PL123019B1 - Process for preparing amide of pyroglutamyl-/3'-aminotyrosil/-proline - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania amidu pyroglutamylo-(3'- -aminotyrozylo)-proliny, o wzorze przedstawionym *na rysunku. Wytworzony amid wykazuje wlasci¬ wosci farmakologiczne i nadaje sie do stosowania przy wytwarzaniu stymulatorów i lub inhibitorów wydzielania neurohormonów z gruczolowej czesci przysadki mózgowej.Stan techniki. W ostatnich latach opisano szereg wystepujacych w mózgu peptydów o silnym dzia¬ laniu stymulujacym lub inhibitujacym wydzielanie hormonów z gruczolowej czesci przysadki mózgo¬ wej. Jako neurohormon stymulujacy wydzielanie hormonu tyreotropowego opisano naturalny peptyd w postaci amidu pyroglutamylo-histydynylo-proliny.Jako peptyd inhibitujacy naturalny neurohormon zsyntetyzowano jedynie amid pyroglutamylo-3,4- -dwuhydroksyfenyloalanylo-proliny.Niedogodnosc stosowania tego znanego peptydu wynika stad, ze reszta zasadowego aminokwasu his- tydyny jest w tym analogu podstawiana reszta sla- bokjtfzisnego fenolu w postaci 3,4-dwuhydroksyfeny- lo-alaniny, wiec powinowactwo do odpowiednich re¬ ceptorów, charakterystycznych dla hormonu tyreo¬ tropowego jest male i powoduje, ze znany peptyd wykazuje stosunkowo slabe wlasciwosci inhibitoro- we. Dodatkowa niedogodnoscia stosowania znanego peptydu jest trudna synteza zwiazków zawieraja¬ cych w lancuchu peptydowym reszte dwuhydroksy- fenyloalaninowa. 2 Istota wynalazku. Sposób wedlug wynalazku wy¬ twarzania amidu pyroglutamylo-(3'-aminotyrozylo)- -proliny, o wzorze przedstawionym na rysunku, po¬ lega na dolaczaniu znanymi sposobami tworzenia 5 wiazania peptydowego do amidu proliny reszty 3'-nitrotyrozyny, zwlaszcza z grupa aminowa chro¬ niona przy pomocy grupy butyloksykarbonylowej, benzyloksykarbonylowej lub formylowej, a nastep¬ nie, po usunieciu znanymi sposobami grup bloku- 10 jacyeh, do tak utworzonego dwupeptydu przylacza sie reszte kwasu pyroglutaminowego, znanymi spo¬ sobami tworzenia wiazania peptydowego, zwlaszcza mieszanych bezwodników, metoda dwucykloheksy- lokarbodwuimidowa lub metoda estrów aktywnych. 15 Tak wytworzony trójpeptyd z grupa nitrowa redu¬ kuje sie wodorem w obecnosci palladu osadzonego na weglu, lub cynkiem w srodowisku kwasnym., lub pradem stalym, korzystnie o natezeniu 2 do 5 A.Przykladowa synteze zilustrowano schematem 20 przedstawionym na rysunku.Zaleta sposobu wedlug wynalazku wytwarzania amidu pyroglutamylo-(3/-aminotyrozylo)-proliny jest prostota wytwarzania, w wyniku której otrzymuje sie peptyd wykazujacy wlasciwosci zasadowe, zbli- 25 zone do wlasciwosci naturalnego hormonu tyreotro¬ powego, o potencjale utleniajaco redukujacym, identycznym z potencjalem utleniajaco-redukcyj- nym amidu pyroglutamylo-3',4'-dwuhydroksyfeny- loalanyloproliny. 30 Przyklad. Do roztworu 1 mmola chlorowodor- 123 019123 019 ku amidu proliny w chlorku metylenu dodano ko¬ lejno podczas intensywnego mieszania 1 mmol trój- etyloaminy, 1 mmol N-hydroksybenzotriazolu i 1 mmol N-t-butyloksykarbonylo-3'-nitrotyrozyny.Po oziebieniu otrzymanego roztworu do — 10°C do¬ dano do roztworu 1 mmol N,N'-dwucykloheksylo- karbodwuimidu. Po 1 godzinie mieszania w tempe¬ raturze — 10°C roztwór ogrzano do temperatury pokojowej, a po nastepnych 4 godzinach odsaczono wytracony N,N'-dwucykloheksylomocznik. Roztwór przemyto kolejno 1% NaHCOs, woda, 10% kwasem cytrynowym i ponownie woda.Po wysuszeniu roztworu siarczanem magnezu, chlorek metylenu odparowano in vacuo. Pozostaly osad krystalizowano z ukladu octan etylu/eter.Otrzymano zólte krysztaly amidu N-t-butyloksykar- bonylo-3'-nitrotyrozylo-proliny o nastepujacych wspólczynnikach Rf na zelu krzemionkowym: Rf (15%i metanol w chloroformie) R^ (25% metanol w chloroformie) RJ (33% metanol w chloroformie) R* (n-butanol, kwas octowy, woda — 4,1:1) = 0,68 = 0,85 = 0,90 = 0,78 10 15 20 25 uzyskujac 80 do 85% wydajnosci i temperature top¬ nienia 112 do 115°C. 1 mmol tak otrzymanego amidu N-t-butyloksy- karbonylo-3'-nitrotyrozyloproliny wstrzasano 15 mi¬ nut w temperaturze pokojowej z 4 N chlorowodo¬ rem w octanie etylu, a nastepnie chlorowodór i oc¬ tan etylu odparowano in vacuo. Pozostalosc w po¬ staci osadu roztarto z eterem, odsaczono eter i hig- roskppijna pozostalosc suszono nad wodorotlenkiem potasu.Pozostalosc rozpuszczono w mieszaninie chlorku metylenu z dwumetyloformamidem i dodano ko¬ lejno 1 mmol trójetyloaminy, 1 mmol estru 2,4,5- -trójchlorofenylowego kwasu pyroglutarninowego i 0,1 mmola N-hydroksybenzotriazolu. Po 4 godzi¬ nach odparowano chlorek metylenu in vacuo, a do pozostalosci dodano eteru. Wytrzasany osad oczy¬ szczono chromatograficznie na zelu krzemionkowym w.ukladzie 25% metanolu w chloroformie. Glówna frakcje wyodrebniono, a rozpuszczalnik odparowa¬ no. Otrzymano zólte krysztaly o skladzie elementar¬ nym zgodnym- z wzorem dla amidu pyroglutamylo- -3'-nitrotyrozylo-proliny o nastepujacych wspól-' czynnikach Rf na zelu krzemionkowym: 30 40 45 50 Rj =0,31 R^ = 0,52 R? = 0,69 ?4 = 0,48 uzyskujac 75 do 80% wydajnosci i temperature top¬ nienia 215 do 220°C. 1 mmol tak uzyskanego amidu pyroglutamylo-3'- -nitrotyrozylo-proliny rozpuszczono w metanolu i dodano 5 mmoli lodowatego kwasu octowego i ja¬ ko katalizatora 50 mg palladu osadzonego na weglu, a nastepnie przez mieszanine przepuszczono wodór, az do calkowitego zaniku zóltej barwy roztworu.Katalizator odsaczono, a przesacz zatezono in vacuo.Do pozostalosci dodano eteru, a wytracony osad odsaczono i wysuszono nad wodorotlenkiem sodu.Otrzymano analitycznie czysty amid pyroglutamy- lo-3'-aminotyrozylo-proliny o nastepujacych wspól¬ czynnikach Rf na zelu krzemionkowym: n\ = o,i Rj = 0,25 R3 = 0,55 R^ = 0,27 uzyskujac w procesie'90 do 95% wydajnosci i pre¬ parat o temperaturze topnienia od 196 do 198°C.Zastrzezenia patentowe Sposób wytwarzania amidu pyroglutamylo-(3'- -aminotyrozylo)-proliny, o wzorze przedstawionym na rysunku, znamienny tym, ze do amidu proliny dolacza sie znanym sposobem tworzenia wiazania peptydowego reszte 3'-nitrotyrozyny z grupa amino- 0 wa chroniona przy pomocy grupy butyloksykarbo- nylowej, benzyloksykarbonylowej lub formylowej, a nastepnie, po usunieciu znanymi sposobami grup blokujacych, do tak utworzonego dwupeptydu przy¬ lacza sie reszte kwasu pyroglutaminowego, znany¬ mi sposobami tworzenia wiazania peptydowego, zwlaszcza mieszanych bezwodników, metoda dwu- cykloheksylokarbodwuimidowa lub metoda estrów aktywnych i tak wytworzony trójpeptyd z grupa nitrowa redukuje sie wodorem w obecnosci palladu osadzonego na weglu, lub cynkiem w srodowisku kwasnym, lub predem stalym, korzystnie o nateze¬ niu 2 do 5 A.123 019 pGlu Tyr B0C- BOC- hOPC -N02 m ASDz -NO, lcL.NHz Schemat Pro |-NH2 fNH2 -NH2 NH2 NH2 HrC-CH, CH2 H2C-CK2 C CH-CONH-CH-COh/ //\/ \ O NH CH-CH, C0NH2 PL

Claims (1)

1. Zastrzezenia patentowe Sposób wytwarzania amidu pyroglutamylo-(3'- -aminotyrozylo)-proliny, o wzorze przedstawionym na rysunku, znamienny tym, ze do amidu proliny dolacza sie znanym sposobem tworzenia wiazania peptydowego reszte 3'-nitrotyrozyny z grupa amino- 0 wa chroniona przy pomocy grupy butyloksykarbo- nylowej, benzyloksykarbonylowej lub formylowej, a nastepnie, po usunieciu znanymi sposobami grup blokujacych, do tak utworzonego dwupeptydu przy¬ lacza sie reszte kwasu pyroglutaminowego, znany¬ mi sposobami tworzenia wiazania peptydowego, zwlaszcza mieszanych bezwodników, metoda dwu- cykloheksylokarbodwuimidowa lub metoda estrów aktywnych i tak wytworzony trójpeptyd z grupa nitrowa redukuje sie wodorem w obecnosci palladu osadzonego na weglu, lub cynkiem w srodowisku kwasnym, lub predem stalym, korzystnie o nateze¬ niu 2 do 5 A.123 019 pGlu Tyr B0C- BOC- hOPC -N02 m ASDz -NO, lcL.NHz Schemat Pro |-NH2 fNH2 -NH2 NH2 NH2 HrC-CH, CH2 H2C-CK2 C CH-CONH-CH-COh/ //\/ \ O NH CH-CH, C0NH2 PL