OA16416A - Pyrazole derivatives, their preparation and their application in therapy. - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne les dérivés de pyrazoles de formule générale (I) dans laquelle X représente le chlore ou le fluor. Procédé de préparation et application en thérapeutique. The invention relates to pyrazole derivatives of general formula (I) in which X represents chlorine or fluorine. Method of preparation and application in therapy.
Description
[0001] La présente Invention se rapporte à des dérivés de pyrazoles, à leur préparation et à leur application en thérapeutique.The present invention relates to pyrazole derivatives, to their preparation and to their therapeutic application.
[0002] Plus particulièrement, et selon un premier aspect, l'invention concerne de nouveaux pyrazoles substitués spécifiques présentant une activité anticancéreuse, via la modulation de l'activité de protéines, en particulier des kinases.[0002] More particularly, and according to a first aspect, the invention relates to novel specific substituted pyrazoles exhibiting anti-cancer activity, via the modulation of the activity of proteins, in particular kinases.
[0003] Les protéines kinases sont une famille d’enzymes qui catalysent la phosphorylation de groupes hydroxyles de résidus spécifiques de protéines tels que des résidus tyrosine, sérine ou thréonine, De telles phosphorylations peuvent largement modifier la fonction des protéines ; ainsi, les protéines kinases jouent un rôle Important dans la régulation d’une grande variété de processus cellulaires, Incluant notamment le métabolisme, la prolifération cellulaire, la différentiation cellulaire, la migration cellulaire ou la survie cellulaire. Parmi les différentes fonctions cellulaires dans lesquelles l’activité d'une protéine kinase est Impliquée, certains processus représentent des cibles attractives pour traiter les maladies cancéreuses ainsi que d’autres maladies.[0003] Protein kinases are a family of enzymes which catalyze the phosphorylation of hydroxyl groups of specific protein residues such as tyrosine, serine or threonine residues. Such phosphorylations can greatly modify protein function; thus, protein kinases play an important role in the regulation of a wide variety of cellular processes, including but not limited to metabolism, cell proliferation, cell differentiation, cell migration or cell survival. Among the different cellular functions in which the activity of a protein kinase is involved, certain processes represent attractive targets for treating cancerous diseases as well as other diseases.
[0004] Ainsi, un des objets de la présente Invention est de proposer des compositions ayant une activité anticancéreuse, en agissant en particulier vis-è-vis de kinases. Parmi les kinases pour lesquelles une modulation de l'activité est recherchée, on peut citer KDR, Tie2, VEGFR-1 (FLT1), VEGFR-3 (Flt4>. PDGFR, FGFR. Les kinases KDR et/ou Tie2 sont préférées.[0004] Thus, one of the objects of the present invention is to provide compositions having anti-cancer activity, by acting in particular against kinases. Among the kinases for which modulation of the activity is desired, mention may be made of KDR, Tie2, VEGFR-1 (FLT1), VEGFR-3 (Flt4> PDGFR, FGFR. KDR and / or Tie2 kinases are preferred.
[0005] Il est connu selon la demande de brevet publiée sous le WO08065282 des composés répondant à la formule générale (I) suivante : Zi[0005] According to the patent application published under WO08065282, compounds corresponding to the following general formula (I) are known: Zi
Formule (I) dans laquelle :Formula (I) in which:
) A et Ar sont Indépendamment sélectionnés dans le groupe constitué par : aryle, hétéroaryle, aryle substitué, hétéroaryle substitué;) A and Ar are independently selected from the group consisting of: aryl, heteroaryl, substituted aryl, substituted heteroaryl;
2) L est sélectionné dans le groupe constitué par; NH-CO-NH et O-CO-NH;2) L is selected from the group consisting of; NH-CO-NH and O-CO-NH;
3) Ri est sélectionné dans le groupe constitué par : H, Re, COR6, SO2R6, dans lequel Re est choisi parmi H, OR71 NR8Ro, alkyle, cycloalkyle, hétérocyclyle, hétérocyclyle substitué, aryle, aryle substitué, hétéroaryle, hétéroaryle substitué, dans lequel R? est choisi parmi H, phényle, alkyle, et dans lequel Ra et Re sont Indépendamment sélectionnés dans le groupe constitué par H, alkyle, cycloalkyle, hétérocyclyle, hétérocyclyle substitué, aryle, aryle substitué, hétéroaryle, hétéroaryle substitué ou bien Re et RB sont liés entre eux pour former un cycle saturé de 5 à Θ chaînons contenant de 0 à 3 hétéroatomes choisis parmi O, S et N ;3) R 1 is selected from the group consisting of: H, R e , COR 6 , SO 2 R 6 , wherein R e is selected from H, OR 71 NR 8 Ro, alkyl, cycloalkyl, heterocyclyl, substituted heterocyclyl, aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl, where R? is selected from H, phenyl, alkyl, and wherein Ra and R e are independently selected from the group consisting of H, alkyl, cycloalkyl, heterocyclyl, substituted heterocyclyl, aryl, substituted aryl, heteroaryl, substituted heteroaryl or R e and R B are linked together to form a 5 to Θ membered saturated ring containing 0 to 3 heteroatoms selected from O, S and N;
4) X est sélectionné dans le groupe constitué par: O et NH ;4) X is selected from the group consisting of: O and NH;
5) R3 est sélectionné dans le groupe constitué par: H, alkyle, alkyle substitué, cycloalkyle, cycloalkyle substitué ;5) R 3 is selected from the group consisting of: H, alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl;
6) R4a est sélectionné dans le groupe constitué par : H et (C1-C4)alkyle ;6) R4a is selected from the group consisting of: H and (C1-C4) alkyl;
7) R4b est sélectionné dans le groupe constitué par : H et (C1-C4)alkyle ;7) R4b is selected from the group consisting of: H and (C1-C4) alkyl;
Θ) Re est sélectionné dans le groupe constitué par : H, halogène, R10l CN, 0(Rw)> OC(O)(Rro). OC(0)N(Rio)(Rii), OS(O2)(Ri0), N(Rw)(Rii). N=C(Rto)(Rn), NiRwWOXRn), N(R12)C(0)N(Rio)(Rh), N(Ri2)C(S)N(Rw)(R«).Θ) R e is selected from the group consisting of: H, halogen, R 10l CN, 0 (Rw)> OC (O) (R ro ). OC (0) N (Rio) (Rii), OS (O 2 ) (Ri 0 ), N (R w ) (Rii). N = C (Rto) (Rn), NiRwWOXRn), N (R 12 ) C (0) N (Rio) (Rh), N (Ri 2 ) C (S) N (R w ) (R “).
N(Riq)S(02)(Rii). C(0)(Rw). C(O)O(Ri0), C(O)N(Ri0)(Rn), C(=N(Rii))(Rio),N (Riq) S (02) (Rii). C (0) (Rw). C (O) O (Ri 0 ), C (O) N (Ri 0 ) (Rn), C (= N (Rii)) (Rio),
C(=N(ORii))(Rio). S(Rio). S(O)(R10), S(O2)(RW), S(O2)O(RW), S(O2)N(Ri0)(Rh) ; dans lequel chaque Rw, Rn, Ru est Indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par H, alkyle, alkylène, alkynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocyclyle, alkyle substitué, alkylène substitué, alkynyle substitué, aryle substitué, hétéroaryle substitué, cycloalkyle substitué, hétérocyclyle substitué, Λ] [0006] Dans c© brevet de préférence X est O, R3 est méthyle, R4a et R4b sont H ; L est NHCONH ; A est phényle ; Ar est phényle ; mais dans cette demande aucun exemple ne décrit la substitution de Ar et son effet sur la pharmacocinétique.C (= N (ORii)) (Rio). S (Rio). S (O) (R 10 ), S (O 2 ) (R W ), S (O 2 ) O (R W ), S (O 2 ) N (Ri 0 ) (Rh); wherein each Rw, Rn, Ru is independently selected from the group consisting of H, alkyl, alkylene, alkynyl, aryl, heteroaryl, cycloalkyl, heterocyclyl, substituted alkyl, substituted alkylene, substituted alkynyl, substituted aryl, substituted heteroaryl, substituted cycloalkyl, substituted heterocyclyl, Λ] [0006] In this patent preferably X is O, R3 is methyl, R4a and R4b are H; L is NHCONH; A is phenyl; Ar is phenyl; but in this application no example describes the substitution of Ar and its effect on the pharmacokinetics.
[0007] La présente invention a pour objet deux composés inclus dans la demande précédente et répondant è la formule (I)The present invention relates to two compounds included in the previous application and corresponding to formula (I)
(!) dans laquelle :(!) in which :
X représente Cl ou F [0008] Les composés de formule (I) peuvent exister à l'état de bases ou de sels d'addition à des acides. De tels sels d'addition font partie de l'invention.X represents Cl or F [0008] The compounds of formula (I) can exist in the form of bases or of addition salts with acids. Such addition salts form part of the invention.
[0009] Les composés sous leurs deux formes tautomères Indiquées cl-dessous appartiennent à l'invention :[0009] The compounds in their two tautomeric forms Indicated below belong to the invention:
[0010] Ces sels peuvent être préparés avec des acides pharmaceutlquement acceptables, mais les sels d'autres acides utiles, par exemple, pour la purification ou l’isolement des composés de formule (I) font également partie de l'invention. Parmi les sels utilisables on peut notamment citer le chlorhydrate.These salts can be prepared with pharmaceutically acceptable acids, but salts of other acids useful, for example, for the purification or isolation of compounds of formula (I) also form part of the invention. Among the salts which can be used, mention may in particular be made of the hydrochloride.
[0011] Les composés de formule (I) peuvent également exister sous forme d'hydrates ou de solvats, à savoir sous forme d'associations ou de combinaisons avec une ou plusieurs molécules d'eau ou avec un solvant. De tels hydrates et solvats font également partie de l’invention.The compounds of formula (I) can also exist in the form of hydrates or of solvates, namely in the form of associations or combinations with one or more molecules of water or with a solvent. Such hydrates and solvates are also part of the invention.
[0012] Parmi les composés de formule (I) objets de l'invention, on peut notamment citer les composés suivants :Among the compounds of formula (I) which are subjects of the invention, mention may in particular be made of the following compounds:
- 4’{3-[3-(2-chloro-4-trlfluorométhyl-phényl)-uréido]-5-fluoro-benzylamino}-1Hpyrazole-3-carboxamlde et son chlorhydrate- 4 ’{3- [3- (2-chloro-4-trlfluoromethyl-phenyl) -ureido] -5-fluoro-benzylamino} -1Hpyrazole-3-carboxamlde and its hydrochloride
- 4-{3-[3-(2-fluoro-4-trifluorométhyl-phényl)-uréido]-5-fluorO'benzylamino}-1H” pyrazote-3-carboxamlde et son chlorhydrate [0013] Conformément à l'invention, on peut préparer les composés de formule générale (I) selon le procédé qui suit.- 4- {3- [3- (2-fluoro-4-trifluoromethyl-phenyl) -ureido] -5-fluorO'benzylamino} -1H ”pyrazote-3-carboxamlde and its hydrochloride [0013] According to the invention, the compounds of general formula (I) can be prepared according to the following process.
[0013] Dans les schémas qui suivent les composés de départ et les réactifs, quand leur mode de préparation n'est pas décrit, sont disponibles dans le commerce ou décrits dans la littérature, ou bien peuvent être préparés selon des méthodes qui y sont décrites ou qui sont connues de l'Homme du métier.In the diagrams which follow the starting compounds and the reagents, when their method of preparation is not described, are commercially available or described in the literature, or else can be prepared according to methods which are described therein or which are known to those skilled in the art.
[0014] L’Invention, selon un autre de ses aspects, a également pour objet les composés de formules x[0014] The invention, according to another of its aspects, also relates to the compounds of formulas x
CHO etCHO and
Dans lesquels X représente F ou Cl.In which X represents F or Cl.
Ces composés sont utiles comme intermédiaires de synthèse des composés de formule (I).These compounds are useful as intermediates in the synthesis of compounds of formula (I).
[0015] Les exemples suivants décrivent la préparation des composés conformes à 5 l'invention. Ces exemples ne sont pas limitatifs et ne font qu'illustrer la présente Invention.[0015] The following examples describe the preparation of the compounds according to the invention. These examples are not limiting and only illustrate the present invention.
Procédé de synthèse des exemplesMethod of synthesis of the examples
Swithtie d* I» parti* amlnoovratol*Swithtie d * I »party * amlnoovratol *
SvntMit 1> Mrtlt <HÎrvl-urHSvntMit 1> Mrtlt <HÎrvl-urH
+ η WCÀ/Mptojrtx DTWFfMslHjCNITA+ η WCÀ / Mptojrtx DTWFfMslHjCNITA
ExemplelExemplel
Chlorhydrate de A-tS-IS-^-chloro^-trlfluorométhyl-phénylj-uréldol-Sfluoro-benzylamino}*1H-pyrazole-3-carboxamide ciA-tS-IS - ^ - chloro ^ -trlfluoromethyl-phenylj-ureldol-Sfluoro-benzylamino} * 1H-pyrazole-3-carboxamide hydrochloride ci
Une suspension de 1,64 g (3,48 mmole) de 4-{3’[3-(2-chloro-4-trifluoraméthylphènyl)-uréldo]-5-fluoro-benzylamlno}-1 H-pyrazole-3-carboxamlde dans 50 mL d’éthanol est agitée à température ambiante sous atmosphère d’argon. Puis 35 mL (35 mmole) d'une solution d'acide chlorhydrique dans le dléthyle éther (1 N) sont ajoutés goutte à goutte. Le milieu réactionnel devient une solution limpide. Après 10 heures d'agitation à température ambiante les solvants sont évaporés à l'évaporateur rotatif sous pression réduite. Le résidu obtenu est agité dans 50 mL de dléthyle éther pendant 30 minutes.A suspension of 1.64 g (3.48 mmol) of 4- {3 '[3- (2-chloro-4-trifluoramethylphenyl) -uréldo] -5-fluoro-benzylamlno} -1 H-pyrazole-3-carboxamlde in 50 ml of ethanol is stirred at room temperature under an argon atmosphere. Then 35 mL (35 mmol) of a solution of hydrochloric acid in dlethyl ether (1 N) are added dropwise. The reaction medium becomes a clear solution. After 10 hours of stirring at room temperature, the solvents are evaporated off in a rotary evaporator under reduced pressure. The residue obtained is stirred in 50 mL of dlethyl ether for 30 minutes.
Après filtration et séchage à l'étuve 1,8 g de chlorhydrate de 4-{3-[3-(2-chloro4'trifluoromêthyl-phényl)'Uréldo]-5'fluoro-benzylamlno}~1H-pyrazole-3-carboxamide sont obtenus sous forme de cristaux jaune pâle.After filtration and drying in an oven 1.8 g of 4- {3- [3- (2-chloro4'trifluoromêthyl-phenyl) 'Uréldo] -5'fluoro-benzylamlno} ~ 1H-pyrazole-3-carboxamide hydrochloride are obtained in the form of pale yellow crystals.
SM : Temps de rétention Tr (min) = 1,01 ; [M+HJ+ m/z = 471 ; [M-H]- m/z = 469MS: Retention time Tr (min) = 1.01; [M + HJ + m / z = 471; [M-H] - m / z = 469
1H NMR (400 MHz, DMSO-d) δ ppm 4.32 (s, 2 H) 6.89 (d large, J=9.6 Hz, 1 H) 7.16 (s large, 1 H) 7.18 - 7.61 (m, 4 H) 7.68 (d large, J=8.9 Hz, 1 H) 7.86 (s large, 1 H) 8.44 (d, J=8.9 Hz, 1 H) 8.81 (m large, 1 H) 10.17 (m large, 1 H)1H NMR (400 MHz, DMSO-d) δ ppm 4.32 (s, 2 H) 6.89 (d wide, J = 9.6 Hz, 1 H) 7.16 (s wide, 1 H) 7.18 - 7.61 (m, 4 H) 7.68 (d wide, J = 8.9 Hz, 1H) 7.86 (wide s, 1H) 8.44 (d, J = 8.9 Hz, 1H) 8.81 (m wide, 1H) 10.17 (m wide, 1H)
Point de fusion (Kofler) = 177°CMelting point (Kofler) = 177 ° C
4-{3-[3-(2-Chloro-4-trifluorométhyl-phônyl)-uréldo]-5-fluoro-benzylamlno}1H-pyrazole-3-carboxamlde4- {3- [3- (2-Chloro-4-trifluoromethyl-phônyl) -uréldo] -5-fluoro-benzylamlno} 1H-pyrazole-3-carboxamlde
FF
Une solution de 5,9 g (9,5 mmole) de 4-{3-[3-(2-chloro-4-trlfluorométhyl· phényl)-uréldo]-5-fluoro-benzylamino}-1H-pyrazole-3-(2,4-dlméthoxy-benzylamlde) et 4,5 g (24 mmole) d'acide paratoluène sulfonlque dans 400 mL de toluène est chauffée au reflux pendant 2 heures. Après décantation la solution toluènique est séparée d'une gomme jaune. La gomme est diluée dans 150 mL de méthanol et 500 mL d'acétate d'éthyle. Puis 500 mL d'eau sont ajoutés. La solution est alors refroidie puis alcallnlsée avec 100 mL d’une solution aqueuse de potasse (10 N). Après décantation la phase aqueuse est extraite avec une solution de 400 mL d'acétate d'éthyle et 100 mL de méthanol. Les phases organiques sont rassemblées et lavées avec 100 mL de solution saturée de chlorure de sodium, séchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous pression réduite pour donner un solide Jaune pâle qui est purifié sur 200 g de silice, élué avec une solution de dlchlorométhane/méthanol/acétonltrlle 80/10/10 (en volume): 1,77 g de 4-{3-[3-(2chloro-4-trifiuorométhyl-phényl)-uréldol’5'fluoro-benzylamino}’1H-pyrazole-3carboxamlde sont obtenus sous forme d'un solide blanc,A solution of 5.9 g (9.5 mmol) of 4- {3- [3- (2-chloro-4-trlfluoromethyl · phenyl) -uréldo] -5-fluoro-benzylamino} -1H-pyrazole-3- (2,4-dlmethoxy-benzylamlde) and 4.5 g (24 mmol) of paratoluene sulfonlque acid in 400 mL of toluene is heated at reflux for 2 hours. After decantation, the toluene solution is separated from a yellow gum. The gum is diluted in 150 mL of methanol and 500 mL of ethyl acetate. Then 500 ml of water are added. The solution is then cooled and then alkalized with 100 mL of an aqueous solution of potassium hydroxide (10 N). After decantation, the aqueous phase is extracted with a solution of 400 mL of ethyl acetate and 100 mL of methanol. The organic phases are combined and washed with 100 mL of saturated sodium chloride solution, dried over magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure to give a pale yellow solid which is purified on 200 g of silica, eluted with a solution of dlchloromethane. methanol / acetonltrlle 80/10/10 (by volume): 1.77 g of 4- {3- [3- (2chloro-4-trifiuoromethyl-phenyl) -ureldol'5'fluoro-benzylamino} '1H-pyrazole-3carboxamlde are obtained in the form of a white solid,
SM : Temps de rétention Tr (min) = 4,29 [M+HJ+ m/z = 471 ; [M-H]· m/z = 469MS: Retention time Tr (min) = 4.29 [M + HJ + m / z = 471; [M-H] m / z = 469
1H NMR (400 MHz, DMSO-d) δ ppm 4.19 (d, 7=6.7 Hz, 2 H) 5.74 (m large, 1 H) 6.80 (d large, 7=9.6Hz, 1 H) 6.95 - 7.11 (m, 3 H) 7.24 (m étalé, 1 H) 7.42 (dt, 7=11.3, 2.3 Hz. 1 H) 7.67 (d large, 7=8.9 Hz. 1H) 7.86 (s large, 1 H) 8.44 (d, 7=8.9 Hz, 1 H) 8.70 (s large 1 H) 9,92 (s large, 1 H) 12.57 (s large, 1 H)1H NMR (400 MHz, DMSO-d) δ ppm 4.19 (d, 7 = 6.7 Hz, 2 H) 5.74 (m wide, 1 H) 6.80 (d wide, 7 = 9.6Hz, 1 H) 6.95 - 7.11 (m , 3H) 7.24 (broad m, 1H) 7.42 (dt, 7 = 11.3, 2.3 Hz. 1H) 7.67 (broad d, 7 = 8.9 Hz. 1H) 7.86 (broad s, 1H) 8.44 (d, 7 = 8.9 Hz, 1H) 8.70 (wide s 1H) 9.92 (wide s, 1H) 12.57 (wide s, 1H)
Point de fusion (Kofler): 220aCMelting point (Kofler): 220 a C
4-{3-[3-(2-Chloro-4-trifluorométhyl-phényl)-uréldo]-5-fliioro«benzylamjno}-4- {3- [3- (2-Chloro-4-trifluoromethyl-phenyl) -uréldo] -5-fliioro "benzylamjno} -
H-pyrazole-3-(2,4-diméthoxy-benzylamlde)H-pyrazole-3- (2,4-dimethoxy-benzylamlde)
Une solution de 10 g (32 mmole) de chlorhydrate de 4-amlno-1H-pyrazole-3(2,4-diméthoxy-benzylamlde) et de 5,9 mL (35,2 mmole) de dlisopropyléthylamlne dans 300 mL de tétrahydrofurane est agitée à température ambiante sous atmosphère d’argon. 3,85 g (35 mmole) de sulfate de magnésium et 12,70 g (35,2 mmole) de 1-(2-chloro-4-trlfluorométhyl-phényl)-3-(3-fluoro-5-formyl-phényl)-urée sont ajoutés. Le mélange réactionnel est alors chauffé au reflux pendant 14 heures. Le mélange est ensuite refroidi à 25eC puis 10,08 g (160 mmole) de cyanoborohydrure de sodium sont additionnés lentement. Après 12 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est concentré à sec à l’évaporateur rotatif. La gomme obtenue est agitée avec 300 mL d’eau et 500 mL de solution aqueuse de soude (1N). Cette suspension est agitée pendant 30 minutes avec 1 L de dichlorométhane. Après filtration sur verre fritté N°3, le solide obtenu est rincé avec 2 fols 500 mL d’eau puis séché à l’étuve sous vide à 40°C. Le solide est alors récrlstalllsé dans 800 mL de méthanol, à chaud, pour donner 8,3 g de 4-{3-(3-(2-chloro-4-trifluorométhyl-phényl)uréldo]-5-fluoro-benzylamino}-1H-pyrazole-3-(2,4-diméthoxy-benzylamlde) sous forme d'une poudre blanche.A solution of 10 g (32 mmol) of 4-amlno-1H-pyrazole-3 (2,4-dimethoxy-benzylamlde) hydrochloride and 5.9 mL (35.2 mmol) of dlisopropylethylamlne in 300 mL of tetrahydrofuran is stirred at room temperature under an argon atmosphere. 3.85 g (35 mmol) of magnesium sulfate and 12.70 g (35.2 mmol) of 1- (2-chloro-4-trlfluoromethyl-phenyl) -3- (3-fluoro-5-formyl-phenyl) ) -urea are added. The reaction mixture is then heated at reflux for 14 hours. The mixture is then cooled to 25 e C and 10.08 g (160 mmol) of sodium cyanoborohydride are added slowly. After 12 hours of stirring at room temperature, the mixture is concentrated to dryness on a rotary evaporator. The gum obtained is stirred with 300 mL of water and 500 mL of aqueous sodium hydroxide solution (1N). This suspension is stirred for 30 minutes with 1 L of dichloromethane. After filtration on sintered glass No. 3, the solid obtained is rinsed with 2 fols 500 mL of water and then dried in an oven under vacuum at 40 ° C. The solid is then recrlstalllsé in 800 mL of methanol, hot, to give 8.3 g of 4- {3- (3- (2-chloro-4-trifluoromethyl-phenyl) uréldo] -5-fluoro-benzylamino} - 1H-pyrazole-3- (2,4-dimethoxy-benzylamlde) as a white powder.
SM : Temps de rétention Tr (min) = 4,97 ; [M+H]+ m/z = 621 ; [M-H]· m/z = 619MS: Retention time Tr (min) = 4.97; [M + H] + m / z = 621; [M-H] m / z = 619
1H NMR (400 MHz, DMSO-d) S ppm 3.73 (s, 3 H) 3.81 (s, 3 H) 4.19 (d, J=6.7 Hz, 2 H) 4.33 (d, J=6.7Hz, 2 H) 5.71 (t large, J=6.7 Hz, 1 H) 6.46 (dd, J=8.3, 2.3 Hz, 1 H) 6.55 (d, J=2.3 Hz, 1 H) 6,80 (d large,J=9.6 Hz, 1 H) 7.04 (s large, 1 H) 7.08 (s, 1 H) 7.10 (d, J=8.9 Hz. 1 H) 7.43 (dt, J=11.4, 2.3 Hz, 1 H) 7.67(d large, J=8.9 Hz, 1 H) 7.86 (s large, 1 H) 7.94 (t large, J=6.7 Hz, 1 H) 8.45 (d, J=8.9 Hz, 1 H) 8.62 (m étalé, 1 H) 9.79 (m étalé, 1 H) 12.60 (m étalé, 1 H)1H NMR (400 MHz, DMSO-d) S ppm 3.73 (s, 3 H) 3.81 (s, 3 H) 4.19 (d, J = 6.7 Hz, 2 H) 4.33 (d, J = 6.7Hz, 2 H) 5.71 (t wide, J = 6.7 Hz, 1 H) 6.46 (dd, J = 8.3, 2.3 Hz, 1 H) 6.55 (d, J = 2.3 Hz, 1 H) 6.80 (d wide, J = 9.6 Hz , 1H) 7.04 (s wide, 1H) 7.08 (s, 1H) 7.10 (d, J = 8.9 Hz. 1 H) 7.43 (dt, J = 11.4, 2.3 Hz, 1 H) 7.67 (d wide, J = 8.9 Hz, 1H) 7.86 (s wide, 1H) 7.94 (t wide, J = 6.7 Hz, 1H) 8.45 (d, J = 8.9 Hz, 1H) 8.62 (m spread, 1H) 9.79 (m spread, 1H) 12.60 (m spread, 1H)
Point de fusion (Kofler):168°C l-^-Chloro-A-trlfluorométhyl-phényO-S-fS-fluoro-S-formyl-phénylJ-urêe ciMelting point (Kofler): 168 ° C l - ^ - Chloro-A-trlfluoromethyl-phenyO-S-fS-fluoro-S-formyl-phenylJ-urea ci
CHOCHO
Une solution de 33,15 g (92,68 mmole) de 1-(2-chloro-4-trifluorométhylphényl)-3-(3-cyanO’5-fluorO’phényl)-urée dans 600 mL de têtrahydrofurane est agitée à -10’C sous atmosphère d'argon. Puis 230 mL d'une solution d'hydrure de dlIsobutyl aluminium à 20% dans le toluène sont ajouté avec un goutte à goutte régulier. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 12 heures. Puis 80 mL supplémentaires d'hydrure de dilsobutylalumlnlum sont ajoutés à -10°C. Après 14 heures d'agitation à température ambiante le milieu réactionnel est concentré à sec à l’évaporateur rotatif pour donner une huile épaisse qui est additionnée lentement sous agitation avec 500 g de glace et 100 mL d'acide acétique à 100%. La suspension obtenue est filtrée. Le solide est alors dilué dans 2 fols 800 mL d'acétate d'éthyle et la solution organique est lavée avec 600 mL de solution saturée de chlorure de sodium, séchée sur sulfate de magnésium, filtrée, concentrée à sec à l'évaporateur rotatif et séchée à l’étuve sous vide à 40*C pour donner 29,57 g de 1-(2-chloro-4-trlfluorométhyl-phényl)-3-(3-f1uoro-5-formyl-phényl)-urée sous forme d'une poudre jaune pâle,A solution of 33.15 g (92.68 mmol) of 1- (2-chloro-4-trifluoromethylphenyl) -3- (3-cyanO'5-fluorO'phenyl) -urea in 600 mL of tetrahydrofuran is stirred at - 10 ° C in an argon atmosphere. Then 230 ml of a 20% solution of dIsobutyl aluminum hydride in toluene are added with a regular dropwise drop. The reaction mixture is stirred at room temperature for 12 hours. Then an additional 80 mL of dilsobutylalumlum hydride is added at -10 ° C. After 14 hours of stirring at room temperature, the reaction medium is concentrated to dryness on a rotary evaporator to give a thick oil which is added slowly, with stirring, with 500 g of ice and 100 mL of 100% acetic acid. The suspension obtained is filtered. The solid is then diluted in 2 fols 800 mL of ethyl acetate and the organic solution is washed with 600 mL of saturated sodium chloride solution, dried over magnesium sulfate, filtered, concentrated to dryness in a rotary evaporator and dried in a vacuum oven at 40 ° C to give 29.57 g of 1- (2-chloro-4-trlfluoromethyl-phenyl) -3- (3-fluoro-5-formyl-phenyl) -urea as d 'a pale yellow powder,
SM : Temps de rétention Tr (min) = 4,86 ; [M+HJ+ m/z = 361 ; [M-H]· m/z = 359MS: Retention time Tr (min) = 4.86; [M + HJ + m / z = 361; [M-H] m / z = 359
1H NMR (400 MHz, DMSO-d) δ ppm 7,35 (ddd, J=8.4, 2,3, 1.8 Hz, 1 H) 7,67 7.75 (m, 2 H) 7.78 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 7.88 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 8.45 (d. J=8.8 Hz, 1 H) 8.72 (s large, 1 H) 9.98 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 10.07 (s large, 1 H)1H NMR (400 MHz, DMSO-d) δ ppm 7.35 (ddd, J = 8.4, 2.3, 1.8 Hz, 1 H) 7.67 7.75 (m, 2 H) 7.78 (t, J = 1.8 Hz , 1H) 7.88 (d, J = 1.8 Hz, 1H) 8.45 (d. J = 8.8 Hz, 1H) 8.72 (broad s, 1H) 9.98 (d, J = 1.8 Hz, 1H) 10.07 ( s wide, 1H)
1-(2-Chloro-4-trlfluorométhyl-phényl)-3-(3-cyano-5-fluoro-phényl)-uréeY1- (2-Chloro-4-trlfluoromethyl-phenyl) -3- (3-cyano-5-fluoro-phenyl) -ureaY
ClCl
Une solution de 15 g (110,2 mmole) de 5-fluoro-3-cyanoanillne dans 150 mL de têtrahydrofurane est agitée à température ambiante sous atmosphère d'argon, Puis 17,5 mL (121,22 mmole) de 2-chloro-4-trifluorométhylphénylisocyanate sont ajoutés. Le milieu réactionnel est chauffé au reflux pendant 3 heures puis concentré à sec à l’évaporateur rotatif. Le résidu solide obtenu est recrlstalllsé à chaud dans 60 mL d’acétate d'éthyle pour donner 33,25 g de 1-(2-chloro-4-trlfluorométhyl-phényl)-3(3-cyano-5-fluoro-phényl)-urée sous forme d'un solide blanc.A solution of 15 g (110.2 mmol) of 5-fluoro-3-cyanoanillne in 150 mL of tetrahydrofuran is stirred at room temperature under an argon atmosphere, then 17.5 mL (121.22 mmol) of 2-chloro -4-trifluoromethylphenylisocyanate are added. The reaction medium is heated under reflux for 3 hours and then concentrated to dryness on a rotary evaporator. The solid residue obtained is recreated hot in 60 mL of ethyl acetate to give 33.25 g of 1- (2-chloro-4-trlfluoromethyl-phenyl) -3 (3-cyano-5-fluoro-phenyl) -urea as a white solid.
SM : temps de rétention Tr (min) = 4,97 ; [M+H]* : m/z 356MS: retention time Tr (min) = 4.97; [M + H] *: m / z 356
Point de fusion (Kofler): 286°CMelting point (Kofler): 286 ° C
La 5“fluoro-3-cyanoanlline est commerciale.5-fluoro-3-cyanoanlline is commercial.
Chlorhydrate de 4-amlno-1H-pyraïole-3-(2,4-dlméthoxy-benzylamlde) ,HCI4-Amlno-1H-pyraïole-3- (2,4-dlmethoxy-benzylamlde) hydrochloride, HCl
Une suspension de 6,12 g (20 mmole) de 4-nitro-1H-pyrazole-3-(2,4dlméthoxybenzylamlde) dans 340 mL d’éthanol est agitée à température ambiante. Puis 15,8 g (70 mmole) de dl-hydrate de chlorure d'étain sont additionnés en 5 minutes. Le mélange réactionnel est agité 14 heures à température ambiante puis concentré à sec à l’évaporateur rotatif. Le résidu obtenu est agité avec 330 mL de solution aqueuse saturée en hydrogénocarbonate de sodium et 300 ml de dlchlorométhane. Après décantation la phase organique est extraite avec 2 fols 150 mL de dlchlorométhane. Les phases organiques sont réunies, lavées avec 150 mL de solution saturée en chlorure de sodium, séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration à l’évaporateur rotatif, 4,57 g de chlorhydrate de 4-amlno-1 H-pyrazole16416A suspension of 6.12 g (20 mmol) of 4-nitro-1H-pyrazole-3- (2,4dlmethoxybenzylamlde) in 340 mL of ethanol is stirred at room temperature. Then 15.8 g (70 mmol) of tin chloride dl-hydrate are added over 5 minutes. The reaction mixture is stirred for 14 hours at room temperature and then concentrated to dryness on a rotary evaporator. The residue obtained is stirred with 330 ml of saturated aqueous sodium hydrogencarbonate solution and 300 ml of dlchloromethane. After decantation, the organic phase is extracted with 2 fols 150 mL of dlchloromethane. The organic phases are combined, washed with 150 ml of saturated sodium chloride solution, dried over magnesium sulfate. After concentration on a rotary evaporator, 4.57 g of 4-amlno-1 H-pyrazole hydrochloride16416
3-(2,4-dlméthoxy-benzylamlde) sont obtenus sous forme d’un solide de couleur violacée.3- (2,4-dlmethoxy-benzylamlde) are obtained in the form of a purplish solid.
SM : IE : [M]+. m/z = 276 ; pic de base m/z = 151SM: IE: [M] +. m / z = 276; base peak m / z = 151
1H NMR (400 MHz, DMSO-d) δ ppm 3.73 (s, 3 H) 3.81 (s, 3 H) 4.31 (d, >6,21H NMR (400 MHz, DMSO-d) δ ppm 3.73 (s, 3H) 3.81 (s, 3H) 4.31 (d,> 6.2
Hz, 2 H) 4.56 (m étalé, 2 H) 6.46 (dd, >8.3, 2.9 Hz, 1 H) 6.55 (d, >2.9 Hz, 1 H) 7.06 - 7.13 (m, 2 H) 7.84 (t, >6.2 Hz, 1 H) 12.50 (m étalé, 1 H)Hz, 2H) 4.56 (m spread, 2H) 6.46 (dd,> 8.3, 2.9 Hz, 1 H) 6.55 (d,> 2.9 Hz, 1 H) 7.06 - 7.13 (m, 2 H) 7.84 (t, > 6.2 Hz, 1 H) 12.50 (m spread, 1 H)
Point de fusion (Buchl): 186°CMelting point (Buchl): 186 ° C
4-Nitro-1H-pyrazole-3-(2,4-dlméthoxybenzylamlde)4-Nitro-1H-pyrazole-3- (2,4-dlmethoxybenzylamlde)
Une solution de 14,65 g (76,4 mmole) de 1-(3-dimêthylaminopropyl)-3éthylcarbodllmide dlhydrate, de 10,32 g (76,4 mmole) de 1-hydroxybenzotrlazole dans 50 mL de diméthylformamlde est agité à température ambiante. 11,7 g (70,03 mmole) de 2,4-dlméthoxybenzylamlne sont ajoutés puis 10,2 g d'acide 4-nltro-3pyrazole carboxyllque par petites portions. Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est versé dans 500 mL d’eau. La suspension est filtrée puis lavée avec 2 fols 250 mL d’eau. Le solide obtenu est séché à l'étuve sous vide à 40’C pour donner 18,58 g de 4-nitro-1 H-pyrazole-3-(2,4dlméthoxybenzylamlde) sous forme d’un solide blanc.A solution of 14.65 g (76.4 mmol) of 1- (3-dimethylaminopropyl) -3ethylcarbodllmide dlhydrate, 10.32 g (76.4 mmol) of 1-hydroxybenzotrlazole in 50 mL of dimethylformamlde is stirred at room temperature. . 11.7 g (70.03 mmol) of 2,4-dlmethoxybenzylamlne are added then 10.2 g of 4-nltro-3pyrazole carboxylic acid in small portions. After 16 hours of stirring at room temperature, the reaction medium is poured into 500 mL of water. The suspension is filtered and then washed with 2 fols 250 mL of water. The solid obtained is dried in an oven under vacuum at 40 ° C. to give 18.58 g of 4-nitro-1 H-pyrazole-3- (2,4dlmethoxybenzylamlde) in the form of a white solid.
1H NMR (400 MHz, DMSO-φ δ ppm 3.75 (s, 3 H) 3.80 (s. 3 H) 4.35 (d, >5.9 Hz, 2 H) 6.50 (dd, >8.3, 2.4 Hz, 1 H) 6.56 (d, >2.4 Hz, 1 H) 7.21 (d, >8.3 Hz, 1 H) 8.71 (s large., 1 H) 8.88 (t large, >5.9 Hz, 1 H) 14.13 (m étalé, 1 H)1H NMR (400 MHz, DMSO-φ δ ppm 3.75 (s, 3H) 3.80 (s. 3H) 4.35 (d,> 5.9 Hz, 2H) 6.50 (dd,> 8.3, 2.4 Hz, 1 H) 6.56 (d,> 2.4 Hz, 1 H) 7.21 (d,> 8.3 Hz, 1 H) 8.71 (s broad, 1 H) 8.88 (t broad,> 5.9 Hz, 1 H) 14.13 (m spread, 1 H)
SM (ES+/-) Temps de rétention Tr (min) = 3,23 ; [M+H]+ m/z = 307 ; [M-H]-m/z = 305MS (ES +/-) Retention time Tr (min) = 3.23; [M + H] + m / z = 307; [M-H] -m / z = 305
Point de fusion (Kofler):192“CMelting point (Kofler): 192 “C
L'acide 4-nltro-3-pyrazole carboxylique est commercial.4-nltro-3-pyrazole carboxylic acid is commercial.
Exemple 2Example 2
Chlorhydrate de 4-{3-[3-(2-fluoro-4-trlf1uorométhyl-phényl)-uréido]-5fluoro-benzylamlno}-1H-pyrazole-3-carboxamide4- {3- [3- (2-fluoro-4-trlf1uoromethyl-phenyl) -ureido] -5fluoro-benzylamlno} -1H-pyrazole-3-carboxamide hydrochloride
Une suspension de 1,85 g (0,40 mmole) de 4-{3-[3-(2-fluoro-4-trifluorométhylphényl)-uréido]-5-fluoro-benzylamino}-1H-pyrazole-3-carboxamide dans 40 mL d’éthanol est agitée à température ambiante sous atmosphère d'argon. 20 mL (40 mmole) d’une solution d’acide chlorhydrique dans le dléthyl éther (1 N) sont ajoutés goutte à goutte. Le milieu réactionnel devient une solution limpide. Après 12 heures d’agitation à température ambiante les solvants sont évaporés à l'évaporateur rotatif sous pression réduite. Le résidu obtenu est agité dans 200 mL de dléthyl éther pendant 30 minutes.A suspension of 1.85 g (0.40 mmol) of 4- {3- [3- (2-fluoro-4-trifluoromethylphenyl) -ureido] -5-fluoro-benzylamino} -1H-pyrazole-3-carboxamide in 40 mL of ethanol is stirred at room temperature under an argon atmosphere. 20 mL (40 mmol) of a solution of hydrochloric acid in dlethyl ether (1 N) are added dropwise. The reaction medium becomes a clear solution. After 12 hours of stirring at room temperature, the solvents are evaporated on a rotary evaporator under reduced pressure. The residue obtained is stirred in 200 mL of dlethyl ether for 30 minutes.
Après filtration et séchage à l’étuve 1,75 g de chlorhydrate de 4-(3-(3-(2fluoro-4-trifluorométhyl-phényl)-urêldo]-5-fluoro-benzylamlno}-1 H-pyrazole-3carboxamide sont obtenus sous forme de cristaux jaune pâle.After filtration and drying in an oven 1.75 g of 4- (3- (3- (2fluoro-4-trifluoromethyl-phenyl) -urêldo] -5-fluoro-benzylamlno} -1 H-pyrazole-3carboxamide hydrochloride are obtained as pale yellow crystals.
iH NMR (400 MHz. DMSO-de) 6 ppm 4.24 (s, 2 H) 6.83 (d, J=9.0 Hz, 1 H) 7.08 (s 1H) 7.18 (br. s., 1H) 7.23 (s, 1 H) 7.35 (br. s., 2 H) 7.42 (dt. J=11.3, 2.0 Hz. 1 H) 7.54 (d.7=8.8 Hz, 1 H) 7.69 (dd. J=11.2, 1.5 Hz, 1 H) 8.41 (t, J=8.2 Hz, 1 H) 8.99 (s, 1 H) 9.54 (s, 1 H)iH NMR (400 MHz. DMSO-de) 6 ppm 4.24 (s, 2H) 6.83 (d, J = 9.0 Hz, 1H) 7.08 (s 1H) 7.18 (br. s., 1H) 7.23 (s, 1 H) 7.35 (br. S., 2 H) 7.42 (dt. J = 11.3, 2.0 Hz. 1 H) 7.54 (d.7 = 8.8 Hz, 1 H) 7.69 (dd. J = 11.2, 1.5 Hz, 1 H) 8.41 (t, J = 8.2 Hz, 1H) 8.99 (s, 1H) 9.54 (s, 1H)
SM : Temps de rétention Tr (min) = 0,97 ; [M+H]+ m/z = 455MS: Retention time Tr (min) = 0.97; [M + H] + m / z = 455
Point de fusion (Kof1er):184°C (avec décomposition)Melting point (Kof1er): 184 ° C (with decomposition)
4-{3-[3-(2-Fluoro-4-trlfluorométhyl-phényl)-uréldo]-5-fluoro-benzylamlno}-4- {3- [3- (2-Fluoro-4-trlfluoromethyl-phenyl) -uréldo] -5-fluoro-benzylamlno} -
H-pyrazole-3-carboxamideH-pyrazole-3-carboxamide
FF
Une solution de 22,3 g (36,89 mmole) de 4-{3-[3-(2-fluoro-4-trifluorométhylphényl)-uréido]-5-fluoro-benzylamino}'1 H-pyrazole-3-(2,4-diméthoxy-benzylamide) et 17,54 g (92,22 mmole) d'acide paratoluène sulfonique dans 600 mL de toluène est chauffée au reflux pendant 14 heures. Après décantation la solution toluènique est séparée d'une gomme jaune. La gomme est agitée pendant 2 heures dans 280 mL d'eau et 100 mL de soude (10 N). La suspension est filtrée. Le solide obtenu est rincé avec 3 fols 350 mL d'eau puis séché pour donner un solide crème qui est purifié sur 350 g de silice, élué avec une solution de dichlorométhane/méthanol/acétonltrile 95/2,5/2,5 (en volume): 3,85 g de 4-{3-[3-(2-fluoro-4-trlfluorométhyl-phényl)-uréldo]-5~ fluoro-benzylamino}-1 H-pyrazole-3-carboxamlde sont obtenus sous forme d'un solide blanc.A solution of 22.3 g (36.89 mmol) of 4- {3- [3- (2-fluoro-4-trifluoromethylphenyl) -ureido] -5-fluoro-benzylamino} '1 H-pyrazole-3- ( 2,4-dimethoxy-benzylamide) and 17.54 g (92.22 mmol) of paratoluene sulfonic acid in 600 mL of toluene is heated at reflux for 14 hours. After decantation, the toluene solution is separated from a yellow gum. The gum is stirred for 2 hours in 280 mL of water and 100 mL of sodium hydroxide (10 N). The suspension is filtered. The solid obtained is rinsed with 3 fols 350 mL of water and then dried to give a cream solid which is purified on 350 g of silica, eluted with a solution of dichloromethane / methanol / acetonitrile 95 / 2.5 / 2.5 (in volume): 3.85 g of 4- {3- [3- (2-fluoro-4-trlfluoromethyl-phenyl) -uréldo] -5 ~ fluoro-benzylamino} -1 H-pyrazole-3-carboxamlde are obtained in the form a white solid.
1H NMR (400 MHz, DMSO-cfe) Ô ppm 4.18 (d, >5.9 Hz, 2 H) 5.68 - 5,77 (m, 1 H) 6.80 (d, >8,8 Hz, 1H) 7.01 - 7.08 (br. s., 1 H) 7.04 (s, 1 H) 7.06 (s, 1 H) 7.24 (br. s., 1 H) 7.40 (dt, >11.4, 2.0 Hz, 1 H) 7.54 (d, >8.3 Hz, 1 H) 7.69 (d, >11.5 Hz, 1 H) 8.41 (t, >8.4 Hz. 1 H) 8.92 (br. s„ 1 H) 9.40 (br. s., 1 H) 12.55 (br. s., 1 H)1H NMR (400 MHz, DMSO-cfe) Ô ppm 4.18 (d,> 5.9 Hz, 2 H) 5.68 - 5.77 (m, 1 H) 6.80 (d,> 8.8 Hz, 1H) 7.01 - 7.08 ( br. s., 1H) 7.04 (s, 1H) 7.06 (s, 1H) 7.24 (br. s., 1H) 7.40 (dt,> 11.4, 2.0 Hz, 1H) 7.54 (d,> 8.3 Hz, 1 H) 7.69 (d,> 11.5 Hz, 1 H) 8.41 (t,> 8.4 Hz. 1 H) 8.92 (br. S „1 H) 9.40 (br. S., 1 H) 12.55 (br . s., 1 H)
SM : Temps de rétention Tr (min) = 4,09 [M+H]+ m/z = 455 ; [M-HJ- m/z = 453MS: Retention time Tr (min) = 4.09 [M + H] + m / z = 455; [M-HJ- m / z = 453
Point de fusion (Kofler):233°CMelting point (Kofler): 233 ° C
4-(3-[3-(2-Fluoro-4-trifluorométhyl-phényl)-uréldo]-5-fluoro-benzylamlno}-4- (3- [3- (2-Fluoro-4-trifluoromethyl-phenyl) -uréldo] -5-fluoro-benzylamlno} -
H-pyrazol©-3-( 2,4-dlméthoxy-benzylamide)^H-pyrazol © -3- (2,4-dlmethoxy-benzylamide) ^
FF
Une solution de 11,40 g (36,45 mmole) de chlorhydrate de 4-amino-1Hpyrazole-S-^A-diméthoxy-benzylamide) et de 6,65 mL (40,09 mmole) de dilsopropyléthylamlne dans de 360 mL de tétrahydrofurane est agitée à température ambiante sous atmosphère d'argon. 4,35 g (36,45 mmole) de sulfate de magnésium et 13,80 g (35,2 mmole) de 1-(2-fluoro-4-trlfluorométhyl-phényl)-3-(3-fluoro-5-formylphényl)-urée sont ajoutés. Le mélange réactionnel est alors chauffé au reflux pendant 14 heures. Le mélange est ensuite refroidi à 25°C puis 11,46 g (182,25 mmole) de cyanoborohydrure de sodium sont additionnés lentement. Après 72 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est concentré à sec à l'évaporateur rotatif La gomme obtenue est agitée avec 400 mL d'eau et 500 mL de solution de soude (1 N). Cette suspension est agitée pendant 1 heure puis filtrée sur verre fritté N’3, le solide obtenu est rincé avec 3 fols 500 mL d'eau puis séché à l'étuve sous vide à 40°C pour donner 22,45 g de 4-{3-[3-(2-fluoro-4-trifluorométhylphényl)-uréldo]-5-fluoro-benzylamlno)-1H-pyrazole-3-(2,4-diméthoxy-benzylamlde) sous forme d'un solide rosâtre.A solution of 11.40 g (36.45 mmol) of 4-amino-1Hpyrazole-S- ^ A-dimethoxy-benzylamide hydrochloride) and 6.65 mL (40.09 mmol) of dilsopropylethylamlne in 360 mL of tetrahydrofuran is stirred at room temperature under an argon atmosphere. 4.35 g (36.45 mmol) of magnesium sulfate and 13.80 g (35.2 mmol) of 1- (2-fluoro-4-trlfluoromethyl-phenyl) -3- (3-fluoro-5-formylphenyl ) -urea are added. The reaction mixture is then heated at reflux for 14 hours. The mixture is then cooled to 25 ° C. then 11.46 g (182.25 mmol) of sodium cyanoborohydride are added slowly. After 72 hours of stirring at room temperature, the mixture is concentrated to dryness on a rotary evaporator. The gum obtained is stirred with 400 ml of water and 500 ml of sodium hydroxide solution (1N). This suspension is stirred for 1 hour then filtered through sintered glass N'3, the solid obtained is rinsed with 3 fols 500 mL of water and then dried in an oven under vacuum at 40 ° C to give 22.45 g of 4- {3- [3- (2-Fluoro-4-trifluoromethylphenyl) -ureldo] -5-fluoro-benzylamlno) -1H-pyrazole-3- (2,4-dimethoxy-benzylamlde) as a pinkish solid.
iH NMR (500 MHz, DMSO-cfë) δ ppm 3.73 (s, 3 H) 3.81 (s, 3 H) 4.18 (d, J=6.3 Hz, 2 H) 4.33 (S, 2 H)-5.70 (t, J=6.2 Hz, 1 H) 6.47 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.55 (s, 1 H) 6.79 (d, J=9.1 Hz, 1 H) 7.05 (s, 1 H) 7.07 - 7.12 (m, 2 H) 7.41 (d, J=11.3 Hz, 1 H) 7,53 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.68 (d, J=11.3 Hz, 1 H) 7.95 (br. s„ 1 H)-8.40 (t, J=8.2 Hz, 1 H) 9.25 (br. s., 2 H) 12.52 (br. s., 1 H)iH NMR (500 MHz, DMSO-cfë) δ ppm 3.73 (s, 3 H) 3.81 (s, 3 H) 4.18 (d, J = 6.3 Hz, 2 H) 4.33 (S, 2 H) -5.70 (t, J = 6.2 Hz, 1 H) 6.47 (d, J = 8.2 Hz, 1 H) 6.55 (s, 1 H) 6.79 (d, J = 9.1 Hz, 1 H) 7.05 (s, 1 H) 7.07 - 7.12 ( m, 2 H) 7.41 (d, J = 11.3 Hz, 1 H) 7.53 (d, J = 8.2 Hz, 1 H) 7.68 (d, J = 11.3 Hz, 1 H) 7.95 (br. s „1 H) -8.40 (t, J = 8.2 Hz, 1H) 9.25 (br. S., 2H) 12.52 (br. S., 1H)
SM : Temps de rétention Tr (min) = 4,79 ; [M+H]+ m/z = 605 ; [M-HJ- m/z = 603MS: Retention time Tr (min) = 4.79; [M + H] + m / z = 605; [M-HJ- m / z = 603
Point de fusion (Kofler):152°CMelting point (Kofler): 152 ° C
-(2-Fluoro-4-trlfluorométhyl-phényl)-3-(3-f1uoro-5-formyl-phényl)-urée- (2-Fluoro-4-trlfluoromethyl-phenyl) -3- (3-fluoro-5-formyl-phenyl) -urea
FF
CHOCHO
Un© solution d© 11,90 g (34,87 mmol©) d© 1-(2-fluoro-4-trifluorométhylphényl)-3-(3-cyano-5-fluoro-phényl)-urée dans 150 mL d© tétrahydrofurane est agité© à -2°C sous atmosphère d'argon. Puis 86 mL d'un© solution d’hydrur© d© di-lsobutyl aluminium à 20% dans l'hexane sont ajouté avec un goutte à goutte régulier. Le mélange réactionnel est agité â température ambiante pendant 12 heures. Puis 60 mL supplémentaires d'hydrure de dllsobutylalumlnlum sont ajoutés à -2°C. Après 3 heures d'agitation à température ambiante I© milieu réactionnel est concentré à sec à l'évaporateur rotatif pour donner une huile épaisse qui est additionnée lentement sous agitation avec 500 g de glace ©t 300 mL d'acid© acétique à 100%. La suspension obtenue est filtrée. Le solide obtenu est lavé avec 4 fols 150 mL d’eau, essoré ©t séché à l'étuv© sous vide à 40°C pour donner 13,95 g de 1-(2-fluoro-4trifluorométhyl'phényiy-S-ÎB-fluoro-S-formyl-phénylJ'Urée sous forme d'un solide jaune pâle.A © solution of 11.90 g (34.87 mmol ©) d © 1- (2-fluoro-4-trifluoromethylphenyl) -3- (3-cyano-5-fluoro-phenyl) -urea in 150 mL of © tetrahydrofuran is stirred at -2 ° C under an argon atmosphere. Then 86 ml of a © solution of hydride © d © di-lsobutyl aluminum at 20% in hexane are added with a regular drop by drop. The reaction mixture is stirred at room temperature for 12 hours. Then an additional 60 mL of dllsobutylalumlum hydride is added at -2 ° C. After 3 hours of stirring at room temperature, the reaction medium is concentrated to dryness on a rotary evaporator to give a thick oil which is added slowly with stirring with 500 g of ice © and 300 mL of 100% acetic acid © . The suspension obtained is filtered. The solid obtained is washed with 4 fols 150 mL of water, drained and dried in a vacuum oven at 40 ° C to give 13.95 g of 1- (2-fluoro-4trifluoromethyl'phényiy-S-ÎB -fluoro-S-formyl-phenylJ 'Urea as a pale yellow solid.
1H NMR (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 7.33 - 7.38 (m, 1 H) 7.57 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.69 - 7.75 (m, 2 H)-7.79 (s, 1 H) 8.41 (t, >8.3 Hz, 1 H) 9.05 (br. s„ 1 H) 9,65 (s, 1 H) 9.98 (d, >1.7 Hz, 1 H)1H NMR (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 7.33 - 7.38 (m, 1 H) 7.57 (d, J = 8.8 Hz, 1 H) 7.69 - 7.75 (m, 2 H) -7.79 (s, 1 H) 8.41 (t,> 8.3 Hz, 1 H) 9.05 (br. S „1 H) 9.65 (s, 1 H) 9.98 (d,> 1.7 Hz, 1 H)
SM : Temps de rétention Tr (min) = 4,62 ; [M+H]+ m/z = 345 ; [M-H]- m/z = 343MS: Retention time Tr (min) = 4.62; [M + H] + m / z = 345; [M-H] - m / z = 343
Point de fusion (Kofler):247°CMelting point (Kofler): 247 ° C
1-(2-Fluoro-4-trlfluorométhyl-phényl)-3-(3-cyano-5-f1uoro-phényl)-urée1- (2-Fluoro-4-trlfluoromethyl-phenyl) -3- (3-cyano-5-fluoro-phenyl) -urea
FF
CNCN
Une solution de 6,15 g (45,18 mmole) de 5-fluoro-3-cyanoaniline dans 90 mL de tétrahydrofurane est agitée à température ambiante sous atmosphère d’argon. 4,3 mL (36,14 mmole) de disphosgène sont ajoutés goutte à goutte puis 30 mL (135,54 mmole) de trléthylamine. Après 3 heures de reflux du mélange réactionnel, une solution de 7,10 g (39,64 mmole) de 4-amlno-3-fluoro-trlfluorométhylbenzène dans 10 mL de tétrahydrofurane est ajoutée lentement. Le reflux est maintenu 2 heures de plus. Le milieu est alors agité dans 100 mL d'eau puis extrait avec 100 mL d’acétate d'éthyle. La phase organique est lavée avec 100 mL d'une solution saturée en chlorure de sodium, séchée sur sulfate de magnésium et concentré à sec à l'évaporateur rotatif. Le résidu solide obtenu est recristallisé à chaud dans 90 mL d’acétonltrlle pour donner 10,35 g de 1-(2-fluoro-4-trlfluorométhyl-phênyl)-3-(3-cyano-A solution of 6.15 g (45.18 mmol) of 5-fluoro-3-cyanoaniline in 90 ml of tetrahydrofuran is stirred at room temperature under an argon atmosphere. 4.3 mL (36.14 mmol) of disphosgene are added dropwise then 30 mL (135.54 mmol) of trlethylamine. After 3 hours of refluxing of the reaction mixture, a solution of 7.10 g (39.64 mmol) of 4-amlno-3-fluoro-trlfluoromethylbenzene in 10 ml of tetrahydrofuran is added slowly. Reflux is maintained for 2 more hours. The medium is then stirred in 100 mL of water and then extracted with 100 mL of ethyl acetate. The organic phase is washed with 100 ml of a saturated sodium chloride solution, dried over magnesium sulphate and concentrated to dryness on a rotary evaporator. The solid residue obtained is recrystallized while hot from 90 mL of acetonitrile to give 10.35 g of 1- (2-fluoro-4-trlfluoromethyl-phenyl) -3- (3-cyano-
5-fluoro-phényl)-ufée sous forme d'un solide crème.5-fluoro-phenyl) -ufée as a cream solid.
1H NMR (400 MHz, DMSO-cfe) ôppm 7.47 (d, J=8.3 Hz, 1 H) 7.57 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.69 (s, 1 H) 7.70 - 7,75 (m, 2 H) 8.37 (t, J=8.4 Hz, 1 H) 9.17 (br. s., 1 H) 9.63 (br, s„ 1 H)1H NMR (400 MHz, DMSO-cfe) ôppm 7.47 (d, J = 8.3 Hz, 1 H) 7.57 (d, J = 8.6 Hz, 1 H) 7.69 (s, 1 H) 7.70 - 7.75 (m, 2 H) 8.37 (t, J = 8.4 Hz, 1 H) 9.17 (br. S., 1 H) 9.63 (br, s „1 H)
SM : temps de rétention Tr (min) » 1.1 ; [M+Hf : m/z 341.SM: retention time Tr (min) »1.1; [M + Hf: m / z 341.
Point de fusion (Kofler):253°CMelting point (Kofler): 253 ° C
Les produits de l'invention sont utiles comme agents Inhibiteurs d'une ou plusieurs réactions catalysées par une kinase. KDR et/ou Tle2 sont des kinases pour lesquelles les produits de l'invention seront particulièrement utiles en tant qu'inhibiteurs.The products of the invention are useful as agents which inhibit one or more reactions catalyzed by a kinase. KDR and / or Tle2 are kinases for which the products of the invention will be particularly useful as inhibitors.
Les raisons pour lesquelles ces kinases sont choisies sont données ci-après :The reasons why these kinases are chosen are given below:
KDRKDR
KDR (Kinase insert Domain Receptor) aussi appelée VEGF-R2 (Vascular Endothélial Growth Factor Receptor 2), est principalement exprimé dans les cellules endothéliales. Ce récepteur lie le facteur pro-anglogénique VEGF, et sert ainsi de médiateur à un signal transductlonnel via l'activation de son domaine kinase Intracellulaire. L'Inhibition directe de l’activité kinase de VEGF-R2 permet de réduire le phénomène d’anglogénèse en présence de VEGF exogène (Vascular Endothélial Growth Factor : facteur de croissance vasculaire endothélial) (Strawn et al., Cancer Research, 1996, vol. 56, p.3540-3545). Ce processus a été démontré notamment à l'aide de mutants VEGF-R2 (Millauer et al., Cancer Research, 1996, vol. 56, p.16151620), Le récepteur VEGF-R2 semble n'avoir aucune autre fonction chez l'adulte que/ celle liée à l'activité angiogénique du VEGF, En plus de ce rôle central dans le processus dynamique angiogénique, des résultats récents suggèrent que l’expression de VEGF contribue à la survie des cellules tumorales après des chlmio- et radiothérapies, soulignant la synergie potentielle d’inhibiteurs de KDR avec d'autres agents (Lee et al. Cancer Research, 2000, vol. 60, p.5565-5570).KDR (Kinase insert Domain Receptor) also called VEGF-R2 (Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2), is mainly expressed in endothelial cells. This receptor binds the pro-anglogenic factor VEGF, and thus mediates a transductal signal via the activation of its intracellular kinase domain. Direct inhibition of the kinase activity of VEGF-R2 makes it possible to reduce the phenomenon of anglogenesis in the presence of exogenous VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor) (Strawn et al., Cancer Research, 1996, vol. 56, pp. 3540-3545). This process has been demonstrated in particular using VEGF-R2 mutants (Millauer et al., Cancer Research, 1996, vol. 56, p.16151620). The VEGF-R2 receptor seems to have no other function in the adult than / that linked to the angiogenic activity of VEGF, In addition to this central role in the dynamic angiogenic process, recent results suggest that the expression of VEGF contributes to the survival of tumor cells after chemotherapy and radiotherapy, highlighting the potential synergy of KDR inhibitors with other agents (Lee et al. Cancer Research, 2000, vol. 60, p.5565-5570).
Tie2Tie2
Tle-2 (TEK) est un membre d’une famille de récepteurs à tyrosine kinase, spécifique des cellules endothéliales. Tle2 est le premier récepteur à activité tyrosine kinase dont on connaît à la fols l’agoniste (angiopoïétine 1 ou Ang1) qui stimule l'autophosphorylation du récepteur et la signalisation cellulaire [S. Davis et al (1996) Cell 87, 1161-1169] et l’antagoniste (angiopoïétine 2 ou Ang2) [P.C. Maisonpierre et al. (1997) Science 277, 55-60). L'angiopoïétine 1 peut avoir un effet synergique avec le VEGF dans les derniers stades de la néo-angiogénèse [AsaharaT. Cire. Res.(1998) 233-240]. Les expériences de knock-out et les manipulations transgéniques de l'expression de Tie2 ou de Ang1 conduisent à des animaux qui présentent des défauts de vascularisation [DJ. Dumont et al (1994) Genes Dev. 8, 1897-1909 et C. Suri (1996) Cell 87, 1171-1180], La liaison d’Angl à son récepteur conduit à l'autophosphorylatlon du domaine kinase de Tle2 qui est essentielle pour la néovascularlsation ainsi que pour le recrutement et l’interaction des vaisseaux avec les péricytes et les cellules musculaires lisses ; ces phénomènes contribuent à la maturation et la stabilité des vaisseaux nouvellement formés [P.C. Maisonpierre et al (1997) Science 277, 55-60]. Lin et al (1997) J. Clin. Invest. 100, 8:2072-2078 et Lin P. (1998) PNAS 95, 8829-8834, ont montré une inhibition de la croissance et de la vascularisation tumorale, ainsi qu'une diminution des métastases de poumon, lors d'infections adénovirales ou d'injections du domaine extracellulaire de Tie-2 (Tek) dans des modèles de xénogreffes de tumeur du sein et de mélanome.Tle-2 (TEK) is a member of a family of tyrosine kinase receptors specific for endothelial cells. Tle2 is the first receptor with tyrosine kinase activity known to have the agonist (angiopoietin 1 or Ang1) which stimulates the autophosphorylation of the receptor and cell signaling [S. Davis et al (1996) Cell 87, 1161-1169] and the antagonist (angiopoietin 2 or Ang2) [P.C. Maisonpierre et al. (1997) Science 277, 55-60). Angiopoietin 1 may have a synergistic effect with VEGF in the late stages of neoangiogenesis [AsaharaT. Wax. Res (1998) 233-240]. The knockout experiments and the transgenic manipulations of the expression of Tie2 or Ang1 lead to animals which present defects in vascularization [DJ. Dumont et al (1994) Genes Dev. 8, 1897-1909 and C. Suri (1996) Cell 87, 1171-1180], Angl's binding to its receptor results in the autophosphorylatlon of the Tle2 kinase domain which is essential for neovascularization as well as for recruitment and the interaction of vessels with pericytes and smooth muscle cells; these phenomena contribute to the maturation and stability of the newly formed vessels [P.C. Maisonpierre et al (1997) Science 277, 55-60]. Lin et al (1997) J. Clin. Invest. 100, 8: 2072-2078 and Lin P. (1998) PNAS 95, 8829-8834, have shown inhibition of tumor growth and vascularization, as well as a decrease in lung metastases, during adenoviral or injections of the extracellular domain of Tie-2 (Tek) in models of breast tumor and melanoma xenografts.
Pour les raisons qui suivent, les inhibiteurs de Tle2 peuvent être utilisés dans les situations où une néovascularlsation ou angiogenèse se fait de façon Inappropriée c’est-à-dire dans les cancers en général mais aussi dans des cancers particuliers tels que le sarcome de Kaposi ou l'hémoanglome Infantile, l'arthrite rhumatoïde, l'osthéoarthrlte et/ou ses douleurs associées, les maladies Inflammatoires de l’intestin telle que la recto-colite hémorragique ou la maladie de Crohn’s, les pathologies de l'œil telle que la dégénérescence maculaire liée a l’âge, les rétinopathies diabétiques, l'inflammation chronique, le psoriasis.For the reasons that follow, Tle2 inhibitors can be used in situations where neovascularization or angiogenesis occurs inappropriately, i.e. in cancers in general but also in particular cancers such as Kaposi's sarcoma. or childhood hemoangloma, rheumatoid arthritis, osteoarthritis and / or its associated pain, inflammatory bowel diseases such as ulcerative colitis or Crohn's disease, pathologies of the eye such as age-related macular degeneration, diabetic retinopathies, chronic inflammation, psoriasis.
L'angiogenèse est un processus de génération de nouveaux vaisseaux capillaires à partir des vaisseaux pré-existants. L'angiogenèse tumorale (formation deAngiogenesis is a process of generating new capillary vessels from pre-existing vessels. Tumor angiogenesis (formation of
néovaisseaux sanguins), indispensable à la croissance tumorale, est également un des facteurs essentiels de la dissémination métastatique (Oncogene. 2003 May 19;22(20):3172-9 ; Nat Med. 1995 Jan;1 (1):27-31.).new blood vessels), essential for tumor growth, is also one of the essential factors of metastatic dissemination (Oncogene. 2003 May 19; 22 (20): 3172-9; Nat Med. 1995 Jan; 1 (1): 27-31 .).
Cette néo-vascularlsatlon est due à la migration, puis à la prolifération et à la différenciation des cellules endothéliales sous l’influence de facteurs angiogéniques sécrétés par les cellules cancéreuses et les cellules du stroma (Recent Prog Horm Res. 2000;55:15-35; 35-6).This neovascularlsatlon is due to the migration, then to the proliferation and differentiation of endothelial cells under the influence of angiogenic factors secreted by cancer cells and stroma cells (Recent Prog Horm Res. 2000; 55: 15- 35; 35-6).
Le système angiopoïétine 1 / récepteur Tle2 joue un rôle prépondérant dans la maturation des vaisseaux en permettant le recrutement de cellules péri-endothéllales pour stabiliser le vaisseau (Cell. 1996 Dec 27;87(7):1161-9, Recent Prog Horm Res, 2004;59:51-71). Ainsi il a été montré que l’administration de la forme recombinante soluble du domaine extracellulaire du récepteur Tie-2 (exTek) Inhibe l'angiogenèse tumorale dans des modèles de tumeurs murines ainsi que le développement métastatique (Pengnlan Lin, Jake A. Buxton, Ann Acheson, Czeslaw Radziejewski, Peter C. Malsonplorre, George D, Yancopoulos, Keith M. Channon, Laura P. Haie, Mark W. Dewhlrst, Samuel E. George, and Kevin G. Peters, Proc Natl Acad Sel USA. 1998 Jul 21 ;95(15):8829-34 ; Cecllia Melanl, Antonella Stoppacciaro, Chiara Foronl, Federlca Fellcettl, Alessandra Caré et MarloP. Colombo, Cancer Immunol Immunother. 2004 Jul;53(7):600-8). Dans des cellules endothéliales en culture, la stimulation de Tie2 active la vole de la PI3 kinase, de p42/p44 voles Impliquées dans la prolifération et la migration cellulaire; de la synthèse de PAF (Cell Signal. 2006 Apr 14; ahead of prlnt) vole Impliquée dans l'activité pro-lnflammatoire. La stimulation de Tle2 stimule la vole de l’Akt et inhibe l’apoptose (Laura M DeBusk, Dennis E Hallahan, Pengnlan Charles Un, Exp Cell Res. 2004 Aug 1 ;298(1 ):167-77) une vole de transduction connue pour son importance dans la survie cellulaire.The angiopoietin 1 / Tle2 receptor system plays a major role in the maturation of vessels by allowing the recruitment of peri-endothelial cells to stabilize the vessel (Cell. 1996 Dec 27; 87 (7): 1161-9, Recent Prog Horm Res, 2004; 59: 51-71). Thus it has been shown that the administration of the soluble recombinant form of the extracellular domain of the Tie-2 receptor (exTek) inhibits tumor angiogenesis in murine tumor models as well as metastatic development (Pengnlan Lin, Jake A. Buxton, Ann Acheson, Czeslaw Radziejewski, Peter C. Malsonplorre, George D, Yancopoulos, Keith M. Channon, Laura P. Haie, Mark W. Dewhlrst, Samuel E. George, and Kevin G. Peters, Proc Natl Acad Sel USA. 1998 Jul 21; 95 (15): 8829-34; Cecllia Melanl, Antonella Stoppacciaro, Chiara Foronl, Federlca Fellcettl, Alessandra Caré and MarloP. Colombo, Cancer Immunol Immunother. 2004 Jul; 53 (7): 600-8). In endothelial cells in culture, stimulation of Tie2 activates the flight of PI3 kinase, p42 / p44 voles involved in cell proliferation and migration; of PAF synthesis (Cell Signal. 2006 Apr 14; ahead of prlnt) vole Involved in pro-inflammatory activity. Stimulation of Tle2 stimulates Akt flight and inhibits apoptosis (Laura M DeBusk, Dennis E Hallahan, Pengnlan Charles Un, Exp Cell Res. 2004 Aug 1; 298 (1): 167-77) a transduction flight known for its importance in cell survival.
L'ajout de Extek (récepteur soluble de Tle2) Inhibe la formation de pseudo tubules des cellules endothéliales sur Matrigel (Cecllia Melanl, Antonella Stoppacciaro, Chiara Foronl, Federlca Fellcettl, Alessandra Caré et MarloP. Colombo, Cancer immunol Immunother. 2004 Jul; 53(7): 600-8. Ces études indiquent que le système Tie2/Anglopolétine est nécessaire lors des premiers stades de la formation de bourgeons vasculaires dans les tissus adultes et qu'une fonction du récepteur Tle-2 est d'augmenter la survie des cellules endothéliales au cours de la formation des vaisseaux sanguins. De plus, l'angiopoletlne-l stimule la prolifération des cellules endothéliales lymphatiques ainsi que la lymphangiogenèse (développement des néovaisseaux lymphatiques) voie d'accès privilégiés pour le développement métastatique (Tohru„„Morlsada, Yulchl Olke, Yoshihlro Yamada, Takashi Urano, Masakl Akao, Yoshlaki Kubota, Hlromitsu Maekawa, Yoshishlge Kimura, Masako Ohmura, TakeshlThe addition of Extek (soluble Tle2 receptor) Inhibits the formation of endothelial cell pseudo tubules on Matrigel (Cecllia Melanl, Antonella Stoppacciaro, Chiara Foronl, Federlca Fellcettl, Alessandra Caré and MarloP. Colombo, Cancer immunol Immunother. 2004 Jul; 53 (7): 600-8. These studies indicate that the Tie2 / Anglopoletin system is necessary during the early stages of vascular bud formation in adult tissues and that a function of the Tle-2 receptor is to increase the survival of endothelial cells during the formation of blood vessels. In addition, angiopoletlne-l stimulates the proliferation of lymphatic endothelial cells as well as lymphangiogenesis (development of lymphatic new vessels) preferred pathway for metastatic development (Tohru „„ Morlsada , Yulchl Olke, Yoshihlro Yamada, Takashi Urano, Masakl Akao, Yoshlaki Kubota, Hlromitsu Maekawa, Yoshishlge Kimura, Masako Ohmura, Takeshl
Mlyamoto, Shiro Nozawa, Gou Young Koh, Kari Alltalo, and Toshio Suda, Blood. 2005 Jun 15; 105(12): 4649-56).Mlyamoto, Shiro Nozawa, Gou Young Koh, Kari Alltalo, and Toshio Suda, Blood. 2005 Jun 15; 105 (12): 4649-56).
Parmi les enzypes ayant un Rôle dans l'anglogénèse on peut aussi citer PDGFRp (Guzman and Laurence H. Hurley, Univ of Arizona Molecular Clonlng of the Human PDGFR-beta Promoter and Targeting the G-Quadruplex-Formlng Région to Control gene Expression ;Blomedlcal Drug Discovery, Genomics/Gentlcs, Therapeutic), FGFR1 (Somala Elbauomy Elsheikh, Andrew R Green,1 Maryou BK Lambros, Nicholas C Turner, Matthew J Grainge,3 Des Powe,1 lan O Ellls, and Jorge S Rels-Fllho, FGFR1 amplification in breast carcinomas: a chromogenlc in situ hybrldisation analysis ; FLT1 (Shlbuya M (2007). Vascular endothélial growth factor receptor-1 (VEGFR-1/FIM ): a dual regulator for anglogenesls.. Angioganesis 9 (4): 225-30; discussion 231 et VEGFR3 (Tamela, T. et al Blocking VEGFR-3 suppresses anglogenlc sprouting and vascular network formation, Nature 454, 656660 (20058).Among the enzypes having a role in anglogenesis we can also cite PDGFRp (Guzman and Laurence H. Hurley, Univ of Arizona Molecular Clonlng of the Human PDGFR-beta Promoter and Targeting the G-Quadruplex-Formlng Region to Control gene Expression; Blomedlcal Drug Discovery, Genomics / Gentlcs, Therapeutic), FGFR1 (Somala Elbauomy Elsheikh, Andrew R Green, 1 Maryou BK Lambros, Nicholas C Turner, Matthew J Grainge, 3 Des Powe, 1 lan O Ellls, and Jorge S Rels-Fllho, FGFR1 amplification in breast carcinomas: a chromogenlc in situ hybridization analysis; FLT1 (Shlbuya M (2007). Vascular endothelial growth factor receptor-1 (VEGFR-1 / FIM): a dual regulator for anglogenesls .. Angioganesis 9 (4): 225- 30; discussion 231 and VEGFR3 (Tamela, T. et al. Blocking VEGFR-3 suppresses anglogenlc sprouting and vascular network formation, Nature 454, 656660 (20058).
Les processus d'angiogenèse jouent ainsi un rôle prépondérant dans la progression de nombreuses tumeurs solides. De plus, il a été montré que la probabilité d'apparition de métastases augmente très fortement avec l'augmentation de la vascularisation de la tumeur primaire (Br J Cancer. 2002 May 20 ; 86(10): 1566-77, Le rôle potentiel d'agents pro-anglogéniques dans les leucémies et lymphomes a été également et plus récemment documenté. En effet de manière générale il a été rapporté que des clones cellulaires dans ces pathologies peuvent être soit détruits naturellement par le système Immunitaire soit basculer dans un phénotype angiogénique qui favorise leur survie puis leur prolifération. Ce changement de phénotype est Induit par une sur expression de facteurs angiogéniques notamment par les macrophages et/ou une mobilisation de ces facteurs à partir de la matrice extracellulalre (Thomas DA, Glles FJ, Cortès J, Albltar M, Kantarjian HM. , Acta Haematol, ¢2001), vol 207, ρρ106Ί90.Angiogenesis processes therefore play a major role in the progression of many solid tumors. In addition, it has been shown that the probability of the appearance of metastases increases very strongly with the increase in the vascularization of the primary tumor (Br J Cancer. 2002 May 20; 86 (10): 1566-77, The potential role of pro-anglogenic agents in leukemia and lymphoma has also been and more recently documented. In general, it has been reported that cell clones in these pathologies can either be destroyed naturally by the immune system or switch to an angiogenic phenotype. which promotes their survival and then their proliferation.This change in phenotype is induced by overexpression of angiogenic factors, in particular by macrophages and / or mobilization of these factors from the extracellular matrix (Thomas DA, Glles FJ, Cortès J, Albltar M, Kantarjian HM., Acta Haematol, ¢ 2001), vol 207, ρρ106Ί90.
Il existe une corrélation entre le processus d'angiogenèse de la moelle osseuse et les extramedullar disease dans les CML (chronic myelomonocytic leukemia), Différentes études démontrent que l'inhibition de l'angiogenèse, pourrait représenter une thérapeutique de choix dans cette pathologie (Leuk Res. 2006 Jan; 30(1): 54-9 ; Hlstol Histopathol. 2004 oct. ;19(4): 1245-60. De plus, Il est fortement suggéré que l'activation du système Tle2/angiopoletine soit Impliquée dans le développement de l'angiogenèse de la moelle osseuse chez les patients atteints de myélome multiple (Blood. 2003 Jul 15; 102(2): 638-45There is a correlation between the process of angiogenesis of the bone marrow and the extramedullar disease in CML (chronic myelomonocytic leukemia), Different studies show that the inhibition of angiogenesis could represent a therapeutic choice in this pathology (Leuk Res. 2006 Jan; 30 (1): 54-9; Hlstol Histopathol. 2004 Oct; 19 (4): 1245-60. In addition, it is strongly suggested that activation of the Tle2 / angiopoletin system is involved in the development of bone marrow angiogenesis in patients with multiple myeloma (Blood. 2003 Jul 15; 102 (2): 638-45
Détermination de l’activité des composés - Protocoles expérimentauxDetermination of the activity of compounds - Experimental protocols
1. KDR1. KDR
L'effet Inhibiteur des composés est déterminé dans un test de phosphorylation de substrat In vitro par une technique de scintillation (plaque 96 puits de type basic Flash Plate).The inhibitory effect of the compounds is determined in an In vitro substrate phosphorylation test by a scintillation technique (96-well plate of the basic Flash Plate type).
Le domaine cytoplasmique (résidus 790 à 1356) de l’enzyme KDR humaine a été cloné sous forme do fusion GST dans le vecteur d'expression baculovirus pFastBac. La protéine a été exprimée dans les cellules SF21, purifiée et activée par autophosphorylation. Le substrat est composé des résidus 658 à 850 de la PLCy exprimée et purifiée sous forme de protéine de fusion GST.The cytoplasmic domain (residues 790-1356) of the human KDR enzyme was cloned as a GST fusion into the baculovirus expression vector pFastBac. The protein was expressed in SF21 cells, purified and activated by autophosphorylation. The substrate is composed of residues 658-850 of PLCγ expressed and purified as a GST fusion protein.
L’activité kinase de KDR est mesurée dans du tampon 20 mM MOPS, 10 mM MgCI2, 10 mM MnCI2, 1 mM DTT, pH = 7.4, Les composés sont initialement dilués dans du DMSO 100% puis préparés en solution 10X dans du DMSO 30% - tampon 70%. 10 μΙ de solution 10X sont déposés puis 70 μΙ de tampon contenant 150 ng (1,6 pmole) d'enzyme KDR à 4°C. La réaction est démarrée en ajoutant 20 μΙ de solution contenant 2 pg (41 pmole) de substrat PLC% 0,5 pCI de y^PfATP] et 2 pM d'ATP froid. La plaque est agitée. Après 30 minutes d’incubation à 37°C, le tampon d'incubation est retiré et les puits sont lavés trois fols avec 300 pi de PBS. La radioactivité est mesurée dans chaque puits en utilisant un compteur de radioactivité Trilux-pWallac.The kinase activity of KDR is measured in 20 mM MOPS buffer, 10 mM MgCl2, 10 mM MnCl2, 1 mM DTT, pH = 7.4, The compounds are initially diluted in 100% DMSO and then prepared in 10X solution in DMSO 30 % - 70% buffer. 10 μΙ of 10X solution are deposited then 70 μΙ of buffer containing 150 ng (1.6 pmole) of KDR enzyme at 4 ° C. The reaction is started by adding 20 μΙ of solution containing 2 μg (41 pmole) of PLC substrate% 0.5 pCI of y ^ PfATP] and 2 μM of cold ATP. The plate is agitated. After 30 minutes of incubation at 37 ° C, the incubation buffer is removed and the wells are washed three times with 300 µl of PBS. The radioactivity is measured in each well using a Trilux-pWallac radioactivity counter.
Le bruit de fond est déterminé par la mesure de la radioactivité dans quatre puits différents contenant ΓΑΤΡ (radiomarqué et froid) et le substrat, en absence d’enzyme et de composé. L'activité contrôle est mesurée dans quatre puits différents contenant tous les réactifs mais en l’absence de composé.The background noise is determined by measuring the radioactivity in four different wells containing ΓΑΤΡ (radiolabeled and cold) and the substrate, in the absence of enzyme and compound. The control activity is measured in four different wells containing all the reagents but in the absence of compound.
L'Inhibition de l'activité KDR avec le composé de l'invention est exprimée en pourcentage d'inhibition de l’activité contrôle déterminée en l'absence de composé.Inhibition of KDR activity with the compound of the invention is expressed as a percentage inhibition of the control activity determined in the absence of compound.
2.2.
Tle2Tle2
L'effet inhibiteur des composés est déterminé dans un test de phosphorylation de substrat In vitro par une technique de scintillation (plaque 96 puits de type basic Flash Plate).The inhibitory effect of the compounds is determined in an In vitro substrate phosphorylation test by a scintillation technique (96-well plate of the basic Flash Plate type).
La séquence codante de Tle2 humain correspondant aux acides aminés du domaine Intracellulaire 774-1124 a été Introduite dans un vecteur d'expression baculovirus pFastBacGT sous forme de protéine de fusion GST. GST-Tie2 a été purifiée et activée par autophosphorylation. Le substrat est composé des résidus 658 àThe coding sequence of human Tle2 corresponding to the amino acids of the intracellular domain 774-1124 was introduced into a baculovirus expression vector pFastBacGT in the form of a GST fusion protein. GST-Tie2 was purified and activated by autophosphorylation. The substrate is composed of residues 658 to
850 de la PLCy exprimée et purifiée sous forme de protéine de fusion GST.850 of PLCy expressed and purified as a GST fusion protein.
L’activité kinase de Tle2 est mesurée dans un tampon MOPS 20mM pH 7.4, contenant 10 mM MgCh, 10 mM MnCI2, 1 mM DTT. Les composés sont Initialement dilués dans du DMSO 100% puis préparés en solution 10X dans du DMSO 30%, tampon 70%. 10 yl de solution 10X sont déposés puis 70 yl de tampon contenant 100 ng (1,5 pmole) d'enzyme Tle2 à 4qC. La réaction est démarrée en ajoutant 20 yl de solution contenant 2 yg (41 pmole) de substrat PLCy, 0,5 yCI de γ^ΡΙΑΤΡ] et 2 yM d’ATP froid. La plaque est agitée. Après 30 minutes d’incubation à 37qC, le tampon d'incubation est retiré et les puits sont lavés trois fols avec 300 yl de PBS. La radioactivité est mesurée dans chaque puits en utilisant un compteur de radioactivité TrIlux-pWallac.The kinase activity of Tle2 is measured in a 20 mM MOPS buffer, pH 7.4, containing 10 mM MgCh, 10 mM MnCl 2 , 1 mM DTT. The compounds are initially diluted in 100% DMSO and then prepared in 10X solution in 30% DMSO, 70% buffer. 10 μl of 10X solution are deposited then 70 μl of buffer containing 100 ng (1.5 pmol) of Tle2 enzyme at 4 q C. The reaction is started by adding 20 μl of solution containing 2 μg (41 pmol) of PLCy substrate , 0.5 yCl of γ ^ ΡΙΑΤΡ] and 2 yM of cold ATP. The plate is agitated. After 30 minutes of incubation at 37 C q, the incubation buffer is removed and the wells are washed three fools with 300 yl of PBS. The radioactivity is measured in each well using a TrIlux-pWallac radioactivity counter.
Le bruit de fond est déterminé par la mesure de la radioactivité dans quatre puits différents contenant ΓΑΤΡ (radiomarqué et froid) et le substrat, en absence d'enzyme et de composé. L'activité contrôle est mesurée dans quatre puits différents contenant tous les réactifs mais en l'absence de composé.The background noise is determined by measuring the radioactivity in four different wells containing ΓΑΤΡ (radiolabeled and cold) and the substrate, in the absence of enzyme and compound. The control activity is measured in four different wells containing all the reagents but in the absence of compound.
L'inhibition de l'activité Tie2 est calculée et exprimée en pourcentage d'inhibition par rapport à l'activité contrôle déterminée en l’absence de composé.The inhibition of Tie2 activity is calculated and expressed as a percentage of inhibition relative to the control activity determined in the absence of compound.
3,Screenlng de molécules en mesurant par marquage radioactif l’activité de phosphorylation de kinase FLTI an présence de substat PFCy.3, Screening of molecules by measuring by radioactive labeling the phosphorylation activity of FLTI kinase in the presence of PFCy substat.
L’activité kinase de FLT1 est mesurée de la même manière que l'Inhlbitlon de Tie2 avec un mélange réactionnel composé de 70 yL de tampon kinase contenant 13 nM d’enzyme FLT1 par puitsThe kinase activity of FLT1 is measured in the same way as the Inhlbitlon of Tie2 with a reaction mixture composed of 70 μL of kinase buffer containing 13 nM of FLT1 enzyme per well
L’Inhlbitlon de l'activité FLT1 est calculée et exprimée en pourcentage d’inhibition par rapport à l’activité contrôle déterminée en l’absence de composé.The inhlbitlon of FLT1 activity is calculated and expressed as a percentage inhibition relative to the control activity determined in the absence of compound.
Le pourcentage d'Inhibltlon correspondant à chaque concentration de molécules est calculé ainsi :The percentage of Inhibltlon corresponding to each concentration of molecules is calculated as follows:
% inhibition = (moyenne des CRM des puits traités - moyenne des CPM des puits contrôles) / (CPM des puits non traités- moyenne des CPM des contrôles) x 100% inhibition = (average of CRMs of treated wells - average of CPMs of control wells) / (CPM of untreated wells - average of CPMs of controls) x 100
4. Screening de molécules mesurant par marquage radioactif l'activité do phosphorylation de kinase PDGFR en présence du substrat PLCy4. Screening of molecules measuring by radioactive labeling the phosphorylation activity of PDGFR kinase in the presence of the substrate PLCy
Le test est réalisé de façon parallèle à celui réalisé avec l'enzyme FLT1 en utilisant ô la place de 13 nM de Flt1 ; 16 nM d'enzyme PDGFR et dans les plaques 96 puits on mélange 16 pl d'Enzyme GST-PDGFR à 4 mg/ml (pour une pureté de 80%) lot VLT802The test is carried out in parallel with that carried out with the enzyme FLT1 using en in place of 13 nM of Flt1; 16 nM of PDGFR enzyme and in the 96-well plates, 16 μl of GST-PDGFR enzyme at 4 mg / ml (for a purity of 80%) are mixed, batch VLT802
5. Screening de molécules mesurant par marquage radioactif l’activité de phosphorylation de kinase FGFR en présence du substrat PLCy5. Screening of molecules measuring by radioactive labeling the phosphorylation activity of FGFR kinase in the presence of the PLCy substrate
Le test est réalisé de façon parallèle à celui réalisé avec l'enzyme FLT1 en utilisant à la place de 13 nM de Flt1 ; 27 nM d’enzyme FGFR et dans les plaques 96 puits on mélange 18μΙ d'Enzyme GST- FGFR à 1,1mg/ml (pour une pureté de 100%) : (Lot JCE3666)The test is carried out in a manner parallel to that carried out with the enzyme FLT1 using instead of 13 nM of Flt1; 27 nM of FGFR enzyme and in the 96-well plates, 18μΙ of GST-FGFR enzyme are mixed at 1.1 mg / ml (for a purity of 100%): (Batch JCE3666)
Résultats :Results:
Les composés des exemples de l'invention présente une concentration Inhibant 50 % de l'activité de la kinase qui est généralement comprise entre 0.1 nM et 2 μΜ sur KDR et/ou TIE2, de préférence comprise entre 0.1 nM et 500 nMt et plus préférentiellement comprise entre 0.1 nM et 50 nM. Les valeurs du tableau 1, cldessous, sont données à titre d'illustration.The compounds of the examples of the invention have a concentration inhibiting 50% of the activity of the kinase which is generally between 0.1 nM and 2 μΜ on KDR and / or TIE2, preferably between 0.1 nM and 500 nM t and more preferably between 0.1 nM and 50 nM. The values in Table 1, below, are given by way of illustration.
[0023] Les composés selon l'invention ont fait l'objet d'essais pharmacologiques permettant de déterminer leur clairance hépatique.The compounds according to the invention have been the subject of pharmacological tests making it possible to determine their hepatic clearance.
Évaluation de la clairance Intrinsèque des composés en utilisant des hépatocytes humains : protocole expérimental.Assessment of Intrinsic Clearance of Compounds Using Human Hepatocytes: Experimental Protocol.
NB : Le test In vitro décrit cl-dessous sur des cellules de foie humain est utilisé pour prédire un paramètre pharmacocinétique Important : la métabollsation par le foie pour un composé donné quand II est administré à l'homme.NB: The In vitro test described below on human liver cells is used to predict an important pharmacokinetic parameter: metabollsation by the liver for a given compound when it is administered to humans.
Condition de culture :Culture condition:
Les Incubations des préparations cryopréservées d'hépatocytes humains ( d'IVT : IVT-TLN-180608 provenant de In Vitro Technologies, Inc, Baltimore, Maryland, USA et des préparations fraîches d' hépatocytes humains (de Biopredlc : HEP200239) ont été faites dans des plaques comportant 48 puits enduits de collagène.Incubations of cryopreserved preparations of human hepatocytes (from IVT: IVT-TLN-180608 from In Vitro Technologies, Inc, Baltimore, Maryland, USA and fresh preparations of human hepatocytes (from Biopredlc: HEP200239) were made in plates comprising 48 wells coated with collagen.
Conditions expérimentales :Experimental conditions:
Les cinétiques ont été démarrée par l'addition, dans le milieu de culture, des composés à une concentration finale de 5μΜ, en l'absence ou en la présence de Kétoconazole 10μΜ (inhibiteur de CYP3A4Le volume d'incubation est de 100 μί, la durée d'incubation : 0 - 24 heures (points cinétiques habituels : 0-0,5 -1 - 2 - 4 - 6 - 8 - 24 heures).The kinetics were started by the addition, in the culture medium, of the compounds at a final concentration of 5μΜ, in the absence or in the presence of Ketoconazole 10μΜ (inhibitor of CYP3A4 The incubation volume is 100 μί, the incubation time: 0 - 24 hours (usual kinetic points: 0-0.5 -1 - 2 - 4 - 6 - 8 - 24 hours).
Les cinétiques ont été arrêtées par l’addition de d’acétonltrile/eau, avec la cortlcostérone, comme standard interne. Les cellules ont été détachées puis lysées. Les milieux Intracellulaires et ©xtracellulaires ont été réunis et congelés (- 20°C) afin d’être stockés jusqu'à l'analyse LC-MS/MS.The kinetics were stopped by the addition of acetonltrile / water, with cortlcosterone, as internal standard. The cells were detached and then lysed. Intracellular and xtracellular media were pooled and frozen (-20 ° C) to be stored until LC-MS / MS analysis.
Méthode analytique de LC-MS/MS :LC-MS / MS analytical method:
Les milieux Intracellulaires et extracellulaires réunis ont été décongelés, soumis aux ultrasons, agités par vortex et centrifugés à 3000g pendant 20 minutes. Les surnageants ont été Injectés et analysés par LC-MS/MS,The combined intracellular and extracellular media were thawed, sonicated, vortexed, and centrifuged at 3000g for 20 minutes. The supernatants were injected and analyzed by LC-MS / MS,
Traitement des données et « classement » • La vitesse In vitro initiale maximale a été calculée pour les métabolites spécifiques des cytochromes P450 et exprimée en nmole/heure/million de cellules.Data processing and “grading” • The maximum initial In vitro rate was calculated for specific metabolites of cytochrome P450 and expressed in nmol / hour / million cells.
V = [concentration à T (n) - concentration à T (n-1 )] /[T (n) - T (n-1 )]V = [concentration at T (n) - concentration at T (n-1)] / [T (n) - T (n-1)]
La clairance Intrinsèque a été déterminée et exprimée en mL/heure/mllllon de celluleIntrinsic clearance was determined and expressed in mL / hour / mL of cell
Clmt = dose/AUC0-24hClmt = dose / AUC0-24h
Dose = quantité à T (0) (nmoles/milllon de cellules)Dose = amount at T (0) (nmoles / milllon of cells)
AUC0-24h : calculé par WlnNonlin, avec une analyse non compartimentée, modélisant une injection Intraveineuse de type bolusAUC0-24h: calculated by WlnNonlin, with a non-compartmentalized analysis, modeling an intravenous injection of bolus type
Le classement de la clairance Intrinsèque a été défini comme suit :The classification of Intrinsic clearance was defined as follows:
Clin( < 0.040 mL.hr'1.10’® cellule : clairance intrinsèque IntermédiaireCli n ( <0.040 mL.hr ' 1 .10'® cell: intrinsic clearance Intermediate
0.040< Clmi< 0.120 mL.hr'1.10'e cellule ; clairance Intrinsèque faible0.040 <Clmi <0.120 mL.hr ' 1 .10' th cell; low intrinsic clearance
Clmi >0.040 mL.hr’1.1 θ’6 cellule : clairance intrinsèque élevéeClmi> 0.040 mL.hr ' 1 .1 θ' 6 cells: high intrinsic clearance
Information démographique sur le donneur:Donor demographic information:
Préparations d'hépatocytes humains cryopréservés :Preparations of cryopreserved human hepatocytes:
D'IVT : · IVT, groupe TLN : Homme, Caucasien, 25 ansIVT: IVT, TLN group: Male, Caucasian, 25 years old
Préparations d’hépatocyte humain frais:Fresh human hepatocyte preparations:
De Blopredlc : · HEP200239 : Femme, Inconnu, 58 ansFrom Blopredlc: HEP200239: Female, Unknown, 58 years old
Sur ce test, la valeur de clairance Intrinsèque du composé décrit à l'exemplel est de 0.057 mL/heure/mllllon de cellule (valeur classée Intermédiaire avec une faible variabilité Inter-Individuelle).On this test, the intrinsic clearance value of the compound described in the example is 0.057 ml / hour / mlllon of cell (value classified as Intermediate with low inter-individual variability).
La valeur de clairance Intrinsèque du composé décrit à I’exemple2 est de 0.055 mUheure/mllIIon de cellule (valeur classée Intermédiaire avec une faible variabilité Inter-individuelle).The intrinsic clearance value of the compound described in Example 2 is 0.055 mUhour / mllIIon of cell (value classified as Intermediate with low inter-individual variability).
[0024] D' autres essais consistant à mesurer l’activité In vivo des composés de l'invention sur des tumeurs du colon ont été effectués.[0024] Other tests consisting in measuring the in vivo activity of the compounds of the invention on colon tumors were carried out.
[0025] Cette activité sur les tumeurs du colon des composés de l’invention a été étudiée sur le mélanome B16. En comparaison le produit de l'exemple 19 de la demande WO08065282 a été testé.[0025] This activity on colon tumors of the compounds of the invention was studied on B16 melanoma. In comparison, the product of example 19 of application WO08065282 was tested.
L'efficacité d’un produit peut être déterminée In vivo par différents critère on peut la déterminer par le pourcentage d’inhibition tumorale %T/C qui représente le rapport entre le poids moyen des tumeurs du groupe traité (T) et le poids moyen des tumeurs du groupe témoin (C) au jour 12 ou 13 du traitement. On considère un produit actif quand le rapport T/C est Inférieur à 42% et un produit ayant une haute activité antitumorale quand le T/C est inférieur à 10%. (Corbett TH and coll., Cancer Research, 42, 1707-1715 (1982).The efficacy of a product can be determined In vivo by different criteria, it can be determined by the percentage of tumor inhibition% T / C which represents the ratio between the average weight of tumors in the treated group (T) and the average weight tumors in the control group (C) on day 12 or 13 of treatment. We consider an active product when the T / C ratio is less than 42% and a product having a high antitumor activity when the T / C is less than 10%. (Corbett TH et al., Cancer Research, 42, 1707-1715 (1982).
Pour mettre en évidence l’efficacité d'un composé, on peut aussi déterminer le Iog10 cellules tuées qui est déterminé selon la formule suivante :To demonstrate the effectiveness of a compound, we can also determine the Iog10 killed cells which is determined according to the following formula:
log-j q des cellules tuées » T-C (jours)/3.32 X T(j dans laquelle T-C représente le délai de croissance des cellules qui est le temps moyen, en jours, pour que les tumeurs du groupe traité (T) et les tumeurs du groupe témoin (C) aient atteint une valeur prédéterminée (750 mg par exemple) et Tj représente le temps, en jours, nécessaire au doublement du volume de la tumeur chez les animaux témoins [T.H, CORBETT et coll., Cancer, 4Q, 2660.2680 (1977) ; F.M, SCHABEL et coll., Cancer Drug Development, Part B, Methods In Cancer Research, 17, 3-51, New-York, Academie Press Inc. (1979)] Un produit est considéré comme actif si log-ιο des cellules tuées est supérieur ou égal à 0,7. Un produit est considéré comme très actif si le log-jθ des cellules tuées est supérieur à 2,8.log-d q of killed cells »TC (days) /3.32 XT (d in which TC represents the delay in cell growth which is the average time, in days, for tumors in the treated group (T) and tumors in the control group (C) have reached a predetermined value (750 mg for example) and Tj represents the time, in days, necessary for the doubling of the volume of the tumor in the control animals [TH, CORBETT et al., Cancer, 4Q, 2660.2680 (1977); FM, SCHABEL et al., Cancer Drug Development, Part B, Methods In Cancer Research, 17, 3-51, New York, Academie Press Inc. (1979)] A product is considered to be active if log- ιο of killed cells is greater than or equal to 0.7 A product is considered to be very active if the log-jθ of killed cells is greater than 2.8.
L'efficacité des composés sur les tumeurs solides peut être déterminée expérimentalement de la manière suivante:The efficacy of the compounds on solid tumors can be determined experimentally as follows:
Les animaux soumis à l'expérience, généralement des souris femelles C57BL/6, sont greffés bilatéralement par voie sous-cutanée avec 30 à 60 mg d'un fragment de tumeur humaine B 16 (Référence de la tumeur.) au jour 0. Les animaux portant les tumeurs sont randomisés avant d'être soumis aux divers traitements et contrôles. Dans le cas de traitement de tumeurs de la présente Invention, on a Initié le traitement à un stade précoce, 3 à 4 jours après l'implantation. Les animaux qui ont subi le traitement avec les composés présentaient un poids d'environ 20 g,. Des animaux porteurs de tumeurs ont également été soumis aux mêmes traitements avec l’excipient seul afin de pouvoir dissocier l'effet toxique de l'excipient de l'effet propre de la chimiothérapie sur la tumeur. Les administrations des composés ont été faites par voie orale aux doses indiquées dans les tableaux et avec les excipients Indiqués dans les tableaux selon une double administration quotidienne. Ces administrations ont été réalisées pendant 8 à 11 jours selon les études, après l'implantation de la tumeur.The animals subjected to the experiment, generally C57BL / 6 female mice, are grafted bilaterally by the subcutaneous route with 30 to 60 mg of a fragment of human tumor B 16 (Tumor reference) on day 0. animals bearing the tumors are randomized before being subjected to the various treatments and controls. In the case of treatment of tumors of the present invention, treatment was initiated at an early stage, 3-4 days after implantation. The animals which underwent the treatment with the compounds had a weight of about 20 g. Tumor-bearing animals were also subjected to the same treatments with the excipient alone in order to be able to dissociate the toxic effect of the excipient from the specific effect of chemotherapy on the tumor. The administrations of the compounds were made orally at the doses indicated in the tables and with the excipients indicated in the tables according to a double daily administration. These administrations were carried out for 8 to 11 days depending on the studies, after implantation of the tumor.
Les tumeurs sont mesurées deux ou trois fols par semaine jusqu'à ce que la tumeur atteigne environ 2 g ou Jusqu’à la mort de l’animal si celle-ci survient avant que la tumeur atteigne 2 g. Les animaux sont autopsiés lors du sacrifice.Tumors are measured two or three times per week until the tumor reaches about 2 g or Until the animal's death if this occurs before the tumor reaches 2 g. The animals are autopsied during sacrifice.
L'activité antitumorale est déterminée en fonction des différents paramètres enregistrés.The antitumor activity is determined according to the various parameters recorded.
A titre d'exemples, sont donnés, dans les tableaux suivants les résultats obtenus avec les composés de l'invention utilisés à leur dose optimale.By way of examples, the results obtained with the compounds of the invention used at their optimum dose are given in the following tables.
[0027] Ainsi l’invention a pour objet des médicaments qui comprennent un composé de formule (I), ou un sel d'addition de ce dernier à un acide pharmaceutiquement acceptable.[0027] Thus the subject of the invention is medicaments which comprise a compound of formula (I), or an addition salt of the latter with a pharmaceutically acceptable acid.
[0028] Selon un autre de ses aspects, l'invention concerne les composés répondant à la formule (I) pour leur application comme médicament dans le traitement du cancer. Les composés selon l'invention peuvent être utilisés pour la préparation de médicaments, en particulier de médicaments Inhibiteurs de l'angiogénèse.According to another of its aspects, the invention relates to the compounds corresponding to formula (I) for their application as a medicament in the treatment of cancer. The compounds according to the invention can be used for the preparation of medicaments, in particular of angiogenesis inhibitor medicaments.
[0029] Ces médicaments trouvent leur emploi en thérapeutique, notamment dans le traitement de tumeurs cancéreuses, notamment de tumeurs solides.These medicaments find their use in therapy, in particular in the treatment of cancerous tumors, in particular of solid tumors.
[0030] Selon un autre de ses aspects, la présente Invention concerne des compositions pharmaceutiques comprenant, en tant que principe actif, un composé selon l'invention. Ces compositions pharmaceutiques contiennent une dose efficace d'au moins un composé selon l'invention, ou un sel pharmaceutlquement acceptable, dudit composé, ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutlquement acceptable.[0030] According to another of its aspects, the present invention relates to pharmaceutical compositions comprising, as active principle, a compound according to the invention. These pharmaceutical compositions contain an effective dose of at least one compound according to the invention, or a pharmaceutically acceptable salt, of said compound, as well as at least one pharmaceutically acceptable excipient.
Lesdlts excipients sont choisis selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaité, parmi les excipients habituels qui sont connus de l'Homme du métier.The excipients are chosen, depending on the pharmaceutical form and the desired mode of administration, from the usual excipients which are known to those skilled in the art.
[0031] Dans les compositions pharmaceutiques de la présente Invention pour l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intra-veineuse, topique, locale, Intratrachéale, Intranasale, transdermique ou rectale, le principe actif de formule (l) cl-dessus, ou son sel, peut être administré sous forme unitaire d'administration, en mélange avec des excipients pharmaceutiques classiques, aux animaux et aux êtres humains pour le traitement des troubles ou des maladies cldessus.In the pharmaceutical compositions of the present invention for oral, sublingual, subcutaneous, intramuscular, intravenous, topical, local, Intratracheal, Intranasal, transdermal or rectal administration, the active principle of formula (l) cl Above, or its salt, may be administered in unit dosage form, in admixture with conventional pharmaceutical excipients, to animals and humans for the treatment of the above disorders or diseases.
[0032] Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par vole orale telles que les comprimés, les gélules molles ou dures, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale, buccale, les formes d'administration transdermique, sous-cutanée, Intramusculaire ou intraveineuse.[0032] Appropriate unit administration forms include oral forms such as tablets, soft or hard capsules, powders, granules and oral solutions or suspensions, sublingual and buccal administration forms, transdermal, subcutaneous, intramuscular or intravenous administration.
[0033] A titre d'exemple, une forme unitaire d’administration d'un composé selon l'invention sous forme de comprimé peut comprendre les composants suivants \By way of example, a unit form of administration of a compound according to the invention in tablet form may comprise the following components \
Composé selon l'invention MannltolCompound according to the invention Mannltol
Croscaramellose sodlque Amidon de maïsCroscaramellose sodium Corn starch
Hydroxypropyl-méthylcelluloseHydroxypropyl-methylcellulose
Stéarate de magnésiumMagnesium stearate
50,0 mg50.0 mg
223,75 mg223.75 mg
6,0 mg6.0 mg
15,0 mg15.0 mg
2,25 mg2.25 mg
3,0 mg [0034] Par voie orale, la dose de principe actif administrée par Jour peut atteindre 1200 mg/kg, en une ou plusieurs prises.3.0 mg Orally, the dose of active principle administered per day can reach 1200 mg / kg, in one or more doses.
[0035] Il peut y avoir des cas particuliers où des dosages plus élevés ou plus faibles sont appropriés : de tels dosages ne sortent pas du cadre de l'invention. Selon la pratique habituelle, le dosage approprié à chaque patient est déterminé par le médecin selon le mode d'administration, le poids et la réponse dudit patient.There may be particular cases where higher or lower dosages are appropriate: such dosages are not outside the scope of the invention. According to usual practice, the dosage appropriate for each patient is determined by the doctor according to the mode of administration, the weight and the response of said patient.
[0036] La présente Invention, selon un autre de ses aspects, concerne également une méthode de traitement des pathologies ci-dessus Indiquées qui comprend l’administration, à un patient, d’une dose efficace d'un composé selon l’invention, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptable. zfThe present invention, according to another of its aspects, also relates to a method of treatment of the pathologies indicated above which comprises the administration, to a patient, of an effective dose of a compound according to the invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. zf
EVALUATION DE L’EXEMPLE 1 CONTRE LE MELANOME MURIN PRECOCE B16EVALUATION OF EXAMPLE 1 AGAINST EARLY MURINE MELANOMA B16
EVALUATION DE L’EXEMPLE 2 CONTRE LE MELANOME MURIN PRECOCE B16EVALUATION OF EXAMPLE 2 AGAINST EARLY MURINE MELANOMA B16
8. E £ σ> g8. E £ σ> g
Q COQ CO
Formulation : Exemple 2 = 20% labrasolf5% solutol,75% glucose,5% en eau. Abréviations utilisées : BWC= body weight change, HNTD= highest nontoxic dose, HDT = highest dose tested.Formulation: Example 2 = 20% labrasol f 5% solutol, 75% glucose, 5% water. Abbreviations used: BWC = body weight change, HNTD = highest nontoxic dose, HDT = highest dose tested.
¥ e o ’43 35 a¥ e o ’43 35 a
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Propriété Industrielle p. 500 YAOUNDE, Cameroun él. 22 21 32 89 - Fax: 22 20 64 14 -mari cabirtelcazenaveQiocnet.crrIndustrial Property p. 500 YAOUNDE, Cameroon el. 22 21 32 89 - Fax: 22 20 64 14 -mari cabirtelcazenaveQiocnet.crr
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