NO135789B

NO135789B -

Info

Publication number: NO135789B
Application number: NO699/70A
Authority: NO
Inventors: H Kubinyi
Original assignee: Knoll Ag
Priority date: 1969-02-28
Filing date: 1970-02-27
Publication date: 1977-02-21
Also published as: IE34036L; US3726857A; SE374915B; NO135789C; NL7002669A; FI47184B; IL33952A0; FR2034576B1; ES377027A1; JPS512471B1; NL164287B; FR2034576A1; BG17560A3; IE34036B1; DE1910207C3; BE746576A; DK128418B; AT299456B; FI47184C; CS168524B2

Description

Mange for behandlingen av hjertelidelser hos mennesker viktige hjerteglykosider inneholder metylerte sukre: Digitalose (Digitalinum verum); oleandrose (oleandrin); cyma-rose (strophantosid, strophantin, cymarin); thevetose (theve-tin, neriifolin og peruvosid).

Alle de anforte glykosider har metoksylgruppen i sukrets 3'-stilling. Ennvidere er også glykosider kjent som har en metylgruppe i 2<1->hydroksylgruppen såvel som glykosider med to metyl-grupper i hydroksylgruppene 2' og 3' /se sammenfatningen av T.

Reichstein og E. Weiss i Adv. Carboh. Chem. 12, 65 (1962)7.

Det er kjent at strukturen av sukret henholdsvis sukkerkjeden har innflytelse på virkningen av et hjerteglykosid /B. Baum-garten, Die herzwirksamen Glykoside, s. 2<*>+2, VEB Georg Thieme-Verlag, Leipzig, (1963)7. Det var hittil ikke mulig å undersoke innvirkningen av stillingen og antallet etergrupper i sukret på de farmakologiske egenskaper kvantitativt, da ikke tilstrekke-lig sammenlikningsgrunnlag foreligger. Det er allerede blitt forsokt å fremstille etre av hjerteglykosider partialsyntetisk. Makarevich beskrev syntesen av cymarin fra helvetikosid /I.F. Makarevich, Med. Prom. SSSR 29 (1967)7 såvel som fra k-strophan-thin-(3 fra glukohelvetikosid /"I.F. Makarevich, Khim. Prirod.

Soedin 217 (1967)7-

I den nederlandske patentanso kning nr. 67.17502 beskrives fremstillingen av helvetikosiddietre fra helvetikosid eller cymarin, og i det tyske patent nr. 1.162.835 fremstillingen av 19-metyleter av 19-hyd.roksykardenolider med en acyloksy- eller glyko-sidgruppe ved C - 3-

De angitte forskrifter fores enten til kjente hj erteglykosider eller til helt foretrede hj erteglykosider, som ikke lenger i sukret bærer noen fri hydroksylgruppe eller til hjerteglykosider, som riktignok ved aglykon bærer en ytterligere metylgruppe, hvis sukker dog forblir uforandret. I intet tilfelle ble nye forbindelser oppnådd, hvis sukker inneholder en eller flere ytterligere grupper såvel som en eller flere ytterligere frie hydroksylgrupper.

Gjenstand for nærværende oppfinnelse er en analogifremgangsmåte for fremstilling av kardioaktive A a H- * 20 ° 22-bufatrienolidrhamnosid-etre med den generelle formel

hvor R betegner en metyl- eller formylgruppe, R-^ og R2 hydrogen-atomer, alkyl- (med 1-6 C-atomer) eller acetylgrupper eller beg-CH ge sammen gruppen ^C=cCH3 og et hydrogenatom, en acetyl-gruppe eller en alkylgrup^e med 1-6 C-atomer, hvorved minst en av restene R1? R2 og R^ er en alkylgruppe. Disse A Il po *2" 2-bufatrienolidrhamnosid-etre med foranstående generelle formel, hvor substituentene R, og R^°§ R^ er SOm foran angitt fremstilles efter en fremgangsmåten som karakteri-L. po 22 seres ved at man omsetter et 6 ' " -bufatrienolidrhamnosid-derivat med den generelle formel

hvor R er som foran angitt og R'-, og R'9 betegner hydrogenato-

CH

mer eller sammen gruppen ^C<TCH3, i e"t inert, organisk opplos-

ningsiniddel med et alkylhalogenid i nærvær av en base, skiller eventuelt den erholdte blanding ved soylekromatografi og/eller krystall!sasjon og/eller Craig-fordeling og eventuelt spalter av en. forekommende isop" opylidenrest og/eller acetylerer frie hydroksygrupper ved sukkerresten.

Som alkylhalogenider egner seg for denne reaksjon særlig alkyl-jodidene. De tilsvarende bromider og klorider er riktignok på grunn av sin storre flyktighet, nemlig metyl- og etylforbindel-sene, ikke fult så lette å behandle som jodidene, men omsetningen lykkes også med disse.

Som baser kommer for reaksjonen fortrinnsvis jordalkalihydroksyder, blandinger av jordalkalihydroksyder og-oksyder, natriumhydrid og solvoksyd i betraktning. Utfores reaksjonen med jordalkalihydroksyder henholdsvis -oksyder eller med natriumhydrid kommer som opplosningsmiddel fortrinnsvis dimetylformamid i betraktning, anvender man som base solvoksyd, så kan omsetningen like godt gjennomfores i aceton, tetrahydrofuran eller dioksan.

Strukturordningen for proscillaridin- og 19-okso-proscillaridin-monoeter skjedde ved KMR-spektroskop!, natriumperjodatbehand-■• ling og acetoniddannelse. Strukturordningen for proscillaridin-og 19-okso-proscillaridin-dimetyleter skjedde ved den utsiktede syntese fra de rene monometyletre og DC- sammenlikning av re-aksjonsproduktene såvel som KMR-spektroskopi. Ved alle proscillaridin-etrene ble også KMR-spektrene for acetylert eter anvendt for strukturoppklaring..

Ved hjelp av KMR-spektroskopi kunne også proscillaridin- henholdsvis 19-okso-proskillaridin-metyleterblandinger analyseres. For dette må KMR-spektrene for metyleterblandingen og - efter acetylering av en liten prove av blandingen også metyleter-blanding-acetatet foreligge. Således kan man f.eks. bestemme sammensetningen av en proscillaridin-monometyleterblanding på folgende måte:

^-innhold av V-metyleter i blandingen =

flater av V- OCH^- signalet x 100

flater for alle OCH^-signaler

innhold av 3'-metyleter i blandingen =

flater av 3'-OCH^-signalet for diacetatblandingen x 100

flater for alle OCH^-signaler i diacetatblandingen

innhold av 2'-metyleter i blandingen =

100$ - (^-innhold av 3'- og h•-metyletre)

Sammensetningen av en proscillaridin-dimetyleterblanding kan bestemmes på folgende måte:

%-innhold av 2'3'-dimetyleter i blandingen =

flater for h'O-acetyl-signalet i dimetyleterblanding-acetatet x 100

totale flater for O-acetyl-signalet i dimetyleterblanding-acetatet

^-innhold av 3 ,1+'-dimetyleter i blandingen =

(flater av OCIU-signalet av 3 ' -dimetyleter-2' -acetatet i dimetyleterblanding-acetat) x 100

totale flater av OCH^-signalene i dimetyleterblanding-acetatet

^-innhold av 2 ,l+' -metyleter i blandingen =

100 % - (^-innhold av 2 1 3 ' - og 3 «lf' -dimetyleter)

Mono- og dimetyleterblandingene kan dessuten analyseres ved hjelp av preparativ tynnlagskromatografi, eluering av sonene og kvantitativ bestemmelse med UV-spektroskopi. Ved monometyl-eller -etyleterblandingene kan også spaltningen med natriumper-jodat og titrering av den forbrukte reagens henholdsvis kvantitativ tynnlagskromatografi trekkes inn for bestemmelse av 3'-etren.

De for strukturbestemmelsen og for analyse av blandingene nød-vendige data kan tas ut fra de folgende tabeller. Tabell 1 viser en sammenstilling av R^-verdiene, tabell 2 en oversikt over de kjemiske egenskaper og tabell 3 KMR-dataene for noen av de fremstilte forbindelser.

I tabell 3 angis de kjemiske forskyvninger cf i ppm (i/tetrame-tylsilan = 0,00 ppm.), koblingene J i Hz. ■

Folgende forkortelser anvendes:

s - enkelt, d = dublett, t = triplett, q -- kvadruplett, m = multiplett, br = bred,

Tabell la:

Rp-verdier for proscillaridin- henholdsvis 19-okso-proscillaridin-mono- og di-derivater. Silikagel (HF-Merck) uten kammer-metning

Tabell 1 b:

Rp-verdier for proscillaridin- henholdsvis 19-okso-proscillaridin-derivater. Silikagel (HF-Merck) uten kammerraetning.

Tabell 2 a:

Kjemiske egenskaper for proscillaridin- og 19-okso-proscillaridin-monoeter

T abell 2 b:

Strukturordning for proscillaridin-dimetyleter ved partiell metylering av proscillaridin-monometyletre

Tabell 3 a:

KMR - Data for proscillaridin-metyleter

De nye forbindelser har en meget god hjertevirkning og er meget godt resorberbare. Den folgende tabell viser den overlegne virk-ning for de nye. forbindelser i sammenlikning med proscillaridin.

Bestemmelsen av hjertevirkningen hos marsvin skjedde efter Knaff 1-Lenz, J. Pharm. exp. Ther. 29_, ^07 (1926), som hos katten efter Hårener og medarb., Am. J. Pharm. 82, 36O (1910). Den enterale resorpsjon hos katten ble bestemt efter Hotovy, R., Arzneimittelforschung 1, 160 (1951).

I norsk patentsøknad nr. I69.I83 er den viktigste forbindelse proscillaridinacetonid. Denne forbindelse har en hjertevirk-somhet hos katter på 0,28 mg/kg, mens den enterale resorpsjon er 77 %• Denne forbindelse er således klart dårligere enn de her foreliggende forbindelser. Det skal i denne sammenheng vises til at nyere forsok med proscillaridin-3'-metyleter og proscillaridin-^'-metyleter har gitt at hjertevirksomheten hos katter er 0,12 henh. 0,15 mg/kg og den enterale resorpsjon 8l henh. >85 %. Det vises her til tabellen på side 18.

De nye substanser kan admininistreres i de farmasøytisk van-lige anvendelsesformer, som tabletter, dragéer, kapsler, oppløs-ninger o.s.v.. Doseområdet ligger mellom 0,2 og 3?0 mg pr. pasient og dag.

Eksempel 1.

5 g proscillaridin rores i 100 ml dioksan med 20 ml metyljodid og 10 g solvoksyd i 6 timer ved 20°C. Satsen filtreres, resten vaskes omhyggelig med eddiksyreetylester, -filtratet dampes inn og resten kromatograferes på avaktivert silikagel på en soyle 110 x 5 cm med systemet kloroform/aceton = 2/1.

Man får:

0,58 g proscillaridin-dimetyleterblanding (11 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,<k>7 - 0,59 i eddiksyreetylester

2,76 g proscillaridin-monoetyleterblanding (5^ % av det teoretiske), RF-verdi = 0,28 - 0,37 i eddiksyreetylester 1,22 g proscillaridin (2<>>+ % av anvendt produkt).

Krystallisasjon av 2,76 g proscillaridin-monometyleterblanding fra 25 ml eddiksyreetylester gir 1,29 g krystallinsk proscillaridin-3'-metyleter, s.p. 235-2<1>+2°C; Rp-verdi = 0,30 i eddiksyreetylester .

Eksempel 2.

5 g proscillaridin rores i 100. ml dimetylformamid med 30 g solvoksyd og 30 ml metyljodid i 2 timer ved 20°C. Satsen filtreres, resten vaskes omhyggelig med eddiksyreetylester og filtratet dampes inn. Efter soylekromatografi på avaktivert silikagel på en soyle 100 x 6 cm med systemet eddiksyreetylester får man: 1,30 g proscillaridin-monometyleterblanding 25 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,28 - 0,37 i eddiksyreetylester.

Eksempel 3.

5 g proscillaridin oppvarmes i 50 ml aceton kort til kokning med 1 g borsyre. Derefter avkjoles den klare opplosning til k0°C, tilsettes 20 ml metyljodid og 10 g solvoksyd og rores i 16 timer ved hO°C. Satsen filtreres, resten vaskes omhyggelig med eddiksyreetylester og filtratet dampes inn. Soylekromatografi på avaktivert silikagel på en soyle 90 x 5 ci gir: 0,8^ g proscillaridin-dimetyleterblanding (16 % av det teoretiske) , Rp-verdi = 0,'+7 - 0,59 i eddiksyreetylester

3,0<*>+ g proscillaridin-monometyl-eterblanding (59 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,28 - 0,37 i eddiksyreetylester.

Efter krystallisasjon fra 30 ml eddiksyreetylester får man 1,8<>>+ g krystallinsk proscillaridin-3'-metyleter (36 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,30 i eddiksyreetylester, s.p. 231 - 2<L>0°C.

Eksempel h .

5 g proscillaridin rores i 100 ml tetrahydrofuran med 20 ml etyljodid og 10 g solvoksyd i 6 timer ved 20°C. Satsen opparbeides som beskrevet i eksempel 1.

Efter soylekromatografi på avaktivert silikagel på en sbyle 110 x 5 cm med systemet kloroform/aceton = h/ l får man: 2,26 g proscillaridin-monoetyleterblanding (^3 % av det teoretiske, henholdsvis 90 % av det teoretiske når det gjelder omsatt utgangsmateriale), Rp-verdi = 0,L7 i eddiksyreetylester 2,63 g proscillaridin (53 % av det anvendte produkt). Krystallisasjon av proscillaridin-monoetyl-eterblandingen fra 10 ml eddiksyreetylester gir 0,77 g proscillaridin-3'-etyleter (15 % av det teoretiske, henholdsivs 31 % av det teoretiske når det gjelder omsatt utgangsmateriale), Rp-verdi. = 0,k7 i eddiksyreetylester, s.p. 238 - 2^-9°C.

Eksempel 5.

5 g proscillaridin rores i 100 ml dimetylformamid med 33 ml metyl jodid og 2,5 g finpulvrert bariumhydroksyd i 70 minutter ved 20°C. Satsen tas opp med 500 ml eddiksyreetylester, rystes ut to ganger med 5 %' s vanndig saltsyre, derpå to ganger med 5 %' s vanndig natronlut og endelig to ganger med vann. Den organiske fase torkes over vannfritt natriumsulfat og dampes inn.

Efter soylekromatografi på avaktivert silikagel på en soyle 80 x 5 cm med systemet kloroform/aceton = 3/1 får man: 0,98 g proscillaridin-dimetyleterblanding (19 % av det teoretiske, RF-verdi = 0,^7 - 0,59 i eddiksyreetylester

3,<*>+6 g proscillaridin-monometyleterblanding (67 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,28 - 0,37 i eddiksyreetylester.

Krystallisasjon av proscillaridin-monometyleterblandingen fra 35 ml eddiksyreetylester gir 2,23 g krystallinsk proscillaridin-3'-metyleter ( hh% av det teoretiske), Rp-verdi = 0,30 i eddik-, syreetylester, s.p. 2>+8 - 255°C.

Eksempel 6.

5 g proscillaridin rores i 50 ml dimetylformamid med 5 ml metyl jodid og 3,5 g finpulverisert bariumhydroksyd 1 time ved

20°C. Opparbeidelsen skjer som i eksempel 5- Man får efter

■ •• soylekromatograf ien:

1,61 g proscillaridin-dimetyleterblanding (31 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,^7 - 0,59 i eddiksyreetylester

2,3^ g proscillaridin-monometyleterblanding ( h- 6 % av det teoretiske) , Rp-verdi = 0,28 - 0,37 i eddiksyreetylester.

Krystallisasjon av proscillaridin-monometyleterblandingen fra 25 ml eddiksyreetylester gir 1,68 g proscillaridin-3'-metyleter (33 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,30 i eddiksyreetylester,s.p. 233 - 2<l>fO°C

Eksempel 7.

5 g proscillaridin oppvarmes i 100 ml dimetylformamid i lopet av kort tid til kokning med 33 ml metyljodid, 33 g finpulverisert bariumoksyd og 1,<1>+ g finpulverisert bariumhydroksyd, og derpå rores om ytterligere 2 timer ved 20°C • Opparbeidelsen skjer som beskrevet i eksempel 5-

Efter soylekromatografien får man:

1,27 g ikke-polare andeler, som består av proscillaridin-tri-og di-metyletre såvel som andre ikke-polare biprodukter.

1,35 g proscillaridin-monometyleterblanding (26 % av det teoretiske) , Rp-verdi = 0,28 - 0,37 i eddiksyreetylester.

Krystallisasjon av proscillaridin-monometyleterblandingen fra 50 ml eddiksyreetylester gir 0,77 g krystallinsk proscillaridin-3 ' -metyleter (15 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,30 i eddiksyreetylester,s.p. 233-239,5°C.

Eksempel 8.

2,5 g finpulverisert bariumhydroksyd rores om i 100 ml dimetylformamid i 16 timer ved 20°C. Derefter tilsettes 5 g proscillaridin og 33 ml metyljodid og satsen rores om ytterligere 60 minutter ved 20°C. Opparbeidelsen skjer som beskrevet i eksempel 5. Efter soylekromatografi får man: 0,36 g proscillaridin-dimetyleterblanding (7 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,<L>7 - 0,59 i eddiksyreetylester

2,79 g proscillaridin-monometyleterblanding (5<*>+ % av det teoretiske) , Rp-verdi = 0,28 - 0,37 i eddiksyreetylester.

Krystallisasjon av proscillaridin-monometyleterblandingen fra 30 ml eddiksyreetylester gir 1,58 g krystallinsk proscillaridin-3'-metyleter (31 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,30 i eddiksyreetylester, s.p. 23U- - 2<1>+0°C.

Eksempel 9.

3 g finpulverisert bariumhydroksyd rores om i 50 ml dimetylformamid i 16 timer ved 20°C. Derefter tilsettes 5 g proscillaridin og 5 ml me ty ljod id og satsen rores ytterligere 1+5 minutter ved 20°C. Opparbeidelsen skjer som beskrevet i eksempel 5- Efter soylekromatografien får man: 1,06 g prosc.Lllaridin-dimetyleterblanding (20 % av det teoretiske), Rp-verdi 0,^7 - 0,59 i eddiksyreetylester

3,91 g proscillaridin-monometyleterblanding (76 % av det teoretiske), Rp-verdi 0,27 - 0,37 i eddiksyreetylester.

Krystallisasjon av proscillaridin-monometyleterblandingen fra ho ml eddiksyreetylester gir 2,75 g krystallinsk proscillaridin-3'-metyleter (5V % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,30 i eddiksyreetylester ,s.p. 2h6 - 252°C.

Ti ytterligere analoge satser med reaksjonstider på 20 til 30 minutter gir 0,79 "til 1,39 g dimetyleterblanding (15 - 27 % av det teoretiske) og 3 9 33 "til U-,01 g pr ose illar idin-monometyl-eterblanding (65 - 78 % av det teoretiske) henholdsvis efter krystallisasjon fra eddiksyreetylester 2,<>>+0 til 2,99 g krystallinsk proscillaridin-3'-metyleter (<1>+7 - 58 % av det teoretiske).

På analog måte får man 19-okso-proscillaridin-monometyleterblanding, Rp-verdi = 0,23 - 0,27 i eddiksyreetylester og efter krystallisasjon fra eddiksyreetylester den rene 19-okso-pro-scilla.ridin-3' -metyleter, s.p. 226 - 230°C, Rp-verdi - 0,23 i eddiksyreetyle ster.

Eksempel 10.

9,91 g proscillaridin-monometyleterblanding (fra krystallisa-sjonsmoderlutene av proscillaridin-3'-metyleter, eksempel 9) fordeles i z = 100 elementer over n = 2000 skritt med systemet tetraklorkarbon/kloroform/metanol/vann = 2/2/3/1 (V = 25/25 ml, T - 20°C): efter 100 skritt grunnprosess anvendes den veksel-fasede opptagelsesfremgangsmåte med et forhold for de opptatte ovre faser og de nedre faser på ca 3:2 (totalt 123k ovre faseskritt og 766 nedre faseskritt).

Man får i elementene:

0-38: 1,21 g blanding bestående av proscillaridin-2'- og h{-metyleter, Rp-verdi = 0,28 og 0,37 i eddiksyreetylester

39-7k: 1,37 g proscillaridin-2.'-metyleter, Rp-verdi = 0,28 i eddiksyreetylester; krystaller fra eddiksyreetylester,

s.p. 151,5 - 158,5°C

75-100' 0,5?- g blanding av proscillaridin-2'- og 3'-metyleter,

Rp-verdi = 0,28 - 0,30 i eddiksyreetylester.

De utlopne nedre henholdsvis ovre faser inneholder proscillaridin-V'- henholdsvis 3'-metyleter.

Eksempel 11.

5 g'proscillaridin rores i 100 ml dimetylformamid med 25 ml etyljodid og 0,5 g av en ca. 50 %'s natriumhydrid-olje-suspensjon 1 time ved 20°C. Satsen tas opp med 500 ml eddiksyreetylester, rystes ut tre ganger, hver gang med 500 ml vann, og al-le vanndige faser eftervaskes ennå engang med 500 ml eddiksyreetylester. De forenede, organiske faser torkes med vannfritt natriumsulfat, dampes inn, og resten kromatograferes på avaktivert silikagel på en soyle 100 x 5 cm med systemet kloroform/ aceton = h/ l til 1/1.

Man får:

Q, h8 g proscillaridindietyleterblanding, Rp-verdi = 0,5 i kloroform/aceton = h/ l

2,17 g proscillaridin-monoetyleterblanding, Rp-verdi = 0,<L>7 i eddiksyreetylester

1,77 g proscillaridin (35 % uforandret utgangsmateriale)

Med 1,0 g 50 % x s natriumhydrid-olje-suspensjon i stedet for 0,5 g får man under ellers identiske betingelser: 0,30 g proscillaridintrietyleter, Rp-verdi = 0,9 i kloroform/

aceton ■- h/ l

1,06 ,g proscillaridindietyleterblanding

2,82 g proscillaridinmonoetyleterblanding

Q, 2h g proscillaridin (5 % uforandret utgangsmateriale)

Pa analog måte får man fra proscillaridin med propyljodid henholdsvis pentyljodid i små utbytter proscillaridinmonopropyl-eterblanding, Rp-verdi = 0,55 1 eddiksyreetylester og proscil-laridinmonopentyleterblanding, Rp-verdi = 0,60 i eddiksyreetylester .

Ved metyleringen av proscillaridin kan natriumhydrid-olje-suspensjonen også erstattes med natriummetylat. Utbyttene av proscillaridinmonometyleterblanding er imidlertid mindre enn med natriumhydrid.

Eksempel 12.

2,5 g proscillaridin-213'-acetonid rores i 50 ml dimetylformamid med 15 ml metyljodid og 15 g solvoksyd i 20 timer ved 20°C. Opparbeidelsen skjer som beskrevet i eksempel 2. Efter soylekromatograf i på avaktivert silikagel på en soyle 100 x h cm med systemet kloroform/eddiksyreetylester - 10/1 får man: 1,90 g proscillaridin-2'3'-acetonid-^<1->metyleter ( 7h % av det teoretiske), amorf, Rp-verdi = 0,67 i kloroform/eddiksyreetylester 1/1.

Eksempel 13.

10 g proscillaridin-2'3'-acetonid oppvarmes i 200 ml aceton med

200 ml etyljodid og 50 g solvoksyd i- 6 timer til kokning. Opparbeidelsen skjer som beskrevet i eksempel 1. Efter sbyiekroma-to.grafi på avaktivert silikagel på en soyle IhO x 3 cm med sy-.''sternet kloroform/eddiksyréetylester = h/ l til 1/1 får man: 1,63 g. proscillaridin-2' 3' -acetonid-1!-'-etyleter (66 % av det teoretiske når det gjelder omsatt utgangsmateriale), amorf, Rp-verdi = 0,71 i kloroform/eddiksyréetylester = 1/1

7, éh g proscillaridin-2'3'-acetonid kan gjenutvinnes uforandret.

Eksempel lh .

1 g proscillaridin-2<1>3'-acetonid-k'-etyleter rores i 50 ml 0,2

n saltsyre i tetrahydrofuran i 8 timer ved 20°C. Satsen tas opp med 200 ml eddiksyreetylester, den organiske fase rystes ut én gang med 200 ml 5 $'s vanndig natronlut og to ganger med vann, torkes over vannfritt natriumsulfat og dampes inn. Resten kromatograferes på avaktivert silikagel på ensoyle 100 x 3 cm med systemet kloroform/eddiksyreetylester = h/ l.

Man får:

0, lh g proscillaridin-2'3 '-acetonid-U-'-etyleter ( ^ lh % av uforandret utgangsmateriale), Rp-verdi = 0,71 i kloroform/eddiksyreetylester = 1/1.

0,k6 g proscillaridin-^'-etyleter ( h8 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0, h8 i eddiksyreetylester. Krystaller fra eddiksyre-etylster,s.p.182 - 192°C.

Eksempel 15.

5 g proscillaridin-2'3'-acetonid opploses i 50 ml dimetylformamid og rores om med 10 ml metyljodid og 1 g av en 50 %'s natri-umbydrid-olje-suspensjon i 15 minutter ved 20°C. Efter opparbeidelse som i eksempel 10 og soylekromatografi på avaktivert silikagel på en soyle 120 x 5 cm, system kloroform/eddiksyreetylester = 5/1 får man: 3,83 g proscillaridin-2'3'-acetonid-^'-metyleter (75 % av det teoretiske), amorf, Rp-verdi = 0,67 i kloroform/eddiksyreetylester = 1/1.

Eksempel 16.

5 g proscillaridin-2'3'-acetonid opploses i 50 ml dimetylformamid og rores om med 10 ml etyljodid og 1 g av en 50 % x s natriumhydrid-olje-suspensjon i 15 minutter ved 20°C. Efter opparbeidelse som i eksempel 10 og soylekromatografi på avaktivert silikagel på en soyle l<>>+0 x 5 cm, system kloroform/eddiksyre-

etyle ster - 5/1, får man:

1,50 g proscillaridin-2' 3 '-acetonid-^-'-etyleter (29 % av det teoretiske), amorf, Rp-verdi - 0,71 i kloroform/eddiksyreetylester = 1/1.

På analog måte får man fra proscillaridin-2'3'-acetonid med propyljodid henholdsvis pentyljodid i små utbytter proscillaridin-2 '3'-acetonid-^1-propyletren, Rp-verdi 0,7^ i kloroform/ eddiksyreetylester ■= 1/1 henholdsvi s proscillaridin-2' 3 1 -acetonid-V'-pentyletren, Rp-verdi - 0,75 i kloroform/eddiksyreetylester = 1/1.

Eksempel 17.

h satser på hver 10 g proscillaridin-2'3<1->acetonid, 100 ml di-metylf ormamid, 20 ml metyljodid og 6 g finpulverisert bariumhydroksyd rores om i 3 timer ved 20°C.

Satsene forenes og opparbeides som i eksempel 5- Inndampningsresten kromatograferes på avaktivert silikagel på en soyle 160 x 6 cm med systemet kloroform/eddiksyreetylester - h/ l. Gjenutvunnet utgangsmateriale metyleres ytterligere én gang efter foranstående forskrifter og det ved dette erholdte utgangsmateriale metyleres ytterligere én gang efter de angitte forskrifter. Man får - efter tre metyleringer og tre soylekromatogra-fier - ialt: 26,82 g proscillaridin-2'3'-acetonid-^'-metyleter (65 % av det teoretiske henholdsvis 76 % av det teoretiske når det gjelder omsatt utgangsmateriale), amorf, Rp-verdi - 0,67 i kloroform/ eddiksyreetylester = 1/1

5,6<*>+ g proscillaridin-2' 3-acetonid ( lh % av det innforte produkt ).

På analog måte får man 19-okso-proscillaridin-2<1>3'-acetonid-h'-metyleteren, amorf, Rp-verdi = 0,25 i kloroform/eddiksyreetyle st er -- 1/1.

Eksempel 18.

25 g proscillaridin-2'3<1->acetonid-V'-metyleter rores i 1,25 ml 0,2 n saltsyre i tetrahydrofuran i 18 timer ved 20°C. Satsen opparbeides som beskrevet i eksempel lh og den erholdte inndampningsrest kromatograferes på avaktivert silikagel på en soyle 160 x 6 cm med systemet kloroform/eddiksyreetylester = 1/1 inntil ren eddiksyreetylester.

Man får:

8,93 g proscillaridin-^'-metyleter (39 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,37 i eddiksyreetylester, krystallisert fra eddiksyreetylester,s.p.197 - 20^,5 C.

Eksempel 19.

1,8 g 19-okso-proscillaridin-2'3'-acetonid-H<1->metyleter rores om i 90 ml 0,2 n saltsyre i tetrahydrofuran i 6 timer ved 20°C. Satsen opparbeides som beskrevet i eksempel lh og den erholdte inndampningsrest kromatogra eres på avaktivert silikagel på en soyle 100 x h cm med systemet eddiksyreetylester.

Man får:

0,37 g 19-okso-proscillaridin-2' 3 1 -acetonid-U-' -metyleter (" =21% av det innforte utgangsmateriale), Rp-verdi = 0,25 i kloroform/ eddiksyreetylester = 1/1.

0,96 g 19-okso-proscillaridin-L'-metyleter (57 % av det teoretiske) Rp-verdi = 0,27 i eddiksyreetylester, krystaller fra eddiksyreetylester ,s.p.222 - 229°C.

Eksempel 20.

5 g proscillaridin opploses i 100 ml dimetylformamid og rores om med 20 ml metyljodid og 2,0 g av en ca. 50 %' s natriumhydrid-olje-suspensjon i 1 time ved 20°C. Efter opparbeidelse som i eksempel 10 og soylekromatografi på avaktivert silikagel på en soyle 120 x h cm med systemet kloroform/eddiksyreetylester = 2/1 fåes: 1,7*+ g proscillaridintrimetyleter (32 % av det teoretiske),

Rp-verdi = 0, hO i kloroform/eddiksyreetylester - 1/1. Krystaller fra metanol, s.p. 121 - 12h°C.

2,19 g proscillaridindimetyleterblanding 0+ 2 % av det teoretiske) , Rp-verdi - 0,^7 - 0,59 i eddiksyreetylester.

0,37 g proscillaridinmonometyleterblanding (/% av det teoretiske), Rp-verdi = 0,28 - 0,37 i eddiksyreetylester.

Eksempel 21.

10 g proscillaridin rores om i 200 ml dimetylformamid med 60

ml rnetyljodid og 12 g finpulverisert bariumhydroksyd i 3 timer ved 20°C. Satsen opparbeides som beskrevet i eksempel 5, og inndampningsresten kromatograferes på avaktivert silikagel på en soyle 120 x 5 cm med systemet kloroform/eddiksyreetylester Vi.

Man får:

3,02 proscillaridin-2'3' h'-trimetyleter (28 % av det teoretiske), Rp-verdi - Q, hO i kloroform/eddiksyreetyle ster = 1/1. Krystaller fra metanol,s.p. U9 - 123°C.

6,15 g proscillaridin-dimetyleterblanding (58 % av det teoretiske) ; inneholder efter tynnlagskromatogram ca. 90% proscillaridin-2 ' 3' -dimetyleter, Rp-verdi = 0,'+7 - 0,59 i eddiksyreetylester.

En ytterligere metylering av dimetyleterblandingen ifolge den foran angitte forskrift gir efter opparbeidelse og kromatograf! på en soyle 120 x 5 cm med systemet kloroform/eddiksyreetylester

-- h/ l ytterligere

1,98 g proscillaridin-2'3 ,!+'-trimetyleter (ialt hG % > av det teoretiske \ Rp-verdi = 0,U-0 i klorof orm/eddiksyreetylester = 1/1

3,36 g proscillaridin-2'3'-dimetyleter (32 av det teoretiske),

Rp-verdi = 0,k7 i eddiksyreetylester, krystaller fra litt eddiksyreetylester , s.p. 136 - lhO, 5°C

På analog måte får man fra 19-okso-proscillaridin 19-okso-proscillaridin-2'3'V-trimetyletren, amorf, Rp-verdi =0,23 i klorof orm/eddiksyreetylester = 1/1 og l9-okso-proscillaridin-2'3'-dimetyletren, amorf, Rp-verdi = 0, 3k i eddiksyreetylester.

Eksempel 22.

5 g proscillaridin-^'-metyleter rores i 50 ml dimetylformamid med 5 ml -metyljodid og 2 g finpulverisert bariumhydroksyd i 60 minutter ved 20°C. Opparbeidelsen skjer som beskrevet i eksempel 5- Efter soylekromatografi på avaktivert silikagel på en soyle 100 x 5 cm med systemet kloroform/eddiksyreetylester = 1/1 får man: 0,90 g prosckllaridin-213'-trimetyleter (17 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,<*>+0 i klorof orm/eddiksyreetylester - 1/1, krystaller fra metanol, s.p. 12<>>+ - 129°C.

2,68 g proscillaridin-2 ' h ' - og 3 ,!+'-dimetyleterblanding (51 % av det teoretiske), Rp-verdi - 0,55 - 0,59 i eddiksyreetylester

0,23 g proscillaridin-<l>f'-metyleter ( ^ 5 % av det innforte produkt), Rp-verdi = 0,37 i eddiksyreetylester.

På analog måte får man fra 19-okso-proscillaridin-^'-metyleter en blanding av 19-okso-proscillaridin-2 ' h ' - og 3 ,1+ ' -dimetyleter, Rp-verdi ■= 0,<1>+1 i eddiksyreetylester.

Fra proscillaridin-2'-metyleter får man en blanding av proscillaridin-2 '3'- og -2'k<l->dimetyleter, Rp-verdi = 0,k7 og 0,55 i eddiksyreetylester. Efter tynns3iktskromatogram består blandingen av ca. 90% proscillaridin-2<1>3'-dimetyleter og 10$ proscillaridin-2 ' -dimetyleter. Ved soylekromatograf i kan den skilles i rene komponenter.

Likeledes får man fra proscillaridin-3'-metyleter en blanding av proscillaridin-2'3'- og -3' k1-dimetyleter, R^-verdi = 0, ky og 0,59 i eddiksyreetylester. Efter tynnlagskromatogram består blandingen av ca. 90$ proscillaridin-2'3'-dimetyleter og 10 % proscillaridin-3' k'-dimetyleter. Ved soylekromatografi kan den skilles i de rene komponenter.

Eksempel 23.

2,68 g proscillaridin-2 !lf 1 - og -3 ' k ' -dimetyleterblanding (oppnådd ifblge eksempel 20) fordeles i z = 100 elementer over n = 550 skritt med systemet tetraklorkarbon/kloroform/metanol/vann = 3/1/3/1 (V = 25/25 ml, T = 20°C): efter 100 skritt grunnpro-ses og 50 skritt opptagelse, av den ovre fase anvendes den vek-selfasede opptagelsesfremgangsmåte med et forhold mellom de opptatte ovre faser og de nedre faser på ca. 13 : 7 (ialt <L>05 ovre fase- og l'+5 nedre faseskritt) .

Man får i elementene:

l8->+7: 0,89 g proscillaridin-3 ,lf'-dimetyleter, R^-verdi - 0,59

i eddiksyreetylester, krystaller fra eddiksyreetylester, s.p. 218,5 - 223°C -•'*+8-b3: 0,80 g proscillaridin-2'>+ ' - og -3 '*+ '-dimetyleterblanding, Rp-verdi = 0,55 og 0,59 i eddiksyreetylester.

6k<->99: 0,82 g proscillaridin-2,<!>+'-dimetyleter, R -verdi = 0,55

i eddiksyreetylester , krystaller fra eddiksyree ter, s.p. 210,5 - 2lh°C.

På liknende måte kan blandingen av 19-okso-proscillaridin-2 ,l+1 - og -3,1+' -dimetyleter skilles i de rene komponenter.

Eksempel 2h .

200 mg proscillaridin-^'-metyleter tilsettes i 5 ml absolutt pyridin 5 ml acetanhydrid og får henstå i 2^ timer ved 20°C. Til reaksjonsblandingen tilsetter man for å spalte overskytende acetanhydrid 10 ml metanol. Efter 1 time ved 20°C tas 200 ml eddikester opp, den organiske fase vaskes to ganger, hver gang

med. 200 ml 5 $'s vanndig saltsyre, to ganger, hver gang med 200 ml 5%'s vanndig natronlut og to ganger, hver gang med 200 ml vann, torkes over vannfritt natriumsulfat og dampes inn. Soylekromatograf! av inndampningsresten på avaktivert silikagel på en soyle 60 x 2 cm med systemet kloroform/ eddiksyreetylester = h/ l gir: 202 mg proscillaridin-^<1->metyleter-2'3'-diacetat (88 % av det teoretiske), amorft, Rp-verdi = 0,55 i kloroform/eddiksyreetylester = 1/1.

Efter identiske forskrifter får man fra: proscillaridin-2'-metyleter proscillaridin-2'-metyleter-3' h' - diacetatet, amorft, Rp-verdi = 0,51 i kloroform/eddiksyreetylester = 1/1

proscillaridin-3'-metyleter proscillaridin-3'-metyleter-2,<k>'-diacetatet, amorft, Rp-verdi = 0,59 i kloroform/eddiksyreetylester = 1/1

proscillaridin-2'3'-dimetyleter proscillaridin-2'3'-dimetyleter-'+<1->acetatet, amorft, Rp-verdi = 0,38 i klorof orm/eddiksyreetylester = 1/1

proscillaridin-2' h' -dimetyleter proscillaridin-2 '•+' -dime ty leter-3'-acetatet, amorft, Rp-verdi = 0,50 i kloroform/eddiksyreetylester = 1/1

proscillaridin-3 ,!+' -metyleter proscillaridin-3 'V -dimetyleter-2'-acetat, amorft, Rp-verdi = 0,1+9 i klorof orm/eddiksyreetylester = 1/1

proscillaridin-3<1->etyleter proscillaridin-3'-etyleter-2' h'-diacetatet, amorft, Rp-verdi = 0,57 i kloroform/eddiksyreetylester = 1/1

proscillaridin-^'-etyleter i proscillaridin-<k>'-etyleter-2'3'-

di acetat,', amorft, Rp-verdi = 0,56 i klorof orm/eddiksyreetylester - l/i

På. analog måte kan de tilsvarende 19-okso-proscillaridin-metyleter-acetater fremstilles fra 19-okso-proscillaridin-metyletre-ne.

Eksempel 25.

1 g proscillaridin-dimetyleterblanding (bestående av ca. 80 % proscillaridin-2'3'-dimetyleter) i 10 ml absolutt pyridin tilsettes 10 ml acetanhydrid og får henstå i 2h timer ved 20°C. Opparbeidelsen skjer som beskrevet i eksempel 2h. Efter soylekromatograf! på avaktivert silikagel på en soyle 120 x 3 cm med systemet kloroform/eddiksyreetylester = h/ l får man: 0,12 g proscillaridin-2.'1+'-dimetyleter-3 '-acetat og-3'<!>+'-dime-tylester-2'-acetatblanding (11 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,50 i kloroform/eddiksyreetylester = 1/1

0,73 g proscillaridin-2'3'-dimetyleter- h'-acetat (68 % av det teoretiske), Rp-verdi = 0,38 i kloroform/eddiksyreetylester 1/1.

Eksempel 26.

10 g proscillaridin-3'-metyleter tilsettes i 100 ml absolutt pyridin 10 ml acetanhydrid og får henstå 2 timer ved 20°C. Opp-arbeidelsen skjer som beskrevet i eksempel 2h. Efter soylekroma-tografien på avaktivert silikagel på en soyle 120 x 5 cm med systemet kloroform/aceton 3/1 får man: 1,62 g proscillaridin-3 ' -metyleter-2 !l+ '-diacetat ( <l>h % av det teoretiske), amorft, Rp-verdi = 0,5^ i kloroform/eddiksyreetylester -- 1/1

0,36 g proscillaridin-3'-metyleter-2'-acetat (3 % av det teoretiske), amorft, Rp-verdi = 0,72 i eddiksyreetylester 5,39 g proscillaridin-3 1 -metyleter-^-'-acetat (50 % av det teo-

retiske), amorft, Rp-verdi = 0,69 i eddiksyreetylester

2,92 g proscillaridin-3<1->metyleter ( 29$ gjenutvunnet utgangsmateriale), Rp-verdi - 0,30 i eddiksyreetylester.

Efter liknende forskrifter får man fra: proscillaridin-2'-metyleter en blanding av proscillaridin-2'-metyleter-3'-acetat og 2'-metyleter-^<1->acetat, Rp-verdi = 0,70

- 0,72 i eddiksyreetylester

proscillaridin-V-metyleter en blanding av proscillaridin-^'-metyleter-2'-acetat og h'-metylester-3<1->acetat, begges Rp-verdi = 0,72 i eddiksyreetylester.

Claims

Analogifremgangsmåte for fremstilling av kardioaktive ZA \ Ll * OD " OO-bufatrienolidrhamnosid-etre med den generelle

formel

hvor R betegner en metyl- eller formylgruppe, R-^ og R2 hydrogen-atomer, alkyl- (med 1-6 C-atomer) eller acetylgrupper eller beg- CH ge disse sammen gruppen ^C^CH^ og R3 et hydrogenatom, en ace- tylgruppe eller en alkylgruppe med 1-6 C-atomer, idet minst en av restene R-,, R9 eller Ro er en alkylgruppe, karakterisert ved at man omsetter et A ' -bufatrienolidrham- nosid-derivat med den generelle formel hvor R er som foran angitt, og R'-, og R'o betegner hydrogenato- CH _.. mer eller begge sammen gruppen^: Cc^-.^ 5 i et inert, organisk opplosningsmiddel med et alkylhalogen^d i nærvær av en base, skiller eventuelt erholdte blandinger ved soylekromatografi og/ eller krystallisasjon og/eller'Craig-fordeling og spalter eventuelt en forekommende isopropylidenrest av og/eller acetylerer frie hydroksygrupper ved sukkerresten.