NO316902B1 - Oligonukleotider og modifiserte nukleotiddimerer, samt fremgangsmate for a fremstille dimeren og anvendelse av denne for fremstilling av oligonukleotidene, og et farmasoytisk preparat omfattende oligonukleotidene - Google Patents
Oligonukleotider og modifiserte nukleotiddimerer, samt fremgangsmate for a fremstille dimeren og anvendelse av denne for fremstilling av oligonukleotidene, og et farmasoytisk preparat omfattende oligonukleotidene Download PDFInfo
- Publication number
- NO316902B1 NO316902B1 NO19963092A NO963092A NO316902B1 NO 316902 B1 NO316902 B1 NO 316902B1 NO 19963092 A NO19963092 A NO 19963092A NO 963092 A NO963092 A NO 963092A NO 316902 B1 NO316902 B1 NO 316902B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- alkyl
- phenyl
- formula
- compound
- amino
- Prior art date
Links
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 title claims abstract description 20
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 title claims description 80
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 44
- 239000000539 dimer Substances 0.000 title claims description 19
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 12
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims abstract description 19
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 claims abstract description 16
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 9
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- -1 pyrimidine radical Chemical group 0.000 claims description 200
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 179
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 130
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 92
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 59
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 45
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 43
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 36
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N Purine Natural products N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 28
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 27
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 24
- 125000000561 purinyl group Chemical group N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 claims description 23
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 22
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 19
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 claims description 18
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 16
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 15
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 14
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 14
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 14
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 14
- 125000004471 alkyl aminosulfonyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 125000004414 alkyl thio group Chemical group 0.000 claims description 13
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 claims description 12
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 claims description 12
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 8
- 125000005210 alkyl ammonium group Chemical group 0.000 claims description 7
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 7
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 claims description 6
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 6
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 claims description 6
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Natural products NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 6
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 claims description 5
- 125000004181 carboxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 5
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 5
- 125000006678 phenoxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 claims description 5
- OIVLITBTBDPEFK-UHFFFAOYSA-N 5,6-dihydrouracil Chemical compound O=C1CCNC(=O)N1 OIVLITBTBDPEFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 4
- 125000000043 benzamido group Chemical group [H]N([*])C(=O)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 claims description 4
- 125000006182 dimethyl benzyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000005059 halophenyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000006178 methyl benzyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 125000004665 trialkylsilyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 claims description 4
- 125000000008 (C1-C10) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000004209 (C1-C8) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000001494 2-propynyl group Chemical group [H]C#CC([H])([H])* 0.000 claims description 3
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims description 3
- 125000000041 C6-C10 aryl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims description 3
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000006177 alkyl benzyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000005037 alkyl phenyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000006278 bromobenzyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000004063 butyryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 125000005982 diphenylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])(*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 125000003104 hexanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 125000000717 hydrazino group Chemical group [H]N([*])N([H])[H] 0.000 claims description 3
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 3
- ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N tert-butyl(dimethyl)silicon Chemical group C[Si](C)C(C)(C)C ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 125000003774 valeryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- CFIBTBBTJWHPQV-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-n-(6-oxo-3,7-dihydropurin-2-yl)propanamide Chemical compound N1C(NC(=O)C(C)C)=NC(=O)C2=C1N=CN2 CFIBTBBTJWHPQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FXGXEFXCWDTSQK-UHFFFAOYSA-N 2-methylsulfanyl-7h-purin-6-amine Chemical compound CSC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 FXGXEFXCWDTSQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 5-bromouracil Chemical compound BrC1=CNC(=O)NC1=O LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZFTBZKVVGZNMJR-UHFFFAOYSA-N 5-chlorouracil Chemical compound ClC1=CNC(=O)NC1=O ZFTBZKVVGZNMJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QQJXZVKXNSFHRI-UHFFFAOYSA-N 6-Benzamidopurine Chemical compound N=1C=NC=2N=CNC=2C=1NC(=O)C1=CC=CC=C1 QQJXZVKXNSFHRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- RYYIULNRIVUMTQ-UHFFFAOYSA-N 6-chloroguanine Chemical compound NC1=NC(Cl)=C2N=CNC2=N1 RYYIULNRIVUMTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- CKOMXBHMKXXTNW-UHFFFAOYSA-N 6-methyladenine Chemical compound CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 CKOMXBHMKXXTNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PMPVIKIVABFJJI-UHFFFAOYSA-N Cyclobutane Chemical compound C1CCC1 PMPVIKIVABFJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 2
- PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N anthraquinone Natural products CCC(=O)c1c(O)c2C(=O)C3C(C=CC=C3O)C(=O)c2cc1CC(=O)OC PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000004056 anthraquinones Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims description 2
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004177 diethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 125000000816 ethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 claims description 2
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 claims description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 2
- 125000002816 methylsulfanyl group Chemical group [H]C([H])([H])S[*] 0.000 claims description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 2
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 2
- 229910003204 NH2 Inorganic materials 0.000 claims 3
- 125000004769 (C1-C4) alkylsulfonyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- CRIZPXKICGBNKG-UHFFFAOYSA-N 3,7-dihydropurin-2-one Chemical compound OC1=NC=C2NC=NC2=N1 CRIZPXKICGBNKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- YEGKYFQLKYGHAR-UHFFFAOYSA-N 6-methylthioguanine Chemical compound CSC1=NC(N)=NC2=C1NC=N2 YEGKYFQLKYGHAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 125000001325 propanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 123
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 112
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 100
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 96
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 89
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 72
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 69
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 62
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 61
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 60
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 54
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 42
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 42
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 42
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 32
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 30
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 29
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 28
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 27
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 27
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 19
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium fluoride Chemical compound [F-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 15
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 15
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 15
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 14
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 12
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 150000002168 ethanoic acid esters Chemical class 0.000 description 11
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- RMVRSNDYEFQCLF-UHFFFAOYSA-N thiophenol Chemical compound SC1=CC=CC=C1 RMVRSNDYEFQCLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 101150041968 CDC13 gene Proteins 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 4-toluenesulfonyl chloride Chemical compound CC1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1 YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LOSXTWDYAWERDB-UHFFFAOYSA-N 1-[chloro(diphenyl)methyl]-2,3-dimethoxybenzene Chemical compound COC1=CC=CC(C(Cl)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=C1OC LOSXTWDYAWERDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 2-(2-cyanopropan-2-yldiazenyl)-2-methylpropanenitrile Chemical compound N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 125000006367 bivalent amino carbonyl group Chemical group [H]N([*:1])C([*:2])=O 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 4
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PBKONEOXTCPAFI-UHFFFAOYSA-N 1,2,4-trichlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 PBKONEOXTCPAFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNZXMWKFPMIKRG-UHFFFAOYSA-N 1-(chloromethoxymethyl)-4-methoxybenzene Chemical compound COC1=CC=C(COCCl)C=C1 DNZXMWKFPMIKRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GEHKTUJXAZRMFB-UHFFFAOYSA-N 1-[bis(4-tert-butylphenyl)-chloromethyl]-4-tert-butylbenzene Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC(=CC=1)C(C)(C)C)C1=CC=C(C(C)(C)C)C=C1 GEHKTUJXAZRMFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VKIGAWAEXPTIOL-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyhexanenitrile Chemical compound CCCCC(O)C#N VKIGAWAEXPTIOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWPQTFXULUUCGD-UHFFFAOYSA-N 3,4,5,7,8,9,10,10a-octahydropyrido[1,2-a][1,4]diazepine Chemical compound C1CCN=CC2CCCCN21 KWPQTFXULUUCGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RKVHNYJPIXOHRW-UHFFFAOYSA-N 3-bis[di(propan-2-yl)amino]phosphanyloxypropanenitrile Chemical compound CC(C)N(C(C)C)P(N(C(C)C)C(C)C)OCCC#N RKVHNYJPIXOHRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- JFDZBHWFFUWGJE-UHFFFAOYSA-N benzonitrile Chemical compound N#CC1=CC=CC=C1 JFDZBHWFFUWGJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000484 butyl group Chemical class [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- DYLIWHYUXAJDOJ-OWOJBTEDSA-N (e)-4-(6-aminopurin-9-yl)but-2-en-1-ol Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2C\C=C\CO DYLIWHYUXAJDOJ-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- QPFMBZIOSGYJDE-UHFFFAOYSA-N 1,1,2,2-tetrachloroethane Chemical compound ClC(Cl)C(Cl)Cl QPFMBZIOSGYJDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PAMIQIKDUOTOBW-UHFFFAOYSA-N 1-methylpiperidine Chemical compound CN1CCCCC1 PAMIQIKDUOTOBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLLIQLLCWZCATF-UHFFFAOYSA-N 2-methoxyethyl acetate Chemical compound COCCOC(C)=O XLLIQLLCWZCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BKOOMYPCSUNDGP-UHFFFAOYSA-N 2-methylbut-2-ene Chemical compound CC=C(C)C BKOOMYPCSUNDGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WADSJYLPJPTMLN-UHFFFAOYSA-N 3-(cycloundecen-1-yl)-1,2-diazacycloundec-2-ene Chemical compound C1CCCCCCCCC=C1C1=NNCCCCCCCC1 WADSJYLPJPTMLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N C[CH]O Chemical group C[CH]O GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Chemical class CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N chlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1 MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LADPCMZCENPFGV-UHFFFAOYSA-N chloromethoxymethylbenzene Chemical compound ClCOCC1=CC=CC=C1 LADPCMZCENPFGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 125000002704 decyl group Chemical class [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003438 dodecyl group Chemical class [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- UREBWPXBXRYXRJ-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;methanol Chemical compound OC.CCOC(C)=O UREBWPXBXRYXRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTZQAGJQAFMTAQ-UHFFFAOYSA-N ethyl benzoate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=CC=C1 MTZQAGJQAFMTAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 125000006277 halobenzyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003187 heptyl group Chemical class [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- 125000004051 hexyl group Chemical class [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 2
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- UAEPNZWRGJTJPN-UHFFFAOYSA-N methylcyclohexane Chemical compound CC1CCCCC1 UAEPNZWRGJTJPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 2
- LQNUZADURLCDLV-UHFFFAOYSA-N nitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC=C1 LQNUZADURLCDLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001400 nonyl group Chemical class [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000002347 octyl group Chemical class [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N olefin Natural products CCCCCCCC=C JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 125000001147 pentyl group Chemical class C(CCCC)* 0.000 description 2
- SUSQOBVLVYHIEX-UHFFFAOYSA-N phenylacetonitrile Chemical compound N#CCC1=CC=CC=C1 SUSQOBVLVYHIEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- HHVIBTZHLRERCL-UHFFFAOYSA-N sulfonyldimethane Chemical compound CS(C)(=O)=O HHVIBTZHLRERCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DPKBAXPHAYBPRL-UHFFFAOYSA-M tetrabutylazanium;iodide Chemical compound [I-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DPKBAXPHAYBPRL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- FTVLMFQEYACZNP-UHFFFAOYSA-N trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate Chemical compound C[Si](C)(C)OS(=O)(=O)C(F)(F)F FTVLMFQEYACZNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002948 undecyl group Chemical class [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- STBLNCCBQMHSRC-BATDWUPUSA-N (2s)-n-[(3s,4s)-5-acetyl-7-cyano-4-methyl-1-[(2-methylnaphthalen-1-yl)methyl]-2-oxo-3,4-dihydro-1,5-benzodiazepin-3-yl]-2-(methylamino)propanamide Chemical compound O=C1[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC)[C@H](C)N(C(C)=O)C2=CC(C#N)=CC=C2N1CC1=C(C)C=CC2=CC=CC=C12 STBLNCCBQMHSRC-BATDWUPUSA-N 0.000 description 1
- HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N (3r,4r)-3-azaniumyl-5-[[(2s,3r)-1-[(2s)-2,3-dicarboxypyrrolidin-1-yl]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-oxo-4-sulfanylpentane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC[C@@H](N)[C@@H](S)C(=O)N[C@@H]([C@H](C)CC)C(=O)N1CCC(C(O)=O)[C@H]1C(O)=O HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N 0.000 description 1
- YQYGGOPUTPQHAY-KIQLFZLRSA-N (4S)-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[2-[6-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(4S,7R)-7-[[(2S)-1-[(2S)-6-amino-2-[[(2R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-4-carboxy-2-hydrazinylbutanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]propanoyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-2-methyl-5,6-dioxooctan-4-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-amino-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-6-oxohexyl]hydrazinyl]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-4-amino-1-[[(2S)-1-hydroxy-3-oxopropan-2-yl]amino]-1,4-dioxobutan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC[C@@H](C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C)C(=O)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)C(CCCCNN[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)[C@H](C)O)C(C)C)[C@H](C)O YQYGGOPUTPQHAY-KIQLFZLRSA-N 0.000 description 1
- 125000000229 (C1-C4)alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006729 (C2-C5) alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- CRPTXKKKIGGDBX-UHFFFAOYSA-N (z)-but-2-ene Chemical group [CH2]C=CC CRPTXKKKIGGDBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-trichloroethane Chemical compound CC(Cl)(Cl)Cl UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVQQQNCBBIEMEU-UHFFFAOYSA-N 1,1,3,3-tetramethylurea Chemical compound CN(C)C(=O)N(C)C AVQQQNCBBIEMEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFFLAFLAYFXFSW-UHFFFAOYSA-N 1,2-dichlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1Cl RFFLAFLAYFXFSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YJTKZCDBKVTVBY-UHFFFAOYSA-N 1,3-Diphenylbenzene Chemical group C1=CC=CC=C1C1=CC=CC(C=2C=CC=CC=2)=C1 YJTKZCDBKVTVBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLHUPYSUKYAIBW-UHFFFAOYSA-N 1-acetylpyrrolidin-2-one Chemical compound CC(=O)N1CCCC1=O YLHUPYSUKYAIBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YZUPZGFPHUVJKC-UHFFFAOYSA-N 1-bromo-2-methoxyethane Chemical compound COCCBr YZUPZGFPHUVJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical compound CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RRQYJINTUHWNHW-UHFFFAOYSA-N 1-ethoxy-2-(2-ethoxyethoxy)ethane Chemical compound CCOCCOCCOCC RRQYJINTUHWNHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XIROXSOOOAZHLL-UHFFFAOYSA-N 2',3',4'-Trihydroxyacetophenone Chemical compound CC(=O)C1=CC=C(O)C(O)=C1O XIROXSOOOAZHLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IWVFFVBJTCPIIG-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethoxy-1-methylpyrrolidine Chemical compound COC1(OC)CCCN1C IWVFFVBJTCPIIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IUVCFHHAEHNCFT-INIZCTEOSA-N 2-[(1s)-1-[4-amino-3-(3-fluoro-4-propan-2-yloxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]ethyl]-6-fluoro-3-(3-fluorophenyl)chromen-4-one Chemical compound C1=C(F)C(OC(C)C)=CC=C1C(C1=C(N)N=CN=C11)=NN1[C@@H](C)C1=C(C=2C=C(F)C=CC=2)C(=O)C2=CC(F)=CC=C2O1 IUVCFHHAEHNCFT-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- VNDWQCSOSCCWIP-UHFFFAOYSA-N 2-tert-butyl-9-fluoro-1,6-dihydrobenzo[h]imidazo[4,5-f]isoquinolin-7-one Chemical compound C1=2C=CNC(=O)C=2C2=CC(F)=CC=C2C2=C1NC(C(C)(C)C)=N2 VNDWQCSOSCCWIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004679 31P NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- WAZPLXZGZWWXDQ-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-4-oxidomorpholin-4-ium;hydrate Chemical compound O.C[N+]1([O-])CCOCC1 WAZPLXZGZWWXDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NSPMIYGKQJPBQR-UHFFFAOYSA-N 4H-1,2,4-triazole Chemical compound C=1N=CNN=1 NSPMIYGKQJPBQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LLKFNPUXQZHIAE-UHFFFAOYSA-N 5-(3-aminopropyl)-8-bromo-3-methyl-2h-pyrazolo[4,3-c]quinolin-4-one Chemical compound O=C1N(CCCN)C2=CC=C(Br)C=C2C2=C1C(C)=NN2 LLKFNPUXQZHIAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical class [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 1
- 108091028026 C-DNA Proteins 0.000 description 1
- 125000002853 C1-C4 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004394 Complementary RNA Proteins 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N Dimethoxyethane Chemical compound COCCOC XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- RJUFJBKOKNCXHH-UHFFFAOYSA-N Methyl propionate Chemical compound CCC(=O)OC RJUFJBKOKNCXHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUAKHGWARZSWIH-UHFFFAOYSA-N N,N‐diethylformamide Chemical compound CCN(CC)C=O SUAKHGWARZSWIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWXPDGCFMMFNRW-UHFFFAOYSA-N N-methylcaprolactam Chemical compound CN1CCCCCC1=O ZWXPDGCFMMFNRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910003849 O-Si Inorganic materials 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910003872 O—Si Inorganic materials 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001788 Proto-Oncogene Proteins c-raf Human genes 0.000 description 1
- 108010029869 Proto-Oncogene Proteins c-raf Proteins 0.000 description 1
- 229910007161 Si(CH3)3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000246358 Thymus Species 0.000 description 1
- 235000007303 Thymus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 229910021626 Tin(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- XDILZEPJCPEDLT-UHFFFAOYSA-N [Na].[O-][N+]1=CC=CC=C1S Chemical compound [Na].[O-][N+]1=CC=CC=C1S XDILZEPJCPEDLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQVISGXICTVSDQ-UHFFFAOYSA-O [c-]1nn[nH]n1.CC(C)[NH2+]C(C)C Chemical compound [c-]1nn[nH]n1.CC(C)[NH2+]C(C)C YQVISGXICTVSDQ-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 125000005036 alkoxyphenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 1
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 150000001555 benzenes Chemical class 0.000 description 1
- INKMLGJBBDRIQR-UHFFFAOYSA-N benzyl 2-(triphenyl-$l^{5}-phosphanylidene)acetate Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)=CC(=O)OCC1=CC=CC=C1 INKMLGJBBDRIQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N benzyl bromide Chemical compound BrCC1=CC=CC=C1 AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- XNNQFQFUQLJSQT-UHFFFAOYSA-N bromo(trichloro)methane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Br XNNQFQFUQLJSQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 238000001818 capillary gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N carbocromen Chemical compound CC1=C(CCN(CC)CC)C(=O)OC2=CC(OCC(=O)OCC)=CC=C21 KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003857 carboxamides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001733 carboxylic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N chloroacetic acid Chemical compound OC(=O)CCl FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940106681 chloroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 229910052681 coesite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 229940125878 compound 36 Drugs 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229910052906 cristobalite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- NKLCNNUWBJBICK-UHFFFAOYSA-N dess–martin periodinane Chemical compound C1=CC=C2I(OC(=O)C)(OC(C)=O)(OC(C)=O)OC(=O)C2=C1 NKLCNNUWBJBICK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940062233 di-isopropylammonium Drugs 0.000 description 1
- FAMRKDQNMBBFBR-BQYQJAHWSA-N diethyl azodicarboxylate Substances CCOC(=O)\N=N\C(=O)OCC FAMRKDQNMBBFBR-BQYQJAHWSA-N 0.000 description 1
- 229940019778 diethylene glycol diethyl ether Drugs 0.000 description 1
- SBZXBUIDTXKZTM-UHFFFAOYSA-N diglyme Chemical compound COCCOCCOC SBZXBUIDTXKZTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005805 dimethoxy phenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- FAMRKDQNMBBFBR-UHFFFAOYSA-N ethyl n-ethoxycarbonyliminocarbamate Chemical compound CCOC(=O)N=NC(=O)OCC FAMRKDQNMBBFBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008282 halocarbons Chemical class 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N hexamethylphosphoric triamide Chemical compound CN(C)P(=O)(N(C)C)N(C)C GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 150000003951 lactams Chemical class 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 1
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- MDEDOIDXVJXDBW-UHFFFAOYSA-N methoxymethyl acetate Chemical compound COCOC(C)=O MDEDOIDXVJXDBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NTNUDYROPUKXNA-UHFFFAOYSA-N methyl 2-(triphenyl-$l^{5}-phosphanylidene)acetate Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(C=1C=CC=CC=1)(=CC(=O)OC)C1=CC=CC=C1 NTNUDYROPUKXNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940017219 methyl propionate Drugs 0.000 description 1
- GYNNXHKOJHMOHS-UHFFFAOYSA-N methyl-cycloheptane Natural products CC1CCCCCC1 GYNNXHKOJHMOHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- CIXHNHBHWVDBGQ-UHFFFAOYSA-N n-propan-2-ylpropan-2-amine;2h-tetrazole Chemical compound C1=NN=NN1.CC(C)NC(C)C CIXHNHBHWVDBGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- IOMMMLWIABWRKL-WUTDNEBXSA-N nazartinib Chemical compound C1N(C(=O)/C=C/CN(C)C)CCCC[C@H]1N1C2=C(Cl)C=CC=C2N=C1NC(=O)C1=CC=NC(C)=C1 IOMMMLWIABWRKL-WUTDNEBXSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- KOSYAAIZOGNATQ-UHFFFAOYSA-N o-phenyl chloromethanethioate Chemical compound ClC(=S)OC1=CC=CC=C1 KOSYAAIZOGNATQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- BTLSLHNLDQCWKS-UHFFFAOYSA-N oxocan-2-one Chemical compound O=C1CCCCCCO1 BTLSLHNLDQCWKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- VVWRJUBEIPHGQF-UHFFFAOYSA-N propan-2-yl n-propan-2-yloxycarbonyliminocarbamate Chemical compound CC(C)OC(=O)N=NC(=O)OC(C)C VVWRJUBEIPHGQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FVSKHRXBFJPNKK-UHFFFAOYSA-N propionitrile Chemical compound CCC#N FVSKHRXBFJPNKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000009834 selective interaction Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(I) nitrate Inorganic materials [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 235000011150 stannous chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910052682 stishovite Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N sulfolane Chemical compound O=S1(=O)CCCC1 HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 description 1
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 1
- MHYGQXWCZAYSLJ-UHFFFAOYSA-N tert-butyl-chloro-diphenylsilane Chemical compound C=1C=CC=CC=1[Si](Cl)(C(C)(C)C)C1=CC=CC=C1 MHYGQXWCZAYSLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000383 tetramethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- FCFMKFHUNDYKEG-UHFFFAOYSA-N thietane 1,1-dioxide Chemical compound O=S1(=O)CCC1 FCFMKFHUNDYKEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001585 thymus vulgaris Substances 0.000 description 1
- AXZWODMDQAVCJE-UHFFFAOYSA-L tin(II) chloride (anhydrous) Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Sn+2] AXZWODMDQAVCJE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003944 tolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- YLGRTLMDMVAFNI-UHFFFAOYSA-N tributyl(prop-2-enyl)stannane Chemical compound CCCC[Sn](CCCC)(CCCC)CC=C YLGRTLMDMVAFNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052905 tridymite Inorganic materials 0.000 description 1
- ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCO ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår modifiserte oligonukleotider omfattende minst en oligonukleotiddimer med et modifisert skjelett, modifiserte nukleotiddimerer fremgangsmåter for fremstilling av de modifiserte oligonukleotidene eller nukleotiddimerene, anvendelsen av de modifiserte oligonukleotidene eller nukleotiddimerene og farmasøytiske preparater inneholdende de modifiserte oligonukleotidene.
Nukleosider og oligonukleotider har oppnådd bred interesse som antivirale aktive ingredienser eller på grunn av deres evne til å vekselvirke med nukleinsyrer ("antisens" oligonukleotider) og deres biologiske aktivitet forbundet derved, se f.eks. Uhlmann, E. , Peyman, A., Chemical Reviews 90:543-584 (1990). For å fremskaffe oligonukleotider med nye egenskaper eller forbedre vekselvirkningen av antisens-oligonukleotider med naturlige nukleinsyrer og deres stabilitet overfor nukleaser, har sukkerradikalene i nukleosldene (eller nukleotidenhetene i oligonukleotidene) eller internukleotidfosfatbindingen i oligonukleotider, blitt modifisert på mange forskjellige måter, se f.eks. Marquez, V.E., Lim. M-I., Medicinal Research Reviews 6:1-40 (1986), Héléne, C, Toulmé, J.J., Biochimica et Biophysica Acta 1049:99-125 (1990), Englisch, U., Gauss, D.H. , Angewandte Chemie 103:629-646 (1990), Matteucci, M.D., Bischofberger, N. , Annual Reports in Medicinal Chemistry 26:287-296 (1991) og WO 91/06556.
I W0 92/20823 ble det beskrevet skjelettmodifiserte oligo-nukleotidanaloger hvor fosfodiester inter-sukkerbindinger funnet i vlldtypeoligomerer, blir erstattet med fire atomblndende grupper og identiske 2'-substituenter. WO 92/05186 beskriver modifiserte oligonukleotider hvor fosfodiesterbindingene er erstattet av to til fire atomer lange internukleosidbindinger hvor minst et av atomene er nitrogen, oksygen eller svovel og hvor substituentene i 2'-posisjonen kan være forskjellig. Eksempler er bindinger hvor heteroatomet er 1 3'-posisjon på sukkeret og dimerene hvor begge nukleosidene er usubstituert.
Hybridiseringskarakteristikken med DNA/RNA og resistensen mot nukleaser til de således modifiserte oligonukleotidene er imidlertid ikke tilfredsstillende.
Det er overraskende funnet at oligonukleotider som er meget resistente mot nukleaser og i stand til sterk hybridisering til mål -RNA eller-DNA, kan hil oppnådd ved innlemming 1 oligonukleotidene av nukleotiddimerer hvor kun en av de to 2'-posisjonene er substituert eller hvor 2'-posisjonene er substituert forskjellig og hvor fosfodiesterbindingen er dannet av en fireledds amid- eller butylengruppe.
Det er et mål ved foreliggende oppfinnelse å fremskaffe et oligonukleotid med formel I
hvor U er et identisk eller forskjellig radikal av et naturlig eller syntetisk nukleosid og n er et tall fra 2 til 200, fortrinnsvis 2 til 100, mer foretrukket 2 til 50 og mest foretrukket 2 til 20 monomerenheter, omfattende minst en strukturell enhet av to påfølgende nukleosider, ved den strukturelle enheten omfattende formel Ila, I Ib eller lic
hvor
Ri er H, C^- C^ alkyl eller C^- C^ alkoksy;
R2 er H; C±- C± alkyl; fenyl; fenyl substituert med OH, OR'"',
0(CH2CH20)nR'" , C6-C10 aryl eller C3-Cg heteroaryl; en interkalator; amino-C1-C4 alyl; C1-C4 alkylamino;
ammonlum-C1-C4 alkyl; C^-C^ alkylammonium; amino-C1-C4 alkylaminosulfonyl; C1-C4 alkylamino-C1-C4 alkylaminosulfonyl eller (CH3)2<N>CH2CH2;
R3 er H eller C^- C^ alkyl;
R3. er H; OH; <C>1-C4 alkyl; 0-C1-C4 alkyl; 0{CH2CH20)nR<*>•'; R» * * er Ci-04 alkyl;
X er H, OH, Q- C^ C^ alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0H;
Y er H, 0-<C>J-C4 alkyl, -0-(CH2-C<H>2<->0)mH eller -0-CH2-C(OR)H-CH2-OH;
R er H eller Cj-C-lo alkyl;
m er et helt tall fra 1 til 4;
n er et helt tall fra 1 til 4; og
B er et purin eller pyrimidinradikal eller analoge derav, med den forutsetning at enten X eller Y er H og at X og Y ikke er identiske.
Noen eksempler på alkyl, alkoksy, alkyltio, hydroksyalyl og aminoalkyl, som fortrinnsvis inneholder 1 til 6 C-atomer, er metyl, etyl og isomerer av propyl, butyl, pentyl, heksyl, heptyl, oktyl, nonyl, decyl, undecyl og dodecyl, og også korresponderende alkoksy, alkyltio, hydroksyalkyl og aminoalkylradikaler. Alkyl, alkoksy, alkyltio, hydroksyalkyl og aminoalkylradikalene inneholder fortrinnsvis 1 til 4 C-atomer. Foretrukne alkyl, alkoksy, alkyltio, hydroksyalkyl og aminoalkylradikaler er metyl, etyl, n- og i-propyl, n-, i- og t-butyl, metoksy, etoksy, metyltio og etyltio, aminometyl, aminoetyl, hydroksymetyl og hydroksyetyl.
Eksempler på aminoalkyl er aminometyl, aminoetyl, 1-amino-prop-2-yl eller -3-yl, l-aminobut-2-yl eller -3-yl eller -4-yl, N-metyl- eller N,N-dimetyl- eller N-etyl- eller N,N-dietyl- eller N-2-hydroksyetyl- eller N,N-di-2-hydroksy-etylaminometyl eller -aminoetyl eller -aminopropyl eller-aminobutyl. Eksempler på hydroksyalkyl er hydroksymetyl, 1-hydroksyet-2-yl, l-hydroksyprop-2- eller -3-yl, 1-hydroksy-but-2-yl, -3-yl eller -4-yl.
Eksempler på Cf,-C10 aryl er naftyl og . fenyl, fenyl er foretrukket, Heteroaryl inneholder fortrinnsvis 1 til 3 heteroatomer valgt blant gruppen omfattende 0, S og N.
En foretrukket interkalator i sammenheng med foreliggende oppfinnelse er antraquinon substituert med en linker, hvor linkeren fortrinnsvis er en kjede på 2 til 7 atomer valgt blant gruppen omfattende C, N og 0.
Dersom B er et purinradikal eller en analog derav, så kan den være et radikal med formelen IV, IVa, IVb, IVc, IVd eller IVe hvor R4 er H, Cl, Br eller OH eller -O-alkyl som har 1 til 12 C-atomer og R5, R^ og R7 er uavhengig av hverandre H, OH, SH, NH2, NHNH2, NHOalkyl med 1 til 12 C-atomer, -N=CH-N(C1-<C>12 alkyl)2, F, Cl, Br, alkyl eller hydroksyalkyl eller aminoalkyl eller alkoksy eller alkyltio med 1 til 12 C-atomer, hvor hydroksyl- og aminogruppene er ikke-substituert eller substituert med beskyttende grupper, fenyl, benzyl, primær amino med 1 til 20 C-atomer og sekundær amino med 2 til 30 C-atomer og R-^ er H eller C1-C4 alkyl.
Beskyttende grupper og fremgangsmåter for derivatisering av hydroksylgruppene med slike beskyttende grupper er generelt kjent i sukker- og nukleotidkjemien og er f.eks. beskrevet av B.T. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley Interscience, New York (1991). Eksempler på beskyttende grupper er: lineære eller forgrenede Cj^-Cg alkyl, spesielt C1-C4 alkyl, f.eks. metyl, etyl, n- og i-propyl, n-, i- og t-butyl; C7-C18 aralkyl, f.eks. benzyl, metylbenzyl, dimetylbenzyl, metoksybenzyl, dimetoksybenzyl, brombenzyl; difenylmetyl, di(metylfenyl)metyl, di(dimetylfenyl)metyl, di(metoksyfenyl)metyl, di(dlmetoksyfenyl)metyl, trityl, tri(metylfenyl)metyl, tri(dimetylfenyl)metyl, metoksyfenyl(difenyl)-metyl, dl(metoksyfenyl)fenylmetyl, tri(metoksyfenyl)metyl, tri(dimetoksyfenyl)metyl; trifenylsilyl, alkyldifenylsilyl, dialkylfenylsilyl og trialkylsilyl med 1 til 20fortrinnsvis 1 til 12 og spesielt 1 til 8 C-atomer i alkylgruppen, f.eks. trimetylsilyl, trietylsilyl, tri-n-propylsilyl, i-propyldimetylsilyl, t-butyldimetylsilyl, t-butyldifenylsilyl, n-oktyldimetylsilyl, (1,1,2,2-tetrametyletylJdimetylsilyl;-(Ci-Cg alkyl)2Si-0-Sl(C1-C8 alkyl)2-, hvor alkyl f.eks. er metyl, etyl, n- eller i-propyl, i- eller t-butyl; C2-C^2 acyl, spesielt C2-Cg acyl, f.eks. acetyl, propanoyl, butanoyl, pentanoyl, heksanoyl, benzoyl, metylbenzoyl, metoksybenzoyl, klorbenzoyl og brombenzoyl; Rjj-SOjj-, hvor R4 er C^-<C>12 alkyl, spesielt C^-Cf, alkyl, C5- eller C5 cykloalkyl, fenyl, benzyl, C^-C12 alkylfenyl og spesielt C1-C4 alkylfenyl, eller C^-C^2 alkylbenzyl og spesielt C1-C4 alkylhenzyl, eller halofenyl eller halobenzyl, f.eks. metyl-, etyl-, propyl-, butyl-, fenyl-, benzyl, p-brom-, p-metoksy-eller p-metylfenylsulfonyl; usubstituert eller F-, Cl-, Br-, C1-C4 alkoksy-, tri(C1-<C>4 alkyl)silyl- eller C^- C^ alkylsulfonyl-substituert C^-C^2 alkoksykarbonyl, fortrinnsvis C^-Cg alkoksykarbonyl, f.eks. metoksy-, etoksy-, n- eller i-propoksy- eller n-, i- eller t-butoksykarbonyl, 2-trimetyl-silyletoksykarbonyl, 2-metylsulfonyletoksykarbonyl, eller fenoksykarbonyl eller benzyloksykarbonyl som er ikke-substituert eller substituert som for alkoksykarbonyl, f.eks. metyl- eller metoksy- eller klorfenoksykarbonyl eller-benzyloksykarbonyl, og også 9-fluorenylmetyloksykarbonyl.
Dersom den beskyttende gruppen er alkyl, kan den være substituert med F, Cl, Br, C^-C4 alkoksy, fenoksy, klorfenoksy, metoksyfenoksy, benzyloksy, metoksybenzyloksy eller klorfenoksy.
I en foretrukket utførelsesform er de beskyttende gruppene uavhengig av hverandre lineære eller forgrenede C1-C4 alkyl, c7~Cl8 aralkyl, trialkylsilyl med 1 til 12 C-atomer i alkylgruppene, -(C1-C4 alkyl)2Si-0-Si(C1-C4 alkyl)2, C2-C8 acyl, R4-SO2-, hvor R4 er C-^-C^ alkyl, fenyl, benzyl, £±- £4 alkylfenyl, C1-C4 alkylbenzyl, halofenyl eller halobenzyl, eller C^-Cg alkoksykarbonyl, fenoksykarbonyl eller benzyloksykarbonyl eller 9-fluorenylmetoksykarbonyl.
I en spesielt foretrukket utførelsesform er de beskyttende gruppene metyl, etyl, n- eller i-propyl, n-, i- eller t-butyl; benzyl, metylbenzyl, dimetylbenzyl, metoksybenzyl, dimetoksybenzyl, brombenzyl; difenylmetyl, di(metylfenyl)-metyl, di(dimetylfenyl)metyl, di(metoksyfenyl)metyl di(met-oksyf enyl )( fenyl )metyl , trityl, tri(metylfenyl)metyl, tri(dimetylfenyl)metyl, tri(metoksyfenyl)metyl, tri(dimet-oksyfenyl)metyl; trimetylsilyl, trietylsilyl, tri-n-propylsilyl, i-propyldimetylsilyl, t-butyldimetylsilyl, t-butyldifenylsilyl, n-oktyldimetylsilyl, (1,1,2,2-tetrametyletyl)-dlmetylsilyl, -(CH3)2Si-0-Si(CH3)2-, <->(I-C3H7)2Si-0-Si(i-C3H7)2-; acetyl, propanoyl, butanoyl, pentanoyl, heksanoyl, benzoyl, metylbenzoyl, metoksybenzoyl, klorbenzoyl og brombenzoyl; metyl-, etyl-, propyl-, butyl-, fenyl-, benzyl-, p-brom-, p-metoksy- og p-metylfenylsulfonyl; metoksy-, etoksy-, n- eller i-propoksy- eller n-, i- eller t-butoksykarbonyl, eller fenoksykarbonyl, benzyloksykarbonyl, metyl-eller metoksy- eller klorfenoksykarbonyl eller -benzyloksykarbonyl eller 9-fluorenylmetoksykarbonyl.
Foretrukkede beskyttende grupper er C-^-Cg acylgrupper, f.eks. acetyl, propionyl, butyroyl og benzoyl. R-^ er fortrinnsvis H eller metyl.
Den primære amino inneholder fortrinnsvis 1 til 12 og spesielt foretrukket 1 til 6 C-atomer og den sekundære amino fortrinnsvis 2 til 12 og spesielt foretrukket 2 til 6 c-atomer.
Noen eksempler på alkyl, alkoksy, alkyltio, hydroksyalkyl og aminoalkyl, som fortrinnsvis inneholder 1 til 6 C-atomer er metyl, etyl og isomerer av propyl, butyl, pentyl, heksyl, heptyl, oktyl, nonyl, decyl, undecyl og dodecyl og også korresponderende alkoksy, alkyltio, hydroksyalkyl og aminoalkylradikaler. Alkyl, alkoksy, alkyltio, hydroksyalkyl og aminoalkylradikalene inneholder fortrinnsvis 1 til 4 C-atomer. Foretrukne alkyl, alkoksy, alkyltio, hydroksyalkyl og aminoalkylradikaler er metyl, etyl, n- og i-propyl, n-, i- og t-butyl, metoksy, etoksy, metyltio og etyltio, aminometyl, aminoetyl, hydroksymetyl og hydroksyetyl.
Den primære amino og sekundære amino kan f.eks. være radikaler med formelen RgRgN, hvor Rg er H eller uavhengig har betydningen for Rg, og Rg er C^-Cgo alkyl, -aminoalkyl eller -hydroksyalkyl, fortrinnsvis C^-C^g alkyl, -aminoalkyl eller -hydroksyalkyl og spesielt foretrukket C^-C^, alkyl,-aminoalkyl eller -hydroksyalkyl; karboksyalkyl eller karbalkoksyalkyl, hvor karbalkoksygruppen inneholder 2 til 8 C-atomer og alkylgruppen inneholder 1 til 6, fortrinnsvis 1 til 4 C-atomer; C2-C2Q alkenyl, fortrinnsvis C2-Ci2<a>lkenyl og spesielt foretrukket C2-Cfc alkenyl; fenyl, mono- eller di(Ci-C4 alkyl- eller -alkoksy)fenyl, benzyl, mono- eller difC^-C^ alkyl- eller -alkoksy)benzyl; eller 1,2-, 1,3- eller 1^-imidazolyl-C^-Cfc alkyl, eller Rg og Rg sammen er tetra-eller pentametylen, 3-oksa-l,5-pentylen, -CH2-NRiø-CH2CH2-eller -CH2CH2-NR10-C<H>2CH2-, hvor R10 er H eller C^- C^ alkyl. Amlnogruppen i aminoalkyl kan være substituert med en eller to C1-C4 alkyl eller -hydroksyalkylgrupper. Hydroksylgruppen i hydroksyalkyl kan være eterifisert med C1-C4 alkyl.
Eksempler på alkyl har blitt gitt tidligere. Eksempler på aminoalkyl er aminometyl, aminoetyl, l-aminoprop-2-yl eller-3-yl, l-aminobut-2-yl eller -3-yl eller -4-yl, N-metyl- eller N.N-dimetyl- eller N-etyl- eller N,N-dietyl- eller N-2-hydroksyetyl- eller N,N-di-2-hydroksyetylaminometyl eller-aminoetyl eller -amlnopropyl eller -aminobutyl. Eksempler på hydroksyalkyl er hydroksymetyl, l-hydroksyet-2-yl, 1-hydroksyprop-2- eller -3-yl, l-hydroksy-but-2-yl, -3-yl eller
-4-yl. Eksempler på karboksyalkyl er karboksymetyl, karboksy-
etyl, karboksypropyl og karboksybutyl, og eksempler på karbalkoksyalkyl er de karboksyalkylgmppene som er esterifi-sert med metyl eller etyl. Eksempler på alkenyl er allyl, but-l-en-3-yl eller -4-yl, pent-3- eller 4-en-l-yl eller -2-yl, heks-3- eller -4- eller -5-en-l-yl eller -2-yl. Eksempler på alkyl- og alkoksyfenyl eller benzyl er metylfenyl, dimetylfenyl, etylfenyl, dletylfenyl, metylbenzyl, dimetylbenzyl, etylbenzyl, dietylbenzyl, metoksyfenyl, dimetoksy-fenyl, etoksyfenyl, dietoksyfenyl, metoksybenzyl, dimetoksybenzyl, etoksybenzyl, dietoksybenzyl. Eksempler på imida-zolylalkyl hvor alkylgruppen fortrinnsvis inneholder 2 til 4 C-atomer, er 1,2-, 1,3- eller 1,4-imidazolyletyl eller -n-propyl eller -n-butyl. R10 er fortrinnsvis H, metyl eller etyl.
Foretrukne eksempler på primær amino og sekundær amino er metyl-, etyl-, dimetyl-, dietyl-, allyl-, mono- eller di(l-hydroksyet-2-yl)-, fenyl- og benzylamino, acetylamino, isobutyrylamino og benzoylamino.
I en foretrukket utførelsesform er R4 hydrogen. I en annen foretrukket utførelsesform er R7 hydrogen. I en ytterligere foretrukket foretrukket utførelsesform er Rg og R5 uavhengig av hverandre H, F, Cl, Br, OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, metylaraino, dimetylamino, benzoylamino, isobutyrylamino, metoksy, etoksy og metyltio.
Ved siden av purin, er noen analoger av purinserien adenin, N-metyladenin, N-benzoyladenin, 2-metyltioadenin, 2-aminoadenin, 6-hydroksypurin, 2-amino-6-klorpurin, 2-amino-6-metyltiopruin, guanin og N-isobutyrylguanin. Adenin, 2-aminoadenin og guanin og også deres basebeskyttede derivater, er spesielt foretrukket.
Dersom B i formel II er et analogt pyrimidinradikal, er det fortrinnsvis uracil, tymin eller cytosinradikaler med formelene V, Va og Vb hvor Rn er H eller C1-C4 alkyl, og R12 °S <E>13 uavhengig av hverandre er H, F, Cl, Br, alkyl, propargyl eller hydroksyalkyl eller aminoalkyl eller alkoksy eller alkyltio som har 1 til 12 C-atomer, hvor hydroksyl og aminogruppene er ikke-substituert eller substituert med beskyttende grupper, fenyl, benzyl, primær amino med 1 til 20 C-atomer eller sekundær amino med 2 til 30 C-atomer, og hydrogenatomene på NH2 gruppen i formel Vb er ikke-substituert eller substituert med cl~c6 alkyl» benzoyl eller benzyl, og dihydroderivatene av radikalene med formelene V, Va og Vb.
Ril er fortrinnsvis H. <R>i2 er fortrinnsvis H, F, Cl, Br, Ci~ Cf, alkyl eller hydroksyl. R13 er fortrinnsvis H, F, Cl, Br, Ci-Cf, alkyl eller -alkoksy eller -hydroksyalkyl.
Noen eksempler på pyrimldinanaloger er uracil, tymin, cytosin, 5-fluoruracil, 5-kloruracil, 5-bromuracil, dihydrouracil og 5-metylcytosin.
I en utførelsesform omfatter oligonukleotidene med formel I minst en strukturell enhet på to påfølgende nukleosider, hvor den strukturelle enheten omfatter formelene Ila eller Ile hvor
Ri er H, C1-C4 alkyl eller C1-C4 alkoksy;
R2 er H; ^-04 alkyl; fenyl; fenyl substituert med OH, OR'",
0(CH2CH20)nR'" , C6-<C>10 aryl eller C3-C9 heteroaryl; en interkalator; amino-Ci-C4 alyl; Ci-C4 alkylamino;
ammonium-Ci-C4 alkyl; C1.-C4 al kyl ammonium; amino-Ci-C4 alkylaminosulfonyl; C1-C4 alkylamino-C1-C4 alkylaminosulfonyl eller (CH3)2NCH2CH2;
R3 er H eller C^- C^ alkyl;
R'" er C-L-C4 alkyl;
X er H, OH, 0-C1-C4 alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0H;
Y er H, 0-C1-C4 alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(OR)H-CH2-0H;
R er H eller Cj^-Cjq alkyl;
m er et helt tall fra 1 til 4;
n er et helt tall fra 1 til 4; og
B er et purin eller pyrimidinradikal eller analoge derav.
I en foretrukket utførelsesform omfatter oligonukleotidet med formel I minst en strukturell enhet av to påfølgende nukleosider, hvor den strukturelle enheten omfatter formelene Ila eller Ile, hvor
Rj er H, Cj-C4 alkyl,
R2 er H; C±- C$ alkyl; fenyl; fenyl substituert med OH, OR<*>'',
0(CH2CH20)nR" ', C6-C10 aryl eller C3-Cg heteroaryl;
R3 er H eller C^ C^ alkyl;
R* " er C1-C4 alkyl;
X er H, OH, 0-C1-C4 alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(OR)H-CH2-OH;
Y er H, O-Cj-04 alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(OR)H-CH2-OH;
R er H eller Cj-C^g alkyl;
m er et helt tall fra 1 til 4;
n er et helt tall fra 1 til 4; og
B er et purln eller pyrimldinradlkal eller analoge derav.
I en spesielt foretrukket utførelsesform omfatter oligo-nukleotldet med formel I minst en strukturell enhet av to påfølgende nukleosider hvor den strukturelle enheten omfatter formel Ila eller lic, hvor
Ri er H, C1-C4 alkyl,
R2 er H; C^- C^ alkyl eller fenyl;
R3 er H eller CJ-C4 alkyl;
X er H, OH, O-Cjl^ alkyl, -0-(CH2-CH2-0 )mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0H;
Y er H, O-Cj^ alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0H;
R er H eller C1-C10 alkyl;
m er et helt tall fra 1 til 4;
n er et helt tall fra 1 til 4; og
B er et purin eller pyrimidinradikal eller analoge derav.
Mer foretrukket er oligonukleotider med formel I omfattende minst en strukturell enhet av to påfølgende nukleosider, hvor den strukturelle enheten omfatter formel Ila eller lic, hvor Rj er H, ^-04 alkyl,
R2 er H; ^-04 alkyl eller fenyl;
R3 er H eller C^- C^ alkyl;
X er H, OH, 0-^-04 alkyl,
Y er H, O-C1-C4 alkyl, og
B er et purin eller pyrimidinradikal eller et analog derav.
Mest foretrukket er oligonukleotider med formel I omfattende minst en strukturell enhet av to påfølgende nukleosider, hvor den strukturelle enheten omfatter formel Ila eller lic, hvor Rj er H;
R2 er H eller fenyl;
R3 er H eller metyl;
X er H eller 0-CH3;
Y er H eller 0-CH3; og
B er et pyrimidinradikal eller en analog derav.
Et annet mål for foreliggende oppfinnelse er en nukleotiddimer med formel Illa, Illb eller Ille
hvor
R-^ er H, C1-C4 alkyl eller C1-C4 alkoksy;
R2 er H; CJ-C4 alkyl; fenyl; fenyl substituert med OH, OR'<*>',
0(CH2CH20)nR* * * , Cfy- C^ Q aryl eller C3-Cg heteroaryl; en interkalator; amlno-C^-C4 alkyl; Ci-C4 alkylamino;
ammonium-Ci-C4 alkyl; C1-C4 alkylammonium; amino-C^-C4 alkylamlnosulfonyl; CJ-C4 alkylamlno-C^-C4 alkylaminosulfonyl eller (CH3)2NCH2CH2;
R3 er H eller C1-C4 alkyl;
R3» er H; OH; <C>1-C4 alkyl; 0-C1-C4 alkyl; 0(CH2CH20 )nR'* *;
R<*> og R" er H eller en OH-beskyttende gruppe eller R" er et radikal som danner en fosforinneholdende nukleotidbrogruppe;
R" * er Ci-04 alkyl;
X er H, 0RX, O-Ci-04 alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0Rx;
Y er H, Q- C^ C^ alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0H;
R er H eller C^-Cio alkyl >
Rx er H eller en OH-beskyttende gruppe;
m er et helt tall fra 1 til 4;
n er et helt tall fra 1 til 4; og
B er et purin eller pyrimidinradikal eller en analog derav, med den forutsetning at enten X eller Y er H og at X og Y ikke er identiske.
Passende beskyttende grupper har blitt nevnt ovenfor.
En fosforinneholdende nukleotid brogruppe er et radikal med formelen hvor Ya er hydrogen, C^-<C>^<g> alkyl, C^-C^g aryl, C7-C2o aralkyl, C7-C2q <a>lkaryl, -0RD, -SR^, -NH2, primær amino, sekundær amino, 0®M® eller S^M ® ; Xa er oksygen eller svovel; Ra er hydrogen, M , C^^-C^g alkyl, C2-C12<a>lkenyl eller C^-C12 aryl, eller gruppen Ra0 er N-heteroaryl-N-yl med 5 ringledd og 1 til 3 N-atomer; R0 er hydrogen, C^-Cjg alkyl eller <C>6-C12 aryl; og M<®> er Na © , K® , Li® , NH4 <9 eller primær, sekundær, tertiær eller kvaternær ammonium; hvor alkyl, aryl, aralkyl og alkaryl i Ya, Ra og RD er ikke-substituert eller substituert med alkoksy, alkyltio, halogen,
-CN, -N02, fenyl, nitrogenyl eller halofenyl.
En foretrukket brogruppe er gruppen -P(0)0<®->, som opptrer i naturlige oligonukleotider. Eksempler på ytterligere brogrupper er -P(0)sO-, -P(S)S<®->, -P(0)R16-, P(0)NR17<R>18, eller -CH2-, hvor R^f, er H eller C-^-Cf, alkyl og R17 og R18 har uavhengig av hverandre samme betydning som R;lé,.
I en annen utførelsesform av foreliggende oppfinnelse har nukleotiddimerene formel Illa eller Ille, hvor Ri er H, C^-C4 alkyl eller C^-C4 alkoksy;
R2 er H; C^- C^ alkyl; fenyl; fenyl substituert med OH, OR''',
0(CH2CH20)nR'*' , C6-C10 aryl eller C3-Cg heteroaryl; en interkalator; amino-C1-C4 alkyl; £\-£n alkylamino;
ammonium-Ci-C4 alkyl; C^-C4 alkylammonium; amino-C^-C4 alkylaminosulfonyl; C1-C4 alkylamino-C1-C4 alkylaminosulfonyl eller (CH3)2NCH2CH2;
R3 er H eller £^-04 alkyl;
R<*>•• er C1-C4 alkyl;
X er H, 0RX, 0-C1-C4 alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -O-CHg-C(OR)H-CH2-ORx;
Y er H, O- C^ C^ alkyl, -0-( CH2-CH2-0 )mH eller -0-CH2-C( OR )H-CH2-OH;
R er H eller C-^- C^ q alkyl;
Rx er H eller en OH-beskyttende gruppe;
m er et helt tall fra 1 til 4;
n er et helt tall fra 1 til 4; og
B er et purin eller pyrimidinradikal eller en analog derav.
I en foretrukket utførelsesform har nukleotiddimerene formel Illa eller Ille, hvor
Si er H, CJ-C4 alkyl,
R2 er H; C^- C^ alkyl; fenyl; fenyl substituert med OH, OR''<*>,
0(CH2CH20)nR''', C^-Cjo aryl eller C3-Cg heteroaryl;
R3 er H eller C1-C4 alkyl;
R' ' ' er 0^-04 alkyl;
X er H, 0RX, 0- C1- Ci alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(OR)H-CH2-ORx;
Y er H, 0-Cx-C4 alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(OR)H-CH2-0H;
R er H eller C^ C-^ q alkyl;
Rx er H eller en OH-beskyttende gruppe;
m er et helt tall fra 1 til 4;
n er et helt tall fra 1 til 4; og
B er et purin eller pyrimidinradikal eller en analog derav.
I en spesielt foretrukket utførelsesform har nukleotiddimerene formel Illa eller Ille, hvor
R2 er H, C^ C^ alkyl,
R2 er H; C^- C^ alkyl eller fenyl;
R3 er H eller C1-C4 alkyl;
X er H, 0RX, O- C^ C^ alkyl, -0-{CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0Rx;
Y er H, O- C^ C^ alkyl, -0-( CH2-CH2-0 )mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0H;
R er H eller C^- C^- q alkyl;
Rx er H eller en OH-beskyttende gruppe;
m er et helt tall fra 1 til 4;
n er et helt tall fra 1 til 4; og
B er et purin eller pyrimidinradikal eller en analog derav.
Mer foretrukket er nukleotlddlmerer med formel Illa eller Ille, hvor
Rx er H eller C^- Cq alkyl,
R2©r H; C^- C^ alkyl eller fenyl;
R3 er H eller Cx- C^ alkyl;
X er H, 0RX 0-Cx-C4 alkyl;
Y er H eller O- Ci- C^ alkyl;
Rx er H eller en OH-beskyttende gruppe;
B er et purin eller pyrimidinradikal eller en analog derav.
Mest foretrukket er nukleotiddimerer med formel Illa eller Ille, hvor
Rx er H;
R2 er H eller fenyl;
R3 er H eller metyl;
X er H eller 0-CH3;
Y er H eller 0-CH3; og
B er et pyrimidinradikal eller en analog derav.
Oppfinnelsen angår dessuten en fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse med formel Illa, Illb eller Ille, som er kjennetegnet ved at
(a) en forbindelse med formel VI
hvor
Sx er H, C-1-C4 alkyl eller C^- C^ alkoksy;
R<*> er H eller en OH-beskyttende gruppe;
X er H, OH, O-Cj-t^ alkyl, -0-( CH2-CH2-0 )mH- eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0H;
R er H eller C^-C^o alkyl; og
B er et purin- eller pyrimidinradikal eller en analog derav;
blir reagert med en forbindelse med formel VII
hvor
R2 er H; C1- C4 alkyl; fenyl, fenyl substituert med OH, OR'*', 0(CH2CH20)nR" ' , <C>6-C10 aryl eller C3-C9 heteroaryl; en interkalator; amino-Cx-C4 alkyl; Cx-C4 alkylamino; ammonium-C-L-C4 alkyl; C1-C4 alkylammonium; amino-C1-C4 alkylaminosulfonyl; C^- C/^ alkylamino-C1-C4 alkylaminosulfonyl; eller (CH3)2NCH2CH2;
R3 er H eller C^ C^ alkyl;
R" er H eller en OH-beskyttende gruppe eller et radikal som
danner en fosforinneholdende nukleotidbrogruppe;
R'* * er C1-C4 alkyl;
Y er H, O-C-l^ alkyl, -0-(CH2-CH2-0 )mH eller -0-CH2-C(OR )H-CH2-0H; og
B er et purin- eller pyrimidinradikal eller en analog derav; eller
(b) en forbindelse med formel VIII
hvor Rx, R2, R', X og B er som definert ovenfor,
blir reagert med en forbindelse med formel IX
hvor
R3, R", Y og B er som definert ovenfor; eller (c) en forbindelse med formel X
hvor Rx, R', X og B er som definert ovenfor, blir reagert med en forbindelse med formel XI
hvor
R3, R", Y og B er som definert ovenfor, og Z er halogen, f.eks. F, Cl, Na; eller
(d) en forbindelse med formel XII
hvor
Rx , R', X og B er som definert ovenfor,
blir reagert med en forbindelse med formel XIII
hvor
R2, R", Y og B er som definert ovenfor.
Forbindelsene med formel VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII og XIII er kjente eller kan bli fremstilt ifølge f.eks. De Mesmaeker, A., Waldner, A., Lebreton, J., Hoffmann, P., Fritsch, V., Wolf, R.M., Freier, S.M., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33:226-229 (1994) eller Pudlo, J.S., Townsend, L.B., Tetrahedron Lett. 31:3101 (1990).
Temperaturen i syntesen kan være fra -80 til +150° C, fortrinnsvis 0 til 100°C.
Generelt blir det benyttet oppløsningsmidler som er protiske og/eller aprotiske og spesielt foretrukket dipolare. Eksempler på oppløsnlngsmidler som kan bli benyttet alene eller som blanding av minst to oppløsnlngsmidler er etere {dibutyleter, tetrahydrofuran, dioksan, dietylenglykol dimetyleter, etylenglykol dlmetyleter eller dietyleter, dietylenglykol dietyleter, trietylenglykol dlmetyleter), halogenerte hydrokarboner (metylenklorid, kloroform, 1,2-dikloretan, 1,1,1-trikloretan, 1,1,2,2-tetrakloretan), karboksylsyreestere og laktoner (etylacetat, metylpropionat, etylbenzoat, 2-metoksyetylacetat, metoksymetylacetat, y-butyrolakton, S-valerolakton, plvalolakton), karboksamider og laktamer (N,N-dimetylformamid, N,N-dietylformamid, N,N-dimetylacetamid, tetrametylurea, heksametylfosforamid, y-butyrolaktam, c-kaprolaktam, N-metylpyrrolidon, N-acetyl-pyrrolldon, N-metylkaprolaktam), sulfoksyder (dimetylsulfok-syd ) , sulfoner (dimetylsulfon, dletylsulfon, trlmetylensul-fon, tetrametylensulfon), tertiære aminer (trietylamin, N-metylpiperidin, N-metylmorfolIn), aromatiske hydrokarboner, f.eks. benzen eller substituerte benzener (klorbenzen, 0-diklorbenzen, 1,2,4-trIklorbenzen, nitrobenzen, toluen, xylen) og nitriler (acetonltril, propionltril, benzonltril, fenylacetonitril), og også allfatiske eller cykloallfatiske hydrokarboner (pentan, petroleumeter, heksan, cykloheksan og metylcykloheksan).
Et mål for foreliggende oppfinnelse er anvendelse av en dlmer med formelen Illa., Illb eller Ille for fremstilling av oligonukleotider som omfatter en eller flere identiske eller forskjellige dimerenheter med formel Illa, Illb og/eller Ille.
Oligonukleotidene ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli fremstilt på en måte som er kjent per se ved forskjellige prosesser, fortrinnsvis på en fast støtte. For detaljer se f.eks. Galt, M.J., 01igonucleotide Synthesls: A Practical Approach, IRL Press, Oxford (1984).
Oligonukleotidene med formel I ifølge oppfinnelsen har antivirale og antiproliferative egenskaper og kan følgelig hli benyttet som medikamenter. Oligonukleotidene ifølge oppfinnelsen har overraskende høy stabilitet overfor degradering av nukleaser. En meget god pardannelse med komplementære nukleinsyrestrenger, spesielt av RNA typen A, blir også observert. Oligonukleotidene ifølge oppfinnelsen er derfor spesielt passende for antisensteknologi, dvs. hemming av ekspresjonen av uønskede proteinprodukter under bindingen til passende komplementære nukleotidsekvenser i nukleinsyre (se EP 266,099, W0 87/07300 og WO 89/08146). De kan bli benyttet for behandling av infeksjoner og sykdommer, f.eks. ved blokkering av ekspresjonen av bioaktive proteiner ved nukleinsyretrinnet (f.eks. onkogenese). Oligonukleotidene ifølge oppfinnelsen er også passende som diagnostika og kan bli benyttet som genbro for deteksjon av virale infeksjoner eller av genetisk relaterte sykdommer ved selektiv interaksjon ved enkel- eller dobbelstreng nukleinsyretrinnet. Spesielt, på grunn av øket stabilitet for nukleaser, er diagnostisk anvendelse ikke kun mulig in vitro, men også in vivo (f.eks. vevsprøver, blodplasma og blodserum). Anvendel-sesmuligheter av denne typen er beskrevet f.eks. i WO 91/06556.
Oppfinnelsen angår anvendelsen av oligonukleotider ifølge oppfinnelsen som diagnostika for deteksjon av antivirale infeksjoner og genetisk relaterte sykdommer.
Oligonukleotider med formel I ifølge oppfinnelsen kan anvendes i en terapeutisk fremgangsmåte for behandling av sykdom hos pattedyr inkludert mennesker ved hjelp av inaktivering av nukleinsyresekvenser i kroppen. Dosen som administreres til pattedyr med en kroppsvekt omkring 70 kg kan eksempelvis være U,U1 til 1000 mg per dag. Administreringen blir fortrinnsvis utført parenteralt, f.eks. intravenøst eller intraperitonealt,- i form av farmasøytiske preparater. Oppfinnelsen angår dessuten et farmasøytisk preparat omfattende eh effektiv mengde av et oligonukleotid med formel I alene eller sammen med andre aktive ingredienser, en farmasøytisk bærer i vanlig mengde og hvis ønskelig, hjelpestoffer.
De farmakologisk aktive oligonukleotidene ifølge oppfinnelsen kan bli benyttet i form av parenteralt administrerbare preparater eller infusjonsoppløsninger. Oppløsninger av denne typen er fortrinnsvis isotone vandige oppløsninger eller suspensjoner, det er mulig å fremstille disse før anvendelse, f.eks. i form av lyofiliserte preparater som inneholder det aktive stoffet alene eller sammen med en bærer, f.eks. mannitol. De farmasøytiske preparatene kan bli sterilisert og/eller inneholde hjelpestoffer, f.eks. konserveringsmidler, stabiliseringsmidler, fuktingsmidler og/eller emulgeringsmid-ler, oppløsere, salter for regulering av det osmotiske trykk og/eller buffere. De farmasøytiske preparatene som hvis ønskelig kan inneholde ytterligere farmasøytiske stoffer som f.eks. antibiotika, blir fremstilt på en måte som er kjent per se, f.eks. ved hjelp av konvensjonell oppløsning eller lyofiliseringsprosesser, og Inneholder omkring 0,1 til 90?é, spesielt fra omkring 0,5 til omkring 30%, f.eks. 1$ > til 5?É aktiv substansen.
Eksemplene nedenfor Illustrerer oppfinnelsen.
De følgende forkortelsene blir benyttet i eksemplene:
Bn: benzyl
DMT: dimetoksytrityl
HV: høy vakuum
Me: metyl
nBu^NF: tetrabutylammoniumfluorid
O-Ac: acetat
Ph: fenyl
pMeOBOM: p-metoksybenzyloksybenzyl
RT: romtemperatur
T: tymin
tBuPhgSi: tert.butyldifenylsilyl Ts: tosyl
TTTr: tris tert.butyltrityl
A. Fremstilling av dimerer
Eksempel Al: Fremstilling av forbindelse nr. 12
Trinn (a) til (e) ble utført under tørr atmosfære av argon,
(a) 5,12 g forbindelse nr. 0
ble oppløst 1 70 ml tørr acetonitril. Til denne oppløsningen ble det tilsatt 1,599 g benzyloksymetylklorid og 1,556 g 1,5-diazabicyklo-[5.4.0]-undec-5-en ved romtemperatur. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 40 timer og så fortynnet med 70 ml CH2C12, vasket med 70 ml vandig NaH2P04 og to ganger med en mettet oppløsning av NaCl. Den organiske fasen ble tørket over Mg2S04. Etter avdamping av oppløsningsmiddel ble resten kromatografert på silikagel (heksan/eddiksyreester 6:1) for å oppnå forbindelse nr. 1.
1H-NMR (CHC13, 500 MHz, J(Hz): 1,91 (3 H7, d, J6_7-<l,>0); 4,01 (H5., dd, J5.=13,<0,><J>5<»_>4--3,0); 4,06 (H4., ddd); 4,14 (H2>, ddd), 4,19 (H5.., dd, J5.»_4.=2,5); 4,40 (H3», dd, J3._ 2-=5,l; <J>3._4'=8,6); 4,72 (0CH2Ph, s); 5,48 og 5,51 (NCH20, AB, J=9,9); 5,72 (Hj., d, Ji>_2»-1.0). MS (FD) (m/e): 620
(M<+>).
(b) 12,87 g av forbindelse nr. 1 ble oppløst i 100 ml CH3I. Til denne blandingen ble det tilsatt 40,32 g Ag20 ved romtemperatur. Oppløsningen ble omrørt i 45<e>C i 2 dager i mørke. CH3I ble destillert av og resten ble omrørt med CH2C12 og filtrert. Ag20 ble forsiktig vasket med CH2C12 og oppløsningsmidlet ble avdampet for å oppnå forbindelse nr. 2.
1H-NMR (CHCI3, 500 MHz, J(Hz): 1,92 (3 H7, d, J6_7=<1,>0); 3,68 (OMe, s); 3,97 (H5», dd, J5>_5»»=13,2, J5»_4 .=2,5 ); 4,11 (H4., dd); 4,20 (H3., dd); 4,24 (Hg.., d); 5,72 (Hi», s). MS (FD) (m/e): 635 (M<+>). (c) Til en oppløsning av 0,771 g av forbindelse nr. 2 i 20 ml tørr tetrahydrofuran ble 0,182 g eddiksyre og 0,698 g tetrabutylammonlumfluorld tilsatt. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur I 20 timer. 0,169 ml trietylamin ble tilsatt og blandingen ble samavdampet med toluen (3x). Resten ble kromatografert på sllikagel (eddiksyreester/metanol 30:1) for å oppnå forbindelse nr. 3.
1H-NKR (CHCI3, 500 MHz, J(Hz): 1,97 (3 H7, d, J6_7=<1,>0); 3,58 (OMe, s); 3,87 (H5», ddd, <J>5<»_>5»»=10,2, J5»_4>-2,5); 4,32 (H3>, ddd); 5,73 (%., d). MS (FD)(m/e): 392 (M<+>). (d) En blanding av 0,772 g trif enylf osf In og 0,54 g av forbindelse nr. 3 ble oppløst 1 toluen/tetrahydrofuran (5:1) ved romtemperatur. 0,338 g Zn(N3).2 pyridin ble tilsatt fulgt av sakte tilsetning av 0,556 g dietylazodikarboksylat. Etter 4 timer ved romtemperatur ble blandingen filtrert, opp-løsningsmidlet avdampet. Resten ble kromatografert på silikagel (heksan/eddiksyreester 1:1) for å oppnå forbindelse nr. 4.
1H-NMR (CHC13, 500 MHz, J(Hz): 1,97 (3 Hy, d, J(,_7=l,0); 3,63 (OMe, s); 3,69 (H5», dd); 4,15 (H3>, m); 5,90 (%., d). MS (FD)(ra/e): 417 (M<+>). IR: 2100 cm"<1> (N3). (e) 0,472 g av forbindelse nr. 4 ble oppløst i 6 ml tørr dimetylformamid. Til denne oppløsningen ble 0,777 g tert.-butyldifenylklorsilan, 0,138 g dimetylamlnopyrldin og 0,228 g trletylamin tilsatt. Blandingen ble oppvarmet til 50<*>C og omrørt i 18 timer ved denne temperaturen. 20 ml av en mettet oppløsning av NaH2?04 ble tilsatt til blandingen og opp-løsningsmidlet ble fjernet under høyvakuum. Resten ble oppløst 1 CHgClg og NaH2P04. Den organiske fasen ble vasket med en mettet oppløsning av NaCl og tørket over Na2S04. Etter avdamping av oppløsningsmidlene ga kromatograf! av resten på silikagel forbindelse nr. 5.
1H-NMR(CHCI3, 500 MHz, J(Hz): 1,08 (t-Bu, 9H, s); 1,84 (3 H7, d, J6_7=1,0); 3,37 (OMe, s); 5,90 (H^, d, ._2'=2 ,0 ). (f) 0,62 g av forbindelse nr. 5 oppløst 1 5 ml metanol ble tilsatt til en suspensjon av 0,427 g SnCl2"2H20 i 15 ml metanol. Blandingen ble omrørt i 20 timer ved romtemperatur. pH ble bragt til 8 med vandig NaHC03. Metanolet ble avdampet og den vandige fasen ble ekstrahert 3x med CH2C12. Den organiske fasen ble tørket og oppløsningsmidlet fjernet. Forbindelse nr. 6 ble oppnådd ved kromatografi.
1H-NMR (CHC13> 500 MHz, J(Hz): 1,11 (t-Bu, 9H, s); 1,80 (3 H7, d, J6_7=1,0); 2,70 (H5., dd, Jg ._5..-14,0, J5._4.-4,l); 2,99 (Hg.., dd, JQH_4>-3t0); 3,99 (H3>, dd, <J>3-_4»=8,0, J3>_ 2--5.0); 5,89 (%>, d). MSCFD(m/e): 630 (M<+>). (g) 1,123 g av forbindelse nr. 7
fremstilt Ifølge De Mesmaeker, A., Waldner, A., Lebreton, J., Hoffmann, P., Fritsch, V., Wolf, R.M., Freier, S.M., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33:226-229 (1984) ble oppløst i 30 ml tørr acetonitril. 0,239 g N-metylmorfolln, 0,758 g 0-(lH-benzotriazol-l-yl)-N,N,N',N<*->tetrametyluroniumtetrafluorborat og 0,145 g N-hydroksybenzotriazol ble tilsatt. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur I 30 minutter. Så ble 1,353 g av forbindelse nr. 6 og 0,326 g N-metylmorfolin tilsatt. Etter 20 timer ble en mettet oppløsning av NaHgPC^ tilsatt. Det organiske oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum. Den organiske fasen ble ekstrahert med CHgClg, den organiske fasen ble tørket og avdampet. Resten ble renset ved kromatograf! på silikagel for å oppnå forbindelse nr. 8.
1H-NMR (CHCI3, 500 MHz, J(Hz): 1,09 (t-Bu, 9H, s); 1,10 (t-Bu, 9H, b); 1,62 (3 H7, d, J6_7-<0,>9); 1,89 (3 H7, d, J6_ 7-0,9); 3,14 (OMe, s); 5,13 (Hji, d, J1»_2.=3,8); 6,10 (H^, dd, J1*_ 2*— 6tl). MS (FD)(m/e): 1133 (M<+>). (h) 1,95 g av forbindelse nr. 8 ble oppløst i 15 ml tetrahydrofuran. Til denne oppløsningen ble 0,309 g eddiksyre og 4,7 ml tetrabutylammoniumfluoridoppløsning (IMI tetrahydrofuran) tilsatt. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 18 timer. 0,263 ml trietylamin ble tilsatt og oppløsningsmldlet ble samavdampet 3 ganger med toluen. Forbindelse nr. 9 ble isolert ved kromatografi på silikagel.
1H-NMR(CHC13, 250 MHz, J(Hz): 1,89 (3 H7, d); 1,96 (3 H7,
d); 3,53 (OMe, s); 5,40 (Hj., d); 5,98 (%., dd).
(i) 1,08 g av forbindelse nr. 9 ble oppløst i 20 ml metanol. 1,08 g 5# Pd/C ble tilsatt. Blandingen ble omrørt under en atmosfære av hydrogen i 24 timer ved romtemperatur. Katalysa-toren ble filtrert fra, vasket med metanol og CHCI3 og de kombinerte filtratene ble avdampet. Kromatograf! av resten på silikagel (eddiksyreester/metanol 9:1) ga forbindelse nr. 10.
1H-NMR (CD3OD 500 MHz, J(Hz): 1,87 (3 H7 , d, <J>6_7<=1,>0); 1,90 (3 H7, d, J6_7=1,0); 3,48 (OMe, s); 5,78 (Hx • , d, Jj^. 2.=4,0); 6,05 (Hi», dd, »_2»=3,1, ._2«=6,9 ).
(j ) 0,755 g av forbindelse nr. 10 ble oppløst i 10 ml tørr pyridln. TII denne blandingen ble 0,954 g p-dimetoksytritylklorid tilsatt i to porsjoner. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 48 timer. Pyridinet ble samavdampet med toluen under vakuum. Resten ble kromatografert på silikagel
(eddiksyreester, metanol + \ <f> trietylamin; 100:1 til 10:1)
for å oppnå forbindelse nr. 11.
1H-NMR (CHCI3, 500 MHz, J(Hz): 1,42 (3 H7, d); 1,91 (3 H7,
d); 3,51 (OMe, s); 5,24 (Hi», d, Ji>_2 .=3,0 ); 6,24 (%>, dd, <J>1<»_>2'=?3,0); 6,24 (Hi», dd, J1._2<»,> Jx > _2 r.-6 ,0 ). M.S. (CI.)
m/e: 839 M<+>.
(k) 0,361 g av forbindelse nr. 11 ble oppløst 1 12 ml CH2C12. 0,143 g 2-cyanoetyl-N,N,N',N'-tetraisopropyl-fosforamidit og 0,088 g N,N-dllsopropylammonlumtetrazolid ble tilsatt. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 20 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med CH2C12 og med NaHC03. Den organiske fasen ble vasket med mettet oppløsning av NaCl og tørket over Na2SC<4. Etter fjerning av oppløsningsmidlet ble resten kromatografert på silikagel (eddiksyreester, metanol + 19É N-metylmorfolin; 50:1 til 9:1) for å oppnå forbindelse nr.
12.
1H-NMR (CHCI3, 500 MHz, J(Hz): 1,47 (3 H7, m); 1,91 (3 H7, m); 3,40 (OMe, s); 3,46 (OMe, s); 3,80 (2 ArOMe, s); 5,24 (Hj», d, J1'_2»=6,0); 5,29 (Hi», d, <J>1<>_>2*-5>5). 31P-NMR (CHCI3, 101 MHz, S(ppm): 150,3, 151,2. Eksempel A2: Fremstilling av forbindelse nr. 26 (a) En oppløsning av 1,47 g av forbindelse nr. 13
fremstilt som beskrevet i Pudlo, J.S., Townsend, L.B., Tetrahedron Lett. 31:3101 (1990) i 15 ml CH2C12 ble tilsatt til en blanding av 2,23 g Dess-Martin reagens
i 35 ml CH2C12. Denne blandingen ble omrørt i 15 minutter ved 0°C i 2 timer ved romtemperatur. Den ble heilt i 100 ml kald, mettet NaHC03 med 12,5 g Na2S2C<3- 5H20. Så ble det organiske laget ekstrahert, vasket med NaHC03 og en mettet oppløsning
av NaCl, tørket over Na2S04, filtrert og avdampet. Resten ble filtrert over silikagel for å oppnå forbindelse nr. 14.
1H-NMR (CHC13, 500 MHz, J(Hz): 1,44 (3H, Me, s); 1,52 (3H, Me, s); 4,43 (H2, d); 6,11 (Hlf d, J1_2=4,6); 7,95 (2 H-Ar, dd, J=8,2, J<*>=l,5). M.S. (FD) (m/e): 292 (M<+>). (b) Til en oppløsning av 1,18 g av forbindelse nr. 14 i 40 ml CH2C12 ble det tilsatt 1,74 g (benyloksykarbonylmetylen}-trifenylfosforan. Denne blandingen ble omrørt over natten ved romtemperatur fulgt av fjerning av oppløsningsmidlet under vakuum. Resten ble kromatografert på silikagel (heksan/eddiksyreester 4:1) og forbindelse nr. 15 ble oppnådd.
1H-NMR (CHCI3, 500 MHz, J(Hz): 5,19 (2 H, s, CH2Ph); 5,23 (2 H, d, <J>AB-12,2, CH2Ph), 5,98 (Hx, d, J!_2=4,5); 6,01 (Hlt d, Ji.2-4,9); 6,07 (=CH, t, J=l,8); 6,28 (=CH, t, J=2,0). MS (Cl)(m/e): 442 (M+NH4)<+.>
(c) 0,5 g av forbindelse nr. 15 ble tilsatt til en suspensjon av Pd/C { 10%) (0,25 g) i 30 ml metanol under en atmosfære av
Hg. Etter 2 timers omrøring ble blandingen filtrert over Cellt og avdampet og forbindelse nr. 16 ble oppnådd.
1H-NMR (CHCI3, 500 MHz, J(Hz): 1,33 (3H, Me, s); 1,52 (3H, Me, s); 2,55 (CH-COOH, dd, J=4,5, J'=17,2); 5,88 { E±, d, Jx_ 2=4,0); 8,05 (2H-Ar, dd, J=8,2, J<*>=l,5). MS (CI) (m/e): 336
(M-).
(d) Tii en oppløsning av 1,0 g av forbindelse nr. 16 i 40 ml acetonitril ble det tilsatt 0,36 ml N-metylmorfolin ved romtemperatur fulgt av tilsetning av 0,203 g tørr hydroksy-benzotrlazol og 1,076 g 0-(lH-benzotrlazol-l-yl)-N,N,N<*>,N'-tetrametyluroniumtetrafluorborat. Etter 15 minutter ble en oppløsning av 1,42 g av aminet, syntetisert fra 5'-azido-5'-deoksytymidln via 3'-beskyttelse og 5'-azidoreduksjon ved hydrogenering og 0,49 ml N-metylmorfolln i 8 ml acetonitril tilsatt. Etter omrøring over natten ble vandig Na^PC^ tilsatt og acetonitril ble fjernet ved avdamping. Det vandige laget ble ekstrahert 3 ganger med CHCI3 og de sammenslåtte organiske ekstraktene ble vasket med mettet oppløsning av NaCl, tørket over Na2S04, filtrert og avdampet. Produktet ble kromatografert på silikagel (heksan/eddiksyreester 1:1 til 1:4) for å oppnå forbindelse nr. 17.
1H-NMR (CHCI3, 500 MHz, J(Hz): 1,09 (9H, s, t-Bu); 1,28 (3H, s, Me); 1,50 (3H, s, Me); 5,82 ( Elt d, <J>1_2<=>4,0); 6,00 (Hj., dd, J1>_2'-7,6); 6,49 (NHCO, m); 7,02 (H6, d, J=1,0). MS (Cl)
(m/e): 797 (M<+>).
(e) 0,5 g av forbindelse nr. 17 ble tilsatt ved 0'C til en oppløsning av 7,2 ml CF3COOH og 3,94 ml tiofenol under en tørr atmosfære av argon. Etter 30 minutter ble reaksjonen holdt ved romtemperatur og så kraftig omrørt i 6 timer. 30 ml CHCI3 og 30 ml av en mettet oppløsning av NaCl ble tilsatt samtidig. Denne blandingen ble sakte nøytralisert ved tilsetning av NaHC03. Det vandige laget ble vasket med en mettet oppløsning av NaCl, tørket, filtrert og avdampet. Produktet ble kromatografert på silikagel for å oppnå forbindelse nr. 18.
1H-NMR (CHCI3, 500 MHz, J(Hz): 1,12 (9H, s, t-Bu); 5,41 (%., d, J!._2'=l,6); 5,69 (Hj - , t, J1-_2.-7,0); 6,98 (H6, d, J-1,0). MS (CI) (ra/e): 850 (M+H)<+>. (f) Til en oppløsning av 0,18 g av forbindelse nr. 18 i 1 ml pyridin ble det tilsatt 0,2 ml eddiksyreanhydrid. Etter 18 timers omrøring ved romtemperatur ble oppløsningsmidlet samavdampet med toluen under vakuum. Resten ble fortynnet med CHCI3, vasket med NaHgPC^ og en mettet oppløsning av NaCl, tørket over NagSC^, filtrert og avdampet. Produktet ble kromatografert på silikagel (toluen/eddiksyrester 1:1) for å oppnå forbindelse nr. 19.
1H-NMR (CH.Clg, 500 MHz, J(Hz): 1,08 (9H, s, t-Bu); 1,92 (3H, d, J=l,6, Me); 5,43 ( Elt s); 5,92 (%. , dd, J1 • _2a »=6,0, J^. 2d1-8,2); 6,51 (1H, m, NHCO). MS (FD) (m/e): 892 (M<+>). (g) En oppløsning av 0,12 g av forbindelse nr. 19 med 0,095 g NaIC-4 1 2,8 ml H20/dloksan (1:1) ble omrørt ved romtemperatur i 72 timer. Dioksanet ble avdampet og resten ble fortynnet med CHCI3, vasket med en mettet oppløsning av NaCl, tørket, filtrert og avdampet. Produktet ble kromatografert på silikagel (toluen/eddiksyreester 1:2 til 1:4) for å oppnå forbindelse nr. 20.
1H-NMR (CHCI3, 500 MHz, J(Ez): 1,08 (9H, s, t-Bu); 1,90 (3H, d, J=l,6, Me); 4,65 (Hi», s); 5,78 { Elf , dd, Ji'_2a»=6,5, Jx»_2b»=7,8); 6,69 (1H, m, NHCO). MS (FD) (m/e): 906 (M-H)~. (h) Til en suspensjon av 0,011 g tymin 1 0,5 ml (CH2C1)2 ble det tilsatt 0,025 ml CH3C[NS1(CH3)3]<0>Si(CH3)3 (0,17 mmol) og denne blandingen ble holdt ved 90°C. Etter 1 time, ble ytterligere 2,2 ekvivalenter CH3C[NSi(CH3)3]0Si(CH3)3 tilsatt. Etter 3 timer ble oppløsningen avkjølt til romtemperatur og en oppløsning av 0,07 g forbindelse nr. 20 i 0,5 ml (CH2C1)2 med 0,014 ml trimetylsilyltrifluormetansulfonat ble tilsatt. Etter 20 minutter ble blandingen avkjølt til 0<*>C og 0,012 ml trietylamln ble tilsatt. Etter tilsetnin-gen av CH2C12 ble blandingen vasket med NaHC03 og en mettet oppløsning av NaCl. Etter tørking og filtrering ble opp-løsningsmldlet avdampet. Produktet ble kromatografert på silikagel (toluen/eddiksyreester 1:2 til 1:3) for å oppnå forbindelse nr. 21.
1H-NMR(CHC13, 250 MHz, J(Hz): 1,08 (9H, s, t-Bu); 2,1 (3H, s, Me); 5,43 (%., dd); 5,80 (H-^ , s); 5,92 (1H, t, NHCO); 9,32 Og 9,56 (1H, br. s, NH). (1) 0,680 g av forbindelsen nr. 21 (0,748-10~<3> mol) ble tilsatt til en oppløsning av 0,084 g natrlummetanolat (1,56*10"<3> mol) i 5 ml metanol. Reaksjonen var ferdig etter 3 timer (tynnsjiktskromatografi: etylacetat:metanol 9:1). Oppløsningen ble nøytralisert med Amberlyst 15 (H<+>). Harpiksen ble filtrert av, oppløsningsmidlet avdampet under vkauum. Resten ble renset ved flashkromatografi på silikagel (etylacetat:metanol; gradient 100:1 10:1) for å oppnå forbindelse nr. 22 (0,44; 0,584*IO"<3> mol: utbytte: 78%).
1H-NMR (CDCI3, 250 MHz, J(Hz): 1,06 (9H, tBu, sj, 1,82 (3H, Me, d, J=1,5J; 1,87 (3H, Me, d, J=l,5); 5,67 (Hlt s); 5,89 (Hlf dd); 6,99 (H6, q); 7,95 (H6, q). (j) 0,245 g dimetoksytritylklorld (0,72'10~<3> mol) ble tilsatt til en oppløsning av 0,55 g av forbindelse nr. 22 (0,72"IO-<3 >mol) i 10 ml pyridin. Etter 12 timer ved romtemperatur ble fem porsjoner på 0,074 g dimetoksytritylklorid (0,3 ekvivalenter) tilsatt hver 4. time. Etter 40 timer med omrøring ved romtemperatur ble blandingen fortynnet med CHgClg» vasket med NaHCOgaq., med en mettet oppløsning av natriumklorid i vann. Oppløsningen ble tørket over NagSOg, så avdampet under vakuum. Det gjenværende pyridin ble samavdampet med toluen under vakuum. Den hvite resten ble renset ved flashkromatografi på silikagel (etylacetat:metanol; gradient 100:1 25:1, med 1% trietylamin) for å oppnå forbindelse nr. 23 (0,581 g; 5,46-10"<3> mol; utbytte: 76SÉ).
1H-NMR (CDCI3 , 500 MHz, J(Hz): 1,06 (9H, s, tBu); 1,82 (3H, d, Me); 1,87 (3H, d); 3,70 (6H, s, OMe); 5,67 (Hlt dd); 6,99 (H6, q); 7,97 (H6, q). MS (FAB): m/e: 1098 (M<+> + Cl"), 1063
(M<+>).
(k) 0,564 g av forbindelse nr. 23 (0,529'10~<3> mol) ble oppløst i 10 ml tørr pyridin. 15 ml eddiksyreanhydrid ble tilsatt og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 20 timer. Oppløsningen ble fortynnet med CHgClg og vasket med NaHC03 aq. Etter tørking med Na2S04, ble oppløsningsmidlene avdampet under vakuum. Det gjenværende pyridin ble samavdampet under vakuum med toluen. Resten ble kromatografert på silikagel (heksan:etylacetat; gradient 4:1 1:3 + Vt> trietylamin) for å oppnå forbindelse nr. 24 (0,283 g; 0,306-10~<3 >mol).
1H-NMR (CDCI3, 500 MHz, J(Hz): 1,08 (9H, s); 1,45 (3H7, d, J6-7=1.°J: 1-88 (3H7h, d, J6*_7« = l,0); 2,02 (3H OAc, s); 2,11 (Hg, dd, Jg_g»-15,0, Jg_3=6,7); 2,18 (H2*, ddd, J2_2*=14,0, J2«_3**=2,7, J2*_1h=6,4 ); 2,21 (Hg., dd, Jg._3=8,4); 2,39 (H2»«, ddd, J2.*_3*=6,3, J2 • «_1«=7,8); 3,04-3,16 (3H, m); 3,25 (H5, dd, J4_5=3,3, J5_.=10,8); 3,46 (H5», dd, J5»_ 4=2,2); 3,79 (6H OMe, s); 3,96-4,02 (H4, H4*, m); 4,30 (H3h, ddd); 5,57 (H2, dd, J2_.=3,9, <J>2_3-6,6); 5,83 (Hlw, dd); 5,96 (Hlp d); 6,55 (H10, dd, Jio-5"=J10-5'*~5»°)! 6»83 (4H11» Jll-12=8,0); 6,96 (H6„, q); 7,60-7,64 (4H12, m); 8,26 (NH, m); 8,62 (NH, m).
MS (FAB): m/e: 1140 (M<+> + Cl"); 1105 (M<+>).
(1) 0,219 g av forbindelse nr. 24 (0,197'10~<3> mol) ble oppløst i 8 ml tørr tetrahydrofuran. 0,218 ml av en 1 M oppløsning av tetrabutylammoniumfluorid (0,217'IO-<3> mol; 1,1 ekv. ) i tetrahydrofuran ble tilsatt til denne oppløsningen. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer, så fortynnet med CH2C12. Denne oppløsningen ble vasket 3 ganger med NaH2P04 aq., med en mettet oppløsning av natriumklorid i vann. Den organiske fasen ble tørket over Na2S04. Etter avdamping av oppløsningsmidlet under redusert trykk ble resten renset ved flashkromatografi på silikagel (etylacetat:etanol 4:1 + 1% trietylamin) for å oppnå forbindelse nr. 25 (0,154 g; 0,175-IO-<3> mol: utbytte: 89*).
1H-NMR (CDC13, 500 MHz, j(Hz): 1,46 (3H7, d); 1,90 (3H7, d);
2,14 (3H OAc, s); 3,79 (6H OMe, s); 5,63 (NH, m); 5,81 (%, dd); 5,88 (Hlp b); 7,08 (H6, q); 7,59 (Hg, q)
MS (FAB): m/e: 866 (M<+->H<+>), 902 (M<+> + Cl").
(m) 0,144 g av forbindelse nr. 15 (0,166*10~<3> mol) ble oppløst 1 10 ml tørr CHgClg. 0,068 g N.N-diisopropylammonium-tetrazolld (0,398-10-<3> mol) og 0,11 g 2-cyanoetyl-N,N,N',N'-tetralsopropylfosforamldlt (0,364*IO"<3> mol) ble tilsatt til denne oppløsningen. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 20 timer. En mettet oppløsning av NaHC03 aq. ble tilsatt. Den organiske fasen ble separert og vasket med NaHCOg aq., med en mettet oppløsning av natriumklorid i vann, tørket over Na2S04. Etter avdamping av oppløsningsmidlet under redusert trykk ble harpiksen renset ved flashkromatografi på silikagel
(etylacetat:metanol; gradient 100:1 20:1 + 1% trietylamin)
for å oppnå forbindelse nr. 26 (0,15 g; 0,139*10-<3> mol; utbytte: 84%).
1H-NMR (CDC13, 500 MHz, J(Hz): 1,46 (3H7, d, Jé,_7=1,0); 1,47 (3H7, d, J6_7=1,0); 1,92 (6H7, d), 2,11 (OAc, s); 2,12 (OAc, s); 3,79 (6H OMe, s); 5,60 (H2-, dd); 5,74 (Hj., dd); 5,89 ( E1* t dd), 5,95 (H-L-, d, J1,_ 2— 2,8); 5,96 (%., d, J2._ 2»=2,8).
<31>P NMR (CDC13, 101 MHz, delta (ppm)): 149,7 og 150,2.
MS (FAB): m/e: 1067 (M<+>), 1066 (M<+->H<+>).
Eksempel A3: Fremstilling av forbindelse nr. 43
(a) Til en omrøring oppløsning av 5,05 g av forbindelse nr. 27 fremstilt ifølge Codington, J.F., Doerr, I.L., Fox, J.F., J. Org. Chem. 29:558 (1964)
i 105 ml CH2C12 ble 4,26 ml pyridin, 2,94 ml trietylamin, 1,29 g dimetylaminopyridin og så 2,86 ml o-fenylklortioformat tilsatt. Etter 24 timers omrøring ble alle reagensene tilsatt i de samme mengdene som ved starten. Etter 56 timer ble produktet opparbeidet som beskrevet i eksempel A2(g) inkludert kromatograf! av råproduktet for å oppnå forbindelse nr. 28.
1H-NMR (CHCI3, 500 MHz, J(Hz): 1,92 (3H, d, J = l,3, Me); 4,66 (1H, t, <J>4<»_>5a<>=J>4'_5b'<=>6,9, H4.); 5,49 (1H, d, <J>2'-i'<=5.>8, H2.); 5,96 (1H, br. s, H3.); 6,25 (1H, d, J1'_2*<=5>.8, Hx.). MS (FD) (m/e): 615 (M<+>). (b) Til en omrørt oppløsning av 4,36 g av forbindelse nr. 28 i 70,9 ml benzen ble 0,58 g azobisisobutyronitril tilsatt, fulgt av tilsetning av 10,7 ml tributylallylstannan. Reaksjonen ble holdt ved 80"C i 18 timer. Ytterligere 0,29 g azobisisobutyronitril ble tilsatt. Etter 22 timer ble blandingen konsentrert og produktet ble kromatografert på silikagel (heksan/eddiksyreester: 2:1 til ren eddiksyreester, så eddiksyreester/metanol 10:1) for å oppnå forbindelse nr. 29.
1H-NMR (CHCI3, 250 MHz, J(Hz): 1,00 (9H, s, t-Bu); 1,91 (3H,
d, J-1,3, Me); 5,06 (1H, dd, H2»); 5,75 (1H, m, CH=C); 6,00 (1H, d, Ji»_2»=5,5, Hx » ) • (c) 0,5 g av forbindelse nr. 29 ble fortynnet med 6,4 ml frisk destillert tetrahydrofuran og 3,2 ml vann ble tilsatt. Etter avkjøling til 0<*>C ble 0,96 ml 2N NaOH tilsatt og oppløsningen ble omrørt i 1 time og 4 timer ved romtemperatur. Etter nøytralisering med IN HC1 ble ekstrahering med CHCI3 utført 4 ganger. Det organiske laget ble vasket med en mettet oppløsning av NaCl, tørket og avdampet. Resten ble kromatografert på silikagel for å gi forbindelse nr. 30.
1H-NMR (CHCI3, 500 MHz, J(Hz): 1,12 (9H, s, t-Bu); 1,71 (3H, d, J-1,4, Me); 4,16 (1H, m, H2.); 6,00 (1H, d, J1-_2.=4,0, Hi-)- MS (FD) (m/e): 521 (M<+>). (d) Til en omrørt oppløsning av 0,44 g av forbindelse nr. 30 i 4 ml acetonitril ble 0,15 ml 1,5-diazabicyklo[5.4.0]-undec-5-en og 0,13 ml benzyloksymetylklorid tilsatt. Etter 18 timer ved romtemperatur ble en vandig oppløsning av NaH2PC<4 tilsatt. Det organiske oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum og den vandige fasen ble ekstrahert med CHC13. Det organiske laget ble vasket med et mettet oppløsning av NaCl, tørket og konsentrert. Produktet ble kromatografert på silikagel for å gi forbindelse nr. 31.
1H-NMR (CHCI3, 500 MHz, J(Hz)): 1,12 (9H, s, t-Bu); 1,74 (3H, d, J=l,6, Me); 4,19 (1H, dt, J2._0H=8,5, »_2»=J2*-3'"3»8» H2.); 5,51 (2H, AB, J=13,2, NCH20); 6,03 (1H, d, J1>_2<>>-3>8, %.). MS (FD) (m/e): 641 (M<+>). (e) En oppløsning av 2,23 g trifenylfosfln i 1,73 ml diisopropylazodikarboksylat 1 30 ml tørr toluen ble omrørt 1 1 time ved 0°C under argon. Oppløsningen ble oppvarmet til romtemperatur og 2,18 g av forbindelse nr. 31 i 15 ml toluen ble tilsatt. Etter 10 minutter ble 0,96 g kloreddlksyre tilsatt. Etter omrøring i 56 timer ble oppløsnlngsmidlet fjernet og resten ble kromatografert på silikagel for å gi forbindelse nr. 32.
1H-NMR(CHC13, 500 MHz, J(Hz): 1,11 (9H, s, t-Bu); 1,57 (3H, s, Me); 5,55 (1H, dd, J=6,2, J=2,l, H2»); 5,92 (1H, d, Jx,_ 2»-2,l, Hi»)- MS (FD) (m/e): 717 (M<+>). (f) Til en oppløsning av 0,24 g av forbindelse nr. 32 i 10 ml metanol ble 10 ml av en oppløsning av natriumetanolat (0,009 g Na i 1 ml metanol) tilsatt ved romtemperatur under argon. Etter 30 minutter ble blandingen nøytralisert med sakte tilsetning av H+<->ionebytteharpiks. Denne blandingen ble filtrert og avdampet for å gi forbindelse nr. 33.
1H-NMR (CHC13, 500 MHz, J(Hz): 1,10 (9H, s, t-Bu); 1,57 (3H, s, Me); 4,28 (2H, dd, J2»_3.=5,3, J1._2.-1,0, H2.); 5,49 (2H, s, NCH20); 5,65 (1H, d, J1»_2»-1,0, .). MS (FD) (m/e): 641
(M<+>).
(g) En suspensjon av 0,69 g Ag20 og 0,19 g av forbindelse nr. 33 i 5 ml CH3I ble holdt ved 45'C i 20 timer. Overskudd av CH3I ble destillert av resten ble fortynnet med CHC13, filtrert og konsentrert. Kromatografi på silikagel ga forbindelse nr. 34.
1H-NMR (CHCI3, 500 MHz, J(Hz): 1,10 (9H, s, t-Bu); 1,46 (3H, d, J=l,6, Me); 3,60 (3H, s, MeO); 4,72 (2H, s, PhCHgO); 5,06 (2H, m, C=CH2); 5,87 (1H, d, J1>_ 2' =1, 0, %.). (h) Til en omrørt suspensjon av 0,084 g NaH i 6 ml tetrahydrofuran ble det tilsatt 0,83 g av forbindelse nr. 33 ved 0<*>C. Etter 1 time ble 0,12 ml CH3I tilsatt og reaksjonen ble holdt ved romtemperatur. Etter 18 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble fortynnet med CHCI3, vasket med Na2S203, <N>aH2P04 og en mettet oppløsning av NaCl, tørket over Na2S04 og avdampet. Resten ble kromatografert på silikagel for å oppnå forbindelse nr. 34. (i) Til en omrørt oppløsning av 0,83 g av forbindelse nr. 34 i aceton/H20 (4:1) ble 0,188 g 4-metylmorfolin-4-oksyd monohydrat og så 0,032 g 0s04 tilsatt ved romtemperatur. Etter 17 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum, resten ble fortynnet med CHCI3, vasket med en mettet oppløsning av NaCl, tørket, filtrert og avdampet. Resten ble kromatografert på silikagel for å oppnå forbindelse nr. 35. (j) En oppløsning av 0,735 g av forbindelse nr. 35 i 10 ml metanol med 0,735 g Pd/C ble omrørt over natten under en atmosfære av hydrogen ved romtemperatur. Oppløsningen ble filtrert og avdampet under vakuum. Resten ble kromatografert på silikagel for å gi forbindelse 36. (k) En oppløsning av 0,49 g av forbindelse nr. 36 og 0,203 g NaI04 i 5 ml av en blanding av dioksan/HgO (3:1) ble omrørt i 18 timer ved romtemperatur. Oppløsningsmidlet ble fjernet og resten ble fortynnet med CHCI3, vasket med en mettet oppløsning av NaCl og tørket. Etter avdamping ga kromatografi på silikagel forbindelse nr. 37. (1) Til en omrørt oppløsning av 0,37 g av forbindelse nr. 37 i 2,3 ml t-butanol ble 0,374 g NaC102, 0,29 ml 2-metyl-2-buten og 0,381 g NaHgPC^ i 1,4 ml vann tilsatt ved romtemperatur. Etter 30 minutter ble oppløsningen avdampet under vakuum. Resten ble tatt opp i mettet natriumkloridoppløsning og ekstrahert 3 ganger med CHCI3. Den organiske fasen ble tørket og avdampet for å gi forbindelse nr. 38. (m) Til en oppløsning av 0,33 g av forbindelse nr. 38 i 3 ml acetonitril ble 0,073 ml N-metylmorfolin, 0,041 g hydroksybenzotriazol og så 0,22 g (1-H-benzotriazol-l-yl) N,N,N',N'-tetrametyluroniumtetrafluorborat tilsatt ved romtemperatur. Etter 30 minutter ble en oppløsning av 0,29 g av forbindelse nr. 39 syntetisert fra 5'-azldo-5<*->deoksytymidin via 3'-beskyttelse og 5'-azidoreduksjon ved hydrogenering,
tilsatt med 1,5 ekvivalenter N-metylmorfolin i 2 ml acetonitril. Etter 17 timer ble vandig NaHgPC^ tilsatt. Acetonitril ble fjernet under vakuum. Den vandige fasen ble ekstrahert med CHClg, den organiske fasen vasket med mettet oppløsning av NaCl, tørket og avdampet. Kromatograf! på silikagel ga forbindelse nr. 40. (n) Til en oppløsning av 0,42 g av forbindelse 40 i 4 ml tetrahydrofuran ble 0,06 ml eddiksyre og 0,91 ml av en IM oppløsning av tetrabutylammoniumfluorid i tetrahydrofuran tilsatt ved romtemperatur. Etter 16 timer ble trietylamin tilsatt og blandingen ble samavdampet med toluen. Resten ble kromatografert på silikagel for å gi forbindelse nr. 41.
(o) 0,146 g dimetoksytritylklorid (0,424, IO-<3> mol) ble tilsatt til en omrørt oppløsning av 0,19 g av forbindelse nr.
41 (0,353, 10~<3> mol) i 6 ml tørr pyridin. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur. Fire porsjoner hver på 0,036 g dimetoksytritylklorid (0,106-10-<3> mol) ble tilsatt hver 6. time. Oppløsningen ble fortynnet med CHgClgi vasket med NaHC03 aq., med en mettet oppløsning av natriumklorld 1 vann, tørket over Na2S04. Oppløsningsmidlet ble avdampet under vakuum. Resten ble renset ved flashkromatografi på silikagel
(etylacetat-metanol; gradient 100:1 20:1 + 1% trietylamin)
for å oppnå forbindelsen r. 42 (0,245 g, 0,289'10~<3> mol; utbytte: 82%).
1H-NMR (CDC13, 400 MHz): 1,48 (3H7, d, J7_6=<1,>0); 1,89 (3H7, d, J6_7=l,l); 3,66 (OMe, s); 3,79 (OMe, s); 3,80 (OMe, s); 5,86 (%, s); 5,95 (Hlp dd, <3>J1_2=7,0, <3>J1_2=7,5); 7,15 (H6, q)<.>
MS (FAB): m/e: 874 (M<+> + Cl"), 838 (M<+> - H<+>).
(p) 0,23 g av forbindelse nr. 42 (0,273*10~<3> mol) ble oppløst 1 10 ml tørr CH2C12. 0,112 g N,N-diisopropylammoniumtetrazo-lid (0,657*10-<3> mol) og 0,182 g 2-cyanoetyl-N,N,N',N'-tetraisopropylfosforamldlt (0,602*10~<3> mol) ble tilsatt til denne oppløsningen. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 24 timer. En mettet oppløsning av NaHC03 aq. ble tilsatt. Den organiske fasen ble separert og vasket med NaHC03 aq., med en mettet oppløsning av natriumklorid i vann, tørket over Na2S04« Etter avdamping av oppløsningsmiddel under vakuum ble resten renset ved flashkromatografi på silikagel (etylacetat-:metanol; gradient 100:1 97:3, + 1% trietylamin) for å oppnå forbindelse nr. 43 (0,21 g; 0,202*10~<3> mol; utbytte 74%).
<31>P NME (CDC13, 101 MHz, delta (ppm)): 148,7 og 149,6.
Eksempel A4: Fremstilling av forbindelse nr. 51
(a) 26,84 g av forbindelse nr. 44 (0,0501 mol) ble oppløst i 80 ml tørr pyridin. Til denne oppløsningen ble det tilsatt 18,44 g 4-klorfenylfosfordiklorat (0,0751 mol) og 10,47 g 1,2,4-triazol (0,1503 mol) ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet ved 50°C 1 24 timer, så fortynnet med CHgClg og vasket med NaH2P04 aq., med en mettet oppløsning av natriumklorid i vann. Den organiske fasen ble tørket over Na2S04. Resten ble overført videre uten rensing. Resten ble oppløst i 100 ml dioksan (100 ml). Til denne oppløsningen ble det tilsatt 50 ml konsentrert ammoniakk (25% i vann). Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 24 timer, så ekstrahert med CHgClg. Vannfasen ble mettet med NaCl og ekstrahert med CHgClg. De organiske fasene ble tørket over Na2S04. Oppløsningsmidlet ble avdampet under vakuum og resten ble renset ved flashkromatografi på silikagel (metanolgradi-ent 50:1 9:1) for å oppnå forbindelse nr. 45 (24,61 g; 0,0456 mol: utbytte - 91%). 1H-NMR (CDC13, 500 MHz, J(Hz): 1,10 (9H, tBu, s); 1,83 (3H7, d, J6_7=l,0), 3,24 (H2, dd, J2_3=5,0, J2_i=l,l); 3,45 (3H OMe, s); 3,46 (hg, dd, Jg_5-=13,5, J5_4=<3,>0); 3,80 (Hg., dd, J5._4=2,8); 3,95 (H3, dd, J3_4=8,8); 4,20 (H4, ddd); 5,91 (Hlt d); 7,36 (H6, q). MS (FD): m/e: 535 (M<+>). (b) 0,251 g av forbindelse nr. 45 (0,469*10~<3> mol) ble oppløst 1 5 ml tørr pyridin. 0,136 g N-metylpyrrolidon dimetylacetal (0,938'IO-<3> mol) ble tilsatt. Denne blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 16 timer. Pyridin ble avdampet tre ganger med toluen og vakuum. Resten ble renset ved flashkromatografi på silikagel (etylacetat:metanol; gradient 20:1 10:1) for å oppnå forbindelse nr. 46 (0,276 g; 0,445'10_ <3> mol; utbytte: 95%).
1H-NMR (CDC13, 500 MHz, J(Hz): 1,10 (9H, tBu, s); 1,88 (3H7, d, Jé,-7=1 .0), 2,04 (2Hg, m); 3,06 (3H NMe, s); 3,13 (H10, m); 3,17 (H10», m); 3,30 (H2, dd, <J>2_3<=>5,l; <J>1_2<=>1,0); 3,43 (Hg, dd, Jg_4-3,5); 3,43-3,47 (2H8, m); 3,45 (3H, OMe, s); 3,75 (Hg», dd, J5_g.=13,4, Jg-_4<=2,>9); 4,02 (H3, dd, J3_4=8,6); 4,20 (H4, ddd); 5,95 {Hlf d); 7,30 (H6, q). (c) 4 g av forbindelse nr. 46 (6,49'10~<3> mol) ble oppløst i 60 ml metanol. 1,466 g SnCl2'2 H20 (6,49*10~<3> mol) ble tilsatt til denne oppløsningen tre ganger: ved_ 0, 60 og 90 minutter. Etter 2 timers kraftig omrøring ved romtemperatur ble en mettet oppløsning av NaHCOg aq. tilsatt. pH til oppløsningen ble bragt til pH-9. Metanolen ble avdampet under vakuum. Vannfasen ble ekstrahert med CH2C12. Den organiske fasen ble vasket med en mettet oppløsning av natriumklorid i vann og tørket over Na2SP04. Råproduktet, forbindelse nr. 47, ble benyttet uten rensing i neste trinn (3,50 g; 5,9'IO-<3 >mol; utbytte: 91%).
1H-NMR (CDC13,250 MHz): 1,10 (9H, tBu, s); 1,86 (3E7, d, J6_ 7=1,0); 3,05 (3H NMe, s); 3,48 (3H OMe, s); 5,91 (Hlt d, Jx_ 2=1,3).
(d) 1,104 g forbindelse nr. 48 (1,588'10-<3> mol)
ble oppløst i 20 ml acetonitril (tørr). 0,176 g trietylamin (1,74*10-<3> mol), 0,561 g 0-(lH-benzotriazol-l-yl)-N,N,N',N•-tetrametyluronium tetrafluorborat (1,74*10~<3> mol) og 0,107 g N-hydroksybenzotriazol (0,79"10~<3> mol) ble tilsatt til denne oppløsningen. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time. 0,935 g av forbindelse 47 (1,588-10~<3> mol) ble tilsatt fulgt av 0,241 g trietylamin (2,38*IO-<3> mol). Etter 12 timer
ved romtemperatur ble en mettet oppløsning av NaH<g>POfl Innført 1 reaksjonsflasken. Oppløsningsmidlet ble avdampet under
vakuum og vannfasen ekstrahert med CHgClg. Den organiske fasen ble tørket over NagSO^ Etter avdamping av oppløsnings-middel ble resten renset ved flashkromatografi på silikagel (etylacetat:metanol: gradient 100:1 10:1) for å oppnå forbindelse nr. 49 (1,407 g; 1,106"10~<3> mol: utbytte:70%).
1H-NMR (CDC13/ 500 MHz): 1.10 (9H, tBu, s); 1,30 (27H tBu, s); 1,35 (3H7, d, J6_7=1,0); 1,96 (3H7, d, J6_7-<1,>0); 3,05 (3H NMe, s); 3,08 (3H OMe, s); 5,18 ( Elt d, j^g-5,9), 6,10 (Hlf dd, J1_g=3,l, J1_2«-7,0).
MS (FAB): m/e 1265 (M<+>).
(e) 0,470 g av forbindelse nr. 49 (0.371-10-<3> mol) ble oppløst i 20 ml tørr tetrahydrofuran. 0,107 g tetrabutylammoniumfluorid (0,408 ml av en IM oppløsning i tetrahydrofu
ran) ble tilsatt til denne oppløsningen. Etter 2 timer ved romtemperatur ble oppløsningsmidlet dampet av under vakuum. Resten ble flashkromatografert på silikagel (etylacetatmeta-nol : gradient 100.1 10:1) for å oppnå forbindelse nr. 50 (0,81 g; 0,304'IO-<3> mol; utbytte: 82%).
1H-NMR (CDC1 / 500 MHz» J(Hz): 1,30 (27H tBu, s); 1,36 (3H7, a, i»98 (3H7> d- J6-7-1'0); 2-07 (2H9- n); 2>23 (1H2, ddd, J2_2»=16,2, <J>2-i<*=>7,0, J2_3=9,2); 2,31-2,44 (3H, m); 3,07 (3H NMe, s); 3,18 (H5, ddd, J5_5»=14,0, <J>5_10-2,2, J5_4=3,0); 3,25 (H10<>> ddd); 3,31 (H5, dd, <J>5_4<=>3,5, J5_ 5.-10,9); 3,46-3,51 (2Hg, m); 3,47 (3H OMe, s); 3,51 (H5, dd, J5_4=2,3); 3,92 (H5, ddd, J5_4<=>2,6, J5_10<=>8,0); 3,95 (H4, ddd, J3_4-8,3); 4,16 (H4, ddd, J3_4=3,6); 4,24 (H3, ddd); 4,71 (H2, dd, J2_3=5,7); 5,15 (Hx, d, Ji.^5,5); 6,11 (Hlf dd, J1_2=3,l); 7,08 (H6, q); 7,75 (H6, q).
MS (FAB): m/e 1027 (M<+>).
(f) 0,24 g av forbindelse nr. 50 (0,233*10-<3> mol) ble oppløst 1 10 ml tørr CH2C12. 0,096 g av N,N-dlisopropylammonium-tetrazolld (0.56-10-<3> mol) og 0,155 g 2-cyanoetyl-N,N,N',N'-tetraisopropylfosforamidlt (0,513*10-<3> mol) ble tilsatt til denne oppløsningen. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 24 timer. En mettet oppløsning av NaHC03 aq. ble tilsatt. Den organiske fasen ble separert og vasket med NaHC03 aq., med en mettet oppløsning av natriumklorid i vann, tørket over Na2S04. Etter avdamping av oppløsningsmidlet under vakuum ble resten renset ved flashkromatografi på silikagel (etylacetat-:metanol; gradient 100:1 25:1) for å oppnå forbindelse nr. 51 (0,225 g; 0,184-10-<3> mol; utbytte: 79%).
<31>P NMR (CDC13, 101 MHz, delta (ppro)): 150,7 og 151,3.
Eksempel A5: Fremstilling av forbindelse nr. 71
(a) En oppløsning av 47,5 mg av forbindelse nr. 52 (0,182 mol ) i 70 ml tetrahydrofuran ble tilsatt til en suspensjon av NaH (8,76 g, 55%, 0,201 mol, vasket med heksan) i 110 ml tetrahydrofuran ved 0"C. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 1 time ved 0°C og 0,5 time ved 25°C. 46,7 g benzylbromid (0,273 mol) og 3,36 g tetrabutylammoniumjodid (9,1 mmol) ble tilsatt til reaksjonshlandingen og omrøringen fortsatte i 1,0 time ved 25CC. Reaksjonsblandingen ble heilt i en mettet, vandig oppløsning av NH4CI og ekstrahert med etylacetat (3x). De sammenslåtte organiske lagene ble vasket med mettet natriumklorid 1 vann, tørket (NagSC^), konsentrert og renset ved flashkromatografi (silika, 20% etylacetat i heksan) for å gi forbindelse nr. 53 (55,0 g, 86%).
Rf = 0,30 (silika, 30% etylacetat i heksan).
1H-NMR (CDC13, 500 MHz): d = 7,45-7,30 (m, 5H, Harom); 5,77 (d, «J=4Hz, 1H, H-C(l')); 4,79, 4,60 (2d, J-12Hz, 2H, Hbenzyl); 4,59 (dd, delvis dekket, J=4,4Hz, 1H, H-C(2<*>));
4,38 (ddd, J=7,7,3 Hz, 1H, H-C(5')); 4,15 (dd, J-9,3Hz, 1H, H-C(4')); 4,00 (m, 2H, H-C(6')); 3,90 (dd, J=9, 4Hz, 1H, H-C(3')); 1,60, 1,40, 1,38, 1,37 (4s, 12H, CH3)..
(b) 55,0 g av forbindelse nr. 53 (0,157 mol) ble oppløst i AcOH/H20 (9/1 , 1105 ml) og omrørt 1 2,0 timer ved 40* C. Reaksjonsblandingen ble konsentrert, samavdampet med toluen (3x) og renset ved flashkromatograf1 (silika, 65% etylacetat i heksan) for å gi diolforblndelse nr. 54 (29,0 g, 60%).
Rf = 0,29 (silika, 80% etylacetat i heksan)
1H-NMR (CDC13, 500 MHz): d = 7,28 (m, 5H, Harom); 6,78 (d, J=4Hz, 1H, H-C(l')); 4,80, 4,56 (2d, J=12Hz, 2H, Hbenzyl); 4,62 (dd, J=4,4Hz, 1H, H-C(2')); 4,23 (dd, J=9,4Hz, 1H. H-C(4')); 4,01 (m, 1H, H-C(5')); 3,94 (dd, J=9,4Hz, 1H, H-C(3')); 3,70 (m, 2H, H-C(6')); 2,57, 2,49 (2bs, 2H, 0H); 1,60, 1,37 (2s, 6H, CH3).
MS (FD): 310 (M).
(c) En oppløsning av 29,0 g av forbindelse nr. 54 (93,5 mmol) i 250 ml pyridin ble behandlet med 25,0 g toluen-4-sulfonyl-klorid (130,9 mmol) og 1,1 g dimetylaminopyridin (9,4 mmol) ved 0°C. Reaksjonsblandlngen ble omrørt i 4 timer ved 25°C, bråstoppet med 11 ml metanol, omrørt i ytterligere 0,3 timer, konsentrert, samavdampet med toluen (2x) og renset ved flashkromatografi for å gi forbindelse nr. 55 (36,8 g, 85%).
Rf = 0,50 (silika, 25% etylacetat i heksan).
1H-NMR (CDC13, 500 MHz): d -7,7 (m, 2H, Harom): 7,39-7,29 (m, 2H, Harom); 5,71 (d, J-4Hz, 1H, H-C(l')); 4,55 (dd, 1H, H-C(2')); 4,72, 4,52 (2d, AB, J=12Hz, 2H, Hbenzyl); 4,13 (m, 2H, H-C(5',6')); 4,05 (dd, J-ll,9Hz, 1H, H-C(6')); 4,00 (dd, J=9,3Hz, 1H, OH); 1,57, 135 (2s, 6H, CH3).
MS (FD): 464 (M).
(d) En oppløsning av 11,7 g av forbindelse nr. 55 (25,3 mmol) i 83 ml dlmetoksyetan (avgasset med argon) ble behandlet med 11,4 g Nal (76,0 mmol), 11,1 g trityltinnhydrid (38,0 mmol) og 410 g azoisobutyronitril (0,25 mmol) og omrørt i 1,0 time ved 80°C. Reaksjonsblandingen ble adsorbert på silikagel, konsentrert og renset ved flashkromatografi (silika, 30% etylacetat i heksan) for å gi forbindelse nr. 56 (7,5 g, 73%).
Rf = 0,13 (silika, 35% etylacetat i heksan).
1H-NMR (CDCl3f 400 MHz): d - 7,35 (m, 5H, Harom); 5,74 (d, J-4Hz, 1H, H-C(l')); 4,76, 4,57 (2d, J=12Hz, 2H, Hbenzyl); 4,58 (m, 1H, H-C(2')); 4,08-3,80 (m, 2H, H-C( 4 ' , 5 * )); 3,88
(dd, J=8,4Hz, 1H, H-C(3')); 2,14 (d, J=2Hz, 1H, OH); 1,60, 1,37 (2s, 6H, CH3); 1,23 (d, J=6Hz, 3H, H-C(6')).
MS (Cl): 312 (M+NH^<4>"); 254 (M-C3H60+NH4+).
(e) En oppløsning av 12,5 g av forbindelse nr. 56 (42,6 mmol) i 125 ml pyridin ved 0<*>C ble behandlet med 20,3 g toluen-4-sulfonyklorid (106 mmol) og 520 g dimetylaminopyridin (4,3 mmol). Reaksjonsblandingen ble sakte oppvarmet til 70'C og omrørt i 3 timer. ReaksjonsblandIngen ble heilt i vandig, mettet NH4CI oppløsning, ekstrahert med CHgClg (3x), tørket (NagS04), konsentrert og renset ved flashkromatografi (silika, 25-35% etylacetat i heksan) for å gi forbindelse nr. 57 (15,9 g, 84%).
Rf => 0,31 (silika, 33% etylacetat 1 heksan).
1H-NMR (CDC13# 500 MHz): d =7,76-7,25 (m, 10H, Harom); 5,42 (d, J=4Hz, 1H, H-C(l')); 4,85 (dq, J=6,2Hz, 1H, H-C(5')); 4,73, 4,55 (2d, J-llHz, 2H, Hbenzyl); 4,48 (dd, J=4,4Hz, 1H, H-C(2')); 4,01 (dd, J-8,2Hz, 1H, H-C(4<*>)); 3,85 (dd, J=8,4Hz, 1H, H-C(3<*>)); 2,43 (s, 3H, ArCH3); 1,52 (s, 3H, CH3); 1,34 (d, J-6Hz, 3H, H-C(6')); 1,32 (s, 3H, CH3).
MS (Cl): 448 (M~), 357 (M-PhCH2).
(f) En oppløsning av 15,9 g av forbindelse nr. 57 (36,0 mmol) i 120 ml dlmetylformamid ble behandlet med 4,6 g NaN3 (71,2 mmol) og omrørt ved 80°C i 3,0 timer. Reaksjonsblandingen ble heilt 1 en mettet oppløsning av natriumklorid 1 vann og ekstrahert med etylacetat (3x). De sammenslåtte organiske lagené ble tørket (Na2S04), konsentrert og renset ved
flashkromatografi (silika, 20% etylacetat i heksan) for å gi forbindelse nr. 58 (10,6 g, 93%).
Rf = 0,42 (silika, 20% etylacetat i heksan).
1H-NMR (CDC1 , 500 MHz); d = 7»38 (m- 5H • Harom); 5,77 (d, J=4Hz, lii, n<3->u(i')); 4,78 og 4,57 (2d, J=12Hz, 2H, Hbenzyl); 4,58 (dd, J=4,4Hz, 1H, H-C(2')); 3,99 (dd, J=9,3Hz, 1H, H-C(4<*>)); 3,83 (dd, J=9,4Hz, 1H, H-C(3')); 3,47 (dq, J=7,3Hz, H-C(5')); 1,60 (s, 3H, CH3); 1,44 (d, J=7Hz, 3H, H-C(6')); 1,38 (s, 3H, CH3).
MS(EI): 320 (M+H<+>).
(g) En oppløsning av 5,0 g av forbindelse nr. 58 (15,7 mmol) i 25 ml CH2C12 ved Q"C ble behandlet med 2,9 ml H20 og 5,8 ml CF3COOH. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 9 timer ved 25"C, avkjølt til 0"C og forsiktig behandlet med fast NaHC03. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 0,3 timer, fortynnet med CH2C12 og vasket med CH2C12. Den vandige fasen ble ekstrahert med CH2C12 (2x), de kombinerte organiske lagene tørket (Na2S04) og konsentrert for å gi forbindelse nr. 59 (4,4 g, 100%). En liten fraksjon ble renset ved flashkromatografi (silika, 3% metanol i CH2C12) for analyse.
Rf = 0,35, 0,27 (silika, 4% metanol i CH2C12).
(h) En oppløsning av 4,4 g av den rå forbindelsen nr. 59 (15,8 mmol) i 50 ml pyridin ble behandlet med 8,1 g eddiksyreanhydrid (79,0 mmol) og 0,2 g dimetylaminopyridin (1,6 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 0,5 timer ved 25"C, heilt i mettet, vandig oppløsning av NH4CI og ekstrahert med CH2C12 (3x). De sammenslåtte organiske lagene ble tørket (Na2S04), konsentrert og renset ved flashkromatografi (silika, 15-20% etylacetat i heksan) for å gi forbindelse nr. 60 (4,7 g, 92%, blanding av anomerer (3,5:1 ved <!>h NMR)).
Rf - 0,41, 0,31 (silika, 33% etylacetat 1 heksan).
1H-NMR mindre polar, hovedanomer (CDCl^, 500 MHz): d = 7,35 (m, 411. Harom); 6,17 (s, 1H, H-C(l<*>)); 5,34 (d, J=5Hz, 1H, H-C(2')); 4,64 og 4,47 (2d, J-llHz, 2H, Hbenzyl), 4,29 (dd, J=8,5Hz, 1H, H-C(3')); 4,01 (dd, J-8, 3Hz, 1H, H-C(4')); 3,32 (dq, J=7,3Hz, 1H, H-C(5')); 2,14, 2,11 (2s, 6H, OAc); 1,41 (d, J-7Hz, 3H, H-C(6')).
MS (FD): 363 (M).
(i) En oppløsning av 4,1 g av forbindelse nr. 60 (12,0 mmol) og 2,1 g tymin (16,8 mmol) i 40 ml CH3CN ble behandlet med 5,8 g N,0-bis(trimetylsilyl)acetamld (28,4 mmol) og omrørt i 0,5 timer ved 50'C. 5,7 g trimetylsilyltrifluormetansulfonat (25,8 mmol) ble tilsatt til reaksjonsblandingen og omrøringen fortsatt i 3 timer ved 50<*>C. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 25°C, heilt i mettet, vandig NaHC03 oppløsning og ekstrahert med CH2C12 (3x). De sammenslåtte organiske lagene ble tørket (Na2S04), konsentrert og renset ved flashkromatografi (siUka, 50% etylacetat i heksan) for å gi forbindelse nr. 61 (4,42 g, 80%).
Rf - 0,30 (silika, 50% etylacetat i heksan).
1H-NMR (CDC13, 250 MHz): d - 8,24 (bs, 1E, NH); 7,32 (m, 6H, Harom, H-C(6)); 5,94 (d, 1H, H-C(l')); 5,32 (dd, 1H, H-C(2')); 4,62 (d, 1H, Hbenzyl); 4,45 (d, 1H, Hbenzyl); 4,22 (dd, 1H, H-C(3')); 3,90 (dd, 1H, H-C(4')); 3,59 (dq, 1H, H-C(5')); 2,15 (s, 3H, OAc); 1,95 (s, 3H, CH3); 1,42 (d, 3H; H-C(6')).
(j ) En oppløsning av 10,6 mg av forbindelse nr. 61 (24,6 mmol) i 70 ml dimetylformamid ved 0°C ble behandlet med 7,5 g 1,5-dIazabIcyklo-[5.4.0]-undec-5-en (49,2 mmol) og en oppløsning av 8,3 g p-metoksybenzyloksymetylklorid (44,3 mmol) i 30 ml dimetylformamid. ReaksJonsblandingen ble omrørt i 2 timer ved romtemperatur, konsentrert og renset ved flashkromatografi (30-50% etylacetat i heksan) for å gi forbindelse nr. 62 (12,3 g, 87%).
Rf = 0,27 (silika, 33% etylacetat i heksan).
1H-NMR (CDC13, 250 MHz): d = 7,30 (m, 8H, Harom, H-C(6)); 6,88 (m, 2H, Harom); 5,92 (d, 1H, H-C(l')); 5,45 (2d, AB, 2H,
NCH20); 5,38 (dd, 1H, H-C(2'))* 4,68-4,40 (m, 4H, Hbenzyl); 4,20 (dd, 1H, H-C(3')); 3,89 (dd, 1H, H-C(4')), 3,79 (s, 3H, 0CH3); 3,60 (dq, 1H, H-C(5')); 2,15 (s, 3H, OAc); 1,95 (s, 3H, CH3); 1,42 (d, 3H, H-C(6<*>)).
(k) En oppløsning av 12,3 g av forbindelse nr. 62 (21,3 mmol) i 120 ml metanol ved 0°C ble behandlet med 4,6 g natrium-metanolat (85,2 mmol) og omrørt 1 1,0 time ved 0°C Reak-sjon sblandIngen ble heilt 1 vandig, mettet NH3C1-oppløsning, ekstrahert med CHgClg (3x), tørket (NagSO^, adsorbert på silikagel og renset ved flashkromatografi (50% etylacetat i heksan) for å gi forbindelse nr. 63 (10,8 g, 94%).
Rf = 0,31 (silika, 50% etylacetat i heksan).
1H-NMR (CDC1 , 500 MHz): d = 7,43-7,28 (m, 7H, Harom); 7,24 (d, J=lHz, 1H, H-C(6)); 6,86 (m, 2H, Harom); 5,77 (d, J=4Hz, 1H, H-C(l')); 5,46 (dd, J=9Hz, 2H, NCHgO); 4,64 (dd, J=llHz, 2H, Hbenzyl); 4,62 (s, 2H, Hbenzyl); 4,26 (m, 1H, H-C(2')), 4,13 (m, 1H, H-C(3')); 3,93 (dd, J=6,4Hz, 1H, H-C(4<*>)); 3,80 (s, 3H, OCH3); 3,58 (dq, J=7,4Hz, 1H, H-C(5')), 2,91 (d, J=6Hz, OH); 1,94 (d, J=lHz, 3H, CH3); 1,40 (d, J-7Hz, 3H, H-C(6')).
MS (Cl): 555 (M+NH4<+>), 538 (M+H<+>).
(1) Til en oppløsning av 10,3 g av forbindelse nr. 63 (19,1 mmol) i 100 ml tetrahydrofuran ved 0°C ble 2,3 g NaH (57,3 mmol) tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt i 0,5 timer ved 0°C. Metyljodid ble tilsatt til reaksjonsblandingen og omrøringen ble fortsatt 1 1,0 time ved 0<*>C. Reaksjonsblandingen ble heilt i en vandig, mettet NH4CI oppløsning, ekstra-
hert med CHgClg (3x), de kombinerte organiske lagene ble tørket (NagS04), konsentrert og renset ved f lashkromatografi (30% etylacetat i heksan) for å gi forbindelse nr. 64 (10,8 g, 100%).
Rf - 0,43 (silika, 50% etylacetat i heksan).
1H-NMR (CDC13, 500 MHz): d = 7,50 (d, J=lHz, 1H, H-C(6)); 7,40-7,30 (m, 7H, Harom); 6,87 (m, 2H, Harom); 5,90 (d, J=2Hz, 1H, H-C(l<*>)); 5,46 (2d, J=9Hz, 2H, NCHgO); 4,64 (s, 2H, Hhenzyl); 4,61 (2d, AB, J=llHz, 2H, Hbenzyl); 4,03 (dd, J-8.2HZ, 1H, H-C(4')); 3,92 (dd, J-8,5Hz, 1H, H-C(3')); 3,79 (s, 3H, ArOCH3); 3,8 (1H, H-C(5')); 3,78 (dd, J=5,2Hz, 1H, H-C(2')); 1,94 (d, J=lHz, 3H, CH3); 1,47 (d, J=7Hz, 3H, H-C(6')).
MS (Cl): 569 (M+NH4<+>), 552 (M+H<+>).
(m) 0,983 g SnClg-HgO ble tilsatt til en oppløsning av 2,0 g av forbindelse nr. 64 (3,63 mmol) i 3 ml metanol ved 0°C og blandingen ble omrørt i 16 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble heilt i mettet, vandig NaHC03-oppløsnlng og ekstrahert med CHgClg (3x). De kombinerte organiske lagene ble tørket (NagS04), konsentrert og renset ved flashkromatograf i (5% metanol i CHgClg) for å gi forbindelse nr. 65 (1,4 g, 71%).
Rf = 0,27 (silika, 7%. metanol i CH2C12).
1H-NMR (CDC13, 500 MHz): d = 7,66 (d, J=lHz, 1H, H-C(6)); 7,40-7,30 (m, 7H, Harom); 6,86 (m, 2H, Harom); 5,85 (d, J=2Hz, 1H, H-C(l')); 5,47 (2d, J=9Hz, 2H, NCH20); 4,68, 4,55 (2d, J-llHz, 2H, Hbenzyl); 4,64 (s, 2H, Hbenzyl); 3,97-3,87 (m, 3H, H-C(2',3',4'); 3,80 (s, 3H, ArOCH3); 3,54 (s, 3H, 0CH3); 3,10 (bs, 1H, H-C(5<*>)); 1,91 (d, J=lHz, 3H, CH3); 1,22 (d, J-7HZ, H-C{6')).
MS (Cl): 526 (M+H<+>).
(n) En oppløsning av 1,42 g av karboksylsyreforbindelsen nr.
66 (2,5 mmol, tørket over P205 på HV, 16,0 timer)
i 12 ml CH3CN ble behandlet i 273 mg trietylamin (2,7 mmol), 867 mg 0-(1-benztriazol-l-yl)-N,N,N,N-tetrametyluronium-tetrafluorborat (2,7 mmol) og 166 mg hydroksybenztriazol (1,3 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 1,5 timer. En oppløsning av 1,31 g av aminforbindelsen nr. 65 (2,5 mmol, tørket over P205 på HV, 16 timer) i 15 ml CH3CN og 373 mg trietylamin (3,6 mmol) ble tilsatt til reaksjonsblandingen og omrøringen fortsatte i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble heilt opp i en vandig, mettet NaH2P04-oppløsning og konsentrert. Den vandige fasen ble ekstrahet med CH2C12 (3x), de kombinerte organiske lagene vasket med vandig, mettet NaH2P04-oppløsning, en mettet oppløsning av natriumklorid i vann, tørket (Na2S04), konsentrert og renset ved flashkromatograf i for å gi forbindelse nr. 67 (2,20 g, 85%).
Rf = 0,61 (silika, 5% metanol i CH2C12).
1H-NMR (CDC13, 500 MHz): d - 7,52 (d, J=lHz, 1H, H-C(6)); 7,39-7,22 (m, 9H, Harom), 6,83 (m, 4H, Harom); 7,05 (d, J=lHz, 1H, H-C(6)), 6,13 (dd, J-6,6Hz, 1H, H-C(1'A)); 5,49 (dd, J-lOHz, 2H, NCH20); 5,41 (dd, J=10Hz, 2H, NCH20); 5,17 (d, J-4Hz, 1H, H-C(1'B); 4,60 (m, 6H, Hbenzyl), 4,32 (dd, J=6,4Hz, 1H, H-C(2'B)); 4,27 (m, 1H, H-C(51B); 4,11 (dd, J=6,6Hz, 1H, H-C(3'B)); 4,01 (dd, J=6,2Hz, 1H, H-C(41B)); 3,90 (dd, J=13,3Hz, H-C(5<*>A)); 3,78 (2s, 6H, ArOCH3); 3,66 (m, 1H, H-C(4 »A,5 'A)); 3,42 (s, 3H, OCH3); 2,72 (m, 1H, H-C(3'A)); 2,4-2,10 (m, 4H, H-C(6•A,2'A)); 1,95 (2d, J-lHz, 6H, CH3); 1,65 (nept, J=6Hz, 1H, Me2CH); 1,22 (d, J=6Hz, 3H, H-C(6'B)); 0,88 (m, 12H, CH3)<;> 0,18 (2s, 6H, Si(CH3)2).
MS(EI): 1082 (M-H<+>).
(o) Til en oppløsning av 2,20 g av forbindelse nr. 67 (2,03 mmol) i 30 ml CH2C12 og 3 ml H20 ble 1,89 g 1,2-diklor-4,5-dicyano-3,6-quinon (8,67 mmol) tilsatt i porsjoner i løpet av 2 timer og reaksjonsblandingen ble omrørt i ytterligere 0,5 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom celit, konsentrert og renset ved flashkromatografi (3-20% metanol i CH2C12) for å gi forbindelse nr. 68 (1,34 g, 84%).
Rf = 0,15 (silika, 2,5% metanol i CH2C12).
1H-NMR (CDC13# 500 MHz): d = 8,97 (bs, 1H, NH); 8,14 (bs, 1H, NH); 7,52 (d, J=lHz, H-C(6)); 7,38-7,23 (m, 4H, Harom); 7,02 (d, J=lHz, 1H, H-C(6)); 6,23 (dd, J=6,6Hz, 1H, H-C(1'A)); 5,12 (d, J=4Hz, H-C(1<*>B)), 4,63 (2d, J=llHz, 2H, Hbenzyl); 4,30 (m, 2H, H-C(2'B,5'B)); 4,09 (dd, J=6,6Hz, 1H, H-C(3'B)); 4,01 (dd, J=6,2Hz, 1H, H-C(4<*>B)); 3,91 (dd, J=ll,2Hz, 1H, H-C(5'A)); 3,80 (ddd, J=5,2,2Hz, 1H, H-C(4'A)); 3,74 (dd, J=ll,3Hz, 1H, H-C(5'A)); 3,42 (s, 3H, OCH3); 2,85 (m, 1H, H-C(3'A)); 2,43 (dd, J=13,5Hz, 1H, H-C(6<*>A)); 2,25 (dd, J=14, 10Hz, 1H, H-C(6<»>A)); 2,13 (m, 2H, H-C(2<*>A)); 1,96, 1,94 (2d, J=lHz, 6H, CH3); 1,66 (m, 1H, Me2CH); 1,20 (d, J=7Hz, H-C(6'B)); 0,90 (m, 4H, cH3); 0,18 (s, 6H, CH3).
MS(CI): 801 (M+NH4<+>), 784 (M+H<+>).
(p) En oppløsning av 650 mg av forbindelse nr. 68 (0,83 mmol) i 6 ml tetrahydrofuran ble behandlet med 1,25 ml n-tetra-butylammoniumfluorld (1,0 M oppløsning i tetrahydrofuran, 1,25 mmol) og omrørt ved 25<*>C i 24,0 timer. Blandingen ble heilt 1 vandig, mettet NaHC03-oppløsning, ekstrahet med CH2C12 (3x), tørket (Na2S04), konsentrert og renset ved
flashkromatografi (2-7% metanol 1 CH2C12) for å gl forbindelse nr. 69 (505 mg, 95%).
Rf = 0, 21 (silika, 6,5% metanol i CH2C12).
1H-NMR (CDC13, 500 MHz): d = 9,83 (bs, 1H, NH); 9,21 (bs, 1H, NH); 7,85 (s, 1H, H-C(6)); 7,28 (m, 5H, Harom); 7,02 (s, 1H, H-C(6)); 6,08 (dd, 1H, H-C(1'A)); 5,15 (d, J=5Hz, 1H, H-C(1'B)); 4,65, 4,59 (2d, J=llHz, 2H, Hbenzyl); 4,36 (dd, J=5,5Bz, 1H, H-C(2'B)); 4,25 (m, 1H, H-C(5'B)); 4,05 (m, 2H, H-C(3'B,4'B)); 3,98 (m, 1H, H-C(5'A)); 3,74 (m, 2H, H-C(4'B,3'B)); 3,41 (s, 3H, 0CH3); 3,37 (m, 1H, H-C(5<*>A)); 2,80 (m, 1H, H-C(3'A)); 2,49 (dd, J015,6Hz, 1H, H-C(6'A)); 2,34 (dd, J=15,8Hz, 1H, H-C(6'A)); 2,21 (m, 2H, H-C(2'A)); 2,94 (2s, 6H, CH3); 1,20 (d, J-8Hz, 3H, H-C(6'B)).
MS (El): 642 (M+H<+>).
(q) En oppløsning av 310 mg av forbindelse nr. 69 (0,48 mmol) ble avgasset med argon, behandlet med Pd/C (10%, 62 mg) og omrørt under en H2-atmosfære i 1,5 timer. Reaksjonskaret ble flushet med argon, filtrert gjennom celit og konsentrert for å gi forbindelse nr. 70 (2fa7 mg, 92%).
Rf = 0,17 (silika, 10% metanol i CHgClg).
1H-NMR (250 MHz, CD3OD): d - 7,90 (s, 1H, H-C(6)); 7,45 (s, 1H, H-C(6)); 5,95 (dd, 1H, H-C(1'A)); 5,60 (d, 1H, H-C(1'B)), 3,38 (s, 3H, OCH3); 1,19 (d, 3H, H-C(6'B)).
(r) En oppløsning av 186 mg av forbindelse nr. 70 (0,34 mmol) i 2 ml pyridin ble behandlet med 3 Å molekylsikter (200 mg), 171 mg 4,4 *-dimetoksytrifenylklorid (0,51 mmol) og 102 mg trietylamin (1,01 mmol) og omrørt i 2 timer ved 25'C. Reaksjonsblåndingen ble heilt i en vandig, mettet NaHCC"3-oppløsning, ekstrahert med CHgClg (3x), tørket (NagS04), konsentrert, samavdampet med toluen (2x) og renset ved flashkromatografi (5% metanol i CHgClg, 1% trietylamin) for å gi forbindelse nr. 71 (274 mg, 95%).
Rf = 0,20 (silika, 12,5% metanol i CHgClg).
1H-NMR (CDC13, 500 MHz): d = 7,63 (d, J=lHz, 1H, H-C(6)); 7,44 (m, 2H, Harom); 7,34-7,20 (m, 7H, Harom); 7,06 (d, J-lHz, 1H, H-C(6)); 6,86 (m, 4H, Harom); 6,27 (dd, J=6,6Hz, 1H, H-C(1'A)); 5,12 (d, J=4Hz, 1H, H-C(1'B)); 5,43 (m, 3H, H-c(2<*>B,3'B,5'B)); 3,84 (m, 2H, H-C( 4'A ,4'B)); 3,79 (s, 6H, ArOCH3); 3,50 (s, 3H, OCH3); 3,46 (dd, J-ll,2Hz, 1H, H-C(5'A)); 3,29 (dd, J=ll,3Hz, 1H, H-C(5'A)); 2,79 (m, 1H, H-(3'A)); 2,73 (bs, 1H, OH); 2,39 (m, 2H, H-C(2'A,6 *A)); 2,23
(rn, 2H, H-C(2'A,6'A)}; 1,94 (d, J=lHz, 3H, CH3); 1,41 (d, J=lHz, 3H, CH3); 1,16 (d, J=7Hz, 3H, H-C(6'B)).
MS(CI): 853(M").
Eksempel A6: Fremstilling av forbindelse nr. 80
(a) 5,46 g 2'-a-metoksy-tymidin og 9,86 g tris-t-butyl-tritylklorid ble tilsatt til 60 ml tørr pyridin. 2,23 g trietylamin ble tilsatt til denne suspensjonen. Etter 96 timer ved romtemperatur ble reaksjonsblandingen avdampet til tørrhet og resten ble oppløst i toluen. Etter avdamping ble den oljeaktige resten tatt opp i eter og vasket to ganger med mettet natriumkloridoppløsning i vann. Den organiske fasen ble tørket over Na2S04 og avdampet til tørrhet. Resten ble tatt opp i heksan for å gi krystaller som ble filtrert av. Utbytte 12,66 g (92%) av forbindelse nr. 72.
1H-NMR (CDC13,500 MHz, J(Hz): 3,65 (s, 3H, 0CH3).
(b) 12,62 g av forbindelse nr. 72 og 2,77 g imidazol ble oppløst i 20 ml tørr dimetylformamid. 5,59 g t-butyl-difenylklorsilan ble tilsatt dråpevis i løpet av 5 minutter. Etter 3,5 timer ble suspensjonen fortynnet med eter og vasket tre ganger med vann. Den organiske fasen ble tørket over NagSC^ og avdampet. Etter behandling med heksan og filtrering: utbytte 12,87 g (76%) av forbindelse nr. 73 som hvite krystaller.
1H-NMR (CDC13, 500 MHz, J(Hz): 3,25 (s, 3H, 0CH3); 0,98 (s, 9H, t-Bu). (c) 16,74 g av forbindelse nr. 73 ble oppløst i 360 ml 80% vandig eddiksyre og oppvarmet til 60°C. Etter 1 time ble reaksjonsblandingen avdampet til tørrhet og resten ble kromatografert på silikagel med en gradient av CHgClg/metanol (100% til 95%/5%) for å gi 8,27 g av forbindelse nr. 74.
1H-NMR (CDC13„ 500 MHz, J(Hz): 3,36 (s, 3H, 0CH3); 1,10 (s, 9H, t-Bu). (d) 8,0 g av forbindelse nr. 74 ble oppløst i 80 ml av en 1:1 blanding av pyridin og CHgClg. 3,58 g tosylklorid ble tilsatt porsjonsvis og oppløsningen ble omrørt over natten. Ytterligere 2,99 g TsCl ble tilsatt og reaks jonsblandingen ble omrørt i ytterligere 48 timer. Etter fjerning av oppløsnings-midlet ble resten tatt opp i CHgClg og vasket med vann. Etter avdamping ga kromatografisk rensing av resten 9,0 g av forbindelse nr. 75. Tynnsjiktskromatografi viste at den rene forbindelsen besto av en blanding av tosylatet og det tilsvarende klorid. Blandingen ble benyttet som sådan for neste trinn. (e) 9,0 g av blandingen oppnådd i A6(d) ovenfor ble suspen-dert i 12,35 ml anilin og 75 mg tetrabutylammoniumjodid ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet til 100°C i et forseglet rør i 12 timer. Anilin ble destillert av under vakuum og resten tatt opp i CHgClg og vasket med vann. Etter tørking og avdamping av oppløsningsmidlet ble 8,39 g av resten kromatografert over silikagel/etylacetat som elueringsmiddel for å gi 6,8 g av forbindelse nr. 76.
1H-NMR (CDC13, 500 MHz, J(Hz): 3,53 (s, 3H, 0CH3); 1,14 (s, 9H, t-Bu).
(f) 360 mg syreforbindelsen nr. 77
fremstilt ifløge De Mesmeaker, A., Waldner, A., Lebreton, J., Hoffman, P. , Fritsch, V., Wolf, H.M., Freler, S.M., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33:226-229 (1994), 250 mg anilinforbin-delse nr. 76 og 165 mg 2-klor-N-metylpyridlniumjodid ble oppløst i tørr CH3CN. 130 mg trietylamin ble tilsatt til denne blandingen og den resulterende oppløsningen ble oppvarmet med tilbakeløpskjøllng 1 4 timer. Den rå reaksjonsblandingen ble kromatografert etter avdamping ved anvendelse av en gradient av toluen/etylacetat 8:2 til 1:1 for å gi 290 mg av forbindelse nr. 78. 1H-NMR (CDCl , 500 MHz- J(Hz): 1,30 (s, 27H, 3 t-Bu); 5,45 (2d, J=8, CH2Ph). MS (FD): 1261. (g) 1,46 g av forbindelse nr. 78 ble oppløst i 20 ml CH2C12/H20 (20:1). 0,94 g 1,2-diklor-4,5-dicyano-3,6-quinon ble tilsatt i løpet av 1 minutt. Etter 90 minutter ble oppløsningen filtrert og filtratet ble vasket med Na2S20g. Etter tørking og avdamping ga kromatografisk rensing av resten 0,84 g av forbindelse nr. 79.
1H-NMR (CDC13, 500 MHz, J(Hz): 3,34 (s, 3H, 0CH3); 1,03 (s, 9H, t-Bu). MS (FD): 1261. (h) 0,84 g av forbindelse nr. 79 ble behandlet med en blanding av tetrabutylammoniumfluorid og eddiksyre (1:1, 4 ekvivalenter) i tetrahydrofuran. Etter 2 time var reaksjonen fullstendig. Etter avdamping ga kromatografisk rensing 0,65 g av forbindelse nr. 80.
1H-NMR (CDC13, 500 MHz, J(Hz): 3,58 (s, 3H, OCH3). MS(FD): 1023. Eksempel A7: Fremstilling av forbindelse nr. 96 (a) 14,2 g av aldehydforbindelsen nr. 81 (28,0 mmol)
ble oppløst i 100 ml CH2C12 og avkjølt til CC. 11,2 g (metoksykarbonylmetylen)-trifenylfosforan (33,5 mmol) ble tilsatt i porsjoner og reaksjonsblandingen ble omrørt i 1,5 timer ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble vasket med vann og den vandige fasen ble ekstrahert med CH2C12. De sammenslåtte organiske fasene ble tørket (Na2SC<4), konsentrert og renset ved flashkromatografi for å gi olefinforbindelsen nr. 82. (b) 14,7 g av olef Inf orbindelsen nr. 82 (26,1 mmol) ble oppløst 1 200 ml metanol og avgasset med argon. 1,4 g 10% Pd/C ble tilsatt og hydrogengass ble boblet gjennom reaksjonsblandingen i 10 minutter. Reaksjonsblandingen ble hurtig omrørt i 20 timer under hydrogenatmosfære (1 atm.). Hydrogen-atmosfæren ble erstattet med en argonatmosfære, reaksjonsblandingen filtrert gjennom cellt, konsentrert og samavdampet med benzen (2x) for å gi forbindelse nr. 83. (c) 14,7 g av forbindelse nr. 83 (26,1 mmol) ble oppløst i 70 ml dimetylf ormamid og avkjølt til 0°C. 8,0 g av diazabicykloundecen (52,1 mmol) og en oppløsning av 7,8 g p-metoksybenzyloksymetylklorid (41,8 mmol) i 15 ml dimetylfor-mamld ble tilsatt til reaksjonsblandingen. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 25"C 1 25 timer, konsentrert, samavdampet med toluen (2x) og renset ved f lashkromatograf 1 for å gi forbindelse nr. 84. (d) 15,3 g av metylesterforblndelsen nr. 84 (21,4 mmol) ble oppløst i 500 ml tetrahydrofuran, avkjølt til 0'C og behandlet med 320 ml av en vandig 0,2M NaOH-oppløsning.
Reaksjonsblandingen ble omrørt i 3,0 timer ved romtemperatur, fortynnet med CHgClg og vasket med en vandig mettet NaHgPOq-oppløsning. Den vandige fasen ble ytterligere ekstrahert med CHgClg (3x), de sammenslåtte organiske lagene ble tørket (NagSC^) og renset ved f lashkromatograf 1 for å gl karboksylsyreforbindelsen nr. 85.
(e) 8,0 g av karboksylsyreforblndelsen nr. 85 (11,4 mmol) ble oppløst 1 60 ml 1,2-dikloretan, avkjølt til 0°C og behandlet med 1,7 g 1-klor-N,N,1-trimetyl-propenylamin (12,5 mmol). Etter 1,0 time ved 0<*>C ble 1,8 g 2-merkaptopyridin-N-oksyd natriumsalt (12,5 mmol) tilsatt som et faststoff og reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0<*>C i 1 time i mørke. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 290 ml 1,2-dikloretan og avgasset med argon. 22,8 g bromtrlklormetan (114,0 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble bestrålet med en sollampe i 5 minutter. Reaksjonsblandingen ble konsentrert og renset ved flashkromatografi for å gl forbindelse nr. 86.
(f) 4,2 g av bromldforbindelsen nr. 86 (5,7 mmol), 1,8 g Nal (11,4 mmol) og 3,0 g trifenylfosfin (11,4 mmol) ble oppløst i
CH3CN og omrørt ved 65'C i 36 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert og renset ved flashkromatografi for å forbindelse nr. 87.
(g) 2,3 g av forbindelse nr. 87 (2,45 mmol) ble oppløst i 20 ml tetrahydrofuran og avkjølt til -78°C. 2,7 ml (TMS)2NNa (IM oppløsning i tetrahydrofuran, 2,7 mmol) ble tilsatt til reaksjonsblandingen. Etter 1 minutt ble 1,37 g av aldehydforbindelsen nr. 88 (2,45 mmol) oppløst i 7 ml tetrahydrofuran tilsatt til reaksjonsblandingen og omrøring fortsatte i 1,0 time ved -78'C og 0,25 timer ved 25°C. Reaksjonen ble stoppet med vann og omrørt i 0,3 timer, fortynnet med etylacetat og vasket med mettet vandig NaCl-oppløsning. Den vandige fasen ble ekstrahert med etylacetat (2x), de sammenslåtte organiske lagene tørket (NagSOg), konsentrert og renset ved flashkromatografi for å gi forbindelse nr. 89. (h) 2,20 g av forbindelse nr. 89 (1,83 mmol) ble oppløst i 10 ml CH2C12/H20 (20:1). 2,9 g av 1,2-diklor-4,5-dicyano-3,6-quinon (12,4 mmol) ble tilsatt i porsjoner og reaksjonsblandingen ble omrørt i 3,0 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom celit, konsentrert og renset ved flashkromatograf i for å gi forbindelse nr. 90. (i) 1,50 g av forbindelse nr. 90 (1,67 mmol) ble oppløst i 15 ml avgasset benzen, behandlet med 91 mg tiofenol (0,83 mmol) og 41 mg azoisobutyronitril (0,25 mmol) og omrørt ved 80<*>C. Ytterligere 91 mg tiofenol (0,83 mmol) og 41 mg azoisobutyronitril (0,25 mmol) ble tilsatt (5 x i 4 timers intervaller). Reaksjonsblandingen ble konsentrert og renset ved flashkromatografi for å gi forbindelse nr. 91 (blanding av trans-og cis-isomerer). (j) 1,20 g av forbindelse nr. 91 (1,33 mmol) ble oppløst i 15 ml tetrahydrofuran, behandlet med n-tetrabutylammoniumfluorid (3,1 ml av IM oppløsning i tetrahydrofuran, 3,1 mmol), omrørt i 16,0 timer ved 25°C, konsentrert og renset ved flashkromatografi for å gi diolforbindelsen nr. 92 (blanding av trans- og cis-isomerer). (k) En oppløsning av 600 mg av diolforbindelsen nr. 92 (1,15 mmol) i 5 ml pyridin ble behandlet med 349 mg trietylamin (3,45 mmol) og 750 mg tris(tert-butyl)-trItylklorid (1,73 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 60<*>C. Etter 3,0 timer og 6,0 timer ble ytterligere tris(tert-butyl)-trltyl-klorid (240 mg, 0,86 mmol og 131 mg, 0,42 mmol) tilsatt til reaksjonsblandingen. Etter 3 timer ble reaksjonsblandingen konsentrert, samavdampet med toluen (3x) og renset ved flashkromatografi for å gi forbindelse nr. 93 (blanding av trans- og clsisomerer).
(1) En oppløsning av 950 mg av forbindelse nr. 93 (1,02 mmol)
i 4 ml dimetylf ormamid ved 0<*>C ble behandlet med 620 mg diazabicykloundecen (4,10 mmol) og en oppløsning av 570 mg p-metoksybenzyloksymetylklorid (3,06 mmol) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 3,5 timer ved 25* C, fortynnet med CHgClg, vasket med en vandig oppløsning av NaHCC*3 og den vandige fasen ble ekstrahert med CH2C12 (2x). De sammenslåtte organiske lagene ble tørket (Na2S04), konsentrert og samavdampet med toluen (2x). Råproduktet ble renset ved flashkromatografi for å gi en blanding av trans-
og clsisomerer. Transisomeren blir separert fra cisisomeren ved flashkromatografi (AgN03 impregnert Si02). Etter gjentatt kromatograf! ble forbindelsen nr. 94 (ren transisomer) oppnådd.
(m) 340 mg av forbindelse nr. 94 (0,276 mmol) ble oppløst i 2,8 ml CHgClg og behandlet med 0,2 ml vann og 626 mg 1,2-dlklor-4,5-dicyano-3,6-quinon (2,76 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 0,7 timer ved 25° C, nøytralisert med 25 dråper NagCOg oppløsning, filtrert gjennom celit, konsentrert og renset ved flashkromatografi for å gi forbindelse nr. 95.
(n) 118 mg av alkoholforbindelsen nr. 95 (0,127 mmol) og 108,7 mg di-isopropylammoniumtetrazolld (0,635 mmol) ble tørket i 2 timer (HV, 60<*>C), oppløst i 4 ml CHgClg og behandlet med 114,6 mg cyanoetoksy-bis-diisopropylamino-fosfin (0,381 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 1,5 timer ved 25<*>C. Reaksjonsblandingen ble konsentrert, oppløst 1 CHgClg og utfelt i kald pentan. Morvæsken ble konsentrert
og gjenværende produkt ble utfelt. Utfellingen ble vasket med pentan og renset ved flashkromatograf1 for å gi fosforamiditforbindelsen nr. 96 (blanding av diastereomerer).
Eksempel A8: Fremstilling av forbindelse nr. 99
(a) En oppløsning av 620 mg av forbindelse nr. 90 (0,689 mmol) i 3 ml tetrahydrofuran ble behandlet med en oppløsning av n-tetrabutylammoniumfluorid i tetrahydrofuran (IM, 1,59 ml, 1,59 mmol) Reaksjonsblandingen ble omrørt i 2 timer ved 50°C, konsentrert og renset ved flashkromatografi for å gi diolforbindelsen nr. 97.
(b) 340 mg av diolforbindelse nr. 97 (0,654 mmol) og 439 mg av tris(tert-butyl)-tritylklorid (0,982 mmol) ble tørket i 4 timer (HV, 60°C), oppløst 1 2 ml pyridin og behandlet med 200 mg trietylamin (1,96 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i
50°C i ytterligere 2 timer. Ytterligere 440 mg tris(tert-butyl )-tritylklorid (0,982 mmol) ble tilsatt, reaksjonsblandingen ble omrørt i ytterligere 16 timer, konsentrert og samavdampet med toluen (2x) og renset ved flashkromatografi for å gi forbindelse nr. 98. (c) 176 mg av alkoholforbindelse nr. 98 (0,189 mmol) og 162 mg di-isopropylammoniumtetrazolid (0,950 mmol) ble tørket i 2 timer (HV, 60°C), oppløst I 4 ml CH2C12 og behandlet med 171 mg cyanoetoksy-bis-diisopropylamino-fosfin (0,567 mmol). Reaks jonsblandingen ble omrørt i 1,5 timer ved 25° C, konsentrert og renset ved flashkromatografi. De produkt-inneholdende fraksjonene ble oppløst i CH2C12 og utfelt i kald pentan. Morvæsken ble konsentrert og gjenværende produkt ble utfelt. Utfellingen ble vasket med pentan for å gi fosforamiditforbindelsen nr. 99 (blanding av diastereomerer).
B. Syntese av oligonukleotider
Hver ol igonukleot id ble fremstilt på en ABI 390 DNA syn-tetisator ved anvendelse av standard fosforamiditkjemi ifølge Gait, M.J., Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press. Oxford (1984), men med forlengede koblingstider (10 minutter). Dimetoksytrityloligonukleotider ble renset ved revers fase HPLC (kolonne: Nucleosil RPC^g, 10 p, 10 x 250 mm; elueringsmiddel A: 50 mM trietylammoniumacetat (TEAA), pH 7,0; elueringsmiddel B: 50 mM TEAA, pH 7,0 i 70% acetonitril; eluering med gradient fra 15% til 45% B i 45 minutter). Etter rensing ved HPLC ble oligonukleotidene kontrollert ved kapillærgelelektroforese (konsentrasjon: 1 OD/ml, Injeksjon: 2 kV, 3 sek., separasjon: 9 kV, kapillær: effektiv lengde 30 cm, indre diameter 100 pm, polyakrylamid 10% T, buffer: 100 mM H3P04, 100 mM Tris, 2 mM EDTA, 7 M urea pH 8,8). Molekylvekten til hver av oligonukleotidene ble sjekket ved massespektroskopi [MALDI-TOF: Pieles, U., Zurcher, W., Schår, M. , Moser, H. , Nucl. Acids Ees. 21:3191
(1993)]. Oligonukleotider er beskrevet ved anvendelse av 2,4-trihydroksyacetofenon som en matriks (deteksjon ved negativt ladede ioner) med diammoniumhydrogencitrat som tilset-ningsstoff (25 mM endelig konsentrasjon).
Oligonukleotider syntetisert:
MALDI-TOF M.S. analyser av sekvens 1:
beregnet: 4416,036 Eksperimentelt: 4416,9
C. Egenskaper til oligonukleotider
Eksempel Cl: Smeltepunkter
Den termiske denatureringen (Tm) til DNA/RNA hybrider ble utført ved 260 nm ved anvendelse av Gilford Respons II spektrofotometer (Ciba-Corning Dlagnostlcs Corp., Oberlln, 0H). Absorbans mot temperaturprof 11 ble målt ved 4 jjM av hver streng i 10 mM fosfat pH 7,0 (Na-salter), 100 mM total [Na<+>]
(tilsatt som NaCl), 0,1 mM EDTA. Tm ble oppnådd fra dets tilpasning til absorbans mot temperaturkurven I en to-tilstandsmodell med lineær hellende baselinjer [Freier, S.M., Albergo, D.D., Turner, D.H., Biopolymers 22:1107-1131
(1982)]. Alle verdiene er gjennomsnitt av minst tre eksperi-menter. Den absolutte eksperimentelle feil ved Tm-verdlene er ± 0,5'C.
Tm (<*>C) til dupleksen med sekvens 1 og komplementær RNA streng: Tm = 54,3°C
for vildtype (dupleks DNA sekvens 1): Tm = 52,2'C
A Tm/1 modifikasjon = + 2,1-C.
Eksempel C2: Resistens mot 3'-' eksonukleaser
For eksperimentelle data se Hoke, G.D., Draper, K. , Freier, S.M., Gonzales, C, Driver, V.B., Zounes, M.C., Ecker, D.J., Nucl. Acids. Res. 19:5743 (1991).
Eksempel C3: Biologisk aktivitet - hemming av ekspresjon av c-raf-kinase
T-24 celler ble behandlet med et umodifisert oligonukleotid eller oligonukleotid modifisert ifølge foreliggende oppfinnelse i serumfri optimem medium inneholdende 10 jjg/ml lipofektin (oligonukleotider ble tilført direkte i mediet). Etter 4 timers inkuberlng ved 37"C ble mediet inneholdende oligonukleotidene erstattet av normalt medium fritt for oligonukleotid (McCoys medium + 10% FCS). Etter 24 timer ble cellens RNA ekstrahert og separert via guanidiniumisotiocya-natmetoden fulgt ved bestemmelse av C-raf RNA ekspresjon ved anvendelse av radiomerket human c-DNA "probe". C-raf RNA blir kvantifisert ved anvendelse av en fosfo-imager.
Claims (51)
1.
Oligonukleotid, karakterisert ved formel I
hvor U er et identisk eller forskjellig radikal av et naturlig eller syntetisk nukleosid og n er et tall fra 2 til 200 omfattende minst en strukturell enhet i to etterfølgende nukleosider av den strukturelle enhet omfattende formel Ila, Ilb. 99 II<d>
hvor
Rx er H, Cx-C4 alkyl eller Cx-C4 alkoksy;
R2 er H; C1-C4 alkyl; fenyl; fenyl substituert med OH, OR'",
0(CH2CH20)nR'" , C6-<C>10 aryl eller C3-C9 heteroaryl; en interkalator; amino-Cx-C4 alyl; Cx-C4 alkylamino; ammonium-Cx-C4 alkyl; Cx-C4 alkylammonium; amino-Cx-C4 alkylaminosulfonyl; Cx-C4 alkylamino-Cx-C4 alkylaminosulfonyl eller (CH3)2<N>CH2CH2;
R3 er H eller Ci~C4 alkyl;
R3. er H; OH; C1-C4 alkyl; 0-C!-C4 alkyl; 0(CH2CH20)nR" '; R* " er C!-C4 alkyl;
X er H, OH, 0-C1-C4 alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-
C(0R)H-CH2-0H;
Y er H, 0-C1-C4 alkyl, -0-(CH2-C<H>2<->0)mH eller -0-CH2-C(0R)H-
CH2-0H;
R er H eller Cx-C10 alkyl;
m er et helt tall fra 1 til 4;
n er et helt tall fra 1 til 4; og
B er et purin eller pyrimidinradikal eller en analog derav, med den forutsetning at enten X eller Y er H eller at X og Y ikke er Identiske.
2.
Oligonukleotid ifølge krav 1, karakterisert ved at interkalatoren er antraquinon forbundet via en 1Inker.
3.
Oligonukleotid Ifølge krav 2, karakterisert ved at linkeren er en kjede med 2 til 7 atomer valgt blant gruppen omfattende C, N og 0.
4.
Oligonukleotid ifølge krav 1, karakterisert ved at B som et purinradikal eller analoge derav er et radikal med formel IV, IVa, IV, IVc, IVd eller IVe hvor R4 er H, Cl, Br eller OH eller -O-alkyl har 1 til 12 C-atomer, og R5, R6 og R7 uavhengig av hverandre er H, OH, SH, NH2, NHNH2, NHOH, NHOalkyl med 1 til 12 C-atomer, -N=CH-N(C1-CX2 alkyl)2, F, Cl, Br, alkyl eller hydroksyalkyl eller aminoalkyl eller alkoksy eller alkyltio med 1 til 12 C-atomer, hvor hydroksyl og aminogrupper er ikke-substituert eller "substituert med en beskyttende gruppe, fenyl, benzyl, primær amino med 1 til 20 C-atomer eller sekundært amino med 2 til 30 C-atomer og R1X er H eller C^- C^ alkyl.
5.
Oligonukleotid Ifølge krav 4, karakterisert ved at den beskyttende gruppen for hydroksyl og amino er C^Cg acyl.
6.
OligonuJileotid ifølge krav 4, karakterisert ved at den primære amino Inneholder 1 til 12 C-atomer og den sekundære amino 2 til 12 C-atomer.
7.
Oligonukleotid ifølge krav 4, karakterisert ved at den primære amino og sekundære amino er radikaler med formel RgRgN hvor Rg er H eller uavhengig har betydningen for Rg, og Rg er Cj-Cgo alkyl, -aminoalkyl eller -hydroksyalkyl; karboksyalkyl eller karbalkoksyalkyl, hvor karbalkoksygruppen inneholder 2 til 8 C-atomer og alkylgruppen 1 til 6 C-atomer; C2-<C>2q <a>lkenyl; fenyl, mono- eller di(Ci~C4 alkyl- eller alkoksy)fenyl, benzyl, mono- eller di(C1-C4 alkyl- eller -alkoksy)benzyl; eller 1,2-, 1,3- eller 1,4-imidazolyl-C^-Cfc alkyl, eller Rg og Rg sammen er tetra- eller pentametylen, 3-okso-l,5-pentylen, -CH2-NRiq-CH2CH2- eller-CH2CH2-N<R>10-CH2CH2-, hvor <R>10 er H eller C^- C^ alkyl, hvor aminogruppen i aminoalkyl er ikke-substituert eller substituert med 1 eller 2 C^- C^ alkyl eller -hydroksyalkylgrupper og hydroksylgruppen i hydroksyalkyl er fri eller eterifisert med C^-C^ alkyl.
8.
Oligonukleotid ifølge krav 6, karakterisert ved at den primære amino og sekundære amino er metyl-, etyl-, dimetyl-, dietyl-, allyl-, mono- eller di(hydroksyet-2-yl)-, fenyl-, benzyl-, acetyl-, isobutyryl- og benzoylamino .
9.
Oligonukleotid ifølge krav 4, karakterisert ved at R4 i formelene IV, IVb, IVc, IVd og IVe er hydrogen.
10.
Oligonukleotid Ifølge krav 4, karakterisert ved at Ry i formel IVd er hydrogen.
11.
Oligonukleotid ifølge krav 4, karakterisert ved at R5 og R6 i formelene IV, IVa, IVb, IVc, IVd og IVe uavhengig av hverandre er H, F, Cl, Br, OH, SH, NH2, NHOH, NHNH2, metylamino, dimetylamino, benzoylamino, metoksy, etoksy og metyltio.
12.
Oligonukleotid ifølge krav 4, karakterisert ved at B er et purinradikal eller et radikal av purlnana-log fra en serie omfattende adenin, N-metyladenln, N-benzoyladenin, 2-metyltioadenin, 2-aminoadenin, 2-hydroksypurin, 2-amino-6-klorpurin, 2-amino-6-metyltiopurln, guanin og N-isobutyrylguanin.
13.
Oligonukleotid ifølge krav 1, karakterisert ved at B som en analog av et pyrimidinradikal er et uracil-, tymln- eller cytosinradikal med formel V, Va eller Vb
hvor <R>xx er H eller C1-C4 alkyl, og Rx2°g <R>13 uavhengig av hverandre er H, F, Cl, Br, alkyl, propargyl eller hydroksyalkyl eller aminoalkyl eller alkoksy eller alkyltio med 1 til 12 C-atomer, hvor hydroksyl- og amlnogruppene er ikke-substituert eller substituert med en beskyttende gruppe, fenyl, benzyl, primær amino med 1 til 20 C-atomer eller sekundært amino med 2 til 30 C-atomer og hydrogenatomet i NH2 gruppen med formel Vb er ikke-substituert eller substituert med Cx-C(, alkyl, benzoyl eller benzyl, og dihydroderivatene av radikalene med formelene V, Va og Vb.
14.
Oligonukleotid ifølge krav 13, karakterisert ved at R12©r H, C^-Cf, alkyl eller -hydroksyalkyl, F, Cl, Br, NH2, benzoylamino, mono- eller di-Cx-C^-alkylamino.
15.
Oligonukleotid ifølge krav 13, karakterisert ved at RX3 er H, C^-Cf, alkyl eller -alkoksy eller-hydroksyalkyl, F, Cl, Br, NH2, benzoylamino, mono- eller di-C^-Cg,-alkyl amino.
16.
Oligonukleotid ifølge krav 14, karakterisert ved at <R>12 er H, F, Cl, Br, NH2, NHCH3, N(CH3)2 eller Cj-C4 alkyl.
17.
Oligonukleotid ifølge krav 16, karakterisert ved at R13 er H, C^ C^ alkyl, NH2, NHCH3 eller (CH3)2N.
18.
Oligonukleotid ifølge krav 13, karakterisert ved at R12 og R13 uavhengig av hverandre er propargyl.
19.
Oligonukleotid ifølge krav 1, karakterisert ved at B som et radikal av en pyrlmidlnanalog er avledet fra uracll, tymin, cytosin, 5-fluoruracil, 5-kloruracIl, 5-bromuracil, dihydrouracil eller 5-metylcytosin.
20.
Oligonukleotid ifølge krav 4, karakterisert ved at den OH-beskyttende gruppen er lineær eller forgrenet <c>i~Cg alkyl, c7_<c>i8 aralkyl, trifenylsilyl, alkyldifenylsilyl, dialkylfenylsilyl eller trialkylsilyl med 1 til 20 C-atomer i alkylgruppene, -(Cj^-Cg alkyl )2SI-0-SI(C-^-Cg alkyl)2-, c2"<c>12 acy! * R14~S02-, hvor RX4 er C^-C^ alkyl, Cg- eller C5 cykloalkyl, fenyl, benzyl, Cj-<C>X2<a>lkylfenyl, <c>l"c12 alkylbenzyl, eller er Cx-<C>x2<a>lkoksykarbonyl, fenoksykarbonyl, benzyloksykarbonyl, metylfenoksykarbonyl eller metylbenzyloksykarboyl som er ikke-substituert eller substituert med F, Cl, Br, C^- Cq alkoksy, tri(C1-C4 alkyl)-silyl eller C1-C4 alkylsulfonyl, eller 9-fluorenylmetoksykarbonyl .
21.
Oligonukleotid ifølge krav 20, karakterisert ved at den OH-beskyttende gruppen er en lineær eller forgrenet C^- C^ alkyl, C7-Cig aralkyl, trialkylsilyl med 1 til 12 C-atomer i alkylgruppene, -(CH3)2-Si-0-Si(CH3)2-, -(i-C3H7)2Sl-0-Si(iC3<H>7)2<->, C2-Cg acyl, R14-S02-, hvor R14 er Zy-Cb alkyl, fenyl, benzyl, C^- C^ alkylfenyl, Cx-C4 alkylbenzyl, halofenyl eller halobenzyl, eller er Cx-Cg alkoksykarbonyl, fenoksykarbonyl, benzyloksykarbonyl eller 9-fluorenylmetoksykarbonyl .
22.
Oligonukleotid Ifølge krav 20, karakterisert ved at den OH-beskyttende gruppen er metyl, etyl, n-eller i-propyl, n-, i- eller t-butyl; benzyl, metylbenzyl, dimetylbenzyl, metoksybenzyl, dimetoksybenzyl, brombenzyl;
difenylmetyl, di(metylfenyl)-metyl, di(dimetylfenylJmetyl, di(metoksyfenyl)metyl, di(metoksyfenyl)-(fenyl)metyl, trityl, tri(metylfenyl)metyl, tri(dimetylfenyl)metyl, tri(metoksy-fenylJroetyl, tri(dimetoksyfenyl)metyl; trimetylsilyl, trletylsilyl, tri-n-propylsilyl, i-propyldimetylsilyl, t-butyldimetylsilyl, t-butyldifenylsilyl, n-oktyldimetylsilyl, (1,1,2,2-tetrametyletyl)dimetylsilyl, -(CH3)2SI-0-Si(CH3)2-, -(i-C3H7)2SI-0-SI(1C3H7 )2-; acetyl, propanoyl, butanoyl, pentanoyl, heksanoyl, benzoyl, metylbenzoyl, metoksybenzoyl, klorbenzoyl eller brombenzoyl; metyl-, etyl-, propyl-, butyl-, fenyl-, benzyl-, p-broro-, p-metoksy- eller p-metylfenylsulfonyl; metoksy-, etoksy-, n- eller 1-propoksy- eller n-, i-og t-butoksykarbonyl, eller fenoksykarboyl, benzyloksykarbonyl, metyl- eller metoksy- eller klorfenoksykarbonyl eller -benzyloksykarbonyl eller 9-fluorenylmetoksykarbonyl.
23.
Oligonukleotid ifølge krav 1, karakterisert ved at den omfatter minst en strukturell enhet av to etterfølgende nukleosider, hvor den strukturelle enheten omfatter formel Ila eller Ile hvor Rx er H, C1-C4 alkyl eller cl~c4 alkoksy; R2 er H; C1-C4 alkyl; fenyl; fenyl substituert med OH, OR'", 0( CH2CH20 )nR"', C6-C10 aryl eller C3-C9 heteroaryl; en interkalator, amino-Cx-C4 alkyl; ci~c4 alkylamino; ammonium-Cx-C4 alkyl; C^- C^ alkylammonium; amino-C^- C^ alkylaminosulfonyl; C±- C$ alkylamlno-C1-C4 alkylaminosulfonyl eller (CH3)2NCH2CH2; R3 er H eller C^- C^ alkyl; R'" er (^-04 alkyl; X er H, OH, 0-Cx-C4 alkyl, -0-(CH2-CH2-0) mE eller -0-CH2-C(OR)H-CH2-0H; Y er H, 0-Ca-C4 alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(0R )H-CH2-0H; R er H eller C-l-C^ alkyl; m er et helt tall fra 1 til 4; n er et helt tall fra 1 til 4 og B er et purin- eller pyrimidinradikal eller en analog derav.
24.
Oligonukleotid ifølge krav 23, karakterisert ved at % er H eller Cy- C^ alkyl; R2 er H; C\- C± alkyl;
fenyl eller fenyl substituert med OH, OR'", 0(CH2CH20)nR<*>'', c6~c10 aryl ellre C3-C9 heteroaryl; R3 er H eller C1-C4 alkyl; R<*>" er C^ C^ alkyl; X er H, OH, O-Ci^ alkyl, -0-(CH2-<C>H2-0)mH eller -0-CH2-<C>(OR)H-CH2-0H; Y er H, 0-C1-C4 alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0H; R er H eller C±- Ciq alkyl; m er et helt tall fra 1 til 4; n er et helt tall fra 1 til 4 og B er et purin- eller pyrimidinradikal eller en analog derav.
25.
Oligonukleotid ifølge krav 24, karakterisert ved at Rj er H eller Cy- C^ alkyl; R2 er H; 0-^-04 alkyl eller fenyl; R3 er H eller 0-^4 alkyl; X er H, OH, 0-C1-C4 alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0H; Y er H, O-Ci-04 alkyl, -0-{CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0H; R er H eller Ci~ C10 alkyl; m er et helt tall fra 1 til 4; n er et helt tall fra 1 til 4 og B er et purin- eller pyrimidinradikal eller en analog derav.
26.
Oligonukleotid ifølge krav 25, karakterisert ved at Ri er H eller Cy- C^ alkyl; R2 er H; Cy- C^ alkyl eller fenyl; R3 er H eller Cy- C^ alkyl; X er H, OH eller 0-€^-04 alkyl; Y er H eller Q- C^- C^ alkyl; og B er et purin-eller pyrimidinradikal eller en analog derav.
27.
Oligonukleotid ifølge krav 26, karakterisert ved at Rj er H; Rg er H eller fenyl; R3 er H eller metyl; X er H eller 0-CH3; Y er H eller 0-CH3; og B er et pyrimidinradikal eller en analog derav.
28.
Nukleotiddimer, karakterisert ved formelen Illa, Illb eller ille
hvor
Rx er H, C1-C4 alkyl eller C1-C4 alkoksy;
R2 er H; C1-C4 alkyl; fenyl; fenyl substituert med OH, OR'<*>',
0(CH2CH20)nR'" , C6-<C>10 aryl eller C3-Cg heteroaryl; en interkalator; amino-Cx-C4 alyl; C1-C4 alkylamino; ammonium-C1-C4 alkyl; C1-C4 alkylammonium; amino-Cx-C4 alkylaminosulfonyl; C1-C4 alkylamino-C1-C4 alkylaminosulfonyl eller (CH3)2NCH2CH2;
R3 er H eller C^- C^ alkyl;
R3» er H; OH; C^- C^ alkyl; O- Cy- C^ alkyl; 0(CH2CH20 )nR*''; R' og R'' er H eller en OH-beskyttende gruppe eller R" er et radikal som danner en fosforinneholdende nukleotidbrogruppe;
X er H, 0HX, O-C-l^ alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-
C(0R)H-CH2-0Hx;
Y er H, O- Cy- C^ alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(OR)H-
CH2-OH;
R er B eller C^- C^ q alkyl;
Rx er H eller en OH-beskyttende gruppe;
m er et helt tall fra 1 til 4;
n er et helt tall fra 1 til 4; og
B er et purin- eller pyrimidinradikal eller analoge derav, med den forutsetning at enten X eller Y er H og at X og Y ikke er identiske.
29.
Dimer ifølge krav 28, karakterisert ved at den fosforinneholdende brogruppen er et radikal med formelen
hvor Ya er hydrogen, CX-<C>X2 alkyl, C^-C^j aryl, C7~<C>2<q >aralkyl, Cy-<C>2Q alkaryl, -0RD, <->SRD, -NH2, primær amino, sekundær amino, 0 ® M ® eller ; Xa er oksygen eller svovel; Ra er hydrogen, M® , Cx-C12 alkyl, C2-C12<a>lkenyl eller C^-C-ljj aryl, eller gruppen Ra0 er N-heteroaryl-N-yl med 5 ringledd og 1 til 3 N-atomer; RD er hydrogen, Cj-CX2 alkyl eller C6-C12 aryl; og M© er Na© , K & , Li<#>" , NH4® eller primært, sekundært, tertiært eller kvaternært ammonium; hvor alkyl, aryl, aralkyl og alkaryl 1 Ya, Ra og R^ er ikke-substituert eller substituert med alkoksy, alkyltio, halogen, -CN, -N02, fenyl, nitrogenyl eller halofenyl.
30.
Dimeren ifølge krav 28, karakterisert ved at brogruppen R" er -P(0)0^-, -P{0)S*3-, -P(S)S^-, -P(0R1É)-
, -P(0)N<R>17Ri8-. eller -CH2-, hvor <R>16 er H eller C1-C6 alkyl, og R17 og RXg uavhengig av hverandre har samme betydning som Rjf,.
31.
Dlmer Ifølge krav 30, karakterisert ved at brogruppen er -P(0)0
32.
Dimer ifølge krav 28, karakterisert ved at den omfatter formelen Illa eller Ille, hvor Rx er H, C1-C4 alkyl eller Cy- C^ alkoksy; R2 er H; C^- C^ alkyl; fenyl, fenyl substituert med OH, OR"', 0(CH2CH20 )nR"', C6-C10 aryl eller C3-Cg heteroaryl; en interkalator; amino-Cx-C4 alkyl; Cx-C4 alkylamino; ammonlum-Cj-C4 alkyl; C1-C4 alkylammonium; amino-cl~c4 alkylaminosulfonyl; 0^-04 alkylamino-Cx-C4 alkylaminosulfonyl eller (CH3)2NCH2CH2; R3 er H eller Cy- C^ alkyl; R"<* >er Ci- C^ alkyl; X er H, 0RX, O-Cj-Cj alkyl, -0-{CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(OR)H-CH2-ORX; Y er H, 0-^-04 alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0H; R er H eller Cx-<C>10 alkyl; Rx er H eller en OH-beskyttende gruppe; m er et helt tall fra 1 til 4; n er et helt tall fra 1 til 4 og B er et purin- eller pyrimidinradikal eller en analog derav.
33.
Dimer ifølge krav 32, karakterisert ved at Rx er H eller C^- C^ alkyl; R2 er H; Cjl-C4 alkyl; fenyl eller fenyl substituert med OH, OR"', 0(CH2CH20)nR'" , C6-C10 ar<y>l eller C3-Cg heteroaryl; Rg er H eller Cj-C4 alkyl; R"<*> er Cj-C4 alkyl; X er H, 0RX, O- Cy- C^ alkyl, -0-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0Rx; Y er H, 0- Cy- C^^ alkyl, -0-( CH2CH2-0 )mH eller -0-CH2-C(OR)H-CH2-0H; R er H eller C1-C10 alkyl; Rx er H eller en OH-beskyttende gruppe; m er et helt tall fra 1 til 4; n er et helt tall fra 1 til 4 og B er et purin- eller pyrimidinradikal eller en analog derav.
34 .
Dimer Ifølge krav 33, karakterisert ved at Kx er H eller C^-C^ alkyl; R2 er H; Cy- C^ alkyl eller fenyl; R3 er E eller Cy- C^ alkyl; X er H, 0RX, O- C^- C^ alkyl, -0-(CH2-CE2-0)mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-0Rx, Y er E, O- C^- C^ alkyl, -O-(CH2-CH2-0)mH eller -0-CH2-C(0R)H-CH2-OH; R er H eller C^- C^ q alkyl; Rx er H eller en OH-beskyttende gruppe; m er et helt tall fra 1 til 4; n er et helt tall fra 1 til 4 og B er et purin- eller pyrimidinradikal eller en analog derav.
35.
Dimer ifølge krav 34, karakterisert ved at Rx er H eller C^- C^ alyl; R2 er H; C^- C^ alkyl eller fenyl; R3 er H eller C^ C^ alkyl; X er H, 0Rfx eller Q- C^- C^ alkyl; Y er H eller O- C^- C^ alkyl; Rx er H eller en OH-beskyttende gruppe; og B er et purin- eller pyrimidinradikal eller en analog derav.
36.
Dimer ifølge krav 35, karakterisert ved at Rx er H; R2 er H eller fenyl; R3 er H eller metyl; X er H eller 0-CH3; Y er H eller 0-CH3; og B er et pyrimidinradikal eller en radikal derav.
37.
Fremgangsmåte for fremstilling av en dimer Ifølge krav 28, karakterisert ved at den omfatter (a) en forbindelse med formel VI
hvor
Rx er H, Cx-C4 alkyl eller Cy- C^ alkoksy; R * er H eller en OH-beskyttende gruppe; X er H, OH, O-C-^-^ alkyl, -0-(CH2-CH2-0)n,H- eller -0-CH2-C(OR )H-CH2-OH; R er H eller Cy- Cyo alkyl; Rx er H eller en OH-beskyttende gruppe og B er et purin- eller pyrimidinradikal eller en analog derav;
blir reagert med en forbindelse med formel VII
hvor
R2 er H; C1- Ci alkyl; fenyl, fenyl substituert med OH, OR''', 0(CH2CH20)nR** *, C6-<C>10 aryl eller C3-Cg heteroaryl; en interkalator; amino-Ci-C4 alkyl; Cx-C4 alkylamino; ammonium-Cl-C4 alkyl5<c>l~c4 alkylammonium; amino-Cx-C4 alkylaminosulfonyl; Cx-C4 alkylamino-C1-C4 alkylaminosulfonyl; eller (CH3)2NCH2CH2; R3 er H eller C1-C4 alkyl; R" er H eller en OH-beskyttende gruppe eller et radikal som danner en fosforinneholdende nukleotidbrogruppe; R''' er Cx-C4 alkyl;
Y er H, 0-C1-C4 alkyl, -0-(CH2-C<H>2-0)mH eller -0-CH2-C(OR)H-CH2-0H; og B er et purin- eller pyrimidinradikal eller en analog derav; eller (b) en forbindelse med formel VIII
hvor Rx, fig, fi', X og B er som definert ovenfor, blir reagert med en forbindelse med formel IX
hvor
R3, R", Y og B er som definert ovenfor; eller (c) en forbindelse med formel X
hvor Rx, R', X og B er som definert ovenfor, blir reagert med en forbindelse med formel XI hvor
R3, R", Y og B er som definert ovenfor, og Z er halogen, f.eks. F, Cl, Na; eller (d) en forbindelse med formel XII
hvor
Ej, R', X og B er som definert ovenfor,
blir reagert med en forbindelse med formel XIII
hvor
Rg, R". Y og B er som definert ovenfor.
38.
Anvendelse av en dimer ifølge krav 28 for fremstilling av oligonukleotider som omfatter en eller flere identiske eller forskjellige dimerenheter av forbindelser med formel Illa, Illb, Ille og/eller Illa, hvor oligonukleotidene omfatter 2 til 200 monomerenheter.
39.
Anvendelse Ifølge krav 38 for fremstilling av oligonukleotider med 2 til 100 monomerenheter.
40.
Anvendelse ifølge krav 39 for fremstilling av oligonukleotider med 2 til 50 monomerenheter.
41.
Anvendelse Ifølge krav 40 for fremstilling av oligonukleotider med 2 til 20 monomerenheter.
42.
Oligonukleotid ifølge krav 1 for anvendelse i en terapeutisk prosess for behandling av sykdommer i pattedyr inkludert mennesker ved hjelp av interaksjon med nukleotidsekvensene i kroppen.
43.
Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det omfatter en effektiv mengde av- et oligonukleotid ifølge krav 1 alene eller sammen med andre aktive ingredienser, en farmasøytisk bærer og hvis passende, hjelpestoffer.
44.
Oligonukleotid ifølge krav 1, karakterisert ved at det omfatter minst en strukturell enhet av to etterfølgende nukleosider, hvor den strukturelle enheten omfatter formel Ila, Hb eller lic.
45.
Oligonukleotid ifølge krav 44, karakterisert ved det omfatter minst en strukturell enhet av to etterfølgende nukleosider, hvor den strukturelle enheten omfatter formel Ila.
46.
Oligonukleotid ifølge krav 44, karakterisert ved det omfatter minst en strukturell enhet av to etterfølgende nukleosider, hvor den strukturelle enheten omfatter formel Hb.
47.
Oligonukleotid ifølge krav 44, karakterisert ved det omfatter minst en strukturell enhet av to etterfølgende nukleosider, hvor den strukturelle enheten omfatter formel He.
48.
Dimer ifølge krav 28, karakterisert ved at den har formel Hia, Illb eller Ille.
49.
Dimer ifølge krav 48,karakterisert ved at den har formel Illa.
50: Dimer ifølge krav 48,karakterisert ved at den har formel Illb.
51.
Dimer ifølge krav 48, karakterisert ved at den har formel Ille.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB9401446A GB9401446D0 (en) | 1994-01-26 | 1994-01-26 | Modified oligonucleotides |
| GB9412526A GB9412526D0 (en) | 1994-06-22 | 1994-06-22 | Modified oligonucleotides |
| PCT/EP1995/000156 WO1995020597A1 (en) | 1994-01-26 | 1995-01-17 | Modified oligonucleotides |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO963092D0 NO963092D0 (no) | 1996-07-24 |
| NO963092L NO963092L (no) | 1996-09-16 |
| NO316902B1 true NO316902B1 (no) | 2004-06-21 |
Family
ID=26304218
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19963092A NO316902B1 (no) | 1994-01-26 | 1996-07-24 | Oligonukleotider og modifiserte nukleotiddimerer, samt fremgangsmate for a fremstille dimeren og anvendelse av denne for fremstilling av oligonukleotidene, og et farmasoytisk preparat omfattende oligonukleotidene |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6066447A (no) |
| EP (1) | EP0741741B1 (no) |
| JP (1) | JPH09508134A (no) |
| AT (1) | ATE222921T1 (no) |
| AU (1) | AU697134B2 (no) |
| CA (1) | CA2180727A1 (no) |
| DE (1) | DE69527942T2 (no) |
| DK (1) | DK0741741T3 (no) |
| FI (1) | FI116677B (no) |
| HU (1) | HU220423B (no) |
| IL (1) | IL112424A0 (no) |
| NO (1) | NO316902B1 (no) |
| WO (1) | WO1995020597A1 (no) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MA23394A1 (fr) * | 1993-12-13 | 1995-07-01 | Procter & Gamble | Compositions liquides concentrees d'assouplissement textile , de viscosite stable. |
| US6166197A (en) * | 1995-03-06 | 2000-12-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds having pyrimidine nucleotide (S) with 2'and 5 substitutions |
| US6222025B1 (en) | 1995-03-06 | 2001-04-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Process for the synthesis of 2′-O-substituted pyrimidines and oligomeric compounds therefrom |
| AU7286696A (en) * | 1995-10-13 | 1997-05-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antisense oligomers |
| US5808035A (en) * | 1995-12-08 | 1998-09-15 | Usher; David A. | Protected nucleoside and method for its synthesis |
| WO1998000434A1 (en) * | 1996-06-28 | 1998-01-08 | Novartis Ag | Modified oligonucleotides |
| WO1999001454A1 (en) | 1997-07-03 | 1999-01-14 | Du Pont Pharmaceuticals Company | Imidazopyrimidines and imidazopyridines for the treatment of neurological disorders |
| US6878716B1 (en) | 1998-06-02 | 2005-04-12 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Compounds specific to adenosine A1 receptor and uses thereof |
| US6686366B1 (en) | 1998-06-02 | 2004-02-03 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Compounds specific to adenosine A3 receptor and uses thereof |
| ID27600A (id) | 1998-06-02 | 2001-04-12 | Osi Pharm Inc | KOMPOSISI PIROLO (2,3d) PIRIMIDIN DAN PENGGUNAANNYA |
| US6365589B1 (en) | 1998-07-02 | 2002-04-02 | Bristol-Myers Squibb Pharma Company | Imidazo-pyridines, -pyridazines, and -triazines as corticotropin releasing factor antagonists |
| US7160890B2 (en) | 1999-12-02 | 2007-01-09 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Compounds specific to adenosine A3 receptor and uses thereof |
| US6680322B2 (en) | 1999-12-02 | 2004-01-20 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Compounds specific to adenosine A1 receptors and uses thereof |
| US6664252B2 (en) | 1999-12-02 | 2003-12-16 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | 4-aminopyrrolo[2,3-d]pyrimidine compounds specific to adenosine A2a receptor and uses thereof |
| US6673802B2 (en) | 2000-12-01 | 2004-01-06 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Compounds specific to adenosine A3 receptor and uses thereof |
| US6680324B2 (en) | 2000-12-01 | 2004-01-20 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Compounds specific to adenosine A1 receptors and uses thereof |
| WO2003048120A2 (en) | 2001-11-30 | 2003-06-12 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | 2-aryl pyrrologpyrimidines for a1 and a3 receptors |
| US20030229067A1 (en) | 2001-12-20 | 2003-12-11 | Arlindo Castelhano | Pyrrolopyrimidine A2b selective antagonist compounds, their synthesis and use |
| US6916804B2 (en) | 2001-12-20 | 2005-07-12 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Pyrimidine A2b selective antagonist compounds, their synthesis and use |
| KR100649352B1 (ko) * | 2005-04-30 | 2006-11-27 | 주식회사 하이닉스반도체 | 반도체소자의 제조 방법 |
| US7820810B2 (en) | 2007-03-19 | 2010-10-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Process for the synthesis of 2′-O-substituted purine nulceosides |
| MX2011010050A (es) | 2009-03-25 | 2011-12-14 | Univ Texas | Composiciones para estimulación de resistencia inmune innata de mamiferos a patógenos. |
| WO2016044839A2 (en) | 2014-09-19 | 2016-03-24 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Compositions and methods for treating viral infections through stimulated innate immunity in combination with antiviral compounds |
| AR105540A1 (es) * | 2015-07-30 | 2017-10-11 | Raptor Pharmaceuticals Inc | Inhibidores de fucosidasas |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4806463A (en) * | 1986-05-23 | 1989-02-21 | Worcester Foundation For Experimental Biology | Inhibition of HTLV-III by exogenous oligonucleotides |
| EP0266099A3 (en) * | 1986-10-28 | 1990-09-19 | The Johns Hopkins University | Oligonucleoside alkyl or arylphosphonate derivatives capable of crosslinking with or cleaving nucleic acids |
| AU636573B2 (en) * | 1988-02-26 | 1993-05-06 | Worcester Foundation For Biomedical Research, Inc. | Inhibition of htlv-iii by exogenous oligonucleotides |
| DE69034150T2 (de) * | 1989-10-24 | 2005-08-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc., Carlsbad | 2'-Modifizierte Oligonukleotide |
| US5378825A (en) * | 1990-07-27 | 1995-01-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogs |
| DE69115702T2 (de) * | 1990-08-03 | 1996-06-13 | Sterling Winthrop Inc | Verbindungen und verfahren zur unterdrückung der genexpression |
| JPH06505704A (ja) * | 1990-09-20 | 1994-06-30 | ギリアド サイエンシズ，インコーポレイテッド | 改変ヌクレオシド間結合 |
-
1995
- 1995-01-17 AT AT95906958T patent/ATE222921T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-01-17 US US08/687,456 patent/US6066447A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-01-17 DK DK95906958T patent/DK0741741T3/da active
- 1995-01-17 HU HU9602040A patent/HU220423B/hu not_active IP Right Cessation
- 1995-01-17 JP JP7519861A patent/JPH09508134A/ja active Pending
- 1995-01-17 DE DE69527942T patent/DE69527942T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-01-17 EP EP95906958A patent/EP0741741B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-17 CA CA002180727A patent/CA2180727A1/en not_active Abandoned
- 1995-01-17 AU AU15347/95A patent/AU697134B2/en not_active Ceased
- 1995-01-17 WO PCT/EP1995/000156 patent/WO1995020597A1/en active IP Right Grant
- 1995-01-24 IL IL11242495A patent/IL112424A0/xx unknown
-
1996
- 1996-07-24 NO NO19963092A patent/NO316902B1/no unknown
- 1996-07-26 FI FI962980A patent/FI116677B/fi active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH09508134A (ja) | 1997-08-19 |
| EP0741741B1 (en) | 2002-08-28 |
| HUT75704A (en) | 1997-05-28 |
| HU220423B (hu) | 2002-01-28 |
| US6066447A (en) | 2000-05-23 |
| IL112424A0 (en) | 1995-03-30 |
| EP0741741A1 (en) | 1996-11-13 |
| AU1534795A (en) | 1995-08-15 |
| WO1995020597A1 (en) | 1995-08-03 |
| FI962980A (fi) | 1996-07-26 |
| ATE222921T1 (de) | 2002-09-15 |
| DK0741741T3 (da) | 2002-12-23 |
| HU9602040D0 (en) | 1996-09-30 |
| DE69527942D1 (de) | 2002-10-02 |
| NO963092L (no) | 1996-09-16 |
| FI116677B (fi) | 2006-01-31 |
| NO963092D0 (no) | 1996-07-24 |
| AU697134B2 (en) | 1998-09-24 |
| FI962980A0 (fi) | 1996-07-26 |
| CA2180727A1 (en) | 1995-08-03 |
| DE69527942T2 (de) | 2003-03-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO316902B1 (no) | Oligonukleotider og modifiserte nukleotiddimerer, samt fremgangsmate for a fremstille dimeren og anvendelse av denne for fremstilling av oligonukleotidene, og et farmasoytisk preparat omfattende oligonukleotidene | |
| AU682576B2 (en) | Nucleosides and oligonucleotides having 2'-ether groups | |
| US5969116A (en) | Nucleosides and oligonucleotides having 2'-ether groups | |
| US6600032B1 (en) | 2′-O-aminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides | |
| US5789562A (en) | Nucleotide monomers containing 8-azapurin bases or a derivative thereof, their preparation and their use in making modified olignonucleotides | |
| US5610300A (en) | Carbocyclic nucleosides containing bicyclic rings, oligonucleotides therefrom, process for their preparation, their use and intermediates | |
| KR20210005057A (ko) | 올리고뉴클레오티드 조성물 및 이의 이용 방법 | |
| CA2080640A1 (en) | Bicyclic nucleosides, oligonucleotides, process for their preparation and intermediates | |
| SG171914A1 (en) | Method for the synthesis of phosphorus atom modified nucleic acids | |
| WO2001002423A9 (en) | 2'-guanidinyl-substituted oligonucleotides and gene expression modulation therewith | |
| CA2162075A1 (en) | Modified oligonucleotides, their preparation and their use | |
| CZ274596A3 (en) | Oligonucleotide n3 - p5 phosphoramidates and process of their synthesis and hybridization | |
| JP7263236B2 (ja) | 新規二環式ヌクレオシドおよびそれから調製されたオリゴマー | |
| JP2003508062A (ja) | ポリ（エーテル−チオエーテル）核酸、ポリ（エーテル−スルホキシド）核酸およびポリ（エーテル−スルホン）核酸 | |
| WO1998000434A1 (en) | Modified oligonucleotides | |
| US6277982B1 (en) | Alkylation of alcohols, amines, thiols and their derivatives by cyclic sulfate intermediates | |
| CA2233460A1 (en) | Compositions and methods for the synthesis of organophosphorus derivatives | |
| US6673912B1 (en) | 2′-O-aminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides | |
| WO2004048376A1 (ja) | 二環性ナフチリジンヌクレオシド | |
| Li et al. | Advances in Chemical Synthesis of Structurally Modified Bioactive RNAs | |
| JP3911703B2 (ja) | アンチセンス核酸同族体 | |
| Fairhurst et al. | Synthesis and duplex stability of oligodeoxyribonucleotides containing a 2′→ 5′-amide linkage | |
| JPH08119945A (ja) | 新規ヌクレオチド類縁体 |