NO324882B1 - Optically pure camptotecin analogs, optically pure intermediate, process for their preparation, use and pharmaceutical preparation - Google Patents

Optically pure camptotecin analogs, optically pure intermediate, process for their preparation, use and pharmaceutical preparation Download PDF

Info

Publication number
NO324882B1
NO324882B1 NO20000995A NO20000995A NO324882B1 NO 324882 B1 NO324882 B1 NO 324882B1 NO 20000995 A NO20000995 A NO 20000995A NO 20000995 A NO20000995 A NO 20000995A NO 324882 B1 NO324882 B1 NO 324882B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
compound
general formula
represented below
formula
product
Prior art date
Application number
NO20000995A
Other languages
Norwegian (no)
Other versions
NO20000995L (en
NO20000995D0 (en
Inventor
Jean-Bernard Cazaux
Christine Le Breton
Eric Manginot
Dennis C H Bigg
Olivier Lavergne
Original Assignee
Sod Conseils Rech Applic
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sod Conseils Rech Applic filed Critical Sod Conseils Rech Applic
Publication of NO20000995L publication Critical patent/NO20000995L/en
Publication of NO20000995D0 publication Critical patent/NO20000995D0/en
Publication of NO324882B1 publication Critical patent/NO324882B1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

OPTISK RENE ANALOGER AV CAMPTOTECIN, OPTISK RENT SYNTETISK MELLOMPRODUKT OG FREMGANGSMÅTE FOR FREMSTILLING AV DISSE OPTICALLY PURE ANALOGUES OF CAMPTOTECIN, OPTICALLY PURE SYNTHETIC INTERMEDIATE AND PROCESS FOR THEIR PREPARATION

Camptotecin er en naturlig forbindelse som ble isolert for første gang fra bladene og barken av den kinesiske planten betegnet camptotheca acuminata (se Wall et al. J. Amer. Chem. Soc. 88:3888 (1966)). Camptotecin er en pentacyklisk forbindelse oppbygget av et indolizino[1,2-b]kinolinfragment kondensert med et a-hydroksylakton med seks bindinger. Karbonet i stilling 20 som bærer a-hyd-roksygruppen er asymmetrisk og gir molekylet en rotasjonsevne. Den naturlige formen av camptotecin har en absolutt "S" konfigurasjon med hensyn til karbon 20 og svarer til den følgende formel: Camptothecin is a natural compound that was first isolated from the leaves and bark of the Chinese plant camptotheca acuminata (see Wall et al. J. Amer. Chem. Soc. 88:3888 (1966)). Camptothecin is a pentacyclic compound made up of an indolizino[1,2-b]quinoline fragment condensed with an α-hydroxylactone with six bonds. The carbon in position 20 which carries the α-hydroxy group is asymmetric and gives the molecule a rotational ability. The natural form of camptothecin has an absolute "S" configuration with respect to carbon 20 and corresponds to the following formula:

Camptotecin har en anti-proliferativ aktivitet i mange cancerøse cellelinjer, omfattende cellelinjene av humane tumorer i kolon, lunge og bryst (Suffness, M Camptothecin has an anti-proliferative activity in many cancerous cell lines, including the cell lines of human tumors of the colon, lung and breast (Suffness, M

et al: The Alkaloids Chemistry and Pharmacology, Bross A., red., bind 25, p. 73 (Academic Press, 1985)). Det er foreslått at den anti-proliferative aktiviteten av camptotecin er forbundet med dets hemmende aktivitet på DNA topoisomerase I. et al: The Alkaloids Chemistry and Pharmacology, Bross A., ed., vol. 25, p. 73 (Academic Press, 1985)). It has been proposed that the anti-proliferative activity of camptothecin is associated with its inhibitory activity on DNA topoisomerase I.

Det har vært antydet at a-hydroksylakton var et absolutt krav for både in vivo og in vitro aktiviteten av camptotecin (Camptothecins: New Anticancer Agents, Putmesil, M et al, red., p. 27 (CRC Press, 1995); Wall M. et al, Cancer Res. 55:753 (1995); Hertzberg et al, J. Med. Chem. 32:715 (1982) og Crow et al, It has been suggested that α-hydroxylactone was an absolute requirement for both the in vivo and in vitro activity of camptothecin (Camptothecins: New Anticancer Agents, Putmesil, M et al, eds., p. 27 (CRC Press, 1995); Wall M . et al, Cancer Res. 55:753 (1995); Hertzberg et al, J. Med. Chem. 32:715 (1982) and Crow et al,

J. Med. Chem. 35:4160 (1992)). Senere har søkeren perfeksjonert en ny klasse av analoger av camptothecin, hvor et B-hydroksylakton erstatter det naturlige oc-hydroksylaktonet av camptotecin (kfr. Patentsøknad WO 97/00876). J. Med. Chem. 35:4160 (1992)). Later, the applicant has perfected a new class of analogues of camptothecin, where a B-hydroxylactone replaces the natural oc-hydroxylactone of camptothecin (cf. patent application WO 97/00876).

En gjenstand for foreliggende oppfinnelse er en ny fremstillingsmetode for et enantiomerisk rent syntetisk mellomprodukt, så vel som nye enantiomerisk rene analoger av camptotecin. An object of the present invention is a new preparation method for an enantiomerically pure synthetic intermediate, as well as new enantiomerically pure analogues of camptothecin.

For det første er en gjenstand for foreliggende oppfinnelse derfor nye analoger av camptotecin som er forskjellige fra hvilke som helst kjente forbindelser, kjennetegnet ved at de har formelen (II) representert nedenfor Firstly, an object of the present invention is therefore new analogues of camptothecin which are different from any known compounds, characterized by having the formula (II) represented below

eller ved at det er saltene av forbindelsen med formel (II) så som for eksempel det med formel (III) representert nedenfor Et nøkkel-mellomprodukt i syntesen av denne typen av optisk rene forbindelser er et produkt med den generelle formel M representert nedenfor or by being the salts of the compound of formula (II) such as for example that of formula (III) represented below A key intermediate in the synthesis of this type of optically pure compounds is a product of the general formula M represented below

hvor R representerer en lineær eller forgrenet alkylrest inneholdende fra 1 til 10 karbonatomer. Fortrinnsvis, representerer R en etylrest. where R represents a linear or branched alkyl radical containing from 1 to 10 carbon atoms. Preferably, R represents an ethyl residue.

Forbindelsen med formel (II) kan fremstilles på følgende måte: The compound of formula (II) can be prepared in the following way:

- forbindelsen med formel - the connection with formula

kobles med én forbindelse med formel N2 representert nedenfor: for å fremstille forbindelsen med formel O2: - ringslutningen av forbindelse 02 gir forbindelsen med formel (II), som, etter saltdannelse, kan gi forbindelsen med formel (III). is coupled with one compound of formula N2 represented below: to prepare the compound of formula O2: - the cyclization of compound O2 gives the compound of formula (II), which, after salt formation, can give the compound of formula (III).

Dannelsen av forbindelse O2 ved å starte fra forbindelsen med den generelle formel M hvori R representerer en etylrest og N2 blir utført med en behandling kjent for fagfolk på området under navnet Mitsunobu's reaksjon (se Mitsunobu, O. et al. Synthesis, p,1 (1981)). Hydroksylfunksjonen av forbindelse N er erstattet med en nukleofil, så som forbindelse M eller et deprotonert derivat av den sistnevnte, ved en behandling med et fosfin, for eksempel trifenylfosfin og et azodikarboksylatderivat, for eksempel dietyl eller diisopropyl-azodikarboksylat, i et aprotisk oppløsningsmiddel så som, for eksempel tetrahydrofuran eller N, N-dimetylformamid. Ringslutningen av forbindelse O2 for å fremstille forbindelsen med formel (II) blir fortrinnsvis utført i nærvær av en palladium- katalysator (for eksempel palladiumdiacetat) under basiske betingelser (tilveiebrakt for eksempel ved et alkalisk acetat eventuelt kombinert med et faseoverføringsmiddel, så som, for eksempel tetrabutylammoniumbromid), i et aprotisk oppløsningsmiddel så som acetonitril eller A/,A/-dimetylformamid, ved en temperatur mellom 50° C og 120° C (R. Grigg et al., Tetrahedron 46, side 4003 (1990)). The formation of compound O2 by starting from the compound of the general formula M in which R represents an ethyl residue and N2 is carried out by a procedure known to those skilled in the art under the name Mitsunobu's reaction (see Mitsunobu, O. et al. Synthesis, p,1 ( 1981)). The hydroxyl function of compound N is replaced with a nucleophile, such as compound M or a deprotonated derivative of the latter, by treatment with a phosphine, for example triphenylphosphine and an azodicarboxylate derivative, for example diethyl or diisopropyl azodicarboxylate, in an aprotic solvent such as , for example tetrahydrofuran or N,N-dimethylformamide. The cyclization of compound O2 to produce the compound of formula (II) is preferably carried out in the presence of a palladium catalyst (for example palladium diacetate) under basic conditions (provided for example by an alkaline acetate optionally combined with a phase transfer agent such as, for example tetrabutylammonium bromide), in an aprotic solvent such as acetonitrile or A/,A/-dimethylformamide, at a temperature between 50° C and 120° C (R. Grigg et al., Tetrahedron 46, page 4003 (1990)).

Oppfinnelsen tilveiebringer også en forbindelse med den generelle formel M som definert tidligere. Dette produktet kan anvendes for fremstilling av medikamenter. The invention also provides a compound of the general formula M as defined previously. This product can be used for the production of medicines.

Forbindelsen med formel M blir syntetisert i henhold til en ny fremgangsmåte som utgjør del av foreliggende oppfinnelse og omfatter de følgende suksessive trinnene: The compound of formula M is synthesized according to a new method which forms part of the present invention and comprises the following successive steps:

- den racemiske f-butylesteren representert nedenfor - the racemic f-butyl ester represented below

(for dens fremstilling se spesielt patentsøknad WO 97/00876) blir behandlet med trifluoreddiksyre i 18 timer ved omgivelsestemperatur for å fremstille den tilsvarende karboksylsyren; - kinidinsaltet av 3-(3-benzyloksymetyl-2-metoksy-4-pyridyl)-3-hydroksy-pentan-syre blir oppvarmet i isopropylalkohol ved en temperatur høyere enn 30 °C og fortrinnsvis ved ca. 50 °C, før reaksjonsmediet hensettes for å avkjøles til omgivelsestemperatur, slik at saltet av (+) enantiomeren av 3-(3-benzyloksymetyl-2-metoksy-4-pyridyl)-3-hydroksy-pentansyre krystalliserer mens saltet av (-) isomeren, hvis anionet er representert nedenfor, forblir i løsning - løsningen i isopropylalkohol av saltet av (-) enantiomeren av 3-(3-benzyloksy-metyl-2-metoksy-4-pyridyl)-3-hydroksy-pentansyre blir konsentrert og behandlet med saltsyre og om rørt, idet forbindelsen med formel A' representert nedenfor fremstilles - forbindelsen A<1> blir deretter bragt i kontakt med palladium på fuktig karbon, deretter blir ammoniumformiat eller maursyre satt til blandingen for å fremstille det debenzylerte produkt B<1> representert nedenfor - deretter blir forbindelsen med formel B<1> ringsluttet ved virkningen av dicykloheksylkarbodiimid for å oppnå den laktoniske forbindelse med formel C representert nedenfor - til slutt blir -OCH3 gruppen av den laktoniske forbindelsen med formel C omdannet til karbonyl, ved virkningen av natriumjodid og trimetylsilylklorid, for å oppnå (+)-5-etyl-5-hydroksy-1,3,4,5,8,9-heksahydrooxepino[3,4-c]pyridin-3)9-dion (eller (+)-EHHOPD) representert nedenfor. (for its preparation see in particular patent application WO 97/00876) is treated with trifluoroacetic acid for 18 hours at ambient temperature to prepare the corresponding carboxylic acid; - the quinidine salt of 3-(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-3-hydroxypentanoic acid is heated in isopropyl alcohol at a temperature higher than 30 °C and preferably at approx. 50 °C, before the reaction medium is allowed to cool to ambient temperature, so that the salt of the (+) enantiomer of 3-(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-3-hydroxy-pentanoic acid crystallizes while the salt of (-) the isomer, if the anion is represented below, remains in solution - the solution in isopropyl alcohol of the salt of the (-) enantiomer of 3-(3-benzyloxy-methyl-2-methoxy-4-pyridyl)-3-hydroxy-pentanoic acid is concentrated and treated with hydrochloric acid and stirred, the compound of formula A' represented below being prepared - the compound A<1> is then brought into contact with palladium on wet carbon, then ammonium formate or formic acid is added to the mixture to prepare the debenzylated product B<1> represented below - then the compound of formula B<1> is cyclized by the action of dicyclohexylcarbodiimide to obtain the lactonic compound of formula C represented below - finally the -OCH3 group of the lactonic compound of formula C is converted to carbonyl, by the action of sodium iodide and trimethylsilyl chloride, to obtain (+)-5-ethyl-5-hydroxy-1,3,4,5, 8,9-Hexahydrooxepino[3,4-c]pyridine-3)9-dione (or (+)-EHHOPD) represented below.

Forbindelsen med formel N2 kan oppnås i henhold til den følgende fremgangsmåten: anilinet med formel P2 representert nedenfor blir orto-acylert ved omsetning med kloracetonitril i nærvær av bortriklorid og en annen Lewis-syre, så som aluminiumtriklorid, titantetraklorid eller dietylaluminiumklorid i et aprotisk oppløsningsmiddel eller en blanding av aprotiske oppløsnings-midler, fulgt av hydrolyse ( cf. Sugasawa T. et al. J. Am. Chem. Soc. 100 p,4842 The compound of formula N2 can be obtained according to the following procedure: the aniline of formula P2 represented below is ortho-acylated by reaction with chloroacetonitrile in the presence of boron trichloride and another Lewis acid, such as aluminum trichloride, titanium tetrachloride or diethylaluminum chloride in an aprotic solvent or a mixture of aprotic solvents, followed by hydrolysis (cf. Sugasawa T. et al. J. Am. Chem. Soc. 100 p,4842

(1978)). Mellomproduktet oppnådd på denne måten blir deretter behandlet med etylmalonylklorid i et aprotisk oppløsningsmiddel, så som acetonitril, i nærvær av en base, så som trietylamin, deretter behandlet med et alkalisk alkoholat, for eksempel natriummetylat i metanol, for å fremstille etyl 7-klor-4-klormetyl-6-metyl-2-okso-1,2-dihydro-3-kinolinkarboksylat. Den sistnevnte blir omdannet til etyl 2,7-diklor-4-klormetyl-6-metyl-3-kinolinkarboksylat ved behandling med fosforyloksy-klorid. Deretter utføres nukleofil substitusjon ved behandling med 4-metylpiperidin. Etylkarboksylatfunksjonen blir deretter redusert med diisobutylaluminiumhydrid i et aprotisk oppløsningsmiddel, så som diklormetan, for å fremstille forbindelsen med formel tø. Rekkefølgen de to siste trinnene utføres i kan reverseres. (1978)). The intermediate thus obtained is then treated with ethylmalonyl chloride in an aprotic solvent, such as acetonitrile, in the presence of a base, such as triethylamine, then treated with an alkaline alcoholate, such as sodium methylate in methanol, to produce ethyl 7-chloro- 4-Chloromethyl-6-methyl-2-oxo-1,2-dihydro-3-quinolinecarboxylate. The latter is converted to ethyl 2,7-dichloro-4-chloromethyl-6-methyl-3-quinolinecarboxylate by treatment with phosphoryloxy chloride. Nucleophilic substitution is then carried out by treatment with 4-methylpiperidine. The ethyl carboxylate function is then reduced with diisobutylaluminum hydride in an aprotic solvent, such as dichloromethane, to produce the compound of formula twe. The order in which the last two steps are performed can be reversed.

Analoger av mellomproduktforbindelsen av N2 type er beskrevet i litteraturen og spesielt i søknaden PCT 95/05427. Analogues of the intermediate compound of the N2 type are described in the literature and in particular in the application PCT 95/05427.

Forbindelsen med formel (II) kan omdannes til farmasøytisk godtagbare salter i henhold til vanlige metoder. Godtagbare salter omfatter, eksempelvis og på ikke-begrensende måte, addisjonssaltene med uorganiske syrer så som hydro-klorid, sulfat, fosfat, difosfat, hydrobromid og nitrat eller med organiske syrer så som acetat, maleat, fumarat, tartrat, succinat, citrat, laktat, metansulfonat, p-toluensulfonat, pamoat, salicylat, oksalat og stearat. For andre eksempler på farmasøytisk godtagbare salter vises det til "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sei. 66:1 (1977). The compound of formula (II) can be converted into pharmaceutically acceptable salts according to conventional methods. Acceptable salts include, for example and in a non-limiting way, the addition salts with inorganic acids such as hydrochloride, sulfate, phosphate, diphosphate, hydrobromide and nitrate or with organic acids such as acetate, maleate, fumarate, tartrate, succinate, citrate, lactate , methanesulfonate, p-toluenesulfonate, pamoate, salicylate, oxalate and stearate. For other examples of pharmaceutically acceptable salts, see "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Pollock. 66:1 (1977).

Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse har nyttige farmakologiske egenskaper. Således har forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse en hem-stand antyder at forbindelsene ifølge oppfinnelsen har en anti-parasitisk og/eller anti-viral aktivitet. På denne måten kan forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse anvendes i forskjellig terapeutiske anvendelser. The compounds according to the present invention have useful pharmacological properties. Thus, the compounds according to the present invention have a heme state, suggesting that the compounds according to the invention have an anti-parasitic and/or anti-viral activity. In this way, the compounds according to the present invention can be used in various therapeutic applications.

En illustrasjon av de farmakologiske egenskapene av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse vil bli funnet nedenfor i den eksperimentelle delen. Forbindelsene kan hemme topoisomerase, for eksempel av type I og II, hos en pasient, for eksempel et pattedyr så som et menneske, ved administrering til denne pasienten av en terapeutisk effektiv mengde av en forbindelse med formel (II) eller av et farmasøytisk godtagbart salt av en forbindelse med formel (II) eller også av hvilken som helst blanding av sistnevnte forbindelser. An illustration of the pharmacological properties of the compounds of the present invention will be found below in the experimental section. The compounds can inhibit topoisomerase, for example of types I and II, in a patient, for example a mammal such as a human, by administering to said patient a therapeutically effective amount of a compound of formula (II) or of a pharmaceutically acceptable salt of a compound of formula (II) or also of any mixture of the latter compounds.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen har en anti-tumor aktivitet. De kan anvendes for behandling av tumorer, for eksempel tumorer som uttrykker en topoisomerase, hos en pasient ved administrering til nevnte pasient av en terapeutisk effektiv mengde av en forbindelse med formel (II) eller av et farmasøytisk godtagbart salt av en forbindelse med formel (II) eller også av hvilken som helst blanding av sistnevnte forbindelser. Eksempler på tumorer eller kreft omfatter kreft i spiserøret, maven, tarmene, rektum, munnhulen, svelget, strupehodet, lungene, tarmen, brystet, livmorhalsen, corpus endometrium, eggstokkene, prostata, testiklene, blæren, nyrene, leveren, bukspyttkjertelen, ben, bindevevet, huden, øyet, hjernen og sentralnervesystemet, så vel som kreft i skjoldbruskkjertelen, leukemi, 1-lodgkin's sykdom, lymfomer forskjellige fra de beslektet med Hodgkin, multiple myelomer og andre. The compounds according to the invention have an anti-tumor activity. They can be used for the treatment of tumors, for example tumors expressing a topoisomerase, in a patient by administering to said patient a therapeutically effective amount of a compound of formula (II) or of a pharmaceutically acceptable salt of a compound of formula (II ) or also of any mixture of the latter compounds. Examples of tumors or cancers include cancer of the esophagus, stomach, intestines, rectum, oral cavity, pharynx, larynx, lungs, bowel, breast, cervix, corpus endometrium, ovaries, prostate, testes, bladder, kidneys, liver, pancreas, bones, connective tissue , the skin, the eye, the brain and the central nervous system, as well as thyroid cancer, leukemia, 1-lodgkin's disease, non-Hodgkin's lymphomas, multiple myeloma and others.

De kan også anvendes for behandling av parasittiske infeksjoner ved hemning av hemoflagellatene (for eksempel i trypanose eller leishmaniasis infeksjoner) eller ved hemning av plasmodia (så som for eksempel i malaria), men også for behandlingen av virale infeksjoner og sykdommer. They can also be used for the treatment of parasitic infections by inhibiting the haemoflagellates (for example in trypanosis or leishmaniasis infections) or by inhibiting plasmodia (such as in malaria), but also for the treatment of viral infections and diseases.

Disse egenskaper gjør produktet med formel (II) egnet for farmasøytiske anvendelser. En gjenstand for foreliggende oppfinnelse er også, som medikamenter, produktet med formel(ll) som definert ovenfor, så vel som addisjonssaltene med farmasøytisk godtagbare mineralsyrer eller organiske syrer av produktet med formel (II), så som for eksempel saltet av formel (III) beskrevet tidligere eller også av hvilken som helst blanding av sistnevnte forbindelser. Tilsvarende angår oppfinnelsen de farmasøytiske preparatene inneholdende minst ett av medikamentene som definert ovenfor som aktiv bestanddel. These properties make the product of formula (II) suitable for pharmaceutical applications. An object of the present invention is also, as drugs, the product of formula (II) as defined above, as well as the addition salts with pharmaceutically acceptable mineral acids or organic acids of the product of formula (II), such as for example the salt of formula (III) described previously or also of any mixture of the latter compounds. Correspondingly, the invention concerns the pharmaceutical preparations containing at least one of the drugs as defined above as active ingredient.

Følgelig angår oppfinnelsen farmasøytiske preparater inneholdende en forbindelse ifølge oppfinnelsen eller et addisjonssalt med en farmasøytisk godtagbar syre av dette, i kombinasjon med en farmasøytisk godtagbar bærer i henhold til den valgte administreringsmetode (for eksempel oral, intravenøs, intraperiton-eal, intramuskulær, transdermisk eller subkutan). Det farmasøytiske preparatet (for eksempel terapeutisk) kan foreligge i form av et faststoff, væske, liposom eller lipidisk micelle. Consequently, the invention relates to pharmaceutical preparations containing a compound according to the invention or an addition salt with a pharmaceutically acceptable acid thereof, in combination with a pharmaceutically acceptable carrier according to the chosen method of administration (for example oral, intravenous, intraperitoneal, intramuscular, transdermal or subcutaneous ). The pharmaceutical preparation (for example therapeutic) can be in the form of a solid, liquid, liposome or lipidic micelle.

Det farmasøytiske preparatet kan foreligge i fast form, så som for eksempel pulvere, piller, granuler, tabletter, liposomer, gelatinkapsler eller suppositorier. Pillen, tabletten eller gelatinkapselen kan være dekket med en substans som kan beskytte preparatet mot virkningen av magesyre eller enzymer i maven av objektet i en tilstrekkelig tidsperiode til å tillate preparatet å passere i en ikke-nedbrutt form i tynntarmen av den sistnevnte. Forbindelsen kan også administreres lokalt, for eksempel ved samme lokalisering som tumoren. Forbindelsen kan også administreres i henhold til en forsinket frigjøringsprosess (for eksempel et forsinket frigjøringspreparat eller en infusjonspumpe). Den passende faststoffbæreren kan for eksempel være kalsiumfosfat, magnesiumstearat, magnesiumkarbonat, talk, sukkere, laktose, dekstrin, stivelse, gelatin, cellulose, metylcellulose, natrium-karboksymetylcellulose, polyvinylpyrrolidin og voks. De farmasøytiske preparatene inneholdende en forbindelse ifølge oppfinnelsen kan også foreligge i væskeform så som, for eksempel løsninger, emulsjoner, suspensjoner eller en formulering med forsinket frigivelse. Egnede væskebærere kan for eksempel være vann, organiske oppløsningsmidler så som glyserol eller glykoler så som polyetylenglykol, tilsvarende deres blandinger, i varierte andeler, i vann. The pharmaceutical preparation can be in solid form, such as, for example, powders, pills, granules, tablets, liposomes, gelatin capsules or suppositories. The pill, tablet or gelatin capsule may be coated with a substance which can protect the preparation from the action of gastric acid or enzymes in the stomach of the subject for a sufficient period of time to allow the preparation to pass in an undegraded form into the small intestine of the latter. The compound can also be administered locally, for example at the same location as the tumor. The compound can also be administered according to a delayed release process (eg, a delayed release formulation or an infusion pump). The suitable solid carrier may be, for example, calcium phosphate, magnesium stearate, magnesium carbonate, talc, sugars, lactose, dextrin, starch, gelatin, cellulose, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, polyvinylpyrrolidine and waxes. The pharmaceutical preparations containing a compound according to the invention can also be in liquid form such as, for example, solutions, emulsions, suspensions or a formulation with delayed release. Suitable liquid carriers can be, for example, water, organic solvents such as glycerol or glycols such as polyethylene glycol, corresponding to their mixtures, in varying proportions, in water.

En gjenstand for foreliggende oppfinnelse er også anvendelse av produktet med formel (II) som definert ovenfor eller addisjonssalter derav med farmasøytisk godtagbare mineralsyrer eller organiske syrer av et produkt med formel (II), så som for eksempel saltet av formel (III) beskrevet tidligere eller også en blanding av sistnevnte forbindelser, for fremstilling av medikamenter som er ment å hemme topoisomerase, og mer spesielt topoisomeraser av type I eller type II, medikamenter ment for behandling av tumorer, medikamenter ment for behandling av parasittiske infeksjoner, så vel som medikamenter ment for behandling av virale infeksjoner eller -sykdommer. An object of the present invention is also the use of the product of formula (II) as defined above or addition salts thereof with pharmaceutically acceptable mineral acids or organic acids of a product of formula (II), such as for example the salt of formula (III) described previously or also a mixture of the latter compounds, for the preparation of drugs intended to inhibit topoisomerase, and more particularly type I or type II topoisomerases, drugs intended for the treatment of tumors, drugs intended for the treatment of parasitic infections, as well as drugs intended for treatment of viral infections or diseases.

Dosen av en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse som forutses for behandling av sykdommene eller lidelsene nevnt ovenfor, varierer i henhold til administreringsmetoden, alderen og kroppsvekt av objektet som skal behandles så vel som tilstanden av den sistnevnte og den fastsettes av den behandlende lege eller veterinær. En slik mengde bestemt av den behandlende lege eller veterinær betegnes her «terapeutisk effektiv mengde». The dose of a compound according to the present invention envisaged for the treatment of the diseases or disorders mentioned above varies according to the method of administration, the age and body weight of the object to be treated as well as the condition of the latter and it is determined by the attending physician or veterinarian. Such an amount determined by the attending physician or veterinarian is referred to here as "therapeutically effective amount".

Hvis ikke definert på annen måte har alle de tekniske og vitenskapelige betegnelsene som her er anvendt den samme betydning som vanligvis anvendes av spesialister innen det fagfeltet som oppfinnelsen tilhører. If not defined otherwise, all the technical and scientific designations used here have the same meaning as is usually used by specialists in the field to which the invention belongs.

De følgende eksempler er presentert for å illustrere de ovenfor omtalte fremgangsmåtene og utgjør ingen begrensning av omfanget av foreliggende oppfinnelse. The following examples are presented to illustrate the methods mentioned above and do not constitute a limitation of the scope of the present invention.

EKSPERIMENTELL DEL: EXPERIMENTAL PART:

Eksempel 1 : (+)- 5- etyl- 5- hydroksy- 1, 3, 4, 5, 8, 9- heksahydrooksepino[ 3, 4-c] pyridin- 3, 9- dion [(+)- EHHOPD] 1 .a. Kinidinsalt av 3-(3-benzyloksymetyl-2-metoksy-4-pyridyl)-3-hydroksy-pentansyre: Tertiobutyl 3-(3-benzyloksymetyl-2-metoksy-4-pyridyl)-3-hydroksy-penta-noat (40 g; 100 mmol) blir behandlet med trifluoreddiksyre (150 ml) og reaksjonsmediet blir om rørt i 18 timer ved 20°C. Etter inndampning av trifluoreddiksyren, blir metylenklorid (200 ml) hellet i og en mettet løsning av natriumbikarbonat blir innført inntil pH = 7,5-8. Etter dekantering, blir den vandige fasen vasket med 100 ml metylenklorid. pH i den vandige fasen blir deretter regulert til 1 ved tilsetning av en oppløsning av 6N saltsyre. Produktet blir deretter ekstrahert fra den vandige fasen med metylenklorid (2 ganger 200 ml). Løsningen blir tørket over magnesiumsulfat og konsentrert. 3-(3-benzyloksymetyl-2-metoksy-4-pyridyl)-3-hydroksy-pentansyren (31,1 g; 90 mmol) således oppnådd, opptatt i isopropylalkohol (30 ml), blir behandlet med en oppløsning av kinidin (29,2 g; 90 mmol) Example 1 : (+)- 5- ethyl- 5- hydroxy- 1, 3, 4, 5, 8, 9- hexahydrooxepino[ 3, 4-c] pyridine- 3, 9-dione [(+)- EHHOPD] 1 .a. Quinidine salt of 3-(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-3-hydroxy-pentanoic acid: Tertiobutyl 3-(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-3-hydroxy-penta-noate (40 g; 100 mmol) is treated with trifluoroacetic acid (150 ml) and the reaction medium is stirred for 18 hours at 20°C. After evaporation of the trifluoroacetic acid, methylene chloride (200 ml) is poured in and a saturated solution of sodium bicarbonate is introduced until pH = 7.5-8. After decantation, the aqueous phase is washed with 100 ml of methylene chloride. The pH of the aqueous phase is then adjusted to 1 by adding a solution of 6N hydrochloric acid. The product is then extracted from the aqueous phase with methylene chloride (2 x 200 ml). The solution is dried over magnesium sulfate and concentrated. The 3-(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-3-hydroxypentanoic acid (31.1 g; 90 mmol) thus obtained, taken up in isopropyl alcohol (30 ml), is treated with a solution of quinidine (29 .2 g; 90 mmol)

i isopropylalkohol (30 ml) ved 50°C under agitering inntil fullstendig oppløsning. Deretter hensettes reaksjonsmediet slik at temperatur reduseres til 40°C, agiter-ingen blir stanset og temperaturen tillates å falle til 20°C. Mediet tas til 0°C uten agitering, holdes deretter ved denne temperatur i 16 timer. Deretter får temperaturen stige til 20°C og agitering blir utført inntil krystallisering. Mediet blir fortynnet in isopropyl alcohol (30 ml) at 50°C with agitation until complete dissolution. The reaction medium is then set aside so that the temperature is reduced to 40°C, the agitation is stopped and the temperature is allowed to fall to 20°C. The medium is taken to 0°C without agitation, then kept at this temperature for 16 hours. The temperature is then allowed to rise to 20°C and agitation is carried out until crystallization. The medium is diluted

med isopropylalkohol og deretter filtrert. Fellingen skylles med isopropylalkohol. Saltet av (+) enantiomeren utfelles (m=26,6 g) mens saltet av (-) enantiomeren forblir i løsning i isopropylalkoholen. Således blir filtratet gjenvunnet og blir konsentrert for å fremstille en olje (34 g) som blir anvendt uten ytterligere rensing i det følgende trinn. with isopropyl alcohol and then filtered. The precipitate is rinsed with isopropyl alcohol. The salt of the (+) enantiomer precipitates (m=26.6 g), while the salt of the (-) enantiomer remains in solution in the isopropyl alcohol. Thus, the filtrate is recovered and is concentrated to produce an oil (34 g) which is used without further purification in the following step.

Produktene analyseres ved HPLC på en 5u CHIRAL AGP kolonne (10 cm x 4mm) elueres med en 30/920/50 isopropylalkohol/vann/fosfat bufferblanding, pH = 6,5, ved en strømningshastighet på 1,2 ml/min, UV deteksjon ved 280 nm. De oppnådde retensjonstidene er 6,4 minutter for (-) enantiomeren og 2,8 minutter for (+) enantiomeren. (-) Enantiomer / (+) enantiomer forholdet er 83/17. 1.b. (-)-3-(3-benzyloksymetyl-2-metoksy-4-pyridyl)-3-hydroksy-pentansyre Løsningen i isopropylalkohol av kinidinsaltet av (-) enantiomeren av 3-(3-benzyl-oksymetyl-2-metoksy-4-pyridyl)-3-hydroksy-pentansyre (trinn 1 .a) blir konsentrert. Konsentratet blir tatt opp i 270 ml metylenklorid og 270 ml av en 1N løsning av saltsyre. Reaksjonsmediet blir omrørt i 16 timer ved 20°C. Etter dekantering blir den organiske fasen konsentrert, konsentratet blir tatt opp i metanol for å anvendes i det følgende trinn. The products are analyzed by HPLC on a 5u CHIRAL AGP column (10 cm x 4 mm) eluted with a 30/920/50 isopropyl alcohol/water/phosphate buffer mixture, pH = 6.5, at a flow rate of 1.2 ml/min, UV detection at 280 nm. The retention times obtained are 6.4 minutes for the (-) enantiomer and 2.8 minutes for the (+) enantiomer. (-) Enantiomer / (+) enantiomer ratio is 83/17. 1.b. (-)-3-(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-3-hydroxy-pentanoic acid The solution in isopropyl alcohol of the quinidine salt of the (-) enantiomer of 3-(3-benzyl-oxymethyl-2-methoxy-4 -pyridyl)-3-hydroxypentanoic acid (step 1.a) is concentrated. The concentrate is taken up in 270 ml of methylene chloride and 270 ml of a 1N solution of hydrochloric acid. The reaction medium is stirred for 16 hours at 20°C. After decantation, the organic phase is concentrated, the concentrate is taken up in methanol to be used in the following step.

13,5 g produkt (utbytte of 87%) og et (-)enantiomer (+) enantiomer forhold på 85/15 blir oppnådd. 13.5 g of product (yield of 87%) and a (-)enantiomer (+) enantiomeric ratio of 85/15 are obtained.

HPLC retensjonstidene (samme fremgangsmåte som i 1 .a.) er: The HPLC retention times (same procedure as in 1.a.) are:

- (-) enantiomer: 6,4 minutter - (-) enantiomer: 6.4 minutes

- (+) enantiomer: 2,8 minutter - (+) enantiomer: 2.8 minutes

1 .c. (+)-5-etyl-5-hydroksy-1,3,4,5,8,9-heksahydrooksepino[3,4-c] pyridin-3,9-dion; 1.c. (+)-5-ethyl-5-hydroxy-1,3,4,5,8,9-hexahydrooxepino[3,4-c]pyridine-3,9-dione;

(-)-3-(3-benzyloksymetyl-2-metoksy-4-pyridyl)-3-hydroksy-pentansyre (-)-3-(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-3-hydroxypentanoic acid

(13,5 g; 39 mmol; trinn 1 .b) bringes i løsning i 87 ml metanol. Denne løsningen blir hellet under nitrogen på 10% palladium på fuktig karbon ved 50% (27,7 g; 13m mol). Reaksjonsmediet blir omrørt i 5 minutter, deretter blir det hellet i en oppløs-ning av ammoniumformiat (11,5 g; 183 mmol) i 135 ml metanol. Reaksjonsmediet blir omrørt i 30 minutter mens temperaturen tillates å stige, deretter blir det oppvarmet ved 40°C i 30 minutter. Mediet blir deretter filtrert på et sjikt av Clarcel fulgt av konsentrering. 40 ml toluen blir hellet inn og blir avdampet; denne operasjonen (13.5 g; 39 mmol; step 1.b) is brought into solution in 87 ml of methanol. This solution is poured under nitrogen onto 10% palladium on moist carbon at 50% (27.7 g; 13m mol). The reaction medium is stirred for 5 minutes, then it is poured into a solution of ammonium formate (11.5 g; 183 mmol) in 135 ml of methanol. The reaction medium is stirred for 30 minutes while the temperature is allowed to rise, then it is heated at 40°C for 30 minutes. The medium is then filtered on a layer of Clarcel followed by concentration. 40 ml of toluene are poured in and evaporated; this operation

blir gjentatt for å eliminere metanolen. Det derved oppnådde residuet blir tatt opp i 45 ml THF. Deretter blir en oppløsning av dicykloheksylkarbodiimid (7,180 g; 34,5 mmol) i 20 ml THF hellet i. Reaksjonsmediet blir oppvarmet til 50°C i 1 time. Blandingen bringes til 20°C hvoretter dicykloheksylurea blir filtrert. Filtratet blir konsentrert til tørrhet. Residuet bringes i løsning i 46 ml acetonitril, 6,0 g (40,5 mmol.) natriumjodid og deretter 5,13 ml (40,5 mmol) trimetylsilylklorid blir tilsatt. Reaksjonsmediet blir holdt under agitering ved omgivelsestemperatur i 5 timer. Deretter blir 28 ml acetonitril og 5,6 ml vann tilsatt. Fellingen oppnådd blir filtrert, deretter tatt opp i 1 ml vann og pH reguleres til 7,5 ved tilsetning av en oppløsning av ammoniumhydroksid. Det faste stoffet oppnådd blir filtrert og tørket, m = 4,2 g sluttprodukt blir oppnådd i et utbytte på 34 % og et (+) enantiomer / (-) enantiomer forhold på 88,4/11,6. is repeated to eliminate the methanol. The resulting residue is taken up in 45 ml of THF. Then a solution of dicyclohexylcarbodiimide (7.180 g; 34.5 mmol) in 20 ml of THF is poured in. The reaction medium is heated to 50°C for 1 hour. The mixture is brought to 20°C after which the dicyclohexylurea is filtered. The filtrate is concentrated to dryness. The residue is dissolved in 46 ml of acetonitrile, 6.0 g (40.5 mmol) of sodium iodide and then 5.13 ml (40.5 mmol) of trimethylsilyl chloride are added. The reaction medium is kept under agitation at ambient temperature for 5 hours. Then 28 ml of acetonitrile and 5.6 ml of water are added. The precipitate obtained is filtered, then taken up in 1 ml of water and the pH is adjusted to 7.5 by adding a solution of ammonium hydroxide. The solid obtained is filtered and dried, m = 4.2 g of final product is obtained in a yield of 34% and a (+) enantiomer / (-) enantiomer ratio of 88.4/11.6.

HPLC analyse blir utført på en Chiralcel OD kolonne 25 cm x 4,6 mm, eluerings-midlet anvendt er heptan 600 og etanol 400, strømningshastigheten er 1 ml/min 210 nm. Den oppnådde retensjonstiden er: - (-) enantiomer: 7,1 minutter - (+) enantiomer: 9 minutter. Produktet blir tatt opp i aceton (40 ml), deretter blir vann (150 ml) tilsatt. Reaksjonen etterlates for å utfelles og 3 g produkt blir oppnådd med et (+) enantiomer / (-) enantiomer forhold på 99,4/11,6. HPLC analysis is performed on a Chiralcel OD column 25 cm x 4.6 mm, the eluent used is heptane 600 and ethanol 400, the flow rate is 1 ml/min 210 nm. The retention time obtained is: - (-) enantiomer: 7.1 minutes - (+) enantiomer: 9 minutes. The product is taken up in acetone (40 ml), then water (150 ml) is added. The reaction is left to precipitate and 3 g of product is obtained with a (+) enantiomer / (-) enantiomer ratio of 99.4/11.6.

NMR <1>H (250 MHz, DMSO D6): 0,8 (f, 3H, CH3-CH2); 1,65 (m, 2H, CH2-CH3); 3,00-3,35 ( q, 1H+1H, -CH2-C=0); 5,3 ( q, 2H, CH2-O); 5,7 (s, -OH); 6,35 (o*. aromatisk 1H); 7,3 (d, aromatisk 1H); 11,7 (s, N-H). NMR <1>H (250 MHz, DMSO D6 ): 0.8 (f, 3H, CH3-CH2 ); 1.65 (m, 2H, CH 2 -CH 3 ); 3.00-3.35 (q, 1H+1H, -CH2-C=O); 5.3 (q, 2H, CH2-O); 5.7 (s, -OH); 6.35 (o*. aromatic 1H); 7.3 (d, aromatic 1H); 11.7 (p, N-H).

Eksempel 2: (+) 1-[ 9- klor- 5- etyl- 5- hydroksy- 10- metyl- 3, 15- diokso- 4, 5, 13, 15-tetrahydro- 1H, 3H- oksepino[ 3', 4' :6J] indolizino[ 1, 2- b] kinolifr metyl- heksahydropyridiniumklorid Example 2: (+) 1-[9-chloro-5-ethyl-5-hydroxy-10-methyl-3,15-dioxo-4,5,13,15-tetrahydro-1H,3H-oxepino[3', 4' :6J]indolizino[1,2-b]quinolifr methyl-hexahydropyridinium chloride

2.a. 1 -(2-amino-4-klor-5-metylfenyl)-2-klor-etanon: 2. a. 1-(2-amino-4-chloro-5-methylphenyl)-2-chloroethanone:

3-klor-4-metylanilin (44,4 ml; 0,366 mol) i 1,2-dikloretan (440 ml), under en argonatmosfære, blir avkjølt i et isbad. Følgende blir tilsatt dråpevis og i følgende rekkefølge i blandingen: bortriklorid (1M i heptan; 400 ml; 0,4 mol), kloracetonitril (28 ml; 0,44 mol) og dietylaluminiumklorid (1M i heptan; 400 ml; 0,4 mol). Under tilsetningen holdes temperaturen under 20j C. Den resulterende blanding blir deretter oppvarmet ved tilbakeløp i 3 timer, deretter avkjølt til 10j C. Hydrolyse av reaksjonsmediet blir deretter utført forsiktig ved anvendelse av 2N saltsyre (240 3-Chloro-4-methylaniline (44.4 mL; 0.366 mol) in 1,2-dichloroethane (440 mL), under an argon atmosphere, is cooled in an ice bath. The following are added dropwise and in the following order to the mixture: boron trichloride (1M in heptane; 400 ml; 0.4 mol), chloroacetonitrile (28 ml; 0.44 mol) and diethylaluminum chloride (1M in heptane; 400 ml; 0.4 mol ). During the addition, the temperature is kept below 20°C. The resulting mixture is then heated at reflux for 3 hours, then cooled to 10°C. Hydrolysis of the reaction medium is then carried out carefully using 2N hydrochloric acid (240

ml) og det blir oppvarmet ved tilbakeløp i 1 time. Vann (1 I) og etylacetat (1 I) blir tilsatt, blandingen oppnådd blir omrørt i 15 minutter før separering av fasene. Den vandige fasen blir igjen ekstrahert med etylacetat (200 ml) og de samlede organiske faser blir vasket med vann (500 ml). Etter tørking over magnesiumsulfat blir den organiske fasen konsentrert. Residuet blir tatt opp i petroleter (fraksjon som har et kokepunkt på 45 til 60°C; 150 ml) og den således oppnådde blandingen hensettes i 16 timer ved 4°C. Det resulterende utfelte stoff blir oppsamlet ved filtrering, vasket med petroleter og tørket under redusert trykk for å fremstille produktet i overskriften (°C 25 g; 31 % utbytte). Sm.p. 129-130°C. ml) and it is heated at reflux for 1 hour. Water (1 L) and ethyl acetate (1 L) are added, the mixture obtained is stirred for 15 minutes before separating the phases. The aqueous phase is again extracted with ethyl acetate (200 ml) and the combined organic phases are washed with water (500 ml). After drying over magnesium sulfate, the organic phase is concentrated. The residue is taken up in petroleum ether (fraction which has a boiling point of 45 to 60°C; 150 ml) and the mixture thus obtained is left for 16 hours at 4°C. The resulting precipitate is collected by filtration, washed with petroleum ether and dried under reduced pressure to afford the title product (°C 25 g; 31% yield). Sm.p. 129-130°C.

NMR <1>H (DMSO): 2,20 (s, 3H); 4,98 (s, 2H); 6,90 (s, 1H); 7,15 (bred topp, 2H); 7,70 (s, 1H). NMR <1>H (DMSO): 2.20 (s, 3H); 4.98 (s, 2H); 6.90 (s, 1H); 7.15 (broad peak, 2H); 7.70 (p, 1H).

IR(KBr): 871, 1018, 1183, 1225, 1270, 1533, 1577, 1619,1662 cm"1. 2.b. Etyl 7-klor-4-klormetyl-6-metyl-2-okso-1,2-dihydro-3-kinolinkarboksylat: Produktet fra trinn 3.a (25 g; 0,11 mol) og trietylamin (30,6 ml; 0,22 mol) blir blandet sammen i acetonitril (520 ml). Etylmalonylklorid (28,1 ml; 0,22 mol) blir tilsatt ved omgivelsestemperatur og under en argonatmosfære. Blandingen oppnådd blir omrørt i 3 timer. Natriumetanolat (fremstilt ved oppløsning av 3 g, dvs. 0,13 mol, natrium i 140 ml absolutt etanol) blir deretter tilsatt dråpevis og den resulterende blanding blir omrørt ved omgivelsestemperatur i 16 timer. Fellingen blir oppsamlet ved filtrering, vasket suksessivt med etanol, vann, etanol og eter. Den blir deretter tørket under redusert trykk ved 70°C over fosforpentoksid for å fremstille produktet i overskriften (28,6 g; 83 % utbytte) i form av et hvitaktig pulver. IR(KBr): 871, 1018, 1183, 1225, 1270, 1533, 1577, 1619,1662 cm"1. 2.b. Ethyl 7-chloro-4-chloromethyl-6-methyl-2-oxo-1,2 -dihydro-3-quinolinecarboxylate: The product from step 3.a (25 g; 0.11 mol) and triethylamine (30.6 mL; 0.22 mol) are mixed together in acetonitrile (520 mL).Ethylmalonyl chloride (28.1 ml; 0.22 mol) is added at ambient temperature and under an argon atmosphere. The mixture obtained is stirred for 3 hours. Sodium ethanolate (prepared by dissolving 3 g, i.e. 0.13 mol, of sodium in 140 ml of absolute ethanol) is then added dropwise and the resulting mixture is stirred at ambient temperature for 16 hours. The precipitate is collected by filtration, washed successively with ethanol, water, ethanol and ether. It is then dried under reduced pressure at 70°C over phosphorus pentoxide to prepare the title product ( 28.6 g; 83% yield) in the form of a whitish powder.

NMR <1>H (DMSO): 1,30 (t, 3H); 2,40 (s, 3H); 4,35 (q, 2H); 4,85 (s, 2H); NMR <1>H (DMSO): 1.30 (t, 3H); 2.40 (s, 3H); 4.35 (q, 2H); 4.85 (s, 2H);

7,41 (s, 1H); 7,91 (s, 1H); 12,15 (bred topp, 1H). 7.41 (s, 1H); 7.91 (s, 1H); 12.15 (broad top, 1H).

IR (KBr): 879, 1108, 1250, 1288, 1483, 1664, 1721 cm"<1>. IR (KBr): 879, 1108, 1250, 1288, 1483, 1664, 1721 cm"<1>.

2.c. Etyl 2,7-diklor-4-klormetyl-6-metyl-3-kinolinkarboksylat: 2.c. Ethyl 2,7-dichloro-4-chloromethyl-6-methyl-3-quinolinecarboxylate:

Produktet fra trinn 3.b (28,4 g; 90 mmol) blir oppvarmet i 4 timer ved til-bakeløp i fosforoksyklorid (400 ml). Blandingen oppnådd blir konsentrert under redusert trykk (20 mm Hg) ved 80°C. Residuet blir tatt opp i diisopropyleter (400 ml). Det resulterende, utfelte stoff blir oppsamlet ved filtrering, vasket med eter og petroleter, deretter tørket under redusert trykk for å fremstille produktet i overskriften (25,4 g; 85 % utbytte) i form av et hvitaktig pulver (Sm.p. 126-127°C). NMR <1>H (DMSO): 1,37 (t, 3H); 2,58 (s, 3H); 4,49 (q, 2H); 5,14 (s, 2H); The product from step 3.b (28.4 g; 90 mmol) is heated for 4 hours at reflux in phosphorus oxychloride (400 ml). The mixture obtained is concentrated under reduced pressure (20 mm Hg) at 80°C. The residue is taken up in diisopropyl ether (400 ml). The resulting precipitate is collected by filtration, washed with ether and petroleum ether, then dried under reduced pressure to afford the title product (25.4 g; 85% yield) as a whitish powder (Sm.p. 126- 127°C). NMR <1>H (DMSO): 1.37 (t, 3H); 2.58 (s, 3H); 4.49 (q, 2H); 5.14 (s, 2H);

8,16 (s, 1H); 8,35 (s, 1H). 8.16 (s, 1H); 8.35 (p, 1H).

IR (KBr): 874, 1006, 1163, 1243, 1278, 1577, 1723 cm"<1>. IR (KBr): 874, 1006, 1163, 1243, 1278, 1577, 1723 cm"<1>.

2.d. 2,7-diklor-4-klormetyl-6-metyl-3-klnolylmetanol: 2.d. 2,7-dichloro-4-chloromethyl-6-methyl-3-chlorolylmethanol:

Produktet fra trinn 3.c (25,2 g; 76,5 mmol) blir blandet under en argonatmosfære med dikloretan (630 ml). Diisobutylaluminiumhydrid (1M i diklormetan; 307 ml; 307 mmol) blir tilsatt dråpevis mens reaksjonsblandingen blir omrørt og temperaturen blir holdt under 20°C. Reaksjonsblandingen blir deretter omrørt ved omgivelsestemperatur i 3 timer, deretter hellet i en vandig løsning av kaliumtartrat (konsentrert til 20 % etter vekt; 1,51). Den derved oppnådde emulsjonen blir om-rørt kraftig i 1 time, filtrert på celit og de to fasene blir deretter separert. Den vandige fasen blir ekstrahert med etylacetat (200 ml) og de samlede organiske faser blir vasket med en vandig løsning av natriumklorid (konsentrert til 20 % etter vekt; 500 ml). Den oppnådde organiske fasen blir tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under redusert trykk. Residuet blir tatt opp i dietyleter (50 ml) og det resulterende, utfelte stoffet blir oppsamlet ved filtrering. Ved tørking under redusert trykk oppnås produktet i overskriften (18,3 g; 93 % utbytte) i form av et hvitaktig pulver (Sm.p. 169-170°C). The product from step 3.c (25.2 g; 76.5 mmol) is mixed under an argon atmosphere with dichloroethane (630 ml). Diisobutylaluminum hydride (1M in dichloromethane; 307 ml; 307 mmol) is added dropwise while the reaction mixture is stirred and the temperature is maintained below 20°C. The reaction mixture is then stirred at ambient temperature for 3 hours, then poured into an aqueous solution of potassium tartrate (concentrated to 20% by weight; 1.51). The resulting emulsion is stirred vigorously for 1 hour, filtered on celite and the two phases are then separated. The aqueous phase is extracted with ethyl acetate (200 ml) and the combined organic phases are washed with an aqueous solution of sodium chloride (concentrated to 20% by weight; 500 ml). The organic phase obtained is dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue is taken up in diethyl ether (50 ml) and the resulting precipitate is collected by filtration. By drying under reduced pressure, the product in the title is obtained (18.3 g; 93% yield) in the form of a whitish powder (M.p. 169-170°C).

NMR <1>H (DMSO): 2,57 (t, 3H); 4,84 (s, 2H); 5,36 (s, 2H); 8,06 (s, 1H); NMR <1>H (DMSO): 2.57 (t, 3H); 4.84 (s, 2H); 5.36 (s, 2H); 8.06 (s, 1H);

8,27 (s, 1H). 8.27 (p, 1H).

IR (KBr): 870, 1022, 1102,1304,1482, 1567 cm"<1>. IR (KBr): 870, 1022, 1102, 1304, 1482, 1567 cm"<1>.

2.e. 2,7-diklor-6-metyl-4-(4-metylpiperidinometyl)-3-kinolylmetanol: 2.e. 2,7-dichloro-6-methyl-4-(4-methylpiperidinomethyl)-3-quinolylmethanol:

En løsning av produktet fra trinn 3.d (16,2 g; 55,7 mmol) i THF (70 ml) blir behandlet med en oppløsning av 4-metylpiperidin (23 ml; 195 mmol). Blandingen oppnådd blir omrørt ved omgivelsestemperatur i 2 timer. Vann (200 ml) og dikloretan (200 ml) blir tilsatt. Den organiske fasen blir vasket med en vandig løsning av natriumklorid (konsentrert til 20 % etter vekt; 100 ml), tørket over magnesiumsulfat og konsentrert under redusert trykk. Ved krystallisering av residuet fra dietyleter oppnås produktet i overskriften (18,3 g; 93 % utbytte) i form av et hvitt krystallinsk faststoff (Sm.p. 170-171,5°C). A solution of the product from step 3.d (16.2 g; 55.7 mmol) in THF (70 mL) is treated with a solution of 4-methylpiperidine (23 mL; 195 mmol). The mixture obtained is stirred at ambient temperature for 2 hours. Water (200 ml) and dichloroethane (200 ml) are added. The organic phase is washed with an aqueous solution of sodium chloride (concentrated to 20% by weight; 100 ml), dried over magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure. By crystallization of the residue from diethyl ether, the title product is obtained (18.3 g; 93% yield) in the form of a white crystalline solid (M.p. 170-171.5°C).

NMR <1>H (CDCI3): 0,88 (d, 3H); 1,17 (m, 2H); 1,42 (m, 1H); 1,60 (m, 2H); NMR <1>H (CDCl3 ): 0.88 (d, 3H); 1.17 (m, 2H); 1.42 (m, 1H); 1.60 (m, 2H);

2,19 (t, 2H); 2,56 (s, 3H); 2,82 (d, 2H); 4,02 (s, 2H); 4,93 (s, 2H); 6,36 (bred topp, 1H); 7,95 (s, 1H); 8,02 (s, 1H). 2.19 (t, 2H); 2.56 (s, 3H); 2.82 (d, 2H); 4.02 (s, 2H); 4.93 (s, 2H); 6.36 (broad peak, 1H); 7.95 (s, 1H); 8.02 (p, 1H).

IR (KBr): 971, 1013, 1105, 1293, 1479, 1559cm"<1>. 2.f. (+)-8-[2,7-diklor-6-metyl-4-(4-metylpiperidinometyl)-3-kinolylmetyl]-5-etyl-5-hydroksy-1,3,4,5,8,9-heksahydrooksepino[3,4-c]pydidin-3,9-dion: En suspensjon av (+)-EHHOPD (oppnådd i trinn 1 .a; 1,56 g; 7,0 mmol) i vannfri dioksan (70 ml) blir behandlet suksessivt, under en argonatmosfære, med produktet fra trinn 3.e (2,47 g; 7,0 mmol), trifenylfosfin (2,02 g; 7,7 mmol) og diisopropyl-azodikarboksylat (1,07 ml; 10,5 mmol). Blandingen blir omrørt ved omgivelsestemperatur i 16 timer. De flyktige substansene blir deretter avdampet under redusert trykk. Residuet blir renset ved kromatografi på en silikakolonne (elueringsmiddel: etylacetat). Det faste stoffet oppnådd blir tatt opp i dietyleter, filtrert og tørket for å fremstille produktet i overskriften (1,96 g; 50 % utbytte) i form av et hvitaktig faststoff (Sm.p. 182°C). NMR <1>H (DMSO): 0,89 (m, 8H); 1,23 (m, 1H); 1,41 (t, 2H); 1,64 (m, 2H); 2,09 (q, 2H); 2,59 (m, 5H); 3,15 (dd, 2H); 4,06 (dd, 2H); 5,31 (dd, 2H); 5,35 (dd, 2H); 5,75 (s, 1H); 6,29 (d, 1H); 7,17 (d, 1H); 8,06 (s, 1H); 8,46 (s, 1H). IR (KBr): 878, 1053, 1275, 1474,1572, 1648, 1747 cm"<1>. 2.g. (+)-9-klor-5-etyl-5-hydroksy-10-metyl-12-(4-metylpiperidinometyl)-4,5,13,15-tetrahydro-1 H,3H-oksepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-c]kinolin-3,15-dion: En blanding av produktet fra trinn 3.f (3,80 g; 6,80 mmol), tetrabutylammoniumbromid (2,42 g; 7,5 mmol), kaliumacetat (1,00 g; 10,2 mmol), trifenylfosfin (890 mg; 3,4 mmol) og palladium (II) acetat (220 mg; 0,68 mmol) blir omrørt under en argonatmosfære i vannfritt acetonitril (85 mg) ved tilbakeløp i 24 timer. Etter avkjøling til omgivelsestemperatur blir det resulterende, utfelte stoffet oppsamlet ved filtrering og vasket suksessivt med acetonitril, vann, aceton og dietyleter for, IR (KBr): 971, 1013, 1105, 1293, 1479, 1559cm"<1>. 2.f. (+)-8-[2,7-dichloro-6-methyl-4-(4-methylpiperidinomethyl)- 3-quinolylmethyl]-5-ethyl-5-hydroxy-1,3,4,5,8,9-hexahydrooxepino[3,4-c]pyridine-3,9-dione: A suspension of (+)-EHHOPD ( obtained in step 1.a; 1.56 g; 7.0 mmol) in anhydrous dioxane (70 ml) is treated successively, under an argon atmosphere, with the product from step 3.e (2.47 g; 7.0 mmol) , triphenylphosphine (2.02 g; 7.7 mmol) and diisopropyl azodicarboxylate (1.07 mL; 10.5 mmol). The mixture is stirred at ambient temperature for 16 h. The volatiles are then evaporated under reduced pressure. The residue is purified by chromatography on a silica column (eluent: ethyl acetate). The solid obtained is taken up in diethyl ether, filtered and dried to prepare the title product (1.96 g; 50% yield) as a whitish solid (Sm. m. 182°C). NMR <1>H (DMSO): 0.89 (m, 8H); 1.23 (m, 1H); 1.41 (t, 2H); 1.64 (m, 2H ); 2.09 (q, 2H); 2.59 (m, 5H); 3.15 (dd, 2H); 4.06 (dd, 2H); 5.31 (dd, 2H); 5.35 (dd, 2H); 5.75 (s, 1H); 6.29 (d, 1H); 7.17 (d, 1H); 8.06 (s, 1H); 8.46 (p, 1H). IR (KBr): 878, 1053, 1275, 1474, 1572, 1648, 1747 cm"<1>. 2.g. (+)-9-chloro-5-ethyl-5-hydroxy-10-methyl-12- (4-methylpiperidinomethyl)-4,5,13,15-tetrahydro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-c]quinoline-3,15-dione: A mixture of the product from step 3.f (3.80 g; 6.80 mmol), tetrabutylammonium bromide (2.42 g; 7.5 mmol), potassium acetate (1.00 g; 10.2 mmol), triphenylphosphine (890 mg ; 3.4 mmol) and palladium (II) acetate (220 mg; 0.68 mmol) are stirred under an argon atmosphere in anhydrous acetonitrile (85 mg) at reflux for 24 h. After cooling to ambient temperature, the resulting precipitate is collected by filtration and washed successively with acetonitrile, water, acetone and diethyl ether for,

etter tørking under redusert trykk, å fremstille produktet i overskriften (2,5 g; 70 % utbytte) i form av et hvitaktig pulver. after drying under reduced pressure, to prepare the title product (2.5 g; 70% yield) as a whitish powder.

NMR <1>H (DMSO): 0,86 (m, 6H); 1,12 (q, 2H); 1,36 (m, 1H); 1,56 (d, 2H); NMR <1>H (DMSO): 0.86 (m, 6H); 1.12 (q, 2H); 1.36 (m, 1H); 1.56 (d, 2H);

1,84 (q, 2H); 2,12 (t, 2H); 2,56 (s, 3H); 2,83 (dd, 2H); 3,26 (dd, 2H); 4,03 (dd, 2H); 5,28 (dd, 2H); 5,45 (dd, 2H); 6,04 (s, 1H); 7,34 (s, 1H); 8,14 (s, 1H); 8,38 (s, 1H). IR (KBr): 870, 1058, 1208, 1280,1477, 1593, 1655, 1749 cm"<1.>1.84 (q, 2H); 2.12 (t, 2H); 2.56 (s, 3H); 2.83 (dd, 2H); 3.26 (dd, 2H); 4.03 (dd, 2H); 5.28 (dd, 2H); 5.45 (dd, 2H); 6.04 (s, 1H); 7.34 (s, 1H); 8.14 (s, 1H); 8.38 (p, 1H). IR (KBr): 870, 1058, 1208, 1280,1477, 1593, 1655, 1749 cm"<1.>

2.h. (+) 1 -[(5R)-9-klor-5-etyl-5-hydroksy-10-metyl-3,15-diokso-4,5,13,15-tetrahydro-1 H,3H-oksepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-c]kinolin-12-ylmetyl]-4-metyl-heksahydropyridiniumklorid: En blanding av produktet fra trinn 3.g (2,3 g; 7,7 mmol) og absolutt etanol (300 ml) underkastes ultralyd i 2 minutter. Den oppnådde melkeaktige suspen-sjonen blir omrørt og behandlet med saltsyre (1N løsning; 13,2 ml; 13,2 mmol) for å fremstille en lyst gult løsning som, ved henstand, danner et gel-lignende presipi-tat. Fellingen blir oppsamlet ved filtrering på en Buchner og vasket suksessivt med etanol og eter, deretter tørket under redusert trykk for å fremstille produktet i overskriften (2,1 g; 85 % utbytte). 2. h. (+) 1 -[(5R)-9-chloro-5-ethyl-5-hydroxy-10-methyl-3,15-dioxo-4,5,13,15-tetrahydro-1H,3H-oxepino[3 ',4':6,7]indolizino[1,2-c]quinolin-12-ylmethyl]-4-methyl-hexahydropyridinium chloride: A mixture of the product from step 3.g (2.3 g; 7.7 mmol) and absolute ethanol (300 ml) are subjected to ultrasound for 2 minutes. The resulting milky suspension is stirred and treated with hydrochloric acid (1N solution; 13.2 ml; 13.2 mmol) to produce a pale yellow solution which, on standing, forms a gel-like precipitate. The precipitate is collected by filtration on a Buchner and washed successively with ethanol and ether, then dried under reduced pressure to afford the title product (2.1 g; 85% yield).

NMR <1>H (DMSO): 0,87 (m, 6H); 1,59 (m, 5H); 1,84 (q, 2H); 2,64 (s, 3H); 3,28 (dd, 2H); 3,45 (s, 2H); 4,93 (s, 2H); 5,47 (dd, 2H); 5,61 (s, 2H); 6,04 (bred topp, 1H); 7,41 (s, 1H); 8,28 (s, 1H); 8,63 (s, 1H); 10,30 (bred topp, 1H). NMR <1>H (DMSO): 0.87 (m, 6H); 1.59 (m, 5H); 1.84 (q, 2H); 2.64 (s, 3H); 3.28 (dd, 2H); 3.45 (s, 2H); 4.93 (s, 2H); 5.47 (dd, 2H); 5.61 (s, 2H); 6.04 (broad peak, 1H); 7.41 (s, 1H); 8.28 (s, 1H); 8.63 (s, 1H); 10.30 (broad top, 1H).

IR (KBr): 1043, 1212, 1479, 1585, 1655, 1751 cm"<1>. IR (KBr): 1043, 1212, 1479, 1585, 1655, 1751 cm"<1>.

FARMAKOLOGISK UNDERSØKELSE AV PRODUKTENE IFØLGE FORELIGGENDE OPPFINNELSE PHARMACOLOGICAL EXAMINATION OF THE PRODUCTS ACCORDING TO THE PRESENT INVENTION

Test av celleproliferasjon. Test of cell proliferation.

Fem tumorcellelinjer blir anvendt i denne undersøkelsen: SW620 (human kolon adenokarsinom), OVCAR-5 (human eggstokk adenokarsinom), PC-3 og DU 145 (cellelinje av human prostata) og NCI-H69 (human lunge adenokarsinom). Disse linjene blir oppnådd fra NCI/Frederick Cancer Research and Development Center (Frederick, MD). De blir dyrket i fullstendig medium inneholdende RMPI-1640 medium anriket med 10 % av føtalt kalveserum og 2 mM L-Glutamin. De blir inkubert ved 37°C i en fuktet atmosfære med 5 % av C02. De adherente cellene løsnes ved en behandling med en løsning med 0,25 % trypsin og 0,2% EDTA Five tumor cell lines are used in this investigation: SW620 (human colon adenocarcinoma), OVCAR-5 (human ovarian adenocarcinoma), PC-3 and DU 145 (human prostate cell line) and NCI-H69 (human lung adenocarcinoma). These lines are obtained from the NCI/Frederick Cancer Research and Development Center (Frederick, MD). They are cultured in complete medium containing RMPI-1640 medium enriched with 10% fetal calf serum and 2 mM L-Glutamine. They are incubated at 37°C in a humidified atmosphere with 5% CO 2 . The adherent cells are loosened by treatment with a solution containing 0.25% trypsin and 0.2% EDTA

(Worthington Biochemical Corp., Freehold, NJ) i 5 minutter ved 37°C. Telling av cellene blir utført ved anvendelse av en Coulter Z1 counter (Coulter Corp., Hialeah, FL). Levedyktigheten evalueres ved farging av cellene med propidium-jodid, deretter telles de med et EPICS Elite flow cytometer (Coulter). (Worthington Biochemical Corp., Freehold, NJ) for 5 min at 37°C. Counting of the cells is performed using a Coulter Z1 counter (Coulter Corp., Hialeah, FL). Viability is evaluated by staining the cells with propidium iodide, then counting them with an EPICS Elite flow cytometer (Coulter).

Forbindelsen ifølge Eksempel 2 som skal testes blir oppløst ved 5 mM i en oppløsning av N,N-dimetylacetamin (DMA, Aldrich). Påfølgende fortynninger blir utført med dyrkningsmedium. De testede endelige molare konsentrasjonene er: 1,10-6, 2,10-7, 4,10-8, 8,10-9, 1,6,10-9, 3,2,10-1<0>, 6,4,10-<11>, 1,28,10-<11>, 2,56,10-<12> og 5,12,10"<13>. Hver konsentrasjon blir testet på åtte brønner. Undersøkelse av innvirkningen på av DMA blir utført på alle cellelinjene. Resultatet av disse undersøkelsene er at ved maksimal konsentrasjon anvendt (0,02 %) har DMA ingen effekt. Doksorubicin i konsentrasjoner på 1,10-<7> M og 2,10"<7> M blir anvendt som en positiv kontroll. The compound according to Example 2 to be tested is dissolved at 5 mM in a solution of N,N-dimethylacetamine (DMA, Aldrich). Subsequent dilutions are carried out with culture medium. The final molar concentrations tested are: 1.10-6, 2.10-7, 4.10-8, 8.10-9, 1.6.10-9, 3.2.10-1<0>, 6,4,10-<11>, 1,28,10-<11>, 2,56,10-<12> and 5,12,10"<13>. Each concentration is tested on eight wells. Investigation of the effect on of DMA is carried out on all the cell lines. The result of these investigations is that at the maximum concentration used (0.02%) DMA has no effect. Doxorubicin in concentrations of 1.10-<7> M and 2.10"<7 > M is used as a positive control.

Cellene sås ved 5,10<3> celler pr. brønn på en mikroplate med 96 brønner (Costar Corporation, Cambridge, MA). Cellene blir inkubert i 24 timer ved 37°C for å tillate en gjentagelse av celleforøkelsen. Forbindelsen ifølge Eksempler 2 og 3 som skal testes blir deretter tilsatt ved konsentrasjonene angitt ovenfor og cellene blir inkubert ved 37°C i en fuktet atmosfære med 5 % CO2, i 3 dager for de adherente cellene (SW620, OVCAR-5, PC-3 og DU 145) og i 5 dager for cellene i suspensjon (NCI-H69). The cells are seeded at 5.10<3> cells per well of a 96-well microplate (Costar Corporation, Cambridge, MA). The cells are incubated for 24 hours at 37°C to allow a repetition of the cell proliferation. The compound according to Examples 2 and 3 to be tested is then added at the concentrations indicated above and the cells are incubated at 37°C in a humidified atmosphere with 5% CO 2 , for 3 days for the adherent cells (SW620, OVCAR-5, PC-3 and DU 145) and for 5 days for the cells in suspension (NCI-H69).

De adherente cellene blir testet ved SRB metoden (beskrevet av L.V. Rubenstein, R.H. Shoemaker, K.D. Pauli, R.M. Simon, S. Tosini, P. Skehan, D.A Scudiero, A. Monks og M.R. Boyd "Comparison of in vitro anticancer-drug-screen-ing data generated with tetrazolium assay versus a protein assay against a diverse panel of human tumor cell lines", J. Nat. Cancer Inst, 82:1113-1118,1990). Etter inkubering i 3 dager elimineres supernatanten og 200 ul RPMI-1640 fritt for føtalt kalveserum blir tilsatt. Cellene fikseres ved tilsetning av 50 ul 50% trikloreddiksyre (endelig konsentrasjon av trikloreddiksyre 10 %) og inkubert ved 4°C i 1 time. The adherent cells are tested by the SRB method (described by L.V. Rubenstein, R.H. Shoemaker, K.D. Pauli, R.M. Simon, S. Tosini, P. Skehan, D.A Scudiero, A. Monks and M.R. Boyd "Comparison of in vitro anticancer-drug-screen -ing data generated with tetrazolium assay versus a protein assay against a diverse panel of human tumor cell lines", J. Nat. Cancer Inst, 82:1113-1118, 1990). After incubation for 3 days, the supernatant is eliminated and 200 µl RPMI-1640 free of fetal calf serum is added. The cells are fixed by adding 50 µl of 50% trichloroacetic acid (final concentration of trichloroacetic acid 10%) and incubated at 4°C for 1 hour.

Brønnene blir vasket 5 ganger med vann, deretter merket med 50 pl av en løsning med 0,4 % sulforodamin B (SRB, Sigma) i eddiksyre ved 1 % ved omgivelsestemperatur i 10 minutter. Fargen solubiliseres med 100 pl av TRIS buffer ved 10 mM, pH 10, i ca. 5 minutter under agitering, mikroplatene avleses ved anvendelse av spektrofotometri ved 570 nm. The wells are washed 5 times with water, then labeled with 50 µl of a solution of 0.4% sulforhodamine B (SRB, Sigma) in 1% acetic acid at ambient temperature for 10 minutes. The dye is solubilized with 100 µl of TRIS buffer at 10 mM, pH 10, for approx. 5 minutes under agitation, the microplates are read using spectrophotometry at 570 nm.

Cellene i suspensjon blir testet ved XTT metoden (beskrevet av D.A. Scudiero, R.H. Shoemaker, K.D. Pauli, A. Monks, S. Tierney, T.H. Nofziger, M.J. Currens, D. Seniff og M.R. Boyd: "Evaluation of a soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor-cell lines", Cancer Research 48:4827-4833,1988). Etter inkubering i nærvær av forbindelsen ifølge Eksempler 2 og 3 som skal testes, blir XTT [natriumsalt av 2,3-bis(2-metoksy-4-nitro-5-sulfofenyl)-2H-tetrazolium-5-karboksanilid, (Sigma)] og fenazinmetosulfat (PMS, Sigma) i løsning i saltvanns fosfatbuffer satt til kulturene og cellene blir inkubert i 4 timer ved 37°C i en atmosfære med 5 % CO2. De endelige konsentrasjonene av XTT og PMS er henholdsvis 50 og 0,38 ug/brønn. Frem-stillingen av formazan blir stanset ved tilsetning av 10 pl av natriumdodecylsulfat ved 10 % (Sigma) og absorbansen avleses ved anvendelse av spektrofotometri ved 450 nm med et referansefilter ved 600-650 nm. The cells in suspension are tested by the XTT method (described by D.A. Scudiero, R.H. Shoemaker, K.D. Pauli, A. Monks, S. Tierney, T.H. Nofziger, M.J. Currens, D. Seniff and M.R. Boyd: "Evaluation of a soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor-cell lines", Cancer Research 48:4827-4833, 1988). After incubation in the presence of the compound of Examples 2 and 3 to be tested, XTT [sodium salt of 2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide, (Sigma) ] and phenazine methosulfate (PMS, Sigma) in solution in saline phosphate buffer added to the cultures and the cells are incubated for 4 hours at 37°C in an atmosphere of 5% CO2. The final concentrations of XTT and PMS are 50 and 0.38 ug/well, respectively. The production of formazan is stopped by the addition of 10 µl of sodium dodecyl sulfate at 10% (Sigma) and the absorbance is read using spectrophotometry at 450 nm with a reference filter at 600-650 nm.

Resultater: Results:

De molare konsentrasjonene av forbindelsene ifølge Eksempel 2 som hemmer celleproliferasjonen med 50% er sammenfattet i den følgende tabellen: The molar concentrations of the compounds according to Example 2 that inhibit cell proliferation by 50% are summarized in the following table:

Claims (9)

1. Produkt, karakterisert ved at det har formelen (II) representert nedenfor eller ved at det er saltene av forbindelsen med formel (II)1. Product, characterized in that it has the formula (II) represented below or in that they are the salts of the compound of formula (II) 2. Produkt i følge krav 1 karakterisert ved at saltet av forbindelsen med formel (II) er forbindelsen med formel (III)2. Product according to claim 1 characterized in that the salt of the compound of formula (II) is the compound of formula (III) 3. Produkt med den generelle formel M representert nedenfor hvor R representerer en etylrest.3. Product of the general formula M represented below where R represents an ethyl residue. 4. Fremgangsmåte for fremstilling av et produkt med den generelle formel M representert nedenfor, hvor R representerer en etylgruppe, karakterisert ved at den omfatter følgende suksessiv trinn: - den racemiske f-butylesteren representert nedenfor blir behandlet med trifluoreddiksyre i 18 timer ved omgivelsestemperatur for å fremstille den tilsvarende karboksylsyren; - deretter blir kinidinsaltet av den tidligere oppnådde syren oppvarmet i isopropylalkohol ved en temperatur høyere enn 30°C, før reaksjonsmediet hensettes for å avkjøles til omgivelsestemperatur, slik at saltet av én av enantiomerene av ovennevnte syre krystalliserer, mens saltet av den andre enantiomeren, hvis anion er representert nedenfor, forblir i løsning - løsningen i isopropylalkohol av saltet av enantiomeren som ikke er krystallisert, konsentreres og behandles med saltsyre og omrøres, idet forbindelsen med den generelle formel A representert nedenfor fremstilles - forbindelsen med den generelle formel A blir deretter bragt i kontakt med palladium på fuktig karbon, deretter blir ammoniumformiat eller maursyre satt til blandingen for å fremstille det debenzylerte produktet med den generelle formel B representert nedenfor - deretter blir forbindelsen med den generelle formel B ringsluttet ved virkningen av dicykloheksylkarbodiimid for å oppnå den laktoniske forbindelsen med den generelle formel C representert nedenfor -til slutt omdannes -OCH3 gruppen av den laktoniske forbindelsen med den generelle formel C til karbonyl, ved virkningen av natriumjodid og tri m ety Isi ly I klo rid, for å oppnå en forbindelse med den generelle formel M representert nedenfor.4. Process for the preparation of a product of the general formula M represented below, where R represents an ethyl group, characterized in that it comprises the following successive steps: - the racemic f-butyl ester represented below is treated with trifluoroacetic acid for 18 hours at ambient temperature to produce the corresponding carboxylic acid; - then the quinidine salt of the previously obtained acid is heated in isopropyl alcohol at a temperature higher than 30°C, before the reaction medium is allowed to cool to ambient temperature, so that the salt of one of the enantiomers of the above-mentioned acid crystallizes, while the salt of the other the enantiomer, whose anion is represented below, remains in solution - the solution in isopropyl alcohol of the salt of the enantiomer which has not crystallized is concentrated and treated with hydrochloric acid and stirred, as the compound with the general formula A represented below is prepared - the compound of general formula A is then contacted with palladium on wet carbon, then ammonium formate or formic acid is added to the mixture to prepare the debenzylated product of general formula B represented below - then the compound of general formula B is cyclized by the action of dicyclohexylcarbodiimide to obtain the lactonic compound of general formula C represented below - finally the -OCH3 group of the lactonic compound of general formula C is converted to carbonyl, by the action of sodium iodide and tri m ety Isi ly I chloride, to obtain a compound of the general formula M represented below. 5. Produkt ifølge kravene 1 til 2, eller enhver blanding av disse produktene anvendt som et medikament.5. Product according to claims 1 to 2, or any mixture of these products used as a medicine. 6. Farmasøytiske preparat, karakterisert ved at det som aktiv bestanddel inneholder minst én av forbindelsene ifølge krav 5.6. Pharmaceutical preparations, characterized in that it contains as active ingredient at least one of the compounds according to claim 5. 7. Anvendelse av forbindelse ifølge krav 1 eller 2, for fremstilling av et medikament med antitumor-aktivitet.7. Use of a compound according to claim 1 or 2, for the production of a drug with antitumor activity. 8. Anvendelse av forbindelse ifølge krav 1 eller 2 for fremstilling av antivirale medikamenter.8. Use of a compound according to claim 1 or 2 for the production of antiviral drugs. 9. Anvendelse av forbindelse ifølge krav 1 eller 2 for fremstilling av antiparasittiske medikamenter.9. Use of a compound according to claim 1 or 2 for the production of antiparasitic drugs.
NO20000995A 1997-08-29 2000-02-28 Optically pure camptotecin analogs, optically pure intermediate, process for their preparation, use and pharmaceutical preparation NO324882B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9710785A FR2768431B1 (en) 1997-08-29 1997-08-29 NOVEL OPTICALLY PURE CAMPTOTHECIN ANALOGS, A NEW OPTICALLY PURE SYNTHESIS INTERMEDIATE AND PROCESS FOR PREPARING THE SAME
PCT/FR1998/001768 WO1999011646A1 (en) 1997-08-29 1998-08-07 Optically pure camptothecin analogues, optically pure synthesis intermediate and method for preparing same

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO20000995L NO20000995L (en) 2000-02-28
NO20000995D0 NO20000995D0 (en) 2000-02-28
NO324882B1 true NO324882B1 (en) 2007-12-27

Family

ID=9510590

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20000995A NO324882B1 (en) 1997-08-29 2000-02-28 Optically pure camptotecin analogs, optically pure intermediate, process for their preparation, use and pharmaceutical preparation

Country Status (26)

Country Link
EP (2) EP1007527B1 (en)
JP (1) JP2001514261A (en)
KR (1) KR100570254B1 (en)
CN (3) CN1104434C (en)
AR (1) AR016856A1 (en)
AT (1) ATE253069T1 (en)
AU (1) AU760863B2 (en)
BR (1) BR9811405A (en)
CA (1) CA2301739C (en)
CZ (1) CZ297896B6 (en)
DE (1) DE69819340T2 (en)
DK (1) DK1007527T3 (en)
ES (1) ES2209196T3 (en)
FR (1) FR2768431B1 (en)
HK (2) HK1031732A1 (en)
HR (1) HRP20000110A2 (en)
HU (1) HUP0003429A3 (en)
IL (2) IL134437A0 (en)
NO (1) NO324882B1 (en)
NZ (1) NZ502862A (en)
PL (1) PL195289B1 (en)
PT (1) PT1007527E (en)
RU (1) RU2233283C2 (en)
TW (1) TW419479B (en)
WO (1) WO1999011646A1 (en)
ZA (1) ZA987445B (en)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2790261B1 (en) * 1999-02-26 2004-09-10 Sod Conseils Rech Applic NOVEL OPTICALLY PURE CAMPTOTHECIN ANALOGS AND PROCESSES FOR THEIR PREPARATION
US6207832B1 (en) 1999-04-09 2001-03-27 University Of Pittsburgh Camptothecin analogs and methods of preparation thereof
US6372906B1 (en) 2001-04-12 2002-04-16 University Of Pittsburgh Synthesis of silyl camptothecins and silyl homocamptothecins
US6723853B2 (en) 2001-08-27 2004-04-20 University Of Pittsburgh Intermediates and methods of preparation of intermediates in the enantiomeric synthesis of (20R)homocamptothecins and the enantiomeric synthesis of (20R)homocamptothecins
CN100408582C (en) * 2004-02-12 2008-08-06 中国人民解放军第二军医大学 Homocamptoth-ecine compounds, their preparation process and use
EP1794127A1 (en) * 2004-09-21 2007-06-13 Société de Conseils de Recherches et d'Applications Scientifiques ( S.C.R.A.S.) Novel processes for the production of useful intermediates
CN100465175C (en) * 2005-11-29 2009-03-04 中国人民解放军第二军医大学 7-bit substituted comptothecine kind compound and pharmaceutical use thereof

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5459269A (en) * 1992-06-18 1995-10-17 North Carolina State University 14-halo-camptothecins
PT835258E (en) * 1995-06-21 2003-02-28 Sod Conseils Rech Applic NEW CAMPOTECETIC ANALOGS, PROCESSES FOR THEIR PREPARATION, ITS USE AS PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS AND DRUGS THAT CONTAIN THEM

Also Published As

Publication number Publication date
HUP0003429A1 (en) 2001-07-30
ZA987445B (en) 1999-02-17
HUP0003429A3 (en) 2002-11-28
NZ502862A (en) 2002-10-25
IL134437A0 (en) 2001-04-30
CN1440973A (en) 2003-09-10
CN1440972A (en) 2003-09-10
CN1195758C (en) 2005-04-06
HK1031732A1 (en) 2001-06-22
EP1007527B1 (en) 2003-10-29
HRP20000110A2 (en) 2001-02-28
HK1058665A1 (en) 2004-05-28
EP1378512A1 (en) 2004-01-07
AU760863B2 (en) 2003-05-22
CZ297896B6 (en) 2007-04-25
CA2301739C (en) 2009-11-17
TW419479B (en) 2001-01-21
KR100570254B1 (en) 2006-04-12
CN1104434C (en) 2003-04-02
CA2301739A1 (en) 1999-03-11
FR2768431A1 (en) 1999-03-19
ATE253069T1 (en) 2003-11-15
EP1007527A1 (en) 2000-06-14
IL134437A (en) 2006-08-01
KR20010023394A (en) 2001-03-26
JP2001514261A (en) 2001-09-11
FR2768431B1 (en) 2000-03-24
PT1007527E (en) 2004-03-31
ES2209196T3 (en) 2004-06-16
CN1268948A (en) 2000-10-04
WO1999011646A1 (en) 1999-03-11
RU2233283C2 (en) 2004-07-27
NO20000995L (en) 2000-02-28
NO20000995D0 (en) 2000-02-28
DE69819340T2 (en) 2004-08-19
DE69819340D1 (en) 2003-12-04
PL195289B1 (en) 2007-08-31
AU8989698A (en) 1999-03-22
DK1007527T3 (en) 2004-03-08
PL338835A1 (en) 2000-11-20
CZ2000711A3 (en) 2000-08-16
AR016856A1 (en) 2001-08-01
BR9811405A (en) 2000-08-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0835258B1 (en) Novel camptothecin analogues, preparation methods therefor, use thereof as drugs, and pharmaceutical compositions containing said analogues
JP3447292B2 (en) Imidazopyridines and their use for the treatment of gastrointestinal diseases
AU6192099A (en) Tetrahydropyridoethers
DE69726007T2 (en) PRODROGS AND ANALOGA OF CAMPTOTHECIN AND THE USE THEREOF AS MEDICINAL PRODUCTS
CA2275351C (en) Novel counterparts of camptothecin, their application as medicine and pharmaceutical compositions containing them
NO324882B1 (en) Optically pure camptotecin analogs, optically pure intermediate, process for their preparation, use and pharmaceutical preparation
US6339091B1 (en) Comptothecin analogues, preparation methods therefor, use thereof as drugs, and pharmaceutical compositions containing said analogues
RU2190613C2 (en) Camptothecin analogs, methods of their synthesis and pharmaceutical composition based on thereof
MXPA00001944A (en) Optically pure camptothecin analogues, optically pure synthesis intermediate and method for preparing same
US6797715B1 (en) Analogues of camptothecin, their use as medicaments and the pharmaceutical compositions containing them
CN116969939A (en) Lysosome-targeted Eutistomin Y compound, and preparation method and application thereof

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees