NO760752L - - Google Patents

Description

Denne oppfinnelse angår et nytt antivirus-middel, særlig

mot virus av familien Picornaviridae så som rhinovirus, entero-virus og calicivirus, bestående av en eller flere kompleksdannere for toverdige kationer og et eller flere nukleosid- eller deoksy-nukleosidtrifosfater, eventuelt i kombinasjon med et annet aktivt stoff, f.eks. et slimhinne-sammentrekkende middel så som 2-(5,6, 7,8-tetrahydro-l-naftylamino)-1-imidazolin-hydroklorid, eller syntetiske vaskemidler, fortrinnsvis i form av en nøytral oppløs-ning .

Det nye stabile antivirus-middel får man ved enkel bland-

ing eller oppløsning av et eller flere kompleksdannende stoffer for toverdige kationer og et flere nukleosid- eller deoksynukleo-sidtrifosfater, eventuelt under tilsetning av et annet aktivt stoff, f.eks. ved oppløsning i vann, etanol eller etanol/vann, ved blanding med et bæremateriale så som pudder, eller innarbeidelse i et salvegrunnlag.

Som nukleosid- eller deoksyribonukleosidtrifosfater kan f.eks. anvendes substituerte pyrimidin- eller purinbaser, som er bundet til ribose eller doksyribose, så som cytidin-, cytosindeoksyribosid-, tymidin-, uridin-, adenosin-, adenindeoksyribosid-, guanosin-, guan-idindeoksyribosid- og inosin-trifosfat. Som kompleksdannere kan f.eks. anvendes kondenserte fosfater og deres oppløselige salter, særlig alkalisaltene så som natrium- eller kaliumsaltene av pyrofos-forsyre, tetrametafosforsyre, trimetafosforsyre, tripolyfosforsyre, nukleosiddifosfater og deoksyribonukleosiddifosfater;

aminosyrer og deres oppløselige salter, særlig alkalisaltene så som natrium- eller kaliumsaltene av 3-alanin-N,N-dieddiksyre, aminobar-bitursyre-N ,N-dieddiksyre , 2-aminobenzoesyre-N ,N-dieddiksyre, (3~

aminoetyl-fors forsyre-N,N-dieddiksyre, 3_aminoetylsulfonsyre-N,N-dieddiksyre, aminometyl-fosfonsyre-N,N-dieddiksyre, aminodi-eddiksyre, aminodipropionsyre, nitrilotrieddiksyre, 2-sulfo-aninlin-dieddiksyre, 1,2-diaminocykloheksan-N,N-tetraeddiksyre, 1,3-diaminocykloheksan-N,N-tetraeddiksyre, 1,4-diaminocykloheksan-N,N-tetraeddiksyre, etylen-diamintetraeddiksyre, N-benzyl-etylen-daimintrieddiksyre, etylendiamintetrapropionsyre, metylamin-N,N-dieddiksyre, trimetylendiamintetraeddiksyre, tetramethyldiamin-tetraeddiksyre, pentametylendiamintetraeddiksyre, etylenglykol-bis - ((3-ami noe ty leter) -N,N'-tetraeddiksyre, aspa rag in , a spa ragi n-syre, glycin, histidin, prolin, tryptofan, valin, SH-glutation ellerY~karboksy-glutaminsyre; nitrogenholdige heterocykliske forbindelser så som 1,10-O-fenanthrolin og derivater derav; di-karboksylsyrer og deres oppløselige salter, særlig alkalisaltene så som natrium- eller kaliumsaltene av oksalsyre eller sitronsyre;

hydroksysyrer og deres oppløselige salter, særlig alkalisaltene så som natrium- eller kaliumsaltene av eplesyre, diketoner så som acetylaceton, benzoylaceton, benzoyltrifluoraceton, dibenzoylmetan, 2-furoyl-benzoylmetan eller 2-tenoyl-2-furoylmetan; fenoliske forbindelser så som 8-oksykinnolin; farvestoffer så som Eriokromsort T, Eriokromsort A, Eriokromsort B eller Eriokromsort R; sukker-aminosyreforbindeIser så som fruktose-glycin eller fruktose-aspara-ginsyre ; eller vitaminer resp. vitaminderivater så som pyridoksyl-glycin, pyridoksyl-amin, pyridoksyl-valin, pyridoksyltreonin, pyridoksyl-tyrosin, pyridoksyl-tryptofan, pyridoksylisonikotinsyre-hydrazid eller askorbinsyre resp. natrium- eller klaiumaskorbat.

Særlig fordelaktig er imidlertid anvendelse av adenosintrifosfat med kompleksdanneren natriumpyrofosfat. Konsentrasjonen av adenosintrifosfat utgjør her hensiktsmessig 0,05 til 20 mg/g antivirusmiddel og av natriumpyrofosfat hensiktsmessig 0,5 til 100 mg/g antivirusmiddel i et vandig og/eller alkoholisk medium.

Et særlig fordelaktig antivirusmiddel for farmasøytisk anvendelse får man imidlertid ved kombinasjon derav med et middel som nedsetter svelning av slimhinnen, f.eks. 2-(5,6,7,8-tetrahydro-1-naftylamino)-2-imidazolin-hydroklorid.

F.eks. utgjør konsentrasjonen av adenosintrifosfat her 0,05 - 5 mg/ml, fortrinnsvis 0,1 - 1 mg/ml. pH-verdien kan ligge mellom 6,0 og 8,5, fortrinnsvis mellom 6,5 og 8.

Konsentrasjonen av kompleksdanner er avhengig av stabilitets-konstantene for komplekser med toverdige kationer. Derfor er ione- arten forskjellig for forskjéllige>virusklasser, men de viktigste er imidlertid Mg<++>, Ca++, Zn<++>. Ved behandling mot rhinovirus, som forårsaker vanlig snue, er kompleksdannere med høy affinitet til Mg<++>særlig virksomme i kombinasjon med adenosintrifosfat. Konsentrasjonen av pyrofosfat utgjør her 0,5 - 50 mg/ml, fortrinnsvis 10 - 25 mg/ml. Foreliggende oppfinnelse angår således et antivirusmiddel som er særlig aktivt mot rhinovirus, munn- og klovsyke-virus, echovirus, coxsackie A og B virus og calici-virus.

Den biologiske virkning av det nye antivirusmiddel ble under-søkt som følger: 1.. På grunnlag av stabiliteten av det radioaktivt merkede ribo-nukleinsyrekomplement til rhinovirus ble reduksjonen i intakte virus undersøkt i en reaksjonsblanding ved bestemmelse av

a) det trikloreddiksyre-fellbare radioaktive materiale,

b) det radioaktive materiale som sedimenterer i sukrose gradient ved 160 S (Svedberg) (sedimentasjonskonstant

for den intakte virus),

c) den radioaktive RNA som sedimenterer ved 30 S = sediment-as jonskonstant for virus-RNA, og d) den radioaktivitet (stilling av rhinovirus) som danner bånd på 1,40 - 1,42 g/cm3 i CsCl, og efter 30 minutters behandlingstid ved 36°C og pH = 7,4, får man følgende resultat: Natrium-adenosintrifosfat. i en konsentrasjon på 0,25 mmol i nærvær av 2 mmol natriumpyrofosfat bevirker en reduksjon av mer enn 90% av rhinovirus-nukleinsyre til trikloreddiksyre oppløselige, lavmolekylære oligonukleotider. Sedi-mentas jonskonstanten for disse oligonukleotider ligger under 3 S (Svedberg) sammenlignet med sedimentasjonskon-stanten for den infeksjonsfrembringende rhinovirus-ribonukleinsyre, som ligger ved 30 S. Intet radioaktivt merket materiale ble funnet ved 160 S, sedimentasjonskonsta-nten for den intakt virus og ved 1,40 - 1,42 g/cm 3 i CsCl.

2. Renset, umerket virus inkuberes med den under nr. 1 angitte

blanding av komplekserende middel og nukleosidtrifosfat, og infek-sjonsevnen hos fortynninger av behandlet virus sammenlignes med ube-handlet virus ved Plaque-prøven under anvendelse av vevkulturceller. Det ble her iakttatt en reduksjon på 4 tierpotenser av infeksjons-

evnen hos viruset efter behandling med adenosintrifosfat og pyrofosfat.

3. Den vesentlige rolle for den hydrolyserbare 3-Y"Oksygen-

bro i nukleosidtrifosfatet ved den autokatalyserte avbygningsreaksjon av rhinovirus-ribonukleinsyren ble vist ved:

a) Avspaltning av den iY~stilling med fosfor-32 merkede fosfatrest fra adenosintrifosfat under reaksjonen med rhinovirus i Mg++-ionefritt medium under dannelse av adenosindifosfat og fosfor-32 bundet til rhinovirus. b) Manglende evne hos adenosintrifosfat til å igangsette den autokatalytiske reaksjon. c) Adenosinimidodifosfat, en analog til adenosintrifosfat, hvor (3-Y-oksygenbroen er erstattet med en -NH-gruppe og ikke kan hydrolyseres, er fullstendig uvirksomt til å frembringe den autokatalytiske inaktivering av rhinovirus . 4. Videre understøttes den enzymatiske karakter av rhinovirus-ribonukelinsyre-avbygningen ved reaksjonens sterke temperaturavheng-ighet (ved 0 eller 20°C ingen reaksjon, over 30°C fullstendig avbyg-ning). 5. I alle tilfeller forhindrer en ekvimolar (basert på kompleks-dahner + nukleosidtrifosfat) tilsetning av Mg<++->ioner til reaksjons-blåndingen avbygningsreaksjonen. 6. Tilstedeværelse av en synergistisk virkning av kompleksdannende middel (f.eks. natriumpyrofosfat) og fosforylerende middel (f.eks. adenosintrifosfat) ble påvist ved hjelp av den induserbare avbygningsreaksjon av radioaktivt merket rhinovirusribonukleinsyre: Porsjoner (10 Plaque-dannende enheter) av renset rhinovirus, hvis ribonukleinsyre var merket med fosfor-32, ble inkubert med 5 n mol adenosintrifosfat, enten alene eller med stigende mengder natrium-pyrofosf at ved pH 7,6 og 36°C i 30 minutter. Som kontrollverdier ble anvendt natriumpyrofosfat i forskjellige konsentrasjoner uten adenosintrifosfat. Resultatene er sammenfattet i den følgende tabell:

Det viser seg at konsentrasjonen av natriumpyrofos fat må overskride en grenseverdi for at den induserende virkning av ade-nosintrifosf at på avbygningsreaksjonen for virus-ribonukleinsyren skal gjøre seg gjeldende, og således foreligger en synergistiske virkning av begge komponenter.

De morfologiske forandringer i virusstrukturen kan også fastslåes elektronmikroskopisk. Det viser seg her at den beskyt-tende viruskappestruktur åpner seg efter behandling med pyrofosfat og adenosintrifosfat.

De følgende eksempler skal illustrere oppfinnelsen ytterli-gere:

EKSEMPEL 1

Oppløsning med pyrofosfat og adenosintrifosfat

Sammensetning:

Fremstilling:

Adenosintrifosfat, pyrofosfat, benzalkoniumklorid og tylose oppløses! vann, buffrene tilsettes, og det hele fortynnes til et sluttvolum på 10 ml med vann.

EKSEMPEL 2

O ppløsning med adenosintrifosfat:

Sammensetning:

Fremstilling:

Adenosintrifosfat og adenosindifosfat frysetørres fra en nøytral, vandig oppløsning og oppløses som lyofilisert pulver kort før anvendelsen i den vandige oppløsning av de øvrige komponenter .

EKSEMPEL 3

Oppløsning av guanosintrifosfat

Sammensetning:

Fremstilling:

Guanosintrifosfat, pyrofosfat og benzalkoniumklorid oppløses i vann, innstilles på pH =7,4 med natronlut og fortynnes til et sluttvolum på 10 ml med vann.

EKSEMPEL 4

Gel med adenosintrifos fat og etylendiamintetraéddiksyre Sammensetning:

Fremstilling:

Den vandige oppløsning av adenosintrifosfat, etylendiamintetraéddiksyre, benzalkoniumklorid, trietanolamin og glycerol røres inn i den vandige oppløsning av Carbopol.

EKSEMPEL 5

Krem med adenosintrifosfat og pyrofosfat

Sammensetning:

Fremstilling:

Benzalkoniumklorid og pyrofosfat oppløses i 70°C varmt vann (I). I smeiten av isopropylmyristat, Tween 60, Span 60 og Lanette 0 suspenderes adenosintrifosfat (II). II emulgeres inn il..

EKSEMPEL 6

Salve med uridintrifosfat og Na- citrat

Sammensetning:

Fremstilling:

Natriumcitrat, uridintrifosfat, Adeps-Lanae anhydr. , paraf-fin og vaselin smeltes sammen.

EKSEMPEL 7

Skumaerosol med adenosintrifosfat og pyridoksyamin Sammensetning:

Fremstilling:

Adenosintrifosfat og pyridoksyamin oppløses i vann (I) , cremophor; Tween og Texapon i vann/etanol (II). I innføres under omrøring i II, og det erholdte konsentrat fylles på beholdere. Efter lukking med en ventil presses drivgassen inn.

EKSEMPEL 8

Aerosol med adenosintrifosfat og pyridoksyamin

Sammensetning:

Fremstilling:

Analogt med eksmepel 7 .

Claims (5)

1. Antivirus-middel, karakterisert ved at det består av én eller flere kompleksdannere for toverdige kationer <p> g et eller flere nukleosid- eller deoksyribonukleosidtrifosfater ved siden av eventuelt et eller flere inerte bærestoffer eller fortynningsmidler.

2. Antivirus-middel som angitt i krav 1, karakterisert ved at dette inneholder 0,5 - 100 mg/g av en kompleksdanner og 0,05- 20 mg/g av et nukleosid- eller deoksyribonukleosid-trifosfat.

3. Antivirus-middel som angitt i krav 1 og 2, karakterisert ved at dette som kompleksdanner inneholder natriumpyrofosfat, adenosinfosfat, natriumcitrat, etyl-endiamintetraeddiksyre eller pyridoksylamin, og som trifosfat ade-nosintrifosf at , guanosintrifosfat, cytidinfos fat eller det tilsvar-ende deoksyribonukleosidtrifosfat.

4. Antivirus-middel som angitt i krav 1 og 2, karakterisert ved at det som kompleksdanner inneholder natriumpyrofosfat og som trifosfat adenosintrifosfat.

5. Fremgangsmåte for fremstilling av antivirum-middel som angitt i krav 1, karakterisert ved at én eller flere kompleksdannere for toverdige kationer og et eller flere nukleosid- eller de-oksyribonukleosidtrifosf ater innarbeides i vanlige anvendelsesformer.