NO751546L

NO751546L -

Info

Publication number: NO751546L
Application number: NO751546A
Authority: NO
Inventors: E K Acther
Original assignee: Baxter Laboratories Inc
Priority date: 1974-05-01
Filing date: 1975-04-30
Publication date: 1975-11-04
Also published as: GB1502447A; FR2269713A1; CA1044916A; SE417136B; JPS586907B2; DK27875A; NL7505161A; DE2504771C3; CH599549A5; SE7501887L; DE2504771A1; JPS50145189A; FR2269713B1; DE2504771B2

Description

Fremgangsmåte .for utledning av oxygenassosiasjonskurver og apparatur for utforelse av fremgangsmåten Procedure for deriving oxygen association curves and apparatus for carrying out the procedure

Foreliggende oppfinnelse angår fremgangsmåter og apparatur for måling av oxygeneringskarakteristikken til blod eller annet materiale hvis lysabsorberende karakteristika forandres mens det behandles med et reagens, og nærmere bestemt en fremgangsmåte og apparatur for utledning av en oxygeneringskurve for en hel blodprove. The present invention relates to methods and apparatus for measuring the oxygenation characteristics of blood or other material whose light-absorbing characteristics change while it is treated with a reagent, and more specifically to a method and apparatus for deriving an oxygenation curve for a whole blood sample.

Hovedmålet med oppfinnelsen er å tilveiebringe en ny og forbedret teknikk og apparatur for å studere de lysabsorberende egenskaper til materialer som behandles med reagenser som modifi-serer disse, lysabsorberende egenskaper, og i særdeleshet for måling av oxygeneringsgraden til en blodprove mens denne behandles med et oxygenerende reagens. The main aim of the invention is to provide a new and improved technique and apparatus for studying the light-absorbing properties of materials that are treated with reagents that modify these light-absorbing properties, and in particular for measuring the degree of oxygenation of a blood sample while it is treated with an oxygenating reagent.

Et ytterligere mål med oppfinnelsen er å tilveiebringe en forbedret metode og apparatur for måling og opptegning av forandringen i lysabsorpsjonsgraden til en blodprove som behandles med et oxygenerende reagens, hvilken metode innbefatter relativt enkle prosedyretrinn og krever bare en liten mengde av proven, og hvor apparaturen er relativt rimelig å konstruere og lett å operere. A further object of the invention is to provide an improved method and apparatus for measuring and recording the change in the degree of light absorption of a blood sample treated with an oxygenating reagent, which method involves relatively simple procedural steps and requires only a small amount of the sample, and where the apparatus is relatively inexpensive to construct and easy to operate.

Et ytterligere mål med oppfinnelsen er å tilveiebringe en forbedret absorpsjonscelle for anvendelse med en fotometer-apparatur for måling av oxygeneringskarakteristika for blod eller lignende materiale som behandles med et reagens som foran-drer de lysabsorberende karakteristika til materialene. A further object of the invention is to provide an improved absorption cell for use with a photometer apparatus for measuring the oxygenation characteristics of blood or similar material which is treated with a reagent which changes the light absorbing characteristics of the materials.

Et ytterligere mål er å tilveiebringe en forbedret ab-sorps jonscelle for anvendelse med et fotometer med to bolgelengder eller lignende optisk instrument for utledning av oxygenassosiasjonskurven for en blodprove hvor cellen, er anordnet til å spre pr oven i et tynt lag som utsettes for oxygenerende gassreay' gens gjennom en flat, ikke-poros, gasspermeabel, gjennomskinnlig membran samtidig med at optiske absorpsjonsmålinger utfores for å bestemme fraksjonen av oxygenert hemoglobin i proven, og hvor arrangementet innbefatter anordninger for kontinuerlig å variere partialtrykket til oxygen som omgir cellen og derved muliggjore at en kontinuerlig oxygenassosiasjonskurve kan utvikles, bg hvor arrangementet muliggjor anvendelse av ufortynnet hel blodprove som prove, hvor den nodvendige anvendelse av sterke reagenser unngåes, hvor barer små provevolum er nodvendig, hvor et lineært mål av oxyhemoglobinfraksjonen tilveiebringes over det fullsten-dige oxygeneringsoraråde, hvilket arrangement gir kontinuerlig oxygenassosiasjonskurver med ukomplisert og pålitelig regulering og variasjon av oxygenpartialtrykket, hvor bare små mengder gassformige reagenser er nodvendig, og hvor der anvendes en oxy-genobserverende anordning som har hoy stabilitet og varighet og som ikke er i direkte kontakt med blodproven. A further object is to provide an improved absorptive ion cell for use with a dual wavelength photometer or similar optical instrument for deriving the oxygen association curve for a blood sample wherein the cell is arranged to spread over a thin layer exposed to an oxygenating gas stream. ' gens through a flat, non-porous, gas-permeable, transparent membrane at the same time that optical absorption measurements are carried out to determine the fraction of oxygenated hemoglobin in the sample, and where the arrangement includes means for continuously varying the partial pressure of oxygen surrounding the cell and thereby enabling a continuous oxygen association curve can be developed, bg where the arrangement enables the use of undiluted whole blood sample as sample, where the necessary use of strong reagents is avoided, where only small sample volumes are required, where a linear measure of the oxyhemoglobin fraction is provided over the complete oxygenation area, which arrangement g ir continuous oxygen association curves with uncomplicated and reliable regulation and variation of the oxygen partial pressure, where only small amounts of gaseous reagents are required, and where an oxygen monitoring device is used which has high stability and duration and which is not in direct contact with the blood sample.

Et ytterligere mål med oppfinnelsen er å tilveiebringe en forbedret teknikk for måling og opptegning av forandringen i lysabsorpsjonsgraden til en blodprove som behandles med et oxygenerende reagens, hvilken teknikk innbefatter en ny og forbedret prosedyre for noyaktig' for-kondisjonering av blodproven for måling av den optiske response av proven overfor oxygeneringen. A further object of the invention is to provide an improved technique for measuring and recording the change in the degree of light absorption of a blood sample treated with an oxygenating reagent, which technique includes a new and improved procedure for accurately pre-conditioning the blood sample for measuring the optical response of the sample to the oxygenation.

Et ytterligere mål med oppfinnelsen er å tilveiebringe en forbedret apparatur for understøttelse av et tynt flatt lag av blodprove i lysveien for et fotometer med to bolgelengder eller lignende optisk instrument for utledning av oxygenassosiasjonskurven for blodproven, hvor den understøttende apparatur'er anordnet til å spre proven til å danne det nodvendige tynne flate lag for at proven noyaktig utsettes for de deoxygenerende og oxygenerende reagenser som anvendes, og for å tillate at optiske absorpsjonsmålinger kan utfores for å bestemme fraksjonen av oxygenert hemoglobin i proven under oxygeneringen av proven, og hvor den understøttende apparatur er enkel i konstruksjon og lett tilgjengelig for innforing eller erstatning av blodprover. A further object of the invention is to provide an improved apparatus for supporting a thin flat layer of blood sample in the light path of a two wavelength photometer or similar optical instrument for deriving the oxygen association curve for the blood sample, where the supporting apparatus is arranged to spread the sample to form the necessary thin flat layer to accurately expose the sample to the deoxygenating and oxygenating reagents used, and to allow optical absorption measurements to be made to determine the fraction of oxygenated hemoglobin in the sample during the oxygenation of the sample, and where the supporting apparatus is simple in construction and easily accessible for the introduction or replacement of blood samples.

Ytterligere mål og fordeler ved oppfinnelsen fremgår av den efterfolgende beskrivelse og krav, og fra de medfolgende tegninger hvori: Further aims and advantages of the invention appear from the following description and claims, and from the accompanying drawings in which:

Fig. 1 er en skjematisk tverrsnittstegning tatt gjennomFig. 1 is a schematic cross-sectional drawing taken through

et typisk system for oxygeneringsassosiasjonsmåling av blodprove og konstruert i henhold til foreliggende oppfinnelse.\a typical system for oxygenation association measurement of blood sample and constructed according to the present invention.\

Fig. 2 er en forstorret horisontal deltegning av den anvendte provecelle i systemet, tatt hovedsakelig ved ved linje 2 - 2 i fig. 1. Fig. 3 er et vertikalt tverrsnitt tatt hovedsakelig på linje 3 - 3 i fig. 2. Fig. 4 er en horisontal deltegning lik fig. 2, men som viser en modifisert form av provecellen ifblge foreliggende oppfinnelse . Fig. 5 er et vertikalt tverrsnitt tatt hovedsakelig på Fig. 2 is an enlarged horizontal partial drawing of the sample cell used in the system, taken mainly at line 2 - 2 in fig. 1. Fig. 3 is a vertical cross-section taken mainly on line 3 - 3 in fig. 2. Fig. 4 is a horizontal partial drawing similar to fig. 2, but which shows a modified form of the sample cell according to the present invention. Fig. 5 is a vertical cross-section taken mainly on

linje 5 - 5 i fig. 4.line 5 - 5 in fig. 4.

Fig. 6 er et forstorret endesnitt av en annen modifi-Fig. 6 is an enlarged end section of another modified

sert form av systemet for blodproveoxygenassosiasjonsmålingen ifolge foreliggende oppfinnelse. serted form of the system for the blood sample oxygen association measurement according to the present invention.

Fig. 7 er et vertikalt tverrsnitt tatt hovedsakelig på linje 7 - 7 i fig. 6, og som skjematisk viser de tilknyttede optiske og elektriske komponenter som anvendes med systemet i den- Fig. 7 is a vertical cross-section taken mainly on line 7 - 7 in fig. 6, and which schematically shows the associated optical and electrical components used with the system in the

ne form av oppfinnelsen.ne form of the invention.

Fig. 8 viser sett ovenfra den blodprove-understottende del som anvendes i utforelsesformen ifolge fig. 6 og 7, tatt hovedsakelig på linje 8 - 8 i fig. 7. Fig. 9 er et vertikaloppriss av den•prove-understot ten-de del tatt hovedsakelig på linje 9 - 9 i fig. 7. Fig. 10 viser forstorret og i tverrsnitt deler av apparaturen tatt hovedsakelig på linje 10 - 10 i fig. 8. Fig. 8 shows a top view of the blood sample supporting part which is used in the embodiment according to fig. 6 and 7, taken mainly on line 8 - 8 in fig. 7. Fig. 9 is a vertical elevation of the sample-supporting part taken mainly on line 9 - 9 in fig. 7. Fig. 10 shows enlarged and cross-sectional parts of the apparatus taken mainly on line 10 - 10 in fig. 8.

Oxygenbindingskurven (vanligvis kallt "oxygendissosia-sjonskurven<1*>) for hemoglobin dannes ved målinger av den fraksjon av det totale hemoglobin som oxygeneres som en funksjon av partialtrykket av oxygen (P02) overfor hvilket hemoglobinprdven utsettes. Den hele kurve og/eller parametre avledet fra denne er av vesentlig fysiologisk-og klinisk betydning. Hyppig anvendte metoder innen dette område anvender fotometre med to bølgeleng-der, og slike metoder omfatter foring av tidsoppdelte måle- og referansestråler /\M og gjennom proven mens den underkastes oxygenering, og hvor forskjellen i absorpsjon av disse stråler som målt- med en elektronmultiplikator og tilknyttede kretser anvendes for utledning av den onskede "oxygendissosiasjonskurve" som i realiteten er en oxygenassosiasjonskurve. The oxygen binding curve (usually called the "oxygen dissociation curve<1*>) for hemoglobin is formed by measurements of the fraction of the total hemoglobin that is oxygenated as a function of the partial pressure of oxygen (P02) to which the hemoglobin sample is exposed. The entire curve and/or parameters derived from this is of significant physiological and clinical importance. Frequently used methods in this area use photometers with two wavelengths, and such methods include passing time-divided measuring and reference beams /\M and through the sample while it is subjected to oxygenation, and where the difference in absorption of these rays as measured by an electron multiplier and associated circuits are used to derive the desired "oxygen dissociation curve" which is in reality an oxygen association curve.

Foreliggende oppfinnelse gjor bruk av en teknikk hvori en prove omfattende et tynt lag av rent blod utsettes for- regulerte PO^(oxygenpartialtrykk) gjennom en flat, strukket, gass-permeabel, gjennomsiktig membran, samtidig som optiske absorpsjonsmålinger utfores for å bestemme fraksjonen av oxygenert hemoglobin. FC>2 varieres på regulert måte, likeledes målingen, og fra de observerte data utvikles en kontinuerlig "oxygendissosia-sj onskurve". The present invention makes use of a technique in which a sample comprising a thin layer of pure blood is exposed to pre-regulated PO^ (oxygen partial pressure) through a flat, stretched, gas-permeable, transparent membrane, while optical absorption measurements are carried out to determine the fraction of oxygenated hemoglobin. FC>2 is varied in a regulated manner, as is the measurement, and a continuous "oxygen dissociation curve" is developed from the observed data.

Teknikken og apparaturen ifolge foreliggende oppfinnelse, gir et uttall bestemte fordeler overfor de vanligvis anvendte teknikker, blant hvilke folgende kan nevnes: 1. Den tillater bruk av ufortynnet rent blod slik at der -derved unngåes mulige ikke-fysiologiske effekter (arti-fakt er). 2. Deoxygenering av blodproven utfores uten anvendelse av sterke reagenser slik som dithionat. 3. Bare et meget lite provevolum er nodvendig, hvilket er viktig i pediatriske tilfeller og for forskning på The technique and the apparatus according to the present invention provide a number of specific advantages over the usually used techniques, among which the following can be mentioned: 1. It allows the use of undiluted pure blood so that possible non-physiological effects (artifacts) are avoided. . 2. Deoxygenation of the blood sample is carried out without the use of strong reagents such as dithionate. 3. Only a very small sample volume is required, which is important in pediatric cases and for research on

sjeldne hemoglobintyper.rare hemoglobin types.

4. Et lineært mål av oxyhemoglobinfraksjonen tilveiebringes over hele oxygeneringsområdet, i motsetning til re-fleks j onsfaktormålinger. 5. Den utvikler kontinuerlige kurver og muliggjor regulering og variasjon av FO^som er ukomplisert, pålitelig og som bare krever små mengder av komprimerte, gasser. 6. Den anvender en oxygenfoiende . elektrode som er stabil av type, og som har en lang levetid, og som ikke er i direkte kontakt med blodproven. 4. A linear measure of the oxyhemoglobin fraction is provided over the entire oxygenation range, unlike reflectance factor measurements. 5. It develops continuous curves and enables regulation and variation of FO^ which is uncomplicated, reliable and requires only small quantities of compressed gases. 6. It uses an oxygen agent. electrode that is stable in type, has a long life, and is not in direct contact with the blood sample.

Teknikken ifolge oppfinnelsen innbefatter anvendelse av en provecelle hvori en tynn film av blod utsettes for kontrol-lerte PO,, via en gasspermeabel membran, og gjennom hvilken der samtidig spektrofotometrisk utfores optiske absorpsjonsmålinger. En filtntykkelse av blod på 0,254 mm eller mindre anvendes for å tillate hurtig oxygenombytning innen blodet og for å gjore den ufortynnede blodprove tilstrekkelig gjennomsiktig for å tillate de optiske absorpsjonsmålinger. FiImtykkelsen må være stabil for. å gi stabile optiske målinger, og må ikke inneholde absorber-ende bobler, både av optiske og gassvekslingsgrunner. The technique according to the invention includes the use of a sample cell in which a thin film of blood is exposed to controlled PO, via a gas-permeable membrane, and through which optical absorption measurements are simultaneously carried out spectrophotometrically. A blood felt thickness of 0.254 mm or less is used to allow rapid oxygen exchange within the blood and to render the undiluted blood sample sufficiently transparent to allow the optical absorption measurements. The film thickness must be stable for to provide stable optical measurements, and must not contain absorbing bubbles, both for optical and gas exchange reasons.

I de medfolgende tegninger angir 11 en apparatur for utledning av oxygenassosiasjonskurver ifolge foreliggende oppfinnelse. Apparaturen 11 omfatter et gasskammer 26 av egnet ugjennomskinnlig materiale slik som aluminium eller lignende, avpasset til å anbringes f.eks. i lysveien for de tids-avdelte monokromatiske stråler<y>\ fra et spektrofotometer med to bølgelengder. I den typiske apparatur som er vist i fig. 1 i tegningen har kammeret et gjennomsiktig vindu 12 i sin bunnvegg for å slippe gjennom de tids-avdelte stråler .A^,°9et annet gjennomsiktig vindu 13 i sin toppvegg vertikalt på linje med vindu 12 for således å avgrense en optisk vei mellom disse, og hvor de frembrytende stråler ledes mot elektronmultiplikatoren 42 i spektrofotometret. In the accompanying drawings, 11 indicates an apparatus for deriving oxygen association curves according to the present invention. The apparatus 11 comprises a gas chamber 26 of suitable opaque material such as aluminum or the like, adapted to be placed e.g. in the light path of the time-separated monochromatic rays<y>\ from a spectrophotometer with two wavelengths. In the typical apparatus shown in fig. 1 in the drawing, the chamber has a transparent window 12 in its bottom wall to let through the time-separated rays.A^,°9 another transparent window 13 in its top wall vertically in line with window 12 to thus define an optical path between them, and where the emerging rays are directed towards the electron multiplier 42 in the spectrophotometer.

Angitt generelt ved 14 er en blodprovecelle som er horisontalt anbragt i veien for de tids-avdelte monokromatiske stråler ^ , j\ . I fig. 2 og 3 omfatter cellen 14 et generelt sirkulært legeme 15 av egnet gjennomsiktig materiale, slik som et gjennomsiktig plastmateriale, konsentrisk formet i sin topp-. fiatedel med et grundt sirkulært spor 16 med en dybde på ca. 0,254 mm og diameter i størrelsesordenen 9,72 mm. Respektive kapiIlarrorinnlop og -utlop 17 og 18 loper vertikalt og forseglende gjennom de diametralt motsatte deler av legemet 15 og står i forbindelse med tilsvarende diametralt motsatte deler av spor 16. Legemet 15 er formet med en avrundet randdel 43 som forer til en periferisk renne 19 som mottar randdelen av en gjennomsiktig gass-permeabel membran 20, hvilken randdel er forseglende og tett festet i rennen 19 med en elastisk 0-ring 21, og hvor hoveddelen av membranen er tett strukket over spo-ret 16. Denoted generally at 14 is a blood sample cell which is horizontally placed in the path of the time-separated monochromatic rays ^ , j\ . In fig. 2 and 3, the cell 14 comprises a generally circular body 15 of suitable transparent material, such as a transparent plastic material, concentrically shaped at its top. fiat part with a shallow circular groove 16 with a depth of approx. 0.254 mm and diameter in the order of 9.72 mm. Respective capillary inlets and outlets 17 and 18 run vertically and sealingly through the diametrically opposite parts of the body 15 and are in connection with corresponding diametrically opposite parts of grooves 16. The body 15 is shaped with a rounded edge part 43 which leads to a circumferential channel 19 which receives the edge part of a transparent gas-permeable membrane 20, which edge part is sealingly and tightly fixed in the channel 19 with an elastic 0-ring 21, and where the main part of the membrane is tightly stretched over the groove 16.

Den gass-perméable gjennomsiktige membran 20 er 0,0254 mm tykk og kan omfatte ren silicongummifi lm eller en egnet kom- mersielt tilgjengelig gjennomsiktig gass-permeabel membran slik som "Perflex OM-110" silicongummicopolymer. The gas-permeable transparent membrane 20 is 0.0254 mm thick and may comprise pure silicone rubber film or a suitable commercially available transparent gas-permeable membrane such as "Perflex OM-110" silicone rubber copolymer.

Legemet 15 er redusert ved sin nedre del som vist ved 22, og den reduserte nedre del er understottende mottatt i en knektring 23 utstyrt med en radial stottearm 24 som er stivt festet til tilstotende sidevegg 25 av kammer 26. Ring 23-er utstyrt med et set skruer 27 diametralt motsatt med arm 24 som klemmende fester den reduserte nedre del 22 i ringen 23. The body 15 is reduced at its lower part as shown at 22, and the reduced lower part is supportingly received in a jack ring 23 equipped with a radial support arm 24 which is rigidly attached to the adjacent side wall 25 of chamber 26. Ring 23 is equipped with a set screws 27 diametrically opposite with arm 24 which clamps the reduced lower part 22 in the ring 23.

Kapillarrørene 17 og 18 loper forseglende gjennom sidevegg 25 i gasskammer 26. En oxygentilforselsledning 28 utstyrt med en egnet reguleringsventi1 29 loper forseglende gjennom den motsatte sidevegg 30 i kammer 26, og en nitrogentilforselsled-ning 31 tilsvarende utstyrt med en egnet reguleringsventil 32 loper forseglende gjennom sidevegg 30. Roterbart og hovedsakelig forseglende opplagret i sidevegg 30 er akselen 33 av viften 34, passende drevet med en ytre elektrisk motor 35. En konvensjonell oxygen-foiende elektrode 36 er forseglende montert i veggen 30 og ragende inri i kammeret, idet elektroden utvendig er forbundet med egnede kretsanordninger for utvikling av X-komponenten til en konvensjonell X-Y skriver. Den oxygen-foiende . elektrode 36 kan være maken til modell 5331 av den type som er kjent som "Clark Electrode". The capillary tubes 17 and 18 run sealingly through side wall 25 in gas chamber 26. An oxygen supply line 28 equipped with a suitable control valve 29 runs sealingly through the opposite side wall 30 in chamber 26, and a nitrogen supply line 31 correspondingly equipped with a suitable control valve 32 runs sealingly through the side wall 30. Rotatable and substantially sealingly supported in the side wall 30 is the shaft 33 of the fan 34, suitably driven by an external electric motor 35. A conventional oxygen-feeding electrode 36 is sealingly mounted in the wall 30 and projecting inside the chamber, the electrode being externally connected with suitable circuitry for developing the X component of a conventional X-Y printer. The oxygen-foiende. electrode 36 may be similar to model 5331 of the type known as the "Clark Electrode".

Et fuktende vann-absorbent vekestykke 46 som lett kan fuktes, er montert i den nedre del av kammeret 26, f.eks. i et spor anbragt i den nedre del av veggen 25»Veken 46 skaper den nodvendige fuktighet for å forhindre okende uttorring av oxygenelektroden 36 og blodproven. Kammeret 26 er temperaturregulert for å holde en hovedsakelig konstant temperatur deri ved hjelp av en elektrisk oppvarmer 37 festet til kammeret i en varme-overforende tilstand, hvis energiavgivelse reguleres på vanlig måte med et temperaturfolsomt element 40 innstopt i kammerveggen stotende til oppvarmeren. A moistening water-absorbent wicking piece 46 which can be easily moistened is mounted in the lower part of the chamber 26, e.g. in a groove placed in the lower part of the wall 25, the wick 46 creates the necessary moisture to prevent further drying of the oxygen electrode 36 and the blood sample. The chamber 26 is temperature-regulated to maintain a substantially constant temperature therein by means of an electric heater 37 attached to the chamber in a heat-transferring state, the energy output of which is regulated in the usual manner by a temperature-sensitive element 40 inserted in the chamber wall abutting the heater.

Veggens 25 ovre del er utstyrt med en innsnevret venti-lasjonspassasje 41. I en typisk utforelsesform er kammerets veggtykkelse ca. 16 cm, og utluftningspassasjen 41 ca. 0,64 mm i diameter. The upper part of the wall 25 is equipped with a narrowed ventilation passage 41. In a typical embodiment, the wall thickness of the chamber is approx. 16 cm, and the ventilation passage 41 approx. 0.64 mm in diameter.

I det tilknyttede spektrofotoraeter med to bolgelengder kan forskjellige bolgelengdepar anvendes for' de monokromatiske stråler y\M og A^, f. eks. 650 nm - 800 nm, 547 nm - 560 nm eller 650 nm -• 724 nm. In the associated spectrophotometer with two wavelengths, different pairs of wavelengths can be used for the monochromatic rays y\M and A^, e.g. 650 nm - 800 nm, 547 nm - 560 nm or 650 nm -• 724 nm.

Fordelene ved anvendelse av et to-bolgelengdesystem for ^ målingen innbefatter a) automatisk korreksjon for enhver forandring i spredt lys under utvikling av testkurven, b) anvendelse av en referansestrålevei som også går gjennom proven, og c)'den mulige evne til å måle hematocrit og andre parametre, såvel som utledning av oxygenassosiasjonskurven samtidig. The advantages of using a two-wavelength system for the ^ measurement include a) automatic correction for any change in scattered light during development of the test curve, b) use of a reference beam path that also passes through the sample, and c) the possible ability to measure hematocrit and other parameters, as well as derivation of the oxygen association curve at the same time.

Et enkelt bolgelengdemålesystem kan anvendes med gass-kamre og blodcelleapparaturen ifolge oppfinnelsen, og som gir reduserte omkostninger og stbrre konstruksjonsforenkling, men A simple wavelength measurement system can be used with gas chambers and the blood cell apparatus according to the invention, and which provides reduced costs and greater construction simplification, but

som ikke gir automatisk korreksjon for mulige forandringer i spredt lys under utvikling av oxygenassosiasjonskurven. which does not provide automatic correction for possible changes in scattered light during development of the oxygen association curve.

Ved drift tilfores membrancellen 14 en prove av rent blod tilfort gjennom kapillarinnlopsroret 17. Kammeret 26 fyl-les forst med N (innbefattet ca. 5 % C02) gjennom ledning 31 During operation, the membrane cell 14 is supplied with a sample of pure blood through the capillary inlet tube 17. The chamber 26 is first filled with N (including approx. 5% C02) through line 31

ved at ventilen 32 åpnes, for å deoxygeneare blodproven. Den umiddelbare deoxygenering av blodproven krever ca. 15 minutter. Derefter med ventil 32 lukket- og spektrofotometersystemet i drift utvikles en oxygenbindingskurve (oxygenassosiasjonskurve) på by the valve 32 being opened, to deoxygenate the blood sample. The immediate deoxygenation of the blood sample requires approx. 15 minutes. Then, with valve 32 closed and the spectrophotometer system in operation, an oxygen binding curve (oxygen association curve) is developed on

den tilknyttede X-Y skriver ved at ventil 29 styres til langsomt å innfore O^(innbefattet ca. 5 % CO^). Oxygentilforsels-strommen kan innbefatte en sproytepumpe eller annen pumpe for å gi en oxygeninnforselshastighet tilstrekkelig til å oppnå 20 % oxygen i kammeret i lopet av 5 - 10 minutter. Variasjonen av P02med tiden vil være eksponensiell i stedet for lineær, slik the associated X-Y writes by controlling valve 29 to slowly introduce O^ (including approx. 5% CO^). The oxygen supply stream may include a syringe pump or other pump to provide an oxygen supply rate sufficient to achieve 20% oxygen in the chamber over 5-10 minutes. The variation of P02 with time will be exponential rather than linear, like this

at oxygenbindingskurven fortrinnsvis utvikles ved bruk av X-Y skriveren hvor oxygenelektroden 36 driver X-aksen, og hvor elektronmultiplikatoren 42 tilveiebringer signalene for utvikling av Y-komponenten i skriveren. Da oxygenelektroden 36 ikke kommer that the oxygen binding curve is preferably developed using the X-Y printer where the oxygen electrode 36 drives the X axis, and where the electron multiplier 42 provides the signals for developing the Y component in the printer. As the oxygen electrode 36 does not come

i kontakt med blodproven, må FO^ i kammeret varieres tilstrekkelig langsomt, slik at blodet alltid effektivt er i likevekt med PO,, i kammeret. in contact with the blood sample, FO^ in the chamber must be varied sufficiently slowly, so that the blood is always effectively in equilibrium with PO,, in the chamber.

Viftens 34 dimensjoner er slik valgt at der tilveiebringes ensartet kraftig blanding under testforsoket. The fan's 34 dimensions are chosen in such a way that uniform, powerful mixing is provided during the test trial.

Det 0,254 mm tykke blodlag i cellen 14 tillater regulert oxygenering av blodet som ovenfor beskrevet, i lopet av 5 - 10 minutter, og den umiddelbare deoxygenering krever ca. 15 minutter. Ved anvéndelse av mindre blodlagtykkelse (f.eks. The 0.254 mm thick blood layer in the cell 14 allows regulated oxygenation of the blood as described above, in the course of 5 - 10 minutes, and the immediate deoxygenation requires approx. 15 minutes. When using a smaller blood layer thickness (e.g.

0, lOl mm eller mindre) kan den nodvendige tid tilsvarende reduse- \ res. 0, lOl mm or less) the required time can be correspondingly reduced.

Ved '" å anbringe cellen 14 horisontalt som ovenfor beskrevet, elimineres muli:ge vanskeligheter forbundet med avleiring av rode blodceller under lange forsok. By placing the cell 14 horizontally as described above, possible difficulties associated with the deposition of red blood cells during long trials are eliminated.

Blodproven forbehandles med et egnet reagens, slik som Heparin eller andre velkjente anti-koaguleringsmidler, for å forhindre sammenklumpning. Dette gjores på det tidspunkt blodet trekkes ut av pasienten. The blood sample is pretreated with a suitable reagent, such as Heparin or other well-known anti-coagulants, to prevent clotting. This is done at the time the blood is drawn from the patient.

Fig. 4 og 5 viser en annen form for membrancelle, generelt angitt ved 14' og utformet i overensstemmelse, med foreliggende oppfinnelse. Cellen 14' omfatter en rustfri stålring 15' formet med et ringformet indre sete 50 i hvilket der er semen- Figs 4 and 5 show another form of membrane cell, generally indicated at 14' and designed in accordance with the present invention. The cell 14' comprises a stainless steel ring 15' formed with an annular inner seat 50 in which there is

tert et sirkulært kvartsvindu 51 hvis toppflate er ca. 0,254 mm under ringens topplan, for å avgrense den blodprovemottagende grop. Diametralt motsatte kanalgroper 52 og 53 er formet i topp-, delen av ringen, og som står i forbindelse med hovedgropen. Ka-pillarrørene 18 og 17 loper vertikalt og forseglende gjennom de motsatte deler av ringen og står i forbindelse med kanalgropene 52 og 53. Ringen har den nedre reduserte del 22' som er fast-spent i den understøttende ring 23 på samme måte som tidligere beskrevet i forbindelse med fig. 2 og 3. tert a circular quartz window 51 whose top surface is approx. 0.254 mm below the top plane of the ring, to delineate the blood sample receiving pit. Diametrically opposite channel pits 52 and 53 are formed in the top part of the ring, and which are in connection with the main pit. The capillary tubes 18 and 17 run vertically and sealingly through the opposite parts of the ring and are connected to the channel pits 52 and 53. The ring has the lower reduced part 22' which is clamped in the supporting ring 23 in the same way as previously described in connection with fig. 2 and 3.

Ring 15' har en avrundet toppranddel 43' som forer tilRing 15' has a rounded top edge part 43' which serves as a liner

en periferisk renne 19', og en strukket gjennomsiktig gass-permeabel membran 20 er festet over blodprovegropen ved hjelp av en 0-ring 21 som klemmer randdelen av membranen i rennen 19' som i den tidligere beskrevne celle 14. a circumferential channel 19', and a stretched transparent gas-permeable membrane 20 is fixed over the blood sample well by means of an O-ring 21 which clamps the edge part of the membrane in the channel 19' as in the previously described cell 14.

Forskjellige anordninger kan anvendes i stedet for en 0-ring for å feste den strukne gjennomsiktige gass-permeable membran over blodprovegropen. Således kan f.eks. membranen klemmes i en egnet giggmontering. En film av silicongummisement kan på-fores randdelen av hovedcellelegemet, og denne randdel kan klem mes mot membranen, idet denne strekkes stramt., og holdes mot denne inntil sementen er herdet, hvorefter overskudd av membranma-teriale kan klippes vekk. Various devices can be used instead of an 0-ring to secure the stretched transparent gas-permeable membrane over the blood sample well. Thus, e.g. the membrane is clamped in a suitable jig assembly. A film of silicone rubber cement can be applied to the edge part of the main cell body, and this edge part can be clamped against the membrane, as this is stretched tight, and held against it until the cement has hardened, after which excess membrane material can be cut away.

Selvom den ovenfor beskrevne prosed3/re gjor bruk av en hel blodprove som prove, er det også mulig å anvende fortynnet x blod eller hemoglobin i opplbsning som en prove ved fremgangsmåten. 1 noen tilfeller er det mulig og onskelig å utelate dekkmembranen 20 og bare anvende et tynt lag blod med tykkelse på 0,0254 mm på en flat gjennomsiktig bæreplate, passende montert i kammeret 26 i stedet for celle 14. Under disse omsten-digheter er omhyggelig kontroll av fuktigheten i kammeret nodvendig. Although the procedure described above uses a whole blood sample as a sample, it is also possible to use diluted x blood or hemoglobin in solution as a sample in the method. In some cases, it is possible and desirable to omit the cover membrane 20 and only apply a thin layer of blood 0.0254 mm thick on a flat transparent carrier plate, suitably mounted in the chamber 26 instead of the cell 14. In these circumstances, careful control of the humidity in the chamber necessary.

I den utforelsesform som er vist i fig. 6 - 10 er gasskammeret vist ved 26' utstyrt med en stor sirkulær åpning 60 i sin hoyre endevegg 25' som vist i fig. 7. En vertikal dekkplate 61 er glidbart understøttet på et par parallelle, horisontale, relativt lange stbttestaver 62, 62 som er gjengbart festet i de nedre hjbrnedeler av endevegg 25', hvilke stavstykker er utstyrt med ytre hodedeler 63, 63 for å begrense den hoyrerettede utvidelse av dekkplaten 61 til den stiplede posisjon som er vist i fig. 7. Dekkplate 61 er formet med aat indre utragende sirkulæ- In the embodiment shown in fig. 6 - 10, the gas chamber shown at 26' is equipped with a large circular opening 60 in its right end wall 25' as shown in fig. 7. A vertical cover plate 61 is slidably supported on a pair of parallel, horizontal, relatively long support rods 62, 62 which are threadedly fixed in the lower head parts of end wall 25', which rod pieces are equipped with outer head parts 63, 63 to limit the right-directed extension of the cover plate 61 to the dashed position shown in fig. 7. Cover plate 61 is shaped with an inner protruding circular

re fremspring 64 formet til hovedsakelig å passe inn i åpningen 60 når dekkplaten er i lukket stilling. De understøttende stavstykker 62, 62 er utstyrt ved sine indre endedeler med ringfor-mede stoppefjærspor 65, og bunnkantdelen av dekkplate 61 er utstyrt med fjæropplagrede baller 66 som er eftergivende og låsen-de i forbindelse med rennene 65 for å holde dekkplaten 61 i lukket stilling som vist fullt opptrukket i fig. 7. Dekkplate 61 er utvendig utstyrt med en sentral operasjonsknapp 67. re protrusion 64 shaped to fit substantially into opening 60 when the cover plate is in the closed position. The supporting rod pieces 62, 62 are equipped at their inner end parts with ring-shaped stop spring grooves 65, and the bottom edge part of the cover plate 61 is equipped with spring-loaded balls 66 which are yielding and locking in connection with the channels 65 to keep the cover plate 61 in the closed position as shown fully drawn up in fig. 7. Cover plate 61 is externally equipped with a central operating button 67.

Stivt festet til den sentrale del av fremspringet 64Rigidly attached to the central part of the projection 64

er den horisontale understøttende arm 24' som bærer blodprove-celleelementet vist ved 68. Det understøttende celleelement 68 omfatter et opprinnelig ringformet ugjennomsiktig stykke som har en sentral bunnåpning 69 og en oppstående periferisk krave is the horizontal support arm 24' which carries the blood sample cell element shown at 68. The cell support element 68 comprises an initially annular opaque piece having a central bottom opening 69 and a raised circumferential collar

70 med motstående avkuttede flater 71, 71 som vist i fig. 8 for70 with opposite cut surfaces 71, 71 as shown in fig. 8 for

o o

å gi adgang for fingrene for fjerning av prover som vil bli be- to give access to the fingers for the removal of samples that will be

skrevet i det efterfdlgende. Som senere vil bli beskrevet, er written in the following. As will be described later, is

blodproven understøttet på en sirkulær gjennomskinnli,g skive 72 av glass eller lignende, plasert i setet avgrenset av elementet 68, og som er dekket med en gass-permeabel membranskive 73 plasert over proven og holdt derpå ved hjelp av overflatespennin-. - gen av blodproven, som vist ved 74 (se fig. 10). the blood sample supported on a circular transparent disk 72 of glass or the like, placed in the seat bounded by the element 68, and which is covered with a gas-permeable membrane disk 73 placed over the sample and held thereon by means of surface tension. - gene of the blood sample, as shown at 74 (see Fig. 10).

Det anvendte optiske system med to bølgelengder kan væ-re lik det som tidligere er beskrevet, men et mer okonomisk system som kan anvendes omfatter en egnet polykromatisk lyskilde 75 inneholdende referansebolgelengdenA^ og målebolgelengden .A^, anordnet til å gi en stråle 76 rettet oppover gjennom bunnvindu 12, åpningen 69, blodproven 74 mellom skivene 72 og 73, og gjennom toppvinduet 13. Efter absorpsjon av blodproven fores strålen 76 gjennom toppvinduet 13 til en strålesplitter 77, slik som et halv-forsolvet 45° speil og danner to respektive utgangsstrå-ler 78 og 79, hvor strålen 78 overfores gjennom det halv-forsol-vede speil, og stråle 79 reflekteres fra dette. Strålen 78 fores gjennom et egnet J\filter 80 til en forste elektronmultiplikator 81, og strålen 79 passerer gjennom et egnet .A filter 82' til en andre elektronmultiplikator 82. Utgangsstrommene"'"AR°^"y\.Mtil ^^^o^U-^^P-^katorene 81 og 82 påtrykkes de respektive innganger i en konvensjonell logaritmisk regnefor-sterker 83 som gir et utgangssigna 1 lik log I - log 1-^?ell!.er log ■= The optical system with two wavelengths used can be similar to that previously described, but a more economical system that can be used comprises a suitable polychromatic light source 75 containing the reference wavelength A^ and the measurement wavelength .A^, arranged to provide a beam 76 directed upwards through the bottom window 12, the opening 69, the blood sample 74 between the discs 72 and 73, and through the top window 13. After absorption of the blood sample, the beam 76 is fed through the top window 13 to a beam splitter 77, such as a half-sunlit 45° mirror and forms two respective output beams beams 78 and 79, where beam 78 is transmitted through the half-sunlit mirror, and beam 79 is reflected from this. The beam 78 is fed through a suitable J\filter 80 to a first electron multiplier 81, and the beam 79 passes through a suitable .A filter 82' to a second electron multiplier 82. The output currents"'"AR°^"y\.Mtil ^^^o The U-^^P-^caters 81 and 82 are applied to the respective inputs of a conventional logarithmic arithmetic amplifier 83 which gives an output signal 1 equal to log I - log 1-^?ell!.er log ■=

Utgangssignalet fra forsterker 83 avgis til Y-inngangen i den tilknyttede X-Y skriver. Som i de tidligere beskrevne ut-forelsesformer for oppfinnelsen er en oxygen-fSigende elektrode anbragt i gasskammeret 26' for utvikling av X-komponenten av skriveren. The output signal from amplifier 83 is output to the Y input of the associated X-Y printer. As in the previously described embodiments of the invention, an oxygen-sensing electrode is placed in the gas chamber 26' for development of the X component of the printer.

I et typisk arrangement ifolge fig. 7-10 har glassski-ven 72 en diameter på ca. 18 mm, og den gjennomsiktige membranskive er ca. 10 mm i diameter. Det understøttende celleelement 68 er formet for å tilpasset motta skiven 72 på den måte sem er vist i fig. 7 - 10, hvorav fremgår at delene av skive 72 rager In a typical arrangement according to fig. 7-10, the glass disc 72 has a diameter of approx. 18 mm, and the transparent membrane disc is approx. 10 mm in diameter. The supporting cell element 68 is shaped to accommodate the disk 72 in the manner shown in fig. 7 - 10, from which it appears that the parts of disk 72 project

utover på den annen side av flatene 71, 71 for at disse lett kan gripes mellom operatorens fingre når det er onsket å lofte ski- outwards on the other side of the surfaces 71, 71 so that these can be easily grasped between the operator's fingers when it is desired to lift the ski

ven 72 som bærer blodproven 74 og membranskiven 73 fra holderen 68 (med dekkplaten 61 i sin åpne stiplefie stilling vist i fig. 7). vein 72 which carries the blood sample 74 and the membrane disk 73 from the holder 68 (with the cover plate 61 in its open dotted position shown in Fig. 7).

Det blodlag som skal undersbkes fremstilles som folger: En skive 72 er plasert i holderen 68. En dråpe blod med 1-2 microliters volum plaseres på den sentrale del av skiven 72. Membranskiven 73 (som'kan være fremstillet av MEM-213 materiale fra General Electric) plaseres over blodproven som da danner et tynt lag 74 på grunn av kapillarvirkningen kombinert med skivens vekt. Derefter fores dekkplaten 61 til sin lukkede stilling, som vist fullt opptrukket i fig. 7. The blood layer to be examined is prepared as follows: A disc 72 is placed in the holder 68. A drop of blood with a volume of 1-2 microliters is placed on the central part of the disc 72. The membrane disc 73 (which can be made of MEM-213 material from General Electric) is placed over the blood sample which then forms a thin layer 74 due to the capillary action combined with the disc's weight. The cover plate 61 is then brought to its closed position, as shown fully extended in fig. 7.

Blodlaget 74 har en tykkelse på mindre enn 25 micron,The blood layer 74 has a thickness of less than 25 microns,

og kan være så liten som mellom 10 og 20 micron i tykkelse. Dette muliggjør fullstendig deoxygenering i lopet av 11/2-2 minutter, hurtig ett-trinns oxygenering på 3-5 sekunder, og dan-nelse av oxygenassosiasjonslikevektkurver i lopet av 5 minutter. and can be as small as between 10 and 20 microns in thickness. This enables complete deoxygenation in 11/2-2 minutes, rapid one-step oxygenation in 3-5 seconds, and formation of oxygen association equilibrium curves in 5 minutes.

I motsetning til dette krever et 0,254 mm's tykt lag fra 15 tilIn contrast, a 0.254 mm thick layer requires from 15 to

20 minutter for deoxygenering og 30 - 50 sekunder for hurtig et-trinnsoxygenering. Anvendelsen av den gass-permeable, åkke-po-rose membranskive 73 utsetter også vanntap og tillater sikker håndtering av blodlaget i omgivende luft. 20 minutes for deoxygenation and 30 - 50 seconds for rapid one-step oxygenation. The use of the gas-permeable, yoke-porous membrane disc 73 also delays water loss and allows safe handling of the blood layer in ambient air.

De egnede bølgelengder for spektrofotometri med to bøl-gelengder hvor et blodlag på 25 micron eller mindre i tykkelse anvendes er 438 nm og 448 nm, og derfor er disse bølgelengder fortrinnsvis anvendt for_A„ og<->A_. The suitable wavelengths for spectrophotometry with two wavelengths where a blood layer of 25 microns or less in thickness is used are 438 nm and 448 nm, and therefore these wavelengths are preferably used for _A„ and <->A_.

M ^ RM ^ R

Med proven installert i holderen 68 på den ovenfor beskrevne måte, forsirkuleres den forst for å oppnå en sikker blodkondisjonering (et meget viktig krav) som folger: Kammeret 26' spyles hurtig med nitrogeninneholdende 5 % C00, f.eks. i 1 minutt med en hastighet på 100 cm 3 /min, for å o deoxygenere proven. Proven oxygeneres derefter hurtig ved at oxygen inneholdende 5 % COg innfores i lopet av 5 sekunder ved 120 mm's trykk. X-Y - skriveren kalibreres derefter ved justering slik at det optiske signal gir en Y-komponent avlesning som lagres som 100 % oxygenering. Kammeret 26'. spyles derefter med nitrogen inneholdende 5 % CO,-,. Efter deoxygenering avleses igjen det optiske signal og lagres som 0 % oxygenering. De to lagrede verdier anvendes for å fastslå nullpunktet og utslaget for Y-aksen i X-Y skriveren, slik at kurven automatisk loper over 0 - 100 % på Y-aksen. With the sample installed in the holder 68 in the manner described above, it is first pre-circulated to achieve safe blood conditioning (a very important requirement) as follows: The chamber 26' is rapidly flushed with nitrogen containing 5% C00, e.g. for 1 minute at a rate of 100 cm 3 /min, to o deoxygenate the sample. The sample is then quickly oxygenated by introducing oxygen containing 5% COg over the course of 5 seconds at a pressure of 120 mm. The X-Y - printer is then calibrated by adjusting so that the optical signal gives a Y-component reading which is stored as 100% oxygenation. Chamber 26'. is then flushed with nitrogen containing 5% CO,-,. After deoxygenation, the optical signal is read again and stored as 0% oxygenation. The two stored values are used to determine the zero point and the output for the Y-axis in the X-Y printer, so that the curve automatically runs over 0 - 100% on the Y-axis.

Oxygenassosiasjonskurven for proven kan derefter utle-des ved å folge den prosedyre som tidligere er beskrevet, nemlig ved å tilfore oxygen i kammeret og måle forandringen i The oxygen association curve for the sample can then be derived by following the procedure previously described, namely by adding oxygen to the chamber and measuring the change in

log •= overfor oxygenkonsentrasjoneh under anvendelse av det log •= versus oxygen concentrationh using it

.AR .YEAR

ovenfor beskrevne optiske system i forbindelse med X-Y skriveren. Dette gir et mål for fraksjonsforandringen i optisk tetthet som tilsvarer oxyhemoglobinfraksjonen i proven over oxygenkonsentra-sjonsområdet i kammer 26'. optical system described above in connection with the X-Y printer. This provides a measure of the fractional change in optical density that corresponds to the oxyhemoglobin fraction in the sample over the oxygen concentration range in chamber 26'.

Den her beskrevne teknikk gir et blodlag som er relativt motstandsdyktig overfor fordampning og relativt stabilt med tiden,- slik at gjentatte assosias j onskurvemålin ger kan utfores på samme prove. The technique described here provides a blood layer that is relatively resistant to evaporation and relatively stable over time, so that repeated association curve measurements can be carried out on the same sample.

Når en prove skal fjernes fra kammeret 26', trekkes dekkplaten 61 ut i sin fulle uttrukne tilstand, hvilket tillater operatoren lett å fjerne proven ved å gripe de utstående, motsatte kantdeler av skiven 72 mellom fingrene og lofte skiven ut av holderen 68. When a sample is to be removed from the chamber 26', the cover plate 61 is pulled out in its fully extended condition, allowing the operator to easily remove the sample by grasping the protruding, opposite edge portions of the disk 72 between the fingers and lifting the disk out of the holder 68.

Claims

1. Assembly for use in a photometer for measuring oxygen association curves, characterized in that it comprises a chamber, devices for transmitting a measuring light beam through the chamber, light-transmitting cell devices arranged to support a thin flat layer of a sample of the material in the chamber in the optical path of the measuring light beam, • a source of deoxygenating gas, regulated line devices that connect the deoxygenating gas source to said chamber, an oxygen source, and regulated line devices that connect the oxygen source to said chamber.

2. Assembly according to claim 1, characterized in that the cell devices comprise a light-transmitting body with a shallow, flat sample-receiving recess and a gas-permeable transparent membrane attached to the body above and covering the recess.

3. Assembly according to claim 1, characterized in that it comprises oxygen-feeding devices mounted in the chamber.

4. Assembly according to claim 3, characterized in that the oxygen mixing devices comprise an oxygen electrode.

5. Assembly according to claim 1, characterized in that the cell devices comprise a light-transmitting body with a shallow, flat sample-receiving recess with a depth of approx.

0.254 mm, and a gas-permeable transparent membrane attached to the body and covering the recess.

6. Assembly according to claim 5, characterized in that an oxygen-feeding electrode is mounted in the chamber.

7. Assembly according to claim 1, characterized in that the chamber is equipped with a narrowed gas outlet passage in a wall part of the chamber.

8. Assembly according to claim 1, characterized in that the cell devices comprise a light-transmitting body, a transparent supporting element mounted on the light-transmitting body and arranged to receive the sample material, and a transparent gas-permeable membrane intended to lie above the sample material.

9. Assembly according to claim 8, characterized in that the light-transmitting body is formed with a seat shaped to receive the transparent supporting body.

10. Assembly according to claim 9, characterized in that the transparent supporting element protrudes from opposite sides of the seat.

11. Assembly according to claim 8, characterized in that the chamber is equipped with an extendable closing piece, and that the light-transmitting body is supportively connected to the extending closing piece.

12. Assembly according to claim 11, characterized in that the closing piece comprises a vertical plate and in which the chamber is equipped with devices which slideably support the plate for horizontal expansion in relation to the chamber.

13. Assembly according to claim 1, characterized in that it comprises a light source that develops the measuring light beam, which source contains at least two wavelengths, which wavelengths have different absorption characteristics when they are passed through a blood sample that is subjected to oxygenation, and devices ti 1 to compare the relative degrees of absorption for the two wavelengths with the amount of oxygen added to the chamber.

14. Assembly according to claim 13, characterized in that the devices for comparing the relative absorption rates with the amount of oxygen supplied in the chamber comprise devices for deriving a first electrical signal according to the relative absorption degrees, means for deriving a second electrical signal according to the degree of oxygen supplied in the chamber, and means to delineate the first signal against the second signal.

15. Sample cell for measuring oxygen association curves of hemoglobin, characterized in that it comprises a light-transmitting sub-clearing body formed with a shallow recess, transparent devices on the body for supporting the blood sample in the recess, and a gas-permeable transparent membrane intended to lie over a blood sample on the blood sample supporting device.

16. Sample cell according to claim 15. characterized in that the recess has a depth of 0.254 mm' to support a thin, flat layer of blood in the recess.

17. Test cell according to claim 15, characterized in that the body has a reduced part, and an annular supporting jack piece which supports and surrounds the reduced part.

18. Method for measuring the oxygen association curve of a blood sample, characterized in that the blood sample is arranged in the form of a thin, flat layer, after which the sample is first deoxygenated by exposing it to a deoxygenating gas, after which the deoxygenated flat layer of the blood sample is exposed to oxygen with a regulated speed, and that changes in the degree of light absorption of the flat layer are measured at the same time as it is exposed to oxygen at the regulated speed.

19. Method according to claim 18, characterized in that the deoxygenating gas comprises nitrogen.

20. Method according to claim 18, characterized in that the measured light absorption change is continuously recorded against the amount of oxygen to which the flat layer is exposed, thereby deriving an oxygen association curve for the blood sample.

21. Method according to claim 18, characterized in that the flat layer of the blood sample is exposed to the deoxygenating gas. and the regulated amount of oxygen via a gas-permeable membrane.

22. Method for measuring the oxygen association curve for a blood sample, characterized in that it comprises arranging the blood sample in the form of a thin, flat layer, and that the sample is first deoxygenated by exposing it to a deoxygenating gas, and that the deoxygenated flat layer of the blood sample is exposed to oxygen, and that the amount of oxygen to which the sample is exposed is continuously measured, and that two respective monochromatic bulb lengths are passed through the sample while it is being oxygenated, whereby at one. wavelength there is no change in the degree of absorption between oxygenated and deoxygenated blood, and where at the other wavelength there is a relatively large change in the degree of absorption between oxygenated and deoxygenated blood, and where the difference in absorption for the two wavelengths is plotted against the amount >of oxygen since the sample is oxygenated .

23. Method for deriving the oxygen association curve for a blood sample, characterized in that the sample is arranged in the form of a thin, flat layer, after which the sample is deoxygenated by exposing it to a deoxygenating gas and then exposing the deoxygenated flat layer of the blood sample to oxygen, and that the amount of oxygen to which the sample is exposed is continuously measured, and that radiation, including two wavelengths, is passed through the sample at the same time as it is oxygenated, where at one wavelength there is no change in the degree of absorption between oxygenated and deoxygenated blood, and where at the other wavelength is one relatively large change in the degree of absorption between oxygenated and deoxygenated blood, and that a function of the relative degree of absorption for the two wavelengths is plotted against the amount of oxygen since the sample is oxygenated.

24. Method according to claim 23, characterized in that the flat layer of the blood sample is first conditioned by exposing it to a deoxygenating gas followed by exposing it to an oxygenating gas.

25.. Method according to claim 23, characterized in that the thin, flat layer is formed by the sample being placed between a pair of transparent parts and that the sample is allowed to spread between the transparent parts by capillary action.