NO179778B

NO179778B - Process for preparing dosage form for feeding biologically active material to fish

Info

Publication number: NO179778B
Application number: NO905386A
Authority: NO
Inventors: Odd Finn Ellingsen; Kjell Erik Nordby; Knut Eunar Rasmussen
Original assignee: Alpharma As; Apothekernes Lab; Al Ind As
Priority date: 1988-06-15
Filing date: 1990-12-13
Publication date: 1996-09-09
Also published as: NO905386L; NO179778C; NO905386D0

Description

Oppfinnelsens område Field of the invention

Foreliggende oppfinnelse angår fremstilling av en farmasøy-tisk doseringsform for medisinering av fisk. The present invention relates to the production of a pharmaceutical dosage form for the medication of fish.

Bakgrunn for oppfinnelsen Background for the invention

Flere problemer påtreffes ved mating og medisinering av fisk. Oppførselen hos fisk ved mating påvirkes sterkt av de rådende betingelser ved matetidspunktet. Slike betingelser innbefatter for eksempel temperaturen og surheten til vannet, nivået av oppløste nitrater og andre substanser i vannet, konsistensen og naturen til foret såsom hardhet, smak og flyteegenskaper og sunnhetstilstanden hos fisken. Several problems are encountered when feeding and medicating fish. The behavior of fish when feeding is strongly influenced by the prevailing conditions at the time of feeding. Such conditions include, for example, the temperature and acidity of the water, the level of dissolved nitrates and other substances in the water, the consistency and nature of the feed such as hardness, taste and buoyancy and the health of the fish.

Kjente metoder for fiskemedisinering innbefatter å blande medikamentet med fiskeforet. Oral tilførsel av medisiner på denne måte kompliseres av tendensen hos de fleste medikamenter til på uheldig måte å innvirke på smaken til foret som blir uakseptabelt for fisken. Videre fremstilles mange typer kjente formedisinerte fortyper i form av pelleter. Medikament og spesielt antibiotika blandes i tørrforpel-leter uten å ta i betraktning de farmasøytiske aspekter av drogesammensetning og selges som medikamenterte pelleter for fisk. Pelletene er særpreget ved dårlig biotilgjengelighet av medikamentet. Pelletene synker også for raskt for inntak av fisken. Den ubrukte del av det medisinerte for representerer en forurensningskilde i fiskeoppdrettsan-legget eller andre omgivelser hvor det medisinerte for frigis. Known methods of fish medication include mixing the drug with the fish feed. Oral administration of medicines in this way is complicated by the tendency of most medicines to adversely affect the taste of the food, which becomes unacceptable to the fish. Furthermore, many types of known premedicated protypes are produced in the form of pellets. Medicines and especially antibiotics are mixed in dry pellets without taking into account the pharmaceutical aspects of drug composition and sold as medicated pellets for fish. The pellets are characterized by poor bioavailability of the drug. The pellets also sink too quickly for the fish to consume. The unused part of the medicated bait represents a source of pollution in the fish farming facility or other surroundings where the medicated bait is released.

Mange fiskemedisiner er toxiske i høye konsentrasjoner. Således kan behandling av foret belagt med medikamentene være skadelige for mennesker. Fiskeoppdrettere som anvender "mykt" medisinert for fremstiller generelt dette ved å blande medikamentet med tilgjengelige formaterialer. Slike ikke-industrielle blandingsmetoder gir ikke tilstrekkelig kontroll av konsentrasjonen av aktivt materiale i foret. Blandingen av store mengder biologisk aktive materialer representerer en helserisiko for fiskeoppdretteren. Utblan-dingen av medikamentet i vann fra disintegrert for eller bæremateriale representerer en ytterligere Many fish medicines are toxic in high concentrations. Thus, treatment of lining coated with the drugs can be harmful to humans. Fish farmers who use "soft" medicated feed generally prepare this by mixing the drug with available precursors. Such non-industrial mixing methods do not provide sufficient control of the concentration of active material in the feed. The mixture of large quantities of biologically active materials represents a health risk for the fish farmer. The dispersion of the drug in water from disintegrated lining or carrier material represents a further one

forurensningskilde eller direkte skader for miljøet. source of pollution or direct damage to the environment.

Flere metoder har blitt foreslått for å lage fiskefor mer akseptabelt og lettere tilgjengelig for fisk. US Patent nr. 4.413.014 beskriver et for eller agnmateriale omfattende et fast, spiselig, porøst kornmateriale mettet med en fiske-tiltrekkende væske. Artikkelen fremstilles med en kjerne av fast f6rmateriale og kan også være belagt med et fast, spiselig materiale. Several methods have been proposed to make fish feed more acceptable and more readily available to fish. US Patent No. 4,413,014 describes a lining or bait material comprising a solid, edible, porous granular material saturated with a fish-attracting liquid. The article is produced with a core of solid feed material and can also be coated with a solid, edible material.

US patenter nr. 4.3 93.087 og 2.358.320 beskriver fremgangsmåter for å gjøre fiskefor mer tilgjengelig for fisk ved å påvirke forets flyteegenskaper. Førstnevnte patent beskriver en fremgangsmåte for å fremstille flytende forpelleter dannet fra en kombinasjon av fiskemel og et proteininne-holdende materiale innbefattende ekspanderte kornpartikler for å gjøre pelletene flytende i vann. US Patent nr. 2.358-.320 beskriver et fiskefor omfattende et materiale som er tettere enn vann, men som er gjort flytende i vann ved å danne materialet til hule pelleter. US patents no. 4,3 93,087 and 2,358,320 describe methods of making fishing forage more accessible to fish by affecting the buoyancy of the forage. The first-mentioned patent describes a method for producing liquid pre-pellets formed from a combination of fishmeal and a protein-containing material including expanded grain particles to make the pellets liquid in water. US Patent No. 2,358-320 describes a fishing line comprising a material which is denser than water but which is liquefied in water by forming the material into hollow pellets.

Internasjonal Patentsøknad nr. WO 85/05015 beskriver en fremgangsmåte for å gjøre foret mer attraktivt for fisk. Pelleter med en myk konsistens dannes med et overflatebe-legg av et herdbart gelmateriale såsom alginat, guargummi, tragakantgummi, pektin eller gelatin. Pelletene kan gis forskjellige flyteegenskaper. International Patent Application No. WO 85/05015 describes a method for making the feed more attractive to fish. Pellets with a soft consistency are formed with a surface coating of a hardenable gel material such as alginate, guar gum, tragacanth gum, pectin or gelatin. The pellets can be given different flow characteristics.

Selvom de ovenfor beskrevne referanser er interessante beskriver de ikke doseringsformer som inneholder medikamenter og heller ikke angår referansene problemene som kan oppstå ved oral tilførsel av medikamenter til fisk. Although the references described above are interesting, they do not describe dosage forms containing drugs, nor do the references concern the problems that can arise when drugs are administered orally to fish.

"Oxytetracycline Vet. EWOS 1OG/KG Medisin Pellet for Fisk - 9P" , fremstilt av EWOS AB, Sodertålje, Sverige, "Oxytetracycline Vet. EWOS 1OG/KG Medicine Pellet for Fish - 9P", manufactured by EWOS AB, Sodertålje, Sweden,

(heretter "Produkt A") fremstilles ved å blande medikament i fiskefor i henhold til trykkpelleterende teknikker fulgt av tørking. Medikamentert for fremstilt i henhold til slike teknikker er ikke flytende, men synker i stedet raskt og reduserer muligheten for opptak av fisk og øker forurensning av miljøet. Videre gir slike for liten kontroll over mengden av medikament som faktisk opptas av fisken og lider av dårlig absorbsjon og biotilgjengelighet av medikamentet. (hereinafter "Product A") is produced by mixing drug in fish feed according to pressure pelleting techniques followed by drying. The medicine produced according to such techniques is not liquid, but instead sinks quickly, reducing the possibility of uptake by fish and increasing pollution of the environment. Furthermore, such provide too little control over the amount of drug that is actually absorbed by the fish and suffer from poor absorption and bioavailability of the drug.

"Skretting Tess Medicine Pellet for Fish (7.5 g OTC/Kg)", fremstilt av T. Skretting A/S, Stavanger, Norge (heretter "Produkt B") fremstilles ved å påføre et belegg av medikament til overflaten av tørt fiskefor. Medikamentet suspenderes i olje og sprøytes på overflaten av f6ret. Størstedelen av medikamentet forblir på overflaten av forpelleten mens resten absorberes inn i foret sammen med oljen. Medikamentert for fremstilt på denne måte lider av å være usmakelig for fisk på grunn av smaken eller lukten av medikamentet avleiret på foroverflaten. Anvendelsesgraden hos fisken er spesielt dårlig hvor medikamentet har en karakteristisk eller en gjennomtrengende smak som for eksempel hos sulfonamider eller nifurazolidon. Siden medikamentet er tilstede i hovedsak på overflaten av f6ret, vil fiskeoppdretteren eller arbeideren være eksponert for dette. Videre er nøyaktigheten ved dosering iboende dårlig for slike får. "Skretting Tess Medicine Pellet for Fish (7.5 g OTC/Kg)", manufactured by T. Skretting A/S, Stavanger, Norway (hereafter "Product B") is produced by applying a coating of medicine to the surface of dry fish feed. The medication is suspended in oil and sprayed on the surface of the fur. The majority of the drug remains on the surface of the pre-pellet while the rest is absorbed into the lining along with the oil. The drug so prepared suffers from being unpalatable to fish due to the taste or smell of the drug deposited on the front surface. The degree of application in fish is particularly poor where the drug has a characteristic or a penetrating taste, such as with sulfonamides or nifurazolidone. Since the drug is mainly present on the surface of the feed, the fish farmer or worker will be exposed to it. Furthermore, the accuracy of dosing is inherently poor for such sheep.

Det er således et mål for foreliggende oppfinnelse å frem-skaffe en doseringsform for medikamentering av fisk som eliminerer de ovenfor nevnte ulemper mens den på samme tid tillater effektiv avgivelse av medikament til fisk. It is thus an aim of the present invention to provide a dosage form for medication of fish which eliminates the above-mentioned disadvantages while at the same time allowing effective delivery of medication to fish.

Oppsummering av oppfinnelsen Summary of the invention

For å oppnå disse mål er det fremskaffet en fremgangsmåte for fremstilling av en farmasøytisk doseringsform for tilførsel av et biologisk aktivt middel til fisk. In order to achieve these goals, a method has been provided for the production of a pharmaceutical dosage form for supplying a biologically active agent to fish.

Doseringsformen fremstilt ifølge oppfinnelsen omfatter de trekk som er angitt i krav l's ingress, og er spesielt bygget opp av et ytre lag som i hovedsak er impermeabelt for vann og det aktive middel. Det ytre lag omfatter fiskemel, evt. et vegetabilsk materiale og et vanndig ekstrakt fra marine + animalsk materiale og vann. Minst ett kammer inneholdende minst ett aktivt middel er omgitt av det ytre lag. The dosage form produced according to the invention includes the features stated in claim 1's preamble, and is particularly built up of an outer layer which is essentially impermeable to water and the active agent. The outer layer includes fishmeal, possibly a vegetable material and an aqueous extract from marine + animal material and water. At least one chamber containing at least one active agent is surrounded by the outer layer.

Det animalske materialet omfatter fortrinnsvis fiskemel. Det ytre lag inneholder videre fortrinnsvis et bindemiddel for det animalske eller vegetabilske materialet. Fremgangsmåten er særpreget ved at det ytre lag fremstilles ved hjelp av koekstrudering sammen med det biologisk aktive materiale. The animal material preferably comprises fishmeal. The outer layer also preferably contains a binder for the animal or vegetable material. The method is characterized by the fact that the outer layer is produced using co-extrusion together with the biologically active material.

Det indre kammer blir ved koekstruderingen delvis fylt med en blanding av det biologisk aktive materialet i en viskøs suspensjon omfattende hjelpematerialer, absorbsjonsøkende materialer eller bærematerialer for å forbedre biotilgjengeligheten og stabiliteten av det aktive middel. Det indre kammer kan også være delvis fylt med et fluidum, fortrinnsvis en gass eller gassblanding såsom luft. Inerte gasser såsom nitrogen kan bli brukt. Flyteegenskapene av doseringsformen i vann kan påvirkes ved å justere volumet av de indre kammere. Oppdriften kan også justeres ved utvelgelse av væsker anvendt til å fylle kammeret. Således virker kammeret effektivt som et hjelpemiddel for selektivt å påvirke flyteegenskapene til doseringsformen i vann. During co-extrusion, the inner chamber is partially filled with a mixture of the biologically active material in a viscous suspension comprising auxiliary materials, absorption-increasing materials or carrier materials to improve the bioavailability and stability of the active agent. The inner chamber can also be partially filled with a fluid, preferably a gas or gas mixture such as air. Inert gases such as nitrogen may be used. The flow properties of the dosage form in water can be influenced by adjusting the volume of the inner chambers. Buoyancy can also be adjusted by selecting liquids used to fill the chamber. Thus, the chamber acts effectively as an aid to selectively influence the flow properties of the dosage form in water.

En fremgangsmåte for å behandle syk fisk og en metode for profylaktisk behandling av fisk er fremskaffet ved å tilfø-re minst ett biologisk aktivt middel til fisken i form av en farmasøytisk doseringsform fremstilt i henhold til oppfinnelsen. A method for treating sick fish and a method for prophylactic treatment of fish has been provided by adding at least one biologically active agent to the fish in the form of a pharmaceutical dosage form prepared according to the invention.

Med "biologisk aktivt middel" eller "aktivt middel" menes ikke bare farmasøytiske substanser for behandling eller forhindring av lidelser eller sykdommer som kan inntreffe hos fisk, men også andre biopåvirkelige materialer som kan anvendes i fiskeoppdrett eller fiskedyrkning såsom for eksempel vekststimulerende eller vekstregulerende substanser. Videre er det påtenkt at ett eller fler biologisk aktive midler kan være inneholdt i doseringsformen fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse. Således skal, med mindre annet er angitt, referanse til " et biologisk aktivt middel" i entall i foreliggende beskrivelse og medfølgende krav, være forstått også å kunne omfatte innbe-fattelsen av flere aktive midler i doseringsformen. By "biologically active agent" or "active agent" is meant not only pharmaceutical substances for the treatment or prevention of ailments or diseases that can occur in fish, but also other bio-influential materials that can be used in fish breeding or fish cultivation, such as, for example, growth-stimulating or growth-regulating substances. Furthermore, it is intended that one or more biologically active agents may be contained in the dosage form produced according to the present invention. Thus, unless otherwise stated, reference to "a biologically active agent" in the singular in the present description and accompanying claims shall be understood to also include the inclusion of several active agents in the dosage form.

Med "i hovedsak impermeabel for vann og det aktive middel" menes at under betingelser ved normalt bruk, motstår det ytre lag av doseringsformen passasjen av vann inn i kammeret og frigjøring av aktivt middel fra kammeret så lenge det ytre lag forblir i hovedsak intakt. By "substantially impermeable to water and the active agent" is meant that under conditions of normal use, the outer layer of the dosage form resists the passage of water into the chamber and the release of active agent from the chamber as long as the outer layer remains substantially intact.

Med "marint animalsk materiale" menes enhver del av legemet eller deler av et hvert marint dyr, hvilken del kan fremstilles i en form som er egnet for å danne det ytre lag av foreliggende doseringsform. Et slikt materiale omfatter i sin enkleste form celler eller cellekomponenter fra encellete eller flercellete animalske dyr. Spesielt vil det animalske materialet innbefatte materiale avledet fra fisk eller andre sjødyr. By "marine animal material" is meant any part of the body or parts of any marine animal, which part can be produced in a form suitable for forming the outer layer of the present dosage form. Such material in its simplest form comprises cells or cell components from unicellular or multicellular animals. In particular, the animal material will include material derived from fish or other marine animals.

Med "vegetabilsk materiale" menes enhver del av en plante som kan fremstilles i en form som er egnet for fremstilling av det ytre lag av foreliggende doseringsform. I sin mest grunnleggende form omfatter slikt materiale celler eller cellekomponenter fra encellete eller flercellete medlemmer av planteriket. By "vegetable material" is meant any part of a plant which can be produced in a form suitable for the production of the outer layer of the present dosage form. In its most basic form, such material comprises cells or cell components from unicellular or multicellular members of the plant kingdom.

Med "fiskemel" menes et forprodukt dannet ved behandling av rå marine materialer. I følge en typisk fiskemelfremstillende prosess blir rå marine materialer som dem beskrevet nedenfor, eventuelt kokt med vann og presset til kakeform, kjent som presskaker. Væskematerialet presset ut av kakene omfatter en oljekomponent og en vanndig komponent eller "pressvann". Pressvannet rekombineres med presskaken ved for eksempel blanding, og vannet inndampes. De resulterende produkter omfatter én form av "fiskemel". By "fishmeal" is meant a preliminary product formed by processing raw marine materials. According to a typical fishmeal manufacturing process, raw marine materials such as those described below are optionally boiled with water and pressed into cake form, known as press cakes. The liquid material pressed out of the cakes comprises an oil component and an aqueous component or "press water". The press water is recombined with the press cake by, for example, mixing, and the water is evaporated. The resulting products comprise one form of "fishmeal".

Med "vanndig ekstrakt fra marine materialer" eller "marin-materiale vannekstrakt" menes det vanndige pressvann som er et biprodukt fra produksjonen av fiskemel. Pressvannet, som også betegnes som "lim-vann" grunnet sine egenskaper som bindemiddel, omfatter et vanndig ekstrakt av de vannopp-løselige komponenter av rå marine materialer. Slike forbin-delser innbefatter for eksempel proteiner, peptider, aminosyrer og nukleotider. Disse virker som smakskomponenter og virker som tiltrekningsstoffer og stimulanter for matingen av oppdrettsfisk. I tillegg til sine tiltrekkende og stimu-lerende egenskaper oppviser ekstraktet også utmerkete bindingsegenskaper. By "aqueous extract from marine materials" or "marine-material water extract" is meant the aqueous pressed water that is a by-product from the production of fishmeal. The pressed water, which is also referred to as "glue water" due to its properties as a binder, comprises an aqueous extract of the water-soluble components of raw marine materials. Such compounds include, for example, proteins, peptides, amino acids and nucleotides. These act as flavor components and act as attractants and stimulants for the feeding of farmed fish. In addition to its attractive and stimulating properties, the extract also exhibits excellent binding properties.

Innbefattet med omfanget av uttrykket "vanndig ekstrakt fra marine materialer" eller "marint vanndig ekstrakt" er ikke bare ekstraktet i seg selv som det fremstilles som et biprodukt fra den fiskemelfremstillende prosess, men det er også innbefattet videre raffinerte produkter basert på det vanndige ekstrakt. For eksempel er det kjent at det vanndige ekstrakt fra marine materialer kan underkastes enzyma-tisk hydrolyse for å bryte ned proteiner og peptider, for å gi en høyere konsentrasjon av aminosyrer og en forbedret smak. Videre kan det vanndige ekstrakt anrikes med smaks- Included in the scope of the term "aqueous extract from marine materials" or "marine aqueous extract" is not only the extract itself as it is produced as a by-product of the fishmeal manufacturing process, but also includes further refined products based on the aqueous extract. For example, it is known that the aqueous extract from marine materials can be subjected to enzymatic hydrolysis to break down proteins and peptides, to give a higher concentration of amino acids and an improved taste. Furthermore, the aqueous extract can be enriched with flavor

komponenter i fast eller konsentrert oppløsningsform. components in solid or concentrated solution form.

I den nedenstående beskrivelse er det referert til en utførelsesform av doseringsformer fremstilt ifølge oppfinnelsen som er kalt "AQUAPHARMAKA". Denne doseringsformen omfatter 75,5% fiskemel, 7,5% modifisert potetstivelse hvor hydroksygruppene er propylert og fosforylert (hydroksyl-distivelsefosfat) under navnet "Trecomer AET-4", 2,0 vekt% av et hydrolysat av fet fisk (spesielt sildearten "tobis") under navnet "Primex (100%)" og 15 vekt% vann. In the description below, reference is made to an embodiment of dosage forms produced according to the invention which is called "AQUAPHARMAKA". This dosage form comprises 75.5% fish meal, 7.5% modified potato starch where the hydroxy groups are propylated and phosphorylated (hydroxyl distarch phosphate) under the name "Trecomer AET-4", 2.0% by weight of a hydrolyzate of oily fish (especially the herring species " tobis") under the name "Primex (100%)" and 15% water by weight.

Kort beskrivelse av figurene Brief description of the figures

Figur 1 illustrerer en utførelsesform av doseringsformen i følge oppfinnelsen i tverrsnitt. Figur 2 sammenligner frigjøringen av oxytetracyclin-HCl (heretter "0TC-HC1") til sjøvann ved 4°C fra henholdsvis de kommersielt tilgjengelige medisinerte forpelleter, produkt A og produkt B, og frigjøringen av OTC-HCl fra en doseringsform (betegnet "AQUAPHARMAKA") fremstilt i henhold til foreliggende oppfinnelse. Figur 3 sammenligner frigjøringsgraden av samme doseringsformer, men ved en vanntemperatur på 18°C. Figur 4 sammenligner plasmakonsentrasjonen av OTC i fisker foret med de to kommersielt tilgjengelige medisinerte f6rpelleter og "AQUAPHARMAKA" doseringsformen fremstilt ifølge oppfinnelsen. Figur 5 sammenligner OTC muskelkonsentrasjonen i fisker matet med de to kommersielt tilgjengelige medisinerte forpelleter og "AQUAPHARMAKA" doseringsformen fremstilt ifølge oppfinnelsen. Figur 6 sammenligner frigjøringsgraden av flumequine fra "AQUAPHARMAKA" doseringsformen (0.4 % flumequine) og fri-gjøringsgraden av oxolinsyre fra produkt A (0.5% oxolinsyre) ved 4°C. Figur 7 sammenligner frigjøringsgradene av samme doseringsformer som i figur 6, men ved en vanntemperatur på 18°C. Figur 8 sammenligner plasmakonsentrasjonen av aktivt middel i fisker matet med "AQUAPHARMAKA" inneholdende 0.2%, 0.5% Figure 1 illustrates an embodiment of the dosage form according to the invention in cross-section. Figure 2 compares the release of oxytetracycline-HCl (hereafter "OTC-HC1") into seawater at 4°C from the commercially available medicated propellets, product A and product B, respectively, and the release of OTC-HCl from a dosage form (designated "AQUAPHARMAKA" ) produced according to the present invention. Figure 3 compares the release rate of the same dosage forms, but at a water temperature of 18°C. Figure 4 compares the plasma concentration of OTC in fish fed with the two commercially available medicated fish pellets and the "AQUAPHARMAKA" dosage form produced according to the invention. Figure 5 compares the OTC muscle concentration in fish fed with the two commercially available medicated propellets and the "AQUAPHARMAKA" dosage form prepared according to the invention. Figure 6 compares the release rate of flumequine from the "AQUAPHARMAKA" dosage form (0.4% flumequine) and the release rate of oxolinic acid from product A (0.5% oxolinic acid) at 4°C. Figure 7 compares the release rates of the same dosage forms as in Figure 6, but at a water temperature of 18°C. Figure 8 compares the plasma concentration of active agent in fish fed with "AQUAPHARMAKA" containing 0.2%, 0.5%

(ti dagers foring), 0.5%<*> (fem dagers foring) og produkt A inneholdende 0.5% oxolinsyre. (ten-day feed), 0.5%<*> (five-day feed) and product A containing 0.5% oxolinic acid.

Figur 9 sammenligner muskelkonsentrasjonen av aktivt middel i fisk foret med samme doseringsformer som i figur 8. Figure 9 compares the muscle concentration of active agent in fish fed with the same dosage forms as in Figure 8.

Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen Detailed description of the invention

Under henvisning til figur 1, er en doseringsform fremstilt i henhold til foreliggende oppfinnelse vist å ha et ytre lag 1 og et indre kammer 2 inneholdende aktivt middel 3. Medikamentet er eventuelt innbefattet i et bæremateriale. With reference to Figure 1, a dosage form produced according to the present invention is shown to have an outer layer 1 and an inner chamber 2 containing active agent 3. The medication is optionally included in a carrier material.

Således er i én utførelsesform av oppfinnelsen doseringsformen fremstilt i form av en "pute". Det ytre lag inneholder et animalt eller vegetabilsk materiale (fortrinnsvis et fiskemel) og/eller vanndig ekstrakt fra marine materialer, eventuelt konsentrerte smakskomponenter og eventuelt bindemiddel. Komponentene av det ytre lag kan velges for å sikre en smak og lukt for produktet som stimulerer opptak. Laget maskerer effektivt smaken av det aktive middel inneholdt i kammeret. For eksempel kan det ytre lag omfatte 60 vektprosent mikronisert fiskemel dannet ved lavtemperatur-teknologi fra fersk fisk, såsom vintersild, hvitting, lodde osv.; 35 vektprosent av et vanndig ekstrakt fra marine materialer såsom sild, hvitting, blekksprutslo (dvs. den delen av dyret som ikke brukes til menneskemat) , fiskeslo, rekeslo, krill osv.; og ca. 5 vektprosent av et bindemiddel. Bindemiddelet kan omfatte én eller fler modifiserte stivelsesderivater såsom, men ikke begrenset til, modifisert hydroksypropyl-distivelse-fosfat. Thus, in one embodiment of the invention, the dosage form is produced in the form of a "pad". The outer layer contains an animal or vegetable material (preferably a fishmeal) and/or aqueous extract from marine materials, possibly concentrated flavor components and possibly a binder. The components of the outer layer can be chosen to ensure a taste and smell for the product that stimulates absorption. The layer effectively masks the taste of the active agent contained in the chamber. For example, the outer layer may comprise 60 percent by weight of micronized fishmeal formed by low-temperature technology from fresh fish, such as winter herring, whiting, capelin, etc.; 35% by weight of an aqueous extract from marine materials such as herring, whiting, squid gills (ie the part of the animal not used for human consumption), fish gills, shrimp gills, krill, etc.; and approx. 5 percent by weight of a binder. The binder may comprise one or more modified starch derivatives such as, but not limited to, modified hydroxypropyl starch phosphate.

Vegetabilske materialer som kan omfatte det ytre lag eller en del derav, innbefatter for eksempel sojamel, potetstivelse og stivelsesderivater, hvetemel, laktose og liknende . Vegetable materials which may comprise the outer layer or part thereof include, for example, soya flour, potato starch and starch derivatives, wheat flour, lactose and the like.

Det marine, vanndige ekstraktmaterialet har fortrinnsvis et tørrstoffinnehold på ca. 30-40 vektprosent, og dannes fortrinnsvis ved vanndig ekstraksjon av marine materialer. Det vanndige ekstrakt kan være tilstede i oppløst form, såvel som i tørr form. The marine, aqueous extract material preferably has a dry matter content of approx. 30-40 percent by weight, and is preferably formed by aqueous extraction of marine materials. The aqueous extract may be present in dissolved form, as well as in dry form.

I det ytre lag av doseringsformen kan bindemiddelet være tilstede i konsentrasjoner innen området fra ca. 5% til ca. 20%, fortrinnsvis ca. 10 %, basert på vekten av doseringsformen. Bindemiddelet innvirker gunstig med bindingsegen-skapene av de vanndig ekstraherte marine materialer for å øke den fysiske styrken av det ytre lag. In the outer layer of the dosage form, the binder can be present in concentrations in the range from approx. 5% to approx. 20%, preferably approx. 10%, based on the weight of the dosage form. The binder interacts favorably with the binding properties of the aqueous extracted marine materials to increase the physical strength of the outer layer.

Doseringsformen fremstilles ved koekstrudering av det ytre lag med materialet i det indre kammer. Det ytre lag ekstru-deres fortrinnsvis med et vanninnhold på ca. 15-30%, fortrinnsvis ca. 20%, og tørkes derpå til et vanninnhold på ca. 10-20%, fortrinnsvis 13%. The dosage form is produced by coextrusion of the outer layer with the material in the inner chamber. The outer layer is preferably extruded with a water content of approx. 15-30%, preferably approx. 20%, and then dried to a water content of approx. 10-20%, preferably 13%.

Volumet av kammeret 2 kan omfatte for eksempel et volum likt 10 ganger volumet av medikamentet 3. De ytre volumf or-hold vil være innlysende for fagmannen. Kammeret 2 kan fylles med opptil ca. 10-20 vektprosent av den koekstruderte, medikamentinneholdende masse basert på vekten av doseringsformen. I en foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen er forholdet mellom ytre og indre diameter av doseringsformen ca. 2:1. The volume of the chamber 2 may comprise, for example, a volume equal to 10 times the volume of the drug 3. The external volume controls will be obvious to the person skilled in the art. Chamber 2 can be filled with up to approx. 10-20 percent by weight of the coextruded drug-containing mass based on the weight of the dosage form. In a preferred embodiment of the invention, the ratio between the outer and inner diameter of the dosage form is approx. 2:1.

Som nevnt tidligere blir doseringsformen fremstilt ifølge oppfinnelsen dannet ved koekstrudering av det ytre lag omkring det indre materialet, det vil si materialet inneholdende det aktive middel. Doseringsformen dannes med ett eller fler kammere for å gi oppdriftsegenskapene. Med denne konstruksjon oppviser doseringsformen ikke bare utmerket lagringsstabilitet, men er stabil i vann. På grunn av impermeabiliteten av det ytre lag blir det aktive middel ikke frigjort for tidlig i det omgivende vann. Den aktive komponent forblir kjemisk stabil inne i doseringsformen. Det animalske eller vegetabilske materialet som danner hovedkomponenten av det ytre lag er lett fordøybar i magen på fisken, slik at det aktive middel i kammeret frigjøres i fordøyelseskanalen hos fisken. As mentioned earlier, the dosage form produced according to the invention is formed by coextrusion of the outer layer around the inner material, that is to say the material containing the active agent. The dosage form is formed with one or more chambers to provide the buoyancy properties. With this construction, the dosage form not only exhibits excellent storage stability, but is stable in water. Due to the impermeability of the outer layer, the active agent is not released prematurely into the surrounding water. The active component remains chemically stable inside the dosage form. The animal or vegetable material that forms the main component of the outer layer is easily digestible in the stomach of the fish, so that the active agent in the chamber is released in the digestive tract of the fish.

I tillegg til å inneholde det aktive middel, kan kammeret være fylt med et fluidum, fortrinnsvis en gass eller en gassblanding såsom luft. Inert gass såsom nitrogen kan anvendes for å hemme oksydering av medikamentet i det indre kammer. In addition to containing the active agent, the chamber can be filled with a fluid, preferably a gas or a gas mixture such as air. Inert gas such as nitrogen can be used to inhibit oxidation of the drug in the inner chamber.

Det aktive middel kan omfatte et hvert biologisk aktivt middel som har anvendbarhet ved ivaretak eller oppdrett av fisk. Slike midler innbefatter for eksempel antibakterielle eller antiparasittiske midler såsom tetracycliner, fortrinnsvis oxytetracyclin ("OTC"), eller et salt derav, flumequin og oxolinsyre. Det foregående er nevnt som illus-trasjon og ikke som begrensning. Substanser som ikke er medisiner kan også tilsettes kammeret av doseringsformen. Slike substanser innbefatter for eksempel vitaminer, mine-raler og liknende. The active agent can include any biologically active agent that has applicability in the care or breeding of fish. Such agents include, for example, antibacterial or antiparasitic agents such as tetracyclines, preferably oxytetracycline ("OTC") or a salt thereof, flumequine and oxolinic acid. The foregoing is mentioned by way of illustration and not as limitation. Substances that are not drugs can also be added to the chamber of the dosage form. Such substances include, for example, vitamins, minerals and the like.

I henhold til oppfinnelsen kan det tenkes flere utførelses-former av den aktive, materialinneholdende del 3 av doseringsformen. For eksempel kan det aktive middel være tilstede i ren eller konsentrert form, eller kan fortynnes med ett eller fler tilsetningsmidler eller bæremidler for å forbedre biotilgjengeligheten og stabiliteten av middelet. I henhold til en foretrukket utførelsesform er det biologisk aktive middel inneholdt i kammeret dannet ved å sus-pendere eller oppløse det aktive middel i en emulsjon eller suspensjon såsom en emulsjon av et fettmateriale. Fettmaterialer som er egnet for slike emulsjoner innbefatter fett eller lipider som er flytende ved ca. 0°C. Det aktive middel kan suspenderes, emulsifiseres, dispergeres eller oppløses i emulsjonen. Aktive midler som ellers lett kan hydrolyseres blir således stabilisert. Andre additiver eller bæremidler kan også innbefattes med det aktive middel, forutsatt at de er ekstruderbare. For eksempel kan det ekstruderbare bæremiddel omfatte en antioksydant for å forhindre oksydasjon av det aktive middel under lagring av doseringsformen. According to the invention, several embodiments of the active, material-containing part 3 of the dosage form are conceivable. For example, the active agent may be present in pure or concentrated form, or may be diluted with one or more additives or carriers to improve the bioavailability and stability of the agent. According to a preferred embodiment, the biologically active agent is contained in the chamber formed by suspending or dissolving the active agent in an emulsion or suspension such as an emulsion of a fatty material. Fatty materials suitable for such emulsions include fats or lipids which are liquid at about 0°C. The active agent can be suspended, emulsified, dispersed or dissolved in the emulsion. Active agents that can otherwise easily be hydrolysed are thus stabilized. Other additives or carriers may also be included with the active agent, provided they are extrudable. For example, the extrudable carrier may comprise an antioxidant to prevent oxidation of the active agent during storage of the dosage form.

Det aktive middel kan være inneholdt i et bæremiddel omfattende en gelmatrise dannet fra et vanndig, gelformende materiale. Slike materialer innbefatter for eksempel nat-riumkarboksymetyl cellulose, mikrokrystallinsk cellulose; polyvinylpyrrolidon; carboksypolymetylen, for eksempel Carbopol<4> 940, tilgjengelig fra B. F. Goodrich; og liknende. Et slikt bæremiddel er spesielt anvendbart for fremstilling av flumequininneholdende doseringsformer i henhold til foreliggende oppfinnelse med forbedret absorbsjon av flumequin. The active agent may be contained in a carrier comprising a gel matrix formed from an aqueous, gel-forming material. Such materials include, for example, sodium carboxymethyl cellulose, microcrystalline cellulose; polyvinylpyrrolidone; carboxypolymethylene, for example Carbopol<4> 940, available from B.F. Goodrich; and similar. Such a carrier is particularly applicable for the production of flumequine-containing dosage forms according to the present invention with improved absorption of flumequine.

De følgende sammenligningseksempler ble utført for ytterligere å illustrere fordelene ved doseringsformen fremstilt ifølge oppfinnelsen, i forhold til de kommersielt tilgjengelige medisinerte fiskeforpelleter, produkt A og produkt B. Spesielt er det å merke seg at doseringsformen fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse motstår for tidlig frigjø-ring av det aktive middel til det omgivende miljø før fordøying av fisken. Således unngår, ulik produktet fra tidligere teknikk, doseringsformen i følge foreliggende oppfinnelse forurensning av miljøet med det aktive middel. The following comparative examples were carried out to further illustrate the advantages of the dosage form produced according to the invention, in relation to the commercially available medicated fish feed pellets, product A and product B. In particular, it is noted that the dosage form produced according to the present invention resists premature release of the active agent to the surrounding environment before digestion by the fish. Thus, unlike the product from prior art, the dosage form according to the present invention avoids contamination of the environment with the active agent.

Eksempel 1 Example 1

Studier av frigjøring av aktivt middel - OTC Active agent release studies - OTC

Seks enheter hver av produkt A, produkt B og en doseringsform fremstilt i henhold til foreliggende oppfinnelse betegnet "AQUAPHARMAKA", alle inneholdende 0TC-HC1, ble plassert i et glassbeger inneholdende 800 ml ferskt sjø-vann. Konsentra-sjonen av OTC i hver av de undersøkte produkter var 1%, og vekten av OTC pr. doseringsenhet var ca. 0.8 gram. Frigjøringen av OTC fra pelletene til det omgivende sjøvann ble bestemt ved to forskjellige vanntem-peraturer, 4°C (figur 2) og 18°C (figur3). Vannprøver på 5 ml ble tatt fra begeret hvert 30. minutt i fem timer (eller inntill pelletene hadde disintegrert). Etter fortynning ble konsentrasjonen av OTC i sjøvannsprøvene bestemt ved høy-effektsvæskekromatografi ("HPLC"). HPLC-målingene ble tatt ved å tilsette 2.00 ml prøve til 4.00 ml metanol. Sjø-vann/metanolblandingen ble plassert i en fryseboks i ti minutter og derpå sentrifugert i ytterligere ti minutter. Den resulterende oppløsning ble injisert direkte i HPLC-apparaturen, omfattende en C8-Brownlee, Spheri-5, MPLC (10 cm x 4.6 mm, 3 cm x 4.6 mm) kolonne; en C18-Corsail 37-50 /xm prekolonne, mobil fase 0.02 M oxalsyre (pH 2), acetonitril 800/120 (v/v) + 5% dimetylformamid. OTC ble påvist ved 280 nm ved å bruke en væskehastighet på 1.0 ml/min., med 10/il injeksjon (automatisk ved 20°C) . OTC som var tilstede oppløst i vannet mot tiden ble bestemt fra gjennom-snittet av de seks undersøkte enheter. Six units each of product A, product B and a dosage form prepared according to the present invention designated "AQUAPHARMAKA", all containing OC-HCl, were placed in a glass beaker containing 800 ml of fresh sea water. The concentration of OTC in each of the investigated products was 1%, and the weight of OTC per dosage unit was approx. 0.8 grams. The release of OTC from the pellets into the surrounding seawater was determined at two different water temperatures, 4°C (Figure 2) and 18°C (Figure 3). Water samples of 5 ml were taken from the beaker every 30 minutes for five hours (or until the pellets had disintegrated). After dilution, the concentration of OTC in the seawater samples was determined by high-performance liquid chromatography ("HPLC"). The HPLC measurements were taken by adding 2.00 ml of sample to 4.00 ml of methanol. The seawater/methanol mixture was placed in a freezer for ten minutes and then centrifuged for a further ten minutes. The resulting solution was injected directly into the HPLC apparatus, comprising a C8-Brownlee, Spheri-5, MPLC (10 cm x 4.6 mm, 3 cm x 4.6 mm) column; a C18-Corsail 37-50 /xm precolumn, mobile phase 0.02 M oxalic acid (pH 2), acetonitrile 800/120 (v/v) + 5% dimethylformamide. OTC was detected at 280 nm using a liquid rate of 1.0 ml/min, with 10 µl injection (automatic at 20°C). The OTC present dissolved in the water versus time was determined from the average of the six investigated units.

Dataene er vist i figurene 2 og 3. The data are shown in figures 2 and 3.

Figurene 2 og 3 viser at OTC ble frigjort fra produktene A og B ifølge tidligere teknikk. Det var ingen vesentlig frigjøring fra doseringsformen fremstilt ifølge oppfinnelsen under samme betingelser. En økning i temperatur påvir-ket ikke i vesentlig grad frigjøringen av aktivt middel fra doseringsformen fremstilt ifølge oppfinnelsen. Figures 2 and 3 show that OTC was released from products A and B according to prior art. There was no significant release from the dosage form prepared according to the invention under the same conditions. An increase in temperature did not significantly affect the release of active agent from the dosage form produced according to the invention.

Disintegrasjonstiden av pelletene ble også bestemt ved å måle tiden det tok for pelleter neddykket i sjøvann å The disintegration time of the pellets was also determined by measuring the time it took for pellets immersed in seawater to

passere gjennom en bunnsikt med åpninger på 2 millimeter i diameter, eller tiden som gikk før pelletene ble fullstendig fragmentert. Disintegrasjonstiden ble regnet ut som et gjennomsnitt fra seks målinger. Dataene er presentert i tabell 1, henholdsvis for 4° og 18°C immersjon i sjøvann. pass through a bottom sieve with openings of 2 millimeters in diameter, or the time that elapsed before the pellets were completely fragmented. The disintegration time was calculated as an average from six measurements. The data are presented in table 1, respectively for 4° and 18°C immersion in seawater.

Tabell 1 viser at doseringsformen fremstilt ifølge oppfinnelsen forblir stabil i mer enn 5 timer og disintegrerte ikke. Table 1 shows that the dosage form prepared according to the invention remains stable for more than 5 hours and did not disintegrate.

Eksempel 2 Example 2

Studier av frigjørin<g> av aktivt middel - flumequin og oxolinsyre. Studies on the release<g> of active agent - flumequin and oxolinic acid.

Fremgangsmåten fra eksempel 1 ble gjentatt for å sammenlig-ne frigjøringen av en flumequininneholdende "AQUAPHARMAKA" anordning fremtilt i henhold til oppfinnelsen og produkt A inneholdende oxolinsyre. The procedure from example 1 was repeated to compare the release of a flumequin-containing "AQUAPHARMAKA" device manufactured according to the invention and product A containing oxolinic acid.

<*> Pelletene var nesten fullstendig erodert og var meget sprøe. <*> The pellets were almost completely eroded and were very brittle.

Selv om de to undersøkte doseringsformer inneholder forskjellige medisiner, oppløser begge de aktive midler seg i vann og tilstedeværelsen av én eller begge av disse midler i det omgivende sjøvann ville indikere lekkasje fra doseringsformen. "AQUAPHARMAKA"-pelletene inneholdt 0.4 % flumeguin. De var ca. 6 mm store, og veide ca. 0.25 gram hver. Produkt A-pelletene inneholdt 0.5% oxolinsyre. De var 6 mm store, og veide ca. 0.37 gram hver. Samme apparatur og fremgangsmåte som eksempel 1 ble brukt og frigjøringen av aktivt middel fra pelletene til det omgivende sjøvann ble bestemt ved 4°C og 18°C. Sjøvannsprøver med 5 ml volum ble fjernet hvert 30. minutt i 5 timer eller inntill pelletene hadde disintegrert. Vannprøvene fjernet fra det produkt A-inneholdende beger (oxolinsyre) ble fortynnet 1:1 med 0.01 N NaOH. De fortynnete prøver ble sentrifugert ved 4000 rpm i 5 minutter. Vannprøvene fra begge begere ble så sentrifugert ved 4000 rpm i 5 minutter. Konsentrasjonen av flumeguin og oxolinsyre ble målt med HPLC som i eksempel 1. Resultatene er angitt i figur 6 (4°C) og figur 7 (18°C). Although the two dosage forms examined contain different drugs, both active agents dissolve in water and the presence of one or both of these agents in the surrounding seawater would indicate leakage from the dosage form. The "AQUAPHARMAKA" pellets contained 0.4% flumeguin. They were approx. 6 mm large, and weighed approx. 0.25 grams each. The Product A pellets contained 0.5% oxolinic acid. They were 6 mm in size, and weighed approx. 0.37 grams each. The same apparatus and method as example 1 was used and the release of active agent from the pellets into the surrounding seawater was determined at 4°C and 18°C. Seawater samples of 5 ml volume were removed every 30 minutes for 5 hours or until the pellets had disintegrated. The water samples removed from the product A-containing beaker (oxolinic acid) were diluted 1:1 with 0.01 N NaOH. The diluted samples were centrifuged at 4000 rpm for 5 minutes. The water samples from both beakers were then centrifuged at 4000 rpm for 5 minutes. The concentration of flumeguin and oxolinic acid was measured by HPLC as in example 1. The results are shown in Figure 6 (4°C) and Figure 7 (18°C).

Figurene 6 og 7 indikerer at lekkasje av aktivt middel fra "AQUAPHARMAKA" doseringsformen fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse er signifikant senere enn lekkasje av oxolinsyre fra produkt A. Ved 4°C var det ingen tegn på flumeguin i sjøvannet som omgir "AQUAPHARMAKA" doseringsformen etter 5 timer. Ved 18°C startet lekkasjen av flumeguin fra "AQUAPHARMAKA"-pelletene ved 3.5 timer. Ved 4.5 timer hadde 90% av flumequinet oppløst seg i sjøvannet og pelletene hadde disintegrert. Figures 6 and 7 indicate that leakage of active agent from the "AQUAPHARMAKA" dosage form produced according to the present invention is significantly later than leakage of oxolinic acid from product A. At 4°C there was no sign of flumeguin in the seawater surrounding the "AQUAPHARMAKA" dosage form after 5 hours. At 18°C, the leakage of flumeguin from the "AQUAPHARMAKA" pellets started at 3.5 hours. By 4.5 hours, 90% of the flumequine had dissolved in the seawater and the pellets had disintegrated.

På den annen side startet oppløsningen av oxolinsyre fra pelletene av produkt A umiddelbart, både ved 4°C og 18°C. Etter 4 timer var 100% av oxolinsyren fra produkt A oppløst i det omgivende sjøvann og pelleten var fullstendig erodert . On the other hand, the dissolution of oxolinic acid from the pellets of product A started immediately, both at 4°C and 18°C. After 4 hours, 100% of the oxolinic acid from product A had dissolved in the surrounding seawater and the pellet had completely eroded.

Disse resultater indikerer at "AQUAPHARMAKA"-pelleten fremstilt i henhold til oppfinnelsen effektivt forhindrer lekkasje av antibiotika til det omgivende medium meget bedre enn det kommersielt tilgjengelige produkt A. Struktu-ren av doseringsformen fremstilt ifølge oppfinnelsen forblir inntakt i minst 3.5 time i sjøvann mellom 4°C og 18°C. Dette indikerer at overskytende legemiddel fjernes fra doseringsformen kun etter at flere timer har gått etter foring. Forurensning av omgivelsene som omgir fiskeopp-drettsanlegget blir således minimalisert. These results indicate that the "AQUAPHARMAKA" pellet manufactured according to the invention effectively prevents leakage of antibiotics into the surrounding medium much better than the commercially available product A. The structure of the dosage form manufactured according to the invention remains ingested for at least 3.5 hours in seawater between 4 °C and 18°C. This indicates that excess drug is removed from the dosage form only after several hours have passed after feeding. Pollution of the environment surrounding the fish farm is thus minimised.

Det bør bemerkes at selv om "AQUAPHARMAKA"-pelleten fremstilt ifølge oppfinnelsen og produkt A inneholdt forskjellige aktive ingredienser i den ovenfor beskrevne test (henholdsvis flumeguin mot oxolinsyre), er begge midler liknende antibiotika i den grad at de oppviser like minima-le inhibitoriske konsentrasjoner for forskjellige bakterie-stammer som angitt i tabell 2: It should be noted that although the "AQUAPHARMAKA" pellet manufactured according to the invention and product A contained different active ingredients in the test described above (flumeguine versus oxolinic acid, respectively), both agents are similar antibiotics to the extent that they exhibit the same minimum inhibitory concentrations for different bacterial strains as indicated in Table 2:

Eksempel 3 Example 3

Studier av anvendelse av aktivt middel - OTC Studies of the use of active agent - OTC

Absorbsjonen av aktive materialer fra doseringsformen fremstilt ifølge oppfinnelsen ble sammenlignet med absorbsjonen av aktivt materiale fra produktene A og B. Absorbsjon ble bestemt ved å måle OTC-konsentrasjonen i plasma og muskelvev fra fisk fSret med "AQUAPHARMAKA" inneholdende 1.2 vekt- The absorption of active materials from the dosage form produced according to the invention was compared with the absorption of active material from products A and B. Absorption was determined by measuring the OTC concentration in plasma and muscle tissue from fish fed with "AQUAPHARMAKA" containing 1.2 wt.

prosent OTC, produkt A inneholdende 1.0 vektprosent OTC og produkt B inneholdende 1.2 vektprosent OTC. Følgelig ble fisk matet fire ganger på dag 0 med "AQUAPHARMAKA" , produkt A eller produkt B ved en sjøvannstemperatur på 5-7°C. Blod-og vevsprøver ble samlet opp ved dagene 1, 2, 3, 4, 7, 14, 21 og 50. Prøvene ble preparert og analysert for OTC-inne-hold i henhold til følgende fremgangsmåter. percent OTC, product A containing 1.0 weight percent OTC and product B containing 1.2 weight percent OTC. Accordingly, fish were fed four times on day 0 with "AQUAPHARMAKA", product A or product B at a seawater temperature of 5-7°C. Blood and tissue samples were collected on days 1, 2, 3, 4, 7, 14, 21 and 50. The samples were prepared and analyzed for OTC content according to the following procedures.

Bestemmelse av muskelkonsentrasionen av OTC Determination of the muscle concentration of OTC

Oppmalt fiskevev (lOmg muskel eller 5 mg lever) ble homogenisert tre ganger i 0.01 M fosfatbuffer inneholdende 0.1 M etylendinitrilotetraeddiksyre dinatriumsalt, pH 4.2. Fett ble ekstrahert ved tilsetning av en blanding av hexan og diklormetan. ProteinhoIdige residuer ble utfelt ved tilsetning av fast natriumklorid fulgt av oppvarming til 48°C, og rask avkjøling i en fryser. Etter sentrifugering ble ekstraktet renset på en C8 fast-fase Sepralytei ekstraksjons-kolonne (Analytical International). OTC ble eluert fra kolonnen med 5% vann i aceton, og deretter med 10% vann i aceton. Acetonet ble inndampet ved hjelp av nitrogen. Residuet ble fortynnet i den mobile fase og analysert på HPLC ved å bruke demeclocyclin som en innvendig standard for å mengdebestemme OTC. Minced fish tissue (10 mg muscle or 5 mg liver) was homogenized three times in 0.01 M phosphate buffer containing 0.1 M ethylenedinitrilotetraacetic acid disodium salt, pH 4.2. Fat was extracted by adding a mixture of hexane and dichloromethane. Proteinaceous residues were precipitated by addition of solid sodium chloride followed by heating to 48°C, and rapid cooling in a freezer. After centrifugation, the extract was purified on a C8 solid-phase Sepralytei extraction column (Analytical International). OTC was eluted from the column with 5% water in acetone, and then with 10% water in acetone. The acetone was evaporated using nitrogen. The residue was diluted in the mobile phase and analyzed on HPLC using demeclocycline as an internal standard to quantify OTC.

Bestemmelse av OTC plasmakonsentrasnon Determination of OTC plasma concentrations

Plasmaprøver (100-1000 fil) ble behandlet med trifluoreddik-syre for å utfelle plasmaproteiner. Etter oppvarming til 37°C ble den gjenværende oppløsning sentrifugert og analysert på HPLC som ovenfor. Plasma samples (100-1000 µl) were treated with trifluoroacetic acid to precipitate plasma proteins. After heating to 37°C, the remaining solution was centrifuged and analyzed on HPLC as above.

Resultatene av blodplasma- og muskelvevs- OTC-bestemmelsen er henholdsvis angitt i figurene 4 og 5. Maksimalverdiene for hver måling er ytterliger angitt i Tabell 3: The results of the blood plasma and muscle tissue OTC determination are shown respectively in Figures 4 and 5. The maximum values for each measurement are also shown in Table 3:

Plasma- og muskelopptaksforsøkene indikerte en overlegen aksepteringsgrad og absorbsjon av aktivt middel fra doseringsformen fremstilt ifølge oppfinnelsen sammenlignet med de undersøkte produkter ifølge tidligere teknikk. The plasma and muscle uptake tests indicated a superior degree of acceptance and absorption of active agent from the dosage form produced according to the invention compared to the investigated products according to the prior art.

Eksempel 4 Example 4

Studier av ahvendelsesarad av aktivt middel - flume<g>uin og oxolinsyre Studies on the application of active agent - flume<g>uin and oxolinic acid

Studier for å bestemme konsentrasjon av aktivt middel i muskel som stammer fra behandling av fisk med "AQUAPHARMAKA" (inneholdende flumeguin) og produkt A (inneholdende oxolinsyre) ble utført. "AQUAPHARMAKA"-pelleter inneholdende 0.2 vektprosent og 0.5 vektprosent flumeguin ble henholdsvis sammenlignet med pelleter av produkt A, inneholdende 0.5% oxolinsyre. 0.2% "AQUAPHARMAKA"-pelleten ble tilført én gruppe fisk daglig i 10 dager ved en foringsgrad på 0.86%, basert på vekten av fisken. 0.5% "AQUAPHARMAKA" -pelleten ble tilført på lignende måte ved en foringsgrad på 0.86% i 5 dager til én gruppe fisk, og i 10 dager til en annen gruppe fisk. Produkt A-pelletene inneholdende 0.5% oxolinsyre ble tilført daglig ved en foringsgrad på 0.43% i 8 dager til nok en annen gruppe. (Forhandler av produkt A-pelleter anbefaler en foringsgrad på 0.20-0.50% i 10 dager, i henhold til brukerveiledningen.) Alle pelleter ble tilført med en automatisk mater. Utløpet av materen var 20-50 pelleter hver 1 eller 2 minutter i 8-12 timer pr. dag. Under hele tilføringsperioden av medisinerte pelleter var appetitten god i alle grupper fisk. Ved slutten av be-handlingsperioden ble fisken overført til et tomt bur og fåret med vekstfor. Studies to determine the concentration of active agent in muscle resulting from treatment of fish with "AQUAPHARMAKA" (containing flumeguin) and product A (containing oxolinic acid) were carried out. "AQUAPHARMAKA" pellets containing 0.2% by weight and 0.5% by weight flumeguin were respectively compared with pellets of product A, containing 0.5% oxolinic acid. The 0.2% "AQUAPHARMAKA" pellet was fed to one group of fish daily for 10 days at a feeding rate of 0.86%, based on the weight of the fish. The 0.5% "AQUAPHARMAKA" pellet was fed in a similar manner at a feeding rate of 0.86% for 5 days to one group of fish, and for 10 days to another group of fish. The Product A pellets containing 0.5% oxolinic acid were fed daily at a feeding rate of 0.43% for 8 days to yet another group. (The distributor of product A pellets recommends a feed rate of 0.20-0.50% for 10 days, according to the user manual.) All pellets were supplied with an automatic feeder. The output of the feeder was 20-50 pellets every 1 or 2 minutes for 8-12 hours per day. During the entire feeding period of medicated pellets, the appetite was good in all groups of fish. At the end of the treatment period, the fish were transferred to an empty cage and fed with growth feed.

Doseringsinformasjonen er oppsummert i Tabell 4: The dosage information is summarized in Table 4:

Tolv fisk fra hvert pelletområde ble samlet opp ved slutten av første tilføringsdag av produktet, og på dag 2, 4, 7, 9, 12, 19, 26 og 41 etter starten av produkttilføringen. Plasma- og muskelprøver ble samlet opp fra hver gruppe. Blodprøvene (2-10 ml) ble samlet opp av caudalåren. Plasma ble isolert ved sentrifugering av blodet ved 4000 rpm i 10 minutter. Plasma- og vevsprøver (hel-lever, filet fra en side av fisken og nyrer) ble umiddelbart frosset og lagret ved -70°C inntill de ble analysert. Alle plasmaprøver og fire muskelprøver ble tatt fra fisk med plasmaverdier omkring middelverdien fra hver gruppe. Twelve fish from each pellet area were collected at the end of the first supply day of the product, and on days 2, 4, 7, 9, 12, 19, 26 and 41 after the start of the product supply. Plasma and muscle samples were collected from each group. The blood samples (2-10 ml) were collected from the caudal vein. Plasma was isolated by centrifugation of the blood at 4000 rpm for 10 minutes. Plasma and tissue samples (whole liver, fillet from one side of the fish and kidneys) were immediately frozen and stored at -70°C until analysed. All plasma samples and four muscle samples were taken from fish with plasma values around the mean value from each group.

Bestemmelse av plasmakonsentrasionen av aktivt middel Mengden av flumeguin eller oxolinsyre i fiskeplasma ble bestemt som følger. Plasmaprøvene ble renset med fastfase-ekstraksjon. C2 Bond Eluti kolonner ble preparert med metanol og fosforsyre (IM) før tilføring av 250 /zl plasma og innvendig standard. Oxolinsyre ble brukt som innvendig standard når analytten var flumeguin og vice versa. Etter vask av kolonnene med vann og fosforsyre (IM) ble analytten og innvendig standard eluert med 250 /il acetonitril-metanol-lM fosforsyre (80:10:10). Eluatene ble analysert med HPLC ved å bruke en kolonne pakket med polystyren divinyl-benzen (PLPR-S, 5 /im) , og med f luorescenspåvisning (emi-sjon: 380 nm, eksitasjon: 262 nm). Den mobile fase var acetonitril-tetrahydrofuran - 0.002M fosforsyre (20:15:65) ved en strømningshastighet på 0.7 ml/min. Determination of the plasma concentration of active agent The amount of flumeguin or oxolinic acid in fish plasma was determined as follows. The plasma samples were purified by solid phase extraction. C2 Bond Eluti columns were prepared with methanol and phosphoric acid (IM) before addition of 250 µl plasma and internal standard. Oxolinic acid was used as an internal standard when the analyte was flumeguin and vice versa. After washing the columns with water and phosphoric acid (1M), the analyte and internal standard were eluted with 250 µl of acetonitrile-methanol-1M phosphoric acid (80:10:10). The eluates were analyzed by HPLC using a column packed with polystyrene divinylbenzene (PLPR-S, 5 µm), and with fluorescence detection (emission: 380 nm, excitation: 262 nm). The mobile phase was acetonitrile-tetrahydrofuran - 0.002M phosphoric acid (20:15:65) at a flow rate of 0.7 ml/min.

Bestemmelse av muskelkonsentrasion av aktivt middel Muskelprøver (10-20 g) ble malt og homogenisert med en blanding av 3 ml NaOH (IM) og 20 ml aceton. Den innvendige standard ble tilsatt som i analysen av plasmaprøvene. Etter sentrifugering ble homogeniseringen gjentatt to ganger. Surgjorte, oppsamlete supernatanter ble ekstrahert med kloroform. Kloroformen ble inndampet til et lite volum. Ytterligere opprensing ble utført med væske-væske ekstraksjon mellom kloroform og sure/basiske vanndige oppløsnin-ger. Kloroformoppløsningen ble inndampet til tørrhet og det tørre residuum ble oppløst i den mobile fase. HPLC-analyse ble utført i likhet med plasmaprøvene. Determination of muscle concentration of active agent Muscle samples (10-20 g) were ground and homogenized with a mixture of 3 ml NaOH (IM) and 20 ml acetone. The internal standard was added as in the analysis of the plasma samples. After centrifugation, the homogenization was repeated twice. Acidified, collected supernatants were extracted with chloroform. The chloroform was evaporated to a small volume. Further purification was carried out by liquid-liquid extraction between chloroform and acidic/basic aqueous solutions. The chloroform solution was evaporated to dryness and the dry residue was dissolved in the mobile phase. HPLC analysis was performed similarly to the plasma samples.

Et totale på 342 plasmaprøver og 134 muskelprøver ble analysert på denne måte. Kurver for gjennomsnittskonsentrasjonen av flumeguin eller oxolinsyre i plasma er vist i figur 8. Kurver for gjennomsnittskonsentrasjonen av flumeguin eller oxolinsyre i muskel er vist i figur 9. Kurvene markert "AQUAPHARMAKA" 0.5%" stammet fra en tidagers perio-de. Kurvene markert "AQUAPHARMAKA 0.5%<*>" stammet fra en femdagers behandlingsperiode. A total of 342 plasma samples and 134 muscle samples were analyzed in this way. Curves for the average concentration of flumeguin or oxolinic acid in plasma are shown in Figure 8. Curves for the average concentration of flumeguin or oxolinic acid in muscle are shown in Figure 9. The curves marked "AQUAPHARMAKA" 0.5%" originated from a ten-day period. The curves marked "AQUAPHARMAKA 0.5%<*>" stemmed from a five-day treatment period.

Dataene i tabell 3 og 4 og figur 4, 5, 8 og 9, reflekterer et eksperiment av stor skala hvor medisinerte pelleter ble tilført til en stor laksepopulasjon, og bekrefter de gun-stige absorbsjonsegenskaper av det aktive middel fra doseringsformen fremstilt i henhold til oppfinnelsen. Spesielt er det mulig å oppnå en høy flumequinkonsentrasjon i fisk via doseringsformen fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse så tidlig som ved første dag av medisinering. The data in Tables 3 and 4 and Figures 4, 5, 8 and 9 reflect a large-scale experiment where medicated pellets were fed to a large salmon population, and confirm the favorable absorption properties of the active agent from the dosage form prepared according to the invention . In particular, it is possible to achieve a high flumequine concentration in fish via the dosage form produced according to the present invention as early as on the first day of medication.

Graden av biotilgjengelighet av flumeguin og oxolinsyre fra de undersøkte doseringsformer er beregnet ved å ta hensyn til arealet under kurvene ("AUC") i figurene 8 og 9. Når arealet under kurvene pr. doseringsverdi sammenlignes, som oppsummert i Tabell 5 nedenfor, er det tydelig at biotilgjengeligheten av aktivt middel basert på plasmaresul-tatene, er 3.5 ganger større for flumeguin i "AQUAPHARMAKA" 0.2%-pelletene enn for oxolinsyre i produkt A medisinert for. For muskeldata er biotilgjengeligheten 1.4 ganger bedre for flumeguin i doseringsformen fremstilt ifølge oppfinnelsen, enn for oxolinsyre i produkt A-pelletene. The degree of bioavailability of flumeguin and oxolinic acid from the investigated dosage forms is calculated by taking into account the area under the curves ("AUC") in Figures 8 and 9. When the area under the curves per dosage value is compared, as summarized in Table 5 below, it is clear that the bioavailability of active agent based on the plasma results is 3.5 times greater for flumeguin in the "AQUAPHARMAKA" 0.2% pellets than for oxolinic acid in product A medicated for. For muscle data, the bioavailability is 1.4 times better for flumeguin in the dosage form prepared according to the invention, than for oxolinic acid in the product A pellets.

Eksempel 5 Example 5

Kliniske studier Clinical studies

"AQUAPHARMAKA" doseringsformen fremstilt i henhold til foreliggende oppfinnelse inneholdende flumeguin som aktivt middel, eller produkt A inneholdende oxolinsyre, ble tilfør Atlanterhavslaks (Salmo salar) med vekt 120-500 gram. Fisken ble holdt i fiberglasstanker (0.5-8.5 m<3>) inneholdende sirku-lerende sjøvann. Fisken ble infisert eksperi-mentelt med en bakteriesuspensjon ved intraperetoneal injeksjon med 0.1 ml av et tilføringsinokulum. Inokulum-tettheten ble bestemt på forhånd fra pilotforsøk for å gi mortaliteter innen beregnete kriterier. Før tilførsel ble fisken bedøvet i 30% klorbutanol fortynnel 1:1000. Deretter ble fisken medisinert tre ganger pr. dag ved faste inter- The "AQUAPHARMAKA" dosage form prepared according to the present invention containing flumeguin as active agent, or product A containing oxolinic acid, was added to Atlantic salmon (Salmo salar) weighing 120-500 grams. The fish were kept in fiberglass tanks (0.5-8.5 m<3>) containing circulating seawater. The fish were infected experimentally with a bacterial suspension by intraperitoneal injection with 0.1 ml of a supply inoculum. The inoculum density was determined in advance from pilot trials to give mortalities within calculated criteria. Before feeding, the fish were anesthetized in 30% chlorobutanol diluted 1:1000. The fish were then medicated three times per day at fixed inter-

valler. Vanntemperaturen ble målt daglig. Appetitten hos fisken og antallet døde fisk ble nedtegnet daglig i løpet av forsøket. Forsøksgruppene ble tilført enten "AQUAPHARMAKA"-pelleter i henhold til oppfinnelsen, inneholdende flumeguin, eller produkt A medisinert for, inneholdende oxolinsyre. Alle mortaliteter i de medisinerte grupper ble undersøkt for spesielle sykdommer. Årsaken til mortalitet ble nedtegnet som spesifik eller ikke-spesifik. Resultatene av eksperimentene er oppsummert nedenfor. ramparts. The water temperature was measured daily. The appetite of the fish and the number of dead fish were recorded daily during the experiment. The experimental groups were given either "AQUAPHARMAKA" pellets according to the invention, containing flumeguin, or product A medicated for, containing oxolinic acid. All mortalities in the medicated groups were examined for specific diseases. The cause of mortality was recorded as specific or non-specific. The results of the experiments are summarized below.

Eksperiment 1 Experiment 1

I dette forsøk ble Atlanterhavslaksen infisert med Yersinia ruckeri. Én dag etter tilførsel av det bakterielle inokulum, ble forsøksgruppene tilført enten "AQUAPHARMAKA" 0.4% eller produkt A medisinert for 0.5% i ti dager. Doseringen var 20 mg legemiddel/kg/dag. Begge legemidler var effektive i å kontrollere Yersiniose ved tilføringsdoser på 10<8 >celler pr. ml. Tyve dager etter medisineringsstart var mortaliteten 22% i gruppen tilført "AQUAPHARMAKA" 0.4%, og 30% i gruppen gitt produkt A medisinert for 0.5%. Kontrollgruppen (ingen medisinering) oppviste en mortalitet på 48%. Ingen forskjell i mortaliteten mellom medikamentene ble observert inntil dag ti av medisineringen. I perioden mellom dag ti og dag tyve etter start av medisinering, var mortaliteten 8 % mindre i "AQUAPHARMAKA"-gruppen. Resulta-tet kan indikere at "AQUAPHARMAKA" doseringsformen fremstilt i henhold til oppfinnelsen er i stand til å stoppe utbruddet av Yersiniose ved et tidligere utviklingstrinn enn produkt A medisinert for. In this experiment, Atlantic salmon were infected with Yersinia ruckeri. One day after administration of the bacterial inoculum, the experimental groups were administered either "AQUAPHARMAKA" 0.4% or product A medicated for 0.5% for ten days. The dosage was 20 mg drug/kg/day. Both drugs were effective in controlling Yersiniosis at application doses of 10<8 >cells per ml. Twenty days after the start of medication, mortality was 22% in the group given "AQUAPHARMAKA" 0.4%, and 30% in the group given product A medicated for 0.5%. The control group (no medication) showed a mortality of 48%. No difference in mortality between the drugs was observed until day ten of the medication. In the period between day ten and day twenty after the start of medication, mortality was 8% less in the "AQUAPHARMAKA" group. The result may indicate that the "AQUAPHARMAKA" dosage form produced according to the invention is able to stop the outbreak of Yersiniosis at an earlier stage of development than product A is medicated for.

Eksperiment 2 Experiment 2

I dette forsøk ble medisineringen startet tre dager før tilførselen av Yersinia ruckeri. Medisineringen varte totalt ti dager, det vil si i tre dager før tilførsel av inokolumet, og syv dager etterpå. Doseringen av flumeguin ("AQUAPHARMAKA" 0.4%) og oxolinsyre (produkt A medisinert for 0.5%) var 20mg/kg/dag. Ved starten av medisineringen før infeksjon var aksepteringen av pelletene optimal. Ingen mortalitet ble observert i gruppen tilført doseringsformen i henhold til oppfinnelsen, mens en 15% mortalitet inntraff i gruppen som mottok produkt A. Mortaliteten i kontrollgruppen var 100%. In this experiment, the medication was started three days before the introduction of Yersinia ruckeri. The medication lasted a total of ten days, i.e. three days before the inoculum was administered, and seven days afterwards. The dosage of flumeguin ("AQUAPHARMAKA" 0.4%) and oxolinic acid (product A medicated for 0.5%) was 20mg/kg/day. At the start of the medication before infection, the acceptance of the pellets was optimal. No mortality was observed in the group given the dosage form according to the invention, while a 15% mortality occurred in the group receiving product A. Mortality in the control group was 100%.

Eksperiment 3 Experiment 3

I dette forsøk ble den profylaktiske effekt av "AQUAPHARMAKA" 0.4% og "AQUAPHARMAKA" 0.5% sammenlignet med produkt A medisinert for ved 0.5%. Alle legemidler ble tilført før tilførsel av Yersinia ruckeri. Ingen mortalitet ble observert ved tilførsel av 50 mg flumequin/kg som "AQUAPHARMAKA" 0.5% én dag før tilførsel av det bakterielle inokulum. Mortalitet i kontrollgruppen var 96%. Den tilsva-rende dosering av oxolinsyre (60 mg/kg) som produkt A, resulterte i 6% mortalitet. Den optimale effekt ble oppnådd med en ekel flumequindosering på 50 mg/kg sammenlignet med to separate mg/kg doser. Således er 50 mg flumequin/kg en passende dosering for behandling av Yersiniose. In this experiment, the prophylactic effect of "AQUAPHARMAKA" 0.4% and "AQUAPHARMAKA" 0.5% was compared with product A medicated for at 0.5%. All drugs were administered before administration of Yersinia ruckeri. No mortality was observed when 50 mg flumequine/kg as "AQUAPHARMAKA" 0.5% was administered one day before administration of the bacterial inoculum. Mortality in the control group was 96%. The corresponding dosage of oxolinic acid (60 mg/kg) as product A resulted in 6% mortality. The optimal effect was achieved with a disgusting flumequin dosage of 50 mg/kg compared to two separate mg/kg doses. Thus, 50 mg flumequin/kg is an appropriate dosage for the treatment of Yersiniosis.

De ovenfor angitte resultater indikerer at doseringsformen fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse, gir bedre resultater enn kommersielt tilgjengelige medisinerte fiskefor i terapeutisk og profylaktisk behandling av fiskesykdommer. Disse resultater viser den overlegne akseptering av doseringsformen i følge foreliggende oppfinnelse hos fisk som fores, og den overlegne absorbsjon av den aktive forbindel-se fra doseringsformen, i forhold til kommersielt tilgjengelige pelleter. The above-mentioned results indicate that the dosage form produced according to the present invention gives better results than commercially available medicated fish feed in the therapeutic and prophylactic treatment of fish diseases. These results show the superior acceptance of the dosage form according to the present invention in fish that is fed, and the superior absorption of the active compound from the dosage form, compared to commercially available pellets.

Fisk kan medisineres effektivt ved å tilføre fisken, for fordøying, den farmasøytiske doseringsform fremstilt i henhold til oppfinnelsen. Doseringsformen er spesielt foretrukket ved tilføring av medikament til medlemmer av klassen Salmoniformes. Fish can be effectively medicated by feeding the fish, for digestion, the pharmaceutical dosage form prepared according to the invention. The dosage form is particularly preferred when administering medication to members of the class Salmoniformes.

Foreliggende oppfinnelse kan utføres i andre spesielle former uten å fravike ånden eller de essensielle trekk derav, og det bør følgelig refereres til de medfølgende krav i stedet for den tidligere beskrivelse for å indikere omfanget av oppfinnelsen. The present invention may be embodied in other particular forms without departing from the spirit or essential features thereof, and reference should accordingly be made to the appended claims rather than to the preceding description to indicate the scope of the invention.

Claims

1. Procedure for the production of a dosage form for biological <-, active material for fish and comprising (a) an outer layer which mainly consists of (i) fishmeal (ii) an aqueous extract from marine animal material and (iii) water, as well as (b) at least one inner chamber surrounded by the outer layer, and which is suitable to be able to contain the biologically active material, where the outer layer is essentially impermeable to water and the biologically active material that may be in the inner chamber, characterized in that the outer layer is produced using co-extrusion together with the biologically active material.

2. Method according to claim 1, characterized in that the outer layer is extruded with a water content of about 15-30%, preferably about 20%, after which the outer layer of the dosage form is dried to a water content of about 10-20%, preferably 13%.

3. Method according to claim 1 or 2, characterized in that the outer layer further comprises a vegetable material such as soy flour, potato starch and starch derivatives, wheat flour and lactose.

4. Method according to claims 1-3, characterized in that the outer layer additionally comprises a binder which constitutes 5% to 20% by weight, preferably 10% by weight of the dosage form.

5. Method according to claims 1-4, characterized in that the biologically active material during the coextrusion is contained in a carrier material, which carrier material solidifies at a temperature around 0°C.

6. Method according to claim 5, characterized in that the inner chamber is filled with up to 10-20% by weight of the coextruded mass, based on the weight of the dosage form.

7. Method according to claim 5 or 6, characterized in that the carrier material comprises an aqueous gel-forming material.

8. Method according to any one of the above-mentioned claims, characterized in that during the extrusion of the biologically active material, optionally together with the carrier material, an essentially inert fluid is simultaneously supplied to the inner chamber of the dosage form.

9. Method according to any of the preceding claims, characterized in that during the extrusion of the biologically active material, possibly together with the carrier material and/or the inert fluid, an antioxidant is simultaneously added.