Przedmiotem wynalazku jest sposób wyodrebniania erytromycyny z przesaczu pofermentacyjnego na drodze ekstrakcji i krystalizacji. Metody izolowania i krystalizacji erytromycyny z plynów pofermentacyjnych sa znane z wielu patentów krajowych i zagranicznych. Wedlug jednej ze znanych metod opisanej w opisie patentowym polskim nr 52 448 wytraca sie z ekstraktu erytromycyny w rozpuszczalniku organicznym, uzyska¬ nego z przesaczu pofermentacyjnego, kompleks tiocyjaniano-octanowy lub propionowy erytromycyny za pomo¬ ca tiocyjanianu sodu i kwasu octowego badz propionowego. Po wyodrebnieniu kompleksu przeprowadza sie go w wolna zasade erytromycyny ogólnie znanymi metodami.Wydajnosc kompleksu erytromycyny podana w przykladzie opisu patentowego wynosi 82,2% do 87% wydajnosci teoretycznej. Nie zostala natomiast ujawniona w patencie wydajnosc wolnej zasady erytromycyny ani tez jej aktywnosc biologiczna. W patencie okreslono tylko moc biologiczna kompleksu erytromycyny wynoszaca 570 mcg/mg. Znana metoda z opisu patentowego polskiego nr 76 648 polega na rozcienczaniu plynu pofermentacyjnego woda do korzystnej, lepkosci przy wartosci pH 7,4 do 8,0, ekstrakcji za pomoca rozpuszczalni¬ ka organicznego, odmyciu zanieczyszczen woda z zachowaniem wartosci pH 8,0 do 11,0, oddzieleniu wody i przeprowadzeniu erytromycyny do roztworu octanowego lub mrówczanowego buforu o wartosci pH 4,3 do 4,8, zobojetnieniu wodnego roztworu octanu lub mrówczanu erytromycyny wodnym roztworem wodorotlenku sodu do wartosci pH 6,9 do 7,0, przeprowadzeniu erytromycyny w jej tiocyjanian za pomoca wodnego roztworu tiocyjanianu sodu, potasu lub amonu oraz na krystalizacji tiocyjanianu erytromycyny w temperaturze 20 do 25 C przy wartosci pH 6,8 do 7,2 i w obecnosci nadmiaru odpowiedniego tiocyjanianu. Krystaliczny osad tiocyjanianu erytromycyny po jego odsaczeniu i przemyciu woda przerabia sie na zasade erytromycyny.Wydajnosc erytromycyny zasady w przeliczeniu na substancje bezwodna wynosi 76,3%, a na substancje o zawartosci 4,3% wilgoci wynosi 84,5% wydajnosci teoretycznej. Aktywnosc biologiczna zasady erytromycyny oznaczono od 923 mcg/mg do 980 mcg/mg.2 142175 Sposób wytwarzania erytromycyny objety patentem polskim nr 87 598 uwzglednia bezposrednie otrzymy¬ wanie tego antybiotyku z przesaczu pofermentacyjnego w postaci krystalicznej soli nierozpuszczalnej w wodzie, takiej jak sól nadchloranowa lub tiocyjanianowa erytromycyny, wydzielanej za pomoca nadchloranu lub tiocyja- ifianii sodu badz potasu z dodatkiem wodnego roztworu wodorotlenku sodu i w nadmiarzejonów nadchlorano- wych lub tiocyjanianowych przy korzystnej wartosci pH 6,5 do 8,0 oraz w korzystnej temperaturze 5-25° C.Wydzielona sól erytromycyny oczyszcza sie i rozklada do wolnej zasady erytromycyny o czystosci farmakopeal- nej przez dodanie-jej do rozpuszczalnika nie mieszajacego sie z woda jak metyloizobutyloketon, octan amylu lub butylu przy wartosci pH 9,5 do 10,5 oraz przez krystalizacje soli i nastepnie jej rozklad.Wydajnosc metody zostala podana w przeliczeniu na aktywnosc biologiczna erytromycyny zasady i wynosi 914 do 945 mcg/mg.Metoda znana z opisu patentowego polskiego nr 114 193 wprowadza zmiany w sposobie izolacji i krystalizacji erytromycyny, a mianowicie alkalizacje wodnego roztworu buforowego erytromycyny kwasnym weglanem sodu w postaci zawiesiny lub roztworu o wartosci pH 7,6 do 7,7. Dodanie roztworu buforowego erytromycyny do zawiesiny badz roztworu kwasnej soli kwasu weglowego zmienia wartosc pH roztworu buforowego 7,7 do 7,2, co zapobiega rozkladowi antybiotyku. Krystalizacje tiocyjanianu erytromycyny prowadzi sie w obecnosci obojetnej soli nieorganicznej rozpuszczalnej w wodzie jak np. chlorek sodu w rozpuszczalniku organicznym mieszajacym sie z woda jak np. metanol. Uzyskany tiocyjanian erytromycyny w postaci krystalicznej jest poddawany dwuetapo¬ wemu rozkladowi alkalicznemu do wolnej zasady erytromycyny przez jego stopniowe wprowadzanie do miesza¬ niny reakcyjnej i ciaglej korekcie wartosci pH do okolo 10,0. W procesie alkalicznego rozkladu soli erytromycy¬ ny stosuje sie ponadto rozpuszczalnik organiczny mieszajacy sie z woda np. etanol lub aceton. Brak w opisie patentowym okreslenia aktywnosci biologicznej uzyskiwanego antybiotyku, a takze wydajnosci osiaganej w procesie.Zgodnie z metoda opisana w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 2 653 899, ekstrakcje erytromycyny z plynu pofiltracyjnego po fermentacji prowadzi sie rozpuszczalnikiem organicznym nie mieszaja¬ cym sie z woda, zwlaszcza octanem amylu, przy wartosci pH 9,0 do 10,0 osiaganej wskutek dodawania roztworu wodorotlenku sodu. Mieszanine w octanie amylu poddaje sie dwukrotnej ekstrakcji wodnej z dodatkiem kwasu siarkowego, doprowadzajacego wartosc pH do okolo 5,0. Polaczone ekstrakty wodne doprowadza sie do wartosci pH 8,0 za pomoca wodnego roztworu wodorotlenku sodu, zateza sie je pod próznia do okreslonej objetosci i w celu uzyskania roztworu o wartosci pH9,5 dodaje sie wodny roztwór wodorotlenku sodu i prowadzi krystalizacje. Odsacza sie otrzymane krysztaly erytromycyny, a do roztworu dodaje sie rozcienczony kwas siarkowy uzyskujac wartosc pH roztworu okolo 8,0. W celu wydzielenia kolejnej porcji krysztalów zateza sie macierzysty roztwór pod próznia do okreslonej objetosci i doprowadza jego wartosc pH do okolo 9,5. Przez dodatkowa rekrystalizacje oczyszcza sie erytromycyne z mieszaniny wodno-acetonowej w stosunku 2:1.Wedlug innej metody znanej z opisu patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 2 864 817, erytro¬ mycyne otrzymuje sie przez jednoetapowy alkaliczny rozklad jej soli tiocyjanianowej w mieszaninie wody i rozpuszczalnika organicznego mieszajacego sie z woda przy wartosci pH 9,0 do 10,0 w podwyzszonej temperatu¬ rze. Wytraceniu ulegaja krysztaly solwatu erytromycyny z rozpuszczalnikiem organicznym, które odsacza sie i ogrzewa w wodzie przy wartosci pH okolo 9,0 w temperaturze 55° - 100°C.Opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 2 881 162 obejmuje sposób otrzymywania zasady erytromycyny z mieszaniny wodnego roztworu surowej soli erytromycyny, zwlaszcza jej octanu i rozpuszczalni¬ ka organicznego mieszajacego sie z woda, w którym erytromycyna jest stosunkowo dobrze rozpuszczalna np. w acetonie lub alkoholu izopropylowym przy wartosci pH 8,5 i w temperaturze 35—45°C. Po dodaniu soli nieorganicznej rozpuszczalnej w wodzie, która powoduje wydzielenie fazy rozpuszczalnika organicznego i fazy wodnej zawierajacej te sól przy doprowadzeniu wartosci pH9,5 do 11,0 i temperatury do okolo 35-45°C, nastepnie rozdziela sie faze rozpuszczalnika organicznego od fazy wodnej z sola nieorganiczna, po czym krystalizuje sie zasade erytromycyny wolna od zanieczyszczen.Z opisu patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 2 894 943 wynika, ze przesacz pofermentacyjny o wartosci pH9,0 do 10,5 z dodatkiem roztworu wodorotlenku sodu poddaje sie ekstrakcji rozpuszczalnikiem organicznym nie mieszajacym sie z woda np. octanem amylu, nastepnie przeprowadza sie reekstrakcje do buforu przy wartosci pH 5,0 do 6,5, zawierajacego wodny roztwór kwasu cytrynowego i wodorotlenku sodu, po czym prowadzi sie kolejna ekstrakcje przy wartosci pH8,5 do 10,2 do rozpuszczalnika organicznego o wysokim wspólczynniku temperatury rozpuszczania i krystalizacji erytromycyny z tego rozpuszczalnika.142175 3 Wedlug opisu patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 551 294 sposób izolowania i krystalizacji erytromycyny obejmuje takie etapy, jak ekstrakcja plynu pofermentacyjnego octanem etylu, zageszczenie ekstraktu organicznego, nastepna ekstrakcja roztworem buforu fosforowego o wartosci pH 5,0 oraz dwukrotna ekstrakcja eterem etylowym. Uzyskuje sie dwie fazy poekstrakcyjne, z których jedna faza wodna z dodatkiem kwasu fosforowego zawiera erytromycyne i te faze doprowadza sie do wartosci pH 9,3, aby poddac ja nastepnie trzygodzinnej ekstrakcji eterem. Ekstrakty eterowe laczy sie, suszy nad bezwodnym siarczanem sodu i zageszcza pod próznia. Z uzyskanego osadu otrzymuje sie erytromycyne po przeprowadzeniu krystalizacji z chloroformu.Ujmujac stan techniki syntetycznie nalezy stwierdzic, ze zgodnie zjedna z podstawowych metod z tego zakresu, mianowicie opisana w opisie Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 2 653 899, ekstrakge erytromycyny po filtracji brzeczki prowadzi sie rozpuszczalnikiem organicznym nie mieszajacym sie z woda przy wartosci pH 9,0 do 10,0, a do korygowania alkalicznego odczynu stosuje sie wodorotlenek sodu.Sposobem wedlug wynalazku ekstrakcje erytromycyny z przesaczu pofermentacyjnego do rozpuszczalnika organicznego nie mieszajacego sie z woda prowadzi sie w pH 8,8 do 10,2 stabilizowanym przez uklad buforowy soli kwasu weglowego, taki jak wodoroweglan —weglan sodu, potasu lub amonu, badz ich mieszaniny. Dla uzyskania ukladu buforowego konieczna jest obecnosc jonów weglanowych i wodoroweglanowych w przesaczu pofermentacyjnym w podanym wyzej zakresie wartosci pH. Ten uklad buforowy ma znaczna pojemnosc na przealkalizowanie i spadki wartosci okreslonego pH. Prowadzenie ekstrakcji przy wyzszych wartosciach pH niz 10,2 szczególnie, gdy zawartosc jonów wodoroweglanowych jest niewielka, badz wystepuje ich calkowity brak, powoduje szkodliwe, miejscowe przealkalizowanie. Takze dla procesu ekstrakcji prowadzonego przy wartosci pH ponizej 8,8, bufor ten zabezpiecza w niewielkim stopniu przed spadkiem wartosci pH do 8,6, w którym erytromycyna-zasada przechodzi w sól i nie daje sie ekstrahowac do rozpuszczalnika organicznego nie mieszajace¬ go sie z woda. Uzyskany w wyniku ekstrakcji roztwór erytromycyny w rozpuszczalniku organicznym nie mieszajacym sie z woda poddaje sie nastepnie izolacji.Sposób ekstrakcji prowadzony wedlug wynalazku zapobiega alkalicznej degradacji erytromycyny oraz hydrolizie, stosowanych w procesie ekstrakcji octanów zarówno butylu jak i amylu. Ponadto takie prowadzenie ekstrakcji poprawia rozdzial dwufazowy rozpuszczalnika organicznego i roztworu wodnego. Zastosowanie nowego sposobu alkalizacji umozliwia wzrost wydajnosci ekstrakcji od 3 do 5% i powoduje zmniejszenie strat rozpuszczalnika organicznego nie mieszajacego sie z woda, takiego jak octan amylu lub butylu. Ze szczególowej analizy stanu techniki wynika, ze znanymi dotychczas metodami z opisów patentowych polskich i amerykanskich druga ekstrakcje erytromycyny z roztworu w rozpuszczalniku organicznym nie mieszajacym sie z woda prowadzi sie wodnym buforem o wartosci pH 4,3 do 5,8 w temperaturze pokojowej i uzyskuje roztwory zawierajace erytromycyne w ilosci do 30 g/dcm3.Jedna z cech wynalazku jest prowadzenie drugiej ekstrakcji erytromycyny wodnym roztworem rozpuszczal¬ nika organicznego mieszajacego .sie z woda w niskich temperaturach. Dodatek rozpuszczalnika obniza lepkosc roztworu wodnego erytromycyny i dzieki temu umozliwia przeprowadzenie ekstrakcji w krótkim czasie przez zastosowanie ekstraktorów wykorzystujacych dzialanie sily odsrodkowej, w których czas ekstrakcji jest stosun¬ kowo krótki, a takze nieoczekiwanie ulatwia uzyskiwanie wysokiego stezenia antybiotyku w ilosci 30 do 100 tysiecy jednostek/cm3. Stosowanie w procesie ekstrakcji niskich temperatur -5° do +15°C, stanowiace jedna z istotnych cech wynalazku, zapobiega rozkladowi erytromycyny w kwasnym srodowisku i ulatwia uzyskiwanie wysokich stezen erytromycyny w klarownym roztworze otrzymywanym z procesu ekstrakcji. Jak powszechnie wiadomo na podstawie znanych metod krystalizacje erytromycyny mozna prowadzic przez tworze¬ nie jej soli np. tiocyjanianu lub nadchloranu, krystalizujacych z roztworów w rozpuszczalnikach organicznych nie mieszajacych sie z woda (opis patentowy polski nr 52 448) lub z wodnych roztworów plynów fermentacyjnych (opis patentowy polski nr 87 598) albo z wodnoorganicznych roztworów z dodatkiem obojetnych soli nieorgani¬ cznych (opis patentowy polski nr 114 193).Sposobem wedlug wynalazku proces krystalizacji róznych soli tego antybiotyku prowadzi sie przez dodanie wodnoorganicznego ekstraktu o wysokim stezeniu erytromycyny do organicznego lub wodnoorganiczne- go roztworu kwasnego buforu, zawierajacego takie aniony jak cytrynowy, winowy, wersenowy, mrówkowy lub fosforanowy i sole nieorganiczne o wysokim stezeniu, takie jak tiocyjanian lub nadchloran sodu, potasu badz amonu, co umozliwia prowadzenie krystalizacji w poczatkowej fazie procesu przy kwasnym pH o wartosci 5,0 do 6,5, w malym nadmiarze wolnej erytromycyny i przy duzym stezeniu kwasnych soli. W przeciwienstwie do dotychczas znanych metod sposób ten zapewnia powolna krystalizacje erytromycyny przez wolny wzrost stezenia antybiotyku w roztworze, w którym prowadzona jest krystalizacja. Zmniejszenie wartosci pH sprzyja ponadto powolnej krystalizacji soli erytromycyny, która w niskich wartosciach pH okolo 4,0 nie zachodzi, natomiast w pH 7,0 przebiega gwaltownie. W wyniku krystalizacji prowadzonej zgodnie z wynalazkiem otrzymu¬ je sie produkt czysty o dobrze wyksztalconych krysztalach bez zawartosci niekorzystnej anhydroerytromycyny.Proces rozkladu tiocyjanianu lub nadchloranu erytromycyny prowadzi sie znanymi sposobami dodajac do zawiesiny soli erytromycyny w roztworze wodnoorganicznym wodorotlenek sodu, potasu lub amonu dla uzyskania okreslonej wartosci pH. Metody te zostaly opisane w opisie patentowym polskim nr 114 193 oraz w opisie patento\*ym Stanów Zjedn. Ameryki nr 2 864 817.4 142175 Sposób prowadzenia rozkladu soli erytromycyny polega wedlug wynalazku na uzyciu wodnego roztworu alkalicznego buforu z zawartoscia wodoroweglanu i weglanu potasu, sodu lub amonu, badz chlorku i wodorotlen¬ ku amonu, który powoduje szybki rozklad tiocyjanianu lub nadchloranu erytromycyny bez potrzeby dokonywa¬ nia korekty wartosci pH. W wyniku zastosowania wynalazku otrzymuje sie czysta erytromycyne-zasade nie zanieczyszczona wspólkrystalizujacym tiocyjanianem lub nadchloranem erytromycyny, co ma zwykle miejsce, jesli wystepuja wahania w wartosci pH.Zgodnie z wynalazkiem rozklad tiocyjanianu lub nadchloranu erytromycyny mozna prowadzic dwuwarian- towo.Pierwszy wariant obejmuje dzialanie na sól erytromycyny wodnego roztworu alkalicznego buforu i rozpuszczalnika organicznego lub mieszaniny rozpuszczalników organicznych w ilosci od 60 do 95% objetoscio¬ wych w celu uzyskania klarownego roztworu erytromycyny i nastepnie dla krystalizacji tego antybiotyku nadmiarem wody. Natomiast drugi wariant polega na dzialaniu wodnego roztworu alkalicznego buforu z dodatkiem rozpuszczalnika organicznego do AO& objetosciowych na sól erytromycyny w celu uzyskania wolnej zasady erytromycyny, a reakcja ta przebiega w zawiesinie bez wydzielania klarownego roztworu erytromycyny.Wedlug wariantu pierwszego uzyskanie klarownego roztworu erytromycyny pozwala na usuniecie wszel¬ kich zanieczyszczen mechanicznych obecnych w tiocyjanianie lub nadchloranie tego antybiotyku, a ponadto powoduje usuniecie wszelkich zanieczyszczen z wolnej zasady erytromycyny, szczególnie erytromycyny C z erytromycyny A. Otrzymywanie klarownego roztworu erytromycyny umozliwia takze uzyskiwanie tego antybio¬ tyku o wyzszej aktywnosci biologicznej nawet powyzej 950 jednostek/mg w porównaniu do znanych metod,a takze w porównaniu z drugim wariantem sposobu. Dotychczasowe sposoby nie uwzglednialy mozliwosci klarowania roztworu soli erytromycyny, takiej jak tiocyjanian lub nadchloran.Drugi wariant sposobu wedlug wynalazku powoduje uzyskiwanie wyzszych wydajnosci procesu w porów¬ naniu z pierwszym. Jedna z istotnych cech wynalazku jest to, ze podczas izolowania erytromycyny z jej soli nastepuje zmniejszenie zuzycia surowców tiocyjanianu badz nadchloranu sodu, a ponadto uzyskiwane sole erytromycyny jako produkty posrednie procesu krystalizacji erytromycyny odznaczaja sie wysoka czystoscia, co irta zasadnicze znaczenie szczególnie wówczas, gdy np. tiocyjanian erytromycyny sam stanowi produkt handlowy.Wynalazek obejmuje takze trzeci wariant sposobu wyodrebniania erytromycyny na drodze ekstrakcji i krystaliza¬ cji, w którym calkowicie eliminuje sie stosowanie tiocyjanianu badz nadchloranu potasu, sodu lub amonu.Wedlug tego wariantu przebieg kolejnych ekstrakcji erytromycyny z przesaczu pofermentacyjnego az do uzyskania klarownego wodnoorganicznego roztworu erytromycyny o wysokim jej stezeniu jest taki sam, jak w dwóch poprzednich wariantach. Od tego etapu po ekstrakcji rozpoczyna sie proces krystalizacji tego antybiotyku bez przeksztalcania erytromycyny w jej sól tiocyjanianowa lub nadchloranowa.Wedlug wynalazku klarowny, wodnoorganiczny roztwór erytromycyny o wysokim stezeniu alkalizuje sie do wartosci pH 8,6 do 11,0, korzystnie 10,0,a uzyskany osad surowej erytromycyny odsacza sie i zawiesza w wodnym roztworze alkalicznego buforu z rozpuszczalnikiem organicznym lub z mieszanina rozpuszczalników organicznych w ilosci 60 do 95% objetosciowych, w temperaturze nie wyzszej niz 60° C, oddziela wytracone sole nieorganiczne i klarowny roztwór erytromycyny rozciencza sie woda oraz schladza w temperaturze 0° do 40° C.Wtedy krystalizuje osad surowej erytromycyny, który nastepnie odsacza sie i dodaje do wodnego roztworu alkalicznego buforu w temperaturze 25° do 60° C. Otrzymuje sie krystaliczny osad wolnej zasady erytromycyny, który odsacza sie, przemywa woda i suszy. Prowadzenie procesu wyodrebniania erytromycyny wedlug trzech wariantów wynalazku przebiega z wysoka wydajnoscia, w aparaturze o znacznie zmniejszonej objetosci, jest mniej pracochlonne w porównaniu do znanych metod, a otrzymywana wolna zasada erytromycyny odpowiada wymaganiom najnowszych farmakopei.Sposobem wedlug wynalazku, ekstrakcje erytromycyny z przesaczu pofermentacyjnego do rozpuszczalnika organicznego nie mieszajacego sie z woda prowadzi sie wobec wodnego roztworu alkalicznego buforu soli kwasu weglowego, takich jak wodoroweglan i weglan potasu, sodu lub amonu, badz chlorku i wodorotlenku amonu.Nastepnie roztwór erytromycyny w rozpuszczalniku organicznym nie mieszajacym sie z woda poddaje sie w niskiej temperaturze —5° do +15° C dzialaniu wodnoorganicznego roztworu kwasnego buforu i uzyskuje sie klarowny roztwór o wysokim stezeniu erytromycyny 30 do 100 g/dcm3.Zgodnie z pierwszym i drugim wariantem sposobu uzyskany z procesu podwójna ekstrakcji, klarowny roztwór o wysokim stezeniu erytromycyny dodaje sie do roztworu soli nieorganicznej, takiej jak tiocyjanian lub nadchloran sodu, potasu badz amonu o stezeniu soli 0,5 do 10 moli/dcm3 w rozpuszczalniku organicznym mieszajacym sie z woda lub w mieszaninie tego rozpuszczalnikai wody, zawierajacego wodnoorganiczny roztwór kwasnego buforu dla wytracenia nierozpuszczalnej w wodzie soli erytromycyny, takiej jak jej tiocyjanian lub nadchloran. I teraz prowadzic mozna rozklad soli wariantowo, albo osad soli erytromycyny po odsaczeniu zawiesza sie w wodnym roztworze alkalicznego buforu i rozpuszczalnika organicznego lub mieszaniny rozpusz¬ czalników w ilosci od 60 do 95% objetosciowych, w temperaturze nie wyzszej niz 60° C, oddziela wytracone sole nieorganiczne, a klarowny roztwór erytromycyny rozciencza sie woda i poddaje krystalizacji w temperaturze 0° do 40° C, nastepnie otrzymany osad surowej erytromycyny odsacza sie i dodaje do wodnego roztworu alkalicznego buforu w temperaturze 25 do 60° C, po czym uzyskany, krystaliczny osad wolnej zasady erytromy-142175 5 cyny odsacza sie, przemywa woda i suszy albo osad soli erytromycyny po odsaczeniu zamiesza sie w wodnym roztworze alkalicznego buforu z dodatkiem do 40% objetosciowych rozpuszczalnika organicznego lub mieszaniny rozpuszczalników organicznych, w temperaturze równiez nie wyzszej niz 60° C, po czym wytracony, krystaliczny osad wolnej zasady erytromycyny odsacza sie, przemywa woda i suszy.Trzeci wariant sposobu wyodrebniania erytromycyny na drodze ekstrakcji i krystalizacji z pominieciem etapu przeprowadzania erytromycyny w sól nieorganiczna, nierozpuszczalna w wodzie, zostal omówiony wyzej.We wszystkich wariantach sposobu stosowany jest wodny roztwór alkalicznego buforu o wartosci pH 8,8 do 10,2, który tworzy sie z mieszaniny soli nieorganicznych w wodzie, korzystnie z wodoroweglanu i weglanu potasu, sodu lid) amonu, badz z chlorku i wodorotlenku amonu o stezeniu soli 0,1 do 10 moli. W procesie ekstrakcji uzywane sa jako rozpuszczalniki organiczne, nie mieszajace sie z woda octan amylu, octan butylu, metyloizobutyloketon, toluen, ksylen, czterochloroetylen lub 1,2-dwuchloroetan, a jako rozpuszczalniki organi¬ czne mieszajace sie z woda sa stosowane do procesu ekstrakcji i krystalizacji metanol, etanol, izopropanol, aceton lub tetrahydrofuran. Do procesu rozkladu nierozpuszczalnej w wodzie soli erytromycyny wedlug dwóch pierwszych wariantów i do oczyszczania surowej erytromycyny po alkalizacji klarownego, wodnego roztworu erytromycyny wedlug trzeciego, stosuje sie jako rozpuszczalniki organiczne alkohole np. etanol, propanol, izopropanol lub butanol, chlorowcopochodne weglowodorów alifatycznych np. chlorek metylenu, chloroform, czterochloroetylen lub 1,2-dwuchloroetan, etery np. tetrahydrofuran, badz mieszaniny podanych rozpuszczalni¬ ków.W sposobie wedlug wynalazku ma zastosowanie wodnoorganiczny roztwór kwasnego buforu o wartosci pH 3,8 do 6,5, który tworzy sie z wody, rozpuszczalnika organicznego mieszajacego sie z woda w ilosci do 40% objetosciowych, z kwasu organicznego jak octowy, winowy, cytrynowy, wersenowy lub mrówkowy, badz z kwasu nieorganicznego, korzystnie fosforowego lub z mieszaniny kwasów i z wodorotlenku sodu lub potasu, badz z ich mieszaniny o stezeniu 0,01 do 2,0 moli/dcm3.Z podstawowych cech wyrózniajacych wynalazek w stosunku do dotychczas znanego stanu techniki wymienic nalezy: — prowadzenie ekstrakcji antybiotyku z przesaczu pofermentacyjnego do rozpuszczalnika organicznego nie mieszajacego sie z woda wobec ukladu buforowego wodoroweglan i weglan sodu, potasu lub amonu, badz chlorku i wodorotlenku amonu, — prowadzenie ekstrakcji antybiotyku z rozpuszczalnika organicz¬ nego nie mieszajacego sie z woda roztworem wodnoorganicznym kwasnego buforu w niskich temperaturach w celu uzyskania antybiotyku o wysokim stezeniu w tym roztworze, — krystalizacje nierozpuszczalnej w wodzie soli erytromycyny przez dodanie klarownego roztworu wodnoorganicznego erytromycyny o wysokim jej steze¬ niu do organicznego lub wodnoorganicznego roztworu soli nieorganicznej w obecnosci kwasnego buforu, — prowadzenie rozkladu nierozpuszczalnej w wodzie soli erytromycyny w dwóch wariantach bez koniecznosci dokonywania korekty wartosci pH, polegajacych na: 1. rozkladzie soli erytromycyny do wolnej zasady w rodowisku rozpuszczalnika organicznego i wodnego roztworu alkalicznego buforu w celu uzyskania klarownego roztworu erytromycyny i nastepnie jej krystalizacji nadmiarem wody, 2. rozkladzie soli erytromycyny do wolnej zasady w srodowisku wodnego roztworu alkalicznego buforu z dodatkiem rozpuszczalnika organicznego, - izolowanie erytromycyny-zasady z ekstraktu wodnoorganicznego erytromycyny o wysokim stezeniu antybiotyku przez alkalizacje roztworu, wyodrebnianie surowej zasady erytromycyny i oczyszczanie jej w warunkach podobnych do rozkladu nierozpuszczalnej w wodzie soli erytromycyny wedlug pierwszego wariantu sposobu rozkladu soli.Przyklad I. 3 dcm3 przesaczu pofermentacyjnego erytromycyny o aktywnosci 2100 jednostek/cm3 zalkalizowano wodnym roztworem zawierajacym 10% wagowych wodorotlenku sodu i 5% wagowych wodorowe¬ glanu sodu do wartosci pH 9,0 i dodano 20% objetosciowych octanu butylu w stosunku do objetosci plynu pofermentacyjnego. Otrzymano roztwór erytromycyny w octanie butylu o zawartosci antybiotyku 10000 jedno¬ stek/cm3^ z którego ekstrahowano erytromycyne 130 cm3 roztworu wodnoorganicznego buforu kwasnego octa¬ nowego, zawierajacego 0,05 mola NaOH,0,05 mola KOH,5% objetosciowych metanolu i kwas octowy w ilosci niezbednej do uzyskania wartosci pH 4,3, w temperaturze 10° C. Otrzymano wodnoorganiczny roztwór erytro¬ mycyny o stezeniu 45000jednostek/cm3(45 g erytromycyny w 1 dcm3 roztworu) i o wartosci pH 5,5, po czym doprowadzono pH roztworu do wartosci 6,0 za pomoca stalego osadu wodoroweglanu sodu. Po zmianie wartosci pH roztwór ten dodano do roztworu, sporzadzonego z 1,2 g tiocyjanianu sodu, 7 cm3 metanolu i 5 cm3 6% buforu cytrynianowego o wartosci pH 6,0. Otrzymano wodnoorganiczna zawiesine tiocyjanianu erytromycy¬ ny, która zobojetniono do wartosci pH 6,8 za pomoca 10% wodnego roztworu KOH i odsaczono. Mokry osad zawieszono w roztworze utworzonym z 20 cm3 acetonu, 4 cm3 wody, 1,4 g weglanu potasu i 0,6 g kwasnego weglanu sodu.Zawiesine ogrzano do temperatury 40° C i po rozpuszczeniu sie tiocyjanianu erytromycyny odsaczono sole nieorganiczne, a organicznowodny roztwór erytromycyny rozcienczono trzykrotna objetoscia wody prowadzac krystalizacje w temperaturze 35° C. Do rozcienczonego "woda roztworu dodano tyle 25% wodnego roztworu chlorku sodu az stezenie NaCl w roztworze poddawanym krystalizacji wynioslo 2%, po czym osad erytromycyny odsaczono i zawieszono w wodnym roztworze alkalicznego buforu, zawierajacego weglan i wodoroweglan potasu o stezeniu 0,2 mola w dcm3, przy wartosci pH 9,6 i w temperaturze 45° C. Osad antybiotyku odsaczono,6 142175 przemyto woda o temperaturze 45° C oraz przy wartosci pH 10,0 i wysuszono. Otrzymano 5,2 g(82% wydajnos¬ ci) erytromycyny o aktywnosci 960 jednostek/mg w przeliczeniu na substancje bezwodna.Przyklad II. 3 dcm3 przesaczu pofermentacyjnego erytromycyny o aktywnosci 1200 jednostek/cm3 zalkalizowano do wartosci pH 9,2 wodnym roztworem zawierajacym po 10% wagowych wodoroweglanu i weglanu potasu, po czym dodano 15% objetosciowych octanu amylu w stosunku do objetosci przesaczu pofermentacyjnego. Z otrzymanego roztworu erytromycyny w octanie amylu o zawartosci 8000 jednostek/cm3 tego antybiotyku ekstrahowano erytromycyne w temperaturze 5° C 90 cm3 wodnoorganicznego roztworu mrówczanowego buforu, zawierajacego 0,1 mola NaOH, 0,1 mola KOH,5% objetosciowych acetonu i kwas mrówkowy w ilosci niezbednej dla uzyskania wartosci pH 4,5. Otrzymano wodnoorganiczny roztwór erytromy¬ cyny o stezeniu 40000 jednostek/cm3 (40 g w 1 dcm3 roztworu), do którego dodano 10% wodny roztwór NaOH w celu uzyskania pH o wartosci 9,5 oraz 50% objetosciowych octanu amylu. Otrzymano roztwór erytromycyny w octanie amylu o stezeniu antybiotyku 80000jednostek/cm3, po czym dodano metanolowodny roztwór 1 g tiocyjanianu potasu prowadzac krystalizacje przy wartosci pH 5,0 i w temperaturze 4° C.Uzyskany osad tiocyjanianu erytromycyny odsaczono, wysuszono i zawieszono w roztworze zawierajacym 20 cm3 etanolu, 4 cm3 wody, 1 g weglanu potasu i 0,5 g wodoroweglanu potasu. Zawiesine ogrzewano do temperatury 40° C i po rozpuszczeniu sie tiocyjanianu erytromycyny odsaczono sole nieorganiczne, a organicz- nowodny roztwór erytromycyny rozcienczono czterokrotna objetoscia wody prowadzac krystalizacje w tempera¬ turze 35° C. Otrzymany osad odsaczono i zawieszono w wodnym roztworze buforu alkalicznego, zawierajacym weglan i wodoroweglan potasu o stezeniu 0,3 mola/dcm3 przy wartosci pH 9,6 i w temperaturze 45° C. Uzyska¬ ny osad antybiotyku odsaczono, przemyto woda o temperaturze 45° C i o wartosci pH 9,0, a potem wysuszono.Otrzymano 2,8 g (78% wydajnosci) erytromycyny o aktywnosci 965 jednostek/mg w przeliczeniu na substancje bezwodna.Przyklad III. 3 dcm3 przesaczu pofermentacyjnego erytromycyny o aktywnosci 1550 jednostek/cm3 zalkalizowano do wartosci pH 9,4 wodnym roztworem zawierajacym 5% wagowych chlorku amonu i 10% wagowych wodorotlenku amonu, po czym dodano 15% objetosciowych czterochloroetylenu w stosunku do objetosci plynu pofermentacyjnego. Otrzymano roztwór erytromycyny w czterochloroetylenie o zawartosci erytromycyny 10300 jednostek/cm3, z którego ekstrahowano ten antybiotyk w temperaturze 4° C, 130 cm3 roztworu wodnoorganicznego kwasnego buforu cytrynowego, zawierajacego po 0,05 mola NaOH i KOH 10% objetosciowych etanolu i kwas cytrynowy w ilosci niezbednej dla uzyskania wartosci pH 4,5. Otrzymano wodnoorganiczny roztwór erytromycyny o stezeniu 35000 jednostek/cm3 (35 g erytromycyny w Idem3 roztworu) i o wartosci pH 5,0. Nastepnie doprowadzono wartosc pH uzyskanego roztworu do 6,5 stalym osadem wodoroweglanu sodu i dodano go do roztworu zawierajacego 1,0 g tiocyjanianu potasu i 0,1 g kwasu wersenowego w 8 cm3 50% wodnego roztworu etanolu.Otrzymano wodnoorganiczna zawiesine tiocyjanianu erytromycyny, która odsaczono i zawieszono w roztworze zawierajacym 20 cm3 czterowodorofuranu, 2 cm3 czterochloroetylenu, 4 cm3 wody, 1,4 g weglanu potasu i 0,6 g wodoroweglanu sodu oraz ogrzewano do temperatury 50° C. Po rozpuszczeniu sie tiocyjanianu erytromycyny odsaczono sole nieorganiczne, a organicznowodny roztwór erytromycyny rozcienczono pieciokrotna objetoscia wody prowadzac krystalizacje w temperaturze 35° C. Osad odsaczono i zawieszono w wodnym roztworze alkalicznego buforu z weglanem i wodoroweglanem sodu o stezeniu soli 0,1 mola/dcm3, o wartosci pH 9,5 i w temperaturze 45° C. Osad odsaczono, przemyto woda o temperaturze 45° C i o wartosci pH 10,0, po czym go wysuszono. Otrzymano 3,8 g (82% wydajnosci) erytromycyny o aktywnosci 965 jednostek/mg w przeliczeniu na substancje bezwodna.Przyklad IV. 3 dcm3 przesaczu pofermentacyjnego erytromycyny o aktywnosci 3070jednostek/cm3 zalkalizowano do wartosci pH 9,6 wodnym roztworem zawierajacym 20% wagowych weglanu sodu i dodano 20% objetosciowych ksylenu w stosunku do objetosci przesaczu pofermentacyjnego. Otrzymano roztwór erytromycy¬ ny w ksylenie o zawartosci antybiotyku 15000 jednostek/cm3. Z tego roztworu ekstrahowano erytromycyne w temperaturze 4° C 150 cm3 wodnoorganicznego roztworu kwasnego buforu octanowego, zawierajacego po 0,1 mola NaOH i KOH, 0,01 mola kwasu wersenowego, 10% objetosciowych metanolu i kwas octowy w ilosci niezbednej dla uzyskania wartosci pH4,3. Otrzymano wodnoorganiczny roztwór erytromycyny o stezeniu 60000 jednostek/cm3 (60 g erytromycyny w 1 dcm3 roztworu) i o wartosci pH 5,7. Doprowadzono nastepnie pH uzyskanego roztworu do wartosci 6,3 stalym osadem wodoroweglanu sodu i roztwór ten dodano do roztworu zawierajacego 1,5 g tiocyjanianu sodu w 10 cm3 metanolu.Otrzymany osad tiocyjanianu erytromycyny odsaczono i zawieszono go w temperaturze 20° C w 75 cm3 wodnoorganicznego roztworu alkalicznego buforu, zawierajacego 15% objetosciowych acetonu, 1% objetosciowy chlorku metylenu i 2% wagowych weglanu potasu. Zawiesine ogrzano do temperatury 45° C prowadzac rozklad tiocyjanianu erytromycyny do wolnej zasady w pH o wartosci 9,3—9,8. Osad zasady erytromycyny odsaczono, przemyto woda o temperaturze 45° C i o wartosci pH 10,0, a nastepnie wysuszono. Otrzymano 7,9g (86% wydajnosci) erytromycyny o aktywnosci 950 jednostek/mg w przeliczeniu na substancje bezwodna.142175 7 Przyklad V. 10dcm3 przesaczu pofermentacyjnego erytromycyny o aktywnosci 550jednostek/cm3 zalkalizowano wodnym roztworem zawierajacym 5% wagowych wodoroweglanu potasu i 12,5% wagowych wodorotlenku amonu, po czym dodano 10% objetosciowych toluenu w stosunku do objetosci przesaczu pofermentacyjnego. Otrzymano roztwór erytromycyny w toluenie o zawartosci antybiotyku 5500jednostek/cm3. Z tego roztworu ekstrahowano erytromycyne w temperaturze 4° C 155 cm3 wodnoorgani- cznego roztworu kwasnego buforu fosforanowego, zawierajacego po 0,05 mola NaOH i KOH, 5% objetosciowych metanolu i kwas fosforowy w ilosci niezbednej dla uzyskania wartosci pH 4,6. Otrzymano wodnoorganiczny roztwór erytromycyny o stezeniu 35000jednostek/cm3 (35 g erytromycyny w 1 dcm3 roztworu) i o wartos¬ ci pH 6,0. Roztwór ten dodano do mieszaniny zawierajacej 4,0 g nadchloranu sodu, 20 cm3 50% roztworu metanolu w wodzie i 5 cm3 6% buforu cytrynianowego o wartosci pH 6,0.Po wykrystalizowaniu osadu nadchloranu erytromycyny, zawiesine zobojetniono 10% wodnym roztworem wodoroweglanu potasu do wartosci pH 7,0. Osad nadchloranu erytromycyny odsaczono i dodano w temperatu¬ rze 40° C do 50 cm3 wodnoorganicznego roztworu alkalicznego buforu o wartosci pH 9,5, zawierajacego chlorek amonu i jego wodorotlenek w ilosci 3% wagowych oraz 15% objetosciowych etanolu. Po calkowitym rozkladzie nadchloranu erytromycyny do wolnej zasady osad odsaczono i po przemyciu woda o temperaturze 45° Ci o wartosci pH9,0, wysuszono. Otrzymano 4,6 g (84% wydajnosci) erytromycyny o aktywnosci 955 jednostek/mg w przeliczeniu na substancje bezwodna.Przyklad VI. 3 dcm3 przesaczu pofermentacyjnego erytromycyny o aktywnosci 4100 jednostek/cm3 zalkalizowano do wartosci pH 9,4 wodnym 20% roztworem weglanu sodu i dodano 25% objetosciowych metyloizobutyloketonu w stosunku do objetosci przesaczu pofermentacyjnego. Otrzymano roztwór erytromycy¬ ny w metyloizobutyloketonie o zawartosci antybiotyku 16400jednostek/cm3. Z tego roztworu ekstrahowano erytromycyne w temperaturze 15° C, 245 cm3 wodnoorganicznego roztworu kwasnego buforu winowego, zawierajacego po 0,05 mola NaOH i KOH, 5% objetosciowych izopropanolu i kwas winowy w ilosci niezbednej dla uzyskania wartosci pH 4,4. Otrzymano wodnoorganiczny roztwór erytromycyny o stezeniu 50000 jednostek/cm3, do którego dodano 10% wodny roztwór NaOH do wartosci pH9,0 i ogrzewano do temperatury 30° C, po czym dodano do niego wodny roztwór alkalicznego buforu o zawartosci wodoroweglanu sodu i weglanu potasu o stezeniu soli 10% wagowych az do uzyskania wartosci pH 10,0. Nastepnie calosc ogrzano do temperatury 50° C, po czym wytracony osad odsaczono. 25 g mokrego osadu erytromycyny rozpuszczono w mieszaninie zawierajacej 60 cm3 acetonu, 5 cm3 wody, 2,0 g weglanu potasu i 1,0 g wodoroweglanu potasu.Nastepnie odsaczono osad soli nieorganicznych i do roztworu organicznowodnego erytromycyny dodano trzykrotna objetosc wody prowadzac krystalizacje erytromycyny w temperaturze 40° C, po czym antybiotyk odsaczono i powtórnie zawieszono w wodnym roztworze alkalicznego buforu, zawierajacego weglan sodu i wodoroweglan potasu o stezeniu soli 0,1 mola, w temperaturze 45° C i przy wartosci pH 9,5. Uzyskana zawiesine odsaczono, przemyto woda o temperaturze 40°C i o wartosci pH 7,5, po czym krystaliczny osad antybiotyku wysuszono. Otrzymano 10,8 g (88% wydajnosci) erytromycyny o aktywnosci 930jednostek/mg w przeliczeniu na substancje bezwodna.Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wyodrebniania erytromycyny z przesaczu pofermentacyjnego na drodze ekstrakcji i krystalizacji, znamienny tym, ze ekstrakcje erytromycyny z przesaczu pofermentacyjnego do rozpuszczalnika organicz¬ nego nie mieszajacego sie z woda prowadzi sie wobec wodnego roztworu alkalicznego buforu, po czym otrzymany roztwór erytromycyny w rozpuszczalniku organicznym nie mieszajacym sie z woda poddaje sie w niskiej temperaturze—5° do +15° C dzialaniu wodnoorganicznego roztworu kwasnego buforu i uzyskany klarowny roztwór o wysokim stezeniu erytromycyny 30 do 100 g/dcm3 dodaje sie do roztworu soli nieorganicz¬ nej, takiej jak tiocyjanian lub nadchloran sodu, potasu lub amonu o stezeniu soli 0,5 do 10 moli/dcm3 w rozpuszczalniku organicznym mieszajacym sie z woda lub w mieszaninie tego rozpuszczalnika i wody, zawieraja¬ cego wodnoorganiczny roztwór kwasnego buforu, po czym albo wytracona, nierozpuszczalna w wodzie sól erytromycyny po jej odsaczeniu zawiesza sie w wodnym roztworze alkalicznego buforu i rozpuszczalnika organicznego lub mieszaniny rozpuszczalników w ilosci od 60 do 95% objetosciowych, w temperaturze nie wyzszej niz 60° C, oddziela wytracone sole nieorganiczne i klarowny roztwór erytromycyny rozciencza woda poddajac go krystalizacji w temperaturze 0° do 40° C, a otrzymany osad surowej erytromycyny odsacza sie i dcdaje do wodnego roztworu alkalicznego buforu w temperaturze 25° do 60° C uzyskujac krystaliczny osad wolnej zasady erytromycyny, który odsacza sie, przemywa woda i suszy, albo wytracony osad nierozpuszczalnej w wodzie soli erytromycyny po jego odsaczeniu zawiesza sie w wodnym roztworze alkalicznego buforu z dodatkiem do 40% objetosciowych rozpuszczalnika organicznego lub mieszaniny rozpuszczalników organicz-8 142175 nych, w temperaturze nie wyzszej niz 60° C, po czym wytracony, krystaliczny osad wolnej zasady erytromycyny odsacza sie, przemywa woda i suszy. 2. Sposób wedlug zastrz. 1,znamienny tym, ze wodny roztwór alkalicznego buforu o wartosci pH 8,8 do 10,2 tworzy sie z mieszaniny soli nieorganicznych w wodzie, korzystnie z wodoroweglanu i weglanu potasu, sodu lub amonu, badz z chlorku amonu i wodorotlenku amonu o stezeniu soli 0,1 do 10 moli/dcm3. 3. Sposób wedlug zastrz. 1, z n a m i e n n y t y m, ze do procesu ekstrakcji erytromycyny jako rozpusz¬ czalniki organiczne nie mieszajace sie z woda stosuje sie octan butylu, octan amylu, metyloizobutyloketon, toluen, ksylen, czterochloroetylen lub 1,2-dwuchloroetan. 4. Sposób wedlug zastrz. 1, z n a m i e n n y t y m, ze do procesu ekstrakcji i krystalizacji erytromycyny jako rozpuszczalniki organiczne mieszajace sie z woda stosuje sie metanol, etanol, izopropanol, aceton lub tetrahydrofuran. 5. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze wodnoorganiczny roztwór kwasnego buforu o wartosci pH 3,8 do 6,5 tworzy sie z wody, rozpuszczalnika organicznego mieszajacego sie z woda w ilosci do 40% objetosciowych, z kwasu organicznego, takiego jak octowy, winowy, cytrynowy, wersenowy lub mrówkowy, badz z kwasu nieorganicznego, korzystnie kwasu fosforowego lub z mieszaniny kwasów i z wodorotlenku sodu lub potasu, badz z ich mieszaniny o stezeniu 0,01 do 2,0 moli/dcm3. 6. Sposób wedlug zastrz. 1,znamienny tym, ze do procesu rozkladu nierozpuszczalnej w wodzie soli erytromycyny stosuje sie jako rozpuszczalniki organiczne alkohole np. etanol, propanol, izopropanol lub butanol, chlorowcopochodne weglowodorów alifatycznych np. chlorek metylenu, chloroform, czterochloroety¬ len lub 1,2-dwuchloroetan, etery, korzystnie tetrahydrofuran, badz mieszaniny wyzej podanych rozpuszczalni¬ ków organicznych. 7. Sposób wyodrebniania erytromycyny z przesaczu pofermentacyjnego na drodze ekstrakcji i krystalizacji, znamienny tym, ze ekstrakcje erytromycyny z przesaczu pofermentacyjnego do rozpuszczalnika organicz¬ nego nie mieszajacego sie z woda prowadzi sie wobec wodnego roztworu alkalicznego buforu, po czym otrzymany roztwór erytromycyny w rozpuszczalniku organicznym nie mieszajacym sie z woda poddaje sie w niskiej temperaturze—5° do +15° C dzialaniu wodnoorganicznego roztworu kwasnego buforu, nastepnie klarowny, wodnoorganiczny roztwór erytromycyny o wysokim stezeniu 30 do 100 g/dcm3 alkalizuje sie do wartosci pH 8,6 do 11,0, korzystnie 10,0, uzyskujac osad surowej erytromycyny, po czym zawiesza sie go po odsaczeniu w wodnym roztworze alkalicznego buforu z rozpuszczalnikiem organicznym lub mieszanina rozpusz¬ czalników organicznych w ilosci 60 do 95% objetosciowych, w temperaturze nie wyzszej niz 60° C, oddziela wytracone sole nieorganiczne, a klarowny roztwór erytromycyny rozciencza sie woda i poddaje krystalizacji w temperaturze 0° do 40° C uzyskujac krystaliczny osad surowej erytromycyny, który nastepnie odsacza sie i dodaje do wodnego roztworu alkalicznego buforu w temperaturze 25° do 60° C, po czym otrzymany krystalicz¬ ny osad wolnej zasady erytromycyny odsacza sie, przemywa woda i suszy. 8. Sposób wedlug zastrz. 7, znamienny tym, ze wodny roztwór alkalicznego buforu o wartosci pH 8,8 do 10,2 tworzy sie z mieszaniny soli nieorganicznych w wodzie, korzystnie z wodoroweglanu i weglanu potasu, sodu lub amonu, badz z chlorku i wodorotlenku amonu o stezeniu soli 0,1 do 10,0 moli/dcm3. 9. Sposób wedlug zastrz. 7, z n a m i e n n y t y m, ze do procesu ekstrakcji erytromycyny jako rozpusz¬ czalniki organiczne nie mieszajace sie z woda stosuje sie octan butylu, octan amylu, metyloizobutyloketon, toluen, ksylen, czterochloroetylen lub 1,2-dwuchloroetan. 10. Sposób wedlug zastrz. 7, z n a m i e n n y t y m, ze do procesu ekstrakcji i krystalizacji erytromycyny jako rozpuszczalniki organiczne mieszajace sie z woda stosuje sie metanol, etanol, izopropanol, aceton lub tetrahydrofuran. 11. Sposób wedlug zastrz. 7, z n a m i e n n y t y m, ze wodnoorganiczny roztwór kwasnego buforu o wartosci pH 3,8 do 6,5 tworzy sie z wody, rozpuszczalnika organicznego mieszajacego sie z woda w ilosci do 40% objetosciowych, z kwasu organicznego, takiegojak octowy, winowy, cytrynowy, wessenowy lub mrówkowy, badz z kwasu nieorganicznego, korzystnie kwasu fosforowego lub z mieszaniny kwasów i z wodorotlenku sodu lub potasu, badz z ich mieszaniny o stezeniu 0,01 do 2,0 moli/dcm3. 12. Sposób wedlug zastrz. 7, z n a m i e n n y t y m, ze do procesu oczyszczania surowej erytromycyny uzyskanej po alkalizacji klarownego wodnoorganicznego roztworu erytromycyny stosuje sie jako rozpuszczalniki organiczne alkohole np. etanol, propanol, izopropanol lub butanol, chlorowcopochodne weglowodorów alifatycz¬ nych np. chlorek metylenu, chloroform, czterochloroetylen lub 1,2-dwuchloroetan, etery, korzystnie tetrahydro¬ furan, badz mieszaniny wyzej podanych rozpuszczalników organicznych.Pracownia Poligraficzna UP PRL. Naklad 100 egz.Cena 400 zl PLThe subject of the invention is a method for the isolation of erythromycin from a digestate by means of extraction and crystallization. The methods of isolating and crystallizing erythromycin from fermentation liquids are known from many national and foreign patents. According to one of the known methods described in Polish Patent No. 52,448, the erythromycin thiocyanate or propionic complex of erythromycin with sodium thiocyanate and acetic or propionic acid is precipitated from the erythromycin extract in an organic solvent obtained from the post-fermentation filtrate. After the complex has been isolated, it is converted to the free base of erythromycin by generally known methods. The yield of the erythromycin complex given in the example of the patent is 82.2% to 87% of theoretical yield. However, neither the efficiency of the free base of erythromycin nor its biological activity has been disclosed in the patent. The patent only states the biological potency of the erythromycin complex of 570 mcg / mg. The method known from Polish patent no. 76 648 consists in diluting the digestate with water to a favorable viscosity at a pH value of 7.4 to 8.0, extraction with an organic solvent, washing off impurities with water maintaining a pH value of 8.0 to 11 , 0, separating the water and converting the erythromycin to an acetate solution or formate buffer with a pH value of 4.3 to 4.8, neutralizing the aqueous solution of erythromycin acetate or formate with aqueous sodium hydroxide solution to a pH value of 6.9 to 7.0, converting erythromycin to its thiocyanate by means of an aqueous solution of sodium, potassium or ammonium thiocyanate and on the crystallization of erythromycin thiocyanate at 20 to 25 ° C at a pH value of 6.8 to 7.2 and in the presence of an excess of the appropriate thiocyanate. The crystalline precipitate of erythromycin thiocyanate, after its draining and washing with water, is transformed into erythromycin base. The efficiency of erythromycin base in anhydrous substance is 76.3%, and for substances with 4.3% moisture content it is 84.5% of theoretical value. The biological activity of the erythromycin base was determined from 923 mcg / mg to 980 mcg / mg.2 142175 The method for the production of erythromycin covered by Polish patent no. 87 598 takes into account the direct preparation of this antibiotic from the post-fermentation slurry in the form of a crystalline salt insoluble in water, such as a perchlorate salt. erythromycin thiocyanate, released by perchlorate or sodium or potassium thiocyanate with the addition of aqueous sodium hydroxide solution and perchlorate or thiocyanate excess at a preferred pH value of 6.5 to 8.0 and at a preferred temperature of 5-25 ° C. Separated salt Erythromycin is purified and degraded to a pharmacopoeial grade erythromycin free base by adding it to a water-immiscible solvent like methyl isobutyl ketone, amyl or butyl acetate at pH 9.5 to 10.5 and by salt crystallization and subsequent decomposition The efficiency of the method was given in terms of the biological activity of eryth romycin base and amounts to 914 to 945 mcg / mg. The method known from Polish patent specification No. 114 193 introduces changes in the method of isolation and crystallization of erythromycin, namely alkalization of the aqueous buffer solution of erythromycin with acid sodium carbonate in the form of a suspension or a solution with a pH value of 7.6 to 7.7. Adding the erythromycin buffer solution to the suspension or the acid salt of carbonic acid changes the pH of the buffer solution 7.7 to 7.2, preventing degradation of the antibiotic. The crystallization of erythromycin thiocyanate is carried out in the presence of a water-soluble inorganic inorganic salt such as, for example, sodium chloride in a water-miscible organic solvent, such as methanol. The obtained erythromycin thiocyanate in crystalline form is subjected to a two-step alkaline decomposition into erythromycin free base by its gradual introduction into the reaction mixture and continual adjustment of the pH value to about 10.0. In the process of alkaline decomposition of erythromycin salts, an organic solvent which is miscible with water, for example ethanol or acetone, is also used. The patent does not specify the biological activity of the antibiotic obtained, as well as the efficiency achieved in the process. According to the method described in US Patent No. 2,653,899, extraction of erythromycin from the filter fluid after fermentation is carried out with an organic solvent immiscible with water. , especially amyl acetate, at a pH of 9.0 to 10.0 achieved by the addition of sodium hydroxide solution. The amyl acetate mixture is extracted twice with water with the addition of sulfuric acid to bring the pH value to about 5.0. The combined aqueous extracts are adjusted to pH 8.0 with aqueous sodium hydroxide solution, concentrated under vacuum to the desired volume, and aqueous sodium hydroxide solution is added to obtain a solution of pH 9.5 and crystallized. The obtained erythromycin crystals are filtered off, and dilute sulfuric acid is added to the solution until the pH value of the solution is about 8.0. In order to separate the next batch of crystals, the mother liquor is concentrated under a vacuum to a certain volume and its pH value is brought to about 9.5. By additional recrystallization, erythromycin is purified from a 2: 1 water-acetone mixture. According to another method known from US Pat. No. 2,864,817, erythromycin is obtained by one-step alkaline decomposition of its thiocyanate salt in a mixture of water and an organic solvent. miscible with water at a pH of 9.0 to 10.0 at elevated temperatures. Crystals of erythromycin solvate with an organic solvent are precipitated, which are filtered off and heated in water at a pH value of about 9.0 at a temperature of 55 ° - 100 ° C. US Patent No. 2,881,162 includes a method of obtaining erythromycin base from a mixture of an aqueous solution crude salt of erythromycin, especially its acetate, and a water-miscible organic solvent in which erythromycin is relatively soluble, for example in acetone or isopropyl alcohol at a pH of 8.5 and a temperature of 35-45 ° C. After the addition of the water-soluble inorganic salt, which causes separation of the organic solvent phase and the aqueous phase containing the salt, while adjusting the pH 9.5 to 11.0 and the temperature to about 35-45 ° C, the organic solvent phase is then separated from the water phase from inorganic salt, and then the contaminant-free erythromycin base crystallizes. US Pat. No. 2,894,943 shows that the digestate with a pH value of 9.0 to 10.5 with the addition of sodium hydroxide solution is extracted with an immiscible organic solvent with water, e.g. amyl acetate, then backextraction into a buffer at pH 5.0 to 6.5 containing an aqueous solution of citric acid and sodium hydroxide, followed by a further extraction at pH 8.5 to 10.2 into the solvent organic with a high coefficient of dissolution temperature and crystallization of erythromycin from this solvent. 14 2175 3 According to US Pat. No. 3,551,294, the method for isolating and crystallizing erythromycin includes the steps of extracting the digestate with ethyl acetate, concentrating the organic extract, then extracting with a phosphorus buffer solution at pH 5.0, and extracting twice with ethyl ether. Two post-extraction phases are obtained, of which one of the aqueous phase with the addition of phosphoric acid contains erythromycin and this phase is adjusted to a pH value of 9.3 in order to subject it to a three-hour extraction with ether. The ether extracts are combined, dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated in a vacuum. Erythromycin is obtained from the obtained sludge after crystallization from chloroform. Considering the state of the art, it should be synthetically stated that according to one of the basic methods in this field, namely described in the US description No. 2 653 899, erythromycin extraction after filtration of the wort is carried out with an organic solvent water-immiscible at a pH value of 9.0 to 10.0, and sodium hydroxide is used to correct the alkaline pH. According to the invention, extraction of erythromycin from the digestate into an organic solvent immiscible with water is carried out at a pH of 8.8 to 10.2 stabilized by a buffer system of carbonic acid salts, such as hydrocarbonate - sodium, potassium or ammonium carbonate, or mixtures thereof. In order to obtain a buffer system, the presence of carbonate and hydrocarbon ions in the digestate pass is necessary in the above-mentioned pH range. This buffer system has a significant capacity to over-alkalinize and drop certain pH values. Carrying out the extraction at higher pH values than 10.2, especially when the content of hydrocarbon ions is low or completely absent, causes harmful local re-alkalisation. Also for the extraction process carried out at a pH value below 8.8, this buffer protects to a small extent against a drop in the pH value to 8.6, in which the erythromycin-base becomes salt and cannot be extracted into an organic solvent that is immiscible with water. The extraction solution of erythromycin in a water-immiscible organic solvent is then isolated. The extraction method according to the invention prevents alkaline degradation of erythromycin and hydrolysis of both butyl and amyl acetates used in the extraction process. Moreover, such an extraction operation improves the two-phase separation of the organic solvent and the aqueous solution. The use of a new method of alkalization enables an increase in the extraction yield from 3 to 5% and reduces the loss of an organic solvent that is immiscible with water, such as amyl or butyl acetate. Detailed analysis of the state of the art shows that the methods known so far from Polish and American patents indicate that the second extraction of erythromycin from a solution in an organic solvent immiscible with water is carried out with an aqueous buffer with a pH value of 4.3 to 5.8 at room temperature, and obtaining solutions containing erythromycin in an amount up to 30 g / dm3. One feature of the invention is to carry out a second extraction of erythromycin with an aqueous solution of an organic solvent mixing with water at low temperatures. The addition of the solvent lowers the viscosity of the erythromycin aqueous solution and thus enables the extraction to be carried out in a short time by using centrifugal extractors, in which the extraction time is relatively short, and also unexpectedly facilitates obtaining a high concentration of the antibiotic in the amount of 30 to 100 thousand units / cm3. The use of low temperatures of -5 ° to + 15 ° C in the extraction process, which is one of the important features of the invention, prevents the decomposition of erythromycin in an acidic environment and facilitates obtaining high concentrations of erythromycin in a clear solution obtained from the extraction process. As it is commonly known, on the basis of known methods, the crystallization of erythromycin can be carried out by the formation of its salts, e.g. thiocyanate or perchlorate, crystallizing from solutions in organic solvents immiscible with water (Polish Patent No. 52,448) or from aqueous solutions of fermentation fluids (description Polish Patent No. 87,598) or from aqueous-organic solutions with the addition of neutral inorganic salts (Polish Patent No. 114,193). According to the invention, the process of crystallization of various salts of this antibiotic is carried out by adding an aqueous-organic extract with a high concentration of erythromycin to an organic or aqueous-organic an acidic buffer solution containing anions such as citric, tartaric, edetic, formic or phosphate anions and high concentration inorganic salts such as sodium, potassium or ammonium thiocyanate or perchlorate, which allows crystallization to be carried out in the initial phase of the process at an acidic pH of 5 .0 to 6.5 in a small excess of free erythromycin and with a high concentration of acid salts. Contrary to the known methods, this method ensures a slow crystallization of erythromycin by slowly increasing the concentration of the antibiotic in the solution in which the crystallization is carried out. The reduction of the pH value also favors the slow crystallization of the erythromycin salt, which does not occur at low pH values around 4.0, while at pH 7.0 it is rapid. As a result of the crystallization carried out in accordance with the invention, a pure product with well-formed crystals is obtained, without the content of the unfavorable anhydroerythromycin. The decomposition of thiocyanate or erythromycin perchlorate is carried out by known methods, adding to the suspension of erythromycin salt in an aqueous organic solution or sodium hydroxide, potassium hydroxide for potassium. pH. These methods are described in Polish patent no. 114 193 and in the US patent no. According to the invention, the method of decomposing the erythromycin salt is based on the use of an aqueous solution of an alkaline buffer containing potassium, sodium or ammonium bicarbonate and carbonate, or ammonium chloride and hydroxide, which causes rapid decomposition of erythromycin thiocyanate or perchlorate without the need to make ¬nia correction of the pH value. The result of the invention is pure erythromycin, which is essentially not contaminated with co-crystallising thiocyanate or erythromycin perchlorate, which is usually the case when there are fluctuations in the pH value. According to the invention, the decomposition of the erythromycin thiocyanate or perchlorate can be carried out in a bivariate variant. erythromycin in an aqueous solution of an alkaline buffer and an organic solvent or a mixture of organic solvents in an amount of 60 to 95% by volume in order to obtain a clear solution of erythromycin and then to crystallize this antibiotic with excess water. However, the second variant consists in the action of an aqueous solution of an alkaline buffer with the addition of an organic solvent to AO & volumetric erythromycin salt in order to obtain erythromycin free base, and this reaction takes place in suspension without the release of a clear solution of erythromycin. According to the first variant, obtaining a clear erythromycin solution allows for the removal of any Any mechanical impurities present in thiocyanate or perchlorate of this antibiotic, and in addition, remove any impurities from erythromycin free base, especially erythromycin C from erythromycin A. Obtaining a clear solution of erythromycin also allows obtaining this antibiotic with higher biological activity (even higher than 950). mg compared to known methods as well as compared to the second method variant. The prior art methods have not considered the possibility of clarifying the solution of an erythromycin salt such as thiocyanate or perchlorate. The second variant of the process of the present invention results in higher process efficiencies than the first. One of the significant features of the invention is that when erythromycin is isolated from its salts, the consumption of thiocyanate or sodium perchlorate raw materials is reduced, and the obtained erythromycin salts as intermediates in the erythromycin crystallization process are characterized by high purity, which is essential, especially when, e.g. Erythromycin thiocyanate itself is a commercial product. The invention also includes a third variant of the erythromycin isolation process by extraction and crystallization, in which the use of thiocyanate or potassium, sodium or ammonium perchlorate is completely eliminated. obtaining a clear organo-aqueous solution of erythromycin with a high concentration is the same as in the two previous variants. From this stage, after extraction, the process of crystallization of this antibiotic begins without converting erythromycin into its thiocyanate or perchlorate salt. According to the invention, a clear, organic aqueous solution of erythromycin with a high concentration is alkalinized to a pH value of 8.6 to 11.0, preferably 10.0, and the resulting precipitate of crude erythromycin is filtered off and suspended in an aqueous solution of an alkaline buffer with an organic solvent or with a mixture of organic solvents in the amount of 60 to 95% by volume, at a temperature not higher than 60 ° C, the precipitated inorganic salts are separated and the clear erythromycin solution is diluted with water and it is cooled at 0 ° to 40 ° C. The precipitate of crude erythromycin then crystallizes, which is then filtered off and added to an aqueous solution of alkaline buffer at 25 ° to 60 ° C. A crystalline precipitate of erythromycin free base is obtained, which is filtered off, washed with water and dries. The process of isolating erythromycin according to three variants of the invention is highly efficient, in an apparatus with a significantly reduced volume, it is less labor-intensive compared to known methods, and the obtained erythromycin free base meets the requirements of the latest pharmacopoeia. According to the invention, the extraction of erythromycin from the post-fermentation sluice into the fermentation solvent organic water immiscible in the presence of an aqueous solution of an alkaline buffer salts of carbonic acid, such as potassium, sodium or ammonium bicarbonate and carbonate, or chloride and ammonium hydroxide, then the erythromycin solution in a water-immiscible organic solvent is subjected to low temperature -5 ° to + 15 ° C by the action of an aqueous-organic solution of an acidic buffer and a clear solution with a high concentration of erythromycin 30 to 100 g / dm3 is obtained. According to the first and second method variants, the double extraction, clear solution with high concentration is obtained Erythromycin is added to a solution of an inorganic salt such as sodium, potassium or ammonium thiocyanate or perchlorate with a salt concentration of 0.5 to 10 mol / dm3 in an organic solvent miscible with water or in a mixture of this solvent and water containing an aqueous organic acid buffer solution for precipitation of the water-insoluble erythromycin salt such as its thiocyanate or perchlorate salt. Now, the decomposition of salts can be carried out alternatively, or the precipitate of the erythromycin salt, after draining, is suspended in an aqueous solution of an alkaline buffer and an organic solvent or a mixture of solvents in an amount of 60 to 95% by volume, at a temperature not higher than 60 ° C, separates the precipitated salts inorganic, and the clear solution of erythromycin is diluted with water and crystallized at 0 ° to 40 ° C, then the obtained crude erythromycin precipitate is filtered off and added to an aqueous alkaline buffer solution at 25 to 60 ° C, after which the obtained crystalline precipitate of free erythromycin-142 175 bases are filtered off, washed with water and dried, or the precipitate of the erythromycin salt after it has been filtered is stirred in an aqueous solution of an alkaline buffer with the addition of up to 40% by volume of an organic solvent or a mixture of organic solvents, at a temperature also not higher than 60 ° C, then whereby the precipitated, crystalline precipitate of erythromycin free base is filtered off Washes with water and dried. The third variant of the method of isolating erythromycin by extraction and crystallization, omitting the step of converting the erythromycin into an inorganic, water-insoluble salt was discussed above. In all variants of the method, an aqueous solution of an alkaline buffer with a pH value of 8.8 to 10 is used , 2, which is formed from a mixture of inorganic salts in water, preferably from potassium bicarbonate and carbonate, sodium and ammonium carbonate, or from chloride and ammonium hydroxide with a salt concentration of 0.1 to 10 mol. In the extraction process they are used as organic solvents immiscible with water, amyl acetate, butyl acetate, methyl isobutyl ketone, toluene, xylene, tetrachlorethylene or 1,2-dichloroethane, and as organic solvents which are miscible with water, they are used in the extraction process and crystallization of methanol, ethanol, isopropanol, acetone or tetrahydrofuran. For the decomposition of the water-insoluble erythromycin salt according to the first two variants and for the purification of crude erythromycin after the alkalization of a clear, aqueous solution of erythromycin according to the third one, organic alcohols are used as solvents, e.g. ethanol, propanol, isopropanol or butanol, halogen derivatives of aliphatic hydrocarbons, e.g. , chloroform, tetrachlorethylene or 1,2-dichloroethane, ethers, e.g. tetrahydrofuran, or mixtures of the solvents mentioned. In the process of the invention, an aqueous organic acid buffer solution with a pH value of 3.8 to 6.5, which is formed from water, is used. an organic solvent that is miscible with water up to 40% by volume, from an organic acid such as acetic, tartaric, citric, edetic or formic acid, or from an inorganic acid, preferably phosphoric, or from a mixture of acids and sodium or potassium hydroxide, or a mixture of these 0.01 to 2.0 moles / dm3. Basic features that distinguish The invention, in relation to the prior art, should be mentioned: - carrying out the extraction of the antibiotic from the post-fermentation filtration into an organic solvent that is immiscible with water in the presence of a buffer system of sodium, potassium or ammonium bicarbonate and carbonate, or ammonium chloride and hydroxide, - extraction of the antibiotic from an organic solvent which is immiscible with water with an aqueous solution of an acidic buffer at low temperatures in order to obtain an antibiotic of high concentration in this solution, - crystallization of a water-insoluble salt of erythromycin by adding a clear aqueous solution of erythromycin with a high concentration to an organic or aqueous organic erythromycin an inorganic salt solution in the presence of an acid buffer, - decomposition of the water-insoluble erythromycin salt in two variants without the need to correct the pH value, consisting in: 1. decomposition of erythromycin salt to free base in the environment organic solvent and an aqueous solution of an alkaline buffer in order to obtain a clear solution of erythromycin and its subsequent crystallization with an excess of water, 2. decomposition of erythromycin salt to the free base in an aqueous solution of an alkaline buffer with the addition of an organic solvent, - isolation of erythromycin-base from a water-organic extract of high erythromycin concentration of the antibiotic by alkalising the solution, isolating the crude erythromycin base and purifying it under conditions similar to the decomposition of the water-insoluble erythromycin salt according to the first variant of the salt decomposition method. Example I. 3 dcm3 of erythromycin post-fermentation effluent with an activity of 2100 units / cm3 alkalized with an aqueous 10% solution by weight of sodium hydroxide and 5% by weight of sodium bicarbonate to a pH of 9.0 and 20% by volume of butyl acetate, based on the volume of the digestate, was added. A solution of erythromycin in butyl acetate with an antibiotic content of 10,000 units / cm3 was obtained, from which erythromycin was extracted with 130 cm3 of a solution of aqueous-organic acetic acid buffer containing 0.05 mol of NaOH, 0.05 mol of KOH, 5% by volume of methanol and acetic acid. in the amount necessary to obtain a pH value of 4.3, at a temperature of 10 ° C. An aqueous organic solution of erythromycin was obtained, with a concentration of 45,000 units / cm3 (45 g of erythromycin in 1 dm3 of solution) and pH value of 5.5, and then the pH of the solution was adjusted to the value of 6.0 with solid sediment of sodium bicarbonate. After the pH value was changed, this solution was added to a solution made of 1.2 g of sodium thiocyanate, 7 cm3 of methanol and 5 cm3 of 6% citrate buffer with a pH value of 6.0. An aqueous organic suspension of erythromycin thiocyanate was obtained, which was neutralized to a pH value of 6.8 with a 10% aqueous KOH solution and filtered off. The wet sediment was suspended in a solution made of 20 cm3 of acetone, 4 cm3 of water, 1.4 g of potassium carbonate and 0.6 g of acid sodium carbonate. The suspension was heated to 40 ° C, and after the erythromycin thiocyanate had dissolved, the inorganic salts were drained, and the organic water solution was drained. Erythromycin was diluted with three times the volume of water by crystallization at 35 ° C. To the diluted "water" solution was added 25% aqueous sodium chloride solution until the concentration of NaCl in the solution to be crystallized was 2%, then the erythromycin precipitate was drained and suspended in an aqueous solution of an alkaline buffer, containing carbonate and potassium bicarbonate at a concentration of 0.2 mol in dcm3, at a pH value of 9.6 and a temperature of 45 ° C. The antibiotic precipitate was filtered off, washed with water at 45 ° C and a pH value of 10.0 and dried. 5.2 g (82% yield) of erythromycin with an activity of 960 units / mg, calculated as anhydrous substances. Example II. 3 dcm3 of erythro fermentation feed Mycins with an activity of 1,200 units / cm3 were made alkaline to a pH value of 9.2 with an aqueous solution containing 10% by weight of potassium bicarbonate and carbonate each, and 15% by volume of amyl acetate, based on the volume of the digestate, was added. Erythromycin was extracted from the obtained solution of erythromycin in amyl acetate with the content of 8000 units / cm3 of this antibiotic at the temperature of 5 ° C with 90 cm3 of an aqueous organic formate buffer solution containing 0.1 mol NaOH, 0.1 mol KOH, 5% by volume acetone and formic acid in the amount necessary to obtain a pH value of 4.5. An aqueous organic erythromycin solution was obtained at a concentration of 40,000 units / cm3 (40 g in 1 liter of solution), to which was added a 10% aqueous NaOH solution to obtain a pH of 9.5 and 50% by volume of amyl acetate. A solution of erythromycin in amyl acetate with an antibiotic concentration of 80,000 units / cm3 was obtained, and then a methanolic solution of 1 g of potassium thiocyanate was added to crystallize it at pH 5.0 and at 4 ° C. The resulting precipitate of erythromycin thiocyanate was drained, dried and suspended in a 20 cm3 solution containing ethanol, 4 cm3 of water, 1 g of potassium carbonate and 0.5 g of potassium bicarbonate. The suspension was heated to 40 ° C and after dissolution of the erythromycin thiocyanate, the inorganic salts were filtered off, and the organic erythromycin solution was diluted with four times the volume of water to crystallize at 35 ° C. The obtained precipitate was filtered off and suspended in an aqueous solution of an alkaline carbonate buffer, containing and potassium hydrogen carbonate at a concentration of 0.3 mol / dm3 at a pH value of 9.6 and a temperature of 45 ° C. The resulting antibiotic precipitate was filtered off, washed with water at a temperature of 45 ° C and a pH value of 9.0, and then dried. , 8 g (78% of yield) of erythromycin with an activity of 965 units / mg calculated as anhydrous substance. Example III. 3 dm3 of the erythromycin digestate with an activity of 1550 units / cm3 was basified to a pH value of 9.4 with an aqueous solution containing 5% by weight of ammonium chloride and 10% by weight of ammonium hydroxide, and 15% by volume of tetrachlorethylene in relation to the volume of the digestate was added. A solution of erythromycin in tetrachlorethylene with an erythromycin content of 10300 units / cm3 was obtained, from which this antibiotic was extracted at a temperature of 4 ° C, 130 cm3 of an aqueous and organic solution of an acidic lemon buffer containing 0.05 mol of NaOH and KOH, 10% by volume of ethanol and citric acid in the amount of necessary to obtain a pH value of 4.5. An aqueous organic solution of erythromycin was obtained with a concentration of 35,000 units / cm3 (35 g of erythromycin in Idem3 solution) and a pH value of 5.0. The pH of the resulting solution was then adjusted to 6.5 with a solid precipitate of sodium hydrogencarbonate and added to a solution containing 1.0 g of potassium thiocyanate and 0.1 g of edetic acid in 8 cm3 of a 50% aqueous ethanol solution. An aqueous organic suspension of erythromycin thiocyanate was obtained, which was drained. and suspended in a solution containing 20 cm3 of tetrahydrofuran, 2 cm3 of tetrachlorethylene, 4 cm3 of water, 1.4 g of potassium carbonate and 0.6 g of sodium bicarbonate, and heated to 50 ° C. After the erythromycin thiocyanate had dissolved, the inorganic salts were filtered off, and the organic water solution Erythromycin was diluted with five times the volume of water by crystallization at 35 ° C. The precipitate was filtered off and suspended in an aqueous solution of alkaline buffer with carbonate and sodium bicarbonate with a salt concentration of 0.1 mol / dcm3, pH 9.5 and at 45 ° C. The precipitate it was filtered off, washed with 45 ° C water, pH 10.0 and then dried. There were obtained 3.8 g (82% yield) of erythromycin with the activity of 965 units / mg in terms of anhydrous substances. Example IV. 3 dm3 of erythromycin digestate with an activity of 3070 units / cm3 was basified to a pH value of 9.6 with an aqueous solution containing 20% by weight of sodium carbonate and 20% by volume of xylene relative to the volume of the digestate was added. A solution of erythromycin in xylene with an antibiotic content of 15,000 units / cm3 was obtained. Erythromycin was extracted from this solution at a temperature of 4 ° C, 150 cm3 of an aqueous organic solution of acidic acetate buffer, containing 0.1 mol each of NaOH and KOH, 0.01 mol of edetic acid, 10% by volume of methanol and acetic acid in the amount necessary to obtain the pH4 value, 3. A water-organic solution of erythromycin with a concentration of 60,000 units / cm3 (60 g of erythromycin in 1 dcm3 of solution) and a pH value of 5.7 was obtained. The pH of the resulting solution was then adjusted to 6.3 with a solid precipitate of sodium bicarbonate and this solution was added to a solution containing 1.5 g of sodium thiocyanate in 10 cm3 of methanol. The resulting precipitate of erythromycin thiocyanate was drained and suspended at 20 ° C in 75 cm3 of an aqueous organic solution. an alkaline buffer containing 15% by volume acetone, 1% by volume methylene chloride and 2% by weight potassium carbonate. The suspension was heated to 45 ° C to decompose the erythromycin thiocyanate to the free base at a pH of 9.3-9.8. The precipitate of erythromycin base was filtered off, washed with water at 45 ° C and a pH of 10.0 and then dried. The obtained yield was 7.9 g (86% yield) of erythromycin with the activity of 950 units / mg in terms of anhydrous substance. 142175 7 Example 5 10 dcm3 of erythromycin post-fermentation feed with the activity of 550 units / cm3 was made alkaline with an aqueous solution containing 5% by weight of potassium bicarbonate and 12.5% by weight of ammonium hydroxide, then 10% by volume of toluene, based on the volume of the digestate, was added. An erythromycin solution in toluene with the antibiotic content of 5500 units / cm3 was obtained. Erythromycin was extracted from this solution at a temperature of 4 ° C with 155 cm3 of an aqueous organic acid phosphate buffer solution containing 0.05 mol each of NaOH and KOH, 5% by volume of methanol and an amount of phosphoric acid necessary to obtain a pH value of 4.6. An aqueous organic solution of erythromycin was obtained with a concentration of 35,000 units / cm 3 (35 g of erythromycin in 1 liter of solution) and a pH of 6.0. This solution was added to a mixture containing 4.0 g of sodium perchlorate, 20 cm3 of a 50% solution of methanol in water and 5 cm3 of a 6% citrate buffer at pH 6.0. After the erythromycin perchlorate precipitate had crystallized, the suspension was neutralized with 10% aqueous potassium hydrogen carbonate solution to pH values 7.0. The precipitate of erythromycin perchlorate was filtered off and added at 40 ° C to 50 cm 3 of an aqueous organic alkaline buffer solution at pH 9.5 containing 3% by weight ammonium chloride and its hydroxide and 15% by volume ethanol. After the erythromycin perchlorate had completely decomposed to the free base, the precipitate was filtered off and, after washing with water at 45 ° C, pH 9.0, dried. The obtained yield was 4.6 g (84% yield) of erythromycin with the activity of 955 units / mg in terms of anhydrous substance. Example VI. 3 dm3 of the erythromycin digestate with an activity of 4100 units / cm3 was basified to a pH value of 9.4 with an aqueous 20% sodium carbonate solution and 25% by volume of methyl isobutyl ketone relative to the volume of the digestate was added. A solution of erythromycin in methyl isobutyl ketone with an antibiotic content of 16,400 units / cm 3 was obtained. Erythromycin was extracted from this solution at 15 ° C, 245 cm3 of an aqueous organic solution of an acidic tartaric buffer containing 0.05 moles of NaOH and KOH, 5% by volume of isopropanol and an amount of tartaric acid necessary to obtain a pH value of 4.4. An aqueous organic solution of erythromycin with a concentration of 50,000 units / cm3 was obtained, to which a 10% aqueous NaOH solution was added to the value of pH 9.0 and heated to a temperature of 30 ° C, and then an aqueous solution of an alkaline buffer containing sodium hydrogen carbonate and potassium carbonate with the concentration of 10% by weight of salt until the pH is 10.0. Then it was heated to 50 ° C and the precipitate was filtered off. 25 g of wet sediment of erythromycin was dissolved in a mixture containing 60 cm3 of acetone, 5 cm3 of water, 2.0 g of potassium carbonate and 1.0 g of potassium bicarbonate. Subsequently, the sediment of inorganic salts was drained and three times the volume of water was added to the organic water solution of erythromycin to crystallize erythromycin at temperature 40 ° C, then the antibiotic was drained and resuspended in an aqueous solution of alkaline buffer containing sodium carbonate and potassium hydrogen carbonate with a salt concentration of 0.1 mol, at 45 ° C and pH 9.5. The resulting suspension was filtered off, washed with water at 40 ° C and a pH of 7.5, and the crystalline antibiotic precipitate was dried. The obtained yield was 10.8 g (88% yield) of erythromycin with an activity of 930 units / mg calculated as anhydrous substances. Patent claims 1. Method for the isolation of erythromycin from the post-fermentation sieve by extraction and crystallization, characterized by the fact that the extraction of erythromycin from the organo-fermentation slurry into a solvent The ¬ one immiscible with water is carried out in the presence of an aqueous solution of an alkaline buffer, then the obtained solution of erythromycin in an organic solvent immiscible with water is subjected at a low temperature of -5 ° to + 15 ° C to the action of an aqueous-organic solution of an acidic buffer and the resulting clear solution with a high concentration of erythromycin 30 to 100 g / dm3 is added to a solution of an inorganic salt such as sodium, potassium or ammonium thiocyanate or perchlorate with a salt concentration of 0.5 to 10 moles / dm3 in an organic solvent miscible with water or in a mixture this solvent and water, containing an aqueous organic solution of an acidic b and then either the precipitated, water-insoluble erythromycin salt, after draining it, is suspended in an aqueous solution of an alkaline buffer and an organic solvent or a mixture of solvents in an amount of 60 to 95% by volume, at a temperature not higher than 60 ° C, separates the precipitated inorganic salts and a clear solution of erythromycin is diluted with water by crystallizing it at 0 ° to 40 ° C, and the resulting crude erythromycin precipitate is filtered off and transferred to an aqueous alkaline buffer solution at 25 ° to 60 ° C to give a crystalline precipitate of erythromycin free base which is filtered off , washed with water and dried, or the precipitated sediment of the water-insoluble erythromycin salt, after its draining, is suspended in an aqueous solution of an alkaline buffer with the addition of up to 40% by volume of an organic solvent or a mixture of organic solvents, at a temperature not higher than 60 ° C, followed by a precipitated, crystalline precipitate of the erythrom free base tin is drained, washed with water and dried. 2. The method according to claim The process of claim 1, characterized in that an aqueous solution of an alkaline buffer with a pH value of 8.8 to 10.2 is formed from a mixture of inorganic salts in water, preferably from potassium, sodium or ammonium bicarbonate and carbonate, or from ammonium chloride and ammonium hydroxide with a salt concentration 0.1 to 10 moles / dcm3. 3. The method according to p. 1, with the fact that in the extraction of erythromycin, butyl acetate, amyl acetate, methyl isobutyl ketone, toluene, xylene, tetrachlorethylene or 1,2-dichloroethane are used as organic solvents which are immiscible with water. 4. The method according to p. 1, with the fact that methanol, ethanol, isopropanol, acetone or tetrahydrofuran are used as organic solvents miscible with water for the extraction and crystallization of erythromycin. 5. The method according to p. A method according to claim 1, characterized in that the aqueous-organic acid buffer solution with a pH value of 3.8 to 6.5 is formed from water, an organic solvent that is water-miscible up to 40% by volume, from an organic acid such as acetic, tartaric, citric, edetic acid or formic acid, either from an inorganic acid, preferably phosphoric acid, or from a mixture of acids and from sodium or potassium hydroxide, or a mixture thereof, with a concentration of 0.01 to 2.0 mol / dm3. 6. The method according to p. A method according to claim 1, characterized in that organic alcohols, e.g. ethanol, propanol, isopropanol or butanol, and halogenated aliphatic hydrocarbons, e.g. methylene chloride, chloroform, tetrachlorethylene or 1,2-dichloroethane are used as solvents for the decomposition of the water-insoluble erythromycin salt, ethers, preferably tetrahydrofuran, or mixtures of the abovementioned organic solvents. 7. The method of isolating erythromycin from the digestate by means of extraction and crystallization, characterized in that the extraction of erythromycin from the digestate into a water-immiscible organic solvent is carried out in the presence of an aqueous alkaline buffer solution, then the obtained erythromycin solution in an organic solvent is not mixed with water is subjected to the action of an aqueous organic acid buffer solution at a low temperature of 5 ° to + 15 ° C, then a clear, aqueous organic erythromycin solution with a high concentration of 30 to 100 g / dm3 is alkalinized to a pH value of 8.6 to 11.0 , preferably 10.0, yielding a precipitate of crude erythromycin, which is then suspended after filtering in an aqueous solution of an alkaline buffer with an organic solvent or a mixture of organic solvents in the amount of 60 to 95% by volume, at a temperature not higher than 60 ° C, separated precipitated inorganic salts and the clear solution of erythromycin is diluted in it is soaked and crystallized at 0 ° to 40 ° C to give a crystalline precipitate of crude erythromycin, which is then filtered off and added to an aqueous solution of alkaline buffer at 25 ° to 60 ° C, after which the resulting crystalline precipitate of erythromycin free base is filtered off. , washed with water and dried. 8. The method according to p. 7. A process according to claim 7, characterized in that an aqueous solution of an alkaline buffer with a pH value of 8.8 to 10.2 is formed from a mixture of inorganic salts in water, preferably from potassium, sodium or ammonium bicarbonate and carbonate, or from chloride and ammonium hydroxide with a salt concentration of 0 , 1 to 10.0 moles / dcm3. 9. The method according to p. 7, with the fact that in the extraction of erythromycin, butyl acetate, amyl acetate, methyl isobutyl ketone, toluene, xylene, tetrachlorethylene or 1,2-dichloroethane are used as organic solvents which are immiscible with water. 10. The method according to p. 7, with the fact that methanol, ethanol, isopropanol, acetone or tetrahydrofuran are used as organic solvents miscible with water for the extraction and crystallization of erythromycin. 11. The method according to p. 7. A process according to claim 7, characterized in that the aqueous-organic acid buffer solution with a pH value of 3.8 to 6.5 is formed from water, an organic solvent which is miscible with water in an amount up to 40% by volume, an organic acid such as acetic, tartaric, lemon, sessenic or formic acid, or an inorganic acid, preferably phosphoric acid, or a mixture of acids and sodium or potassium hydroxide, or mixtures thereof with a concentration of 0.01 to 2.0 mol / dm3. 12. The method according to p. 7, characterized by the fact that organic alcohols, e.g. ethanol, propanol, isopropanol or butanol, halogen derivatives of aliphatic hydrocarbons, e.g. methylene chloride, chloroform, tetrachlorethylene or 1,2 are used as solvents for the purification of crude erythromycin obtained after the alkalization of the clear organic aqueous solution of erythromycin. - dichloroethane, ethers, preferably tetrahydrofuran, or mixtures of the above-mentioned organic solvents. Printing studio of the Polish People's Republic of Poland. Mintage 100 copies Price PLN 400 PL