NO881204L - MITOSANDERIVATER. - Google Patents

MITOSANDERIVATER.

Info

Publication number
NO881204L
NO881204L NO881204A NO881204A NO881204L NO 881204 L NO881204 L NO 881204L NO 881204 A NO881204 A NO 881204A NO 881204 A NO881204 A NO 881204A NO 881204 L NO881204 L NO 881204L
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
mitomycin
compound
solution
methanol
amino
Prior art date
Application number
NO881204A
Other languages
Norwegian (no)
Other versions
NO881204D0 (en
Inventor
Dolatrai Mohanlal Vyas
Takushi Kaneko
Terrence William Doyle
Original Assignee
Bristol Myers Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US06/492,903 external-priority patent/US4487769A/en
Publication of NO881204L publication Critical patent/NO881204L/en
Application filed by Bristol Myers Co filed Critical Bristol Myers Co
Priority to NO881204A priority Critical patent/NO881204D0/en
Publication of NO881204D0 publication Critical patent/NO881204D0/en

Links

Landscapes

  • Centrifugal Separators (AREA)
  • Farming Of Fish And Shellfish (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse angår mitomycin-analoger som inneholder en eller flere amidinogrupper. Disse forbindelser er mitomycin C-derivater, der enten 7-aminogruppen eller karbamido-nitrogenatomet eller begge to, er inne-bygget i en amidino-substituent. Disse forbindelser er aktive antitumormidler i eksperimentelle animalske tumorer. The present invention relates to mitomycin analogues which contain one or more amidino groups. These compounds are mitomycin C derivatives, in which either the 7-amino group or the carbamido nitrogen atom or both are built into an amidino substituent. These compounds are active antitumor agents in experimental animal tumors.

Nomenklatur: Det systematiske navn for mitomycin C er ifølge "Chemical Abstracts": [laR-(laa,8 B,8aa,8ba) ]-6-amino-8-[ ((aminokarbonyl)oksy)--metyl]-1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8a-metoksy-5-metyl-azirino[2',2',3,4]-pyrrolo[l,2-a]-indol-4,7-dion, i henhold til hvilket azirinopyrroloindol-ringsystemet nummereres som følger: Nomenclature: The systematic name for mitomycin C is according to "Chemical Abstracts": [laR-(laa,8 B,8aa,8ba) ]-6-amino-8-[ ((aminocarbonyl)oxy)--methyl]-1, 1a,2,8,8a,8b-hexahydro-8a-methoxy-5-methyl-azirino[2',2',3,4]-pyrrolo[1,2-a]-indole-4,7-dione, according to which the azirinopyrroloindole ring system is numbered as follows:

Et trivielt nomenklatursystem som har funnet utstrakt anvendelse innenfor mitomycin-litteraturen, identifiserer det foregående ringsystem inklusive flere av de karakteristiske substituenter for mitomycinene som mitosan. A trivial nomenclature system that has found widespread use within the mitomycin literature identifies the preceding ring system including several of the characteristic substituents of the mitomycins as mitosan.

Selv om dette system er bekvemt og hensiktsmessig for en Although this system is convenient and appropriate for one

rekke enkle derivater slik som de som bærer N-substituenter for azirino-ringnitrogenatomet eller i 7- eller 9a-stillingene, lider det av visse tvetydigheter og mangler for generell bruk. Med henblikk på forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, hvorav enkelte har substituenter både på azirino-ringnitrogenatomet og på sidekjede-karbamoylnitrogen-a-tomet, ;:er .det - ingen konvens jonell nummerering som kan atskille disse stillinger. I den foreliggende beskrivelse er det derfor valgt å henvise til azirino-nitrogenatomet som N"*"a og karbamoyl-nitrogenatomet som N"^ ved bruk av mitosan-nomenklatursystemet. Med henblikk på de omhandlede forbindelsers stereokjemiske konfigurasjon er det hensikten, når de identifiseres ved grunnavnet "mitosan" eller ved en strukturformel, å identifisere den som den kjemiske konfigurasjon av mitomycin C. series of simple derivatives such as those bearing N-substituents at the azirino ring nitrogen atom or at the 7- or 9a-positions, it suffers from certain ambiguities and shortcomings for general use. With regard to the compounds according to the present invention, some of which have substituents both on the azirino ring nitrogen atom and on the side chain carbamoyl nitrogen atom, there is no conventional numbering that can separate these positions. In the present description, it has therefore been chosen to refer to the azirino nitrogen atom as N"*"a and the carbamoyl nitrogen atom as N"^ using the mitosan nomenclature system. With regard to the stereochemical configuration of the compounds in question, it is intended that, when they are identified by the basic name "mitosan" or by a structural formula, to identify it as the chemical configuration of mitomycin C.

Mitomycin C er et antibiotikum som fremstilles ved fermentering og som allerede er kommersielt tilgjengelig med god-kjennelse "av "Food and Drug Administration" i terapien av disseminerende adenokarsinomer i mage eller pankreas i etter-prøvede kombinasjoner med andre godkjente kjemoterapeutiske midler og til palliativ behandling, når andre muligheter har feilet ("Mutamycin", Bristol Laboratories, Syracuse, Mitomycin C is an antibiotic that is produced by fermentation and is already commercially available with the approval of the "Food and Drug Administration" in the therapy of disseminating adenocarcinomas of the stomach or pancreas in post-tested combinations with other approved chemotherapeutic agents and for palliative treatment , when other options have failed ("Mutamycin", Bristol Laboratories, Syracuse,

New York, 13201, Physicians 1 Desk Reference 3 5'.'-:utg. , : 19 81,New York, 13201, Physicians 1 Desk Reference 3 5'.'-:ed. , : 19 81,

s. 717 og 718). Mitomycin C og fremstilling derav ved fermentering er gjenstand for US-PS 3.660.578 av 2. mai 1982 og med prioritet fra tidligere søknader, derunder fra Japan 6. april 1957. pp. 717 and 718). Mitomycin C and its preparation by fermentation are the subject of US-PS 3,660,578 of May 2, 1982 and with priority from earlier applications, including from Japan on April 6, 1957.

Strukturene av mitomycinene A, B, C og av porfiromycin ble først publisert..av~J.S. Webb et al. fra Lederle Laboratories Division American Cyanamid Company, "J. Amer. Chem. Soc.", The structures of the mitomycins A, B, C and of porfiromycin were first published..by~J.S. Webb et al. of Lederle Laboratories Division American Cyanamid Company, "J. Amer. Chem. Soc.",

84, 3185-3187 (1962). En av de kjemiske transformasjoner som ble anvendt i dette strukturstudium for å relatere mitomycin A og mitomycin C, var omdannelsen av førstnevnt 7 — Sbt — dimetoksymitosan ved omsetning med ammoniakk til sistnevnte 84, 3185-3187 (1962). One of the chemical transformations used in this structural study to relate mitomycin A and mitomycin C was the transformation of the former 7 — Sbt — dimethoxymitosane by reaction with ammonia into the latter

7-amino-9a-metoksymitosan. Utbytting av 7-metoksygruppen i mitomycin A har vist seg å være en reaksjon av betydelig interesse ved fremstilling av antitumoraktive derivater av mitomycin C. De følgende artikler og patentskrifter omhand-ler alle omdanning av mitomycin A til et 7-substituert amino-mitomycin C-derivat med antitumoraktivitet. Formålet med dette forskningsarbeidet var å fremstille derivater som var meget aktive og spesielt som var mindre toksiske enn mitomycin C. 7-amino-9α-methoxymitosane. Exploitation of the 7-methoxy group in mitomycin A has proven to be a reaction of considerable interest in the production of antitumor active derivatives of mitomycin C. The following articles and patents all deal with the conversion of mitomycin A to a 7-substituted amino-mitomycin C- derivative with antitumor activity. The purpose of this research work was to produce derivatives that were very active and, in particular, that were less toxic than mitomycin C.

Matsui et al., "The Journal of Antibiotics", XXI, 189-198 (1968). Matsui et al., "The Journal of Antibiotics", XXI, 189-198 (1968).

Kinoshita et al., "J. Med. Chem.", 14, 103-109 (1971). Iyengar et al., "J. Med. Chem.", 24, 975-981 (1981). Iyengar, Sami, Remers og Bradner, Abstracts of Papers Annual Meeting of the American Chemical Society, Kinoshita et al., "J. Med. Chem.", 14, 103-109 (1971). Iyengar et al., J. Med. Chem., 24, 975-981 (1981). Iyengar, Sami, Remers and Bradner, Abstracts of Papers Annual Meeting of the American Chemical Society,

Las Vegas, Nevada, mars 1982, sammendrag nr. MEDI 72.Las Vegas, Nevada, March 1982, Abstract No. MEDI 72.

De følgende patenter viser fremstilling av 7-substituerte aminomitosan-derivater ved omsetning av mitomycin A, mitomycin B eller et N^<a->substituert derivat derav med et primært eller sekundært amin: Cosulich et al., US-PS 3.332.944 av 25. juli 1967 ; The following patents show the preparation of 7-substituted aminomitosane derivatives by reacting mitomycin A, mitomycin B or an N^<a->substituted derivative thereof with a primary or secondary amine: Cosulich et al., US-PS 3,332,944 of 25 July 1967;

Matsui et al., US-PS 3.420.846 av 7. januar 1969; Matsui et al., US-PS 3,420,846 of January 7, 1969;

Matsui et al., US-PS 3.450.705 av 17. juni 1969; Matsui et al., US-PS 3,450,705 of June 17, 1969;

Matsui et al., US-PS 3.514.452 av 26. mai 1970; Matsui et al., US-PS 3,514,452 of May 26, 1970;

Nakano et al., US-PS 4.231.926 av 4. november 1980; Nakano et al., US-PS 4,231,926 of November 4, 1980;

Remers, US-PS 4.268.676 av 19. mai 1981.Remers, US-PS 4,268,676 of May 19, 1981.

Mitomycin C-derivater med en substituert aminosubstituent i 7-stilling er også fremstilt ved direkte biosyntese, dvs. Mitomycin C derivatives with a substituted amino substituent in the 7-position have also been prepared by direct biosynthesis, i.e.

ved å tilsette en rekke primære aminer til fermenterings-substrater og utføre den konvensjonelle mitomycinfermentering . by adding a variety of primary amines to fermentation substrates and performing the conventional mitomycin fermentation.

(CA. Claridge et al., Abst. of the Annual Meeting of Amer. Soc. for Microbiology 1982. Sammendrag 028). (CA. Claridge et al., Abst. of the Annual Meeting of Amer. Soc. for Microbiology 1982. Abstract 028).

Mitomycin C er det primære mitomycin som fremstilles ved fermentering og den er den kommersielt tilgjengelige form. Den nåværende teknologi for omdanning av mitomycin C til mitomycin A til bruk ved fremstilling av semisyntetiske substituerte aminoanaloger av mitomycin C, og hvortil det henvises i de ovenfor nevnte publikasjoner, involverer hydrolyse av mitomycin C til det tilsvarende 7-hydroksy-mitosan, en høyst ustabil forbindelse, og deretter metylering av dette med diazometan som er et meget farlig stoff å hånd-tere. Et forsøk på å unngå anvendelse av diazometan for metylering av 7-0-demetyl-mitomycin A som.fremstilles ved hydrolyse av mitomycin C, involverer anvendelse av 7-acyl-oksymitosaner (Kyowa Hakko Kogyo KK, japansk patentskrift nr. J5 6073-085, Farmdoc nr. 56227 D/31). Mitomycin C is the primary mitomycin produced by fermentation and is the commercially available form. The current technology for the conversion of mitomycin C to mitomycin A for use in the preparation of semisynthetic substituted amino analogues of mitomycin C, and referred to in the above-mentioned publications, involves the hydrolysis of mitomycin C to the corresponding 7-hydroxy-mitosane, a highly unstable compound, and then methylation of this with diazomethane, which is a very dangerous substance to handle. An attempt to avoid the use of diazomethane for the methylation of 7-0-demethyl-mitomycin A which is produced by the hydrolysis of mitomycin C involves the use of 7-acyl-oxymitosanes (Kyowa Hakko Kogyo KK, Japanese Patent Document No. J5 6073-085 , Farmdoc No. 56227 D/31).

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en til nå ukjent gruppe av monoguanidino- eller mono- og bis-amidino-analoger av mitomycin C, der enten 7-aminonitrogenatomet eller N^-karbamoy1-nitrogenatomet for mitomycin C, eller begge, er en del av en aminosubstituent, eller 7-aminon'itrogenet er en del av en guanidinogruppe. Tilsvarende analoger av mitomycin A med metoksygruppen i 7-stilling og amidinogruppen i N^-stilling er også omfattet. De angjeldende forbindelser svarer til følgende strukturformel: The present invention provides a hitherto unknown group of monoguanidino or mono- and bis-amidino analogues of mitomycin C, where either the 7-amino nitrogen atom or the N^-carbamoy1 nitrogen atom of mitomycin C, or both, is part of an amino substituent, or the 7-aminonitrogen is part of a guanidino group. Corresponding analogues of mitomycin A with the methoxy group in the 7-position and the amidino group in the N^-position are also included. The relevant compounds correspond to the following structural formula:

der • ■ -:- ■ ■ ■ there • ■ -:- ■ ■ ■

i in

A er amino eller metoksy7A is amino or methoxy7

B er amino ogB is amino and

R 1 er metyl eller formyl.R 1 is methyl or formyl.

Fagmannen vil se at at tautomere former av noen av disse foregående amidinogrupper eksisterer. Slike skal også være omfattet av de ovenfor angitte formler og av foreliggende oppfinnelse. The person skilled in the art will see that tautomeric forms of some of these preceding amidino groups exist. Such shall also be covered by the above stated formulas and by the present invention.

De ovenfor nevnte forbindelser med formel (I) har antitumoraktivitet i forsøksdyr. De er også nyttige som mellomprodukter ved fremstilling av andre forbindelser med antitumoraktivitet i dyr.Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer fremgangsmåter for fremstilling av de førstnevnte forbindelser og deres omdanning til andre verdifulle forbindelser The above-mentioned compounds of formula (I) have antitumor activity in experimental animals. They are also useful as intermediates in the preparation of other compounds with antitumor activity in animals. The present invention provides methods for the preparation of the first-mentioned compounds and their conversion into other valuable compounds

med antitumoraktivitet i forsøksdyr, slik som beskrevet nedenfor. with antitumor activity in laboratory animals, as described below.

De.foregående forbindelser brukes som mellomprodukter for^; fremstilling av andre forbindelser med antitumoraktivitet i dyr, involverer omsetning av en forbindelse med formel (I), der A eller både A og B er amidinogruppen, med et primært -amin, noe som resulterer i-spalting av N —aminometylen-substituenten når den er tilstede, med omdanning derav til N^-gruppen som er tilstede i mitomycin A og mitomycin C. The preceding compounds are used as intermediates for^; preparation of other compounds with antitumor activity in animals involves reacting a compound of formula (I), where A or both A and B is the amidino group, with a primary -amine, resulting in cleavage of the N -aminomethylene substituent when the is present, with its conversion to the N^ group present in mitomycin A and mitomycin C.

De primære aminer reagerer med visse unntak også i 7-stilling ved fjerning av amidinogruppen og erstatning av denne med aminosubstituenten tilsvarende reaktanten. Disse fremgangsmåter er belyst i de følgende reaksjonsligninger. R som betegner nitrogensubstituenten av forskjellige kjente og ukjente 7-substituerte amino-mitomycin C-forbindelser, With certain exceptions, the primary amines also react in the 7-position by removing the amidino group and replacing it with the amino substituent corresponding to the reactant. These procedures are illustrated in the following reaction equations. R denoting the nitrogen substituent of various known and unknown 7-substituted amino-mitomycin C compounds,

som er beskrevet her, og av de primære aminer, som er i stand til å skifte ut 7-amidinogruppen i forbindelsen med formel (II), er valgt blant C-^g-alkyl, bortsett fra tert-alkyl, C1_1g-alkoksy. C^^-alkenyl, C1_lg-alkynyl, C1_lg-halogenalkyl,'C1_1g-hydroksyalkyl, C4_g-cykloalkyl, aryl eller laverearalkyl eller laverearalkoksy med hver inntil 12 karbonatomer, eller en heteroalicyklisk eller hetero-aromatisk gruppe med fra 3-8 ringatomer, hvorav minst to er karbonatomer. R som betyr nitrogensubstituenten av de primære aminer som kun er i stand til å spalte N^-amidino-substituenten, er resten av et meget svakt basisk alifatisk amin eller et sterkt hindret alkylamin eller aralkylamin. Eksempler er trifluoretylamin, benzhydrylamin (dvs. aminodifenylmetan) eller tert-butylamin. as described herein, and of the primary amines, which are capable of displacing the 7-amidino group in the compound of formula (II), are selected from C 1-6 alkyl, except for tert-alkyl, C 1-1 6 alkoxy. C2-alkenyl, C1-1g-alkynyl, C1-1g-haloalkyl, C1-1g-hydroxyalkyl, C4-g-cycloalkyl, aryl or lower aralkyl or lower aralkyl with up to 12 carbon atoms each, or a heteroalicyclic or heteroaromatic group with from 3-8 ring atoms, of which at least two are carbon atoms. R meaning the nitrogen substituent of the primary amines capable of cleaving only the N 2 -amidino substituent is the residue of a very weakly basic aliphatic amine or a strongly hindered alkylamine or aralkylamine. Examples are trifluoroethylamine, benzhydrylamine (ie aminodiphenylmethane) or tert-butylamine.

Forbindelsene med formel (I) fremstilles ved omsetning av mitomycin C, 7-hydroksy-9a-metoksymitosan, eller mitomycin A eller en N"<*>"<a->substituert analog av enhver av de foregående, med et amid-acetal. De forbindelser med formel (I), der A, men ikke, B er amidinogruppen, ka;n også fremstilles ved omsetning av" mitomycin C eller en N"<*>"<a->substituert analog derav med en sterk base for dannelse av et anion ved N^, fulgt av omsetning av anionet med en reagens som er i stand til å danne aminometylengruppen, slik som et halogenmetyleniminiumsalt. The compounds of formula (I) are prepared by reacting mitomycin C, 7-hydroxy-9α-methoxymitosane, or mitomycin A or an N"<*>"<a->substituted analog of any of the foregoing, with an amide acetal. The compounds of formula (I), where A, but not B, is the amidino group, can also be prepared by reacting "mitomycin C or an N"<*>"<a->substituted analog thereof with a strong base for formation of an anion at N^, followed by reaction of the anion with a reagent capable of forming the aminomethylene group, such as a halomethyleneiminium salt.

De foretrukne forbindelser som fremstilles ifølge oppfinnelsen er mitomycin C-analoger, der 7-aminogruppen er innebyg-get i en substituert eller usubstituert amidinogruppe. The preferred compounds produced according to the invention are mitomycin C analogues, where the 7-amino group is embedded in a substituted or unsubstituted amidino group.

De har sterk'antitumorvirkning overfor eksperimentelle animalske tumorer. Disse foribndleser fremstilles ved omsetning av mitomycin C med en reagens som er i stand til å omdanne 7-aminogruppen til en 7-amidinogruppe. Fortrukne reagenser for dette formål er amid-acetalene som reagerer i godt utbytte og under milde betingelser med mitomycin C (eksemplene 1-5 samt 18). En annen gruppe amidin-dannende reagenser er imidoylhalogenidene (eksempel 17), halogen-metyleniminiumsaltene (eksempel 15), 2-halogen-l-alkyl-pyridinumhalogenidene (eksempel 16) og iminoetrene eller iminotioetrene (eksempel 13 og 14) som reagerer med den anioniske form av mitomycin C, som dannes ved deprotonisering av 7-aminogruppen derav ved behandling med en sterk base. Betingelser for deprotonisering av mitomycin C involverer behandling av mitomycin C i dimetylformamidoppløs-ning med ca. 1,5 moldeler natriumhydrid ved romtemperatur. Omsetning av den således dannede anioniske form med ett They have a strong antitumor effect against experimental animal tumors. These compounds are prepared by reacting mitomycin C with a reagent capable of converting the 7-amino group into a 7-amidino group. Preferred reagents for this purpose are the amide acetals which react in good yield and under mild conditions with mitomycin C (Examples 1-5 as well as 18). Another group of amidine-forming reagents are the imidoyl halides (Example 17), the halogen-methyleneiminium salts (Example 15), the 2-halo-1-alkyl-pyridinium halides (Example 16), and the iminoethers or iminothioethers (Examples 13 and 14) which react with the anionic form of mitomycin C, which is formed by deprotonation of its 7-amino group by treatment with a strong base. Conditions for deprotonation of mitomycin C involve treatment of mitomycin C in dimethylformamide solution with approx. 1.5 mole parts sodium hydride at room temperature. Reaction of the thus formed anionic form with one

eller flere av de ovenfor angitte reagenser benytter fortrinnsvis 1-1,5 moldeler derav i forhold til mitomycin C ved en temperatur fra romtemperatur til ca. -60°C. Aprotiske, polare, organiske oppløsningsmidler slik som dimetylformamid, heksametylfosforamid, dimetylsulfoksyd eller pyridin, or several of the above-mentioned reagents preferably use 1-1.5 mole parts thereof in relation to mitomycin C at a temperature from room temperature to approx. -60°C. Aprotic, polar, organic solvents such as dimethylformamide, hexamethylphosphoramide, dimethylsulfoxide or pyridine,

anvendes som reaksjonsmedium. Fremgangsmåten er imidlertid ikke begrenset til dannelse av anionisk mitomycin C på denne spesifikke måte, da modifikasjoner vil kunne innses av fagmannen . is used as a reaction medium. However, the method is not limited to the formation of anionic mitomycin C in this specific way, as modifications will be realized by the person skilled in the art.

Den foretrukne fremgangsmåte for fremstilling av forbindelsene med formel (I), der B eller både A og B er amidinogruppen med formelen The preferred process for the preparation of the compounds of formula (I), where B or both A and B is the amidino group of the formula

R<2>R<2>

R R -N-C=N-, bestar i omsetning av mitomycin C eller mitomycin A eller et N^-substituert derivat av en av disse forbindelser med et amidacetal med formelen R R -N-C=N-, consists in the reaction of mitomycin C or mitomycin A or an N^-substituted derivative of one of these compounds with an amidacetal of the formula

der R2, R3 og R4 har den ovenfor angitte betydning ogR^ er laverealkyl eller cykloalkyl med opptil 6 karbonatomer, eller de to R -grupper er forbundet som en alkylenkjede, som sammen med de to oksygenatomer og det mellomliggende karbonatom danner en cyklisk struktur med 5 eller 6 ring- where R2, R3 and R4 have the meaning given above and R^ is lower alkyl or cycloalkyl with up to 6 carbon atoms, or the two R groups are connected as an alkylene chain, which together with the two oxygen atoms and the intermediate carbon atom forms a cyclic structure with 5 or 6 ring-

atomer. Omsetningen av slike amidacetaler med primære aminer er velkjente i teknikken og fagmannen vil vite hvor-ledes omsetningen skal skje med mitomycin C, mitomycin A eller N<la->alkylderivatene derav. Det henvises f.eks. til US-PS 3.121.084 av 11. februar 1964 og til R.F. Abdulla atoms. The reaction of such amide acetals with primary amines is well known in the art and the person skilled in the art will know how the reaction should take place with mitomycin C, mitomycin A or the N<1a->alkyl derivatives thereof. It is referred to e.g. to US-PS 3,121,084 dated February 11, 1964 and to R.F. Abdullah

et al., "The Chemistry of Formamide Acetals", Tetrahedron, vol. 35, s. 1720-24 (1979). et al., "The Chemistry of Formamide Acetals", Tetrahedron, vol. 35, pp. 1720-24 (1979).

Det foretrekkes å utføre omsetningen i et flytende, vannfritt reaksjonsmedium der fortynningsmidlet er en væske som er forenelig med reaksjonsbetingelsene. Fortrinnsvis er sistnevnte et lavere halogenert, alifatisk karbonhydrid eller en laverealkanol eller gjerne en blanding av disse. Kloroform og metanol og blandinger derav er ganske velegnet, omsetningen skjer ved en temperatur fra 40-65°C i et tidsrom tisltrekkelig til at reaksjonen skjer til avslutning. It is preferred to carry out the reaction in a liquid, anhydrous reaction medium where the diluent is a liquid which is compatible with the reaction conditions. Preferably, the latter is a lower halogenated, aliphatic hydrocarbon or a lower alkanol or preferably a mixture of these. Chloroform and methanol and mixtures thereof are quite suitable, the reaction takes place at a temperature of 40-65°C for a period of time sufficient for the reaction to complete.

Når et stort overskudd (ca. 60 ganger) av acetalet anvendes, er det dominerende dannede produkt bis-amidinoforbindelsen, dvs. de forbindelser med formel (I), der både A og B utgjør amidogruppen. N"^a-f ormylderivatet dannes under tiden som et biprodukt..Når imidlertid en bégrenset mengde ..(ca.. 10 ganger) av acetalet anvendes, dannes foruten bis-amidinoforbindelsen også en mono-amidinoforbindelse, dvs. en forbindelse med formel (I), der A er aminogruppen og B er amidinogruppen. Blandinger av de ovenfor nevnte reaksjonsprodukter separeres lett ved kromatografering slik som beskrevet i de følgende eksempler. When a large excess (approx. 60 times) of the acetal is used, the predominant product formed is the bis-amidino compound, i.e. the compounds of formula (I), where both A and B form the amido group. The N"^a-formyl derivative is formed in the meantime as a by-product. However, when a limited amount (about 10 times) of the acetal is used, in addition to the bis-amidino compound, a mono-amidino compound is also formed, i.e. a compound of formula (I ), where A is the amino group and B is the amidino group Mixtures of the above-mentioned reaction products are easily separated by chromatography as described in the following examples.

Noen kommersielt tilgjengelige amidacetaler som kan anvendes ved denne fremgangsmåte, er angitt i tabell 1, som er hentet fra den ovenfor angitte artikkel av Abdulla et al., s. 1685. Forbindelsene med formel (I), der R 2 er cyano, dilavere-alkylamino, laverealkoksy eller laverealkyltio, fremstilles ved å anvende de følgende ortokarbonatderivater i stedet for amidacetalene ved den foran nevnte fremgangsmåte. Some commercially available amide acetals that can be used in this process are listed in Table 1, which is taken from the above-mentioned article by Abdulla et al., p. 1685. The compounds of formula (I), where R 2 is cyano, dilave- alkylamino, lower alkoxy or lower alkylthio, are prepared by using the following orthocarbonate derivatives instead of the amide acetals by the aforementioned method.

Disse reagenser er lett tilgjengelige fra de følgende kil der r é ni l1 e;.r:c.; .i ^itiiu. -.oeta i e - Amidinoderivatene med formel (I), der A er eller These reagents are readily available from the following sources; .in ^itiiu. -.oeta i e - The amidino derivatives of formula (I), where A is or

fremstilles ut fra den anioniske form av mitomycin is produced from the anionic form of mitomycin

C eller et N^-substituert derivat derav som beskrevet ovenfor. Egnede halogenmetyleniminiumsalter for anvendelse ved denne fremgangsmåte er beskrevet i litteraturen. Represen-tative er de som anføres av W. Kantlehner i "Advances in Organic Chemistry", vol 9, del 2, Wiley Interscience, 1979, s. 81 og 82. Tabell II nedenfor er hentet fra Kantlehners sammendrag .* Når det anvendes et halogenmetyleniminiumsalt som reaktant, slik som vist i tabell II, er det av og til hensiktsmessig å anvende det tilsvarende amid som oppløsningsmiddel, dvs. C or an N^-substituted derivative thereof as described above. Suitable halomethyleneininium salts for use in this method are described in the literature. Representative are those listed by W. Kantlehner in "Advances in Organic Chemistry", vol 9, part 2, Wiley Interscience, 1979, pp. 81 and 82. Table II below is taken from Kantlehner's summary.* When a halomethyleneiminium salt as reactant, as shown in Table II, it is sometimes appropriate to use the corresponding amide as solvent, i.e.

det amid hvorfra iminiumsaltet ble fremstilt. I tilfeller der de tilsvarende amider er faste, kan man anvende heksametylfosforamid eller pyridin. Dette er belyst i eksempel 17 og 18 nedenfor. the amide from which the iminium salt was prepared. In cases where the corresponding amides are solid, hexamethylphosphoramide or pyridine can be used. This is illustrated in examples 17 and 18 below.

De fra N-substituerte formamider avledede imidoylkloriderThe imidoyl chlorides derived from N-substituted formamides

er også hensiktsmesige reaktanter for dette formål. Deres fremstilling er velkjent for fagmannen, slik som belyst i tabell III, som er hentet fra H. Ulrich i "The Chemistry of Imidoyl Halides", Plenum Press, New York, 1968, s. 74-76. Deres omsetning med aminer for dannelse av amidiner er også velkjent, slik dette belyses av S.R. Sandler og W. Karo i "Organic Chemistry", vol. 12-111, A.T. Blomquist og H. Wasserman, utgivere, Academic Press, New York, 1972, s. 227. are also suitable reactants for this purpose. Their preparation is well known to those skilled in the art, as illustrated in Table III, which is taken from H. Ulrich in "The Chemistry of Imidoyl Halides", Plenum Press, New York, 1968, pp. 74-76. Their reaction with amines to form amidines is also well known, as elucidated by S.R. Sandler and W. Karo in "Organic Chemistry", vol. 12-111, A.T. Blomquist and H. Wasserman, publishers, Academic Press, New York, 1972, p. 227.

Forbindelsene med formel (I), der A er den nitrogen-usubstituerte amidinogruppe, eller The compounds of formula (I), where A is the nitrogen-unsubstituted amidino group, or

fremstilles is produced

ved omsetning av en aminobeskyttet iminoeter med mitomycin C, by reacting an amino-protected iminoether with mitomycin C,

et N^-substituert derivat derav eller et N~^a-laverealkyl-derivat av en av disse i anionisk form som beskrevet ovenfor. Den beskyttende gruppe fjernes deretter på konven-sjonell måte. Isopropylformidat, der aminogruppen er be-skyttet av e-trimetylsilyletoksykarbonylgruppen, er en egnet reaktant (eksempel 13). an N^-substituted derivative thereof or an N-^a-lower alkyl derivative of one of these in anionic form as described above. The protecting group is then removed in a conventional manner. Isopropyl formidate, where the amino group is protected by the ε-trimethylsilylethoxycarbonyl group, is a suitable reactant (Example 13).

Når A er (l-laverealkyl-2(1H)-pyridinyliden)amino eller gruppen med formelen involverer fremstillingen omsetning av den anioniske form av mitomycin C med cykliske halogerimetyleniminiumsalter eller imidoylhalogenider, der R 2 og R 3 med formelen When A is (1-lower alkyl-2(1H)-pyridinylidene)amino or the group of the formula the preparation involves reaction of the anionic form of mitomycin C with cyclic halogerimethyleneiminium salts or imidoyl halides, where R 2 and R 3 of the formula

er forbundet til dannelse av en ring. Egnede reagenser for omsetning med mitomycin C er 2-klor-l-metylpyridiniumjodid (eksempel 16), 2-klor-4,5-dihydro-l-metyl-l(3H)-pyrrolidinium-klorid (tabell 11), N,N<1->dimetyl-N,N'-trimetylenklorform-amidimiumklorid (eksempel 28) og andre cykliske imidoylhalogenider som avledes av 2-azetidinoner, 2-pyrrolidinoner, 2-piperidinoner og 2-azepinoner. Igjen anvendes nåo r R<7> are connected to form a ring. Suitable reagents for reaction with mitomycin C are 2-chloro-1-methylpyridinium iodide (Example 16), 2-chloro-4,5-dihydro-1-methyl-1(3H)-pyrrolidinium chloride (Table 11), N,N <1->dimethyl-N,N'-trimethylenechloroform-amidimium chloride (Example 28) and other cyclic imidoyl halides derived from 2-azetidinones, 2-pyrrolidinones, 2-piperidinones and 2-azepinones. Again R<7> is now used

eller R qi sluttproduktet er hydrogen, en:beskyttende gruppe, slik som ovenfor, i det cykliske halogenmetyleniminiumsalt-mellomprodukt. or R qi the final product is hydrogen, a: protecting group, as above, in the cyclic halomethyleneiminium salt intermediate.

Forbindelsene med formel (I), der A eller både A og B erThe compounds of formula (I), where A or both A and B are

en amidinogruppe med formelen an amidino group of the formula

reagerer med 5 5 primære aminer med formelen R NH, der R er valgt blant C-L_1g-alkyl, unntatt tert-alkyl, C1_1g-alkenyl, C^.^g"alkynyl, C-^^g-halogenalkyl, C1_1g-hydroksyalkyl, C4_g-cykloalkyl eller aryl eller laverearalkyl med hver inntil 12 karbonatomer eller en heteroalicyklisk eller hetero-aromatisk gruppe med fra 3-8 ringatomer, hvorav minst to er karbonatomer. Den eneste begrensning for valget av primært amin, bortsett fra fraværet av funksjonelle grupper, som er uforenelige med reaksjonsbetingelsene, er at aminonitrogenatomet er bundet til et karbonatom som bærer minst et hydrogenatom og mindre enn to arylgrupper. En vannfri, flytende organisk forbindelse anvendes som reaksjonsmedium og ethvert slikt stoff kan anvendes, så lenge det er forenelig med reaksjonsbetingelsene og ikke deltar i reaksjonen på skadelig måte. Et overskudd av den primære aminreaktant på molbasis, anvendes vanligvis. En reaksjonstemperatur i intervallet fra ca. -15°C til +15°C foretrekkes. Det resulterende produkt fra denne omsetning er et 7-substituert amino-9a-metoksymitosan, nemlig et mitomycin C-derivat med en substituent som definert for R^ på 7-aminogruppen. Slike forbindelser vet man fra den kjente teknikk har en vesentlig grad av antitumoraktivitet i forsøksdyr. Noen primære aminer, angitt ved formelen R^NP^, har vist seg å være ute av stand til å fjerne 7-amidinogruppen ved den i foregående avsnitt beskrevne fremgangsmåte. R^ er alkyl, cykloalkyl, cykloalkylalkyl, aralkyl eller heteroalicyklisk med fra 4-18 karbonatomer, hvori karbonatomet som bærer aminogruppen er et tertiært karbonatom, eller et sekundært karbonatom som bærer 2 arylgrupper. Visse andre svakt basiske alifatiske aminer, slik som trifluoretylamin, kan heller ikke fjerne 7-amidinogruppen. Disse aminer er nyttig for omdanning av en forbindelse med formel (I), der både A oq B er den nevnte amidinoqruppe, med formelen reacts with 5 5 primary amines of the formula R NH, where R is selected from C-L_1g-alkyl, except tert-alkyl, C1-1g-alkenyl, C^.^g"alkynyl, C-^^g-haloalkyl, C1-1g-hydroxyalkyl . incompatible with the reaction conditions is that the amino nitrogen atom is attached to a carbon atom bearing at least one hydrogen atom and less than two aryl groups. An anhydrous, liquid organic compound is used as the reaction medium and any such substance may be used, as long as it is compatible with the reaction conditions and does not participates in the reaction deleteriously. An excess of the primary amine reactant on a molar basis is usually employed. A reaction temperature in the range of about -15°C to +15°C is preferred. The resulting product of this reaction is a 7-substituted amino-9α-methoxymitosane, namely a mitomycin C derivative with a substituent as defined for R 1 on the 7-amino group. Such compounds are known from the prior art to have a significant degree of antitumor activity in experimental animals. Some primary amines, indicated by the formula R^NP^, have been shown to be unable to remove the 7-amidino group by the method described in the previous section. R 1 is alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, aralkyl or heteroalicyclic with from 4-18 carbon atoms, in which the carbon atom carrying the amino group is a tertiary carbon atom, or a secondary carbon atom carrying 2 aryl groups. Certain other weakly basic aliphatic amines, such as trifluoroethylamine, also cannot remove the 7-amidino group. These amines are useful for converting a compound of formula (I), wherein both A and B are the said amidino group, with the formula

til en forbindelse med formel (I), der kun A er to a compound of formula (I), where only A is

amidinogruppen. Selv om disse aminer mangler evnen til å ff ■ j er ri é: '•' åteLdlliro gr-up peh>!;! 'e r-'' lde!; al l;i ké ve 1 ^ i ••stari d tila spalte den med B angitte amidinogruppe til NH^under dannelse av den karbamidofunksjon som er karakteristisk for de usubstituerte mitosaner. Selv aminet kan tjene som reaksjonsmedium, eller man kan anvende et oppløsningsmiddel-system som angitt i det foregående avsnitt. Denne fremgangsmåte gjennomføres fortrinnsvis1 i området 20-60°C. the amidino group. Although these amines lack the ability to ff ■ j er ri é: '•' eatLdlliro gr-up peh>!;! 'e r-'' lde!; al l;i ké ve 1 ^ i ••stari d tila cleave the amidino group indicated by B to NH^under formation of the carbamido function which is characteristic of the unsubstituted mitosans. The amine itself can serve as the reaction medium, or one can use a solvent system as indicated in the previous section. This method is preferably carried out1 in the range 20-60°C.

Oppfinnelsen skal beskrives nærmere i de følgende eksempler. Smeltepunktene ble bestemt på et Thomas-Hoover kapillær-smeltepunktsapparat og er ukorrigerte. Temperaturene er uttrykt i °C. De kjernemagnetiske resonansspektre, NMR, blir registrert på et Varian XL100 spektrometer i pyridin-d^, hvis ikke annet er anført. De infrrøde spektre, IR, ble oppnådd med et Beckman 4240-spektrofotometer og prøven ble presset til en pille med kaliumbromid. IR-tallene er The invention shall be described in more detail in the following examples. Melting points were determined on a Thomas-Hoover capillary melting point apparatus and are uncorrected. The temperatures are expressed in °C. The nuclear magnetic resonance spectra, NMR, are recorded on a Varian XL100 spectrometer in pyridine-d^, unless otherwise stated. The infrared spectra, IR, were obtained with a Beckman 4240 spectrophotometer and the sample was pressed into a pellet of potassium bromide. The IR numbers are

umaksi cm ^' ne syn-'-:'-9e UV-spektre ble registrert på et Varian-Cary 219-spektrofotometer. umaksi cm ^' ne syn-'-:'-9e UV spectra were recorded on a Varian-Cary 219 spectrophotometer.

Tynnsjiktskromatografi, tic, ble utført på 0,25 mm forbelagte silikagelplater under anvendelse av UV-lys som visualiser-ende middel. •Flash-kromatografi ble utført under anvendelse av Silica Woelm (32-63 um). Oppløsningsmidlet ble dampet inn under redusert trykk og under 50°C. Thin-layer chromatography, tic, was performed on 0.25 mm precoated silica gel plates using UV light as visualizing agent. •Flash chromatography was performed using Silica Woelm (32-63 µm). The solvent was evaporated under reduced pressure and below 50°C.

Eksempel 1Example 1

Forbindel ( V) Connect (V)

7--[..( dimetylamino) metylen ] amino-N1^- ( dimetylamino)metylen-9a-métoksymitosan • " •;': 7-[..( dimethylamino) methylene ] amino-N1^- ( dimethylamino)methylene-9a-methoxymitosane • " •;':

Forbindelse ( VI) 7 - [ ( dimetylamino) metylen ] amino-N"'"^- ( dimetylamino) metylen-N"*"3-formyl-9a-metoksymitosan Compound ( VI) 7 - [ ( dimethylamino)methylene ] amino-N"'"^-( dimethylamino)methylene-N"*"3-formyl-9a-methoxymitosane

Til en suspensjon av 500 mg eller 1,50 mM mitomycin C i To a suspension of 500 mg or 1.50 mM mitomycin C i

25 ml kloroform ble det satt ialt 9,6 ml (2,4 ml andeler etter 0, 18, 21 og 23 timer) N,N-dimetylformamid-dimetylacetal og suspensjonen ble omrørt ved ca. 50°C i 41 timer. 25 ml of chloroform was added to a total of 9.6 ml (2.4 ml portions after 0, 18, 21 and 23 hours) of N,N-dimethylformamide-dimethylacetal and the suspension was stirred at approx. 50°C for 41 hours.

Ved inndamping av oppløsningsmidlet og overskytende reagens under redusert trykk ble det oppnådd en mørkegrønn rest; Evaporation of the solvent and excess reagent under reduced pressure gave a dark green residue;

tic (metylenklorid/metanol 20:1) viste fravær av mitomycin C og nærvær av to nye grønne komponenter (Rf = 0,16 og 0,22). Hovedkomponenten (Rf = 0,16) ble isolert ved flashkromato-grafi under anvendelse av metylenklorid/metanol i forholdet 20:1 som elueringsmiddel og som et grønt fast stoff (340 mg, 51,5%) som ved oppløsning i dietyleter fulgt av tilsetning av heksan ga forbindelse (V) som et mørkegrønt, amorft pulver . tic (methylene chloride/methanol 20:1) showed the absence of mitomycin C and the presence of two new green components (Rf = 0.16 and 0.22). The major component (Rf = 0.16) was isolated by flash chromatography using methylene chloride/methanol 20:1 as eluent and as a green solid (340 mg, 51.5%) which on dissolution in diethyl ether followed by addn. of hexane gave compound (V) as a dark green, amorphous powder.

NMR (pyridin d5,6): 2,18 (s, 3H), 2,70 (bs, 1H), 2,76 (s, 3H), 2,82 (s, 3H), 2,86 (s, 6H), 3,22 (s, 3H), 3,30 (bs, 1H), 3,60 (d, J=12Hz), 4,12 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,43 NMR (pyridine d5,6): 2.18 (s, 3H), 2.70 (bs, 1H), 2.76 (s, 3H), 2.82 (s, 3H), 2.86 (s, 6H), 3.22 (s, 3H), 3.30 (bs, 1H), 3.60 (d, J=12Hz), 4.12 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4, 43

(d, 1H, J=12 Hz), 4,90 (bs, 1H), 5,10 (t, 1H, J=10 Hz),(d, 1H, J=12 Hz), 4.90 (bs, 1H), 5.10 (t, 1H, J=10 Hz),

5,52 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 7,85.(s, 1H), 8,64 (s, 1H). 5.52 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 7.85.(s, 1H), 8.64 (s, 1H).

IR (KBr) u k<c>m"<1>: 3300, 2930, 1675, 1620, 1545, 1230, 1060. IR (KBr) u k<c>m"<1>: 3300, 2930, 1675, 1620, 1545, 1230, 1060.

UV (H2<0>)<*>maks'nm: 390 og 244.UV (H2<0>)<*>max'nm: 390 and 244.

Analyse beregnet for c2iH28N6°5: C 56'71' H 6'08'N 18,90 Analysis calculated for c2iH28N6°5: C 56'71' H 6'08'N 18.90

Funnet: C 56,20, H 6,28, N 17,88 Found: C 56.20, H 6.28, N 17.88

Den mindre komponent, Rf = 0,22, som ble isolert (180 mg, 25,35%) som et amorft, fast stoff ved felling fra dietyleter og heksan, ble identifisert som.forbindelse (VI). The minor component, Rf = 0.22, which was isolated (180 mg, 25.35%) as an amorphous solid by precipitation from diethyl ether and hexane, was identified as compound (VI).

NMR (pyridin d5, s): 2,20 (s, 3H), 2,60-3,00 (3 singletter, 12H), 3,2 (s, 3H), 3,65 (m, 2H), 4,04 (d, 1H, J=4 Hz), NMR (pyridine d5, s): 2.20 (s, 3H), 2.60-3.00 (3 singlets, 12H), 3.2 (s, 3H), 3.65 (m, 2H), 4 .04 (d, 1H, J=4 Hz),

4,16 (dd, 1H, J=12, 4Hz), 4,60 (d, 1H, J=13 Hz), 4,86 (t, 1H, J=12 Hz), 4,90 (s, 1H), 5,48 (dd, 1H, J=12, 4 Hz), 4.16 (dd, 1H, J=12, 4Hz), 4.60 (d, 1H, J=13 Hz), 4.86 (t, 1H, J=12 Hz), 4.90 (s, 1H ), 5.48 (dd, 1H, J=12, 4 Hz),

7,90 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 9,06 (s, 1H). 7.90 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 9.06 (s, 1H).

IR (KBr) umaks/cm -<1>: 2490, 2860, 1698, 1630, 1600, 1540, 1250, 1060. IR (KBr) umax/cm -<1>: 2490, 2860, 1698, 1630, 1600, 1540, 1250, 1060.

UV (H20), *maks>nm: 390 og 244.UV (H20), *max>nm: 390 and 244.

Analyse beregnet for C22H28<N>6°6<:>C 55'89'K 5'93'N l7/78 Analysis calculated for C22H28<N>6°6<:>C 55'89'K 5'93'N l7/78

Funnet: C 55,41, H 5,96, N 16,99. Found: C 55.41, H 5.96, N 16.99.

Oppløsninger av (V) og (VI) i enten etylacetat eller N,N-dimetylformamid-dimetylacetal viste tic, ved henstand ved stuetemperatur i mer enn 10 timer, at forbindelse (VI) Solutions of (V) and (VI) in either ethyl acetate or N,N-dimethylformamide-dimethyl acetal showed, on standing at room temperature for more than 10 hours, that compound (VI)

(Rf = 0,22) omdannes til forbindelse (V) (Rf = 0,16) under dannelse av en oppløsning som var sterkt anriket på sistnevnte forbindelse. (Rf = 0.22) is converted to compound (V) (Rf = 0.16) forming a solution that was highly enriched in the latter compound.

Eksempel 2-7 ble utført i henhold til fremgangsmåten ifølge eksempel 1 med de nedenfor angitte modifikasjoner for dannelse av forskjellige ytterligere forbindelser ifølge oppfinnelsen . Examples 2-7 were carried out according to the method according to example 1 with the modifications indicated below for the formation of various additional compounds according to the invention.

Eksempel 2Example 2

Forbindelse ( VII) 7-[(diisopropylamino)metylen]amino-N<1>^-(diisopropylamino)-metylen-9a-metoksymitosan Compound (VII) 7-[(diisopropylamino)methylene]amino-N<1>^-(diisopropylamino)-methylene-9a-methoxymitosane

En suspensjon av mitomycin C (200 mg, 0,6 rtiM) i N,N-diiso-propylformamid-dietylacetal (3 ml) ble oppvarmet under om-røring ved 53°C i 15 timer. Reaksjonsblandingen ble helt i 50 ml vann og ekstrahert med etylacetat (3 x 30 ml). Den kombinerte organiske ekstrakt ble tørket over Na2S04og dampet inn under dannelse av en mørkegrønn sirup, tic (metylenklorid/metanol 10:1) viste en grønn hovedkomponent ved Rf = 0,43 med urenheter (Rf = 0,45-0,50) som beveget seg hurtigere. Hovedkomponenten (VII) ble isolert som et mørkegrønt faststoff (156 mg, 46,8%) ved to flash-kromato-grafiprosedyrer under anvendelse av metylenklorid/metanol 20:1 som eluerende oppløsningsmiddel. A suspension of mitomycin C (200 mg, 0.6 rM) in N,N-diiso-propylformamide-diethyl acetal (3 ml) was heated with stirring at 53°C for 15 hours. The reaction mixture was poured into 50 ml of water and extracted with ethyl acetate (3 x 30 ml). The combined organic extract was dried over Na2SO4 and evaporated to give a dark green syrup, tic (methylene chloride/methanol 10:1) showed a major green component at Rf = 0.43 with impurities (Rf = 0.45-0.50) as moved faster. The major component (VII) was isolated as a dark green solid (156 mg, 46.8%) by two flash chromatography procedures using methylene chloride/methanol 20:1 as the eluent.

NMR (CDC13, 6): 1,10-1,50 (5 singletter, 24H), 1,94 (s,NMR (CDCl 3 , 6): 1.10-1.50 (5 singlets, 24H), 1.94 (s,

3H), 2,78 (dd, 1H, J=4, 2 Hz), 3,05 (d, 1H, J=4 Hz),3H), 2.78 (dd, 1H, J=4, 2 Hz), 3.05 (d, 1H, J=4 Hz),

3,22 (s, 3H), 3,60 (m, 5H), 3,75 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 3.22 (s, 3H), 3.60 (m, 5H), 3.75 (dd, 1H, J=10, 4 Hz),

4,24 (d, 1H, J= 12 Hz), 4,56 (t, 1H, J=10 Hz), 4,88 4.24 (d, 1H, J= 12 Hz), 4.56 (t, 1H, J=10 Hz), 4.88

(dd, 1H, J=10, 4 Hz), 7,83 (s, 1H), 8,67 (s, 1H). (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 7.83 (s, 1H), 8.67 (s, 1H).

IR (KBr), «maks/cm"<1>: 3320, 2990, 2940, 1680, 1630, 1600, 1500, 1235,1060. IR (KBr), "max/cm"<1>: 3320, 2990, 2940, 1680, 1630, 1600, 1500, 1235,1060.

UV (MeOH) *maks, nm: 24 6 og 3 93.UV (MeOH) *max, nm: 24 6 and 3 93.

Analyse beregnet for C2gH44<N>g05: C 62,55, H 7,91, N 15,10 Analysis calculated for C2gH44<N>g05: C 62.55, H 7.91, N 15.10

Funnet: C 62,03, H 7,80, N 14,60 Found: C 62.03, H 7.80, N 14.60

Eksempel 3Example 3

Forbindelse ( XIV) Connection ( XIV)

7-[(dimetylamino)metylen]amino-N<1>^-(dimetylamino)metylen-ga-me tok sy -Nla-me ty Imi tos an 7-[(dimethylamino)methylene]amino-N<1>^-(dimethylamino)methylene-ga-me tok sy -Nla-me ty Imitos an

I dette eksempel anvendte man i stedet porfiromycin (N<la->i metyl-mitomycin C), 130 mg (0,37 mM) som utgangsmateriale for omsetning med 0,8 ml (1,5 mM) N,N-dimetylformamid-dimetylacetal under anvendelse av 10 ml kloroform og 2 ml metanol som reaksjonsoppløsningsmiddel og en reaksjonstid på 50 minutter ved 50°C. Forbindelse (IX) ble oppnådd som en sirup etter inndamping av reaksjonsoppløsnningsmidlet og renset ved flash-kromatografi under anvendelse av 20 g silikagel og metylenklorid/metanol (20:1) som eluerende oppløsningsmiddel. In this example, porfiromycin (N<1a>i methyl-mitomycin C), 130 mg (0.37 mM) was used instead as starting material for reaction with 0.8 ml (1.5 mM) N,N-dimethylformamide dimethyl acetal using 10 ml of chloroform and 2 ml of methanol as reaction solvent and a reaction time of 50 minutes at 50°C. Compound (IX) was obtained as a syrup after evaporation of the reaction solvent and purified by flash chromatography using 20 g of silica gel and methylene chloride/methanol (20:1) as the eluting solvent.

NMR (pyridin d5,6): 2,22 .(bs, 4H), 2,28 (s,.3H), 2,70NMR (pyridine d5,6): 2.22 (bs, 4H), 2.28 (s, 3H), 2.70

(d, 1H, J=4 Hz), 2,80 (s, 3H), 2,84 (s, 3H), 2,90 (s, 6H), 3,20 (s, 3H), 3,52 ..{.dd, 1H, J=2, 12 Hz) , 4,10- .(dd, 1H,,-J=4, 11 Hz), 4,38 (d, 1H, J=12 Hz), 4,92 (t, 1H, J=ll Hz), 4,96 (bs, 1H), 5,46 (dd, 1H,J=4, 11 Hz), 7,86 (s, 1H), (d, 1H, J=4 Hz), 2.80 (s, 3H), 2.84 (s, 3H), 2.90 (s, 6H), 3.20 (s, 3H), 3.52 ..{.dd, 1H, J=2, 12 Hz) , 4.10- .(dd, 1H,,-J=4, 11 Hz), 4.38 (d, 1H, J=12 Hz), 4.92 (t, 1H, J=ll Hz), 4.96 (bs, 1H), 5.46 (dd, 1H,J=4, 11 Hz), 7.86 (s, 1H),

8,70 (s, 1H). 8.70 (p, 1H).

Rf = 0,53, tynnsjiktskromagrafi med 9:1 metylenklorid/metanol. Rf = 0.53, thin layer chromatography with 9:1 methylene chloride/methanol.

IR (KBr) umaks^cm"<1>: 2930, 1680, 1620, 1545, 1230, 1115. IR (KBr) umax^cm"<1>: 2930, 1680, 1620, 1545, 1230, 1115.

UV (MeOH) *maks, nm: 386 og 243.UV (MeOH) *max, nm: 386 and 243.

Analyse beregnet for C22H30<N>6°5<:>C 57,60, H 6,55, N 18,33 Analysis calculated for C22H30<N>6°5<:>C 57.60, H 6.55, N 18.33

Funnet: C 57,11, H 6,11, N 17,99 Found: C 57.11, H 6.11, N 17.99

Denne fremgangsmåte ga forbindelse (XV) , 7-amino-N^-di-metylaminometylen-9a-metoksy-N<la->metylmitosan, som et bi-produkt i 30% utbytte, tic Rf = 0,40 (metylenklorid/- This procedure gave compound (XV), 7-amino-N^-dimethylaminomethylene-9a-methoxy-N<1a->methylmitosane, as a by-product in 30% yield, tic Rf = 0.40 (methylene chloride/-

metanol 9:1).methanol 9:1).

NMR (pyridin d5, 6): 2,02 (s, 3H), 2,16 (dd, 1H, J= 2, 5 Hz), 2,25 (s, 3H), 2,66 (d, 1H, J=5 Hz), 2,76 (s, 3H), 2,86 NMR (pyridine d5, 6): 2.02 (s, 3H), 2.16 (dd, 1H, J= 2, 5 Hz), 2.25 (s, 3H), 2.66 (d, 1H, J=5 Hz), 2.76 (s, 3H), 2.86

(s, 3H), 3,18 (s, 3H), 3,51 (dd, 1H, J=2, 12 Hz), 4,08 (s, 3H), 3.18 (s, 3H), 3.51 (dd, 1H, J=2, 12 Hz), 4.08

(dd, 1H, J=4, 10 Hz), 4,50 (d, 1H, J=10 Hz), 4,90 (t, (dd, 1H, J=4, 10 Hz), 4.50 (d, 1H, J=10 Hz), 4.90 (t,

1H, J=10Hz), 5,05 (bs), 5,43 (dd, 1H, J=4, 10 Hz), 1H, J=10Hz), 5.05 (bs), 5.43 (dd, 1H, J=4, 10 Hz),

8,70 (s, 1H). 8.70 (p, 1H).

IR (KBr)"maks. cm"<1>: 3430, 3330, 3270, 2940, 2960, 1690 1625, 1553, 1230, 1125. IR (KBr)"max cm"<1>: 3430, 3330, 3270, 2940, 2960, 1690 1625, 1553, 1230, 1125.

UV (MeOH) *maks/nm: 358, 244 og 216.UV (MeOH) *max/nm: 358, 244 and 216.

Analyse beregnet for C19H25N505: c 56'53'H 6,20, N 17,38 Analysis calculated for C19H25N505: c 56'53'H 6.20, N 17.38

Funnet: C 54,68, H 6,13, N 16,59 Found: C 54.68, H 6.13, N 16.59

Eksempel 4Example 4

Forbindelse ( IX) Connection ( IX)

9a-metoksy-7-[(1-piperidinylamino)metylen]amino-N<10->(1-pipe-ridinylmetylen)mitosan 3 ml N-(dietoksymetyl)piperidin og 200 mg mitomycin C fikk lov å reagere ved 60°C i 2,5 time i kloroformoppløsning (3 ml). Produktet ble oppnådd i et utbytte på 27,6%, tic Rf = 0,20 (metylenklorid/metanol 20:1). 9α-Methoxy-7-[(1-piperidinylamino)methylene]amino-N<10->(1-piperidinylmethylene)mitosane 3 ml of N-(diethoxymethyl)piperidine and 200 mg of mitomycin C were allowed to react at 60°C for 2.5 hours in chloroform solution (3 ml). The product was obtained in a yield of 27.6%, tic Rf = 0.20 (methylene chloride/methanol 20:1).

NMR (pyridin d5, 6): 1,38 (bs, 12H), 2,20 (s, 3H), 2,80 (bs, '1H) ,.... 3,24 (s, 3H), 3 , 00-3, 40 (m, 5H), 3 , 40-3 , 80 (m, 5H), 4,13 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,45 (d, 1H, J=12 Hz), 4,90 (bs, 2H), 5,12 (t, 1H, J=10 Hz), 5,56 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 7,87 (s, 1H), 8,70 (s, 1H). NMR (pyridine d5, 6): 1.38 (bs, 12H), 2.20 (s, 3H), 2.80 (bs, '1H),... 3.24 (s, 3H), 3 , 00-3, 40 (m, 5H), 3 , 40-3 , 80 (m, 5H), 4.13 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4.45 (d, 1H, J =12 Hz), 4.90 (bs, 2H), 5.12 (t, 1H, J=10 Hz), 5.56 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 7.87 (s, 1H), 8.70 (s, 1H).

IR (KBr) u k f cm"<1>: 3300, 2950, 2870, 1680, 1630, 1610, 1550, 1200, 1070. IR (KBr) u k f cm"<1>: 3300, 2950, 2870, 1680, 1630, 1610, 1550, 1200, 1070.

UV (H20)^maks</>nm: 394 og246.UV (H20)^max</>nm: 394 and 246.

Analyse beregnet for C27H36<N>605: C 61,79, H 6,87, N 16,02 Analysis calculated for C27H36<N>605: C 61.79, H 6.87, N 16.02

Funnet: C 61,01, H 6,85, N 15,34 Found: C 61.01, H 6.85, N 15.34

N<la->formylderivatet av den foregående forbindelse, forbindelse (VIII), N la-formyl-9a-metoksy-7-[(1-piperidinylamino)-metylen]-amino-N<1>^-(1-piperidinylmetylen)mitosan, ble oppnådd som en hovedkomponent med 43% utbytte, tic Rf = 0,25 (metylenklorid/metanol 20:1). The N<1α->formyl derivative of the preceding compound, compound (VIII), N<1α-formyl-9a-methoxy-7-[(1-piperidinylamino)-methylene]-amino-N<1>^-(1-piperidinylmethylene) mitosan, was obtained as a major component in 43% yield, tic Rf = 0.25 (methylene chloride/methanol 20:1).

NMR (pyridin d5, 6): 1,38 (bs, 12H), 2,23 (s, 3H), 3,00-3,40 (m, 4H), 3,23 (s, 3H), 3,40-3,90 (m, 6H), 4,07 (d, 1H, J=4 Hz), 4,18 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 4,63 (d, 1H), 4,90 NMR (pyridine d5, 6): 1.38 (bs, 12H), 2.23 (s, 3H), 3.00-3.40 (m, 4H), 3.23 (s, 3H), 3, 40-3.90 (m, 6H), 4.07 (d, 1H, J=4 Hz), 4.18 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 4.63 (d, 1H), 4.90

(t, 1H, j=ll Hz), 4,94 (bs, 1H), 5,54 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 7,94 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 9,08 (s, 1H). (t, 1H, j=ll Hz), 4.94 (bs, 1H), 5.54 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 7.94 (s, 1H), 8.71 (s , 1H), 9.08 (s, 1H).

IR (KBr)°maks</><c>m"<1>: 2490, 2860, 1698, 1630, 1600, 1540, 1250, 1060. IR (KBr)°max</><c>m"<1>: 2490, 2860, 1698, 1630, 1600, 1540, 1250, 1060.

UV J H20) amaks, nm: 3 94 og 24 7 .UV J H20) amax, nm: 3 94 and 24 7 .

Analyse beregnet for C28H36<N>6°6<:>C 60'08'H 6'52'N 15,21Analysis calculated for C28H36<N>6°6<:>C 60'08'H 6'52'N 15.21

o r.;! Ux---. ■ . Funnet: C 59, 99 , H 6,17, N 15,07 o r.;! Ugh---. ■ . Found: C 59, 99 , H 6.17, N 15.07

Eksempel 5Example 5

Forbindelse ( X) Connection ( X)

9a-metoksy-7-[(1-morfolino)metylen]amino-N"^-(1-morfolino-metylen ) mitosan 9a-Methoxy-7-[(1-morpholino)methylene]amino-N"^-(1-morpholino-methylene)mitosane

En omrørt suspensjon av mitomycin C (200 mg, 0,6 mM) i klorform (10 ml) og N-dietoksymetylmorfolin (4 ml) ble oppvarmet til ca. 53°C i 42 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert til sirup under høyt vakuum. En rå sepa-rering ved flash-kromatografi (metylenklorid/metanol 25:1) ble gjennomført for å isolere de grønnfargede komponenter fra overskuddet av reagenser. De forenede grønne komponenter ble oppløst i 20 ml etylacetat og vasket med 3 x 20 ml vann. De kombinerte vaskevæsker ble ekstrahert igjen med 3 x 15 ml etylacetat. Alle etylacetatfraksjoner ble forenet, tørket over Na2SO^og dampet inn til et mørkegrønn sirup, tic (metylenklorid/metanol 10:1) viste en spesiell grønn komponent ved Rf = 0,33 med adskillige grønne urenheter (Rf = 0,35-0,40). Ved flash-kromatografi isolerte man komponenten ved Rf 0,33 (130 mg, 56,8%) som et mørke-grønt, amorft faststoff som karakteriseres som forbindelse A stirred suspension of mitomycin C (200 mg, 0.6 mM) in chloroform (10 mL) and N-diethoxymethylmorpholine (4 mL) was heated to ca. 53°C for 42 hours. The reaction mixture was concentrated to syrup under high vacuum. A crude separation by flash chromatography (methylene chloride/methanol 25:1) was carried out to isolate the green colored components from the excess of reagents. The combined green components were dissolved in 20 ml of ethyl acetate and washed with 3 x 20 ml of water. The combined washings were re-extracted with 3 x 15 ml ethyl acetate. All ethyl acetate fractions were combined, dried over Na2SO^ and evaporated to a dark green syrup, tic (methylene chloride/methanol 10:1) showed a distinct green component at Rf = 0.33 with several green impurities (Rf = 0.35-0, 40). Flash chromatography isolated the component at Rf 0.33 (130 mg, 56.8%) as a dark-green, amorphous solid characterized as compound

(X) . (X) .

NMR (CDC13, 6): 1,91 (s, 3H), 2,80 (bs, 1H), 3,13 (d, 1H, J= 2 Hz), 3,22 (s, 3H), 3,30-3,94 (m, 18H), 4,20 (d, 1H, J=12 Hz), 4,40 (bs, 1H), 4,54 (t, 1H,J=10 Hz), 4,88 (dd, 1H, J=10 Hz, 4 Hz), 7,74 (s, 1H), 8,51 (s, 1H). NMR (CDCl 3 , 6): 1.91 (s, 3H), 2.80 (bs, 1H), 3.13 (d, 1H, J= 2 Hz), 3.22 (s, 3H), 3, 30-3.94 (m, 18H), 4.20 (d, 1H, J=12 Hz), 4.40 (bs, 1H), 4.54 (t, 1H,J=10 Hz), 4, 88 (dd, 1H, J=10 Hz, 4 Hz), 7.74 (s, 1H), 8.51 (s, 1H).

IR (KBr)<u>maks, cm<_1>: 3300, 2970, 2920, 1680, 1625, 1550, 1235, 1070. IR (KBr)<u>max, cm<_1>: 3300, 2970, 2920, 1680, 1625, 1550, 1235, 1070.

UV (MeOH) xmaks/nm: 28 6 og 24 4.UV (MeOH) xmax/nm: 28 6 and 24 4.

Analyse beregnet for<C>25<H>32<N>6°7<:>C 56'78'H 6'06'N 15,90 Analysis calculated for<C>25<H>32<N>6°7<:>C 56'78'H 6'06'N 15.90

Funnet: C 53,07, H 6,03, N 15,37 Found: C 53.07, H 6.03, N 15.37

Eksempel 6Example 6

Forbindelse ( XVI) Connection ( XVI)

7-amino-N^-dimetylaminometylen-9a-metoksymitosan Mitomycin C (200 mg, 0,6 mM) ble oppløst i 10 ml kloroform og 2 ml metanol, N,N-dimetylformamid-dimetylacetal (0,64 7-amino-N^-dimethylaminomethylene-9a-methoxymitosane Mitomycin C (200 mg, 0.6 mM) was dissolved in 10 ml of chloroform and 2 ml of methanol, N,N-dimethylformamide dimethyl acetal (0.64

ml, 4,8 mM) ble tilsatt og oppløsningen ble omrørt ved ca. 50°C i 50 minutter. Tynnsjiktskromatografi (metylenklorid/- ml, 4.8 mM) was added and the solution was stirred at approx. 50°C for 50 minutes. Thin-layer chromatography (methylene chloride/-

metanol 90:10) viste spor av ikke-omsatt mitomycin C (Rf = 0,22) og to nye komponenter (Rf = 0,42 henholdsvis 0,33). Oppløsningen ble konsentrert under redusert trykk og man oppnådde en sirup som ble flash-kromatografert (25 g silikagel) under anvendelse av metylenklorid/metanol i forholdet 20:1 som elueringsmiddel. methanol 90:10) showed traces of unreacted mitomycin C (Rf = 0.22) and two new components (Rf = 0.42 and 0.33 respectively). The solution was concentrated under reduced pressure and a syrup was obtained which was flash chromatographed (25 g silica gel) using methylene chloride/methanol in the ratio 20:1 as eluent.

Den hurtigste komponent (Rf = 0,42) ble isolert som et grønt, amorft faststoff (60 mg, 22,5%) og identifisert som forbindelse (V) på basis av NMR-spekteret (pyridin d5). The fastest component (Rf = 0.42) was isolated as a green, amorphous solid (60 mg, 22.5%) and identified as compound (V) on the basis of the NMR spectrum (pyridine d5).

Den .blå ..hovedkomponent. (Rf ■= . 0 , 33 ) ble isolert som et amorft, faststoff (148 mg, 63,3%) ogkarakterisertsom forbindelse (XVI). En analytisk prøve ble oppnådd ved felling fra metylenklorid og n-pentan. The .blue ..main component. (Rf ■= . 0 , 33 ) was isolated as an amorphous solid (148 mg, 63.3%) and characterized as compound (XVI). An analytical sample was obtained by precipitation from methylene chloride and n-pentane.

NMR (pyridin, d5#6): 2,02 (s, 3H), 2,76 (bs, 4H), 2,86 (s, 3H), 3,21 (s, 3H), 3,28 (d, 1H, J=4 Hz), 3,62 (dd, 1H, J=2, 13 Hz), 3,94 (bs), 4,14 (dd, 1H, J=4, 12 Hz), 4,56 (d, 1H, J=13 Hz), 5,12 (t, 1H, J=10 Hz), 5,52 (dd, NMR (pyridine, d5#6): 2.02 (s, 3H), 2.76 (bs, 4H), 2.86 (s, 3H), 3.21 (s, 3H), 3.28 (d , 1H, J=4 Hz), 3.62 (dd, 1H, J=2, 13 Hz), 3.94 (bs), 4.14 (dd, 1H, J=4, 12 Hz), 4, 56 (d, 1H, J=13 Hz), 5.12 (t, 1H, J=10 Hz), 5.52 (dd,

1H, J=4, 10 Hz) .1H, J=4, 10 Hz).

IR (KBr) umaks, cm"<1>: 3430, 3320, 3280, 2930, 1675, 1615, 1650, 1230, 1115. IR (KBr) umax, cm"<1>: 3430, 3320, 3280, 2930, 1675, 1615, 1650, 1230, 1115.

UV (H20) *maks, nm: 364, 244 og 219.UV (H20) *max, nm: 364, 244 and 219.

Analyse beregnet for C]_8N23N505: C 55, 48, H 5,91, N 17,98 Funnet: C 54 , 70, H 6,14, N 17,95 Analysis calculated for C]_8N23N505: C 55, 48, H 5.91, N 17.98 Found: C 54 , 70, H 6.14, N 17.95

Eksempel 7Example 7

Forbindelse ( XVII) Connection (XVII)

7,9a-dimetoksy-N<10->dimetylaminometylenmitosan Mitomycin A (170 mg) ble anvendt i stedet for mitomycin C 7,9α-dimethoxy-N<10->dimethylaminomethylenemitosane Mitomycin A (170 mg) was used instead of mitomycin C

i eksempel 1 og fikk lov til å reagere med N,N-dimetylformamid-dimetylacetal (0,6 ml) i klorform/metanoloppløs-ning (10:1) ved 5.0°C i 1 time. Det ønskede produkt ble opp- in Example 1 and allowed to react with N,N-dimethylformamide-dimethyl acetal (0.6 ml) in chloroform/methanol solution (10:1) at 5.0°C for 1 hour. The desired product was

nådd i 48 %-ig utbytte, tic Rf = 0,50 (metylenklorid/metanol 9:1) . reached in 48% yield, tic Rf = 0.50 (methylene chloride/methanol 9:1).

NMR (pyridin d5, 6): 1,83 (s, 3H), 2,76 (bs, 4H), 2,86NMR (pyridine d5,6): 1.83 (s, 3H), 2.76 (bs, 4H), 2.86

(s, 3H), 3,22 (s, 3H), 3,28 (d, 1H), 3,56 (dd, 1H, J=2, (s, 3H), 3.22 (s, 3H), 3.28 (d, 1H), 3.56 (dd, 1H, J=2,

13 Hz), 4,02 (s, 3H), 4,10 (dd, 1H, J=4, 10 Hz), 4,24 13 Hz), 4.02 (s, 3H), 4.10 (dd, 1H, J=4, 10 Hz), 4.24

(d, J=13 Hz), 5,10 (t, 1H, J=10 Hz), 5,50 (dd, 1H, J=4, 10 Hz), 8,67 (s, 1H). (d, J=13 Hz), 5.10 (t, 1H, J=10 Hz), 5.50 (dd, 1H, J=4, 10 Hz), 8.67 (s, 1H).

IR (KBr) umaks, cm"<1>: 3300, 2930, 1675, 1655, 1625, 1500, 1235, 1120. IR (KBr) umax, cm"<1>: 3300, 2930, 1675, 1655, 1625, 1500, 1235, 1120.

UV (H20) xmaks, nm: 530, 316 og 244.UV (H20) xmax, nm: 530, 316 and 244.

Analyse beregnet for C19H24N406: C 56,39, H 5,94, N 13,85 Analysis calculated for C19H24N406: C 56.39, H 5.94, N 13.85

Funnet: C 56,51, H 5,92, N 13,71 Found: C 56.51, H 5.92, N 13.71

N<la->formylderivatet av forbindelse (XVII) ble oppnådd som forbindelse (XVIII), 7, ga-dimetoksy-N^-dimetylaminometylen-N -formylmitosan i et utbytte på 16,5%, tic Rf = 0,61 (metylenklorid/metanol 9:1). The N<1a->formyl derivative of compound (XVII) was obtained as compound (XVIII), 7, ga-dimethoxy-N^-dimethylaminomethylene-N -formylmitosane in a yield of 16.5%, tic Rf = 0.61 (methylene chloride /methanol 9:1).

NMR (pyridin d5, «): 1,88 (s, 3H), 2,76 (s, 3H), 2,85 (s, 3H), 3,54 (d, 1H), 3,62 (bs, 1H) , 4,05 (s, 3H), 4,05 (s, 3H), 4,05 (bs, 1H), 4,14 (dd, 1H, J=4, 12 Hz), 4,40 (d, 1H, J=13 Hz), 4,86 (t, 1H,J=12Hz), 5,42 (dd, 1H, J=4, 12Hz), 8,66 (s, 1H), 9,08 (s, 1H). NMR (pyridine d5, «): 1.88 (s, 3H), 2.76 (s, 3H), 2.85 (s, 3H), 3.54 (d, 1H), 3.62 (bs, 1H) , 4.05 (s, 3H), 4.05 (s, 3H), 4.05 (bs, 1H), 4.14 (dd, 1H, J=4, 12 Hz), 4.40 ( d, 1H, J=13 Hz), 4.86 (t, 1H,J=12Hz), 5.42 (dd, 1H, J=4, 12Hz), 8.66 (s, 1H), 9.08 (p, 1H).

Eksempel 8Example 8

Forbindelse ( XIX) Connection (XIX)

7-(dimetylaminometylen)amino-9a-metoksymitosan Til forbindelse (V) (600 mg, 1,35 mM) oppløst i 10 ml metanol ble det satt aminodifenylmetan (2,2 ml, 10,8 mM) og den resulterende oppløsning ble omrørt ved 54°C i 4 timer. Reaksjonsforløpet ble målt ved tic (metylenklorid/metanol 90:10). Ved avslutningen av de 4 timer var utgangsmaterialet (Rf = 0,35) forsvunnet og en ny grønn hovedsone (Rf = 0,29) forekom i stedet. Oppløsningen ble konsentrert ved redusert 7-(Dimethylaminomethylene)amino-9α-methoxymitosane To compound (V) (600 mg, 1.35 mM) dissolved in 10 mL of methanol was added aminodiphenylmethane (2.2 mL, 10.8 mM) and the resulting solution was stirred at 54°C for 4 hours. The course of the reaction was measured by tic (methylene chloride/methanol 90:10). At the end of the 4 hours, the starting material (Rf = 0.35) had disappeared and a new main green zone (Rf = 0.29) appeared in its place. The solution was concentrated by reducing

trykk og den resulterende sirup flash-kromatografert, 25 g silikagel, under anvendelse av metylenklorid/etanol 20:2 pressure and the resulting syrup flash chromatographed, 25 g silica gel, using methylene chloride/ethanol 20:2

som elueringsmiddel. Fraksjoner inneholdende den grønne komponent (Rf = 0,29) ble samlet, tørket over Na2S04og konsentrert. Man oppnådde forbindelse (XIX) som et amorft faststoff (215 mg, 41%). as eluent. Fractions containing the green component (Rf = 0.29) were pooled, dried over Na 2 SO 4 and concentrated. Compound (XIX) was obtained as an amorphous solid (215 mg, 41%).

NMR (pyridin dg, 6): 2,18 (s, 3H), 2,70 (bs, 1H), 2,80NMR (pyridine dg, 6): 2.18 (s, 3H), 2.70 (bs, 1H), 2.80

(s, 3H), 2,88 (s, 3H), 3,08 (bs, 1H), 3,24 (s, 3H), (s, 3H), 2.88 (s, 3H), 3.08 (bs, 1H), 3.24 (s, 3H),

3,56 (bd, 1H, J=12 Hz), 4,00 (dd, 1H), 4,44 (d, 1H, J=12 3.56 (bd, 1H, J=12 Hz), 4.00 (dd, 1H), 4.44 (d, 1H, J=12

Hz), 5,06 (t, 1H, J=10 Hz), 5,56 (dd, 1H, J=10, 4 Hz),Hz), 5.06 (t, 1H, J=10 Hz), 5.56 (dd, 1H, J=10, 4 Hz),

7,58 (bs, 2H), .7,88 (s, 1H). 7.58 (bs, 2H), .7.88 (s, 1H).

IR (KBr) umaks/cm"<1>: 3300-3450, 2960-2910, 1715, 1620, 1535, 1050 . IR (KBr) umax/cm"<1>: 3300-3450, 2960-2910, 1715, 1620, 1535, 1050 .

UV (H20) xmaks, nm: 390 og 226.UV (H20) xmax, nm: 390 and 226.

Analyse beregnet for C18H23N5°5<:>C 55'48'H 5>91'N 17,98 Analysis calculated for C18H23N5°5<:>C 55'48'H 5>91'N 17.98

Funnet: C 54,83, H 5,67, N 16,90 Found: C 54.83, H 5.67, N 16.90

Når N<la->formylderivatet, forbindelse (VI), ble benyttet som utgangsmateriale i eksempel 8, men under anvendelse av romtemperatur i 20 timer som reaksjonsbetingelser, oppnådde man forbindelse (XIX) i det vesentlige på samme måte og med samme utbytte. When the N<la>formyl derivative, compound (VI), was used as starting material in example 8, but using room temperature for 20 hours as reaction conditions, compound (XIX) was obtained in essentially the same way and with the same yield.

Eksempel 9Example 9

Forbindelse ( XX) Connection ( XX)

7-(dimetylaminometylen)amino-9a-metoksy-N la-metylmitosan Forbindelse (XIV), (1 g, 2,18 mM) ble oppløst i 20 ml meta- 7-(Dimethylaminomethylene)amino-9a-methoxy-N 1a -methylmitosane Compound (XIV), (1 g, 2.18 mM) was dissolved in 20 ml of meta-

nol, aminodifenylmetan (3,5 ml, 17,18 mM) ble tilsatt og den resulterende oppløsning omrørt ved romtemperatur i 5 nol, aminodiphenylmethane (3.5 mL, 17.18 mM) was added and the resulting solution stirred at room temperature for 5

timer og ved 40°C i 5 timer. Tynnsjiktskromatografi (CH2Cl2/MeOH 90:10) av reaksjonsblandingen viste at nesten alt utgangsmateriale (Rf = 0,55) var forbrukt og at en ny grønn hovedsone (Rf = 0,48) var kommet frem. Opparbeiding hours and at 40°C for 5 hours. Thin layer chromatography (CH2Cl2/MeOH 90:10) of the reaction mixture showed that almost all the starting material (Rf = 0.55) had been consumed and that a new green main zone (Rf = 0.48) had emerged. Processing

på tilsvarende måte som i eksempel 8 ga forbindelse (XX) som et amorft faststoff i en mengde av 350 mg. Ytterligere rensing skjedde ved flash-kromatografi (7g, silikagel) in a similar manner as in Example 8 gave compound (XX) as an amorphous solid in an amount of 350 mg. Further purification occurred by flash chromatography (7g, silica gel)

under anvendelse av CH2Cl3/MeOH (250 ml, 96/4 vol/vol) og bunnfelling av det resulterende faste stoff (Rf = 0,48) fra 5 ml metylenklorid og 50 ml heksan, noe som ga analytisk ren (XX) (314 mg, 35,7%) som et faststoff. using CH2Cl3/MeOH (250 mL, 96/4 vol/vol) and precipitation of the resulting solid (Rf = 0.48) from 5 mL methylene chloride and 50 mL hexane to give analytically pure (XX) (314 mg, 35.7%) as a solid.

NMR (CDC13, 6): 1,93 (s, 3H), 2,26 (bs, 1H), 2,26 (s, 3H), 3,06 (s, 3H), 3,08 (bs, 1H), 3,10 (s, 3H), 3,20 (s, 3H), 3,46 (bd, 1H, J=12, 1Hz), 3,58 (dd, 1H, J=4, 10 Hz), 4,17 (d, 1H, J=12 Hz), 4,38 (t, 1H, J=10 Hz), 4,68 (m, 2H), NMR (CDCl 3 , 6): 1.93 (s, 3H), 2.26 (bs, 1H), 2.26 (s, 3H), 3.06 (s, 3H), 3.08 (bs, 1H ), 3.10 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 3.46 (bd, 1H, J=12, 1Hz), 3.58 (dd, 1H, J=4, 10 Hz) , 4.17 (d, 1H, J=12 Hz), 4.38 (t, 1H, J=10 Hz), 4.68 (m, 2H),

4,76 (dd, 1H, J=4,10 Hz), 7,72 (s, 1H). 4.76 (dd, 1H, J=4.10 Hz), 7.72 (s, 1H).

IR (KBr) u . , cm"1: 3440, 3350, 3190, 3020, 2940, 2910, IT13.K S 1725, 1630, 1550, 1055. IR (KBr) u . , cm"1: 3440, 3350, 3190, 3020, 2940, 2910, IT13.K S 1725, 1630, 1550, 1055.

UV (MeOH)Xmaks, nm: 386og 231UV (MeOH)Xmax, nm: 386 and 231

Analyse beregnet for C19H25<N>5°5<:>c 56'53'H 6,20, N 17,36 Analysis calculated for C19H25<N>5°5<:>c 56'53'H 6.20, N 17.36

Funnet: C 53,90, H 5,13, N 15,81 Found: C 53.90, H 5.13, N 15.81

Eksempel 10Example 10

Forbindelse ( XI)Connection (XI)

7-(n-propyl)amino-9a-metoksymitosan7-(n-propyl)amino-9a-methoxymitosane

Forbindelse (V) (330 mg, 0,74 mM) ble oppløst i 10 ml vannfri metanol og 1,0 ml n-propylamin ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 6 timer ved romtemperatur og i 16 timer ved 0-4°C. Oppløsningsmidlet og overskytende reagens ble dampet inn under redusert trykk og resten flash-kromatografert under anvendelse av silikagel som absorpsjonsmiddel. Den ved eluering med metylenklorid/metanol 30:1 oppnådde Compound (V) (330 mg, 0.74 mM) was dissolved in 10 ml of anhydrous methanol and 1.0 ml of n-propylamine was added. The reaction mixture was stirred for 6 hours at room temperature and for 16 hours at 0-4°C. The solvent and excess reagent were evaporated under reduced pressure and the residue flash chromatographed using silica gel as absorbent. The obtained by elution with methylene chloride/methanol 30:1

blå komponent (Rf = 0,40) ble felt ut igjen fra metylenklorid med heksan og man oppnådde forbindelse (XI) som et amorft, grått pulver (125 mg, 44,5%). blue component (Rf = 0.40) was re-precipitated from methylene chloride with hexane and compound (XI) was obtained as an amorphous gray powder (125 mg, 44.5%).

NMR (pyridin dg,6): 0,80 (t, 3H), 1,42 (m, 2H), 2,11 (s, 3H), 2,74 (bs, 1H), 3,12 (bs, 1H), 3,22 (s, 3H) , 3,36 NMR (pyridine dg,6): 0.80 (t, 3H), 1.42 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.74 (bs, 1H), 3.12 (bs, 1H), 3.22 (s, 3H), 3.36

(q, 2H), 3,60 (d, 1H, J=12 Hz), 3,96 (dd, 1H, J=llHz,(q, 2H), 3.60 (d, 1H, J=12 Hz), 3.96 (dd, 1H, J=11Hz,

4 Hz), 4,54 (d, 1H, J=12 Hz), 5,00 (m, 3H), 5,36 (dd, 4 Hz), 4.54 (d, 1H, J=12 Hz), 5.00 (m, 3H), 5.36 (dd,

1H, J=ll, 4 Hz), 6,90 (t, 1H).1H, J=11, 4 Hz), 6.90 (t, 1H).

IR (KBr)<U>maks/cm"<1>: 3440, 3300, 2960, 2940, 1715, 1630, 1600, 1550, 1510, 1220, 1060. IR (KBr)<U>max/cm"<1>: 3440, 3300, 2960, 2940, 1715, 1630, 1600, 1550, 1510, 1220, 1060.

UV (H20)Xmaks, nm: 372 og 222UV (H20)Xmax, nm: 372 and 222

Analyse beregnet for C18H24<N>4°5<:>C 57'40'H 6,38, N 14,88 Analysis calculated for C18H24<N>4°5<:>C 57'40'H 6.38, N 14.88

Funnet: C 57,28, H 6,41, N 14,08 Found: C 57.28, H 6.41, N 14.08

Eksempel 11Example 11

Forbindelse ( XII)Compound (XII)

7-(2-hydroksyetyl)amino-9a-metoksymitosan7-(2-Hydroxyethyl)amino-9a-methoxymitosane

Forbindelse (V) (330 mg, 0,74 mM) ble oppløst i 5 ml vannfri metanol og det ble tilsatt 2 ml etanolamin. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer og deretter fortynnet med 50 ml vann og ekstrahert med 5 x 60 ml etylacetat. De forenede etylacetatekstrakter ble tørket over Na2S04og konsentrert til en blålig-purpurfarget rest som ved søylekromatografi under anvendelse av 10% metanol i metylenklorid og konsentrering av de samlede fraksjoner inneholdende den blå forbindelse ga 105 mg eller 37% av forbindelse (XII) som et amorft faststoff. Compound (V) (330 mg, 0.74 mM) was dissolved in 5 ml of anhydrous methanol and 2 ml of ethanolamine was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours and then diluted with 50 ml of water and extracted with 5 x 60 ml of ethyl acetate. The combined ethyl acetate extracts were dried over Na 2 SO 4 and concentrated to a bluish-purple residue which by column chromatography using 10% methanol in methylene chloride and concentrating the combined fractions containing the blue compound gave 105 mg or 37% of compound (XII) as an amorphous solid .

NMR (pyridin dg,6): 2,14 (s, 3H), 2,81 (bs, 1H), 3,18 (d, 1H, J=4 Hz), 3,24 (s, 3H), 3,65 (dd, 1H, J=2, 12 Hz), 3,70-4,20 (m, 5H), 4,52 (D, 1H,J=13-Hz), 4,96 (t, 1H, J=12 Hz), 7,38 (t, 1H), 7,58 (bs). NMR (pyridine dg,6): 2.14 (s, 3H), 2.81 (bs, 1H), 3.18 (d, 1H, J=4 Hz), 3.24 (s, 3H), 3 .65 (dd, 1H, J=2, 12 Hz), 3.70-4.20 (m, 5H), 4.52 (D, 1H,J=13-Hz), 4.96 (t, 1H , J=12 Hz), 7.38 (t, 1H), 7.58 (bs).

IR (KBr) umaks, cm"<1>: 3300-3500, 2930, 1710, 1630, 1600, 1540, 1510, 1200, 1055. IR (KBr) umax, cm"<1>: 3300-3500, 2930, 1710, 1630, 1600, 1540, 1510, 1200, 1055.

UV (<H>2<0>)<*>maks, nm: 371 og 221UV (<H>2<0>)<*>max, nm: 371 and 221

Analyse beregnet for C17H.J.O,: C 53, 92 , H 5,82, N 14,80 Analysis calculated for C17H.J.O,: C 53, 92 , H 5.82, N 14.80

Funnet: C 51,30, H 5,88, N 14,80 Found: C 51.30, H 5.88, N 14.80

Eksempel 12Example 12

Forbindelse ( XIII) Compound (XIII)

7-(2-benzyltioetyl)amino-9a-metoksymitosan7-(2-Benzylthioethyl)amino-9a-methoxymitosane

Forbindelse (V) (200 mg, 0,45 mM) ble oppløst i 2 ml metanol, 0,5 ml S-benzyl-2-aminoetantiol ble tilsatt og oppløsningen omrørt ved romtemperatur i 16 timer. Den ved avdamping av oppløsningsmidlet under redusert trykk oppnådde rest ble flash-kromatografert (40 g, silikagel) under anvendelse av 6% metanol/metylenklorid i en mengde av 400 ml som elueringsmiddel. Den blå komponent (Rf ca. 0,5 i 10% MeOH/CH2Cl2) ble isolert som et amorft faststoff i en mengde av 65 mg eller 29,8%. Forbindelsens spektraldata (NMR, IR, UV og massespektrum) var i overensstemmelse med den gitte struktur. Compound (V) (200 mg, 0.45 mM) was dissolved in 2 ml of methanol, 0.5 ml of S-benzyl-2-aminoethanethiol was added and the solution stirred at room temperature for 16 hours. The residue obtained by evaporation of the solvent under reduced pressure was flash chromatographed (40 g, silica gel) using 6% methanol/methylene chloride in an amount of 400 ml as eluent. The blue component (Rf ca. 0.5 in 10% MeOH/CH2Cl2) was isolated as an amorphous solid in an amount of 65 mg or 29.8%. The compound's spectral data (NMR, IR, UV and mass spectrum) were consistent with the given structure.

Analyse beregnet for C24<H>28M4°5<S:>C 59'49'H 5'82, N 11,56 Analysis calculated for C24<H>28M4°5<S:>C 59'49'H 5'82, N 11.56

Funnet: C 59,72, H 5,94, N 11,08 Found: C 59.72, H 5.94, N 11.08

Eksempel 13Example 13

Fremstilling avManufacture of

(A) Til en oppløsning av isopropylformimidat-hydroklorid (1 mmol) i dimetylformamid (DMF), 2 ml, settes det langsomt diisopropyletylamin (2,1 mmol) ved 0°C under en nitrogenatmosfære. Til den resulterende oppløsning settes dråpevis 6-trimetylsilyletylklorformiat ved 0°C. Den resulterende klare oppløsning kalles oppløsning A. (B) En oppløsning av 1 mmol mitomycin C i 5 ml DMF settes til en suspensjon av 1,5 mmol natriumhydrid i 3 ml DMF. (A) To a solution of isopropylformimidate hydrochloride (1 mmol) in dimethylformamide (DMF), 2 ml, is slowly added diisopropylethylamine (2.1 mmol) at 0°C under a nitrogen atmosphere. To the resulting solution is added dropwise 6-trimethylsilylethyl chloroformate at 0°C. The resulting clear solution is called solution A. (B) A solution of 1 mmol mitomycin C in 5 ml DMF is added to a suspension of 1.5 mmol sodium hydride in 3 ml DMF.

Oppløsningen omrøres ved romtemperatur i 20 minutter og avkjøles til -40 til -50°C før tilsetning av oppløsning A The solution is stirred at room temperature for 20 minutes and cooled to -40 to -50°C before adding solution A

(ovenfor). Oppløsningen holdes ved -40°C i en time og settes deretter hen til oppvarming til romtemperatur. Etter henstand ved romtemperatur i ca. 6-18 timer, ble reaksjonsblandingen fortynnet med CI^C^ og filtrert. Den etter inndamping av filtratet oppnådde faste rest kromatograferes på silikagel for å isolere den amidino-beskyttede tittelforbindelse. (C) Den amidino-beskyttende gruppe på det foregående mellom-produkt fjernes ved hjelp av den prosedyre som er offent-liggjort i henhold til Carpino og Tsao ("J. Chem. Soc. Chem. Comm." 358 (1978)) for oppnåelse av usubstituert amidino-tittelforbindelse. (above). The solution is kept at -40°C for one hour and then allowed to warm to room temperature. After resting at room temperature for approx. 6-18 hours, the reaction mixture was diluted with Cl 2 Cl 2 and filtered. The solid residue obtained after evaporation of the filtrate is chromatographed on silica gel to isolate the amidino-protected title compound. (C) The amidino protecting group of the preceding intermediate is removed by the procedure disclosed by Carpino and Tsao ("J. Chem. Soc. Chem. Comm." 358 (1978)) for obtaining the unsubstituted amidino title compound.

Eksempel 14Example 14

Fremstilling avManufacture of

(A) Til en oppløsning av 1 mmol isopropylformimidat-hydroklorid i 2 mlDMFsettes langsomt 21 mmol diisopropyletylamin ved 0°C under en nitrogenatmosfære. Til den resulterende oppløsning settes metyljodid ved 0°C. Den resulterende.oppløsning kalles oppløsning B. (B) Den i eksempel 13(B) gitte prosedyre gjentas under anvendelse av oppløsning B i stedet for oppløsning. A for (A) To a solution of 1 mmol of isopropylformimidate hydrochloride in 2 ml of DMF, slowly add 21 mmol of diisopropylethylamine at 0°C under a nitrogen atmosphere. To the resulting solution is added methyl iodide at 0°C. The resulting solution is called solution B. (B) The procedure given in Example 13(B) is repeated using solution B instead of solution. A for

å oppnå tittelforbindelsen.to achieve the title connection.

Eksempel 15Example 15

En 0,5 M oppløsning av N,N-dimetylklormetyleniminiumklorid fremstilles ved dråpevis tilsetning av oksalylklorid (1,57 g, 12,5 mmol) ved 0°C til en oppløsning av DMF (915 mg, 12,5 mmol) i 25 ml CHCl^, fulgt av omrøring ved romtemperatur i 30 minutter. Separat settes en oppløsning av mitomycin C (334 mg, 1 mmol) i 5 ml DMF til en suspensjon av NaH (36 mg, 1,5 mmol) i 3 ml DMF. Oppløsningen omrøres ved romtemperatur i 20 minutter og avkjøles til -40 til -50°C, og den ovenfor nevnte oppløsning av N,N-dimetylklormetyleniminium-klorid (3 ml, 1,5 mmol) tilsettes deretter. Ytterligere NaH (18 mg, 0,75 mmol) tilsettes etter 10 minutters omrør-ing ved -40°C. Oppløsningen ble holdt ved -40°C i en time og fortynnes deretter med CH2C12og filtreres. Den etter inndamping av filtratet oppnådde rest kromatograferes ved tynnsjiktskromatografi, tic, på silikagel (10% CH30H-CH2C1 som elueringsmiddel). Ekstrahering av det grønne hovedbånd ga 78 mg eller 43%, beregnet på gjenvunnet mitomycin C, av et amorft faststoff hvis NMR-spektrum og tlc-oppførsel var identisk med de for forbindelsen (XIX) fremstilt i eksempel 8. Ekstrahering av det purpurfargede bånd ga 150 mg mitomycin C. Eksempel 16 7(1-mety1-2-(H)-pyridinyliden)amino-9a-metoksymitosan A 0.5 M solution of N,N-dimethylchloromethyleneiminium chloride is prepared by dropwise addition of oxalyl chloride (1.57 g, 12.5 mmol) at 0°C to a solution of DMF (915 mg, 12.5 mmol) in 25 mL CHCl^, followed by stirring at room temperature for 30 minutes. Separately, a solution of mitomycin C (334 mg, 1 mmol) in 5 mL DMF is added to a suspension of NaH (36 mg, 1.5 mmol) in 3 mL DMF. The solution is stirred at room temperature for 20 minutes and cooled to -40 to -50°C, and the above solution of N,N-dimethylchloromethyleneiminium chloride (3 ml, 1.5 mmol) is then added. Additional NaH (18 mg, 0.75 mmol) is added after 10 minutes of stirring at -40°C. The solution was kept at -40°C for one hour and then diluted with CH 2 Cl 2 and filtered. The residue obtained after evaporation of the filtrate is chromatographed by thin-layer chromatography, tic, on silica gel (10% CH3OH-CH2Cl as eluent). Extraction of the major green band gave 78 mg or 43%, calculated on mitomycin C recovered, of an amorphous solid whose NMR spectrum and tlc behavior were identical to those of compound (XIX) prepared in Example 8. Extraction of the purple band gave 150 mg mitomycin C. Example 16 7(1-methyl-2-(H)-pyridinylidene)amino-9a-methoxymitosane

Til en blanding av mitomycin C (242 mg, 0,725 mmol) og To a mixture of mitomycin C (242 mg, 0.725 mmol) and

NaH (43,5 mg, 1,81 mmol) ble det satt 4 ml DMF. Etter om-røring i 15 minutter ble det tilsatt 2-klor-l-metylpyridiniumjodid (370 mg, 1,45 mmol) ved romtemperatur. Oppløsningen ble omrørt i 1,5 timer og deretter fortynnet med etylacetat (EtOAc) og filtrert. Den etter inndamping av filtratet oppnådde rest ble kromatografert på silikagel (5% CH^OH-CH2Ci2 som elueri'ngsmiddei) .<v>Dét mindré produkt i en mengde av 12 mg var forbindelse (XIX) (eksempel 8). Hovedproduktet i eri mengde av 75 mg ble ytterligere renset ved hjelp av silikagel-tlc (10% CH30H-CH2C12) for oppnåelse av 6 mg eller 2% av tittelforbindelsen. To NaH (43.5 mg, 1.81 mmol) was added 4 ml of DMF. After stirring for 15 minutes, 2-chloro-1-methylpyridinium iodide (370 mg, 1.45 mmol) was added at room temperature. The solution was stirred for 1.5 h and then diluted with ethyl acetate (EtOAc) and filtered. The residue obtained after evaporation of the filtrate was chromatographed on silica gel (5% CH^OH-CH2Cl2 as eluent).<v>The minor product in an amount of 12 mg was compound (XIX) (Example 8). The major product in the amount of 75 mg was further purified by silica gel-tlc (10% CH 3 OH-CH 2 Cl 2 ) to obtain 6 mg or 2% of the title compound.

NMR (pyridin dg, &) : 2,11 (s, 3H), 2,76 (bs, 1H), 3,20NMR (pyridine dg, &) : 2.11 (s, 3H), 2.76 (bs, 1H), 3.20

(m, 1H), 3,26 (s, 3H), 3,49 (s, 3H), 3,63 (dd, 1H, J= (m, 1H), 3.26 (s, 3H), 3.49 (s, 3H), 3.63 (dd, 1H, J=

13, 1 Hz), 4,01 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 4,51 (d, 1H, J=13Hz), 13, 1 Hz), 4.01 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 4.51 (d, 1H, J=13Hz),

5,10 (t, 1H, J=10 Hz), 5,43 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 5,99 (dt, 1H, J=9, 2 Hz), 6,09 (dd, 1H, J=9, 1 Hz), 6,95 (dd, 1H, J=9, 7, 2 Hz), 7,32 (dd, 1H, J= 7, 1 Hz). 5.10 (t, 1H, J=10 Hz), 5.43 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 5.99 (dt, 1H, J=9, 2 Hz), 6.09 ( dd, 1H, J=9, 1 Hz), 6.95 (dd, 1H, J=9, 7, 2 Hz), 7.32 (dd, 1H, J= 7, 1 Hz).

Eksempel 17 Example 17

7-[(metylaminometylen)amino]-9a-metoksymitosan7-[(methylaminomethylene)amino]-9a-methoxymitosane

Natriumhydrid (12 mg, 0,5 mmol) settes under nitrogenatmosfære til en oppløsning av mitomycin C (167 mg, 0,5 mmol) i 2 ml heksametylfosforamid. Til denne oppløsning settes N-metylformimidoylklorid (19 mg, 0,25 mmol, N.H. Bosshard og H. Zollinger, "Heiv. Chim.Acta", 42, 1659 (1959)). Opp-løsningen omrøres ved romtemperatur i 10 minutter og deretter tilsettesNaH (6 mg, 0,25mmol) og N-metylformimidoylklorid (9,5 mg, 0,13 mmol). Etter omrøring i 6-12 timer fortynnes oppløsningen med etylacetat og filtreres. Avdamping av oppløsningsmidlet fulgt av kromatografisk rensing av resten gir tittelforbindelsen. Sodium hydride (12 mg, 0.5 mmol) is added under a nitrogen atmosphere to a solution of mitomycin C (167 mg, 0.5 mmol) in 2 ml of hexamethylphosphoramide. To this solution is added N-methylformimidoyl chloride (19 mg, 0.25 mmol, N.H. Bosshard and H. Zollinger, "Heiv. Chim. Acta", 42, 1659 (1959)). The solution is stirred at room temperature for 10 minutes and then NaH (6 mg, 0.25 mmol) and N-methylformimidoyl chloride (9.5 mg, 0.13 mmol) are added. After stirring for 6-12 hours, the solution is diluted with ethyl acetate and filtered. Evaporation of the solvent followed by chromatographic purification of the residue affords the title compound.

Eksempel 18Example 18

Forbindelse ( XXI) Connection ( XXI)

9a-metoksy-7-(1-morfolinometylen)aminomitosan9α-Methoxy-7-(1-morpholinomethylene)aminomitosane

Til mitomycin C (600 mg, 1,8 mM) suspendert i 30 ml kloroform, settes 4-dietoksymetylmorfolin (12,5 ml) og den resulterende suspensjon oppvarmes til 58°C i 48 timer. Ved avslutning av de 48 timer viste tic (20% MeOH i CH2C12) at reaksjonen var ufullstendig. Oppløsningen ble konsentrert under redusert trykk og til den resulterende sirup ble det satt 100 ml vann. Etter omrøring i 20 minutter ble den mørkegrønne oppløsning ekstrahert med 5 x 50 ml metylenklorid og den kombinerte ekstrakt ble tørket og konsentrert til en sirup. Til denne sirup i 20 ml metanol ble det satt 6,5 ml aminodifenylmetan og den resulterende oppløsning omrørt ved 30-35°C i 18 timer. Tynnsjiktskromatografi (20% MeOH i CH2C12) viste en grønn hovedsone med en mindre, langsommere og purpurfarget sone. Oppløsningen ble konsentrert under redusert trykk og den resulterende sirup renset ved hjelp av den vanlige flash-kromatografiteknikk for å oppnå tittelforbindelsen som et mørkegrønt, amorft faststoff i en mengde av 75 mg tilsvarende 10%. En analytisk prøve ble oppnådd ved utfelling fra en metylenkloridoppløsning med n-heksan. To mitomycin C (600 mg, 1.8 mM) suspended in 30 ml of chloroform is added 4-diethoxymethylmorpholine (12.5 ml) and the resulting suspension is heated to 58°C for 48 hours. At the end of the 48 hours, tic (20% MeOH in CH 2 Cl 2 ) showed that the reaction was incomplete. The solution was concentrated under reduced pressure and to the resulting syrup was added 100 ml of water. After stirring for 20 minutes, the dark green solution was extracted with 5 x 50 mL of methylene chloride and the combined extract was dried and concentrated to a syrup. To this syrup in 20 ml of methanol was added 6.5 ml of aminodiphenylmethane and the resulting solution stirred at 30-35°C for 18 hours. Thin layer chromatography (20% MeOH in CH 2 Cl 2 ) showed a major green zone with a smaller, slower purple zone. The solution was concentrated under reduced pressure and the resulting syrup purified by the usual flash chromatography technique to obtain the title compound as a dark green amorphous solid in an amount of 75 mg corresponding to 10%. An analytical sample was obtained by precipitation from a methylene chloride solution with n-hexane.

NMR (pyridin dg,6): 2,16 (s,.3H), 2,76 (dd, 1H, J=5 og 1 Hz), 3,16 (d, 1H,J=5Hz), 3,24 (s, 3H), -3,28-3,80 (m, 10H), 4,02 (dd, 1H,J=10og 4Hz), 4,40 (d, 1H, J=12 Hz), 5,06 (t, 1H, J=10Hz), ■ 5,46 (dd, 1H, J=10 og 4 Hz), 7,90 (s, 1H). NMR (pyridine dg,6): 2.16 (s,.3H), 2.76 (dd, 1H, J=5 and 1 Hz), 3.16 (d, 1H,J=5Hz), 3.24 (s, 3H), -3.28-3.80 (m, 10H), 4.02 (dd, 1H,J=10and 4Hz), 4.40 (d, 1H, J=12 Hz), 5, 06 (t, 1H, J=10Hz), ■ 5.46 (dd, 1H, J=10 and 4 Hz), 7.90 (s, 1H).

IR (KBr)"maks,<c>m<_1>: 3360, 3280, 2960, 2920, 1720, 1600, 1520, 1230, 1050. IR (KBr)"max,<c>m<_1>: 3360, 3280, 2960, 2920, 1720, 1600, 1520, 1230, 1050.

UV (MeOH) *maks: 384 og 234 UV (MeOH) *max: 384 and 234

Analyse beregnet for C20H25N5°6<:>C 55'64'H 5'80'N 16'23 Analysis calculated for C20H25N5°6<:>C 55'64'H 5'80'N 16'23

Funnet: C 55,07, H 5,55, N 15,88 Found: C 55.07, H 5.55, N 15.88

Eksempel 19Example 19

Forbindelse ( XXII) Connection ( XXII)

7-(1-pyrrolidinylmetylen)amino-9a-metoksymitosan7-(1-pyrrolidinylmethylene)amino-9a-methoxymitosane

En 0,5 M oppløsning av pyrrolidinylklormetyleniminiumklorid ble fremstilt ved dråpevis tilsetning av oksalylklorid (3,17 g, 25 mmol) ved 0°C til en oppløsning av 1-formylpyrrolidin (2,48 g, 25 mmol) i 50 ml CHCl^, fulgt av omrøring ved romtemperatur i 30 minutter. Natriumhydrid (24 mg, 1 mmol) ble tilsatt separat under nitrogenatmosfære til en oppløsning av mitomycin C (334 mg, 1 mmol) i 3 ml 1-formylpyrrolidin. A 0.5 M solution of pyrrolidinylchloromethyleneiminium chloride was prepared by dropwise addition of oxalyl chloride (3.17 g, 25 mmol) at 0°C to a solution of 1-formylpyrrolidine (2.48 g, 25 mmol) in 50 mL of CHCl^, followed by stirring at room temperature for 30 minutes. Sodium hydride (24 mg, 1 mmol) was added separately under a nitrogen atmosphere to a solution of mitomycin C (334 mg, 1 mmol) in 3 mL of 1-formylpyrrolidine.

Etter omrøring i 20 minutter ved romtemperatur ble oppløs-ningen avkjølt til -40 til -50°C og den ovenfor angitte iminiumsaltoppløsning (1 ml, 0,5 mmol) ble tilsatt. Til denne blanding ble det skiftevis i 10 minutters intervaller til 12 mg (0,5 mmol) NaH, 0,5 ml (0,25 mmol) av iminiumsaltopp-løsningen, 6 mg (0,25 mmol)NaH, 0,25 ml (0,125 mmol) av iminiumsaltoppløsningen, og endelig 3 mg (0,125 mmol) NaH After stirring for 20 minutes at room temperature, the solution was cooled to -40 to -50°C and the above iminium salt solution (1 ml, 0.5 mmol) was added. To this mixture were added alternately at 10 minute intervals to 12 mg (0.5 mmol) NaH, 0.5 ml (0.25 mmol) of the iminium salt solution, 6 mg (0.25 mmol) NaH, 0.25 ml (0.125 mmol) of the iminium salt solution, and finally 3 mg (0.125 mmol) of NaH

og 0,125 ml (0,063 mmol) av iminiumsaltoppløsningen. Etter and 0.125 mL (0.063 mmol) of the iminium salt solution. After

omrøring i 30 minutter ved -30°C ble blandingen oppvarmet til romtemperatur. Den ble fortynnet med etylacetat og uorganisk salt filtrert av. Den oppnådde rest ble kromatografert etter avdamping av oppløsningsmidlet ved tynnsjiktskromatografi på silikagel (10% CH30H-CH2C12). Ekstrahering av det grønne bånd ga 120 mg eller 15% av tittelforbindelsen. stirring for 30 minutes at -30°C, the mixture was warmed to room temperature. It was diluted with ethyl acetate and inorganic salt filtered off. The obtained residue was chromatographed after evaporation of the solvent by thin-layer chromatography on silica gel (10% CH3OH-CH2Cl2). Extraction of the green band gave 120 mg or 15% of the title compound.

NMR (pyridin dg, 6): 1,58 (m, 4H), 2,29 (s, 3H), 2,73 (m, 1H), 3,06-3,50 (m, 8H), 3,59 (dd, 1H, J=13, 1Hz), 4,03 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 4,44 (d, 1H, J=12 Hz), 5,05 (t, 1H, J= 10 Hz), 5,45 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 8,04 (s, 1H). NMR (pyridine dg, 6): 1.58 (m, 4H), 2.29 (s, 3H), 2.73 (m, 1H), 3.06-3.50 (m, 8H), 3, 59 (dd, 1H, J=13, 1Hz), 4.03 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 4.44 (d, 1H, J=12 Hz), 5.05 (t, 1H, J= 10 Hz), 5.45 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 8.04 (s, 1H).

IR (KBr)"maks,<c>m"<1>:3420, 3280, 2960-2870, 1715, 1625, 1560, 1300, 1055. IR (KBr)"max,<c>m"<1>:3420, 3280, 2960-2870, 1715, 1625, 1560, 1300, 1055.

Eksempel 20 Example 20

7-[N-metyl-N-(metylamino)metyl]amino-9a-metoksymitosan 7-[N-methyl-N-(methylamino)methyl]amino-9a-methoxymitosane

Man gjentok fremgangsmåten ifølge eksempel 17 'under anvendelse av 9a-metoksy-7-(N-metylamino)mitosan (Matsui et al., "The Journal of Antibiotics",XXI, 189-198 (1968)) i stedet for mitomycin C i tilsvarende molar mengde. The procedure of Example 17 was repeated using 9α-methoxy-7-(N-methylamino)mitosane (Matsui et al., "The Journal of Antibiotics", XXI, 189-198 (1968)) instead of mitomycin C in equivalent molar amount.

Eksempel 21Example 21

Forbindelse ( XXIII) Connection ( XXIII)

7 - [ 1- ( dimetylamino) etyl iden ] amino-N11^- [ 1- ( dimetylamino) - etyliden]-9-metoksymitosan 7 - [ 1-( dimethylamino) ethylidene ] amino-N11^- [ 1-( dimethylamino) - ethylidene]-9-methoxymitosane

En suspensjon av 600 mg (1,79 mM) mitomycin C i 2 ml metanol ble fremstilt og behandlet med 3 ml N,N-dimetylacetamid-dimetylacetal. Suspensjonen ble oppvarmet til 75-80°C under omrøring i 2 timer. På dette trinn viste tic (CE^C^/metanol 10:1) at nesten alt mitomycin C var forbrukt ved reaksjonen. Produktet fremkom som en grønn sone. Oppløsningsmidlet A suspension of 600 mg (1.79 mM) mitomycin C in 2 ml of methanol was prepared and treated with 3 ml of N,N-dimethylacetamide-dimethyl acetal. The suspension was heated to 75-80°C with stirring for 2 hours. At this stage, tic (CE₂C₂/methanol 10:1) showed that almost all of the mitomycin C was consumed by the reaction. The product appeared as a green zone. The solvent

og flyktige stoffer ble fjernet ved konsentrering av reaksjonsblandingen til tørr tilstand under redusert trykk, and volatiles were removed by concentrating the reaction mixture to dryness under reduced pressure,

noe som ga en sirup som ble oppløst i metylenklorid og fylt på en silikagelsøyle (40 g silikagel), og søylen utviklet med 1% metanol i 200 ml metylenklorid, 2% metanol i 200 ml metylenklorid og 5% metanol i 400 ml metylenklorid. Frak-sjonene inneholdende den grønne sone og ble forenet og konsentrert til et amorft faststoff som veiet 110 mg tilsvarende 13%. Dette materialet ble oppløst i 2 ml aceton og bunnfelt fra oppløsningen ved tilsetning av heksan. Produktet ble samlet ved filtrering. which gave a syrup which was dissolved in methylene chloride and loaded onto a silica gel column (40 g silica gel), and the column developed with 1% methanol in 200 ml methylene chloride, 2% methanol in 200 ml methylene chloride and 5% methanol in 400 ml methylene chloride. The fractions containing the green zone were combined and concentrated to an amorphous solid weighing 110 mg corresponding to 13%. This material was dissolved in 2 ml of acetone and precipitated from the solution by the addition of hexane. The product was collected by filtration.

Analyse beregnet for C23H32<N>6°5<:>C 58'46'H 6'83'N 17,79 Analysis calculated for C23H32<N>6°5<:>C 58'46'H 6'83'N 17.79

Funnet: C 58,89, H 6,89, N 17,64 Found: C 58.89, H 6.89, N 17.64

UV (MeOH) X mak. s, nm: 235, 364.UV (MeOH) X max. pp, nm: 235, 364.

IR (KBr) u ITldK S, cm"<1>: 3440, 3295, 2925, 1770, 1660,1620, IR (KBr) u ITldK S, cm"<1>: 3440, 3295, 2925, 1770, 1660,1620,

1580, 1550, 1300, 1055. 1580, 1550, 1300, 1055.

"<*>"H NMR-spekteret i pyridin d^stemmer overens med strukturen av titelforbindelsen. The H NMR spectrum in pyridine is consistent with the structure of the title compound.

Eksempel 22Example 22

Forbindelse ( XXIV) Connection ( XXIV)

7-[1-(dimetylamino)etylidenamino1-9a-metoksymitosan 7-[1-(dimethylamino)ethylideneamino1-9a-methoxymitosane

En oppløsning av 100 mg (0,21 mM) av forbindelse (XXIII) A solution of 100 mg (0.21 mM) of compound (XXIII)

i 2 ml kloroform ble tilsatt til 2 ml aminodifenylmetan og oppløsningen ble oppvarmet til ca. 55-60°C i timer. in 2 ml of chloroform was added to 2 ml of aminodiphenylmethane and the solution was heated to approx. 55-60°C for hours.

På dette trinn forble spormengder av forbindelse (XXIII) i reaksjonsblandingen, men den ble allikevel konsentrert og resten kromatografert over nøytralt aluminiumoksyd under anvendelse av gradienteluering ut fra metylenklorid og av-sluttet med metanol/metylenklorid 2,5:1. Den grønne .hovedsone ble isolert som et amorft, grønt faststoff i en mengde av 25 mg tilsvarende 29,4%. Dette materialet ble renset ved oppløsning i aceton og tilsetning av heksan til aceton-oppløsningen til bunnfelling. Produktet ble samlet ved filtrering og tørket. At this stage, trace amounts of compound (XXIII) remained in the reaction mixture, but it was nevertheless concentrated and the residue chromatographed over neutral alumina using gradient elution from methylene chloride and terminated with methanol/methylene chloride 2.5:1. The green main zone was isolated as an amorphous green solid in an amount of 25 mg corresponding to 29.4%. This material was purified by dissolving in acetone and adding hexane to the acetone solution to precipitate. The product was collected by filtration and dried.

Analyse beregnet for C25H32<N>6°5<:>C 56'58'H 6'20'N 17,37 Funnet: C 55,71, H 6,34, N 15,23 Analysis calculated for C25H32<N>6°5<:>C 56'58'H 6'20'N 17.37 Found: C 55.71, H 6.34, N 15.23

UV (H2<0>)<*>maks, nm: 374, 230 (skulder)UV (H2<0>)<*>max, nm: 374, 230 (shoulder)

IR (KBr) umaks, cm"<1>: 3420, 3350, 3280, 2920, 2710, 1610, 1540, 1300, 1050. IR (KBr) umax, cm"<1>: 3420, 3350, 3280, 2920, 2710, 1610, 1540, 1300, 1050.

"'"H NMR-spekteret i pyridin d^stemmer overens med strukturen. The H NMR spectrum in pyridine is consistent with the structure.

Eksempel 23Example 23

Forbindelse ( XXV) Connection (XXV)

7-[(l-metyl-2-pyrrolidinyliden)amino]-N<10->[(l-metyl-2-pyrrolidinyliden)amino]-9a-metoksymitosan 7-[(1-methyl-2-pyrrolidinylidene)amino]-N<10->[(1-methyl-2-pyrrolidinylidene)amino]-9a-methoxymitosane

2,2-dimetoksy-l-metylpyrrolidin (H. Eilingsfeld et al., "Angew. Chem.", 72, 836 (1960)), 1,5 g (10,3 mM) og 280 2,2-dimethoxy-1-methylpyrrolidine (H. Eilingsfeld et al., "Angew. Chem.", 72, 836 (1960)), 1.5 g (10.3 mM) and 280

mg mitomycin C (0,34 mM) i 20 ml metanol ble oppvarmet til 55°C i 5 timer. Reaksjonsblandingen ble prøvet ved tynnsjiktskromatografi på en aluminiumoksydplate under anvendelse av metylenklorid/metanol 97:3 som oppløsningsmiddel. tic viste en stor grønn flekk som representerte produktet og en liten blå flekk som representerte mitomycin C utgangsmaterialet. Oppløsningsmidlet ble' fjernet ved destillasjon i vakuum ved 40°C og resten ble oppløst i metylenklorid og fylt på en 4,5 cm søyle inneholdende 150 g aluminiumoksyd. Eluering med 50 ml metylenklorid fulgt av 600 ml 1 %-ig metanol i metylenklorid. Store urenheter ble fjernet, men ingen rene fraksjoner ble isolert. Det kombinerte elueringsmiddel ble konsentrert ved destillasjon ved 20°C til en oljeaktig rest som tilsynelatende inneholdt noe 2,2-dimetoksy-l-metylpyrrolidin . Dette materialet ble kromatografert igjen på en aluminiumoksydsøyle (25 g aluminiumoksyd) under anvendelse av 200 ml metylenklorid etterfulgt av 100 ml 1% metanol i metylenklorid. Dette resulterte i fjerning av 2,2-dimetoksy-l-metylpyrrolidin og resulterte i et antall fraksjoner inneholdende mindre urenheter og adskillig rene fraksjoner, som var bekreftet av tic (en grønn flekk) og som utgjorde det ønskede produkt i et utbytte av 53 mg. mg of mitomycin C (0.34 mM) in 20 ml of methanol was heated to 55°C for 5 hours. The reaction mixture was tested by thin layer chromatography on an alumina plate using methylene chloride/methanol 97:3 as solvent. tic showed a large green spot representing the product and a small blue spot representing the mitomycin C starting material. The solvent was removed by distillation in vacuo at 40°C and the residue was dissolved in methylene chloride and loaded onto a 4.5 cm column containing 150 g of alumina. Elution with 50 ml of methylene chloride followed by 600 ml of 1% methanol in methylene chloride. Major impurities were removed, but no pure fractions were isolated. The combined eluent was concentrated by distillation at 20°C to an oily residue which apparently contained some 2,2-dimethoxy-1-methylpyrrolidine. This material was chromatographed again on an alumina column (25 g alumina) using 200 ml of methylene chloride followed by 100 ml of 1% methanol in methylene chloride. This resulted in the removal of 2,2-dimethoxy-1-methylpyrrolidine and resulted in a number of fractions containing minor impurities and several pure fractions, which were confirmed by tic (a green spot) and which constituted the desired product in a yield of 53 mg .

Analyse beregnet for5H32<N>6°5•<0>'85H2°:Analysis calculated for 5H32<N>6°5•<0>'85H2°:

C 58,66, H 6,64, H 16,42 Funnet: C 58,63, H 6,46, H 16,50 C 58.66, H 6.64, H 16.42 Found: C 58.63, H 6.46, H 16.50

UV (MeOH) X , nm: 354, 239UV (MeOH) X , nm: 354, 239

maks _,max _,

IR (KBr) umaks, cm :3300, 3220, 2940, 1660, 1620, 1550, 1290, 1055. IR (KBr) umax, cm :3300, 3220, 2940, 1660, 1620, 1550, 1290, 1055.

"'"H-NMR-spekteret i pyridin dg stemmer overens med strukturen i tittelforbindelsen. "'"The H-NMR spectrum of pyridine dg is consistent with the structure of the title compound.

Eksempel 24 Example 24

7-[(l-metyl-2-pyrrolidinyliden)amino]-9a-metoksymitosan 7-[(1-methyl-2-pyrrolidinylidene)amino]-9a-methoxymitosane

En oppløsning av 80 mg (0,16 mM) av forbindelsen (XXV) og 0,48 ml n-butylamin i 15 ml kloroform ble oppvarmet under tilbakeløpskoking i 48 timer. tic (metanol/metylenklorid, 2% på aluminiumoksyd) ga en stor grønn flekk og en liten foranliggende blå flekk samt en liten etterfølgende rød flekk som alle svarte til utgangsmaterialet. Reaksjonsopp-løsningen ble fylt på en søyle inneholdende 50 g aluminiumoksyd og eluert med 20 ml 1% metanol i metylenklorid fulgt av 400 ml 2% metanol i metylenklorid.- De fraksjoner som inneholdt en enkelt stor grønn komponent som vist ved tic, ble kombinert og konsentrert til en rest av det ønskede produkt i en mengde av 24 mg. A solution of 80 mg (0.16 mM) of the compound (XXV) and 0.48 ml of n-butylamine in 15 ml of chloroform was heated under reflux for 48 hours. tic (methanol/methylene chloride, 2% on aluminum oxide) gave a large green spot and a small preceding blue spot as well as a small trailing red spot which all corresponded to the starting material. The reaction solution was loaded onto a column containing 50 g of alumina and eluted with 20 ml of 1% methanol in methylene chloride followed by 400 ml of 2% methanol in methylene chloride. The fractions containing a single large green component as shown by tic were combined and concentrated to a residue of the desired product in an amount of 24 mg.

NMR (pyridin dg, 6): 1,72 (q, 2H), 2,04 (s, 3H), 2,16NMR (pyridine dg, 6): 1.72 (q, 2H), 2.04 (s, 3H), 2.16

(q, 2H), 2,72 (bs, 1H), 2,84 (s, 3H), 3,12 (m, 3H), (q, 2H), 2.72 (bs, 1H), 2.84 (s, 3H), 3.12 (m, 3H),

3,24 (s, 3H), 3,60 (dd, 1H, J=14, 2Hz), 4,00 (dd, 1H, j=12, 6 Hz), 4,40 (d, 1H, J=14 Hz), 5,04 (t, 1H, J=14Hz), 3.24 (s, 3H), 3.60 (dd, 1H, J=14, 2Hz), 4.00 (dd, 1H, j=12, 6 Hz), 4.40 (d, 1H, J= 14 Hz), 5.04 (t, 1H, J=14Hz),

5,38 (dd, 1H, J=12, 6 Hz), 7,48 (bs, 2H). 5.38 (dd, 1H, J=12, 6 Hz), 7.48 (bs, 2H).

Eksempel 25Example 25

Forbindelse ( XXVI) Connection (XXVI)

7-[(metoksyamino)metylen]amino-9a-metoksymitosan 7-[(Methoxyamino)methylene]amino-9α-methoxymitosane

En oppløsning av forbindelse (XIX) 660 mg (1,7 mM) i 10 ml metanol ble fremstilt og 170 mg (2,0 mM) metoksyamin-hydroklorid ble tilsatt. Oppløsningen ble omrørt ved 10°C i 3 timer og ved romtemperatur i 2 timer. tic viste kun et spor av ikke omsatt forbindelse (XIX). En sort utfelling som ble dannet ved henstand, ble samlet og vasket med aceton og utbyttet av det ønskede produkt var 380 mg eller 57%. A solution of compound (XIX) 660 mg (1.7 mM) in 10 ml of methanol was prepared and 170 mg (2.0 mM) of methoxyamine hydrochloride was added. The solution was stirred at 10°C for 3 hours and at room temperature for 2 hours. tic showed only a trace of unreacted compound (XIX). A black precipitate formed on standing was collected and washed with acetone and the yield of the desired product was 380 mg or 57%.

Analyse beregnet for<C>]_7H2i<N>5°6<:>c 52'19'H 5'40',N 17,90 Analysis calculated for <C>]_7H2i<N>5°6<:>c 52'19'H 5'40',N 17.90

Funnet: C 51,64, H 5,40, N 17,83 Found: C 51.64, H 5.40, N 17.83

UV (MeOH)<x>maks, nm: 376, 242UV (MeOH)<x>max, nm: 376, 242

IR (KBr) umaks, cm"<1>: 3440, 3250, 3140, 2920, 1730, 1645, 1615, 1560, 1450, 1320, 1050. IR (KBr) umax, cm"<1>: 3440, 3250, 3140, 2920, 1730, 1645, 1615, 1560, 1450, 1320, 1050.

"*"H NMR-spekteret i pyridin d^er i overensstemmelse med strukturen av ententittelforbindelsen eller dens tautomer hva angår C-7, dvs. The "*"H NMR spectrum in pyridine d^ is consistent with the structure of the title compound or its tautomer with respect to C-7, i.e.

Eksempel 26 Example 26

Forbindelse ( XXVII) Connection (XXVII)

7-[(benzyloksyamino)metylen]amino-9a-metoksymitosan 7-[(benzyloxyamino)methylene]amino-9a-methoxymitosane

En oppløsning av forbindelse (XIX), 100 mg (0,26 mM) i 2 ml metanol inneholdende 0,5 ml trietylamin ble fremstilt og dertil ble det satt 400 mg (2,5 mM) O-benzylhydroksylamin-hydroklorid. Man lot reaksjonen fortsette i 2,5 timer ved romtemperatur. tic (Cl^C^/metanol 10:1) viste en stor oransjebrun sone før den grønne sone, idet den sistnevnte tilsvarte forbindelsen (XIX). Reaksjonsblandingen ble konsentrert til en rest som ble flash-kromatografert over 20 g silikagel under anvendelse av CI^C^:metanol 20:1 som elueringsmiddel. Den store brune sonen som utgjorde det ønskede produkt ble samlet som et amorft faststoff i en mengde av 80 mg eller 65,6%. ' A solution of compound (XIX), 100 mg (0.26 mM) in 2 ml of methanol containing 0.5 ml of triethylamine was prepared and thereto was added 400 mg (2.5 mM) of O-benzylhydroxylamine hydrochloride. The reaction was allowed to continue for 2.5 hours at room temperature. tic (Cl^C^/methanol 10:1) showed a large orange-brown zone before the green zone, the latter corresponding to compound (XIX). The reaction mixture was concentrated to a residue which was flash chromatographed over 20 g of silica gel using Cl₂C₂:methanol 20:1 as eluent. The large brown zone constituting the desired product was collected as an amorphous solid in an amount of 80 mg or 65.6%. '

Analyse beregnet for<C>23<H>25<N>5°6<:>C 59'10'H 5'35'N 14,97 Analysis calculated for<C>23<H>25<N>5°6<:>C 59'10'H 5'35'N 14.97

Funnet: C 58,43, H 5,48, N 14,62 Found: C 58.43, H 5.48, N 14.62

UV (MeO<H>)<x>maks, nm: 376, 245, 209UV (MeO<H>)<x>max, nm: 376, 245, 209

IR (KBr) u maK, s, cm"<1>: 3460, 3300, 2945, 2920, 1745, 1720, 1570, 1275, 1220, 1060. IR (KBr) u maK, s, cm"<1>: 3460, 3300, 2945, 2920, 1745, 1720, 1570, 1275, 1220, 1060.

NMR-spekteret i pyridin d^ er i overensstemmelse med strukturen av enten titelforbindelsen eller dens tautomer ved C-7, The NMR spectrum in pyridine d^ is consistent with the structure of either the title compound or its tautomer at C-7,

dvs. i.e.

Uomsatt utgangsmateriale, forbindelse (XIX)-, i en mengde av 10 mg, ble gjenvunnet. Unreacted starting material, compound (XIX)-, in an amount of 10 mg, was recovered.

Eksempel 27Example 27

Forbindelse ( XXVIII) Connection ( XXVIII)

7-(1,3-dimetyl-2-imidazolinyliden)-9a-metoksymitosan7-(1,3-Dimethyl-2-imidazolinylidene)-9a-methoxymitosane

Mitomycin C, 0,34 g (1 mmol) ble oppløst i 5 ml 1,3-dimetyl-2-imidazolin og 0,1 g natriumhydrid (50% i olje, 2,08 mmol) ble satt til ved romtemperatur. Blandingen ble holdt ved romtemperatur i 20 minutter og deretter avkjølt i et is-saltbad (-15°C). Blandingen ble holdt i 10 minutter ved denne temperatur, og deretter ble det tilsatt 0,65 g (2 mmol) 2-klor-1,3-dimetyl-4,5-dihydro-(3H)-imidazoliminiumklorid. Det hele ble holdt ved -15°C i 1 time og deretter fortynnet med etylacetat og kromatografert på en aluminiumoksydsøyle. Søylen fortynnes med metylenklorid, fulgt av metylenklorid inneholdende 2% vol/vol metanol. Det oppnås en grønnfarget fraksjon som består av det ønskede produkt som ytterligere renses ved kromatografi på aluminiumoksyd under anvendelse av metylenklorid inneholdende 10% vol/vol metanol, i et utbytte av 20 mg eller 5%. Mitomycin C, 0.34 g (1 mmol) was dissolved in 5 ml of 1,3-dimethyl-2-imidazoline and 0.1 g of sodium hydride (50% in oil, 2.08 mmol) was added at room temperature. The mixture was kept at room temperature for 20 minutes and then cooled in an ice-salt bath (-15°C). The mixture was kept for 10 minutes at this temperature, and then 0.65 g (2 mmol) of 2-chloro-1,3-dimethyl-4,5-dihydro-(3H)-imidazoliminium chloride was added. The whole was kept at -15°C for 1 hour and then diluted with ethyl acetate and chromatographed on an alumina column. The column is diluted with methylene chloride, followed by methylene chloride containing 2% vol/vol methanol. A green colored fraction consisting of the desired product is obtained which is further purified by chromatography on alumina using methylene chloride containing 10% vol/vol methanol, in a yield of 20 mg or 5%.

Analyse beregnet for<C>^0<H>26N6°5'1-1/4H2°:Analysis calculated for <C>^0<H>26N6°5'1-1/4H2°:

C 53,03, H 6,34, N 18,55 Funnet: C 52,68, H 6,21, N 18,15 C 53.03, H 6.34, N 18.55 Found: C 52.68, H 6.21, N 18.15

NMR (pyridin-d5, 6): 2,32 (s, 3H), 2,47 (s, 3H), 2,59 (s, 3H), 2,74 (m, 1H), 3,03-3,32 (m, 5H), 3,26 (s, 3H), 3,66 (bd, 1H, J-12 Hz), 4,02 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 4,75 (d, 1H, J=12 Hz), 5,09 (bt, 1H, J=ll Hz), 5,44 (dd, 1H, J=ll,~4 Hz). NMR (pyridine-d5,6): 2.32 (s, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.59 (s, 3H), 2.74 (m, 1H), 3.03-3 .32 (m, 5H), 3.26 (s, 3H), 3.66 (bd, 1H, J-12 Hz), 4.02 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 4.75 (d, 1H, J=12 Hz), 5.09 (bt, 1H, J=11 Hz), 5.44 (dd, 1H, J=11,~4 Hz).

IR (KBr): 3400, 3280, 2930, 1700, 1610, 1480, 1330, IR (KBr): 3400, 3280, 2930, 1700, 1610, 1480, 1330,

1055 cm"<1>. 1055 cm"<1>.

UV (MeOH, xmaks)= 600,375, 252 (sh), 222 nm.UV (MeOH, xmax) = 600.375, 252 (sh), 222 nm.

Eksempel 28Example 28

Forbindelse ( XXIX) Connection (XXIX)

7-[(1,3-dimetyltetrahydropyrimidinyliden)amino]-9a-metoksy-mitosan 7-[(1,3-dimethyltetrahydropyrimidinylidene)amino]-9a-methoxymitosane

Natriumhydrid (50% oljedispersjon, 200 mg, 4,2 mmol) ble tilsatt under nitrogen til en oppløsning av mitomycin C (680 mg, 2 mmol) i 8 ml 1,3-dimety1-3,4,5,6-tetrahydro(1H,3H)-2-pyri-midinon. Blandingen holdes i 20 minutter ved romtemperatur og avkjøles deretter til 25°C. 2-klor-l,3-dimetyl-2, 3,4,5-tetrahydro-pyimidiniumklori, 0,73 g (4 mmol) ble deretter tilsatt, og blandingen holdt ved -25°C i 3 timer. Den fortynnes deretter med etylacetat og 2 ml metanol. Blandingen fylles uten ytterligere behandling på en tørr kromatografisk aluminiumoksydsøyle og elueres først med metylenklorid og deretter med 2% vol/vol metanol/metylenklorid, noe som gir det ønskede produkt i en mengde av 0,35 g tilsvarende 39,5% og med smeltepunkt 138-140°C. Sodium hydride (50% oil dispersion, 200 mg, 4.2 mmol) was added under nitrogen to a solution of mitomycin C (680 mg, 2 mmol) in 8 mL of 1,3-dimethyl-3,4,5,6-tetrahydro( 1H,3H)-2-pyrimidinone. The mixture is kept for 20 minutes at room temperature and then cooled to 25°C. 2-Chloro-1,3-dimethyl-2,3,4,5-tetrahydro-pyrimidinium chloro, 0.73 g (4 mmol) was then added and the mixture kept at -25°C for 3 hours. It is then diluted with ethyl acetate and 2 ml of methanol. The mixture is loaded without further treatment on a dry chromatographic alumina column and eluted first with methylene chloride and then with 2% vol/vol methanol/methylene chloride, which gives the desired product in an amount of 0.35 g corresponding to 39.5% and with a melting point of 138 -140°C.

Analyse beregnet for C2iH27<N>6°5'<H>2°<:>Analysis calculated for C2iH27<N>6°5'<H>2°<:>

C 54,65, H 6,33, N 18,21 Funnet: C 54,78, H 6,18, N 18,21 C 54.65, H 6.33, N 18.21 Found: C 54.78, H 6.18, N 18.21

NMR (pyridin-d5, 6): 1,80 (m, 2H), 2,42 (s, 3H), 2,52 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,76 (m, 1H), 2,90-3,30 (m, 5H), 3,26 (s, 3H), 3,74 (d, 1H,J=12Hz), 4,05 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 4,97 (d, 1H, J=12 Hz), 5,09 (t, 1H, J=ll.Hz), 5,41 (dd, 1H, J=ll, 4Hz). NMR (pyridine-d5,6): 1.80 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.64 (s, 3H), 2.76 (m , 1H), 2.90-3.30 (m, 5H), 3.26 (s, 3H), 3.74 (d, 1H,J=12Hz), 4.05 (dd, 1H, J=ll , 4 Hz), 4.97 (d, 1H, J=12 Hz), 5.09 (t, 1H, J=11.Hz), 5.41 (dd, 1H, J=11, 4Hz).

IR (KBr): 3430, 3280, 2930, 1710, 1570, 1480, 1450, 1350, 1050 cm"<1>. IR (KBr): 3430, 3280, 2930, 1710, 1570, 1480, 1450, 1350, 1050 cm"<1>.

UV (MeO<H,><A>maks)= 635, 377, 264 (sh), 223 nm.UV (MeO<H,><A>max) = 635, 377, 264 (sh), 223 nm.

Eksempel 29Example 29

Forbindelse ( XXX) Connection ( XXX)

7-(tetrametyldiaminometylen)amino-9a-metoksymitosan7-(Tetramethyldiaminomethylene)amino-9a-methoxymitosane

Mitomycin C, 425 mg (1,42 mmol) blandes med en 50% disper-sjon i olje av 85,3 mg natriumhydrid og 4 ml dimetylformamid tilsettes. Blandingen omrøres ved romtemperatur under en atmosfære av argon i 10 minutter og akvjøles deretter til Mitomycin C, 425 mg (1.42 mmol) is mixed with a 50% dispersion in oil of 85.3 mg of sodium hydride and 4 ml of dimethylformamide is added. The mixture is stirred at room temperature under an atmosphere of argon for 10 minutes and then cooled

-35°C. Tetrametylklorformamidimiumklorid, 289 mg (2,13 mmol) tilsettes og blandingen tillates oppvarming til 5°C -35°C. Tetramethylchloroformamidium chloride, 289 mg (2.13 mmol) is added and the mixture is allowed to warm to 5°C

i løpet av 2 timer. Knust tørris settes deretter til blandingen for å avkjøle reaksjonen og oppløsningsmidlet fjernes ved destillasjon under et redusert trykk. Resten kromatograferes på 100 g aluminiumoksydsøyle ved bruk av 3% vol/vol metanol i metylenklorid for elueringen. Dette materialet renses ytterligere ved aluminiumoksyd-tlc (5% vol/vol metanol i metylenklorid), noe som gir to fraksjoner på 17 mg og 76 mg. Den sistnevnte krystalliseres fra aceton-eter for å oppnå det ønskede produkt i et utbytte på 12% og med smeltepunkt 193-195°C. within 2 hours. Crushed dry ice is then added to the mixture to cool the reaction and the solvent is removed by distillation under reduced pressure. The residue is chromatographed on a 100 g alumina column using 3% vol/vol methanol in methylene chloride for the elution. This material is further purified by alumina-tlc (5% vol/vol methanol in methylene chloride), giving two fractions of 17 mg and 76 mg. The latter is crystallized from acetone-ether to obtain the desired product in a yield of 12% and with a melting point of 193-195°C.

Analyse beregnet for<c>2oH28<N>6°5: C 55,54, H 6'53'N 19,43 Analysis calculated for<c>2oH28<N>6°5: C 55.54, H 6'53'N 19.43

Funnet: C 54,92, H 6,53, N 19,29 Found: C 54.92, H 6.53, N 19.29

NMR (pyridin-d5, 6): 2,26 (s, 3H), 2,59 (s, 6H), 2,68 (s, 6H), 2,75 (m, 1H), 3,15 (d, 1H, J=4 Hz), 3,26 (s, 3H), 3,65 (d, 1H, J=12 Hz), 4,00 (dd, 1H, J=ll, 5 Hz), 4,62 NMR (pyridine-d5,6): 2.26 (s, 3H), 2.59 (s, 6H), 2.68 (s, 6H), 2.75 (m, 1H), 3.15 (d , 1H, J=4 Hz), 3.26 (s, 3H), 3.65 (d, 1H, J=12 Hz), 4.00 (dd, 1H, J=ll, 5 Hz), 4, 62

(d, 1H, J=12 Hz), 5,04 (t, 1H, J=ll Hz), 4,38 (dd, 1H, J=ll, 5 Hz). (d, 1H, J=12 Hz), 5.04 (t, 1H, J=11 Hz), 4.38 (dd, 1H, J=11, 5 Hz).

IR (KBr): 3430, 3280, 2920, 1710, 1610, 1495, 1335, 1055 cm"<1.>IR (KBr): 3430, 3280, 2920, 1710, 1610, 1495, 1335, 1055 cm"<1.>

UV (MeO<H,><x>maks)= 610, 380, 260, 220 nm.UV (MeO<H,><x>max)= 610, 380, 260, 220 nm.

Eksempel 30Example 30

Forbindelse ( XXXI) Connection (XXXI)

7-(1-piperidinylmetylen)amino-9a-metoksymitosan7-(1-piperidinylmethylene)amino-9a-methoxymitosane

En 0,5 M oppløsning av piperidinylklormetyleniminiumklorid fremstilles ved dråpevis tilsetning av oksalylklorid (380 mg, 3 mmol) til 6 ml kloroform inneholdende 0,34 g (3 mmol) 1-formylpiperidin. Natriumhydrid (50% oljedispersjon, 96 mg, 2 mmol) tilsettes separat under nitrogen til en oppløsning av mitomycin C (334 mg, 1 mmol) i 3 ml 1-formylpiperidin. Etter omrøring i 15 minutter ved romtemperatur avkjøles opp-løsningen til -25°C og den ovenfor fremstilte iminiumsalt-oppløsning (4 ml, .2 mmol) tilsettes. Reaksjonsblandingen holdes ved -25°C i 1"time og avkjøles ved tilsetning av tørris. Etter tilsetning av 1 ml metanol absorberes produkt-blandingen på nøytralt aluminiumoksyd. Dette materialet anbringes på en aluminiumoksydsøyle (30 g). Søylen elueres først med metylenklorid og deretter med 3% vol/vol metanol i metylenklorid, noe som gir 360 mg eller 84% av tittelforbindelsen med smeltepunkt 68-70°C. A 0.5 M solution of piperidinylchloromethyleneiminium chloride is prepared by dropwise addition of oxalyl chloride (380 mg, 3 mmol) to 6 ml of chloroform containing 0.34 g (3 mmol) of 1-formylpiperidine. Sodium hydride (50% oil dispersion, 96 mg, 2 mmol) is added separately under nitrogen to a solution of mitomycin C (334 mg, 1 mmol) in 3 mL of 1-formylpiperidine. After stirring for 15 minutes at room temperature, the solution is cooled to -25°C and the iminium salt solution prepared above (4 ml, .2 mmol) is added. The reaction mixture is kept at -25°C for 1 hour and cooled by adding dry ice. After adding 1 ml of methanol, the product mixture is absorbed on neutral alumina. This material is placed on an alumina column (30 g). The column is first eluted with methylene chloride and then with 3% vol/vol methanol in methylene chloride, which gives 360 mg or 84% of the title compound with melting point 68-70°C.

Analyse beregnet for c2iH25N5°6'1_1/4 H20:Analysis calculated for c2iH25N5°6'1_1/4 H20:

C 55,80, H 6,58, N 15,49 Funnet: C 55,57, H 6,21, N 15,91 NMR (pyridin-d5, 6): 1,42 (bs, 6H), 2,19 (s, 3H), 2,72 (m, 1H), 3,06-3,30 (m, 3H), 3,25 (s, 3H), 3,48-3,70 (m, 2H), 3,57 (d, 1H, J=13 Hz), 4,01 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 4,43 (d, 1H, J=13Hz), 5,02 (bt, 1H, J=ll Hz), 5,55 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 7,86 (s, 1H). C 55.80, H 6.58, N 15.49 Found: C 55.57, H 6.21, N 15.91 NMR (pyridine-d5, 6): 1.42 (bs, 6H), 2, 19 (s, 3H), 2.72 (m, 1H), 3.06-3.30 (m, 3H), 3.25 (s, 3H), 3.48-3.70 (m, 2H) , 3.57 (d, 1H, J=13 Hz), 4.01 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 4.43 (d, 1H, J=13Hz), 5.02 (bt, 1H, J=11 Hz), 5.55 (dd, 1H, J=11, 4 Hz), 7.86 (s, 1H).

IR (KBr): 3440, 3350, 3300, 2935, 2835, 1710, 1615, 1520, 1445, 1305, 1250, 1200, 1055 cm"<1>. IR (KBr): 3440, 3350, 3300, 2935, 2835, 1710, 1615, 1520, 1445, 1305, 1250, 1200, 1055 cm"<1>.

UV (MeO<H,><x>maks): 590, 389, 362 (sh), 234, 212 (sh) nm. UV (MeO<H,><x>max): 590, 389, 362 (sh), 234, 212 (sh) nm.

Eksempel 31 Example 31

7-hydroksy-N<1>^-dimetylaminometylen-9a-metoksymitosan7-hydroxy-N<1>^-dimethylaminomethylene-9a-methoxymitosane

Til en oppløsning av 7-hydroksy-9a-metoksymitosan (20 mg) i metylenklorid (3 ml) settes dimetylformamid-dimetylacetal (1 ml) og oppløsningen omrøres ved ca. 65°C i 30 minutter. Reaksjonens forløp følges ved tic (10:1 CH2Cl2/MeOH). Produktet utvinnes ved å konsentrere blandingen under et redusert trykk og resten kromatograferes over silikagel, hvorved man oppnår tittelforbindelsen. Dimethylformamide-dimethyl acetal (1 ml) is added to a solution of 7-hydroxy-9a-methoxymitosane (20 mg) in methylene chloride (3 ml) and the solution is stirred at approx. 65°C for 30 minutes. The progress of the reaction is followed at tic (10:1 CH2Cl2/MeOH). The product is recovered by concentrating the mixture under reduced pressure and the residue is chromatographed over silica gel, whereby the title compound is obtained.

Aktivitet overfor P- 388 museleukemiActivity against P-388 mouse leukemia

Tabell IV inneholder resultatene av laboratorieforsøk med CDF^-mus av hunnkjønn implantert intraperitonealt med en tumor-innpodning av IO6 ascites-celler av P-388 museleukemi og behandlet med forskjellige doser av enten en testforbin- deise med formel (I) eller mitomycin C. Forbindelsene ble inngitt ved intraperitoneal injeksjon. Grupper på seks mus ble anvendt for hvert doseringsnivå og de ble behandlet med en enkelt dose av forbindelsen kun på dag 1. En gruppe på ti saltvannsbehandlede kontrollmus ble innbefattet i hver forsøksserie. De med mitomycin C behandlede grupper ble tatt med som en positiv kontroll. En 30 dagers protokoll ble anvendt, idet den gjennomsnittlige overlevelsestid 1 dager ble bestemt for hver gruppe av mus og antallet av overlevende ved slutten av 30 dagers perioden ble notert. Musene ble veiet før behandling og igjen på den 6. dag. Vektforandring ble tatt som mål på legemiddelgiftigheten. Mus som hver veide 20 g ble anvendt og et vekttap på inntil 2 g ble ikke betraktet som for stort. Resultatene ble bestemt med hensyn til % T/C og det er forholdet mellom den gjennomsnittlige overlevelsestid for den behandlede gruppe og den gjennomsnittlige overlevelsestid for den med saltvann behandlede kontrollgruppe multiplisert med 100. De med saltvann behandlede kontrolldyr døde vanligvis innen 9 dager. Den "maksimale effekt" i den etterfølgende tabell er uttrykt som % T/C og dosen som gir denne virkning er anført. Verdiene i parentes er de;verdier som ble oppnådd med mitomycin C som en positiv kontroll i det samme forsøk. Et mål for den relative aktivitet for de angjeldende forbindelser i forhold til mitomycin C kan derfor forstås. Table IV contains the results of laboratory experiments with female CDF^ mice implanted intraperitoneally with a tumor inoculation of 106 ascites cells of P-388 murine leukemia and treated with various doses of either a test compound of formula (I) or mitomycin C. The compounds were administered by intraperitoneal injection. Groups of six mice were used for each dose level and they were treated with a single dose of the compound only on day 1. A group of ten saline-treated control mice was included in each series of experiments. The mitomycin C-treated groups were included as a positive control. A 30 day protocol was used, in which the mean survival time of 1 day was determined for each group of mice and the number of survivors at the end of the 30 day period was noted. The mice were weighed before treatment and again on the 6th day. Weight change was taken as a measure of drug toxicity. Mice weighing 20 g each were used and a weight loss of up to 2 g was not considered excessive. The results were determined in terms of %T/C, which is the ratio of the mean survival time of the treated group to the mean survival time of the saline-treated control group multiplied by 100. The saline-treated control animals usually died within 9 days. The "maximum effect" in the following table is expressed as % T/C and the dose that produces this effect is indicated. Values in parentheses are those obtained with mitomycin C as a positive control in the same experiment. A measure of the relative activity of the compounds in question in relation to mitomycin C can therefore be understood.

En minimal effekt med henblikk på % T/C ble betraktet å være 125. Den minimale effektive dose som er angitt i den etterfølgende tabell er den dose som gir en % T/C på ca. 125. De to verdier som i hvert tilfelle er angitt i "gjennomsnittlig vektforandring"-kolonnen er henholdsvis den gjennomsnittlige vektforandring pr. mus ved den maksimale effektive dose og den minimale effektive dose. Forbindelser (XIX) og (XX) er av spesiell interesse, da deres aktivitet klart er bedre enn for mitomycin C, både med henblikk på maksimal virkning og mg styrke, (sammenlig-nende doseringsstørrelser for ekvivalente virkninger). A minimal effect in terms of % T/C was considered to be 125. The minimal effective dose indicated in the following table is the dose which gives a % T/C of approx. 125. The two values which in each case are stated in the "average weight change" column are respectively the average weight change per mice at the maximum effective dose and the minimum effective dose. Compounds (XIX) and (XX) are of particular interest, as their activity is clearly better than that of mitomycin C, both in terms of maximum effect and mg strength, (comparative dosage sizes for equivalent effects).

De er begge forbindelser med formel (I), der A er amidinogruppen og B er -NH.-,, eller med andre ord mitomycin C-derivater, som ved N 7 er substituert med en aminometylen- They are both compounds of formula (I), where A is the amidino group and B is -NH.-,,, or in other words mitomycin C derivatives, which at N 7 are substituted with an aminomethylene-

gruppe med formel group with formula

2 3 4 der R , R og R er som angitt 2 3 4 where R , R and R are as indicated

ovenfor.above.

De angjeldende bis-amidinoforbindelser med formel (I), der både A og B er amidinogruppen, er også av betydelig interesse som aktive antitumorforbindelser. Det henvises til resultatene i tabellen for forbindelsene (V), (VI), (VII), (IX), (X) og (XIV), som svarer til dette strukturkrav. The relevant bis-amidino compounds of formula (I), where both A and B are the amidino group, are also of considerable interest as active antitumor compounds. Reference is made to the results in the table for the compounds (V), (VI), (VII), (IX), (X) and (XIV), which correspond to this structural requirement.

Tabell V inneholder resultater av antitumorforsøk under anvendelse av B16 melanomer dyrket i mus. BDF-^-mus ble anvendt og podet intraperitonealt med tumorimplantas j.onen. Table V contains results of antitumor experiments using B16 melanomas grown in mice. BDF-^ mice were used and inoculated intraperitoneally with tumor implant ion.

En 60 dagers protokoll ble anvendt. Grupper på 10 mus ble anvendt for hver prøvede dosismengde og den gjennomsnittlige overlevelsestid for hver gruppe ble bestemt. Kontrolldyr ble podet på samme måte som forsøksdyrene og behandlet med injeksjonsbæreren uten legemiddel og de oppviste en gjennomsnittlig overlevelsestid på 21 dager. Overlevelsestiden i forhold til den for kontrolldyrene (% T/C) ble anvendt som et mål på effektiviteten og den maksimale effektive dose og minimale effektive dose for hver prøve-forbindelse ble bestemt. Den minimale effektive dose ble definert som den dose som oppviste en % T/C-verdi på 125. For hvert dosisnivå ble forsøksdyrene behandlet med prøve-forbindelsen på dagene 1, 5 og 9 på intraperitoneal måte. Dengjennomsnittlige vektforandring på den angitte dag ved den maksimale effektive dose og den minimale effektive ble anvendt som et mål på giftigheten. Et vekttap på 2 g for en 20 g mus ble ikke betraktet som for høyt. A 60 day protocol was used. Groups of 10 mice were used for each tested dose and the mean survival time for each group was determined. Control animals were inoculated in the same way as the experimental animals and treated with the injection vehicle without drug and they showed an average survival time of 21 days. The survival time relative to that of the control animals (% T/C) was used as a measure of efficacy and the maximum effective dose and minimum effective dose for each test compound were determined. The minimum effective dose was defined as the dose that showed a % T/C value of 125. For each dose level, the test animals were treated with the test compound on days 1, 5 and 9 intraperitoneally. The average weight change on the indicated day at the maximum effective dose and the minimum effective dose was used as a measure of toxicity. A weight loss of 2 g for a 20 g mouse was not considered excessive.

Forbindelsene (XXX) (eksempel 29) og forbindelse (XXIX) Compounds (XXX) (Example 29) and Compound (XXIX)

(eksempel 28) ble prøvet med henblikk på B16 muse-melanomene under anvendelse av subkutan tumorimplantering og intrave-nøs behandling med legemidlet. Behandlingsskjemaet og vur-deringene av overlevelsestiden (det ble benyttet en 40 dagers protokoll) ble bestemt som før. Vektforandringen ble målt på dag 12. Den maksimale effektive dose av forbindelse (XXX) var 1 mg pr. kg, noe som ga en % T/C på 156 og en vektøkning på 1,5 g. Grupper på 6 dyr ble anvendt og 3 dyr overlevde hele 4 0 dagers protokollen ved denne dose. Den minimale effektive dose var 0,25 mg/kg ved hvil-ken dose 12 dagers vektendringen var 1,0 g. For forbindelse (XXIX) var den maksimale effektive doser 8 mg/kg ved en % T/C på 177 og ved en vektforandring på -0,6. Den minimale effektive dose var 4 mg/kg med en vektøkning på +0,8. (Example 28) was tested on the B16 mouse melanomas using subcutaneous tumor implantation and intravenous treatment with the drug. The treatment schedule and assessments of survival time (a 40-day protocol was used) were determined as before. The weight change was measured on day 12. The maximum effective dose of compound (XXX) was 1 mg per kg, giving a % T/C of 156 and a weight gain of 1.5 g. Groups of 6 animals were used and 3 animals survived the full 40 day protocol at this dose. The minimum effective dose was 0.25 mg/kg at which dose the 12 day weight change was 1.0 g. For compound (XXIX) the maximum effective dose was 8 mg/kg at a % T/C of 177 and at a weight change of -0.6. The minimum effective dose was 4 mg/kg with a weight gain of +0.8.

I det samme forsøk var den maksimale effektive dose av mitomycin C 3 mg/kg ved en % T/C på 195 og en vektendring på -0,5. Den minimale effektive dose av mitomycin C ble ikke bestemt. In the same experiment, the maximum effective dose of mitomycin C was 3 mg/kg at a %T/C of 195 and a weight change of -0.5. The minimum effective dose of mitomycin C was not determined.

Ved en kort toksikologisk protokoll under anvendelse av grupper på 5 BDF-^-mus av hannkjønn pr. dosis inngitt i en enkelt intraperitoneal dose av forbindelse (XIX) forekom det ingen signifikant reduksjon i lymfocytt-tellingen ved den optimale effektive dose av denne forbindelse i en mengde av 1,6 mg/kg i.p. Ved denne dose var det ingen signifikant stigning i blodurinstoffnitrogenmengden (BUN) eller serum-glutamin-fosfo-transferasen (SGPT), noe som antyder at det ikke var noen skadelig virkning på nyre- eller leverfunk-sjonen eller undertrykkelse av lymfocytisk aktivitet. In a short toxicological protocol using groups of 5 male BDF-^ mice per dose administered in a single intraperitoneal dose of compound (XIX) there was no significant decrease in the lymphocyte count at the optimal effective dose of this compound in an amount of 1.6 mg/kg i.p. At this dose, there was no significant increase in blood urea nitrogen (BUN) or serum glutamine phosphotransferase (SGPT), suggesting no adverse effect on renal or hepatic function or suppression of lymphocytic activity.

I betraktning av den enestående antitumoraktivitet som iakttas ved eksperimentelle animalske tumorer, og den redu-serte giftighet i forhold til mitomycin C, omfatter oppfinnelsen anvendelse av forbindelsene med formel (I) for inhibering av tumorer hos pattedyr. Til dette formålet inngis de systemisk til et pattedyr med en tumor i en i det vesentlige ikke-giftig, men antitumoreffektiv dose. In view of the unique antitumor activity observed in experimental animal tumors, and the reduced toxicity compared to mitomycin C, the invention encompasses the use of the compounds of formula (I) for the inhibition of tumors in mammals. For this purpose, they are administered systemically to a mammal with a tumor in a substantially non-toxic but antitumor effective dose.

Claims (1)

Mitosanderivater, karakterisert ved at de har formelen: Mitosane derivatives, characterized in that they have the formula: der A er amino eller metoksy, B er amino, og R 1 er metyl eller formyl.there A is amino or methoxy, B is amino, and R 1 is methyl or formyl.
NO881204A 1982-06-04 1988-03-18 MITOSANDERIVATER. NO881204D0 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NO881204A NO881204D0 (en) 1982-06-04 1988-03-18 MITOSANDERIVATER.

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US38514982A 1982-06-04 1982-06-04
US06/492,903 US4487769A (en) 1982-06-04 1983-05-09 Amidines
NO832022A NO161676C (en) 1982-06-04 1983-06-03 ANALOGY PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF THERAPEUTIC ACTIVE MITOSANDER DERIVATIVES.
NO881204A NO881204D0 (en) 1982-06-04 1988-03-18 MITOSANDERIVATER.

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO881204L true NO881204L (en) 1983-12-05
NO881204D0 NO881204D0 (en) 1988-03-18

Family

ID=27484079

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO881204A NO881204D0 (en) 1982-06-04 1988-03-18 MITOSANDERIVATER.

Country Status (1)

Country Link
NO (1) NO881204D0 (en)

Also Published As

Publication number Publication date
NO881204D0 (en) 1988-03-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0116208B1 (en) Mitomycin analogues
DK161023B (en) MITOSANDERIVATIVES
MX2012004379A (en) Pyrrolo[2,3-d] pyrimidine compounds.
AU716656B2 (en) Selected derivatives of K-252a
CN112110938B (en) Compound as protein kinase inhibitor and preparation method and application thereof
US4866180A (en) Amino disulfide thiol exchange products
NZ277503A (en) 1,5,10,14-tetraazatetradec-7-ene derivatives; pharmaceutical compositions thereof
US4803212A (en) Amino disulfides
NO881204L (en) MITOSANDERIVATER.
IE52956B1 (en) Mitomycin derivatives, their preparation and use
US4567256A (en) Amidine process
US4691023A (en) Amino disulfides
US4748251A (en) 7-n-aminomethylenemitomycin derivative
SU1258327A3 (en) Method of producing 7-substituted compounds of 9a-methoxy-mitosane
EP0294828B1 (en) Mitomycin analogs, a process for preparing them and pharmaceutical compositions
HU194243B (en) Process for producing n-7-abov-amidino-substituted mitomycin c derivatives
AU595183B2 (en) Crystalline form of 7-(dimethylaminomethylene) amino-9a- methoxymitosane
US5095017A (en) 1,2-dihydropyrido(3,4,-b)pyrazines as fungicides
NO163368B (en) MITOSANDERIVATER.
AT397092B (en) Process for the preparation of novel mitosan derivatives
NO164241B (en) PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF CRYSTALLINIC 7- (DIMETHYLAMINOMETHYL) AMINO-9A METOXYMITOSAN.