125 g, 3 mmol). Do tej mieszaniny dodano DBU (0,456 g, 3 mmol) w pirydynie (1,5 ml). Reakcję prowadzono w temperaturze pokojowej. Po zakończeniu reakcji mieszaninę reakcyjnązatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, rozpuszczono w choloroformie i ekstrahowano buforem fosforanowym. Po zatężeniu warstwy organicznej produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym.The diastereomerically pure [Sp] formula 5a (SLOW) (0.3 mmol) and the 3'-O-acetyl (N-blocked) formula 6 (0.1 mmol) were dried and dissolved in pyridine (5 ml) with the addition of chloride lithium (0.125 g, 3 mmol). To this mixture was added DBU (0.456 g, 3 mmol) in pyridine (1.5 ml). The reaction was carried out at room temperature. After completion of the reaction, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure, dissolved in choloroform and extracted with phosphate buffer. After concentration of the organic layer, the product was purified by column chromatography on silica gel.

Przykład XVII. [Rpj-S^O-DMT-tymidyloP^S^-metanofosfonian3'-O-acetylotymidylowy (wzór la).Example XVII. 3'-O-acetylthymidyl [Rpj-S ^ O-DMT-thymidyl [Rp] S ^ -methanophosphonate (formula Ia).

Otrzymano z [Sp]-wzór 5a (SLOW) jak w przykładzie XVI, ³¹P NMR: 55,14 ppm i 3'-O-acetylotymidyny - wzór 6. Wydajność 85%, ³¹P NMR (CDCL₃): 33,00 ppm; ’H NMR (CDC1₃): 1,58 (3H, d, P-CH₃); 2JP-H = 17,64 Hz; FAB-MS [M-H]: 887,3.Was obtained from [Sp] -total 5a (SLOW) as in Example XVI, ³¹ P NMR d: 55.14 ppm and the 3'-O-acetylotymidyny - example 6. Yield 85% ³¹ P NMR (CDCl _3): 33.00 ppm; 1 H NMR (CDCl ₃ ): 1.58 (3H, d, P-CH ₃ ); 2JP-H = 17.64 Hz; FAB-MS [MH]: 887.3.

Przykład XVIII. [Rp]-5'-O-DMT-N⁴-Benzoilo-2'-O-deoksycytydylo(3',5')-metanofosfonian N⁴-benzoilo-3'-O-acetylo cytydylowy wzór (la).Example XVIII. [Rp] -5'-O-DMT-N ⁴ -Benzoyl-2'-O-deoxycytidyl (3 ', 5') N ⁴ -benzoyl-3'-O-acetyl cytidyl methanophosphonate formula (Ia).

Otrzymano z [Sp] - wzór 5b (SLOW) jak w przykładzie XVI, ³¹P NMR: 56,20 ppm i N⁴-benzoilo-3'-O-acetylocytydyny - wzór 6b. Wydajność 73%. FAB MS [M-H]: 1067;³’P NMR (CDC1₃): 33,08 ppm; Ή NMR (CDC1₃): 1,6 (3H, d, P-CH₃), 2JP-H=17,5 Hz.Prepared from [Sp] - Formula 5b (SLOW) as in Example XVI, ³¹ P NMR: 56.20 ppm and N ⁴ -benzoyl-3'-O-acetylcytidine - Formula 6b. 73% yield. FAB MS [MH]: 1067; ³ 'P NMR (CDCl ₃ ): 33.08 ppm; Ή NMR (CDC1 _3): 1.6 (3H, d, P-CH _3), 2JP-H = 17.5 Hz.

181 746181 746

wzór 2 wzór 2a wzór2bpattern 2 pattern 2a pattern2b

Me^Z 'O wzór 3 wzór 3a wzór 3bMe ^Z 'O formula 3 formula 3a formula 3b

181 746181 746

R³X wzór 4R ³ X formula 4

wzór 5 wzór 5a wzór 5bpattern 5 pattern 5a pattern 5b

Ηθη o B'Ηθη o B '

R⁴OR ⁴ O

R² wzór 6R ² formula 6

R¹OR ¹ O

MeMe

wzór 7aformula 7a

wzór 7 wzór 7bformula 7 formula 7b

181 746181 746

Schemat 1Scheme 1

wzór 2bformula 2b

181 746181 746

Schemat 2Scheme 2

Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 60 egz. Cena 4,00 zł.Publishing Department of the Polish Patent Office. Circulation of 60 copies. Price PLN 4.00.

Claims

Patent claims

A method for the preparation of modified P-chiral nucleotide analogs of general formula 1 (Ia + Ib), wherein R ¹ is a blocking group, preferably 4,4'-dimethoxytrityl or 9-phenylxanthen-9-yl, R ² is hydrogen or an alkoxy group, preferably methoxy, R ⁴ is a blocking group, preferably acetyl, t-butyldimethylsilyl or a nucleotide 5'-O-methanophosphonate, and B 'is an N-blocked purine or pyrimidine base, preferably selected from the group consisting of Thymine, Uracil, Adenine, Cytosine and Guanine, using compounds of general formula 2, characterized in that the mixture of nucleoside-3'-O-methanophosphonothioanilide diastereoisomers of general formula 2 (2a + 2b), wherein R ¹ , R ² and B 'are as defined above, is subjected to is reacted with sodium hydride or 1,8-diazabicyclo- [5.4.0] -undec-7-ene (DBU) and carbon dioxide, followed by alkylation of the transiently obtained nucleoside 3'-O-methanothiophosphonic acid (sodium salt or DBU- new) of formula 7 (7a + 7b) by means of experiments an alkylating agent of the formula IV in which R ³ is an alkyl or alkylaryl group, aX is a chlorine, bromine or iodine atom, and the obtained product of the general formula 5 (5a + 5b) is subjected to a condensation reaction with an alcohol of the general formula 6 where R ² and R ⁴ are as defined above.

2. The method according to p. The process of claim 1, characterized in that the condensation reaction between the compound of general formula 5 and the alcohol of formula 6, wherein the substituents have the above meanings, is carried out under anhydrous conditions in an aprotic organic solvent, preferably acetonitrile.

3. The method according to p. A process as claimed in claim 1, characterized in that bases, preferably tertiary amines, and most preferably 1,8-diazabicyclo- [5.4.0] -undec-7-ene (DBU ) and lithium salts, preferably lithium chloride.

4. A method for the preparation of modified P-chiral nucleotide analogues of general formula 1 (Ia + Ib), wherein R ¹ is a blocking group, preferably 4,4'-dimethoxytrityl or 9-phenylxanthen-9-yl, R ² is hydrogen or alkoxy, preferably methoxy, R ⁴ is a blocking group, preferably an acetyl, t-butyldimethylsilyl or 5'-O-methanophosphonate group of a nucleotide, and B 'is an N-blocked purine or pyrimidine base, preferably selected from the group consisting of Thymine, Uracil, Adenine , cytosine and guanine, using compounds of formula 2, characterized in that the mixture of diastereomers of nucleoside 3'-O-metanofosfonotioanilidu of formula 2 (2a + 2b), wherein R, R ² and B 'mająpodanie hereinbefore defined, subjected to an oxidation reaction with known oxidizing agents, preferably with potassium peroxymonosulfate or hydrogen peroxide, then the obtained product of general formula 3 (3a + 3b), wherein R ¹ , R ² and B 'are as defined above, is reacted with sodium hydride or DBU and carbon disulfide, and the transiently obtained nucleoside 3'-O-methanothiophosphonic acid (sodium or DBU-sodium salt) of formula (7a + 7b) is alkylated with an alkylating reagent of formula 4, wherein R ³ is an alkyl or alkylaryl group and X is chlorine, bromine or iodine, and the obtained product of general formula 5 (5a + 5b) is condensed with an alcohol of general formula 6, where R ² and R ⁴ are as defined above.

5. The method according to p. The process of claim 4, wherein the condensation reaction between the compound of general formula 5 and the alcohol of formula 6 wherein the substituents have the above meanings is carried out under anhydrous conditions in an aprotic organic solvent, preferably acetonitrile.

6. The method according to p. A process as claimed in claim 4, characterized in that bases, preferably tertiary

181,746 dium amines, most preferably 1,8-diazabicyclo [5.4.0] -undec-7-ene (DBU), and lithium salts, preferably lithium chloride.

7. A method for the preparation of modified P-chiral nucleotide analogues of general formula Ia, wherein R ¹ is a blocking group, preferably 4,4'-dimethoxytrityl or 9-phenyl-xanthen-9-yl, R ² is a hydrogen atom or an alkoxy group, preferably methoxy R ⁴ is a blocking group, preferably an acetyl t-butyldimethylsilyl group or a 5'-O-methane phosphonate group of a nucleotide, and B 'is an N-blocked purine or pyrimidine base preferably selected from the group consisting of Thymine, Uracil, Adenine, Cytosine and Guanine, using compounds of the general formula 2, characterized in that the diastereomer nucleoside 3'-O-metanofosfonotioanilidu of general formula 2a, wherein R ^1, R ² and B 'mająpodanie hereinbefore defined, is reacted with sodium hydride or 1,8-diazabicyclo [5.4.0 ] -undec-7-ene (DBU) and carbon dioxide, followed by alkylation of the transiently obtained nucleoside 3'-O-methanothiophosphonic acid (sodium or DBU-ionium salt) of formula 7a with an alkylating reagent of formula 4 in which m R ³ is an alkyl or alkylaryl group and X is chlorine, bromine or iodine, and the resulting product of general formula 5a is subjected to condensation with an alcohol of formula 6, where R ² and R ⁴ are as defined above.

8. The method according to p. The process of claim 7, characterized in that the condensation reaction between the compound of general formula 5a and the alcohol of formula 6 wherein the substituents have the above meanings is carried out under anhydrous conditions in an aprotic organic solvent, preferably acetonitrile.

9. The method according to p. The process according to claim 7, characterized in that bases, preferably tertiary amines, and most preferably 1,8-diazabicyclo [5.4.0] -undec-7-ene are used as process activator between the compound of general formula 5a and the alcohol of formula 6. (DBU) and lithium salts, preferably calcium chloride.

A method for the preparation of modified P-chiral nucleotide analogues of general formula Ia, wherein R ¹ is a blocking group, preferably 4,4'-dimethoxytrityl or 9-phenylxanthen-9-yl, R ² is a hydrogen atom or an alkoxy group, preferably a methoxy group R ⁴ represents a blocking group, preferably an acetyl t-butyldimethylsilyl group or a 5'-O-methane phosphonate group of a nucleotide, and B 'represents an N-blocked purine or pyrimidine base preferably selected from the group consisting of Thymine, Uracil, Adenine, Cytosine and Guanine, using compounds of general formula 2 characterized in that the diastereomer nucleoside 3'-O-metanofosfonotioanilidu of the general formula 2b, wherein R ', R ² and B' mająpodanie hereinbefore defined, is reacted by oxidation with known oxidizing agents, preferably with potassium peroxymonosulfate or hydrogen peroxide , then the product obtained of general formula 3b, in which R ¹ , R ² and B 'are as defined above, is reacted with sodium hydride 1 or DBU and carbon disulphide, and the transiently obtained nucleoside 3'-O-methanothiophosphonic acid (sodium or DBU-nium salt) of formula 7a is alkylated with an alkylating reagent of formula 4 where R ³ is an alkyl or alkylaryl group and X is chlorine, bromine or iodine, and the resulting product of general formula 5a is subjected to a condensation reaction with an alcohol of formula 6, wherein R ² and R ⁴ are as defined above.

11. The method according to p. The process of claim 10, characterized in that the condensation reaction between the compound of general formula 5a and the alcohol of formula 6 wherein the substituents have the above meanings is carried out under anhydrous conditions in an aprotic organic solvent, preferably acetonitrile.

12. The method according to p. A process as claimed in claim 10, characterized in that bases, preferably tertiary amines, and most preferably 1,8-diazabicyclo- [5.4.0] -undec-7-ene (DBU ) and lithium salts, preferably lithium chloride.

13. A method for the preparation of modified P-chiral nucleotide analogues of general formula Ib, wherein R ¹ is a blocking group, preferably 4,4'-dimethoxytrityl or 9-phenylxanthen-9-yl, R ² is a hydrogen atom or an alkoxy group, preferably methoxy

181 746

Iowa, R ⁴ is a blocking group, preferably acetyl, t-butyldimethylsilyl or a nucleotide 5'-O-methane phosphonate, and B 'is an N-blocked purine or pyrimidine base, preferably selected from the group consisting of Thymine, Uracil, Adenine, Cytosine and Guanine, using compounds of general formula 2, characterized in that the diastereomer nucleoside 3'-O-metanofosfonotioanilidu of the general formula 2b, wherein R ^1, R ² and B 'mająpodanie hereinbefore defined, is reacted with sodium hydride or 1,8-diazabicyclo [5.4.0] -undec-7-ene (DBU) and carbon dioxide, followed by alkylation of the transiently obtained nucleoside 3'-O-methanothiophosphonic acid (sodium or DBU-nium salt) of formula 7b with an alkylating reagent of formula 4, in wherein R ³ is an alkyl or alkylaryl group and X is chlorine, bromine or iodine, and the resulting product of general formula 5b is subjected to a condensation reaction with an alcohol of formula 6, where R ² and R ⁴ are as defined above.

14. The method according to p. A process as claimed in claim 13, characterized in that the condensation reaction between the compound of general formula 5b and the alcohol of formula 6, wherein the substituents have the above meanings, is carried out under anhydrous conditions in an aprotic organic solvent, preferably acetonitrile.

15. The method according to p. A process according to claim 13, characterized in that bases, preferably tertiary amines, and most preferably 1,8-diazabicyclo [5.4.0] -undec-7-ene (DBU) are used as process activator between the compound of general formula 5b and the alcohol of formula 6. ) and lithium salts, preferably lithium chloride.

16. A method for the preparation of modified P-chiral nucleotide analogues of general formula Ib, wherein R ¹ is a blocking group, preferably 4,4'-dimethoxytrityl or 9-phenyl-xanthen-9-yl, R ² is a hydrogen atom or an alkoxy group, preferably methoxy , R ⁴ is a blocking group, preferably an acetyl, t-butyldimethylsilyl or a 5'-O-methane phosphonate group of a nucleotide, and B 'is an N-blocked purine or pyrimidine base, preferably selected from the group consisting of Thymine, Uracil, Adenine, Cytosine and Guanine, using the compounds of formula 2, characterized in that the diastereomer nucleoside 3'-O-metanofosfonotioanilidu of general formula 2a, wherein R ^1, R ² and B 'mająpodanie hereinbefore defined, is reacted by oxidation with known oxidizing reagents, preferably using a peroxymonosulfate potassium hydroxide or hydrogen peroxide, and then the resulting product of the general formula 3a, wherein R ^1, R ² and B 'are as defined above, is reacted with hydrides with sodium or DBU and carbon disulfide, and the transiently obtained nucleoside 3'-O-methanothiophosphonic acid (sodium or DBU-sodium salt) of formula 7b is alkylated with an alkylating reagent of formula 4, wherein R ³ is an alkyl or alkylaryl group, and X represents chlorine, bromine or iodine, and the resulting product of formula 5b is subjected to a condensation reaction with an alcohol of formula 6, wherein R ² and R ⁴ are as defined above.

17. The method according to p. The process of claim 16, characterized in that the condensation reaction between the compound of general formula 5b and the alcohol of formula 6, wherein the substituents have the above meanings, is carried out under anhydrous conditions in an aprotic organic solvent, preferably acetonitrile.

18. The method according to p. A process as claimed in claim 16, characterized in that bases, preferably tertiary amines, and most preferably 1,8-diazabicyclo [5.4.0] -undec-7-ene (DBU ) and lithium salts, preferably lithium chloride.

* ♦ *