NL9500639A - Isotonic diluent for diluting whole blood, diluent in combination with a lysing agent, and method for treating a sample of whole blood - Google Patents
Isotonic diluent for diluting whole blood, diluent in combination with a lysing agent, and method for treating a sample of whole blood Download PDFInfo
- Publication number
- NL9500639A NL9500639A NL9500639A NL9500639A NL9500639A NL 9500639 A NL9500639 A NL 9500639A NL 9500639 A NL9500639 A NL 9500639A NL 9500639 A NL9500639 A NL 9500639A NL 9500639 A NL9500639 A NL 9500639A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- diluent
- lysing agent
- blood
- whole blood
- isotonic
- Prior art date
Links
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 title claims abstract description 41
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 30
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000007865 diluting Methods 0.000 title claims abstract description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 38
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 12
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 10
- -1 4-aminobenzoic acid ester Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 8
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 claims abstract description 6
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N aniline-p-carboxylic acid Natural products NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- QZTKDVCDBIDYMD-UHFFFAOYSA-N 2,2'-[(2-amino-2-oxoethyl)imino]diacetic acid Chemical compound NC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O QZTKDVCDBIDYMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- QUBQYFYWUJJAAK-UHFFFAOYSA-N oxymethurea Chemical compound OCNC(=O)NCO QUBQYFYWUJJAAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229950005308 oxymethurea Drugs 0.000 claims description 9
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical group 0.000 claims description 8
- HCBIBCJNVBAKAB-UHFFFAOYSA-N Procaine hydrochloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 HCBIBCJNVBAKAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000002070 germicidal effect Effects 0.000 claims description 7
- 229960001309 procaine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 7
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 7
- VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N hexamethylenetetramine Chemical compound C1N(C2)CN3CN1CN2C3 VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000004312 hexamethylene tetramine Substances 0.000 claims description 3
- 235000010299 hexamethylene tetramine Nutrition 0.000 claims description 3
- HWJHZLJIIWOTGZ-UHFFFAOYSA-N n-(hydroxymethyl)acetamide Chemical compound CC(=O)NCO HWJHZLJIIWOTGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- XNRNJIIJLOFJEK-UHFFFAOYSA-N sodium;1-oxidopyridine-2-thione Chemical compound [Na+].[O-]N1C=CC=CC1=S XNRNJIIJLOFJEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WDRFFJWBUDTUCA-UHFFFAOYSA-N chlorhexidine acetate Chemical compound CC(O)=O.CC(O)=O.C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 WDRFFJWBUDTUCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001884 chlorhexidine diacetate Drugs 0.000 claims description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 16
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 8
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 3
- 239000003193 general anesthetic agent Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- DLNPJWYSCKUGHI-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxypyridine-2-thione;sodium Chemical compound [Na].ON1C=CC=CC1=S DLNPJWYSCKUGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- CXRFDZFCGOPDTD-UHFFFAOYSA-M Cetrimide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C CXRFDZFCGOPDTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 229940035674 anesthetics Drugs 0.000 description 2
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 2
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- DDXLVDQZPFLQMZ-UHFFFAOYSA-M dodecyl(trimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C DDXLVDQZPFLQMZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000003617 erythrocyte membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 2
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 229960004011 methenamine Drugs 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 108091006112 ATPases Proteins 0.000 description 1
- 102000057290 Adenosine Triphosphatases Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 208000001840 Dandruff Diseases 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical class [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000004807 desolvation Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XJWSAJYUBXQQDR-UHFFFAOYSA-M dodecyltrimethylammonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C XJWSAJYUBXQQDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003914 myeloid leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000979 retarding effect Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000002453 shampoo Substances 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007614 solvation Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/1031—Investigating individual particles by measuring electrical or magnetic effects
- G01N15/12—Investigating individual particles by measuring electrical or magnetic effects by observing changes in resistance or impedance across apertures when traversed by individual particles, e.g. by using the Coulter principle
- G01N15/131—Details
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5094—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for blood cell populations
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Op grond van de niet-eenheidsbeschikking van 22 november 1994 van octrooiaanvrage 8103855 afgesplitste octrooiaanvragePursuant to the non-unit decision of 22 November 1994 of patent application 8103855, divisional patent application
Korte aanduiding: Isotoon verdunningsmiddel voor het verdunnen van totaal bloed, verdunningsmiddel in combinatie met een lyseermiddel, en werkwijze voor het behandelen van een .Short designation: Isotonic diluent for diluting whole blood, diluent in combination with a lysing agent, and method for treating a.
monster van totaal bloed.whole blood sample.
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een isotoon verdunningsmiddel voor het verdunnen van totaal bloed, dat een waterige oplossing van bloedcel-stabiliserende stoffen omvat.The present invention relates to an isotonic whole blood diluent diluent comprising an aqueous solution of blood cell stabilizers.
Een soortgelijk verdunningsmiddel is bekend uit het Amerikaanse octrooischrift nr. 4.185.965. Het verdunningsmiddel volgens deze referentie bevat anorganische zouten, om een in hoofdzaak osmotisch gebalanceerde oplossing te verschaffen, en bovendien anorganische buffers en antimicrobiële middelen.A similar diluent is known from U.S. Patent No. 4,185,965. The diluent of this reference contains inorganic salts to provide a substantially osmotically balanced solution, in addition inorganic buffers and antimicrobial agents.
De onderhavige uitvinders hebben er nu naar gestreefd een verdunningsmiddel te ontwikkelen waarmee het mogelijk wordt differentiële tellingen van bloedcellen uit te voeren, met name ten minste twee volume-bepalingen van leukocyten. Het verdunningsmiddel volgens de onderhavige uitvinding is gekenmerkt doordat de oplossing de volgende stoffen omvat: a) één of meer anesthetische verbindingen met inbegrip van 4-aminobenzoëzuuresterderivaten voor het stabiliseren van de cellulaire componenten van het bloedmonster, b) één of meer organische buffers om interferentie van de differentiële bepaling van de leukocyten door erythrocyten te voorkomen en c) één of meer celmembraan-stabilisatoren om een bijkomende maatregel voor het stabiliseren van het leukocytenmembraan te verkrijgen.The present inventors have now sought to develop a diluent which makes it possible to perform differential counts of blood cells, in particular at least two leucocyte volume determinations. The diluent of the present invention is characterized in that the solution comprises the following substances: a) one or more anesthetic compounds including 4-aminobenzoic acid ester derivatives for stabilizing the cellular components of the blood sample, b) one or more organic buffers to prevent interference from the differential determination of the leukocytes by erythrocytes and c) one or more cell membrane stabilizers to obtain an additional measure for stabilizing the leukocyte membrane.
Een isotoon verdunningsmiddel dat volgens de uitvinding de voorkeur verdient is gekenmerkt doordat de oplossing de volgende combinatie van stoffen omvat: a) procaïnehydrochloride, b) N-(2-aceetamido)iminodiazijnzuur, c) één of meer celmembraan-stabilisatoren gekozen uit de groep bestaande uit dimethylolureum, hexamethyleentetramine en N-hydroxymethylaceetami de, d) één of meer germiciden gekozen uit de groep bestaande uit chloorhexidinediacetaat, dimethylolureum en natrium-l-hydroxypyridine-2-thion.A preferred isotonic diluent according to the invention is characterized in that the solution comprises the following combination of substances: a) procaine hydrochloride, b) N- (2-acetamido) iminodiacetic acid, c) one or more cell membrane stabilizers selected from the group consisting of from dimethylolurea, hexamethylenetetramine and N-hydroxymethylacetamide, d) one or more germicides selected from the group consisting of chlorhexidine diacetate, dimethylolurea and sodium 1-hydroxypyridine-2-thione.
Het verdient de voorkeur dat het verdunningsmiddel als celmembraan-stabilisator en als germicide dimethylolureum bevat. De concentratie van het procaïnehydrochloride bedraagt bij voorkeur 75-250 mg/1. De concentratie van het N-(2-aceetamido)iminodiazijnzuur bedraagt bij voorkeur 1,2-2,0 g/1.It is preferable that the diluent contains dimethylolurea as a cell membrane stabilizer and as a germicide. The concentration of the procaine hydrochloride is preferably 75-250 mg / l. The concentration of the N- (2-acetamido) iminodiacetic acid is preferably 1.2-2.0 g / l.
De uitvinding heeft eveneens betrekking op een isotoon verdunningsmiddel dat is gekenmerkt doordat het verdunningsmiddel volgens de uitvinding is gecombineerd met een lyseermiddel bestaande uit een waterige oplossing die ten minste één kwaternaire ammoniumzout bevat met bloedceloppervlakte-actieve eigenschappen, waarbij het zout aanwezig is in een concentratie die werkzaam is om ten minste een twee-volume-leukocytenhystogram te verkrijgen. Tenslotte betreft de uitvinding een werkwijze voor het behandelen van een monster van totaal bloed met een verdunningsmiddel en een lyseermiddel.The invention also relates to an isotonic diluent characterized in that the diluent according to the invention is combined with a lysing agent consisting of an aqueous solution containing at least one quaternary ammonium salt with blood cell surfactant properties, the salt being present in a concentration that is effective to obtain at least a two-volume leukocyte hystogram. Finally, the invention relates to a method of treating a whole blood sample with a diluent and a lysing agent.
Het verdunningsmiddel voor bloed is met name geschikt om te worden toegepast bij de elektronische bepaling van de grootte en het aantal van de bloedcellen, de bepaling van hemoglobine en van de gezamenlijke indices en de bepaling van de parameters van bloedplaatjes in één enkel monster van bloedcellen door middel van hiertoe geschikte elektronische apparatuur. Met name is het gewenst om reagentia en werkwijzen te ontwikkelen die kunnen worden toegepast bij de automatische bloedteller "Coulter Counter Model S Plus" (merkaanduiding van Coulter Electronics), vervaardigd door Coulter Electronics Inc. Hialeah, Florida, waarmee het mogelijk is om met de op een "Coulter Channelyzer" verzamelde gegevens met betrekking tot het cel vol urne twee populaties leukocyten te onderscheiden, te weten 1) een lymfoïde populatie (lymfocyten) en 2) een myeloïde populatie (neutrofielen, monocyten, eosinofielen en basofielen). Dergelijke gegevens zijn geschikt voor het onderzoek naar abnormale onderlinge verhoudingen van leukocyten. Abnormale situaties die door middel van deze methode worden vastgesteld leveren informatie die een diagnostische betekenis heeft en zijn tevens van belang voor verder onderzoek.The blood diluent is particularly suitable for use in the electronic determination of the size and number of the blood cells, the determination of hemoglobin and of the joint indices and the determination of the parameters of platelets in a single sample of blood cells by by means of suitable electronic equipment. In particular, it is desirable to develop reagents and methods to be used with the "Coulter Counter Model S Plus" automatic blood counter (brand designation of Coulter Electronics) manufactured by Coulter Electronics Inc. Hialeah, Florida, with which it is possible to distinguish two populations of leukocytes, namely 1) a lymphoid population (lymphocytes) and 2) a myeloid population (neutrophils) using the data collected on a "Coulter Channelyzer" , monocytes, eosinophils and basophils). Such data is suitable for the investigation of abnormal leukocyte relationships. Abnormal situations determined by this method provide information of diagnostic significance and are also important for further investigation.
De scheiding van normale menselijke leukocyten door een volumeverdeling, waarbij gebruik wordt gemaakt van het principe dat een telling en bepaling van de grootte wordt uitgevoerd, is ontwikkeld door Wallace H. Coulter en toegepast in Coulter Counter instrumenten, en deze methode wordt nu toegepast als een klinische, diagnostische methode. Deze methode is gebaseerd op de fundamentele eigenschap van alle levende cellen dat het cel vol urne wordt geregeld op basis van de informatie van de genetische code. Elk celtype in de bloedsomloop heeft zijn eigen karakteristiek volume dat varieert van ongeveer 3 μιη3 voor polymorfo-nucleaire cellen. De onlangs ontwikkelde Coulter Counter instrumenten zijn op zodanige wijze ontworpen, dat gebruik wordt gemaakt van dit volume-verschil met het oog op het tellen en bepalen van de grootteverdeling van de plaatjes en erythrocyten, om pathologische toestanden te detecteren en te volgen.The distribution of normal human leukocytes by volume distribution, using the principle of counting and size determination, was developed by Wallace H. Coulter and applied in Coulter Counter instruments, and this method is now applied as a clinical diagnostic method. This method is based on the fundamental property of all living cells that the cell is packed full of urine based on the information of the genetic code. Each cell type in the circulatory system has its own characteristic volume ranging from about 3 μιη3 for polymorphonuclear cells. The recently developed Coulter Counter instruments have been designed to take advantage of this volume difference for counting and determining the size distribution of platelets and erythrocytes to detect and monitor pathological conditions.
Erythrocyten en lymfoïde leukocyten hebben jammer genoeg een aanzienlijke overlap wat betreft hun celgrootte, en het is niet mogelijk alleen op basis van grootteverschillen één van deze cel soorten te tellen in aanwezigheid van de andere. Meestal wordt gebruik gemaakt van een sterk lyserende oppervlakte-actieve stof die de erythrocyten stromatolyseert, waardoor ze tot zeer kleine deeltjes worden verkleind, of waardoor het membraan in oplossing wordt gebracht, en het cytoplasma van zowel de lymfoïde als de myeloïde leukocyten wordt verwijderd, waardoor alleen de lyse-bestendige kernen overblijven om te worden geteld. Omdat het oorspronkelijke celvolume sterk is beïnvloed en tot een minimum is herleid, kan bij onderzoek van de grootteverdeling slechts één populatie worden waargenomen.Unfortunately, erythrocytes and lymphoid leukocytes have a significant overlap in their cell size, and it is not possible to count one of these cell types alone in the presence of the others based on size differences. Typically, a highly lysing surfactant is used to stromatolyze the erythrocytes, reducing them to very small particles, or solubilizing the membrane, and removing the cytoplasm of both the lymphoid and myeloid leukocytes, thereby only the lysis-resistant cores remain to be counted. Because the original cell volume has been strongly influenced and reduced to a minimum, only one population can be observed when examining the size distribution.
Het Coulter Counter Model S Plus-automatische tel apparaat voor bloedcellen is ontworpen om een totaal monster van bloed te verdunnen in een isotoon verdunningsmiddel waaraan een lyseermiddel wordt toegevoegd en vervolgens na 7,5 seconden de telling uit te voeren. Gegevens worden verzameld gedurende 4 seconden voor erythrocyten en leukocyten en tot 20 seconden voor plaatjes. Zodoende moet een verder systeem van verdunningsmiddel-lyseermiddel een erythrocyten-lyseerkinetiek geven die voldoende snel is om volledige stromatisering te bewerkstelligen tijdens het lyseren, maar de leukocyten gedurende deze tijd niet volledig stript. Bovendien moeten de veranderingen in het volume van de leukocyten minimaal zijn tijdens het verzamelen van de gegevens en het zou ideaal zijn dat deze gedurende enkele minuten stabiel zouden zijn. Het systeem van reagentia moet er ook voor zorgen dat de integriteit van het aantal erythrocyten en plaatjes en de grootteverdeling wordt behouden, de hemoglobineadsorptiecurve en het totale aantal leukocyten. Bloedmonsters verkregen door vingerprikken moeten gedurende ten minste twee uren stabiel zijn wanneer deze worden voorverdund in het isotone verdunningsmiddel.The Coulter Counter Model S Plus automatic blood cell counter is designed to dilute a total sample of blood in an isotonic diluent to which a lysing agent is added and then count after 7.5 seconds. Data is collected for 4 seconds for erythrocytes and leukocytes and up to 20 seconds for platelets. Thus, a further diluent-lysing agent system must provide erythrocyte-lysing kinetics that are fast enough to effect complete stromation during lysing, but do not completely strip the leukocytes during this time. In addition, the changes in the volume of the leukocytes should be minimal during data collection and ideally they should be stable for several minutes. The system of reagents must also ensure that the integrity of the erythrocyte and platelet count and size distribution, hemoglobin adsorption curve, and total leukocyte count are maintained. Blood samples obtained by fingersticks should be stable for at least two hours when prediluted in the isotonic diluent.
Om een analyse te verkrijgen van de relatieve populatie van de lymfoïde en myeloïde cellen in het bloed moet het histogram van het leukocytenvolume duidelijk gescheiden lymfoïde en myeloïde pieken vertonen, met weinig afvalmateriaal van erythrocyten, waarbij de dalen tot zeer dicht bij de basislijn kunnen liggen. Integratie van elke piek zal de relatieve populatie van de lymfoïde en myeloïde cellen geven. Uit de lymfoïde piek is gebleken dat deze lymfocyten en kleine atypische lymfocyten bevat terwijl de myeloïde piek polymorfonucleaire cellen, banden, monocyten, eosinofielen, basofielen en grote atypische lymfocyten bevat.In order to obtain an analysis of the relative population of the lymphoid and myeloid cells in the blood, the histogram of the leukocyte volume must show clearly separated lymphoid and myeloid peaks, with little erythrocyte waste material, the valleys being close to baseline. Integration of each peak will yield the relative population of the lymphoid and myeloid cells. The lymphoid peak has been shown to contain lymphocytes and small atypical lymphocytes while the myeloid peak contains polymorphonuclear cells, bands, monocytes, eosinophils, basophils and large atypical lymphocytes.
De analyse op basis van de twee volume-verdeling is moeilijk omdat met veel oplosmiddelen de twee populaties snel in elkaar overgaan zodat er onvoldoende tijd beschikbaar is waarbinnen de tellingen kunnen worden verricht voor de analyse.The analysis on the basis of the two volume distribution is difficult because with many solvents the two populations merge quickly, so that there is insufficient time within which the counts can be made for the analysis.
Volgens de onderhavige werkwijze wordt een isotoon verdunningsmiddel voor bloed met een multi-functioneel karakter verkregen en een werkwijze om dit verdunningsmiddel te gebruiken met een lyseer-middelsysteem om de routine-telling van traditionele histogramwaarden te bepalen en ook om het lymfoïde/myeloïde histogram van de leukocyten en hun onderlinge concentraties weer te geven en te berekenen, met name volgens een automatisch tel systeem zoals met de geautomatiseerde Coulter Counter (merk)-apparatuur met een niet-gemodificeerde programmering en een externe of interne leukocyt Channelyzer(merkaanduiding)-instrument-mogelijkheid.According to the present method, an isotonic diluent for blood of a multi-functional character is obtained and a method of using this diluent with a lysing system to determine the routine count of traditional histogram values and also to measure the lymphoid / myeloid histogram of the to display and calculate leukocytes and their mutual concentrations, especially using an automatic counting system such as with the automated Coulter Counter (brand) equipment with unmodified programming and an external or internal leukocyte Channelyzer (brand designation) instrument capability .
Dit multi-functionele isotone verdunningsmiddel omvat een mengsel van organische buffers, anesthetica zoals 4-aminobenzoëzure esterderivaten en germiciden, van welk mengsel de pH wordt ingesteld op 7,0 ±0,1 en de osmolaliteit op 320 ± 5 milliosmol per kilogram, in een osmotisch uitgebalanceerde en nagenoeg neutrale oplossing, en dient om de kinetiek van de cytoplasmatische stripping van de leukocyten te vertragen terwijl de traditionele hemogramparameters worden gestabiliseerd.This multi-functional isotonic diluent includes a mixture of organic buffers, anesthetics such as 4-aminobenzoic acid ester derivatives and germicides, the mixture of which the pH is adjusted to 7.0 ± 0.1 and the osmolality to 320 ± 5 milliosmol per kilogram, in a osmotically balanced and almost neutral solution, and serves to slow the kinetics of the cytoplasmic stripping of the leukocytes while stabilizing the traditional hemogram parameters.
Het met het verdunningsmiddel toepasbare lyseermiddelts een mengsel van een waterige oplossing van ten minste één kwaternair ammoniumzout met oppervlakte-actieve eigenschappen op een alkalimetaal-cyanide in een concentratiegebied dat effectief is om histogrammen te geven van twee-volume-leukocyten. De weergave van de gegevens kan worden uitgevoerd met standaard Coulter Counter-apparatuur samen met een Channelyzer (merkaanduiding) en een X-Y plotter. Aanvullende berekenings-en gegevensverwerkende apparatuur is gewenst voor een volledige automatisering, maar niet essentieel om de metingen te kunnen uitvoeren.The diluent-usable lysing agent is a mixture of an aqueous solution of at least one quaternary ammonium salt with surfactant properties on an alkali metal cyanide in a concentration range effective to give histograms of two-volume leukocytes. The display of the data can be performed with standard Coulter Counter equipment along with a Channelyzer (brand designation) and an X-Y plotter. Additional calculation and data processing equipment is desirable for full automation, but not essential to perform the measurements.
Een werkwijze voor het bepalen van leukocyten en hemoglobine in het bloed waarbij een lyseermiddel wordt gebruikt dat een waterige oplossing bevat van een kwaternair ammoniumzout met oppervlakte-actieve eigenschappen en een alakalimetaalcyanide om erythrocyten en plaatjes-cellen te stromatolyseren en om hemoglobine om te zetten tot een chromageen, welk kwaternair ammoniumzout aan het stikstofatoom drie korte alkyl groepen heeft en een lange alkyl groep, waarbij het kwaternaire ammoniumzout en het al kalimetaalzout aanwezig is in een concentratie die effectief is ter verkrijging van twee volume-leukocytenhistogrammen en om een routineberekening mogelijk te maken van het lymfoïde/myeloïde histogram van de leukocyten en de hiermee samenhangende concentraties, met name in een automatisch telsysteem. Een multi-functioneel isotoon verdunningsmiddel wordt hierdoor gekenmerkt dat dit een waterige oplossing is van organische buffers, anesthetische middelen zoals 4-aminobenzoëzure esterderivaten en germiciden, welk verdunningsmiddel wordt ingesteld op een pH van 7,0 ± 0,1 met natriumhydroxyde of zoutzuur in oplossing indien dit noodzakelijk is, en op een osmol al itische waarde van 320 ± 5 milliosmol per kilogram met natriumchloride en natriumsulfaat.A method of determining leukocytes and hemoglobin in the blood using a lysing agent containing an aqueous solution of a quaternary ammonium salt with surfactant properties and an alkali metal cyanide to stromatolyze erythrocytes and platelet cells and convert hemoglobin chromagen, which quaternary ammonium salt on the nitrogen atom has three short alkyl groups and a long alkyl group, the quaternary ammonium salt and the al potassium metal salt being present at a concentration effective to obtain two volume leukocyte histograms and to allow a routine calculation of the lymphoid / myeloid histogram of the leukocytes and associated concentrations, especially in an automatic counting system. A multi-functional isotonic diluent is characterized by being an aqueous solution of organic buffers, anesthetics such as 4-aminobenzoic acid ester derivatives and germicides, which diluent is adjusted to a pH of 7.0 ± 0.1 with sodium hydroxide or hydrochloric acid in solution if necessary, and at an osmol al itical value of 320 ± 5 milliosmol per kilogram with sodium chloride and sodium sulfate.
Een bij voorkeur toegepaste samenstelling van het isotone verdunningsmiddel is: procaïnehydrochloride 0,11 g/1 N-(2-aceetamido)iminodiazijnzuur (ADA) 1,40 g/1 chloorhexideendiacetaat 0,02 g/1 dimethylolureum 1,00 g/1 natrium-l-hydroxypyridine-2-thion 0,50 g/1 natriumhydroxyde 0,50 g/1 natriumsulfaat (watervrij) 9,72 g/1 natriumchloride 4,50 g/1 water aanvullen tot 1 literA preferred composition of the isotonic diluent is: procaine hydrochloride 0.11 g / 1 N- (2-acetamido) iminodiacetic acid (ADA) 1.40 g / 1 chlorhexidene diacetate 0.02 g / 1 dimethylolurea 1.00 g / 1 sodium -1-hydroxypyridine-2-thion 0.50 g / 1 sodium hydroxide 0.50 g / 1 sodium sulfate (anhydrous) 9.72 g / 1 sodium chloride 4.50 g / 1 water make up to 1 liter
Dit verdunningsmiddel wordt met een oplossing van natriumhydroxyde of zoutzuur ingesteld op een pH van 7,0 ± 0,1, indien dit noodzakelijk is. De osmolaliteit wordt met natriumchloride ingesteld op 320 ± 5 milliosmol per kilogram.This diluent is adjusted to a pH of ± ± 0.1 with a solution of sodium hydroxide or hydrochloric acid, if necessary. The osmolality is adjusted to 320 ± 5 milliosmol per kilogram with sodium chloride.
Het is bekend dat bloedcellen ATPase-enzymen bevatten die alkalimetaal-kationen samen met kleine anionen (bijvoorbeeld chloride) in en uit de cellen transporteren door een energievereisend mechanisme teneinde de osmotische balans, de turgor van de cel en de gewenste membraanpotentialen te behouden. Natriumionen samen met de veel grotere sulfaationen worden klaarblijkelijk niet zo gemakkelijk getransporteerd door het grotere verschil in 1adingsdichtheid tussen de sulfaationen en chlorideïonen en het potentiaalverschil in de membraanlading wanneer ionen worden getransporteerd in en uit de cel. De balans van de inwendige osmotische druk binnen de cel wordt gehandhaafd door het opnemen van ongeveer 30 milliosmol natriumchloride. Natriumsulfaat is bekend voor de mogelijkheid om abnormale plasmaglobulines in oplossing te brengen en om de troebelheid in de hemoglobine-oplossing veroorzaakt door de verhoogde leukocytentelling te verminderen of op te heffen.Blood cells are known to contain ATPase enzymes that transport alkali metal cations along with small anions (e.g., chloride) into and out of the cells by an energy-demanding mechanism to maintain the osmotic balance, the cell's turgor and the desired membrane potentials. Sodium ions along with the much larger sulfate ions are apparently not so easily transported due to the larger charge density difference between the sulfate ions and chloride ions and the potential difference in the membrane charge when ions are transported in and out of the cell. The balance of the internal osmotic pressure within the cell is maintained by incorporating about 30 milliosmoles of sodium chloride. Sodium sulfate is known for its ability to dissolve abnormal plasma globulins and to reduce or eliminate the turbidity in the hemoglobin solution caused by the increased leukocyte count.
Procaïnehydrochloride is één van de ane.sUtetische middelen met inbegrip van 4-aminobenzoëzure esterderivaten en de zouten hiervan en het is bekend dat deze stof een stabiliserende invloed heeft op het erythrocytenmembraan, maar het werkingsmechanisme is nog niet zeker.Procaine hydrochloride is one of the anesthetic agents including 4-aminobenzoic acid ester derivatives and their salts and is known to have a stabilizing effect on the erythrocyte membrane, but the mechanism of action is not yet certain.
Het gebruik van N-(2-aceetamido)iminodi azijnzuur (ADA) als organische buffer is gebaseerd op de mogelijkheid hiervan om de werking van zwakke kwaternaire ammoniumzouten als lyseermiddel te versterken voov het verkleinen van het gelyseerd afval materiaal van erythrocyten tot deeltjesgrootte kleiner dan 45 μπι3, zodat de interferentie door erythrocyten met de telling en de verdeling van de leukocyten in twee afzonderlijke populaties (lymfoïde en myeloïde) wordt voorkomen.The use of N- (2-acetamido) iminodi acetic acid (ADA) as an organic buffer is based on its ability to enhance the action of weak quaternary ammonium salts as a lysing agent to reduce the lysed erythrocyte waste material to particles size less than 45 μπι3, so that interference by erythrocytes with the counting and distribution of the leukocytes into two separate populations (lymphoid and myeloid) is prevented.
Hoewel het mechanisme van de werking van ADA niet volledig is onderzocht is het bekend dat het een tamelijk sterk ligand is voor alkalimetalen uit groep II en overgangsmetalen uit groep IIB, evenals een redelijk effectieve buffer. Door de sterke gelijkenis met een aminozuur wordt ADA klaarblijkelijk aangetrokken tot en werkt het in op de celmembraaneiwitten. Vervolgens wordt het gecoördineerd met metaal-kationen waardoor aan het buitenoppervlak van het membraan een meer positief ladingsvoorkomen wordt verkregen ten opzichte van de omringende oplossing, waardoor solvateren en anion-aantrekking rond het buitenmembraan wordt bevorderd. Deze coating van de moleculen van oplosmidden en an ionen voorkomt effectief benaderen en agglutineringsinteracties met andere cellen die in suspensie zijn. De bufferende werking van ADA voorkomt de verandering in deze "lokale" omgeving, waardoor desolvatieen stabiliteits-verlies worden voorkomen.Although the mechanism of action of ADA has not been fully investigated, it is known to be a fairly strong ligand for Group II alkali metals and Group IIB transition metals, as well as a fairly effective buffer. Due to its strong resemblance to an amino acid, ADA is apparently attracted to and interact with the cell membrane proteins. It is then coordinated with metal cations to provide a more positive charge appearance on the outer surface of the membrane relative to the surrounding solution, thereby promoting solvation and anion attraction around the outer membrane. This coating of the solvent and anion molecules prevents effective approximation and agglutination interactions with other cells that are in suspension. The buffering action of ADA prevents the change in this "local" environment, thereby preventing desolvation and loss of stability.
Dit mechanisme, gekoppeld aan de werking van een lokaal anesthetisch middel zoals procaïnehydrochloride en natriumsulfaat, levert een bijdrage bij het stabiliseren van de cellulaire componenten van het bloedmonster, waardoor deze in hoofdzaak onveranderd blijven ten opzichte van de oorspronkelijke toestand in het bloed wat betreft het aantal, de grootteverdeling en de vorm. Deze factor is diagnostisch van groot belang bij de interpretatie van de traditionele hemogramparameters.This mechanism, coupled with the action of a local anesthetic agent such as procaine hydrochloride and sodium sulfate, contributes to stabilizing the cellular components of the blood sample, leaving them essentially unchanged from the original blood count , the size distribution and the shape. Diagnostically, this factor is of great importance in the interpretation of traditional hemogram parameters.
Chloorhexideendiacetaat is, hoewel gewoon!ijk toegepast als virocide en germicide, slechts mmarginaal effectief wanneer het alleen wordt gebruikt bij de toegepaste concentratie, maar geeft een significant betere werking aan ADA bij het vertragen van het achtergrond-afvalmateriaal dat interfereert met de bepaling van de grootteverdel ing van de leukocyten. Chloorhexideen heeft ook enige overeenkomst met de amines van arginine en guanidine en het kan worden verwacht dat deze stof van invloed is op de membraaneiwitten door coördinatie en waterstofbinding. Als zodanig helpt het de lyseermiddelen waarschijnlijk om de erythrocyten membranen volledig te stromatolyseren.Chlorhexidene diacetate, although commonly used as a virocide and germicide, is only marginally effective when used alone at the concentration used, but gives significantly better activity to ADA in retarding the background waste material that interferes with the size distribution determination leukocyte ing. Chlorhexidene also has some similarities with the amines of arginine and guanidine and this substance can be expected to affect the membrane proteins through coordination and hydrogen bonding. As such, it likely helps the lysing agents to completely stromatolize the erythrocyte membranes.
Dimethylolureum is een condensaat van formaldehyde en ureum en er wordt aangenomen dat deze stof bij neutrale pH in oplossing zeer langzaam reageert met 1 eukocytenmembranen om een maat van stabiliteit bij bewaring te verschaffen, die niet duidelijk is na verwijdering van deze verbinding. Het is bekend als een bacteriostatische, antiseptische stof, waarmee bij matige concentraties de groei van de micro-organismen kan worden voorkomen. Andere verbindingen die worden toegevoegd om de leukocyten te stabiliseren zijn hexamethyleentetramine en N-hydroxymethyl-aceetamide.Dimethylolurea is a condensate of formaldehyde and urea and it is believed that this substance reacts very slowly with neutral eukocyte membranes at neutral pH in solution to provide a measure of storage stability which is not apparent after removal of this compound. It is known as a bacteriostatic antiseptic, which can prevent the growth of microorganisms at moderate concentrations. Other compounds added to stabilize the leukocytes are hexamethylene tetramine and N-hydroxymethyl acetamide.
Natrium-l-hydroxypyridine-2-thion is bekend als fungicide en bacteriocide in shampoo met een werking tegen roos. Deze stof wordt hier gebruikt als bacteriocide en fungicide, welke stof geen merkbare nadelige invloed heeft op de vorm, de grootteverdeling of het aantal cellulaire componenten in een volledig menselijk bloedmonster.Sodium 1-hydroxypyridine-2-thion is known as a fungicide and bacteriocide in shampoo with anti-dandruff action. This substance is used here as a bacteriocide and fungicide, which has no appreciable adverse effect on the shape, size distribution, or number of cellular components in a whole human blood sample.
Het gebruik van de combinatie van dimethylolureum en natrium-l-hydroxypyridine-2-thion geeft een zeer bactericidaal produkt dat een betere werking heeft dan verkregen met elke stof afzonderlijk. Deze combinatie geeft een stabiel hemogram voor zowel normale als abnormale monsters waarbij het tegelijkertijd mogelijk is om informatie te verkrijgen met betrekking tot de volumeverdeling van de witte cellen die moeten worden verzameld door een geautomatiseerd apparatuursysteem.The use of the combination of dimethylolurea and sodium 1-hydroxypyridine-2-thione gives a very bactericidal product which has a better effect than obtained with each substance separately. This combination provides a stable hemogram for both normal and abnormal samples while at the same time it is possible to obtain information regarding the volume distribution of the white cells to be collected by an automated equipment system.
De primaire doelstelling van dit verdunningssysteem is dat de cel grootte, de vorm en de integriteit van alle bloed-cellulaire componenten wordt gestabiliseerd tot een mate die tot nu toe niet is bereikt, zodat de nauwkeurigheid voor de diagnostische bepaling van bloedhemogrammen, die zijn afgeleid van een geautomatiseerde volume-verdelingsanalyse en telling worden verbeterd. Door het resultaat van de gedane onderzoekingen is het mogelijk om een verbetering en uitbreiding te verkrijgen ten opzichte van de bekende technieken door de bloedstroom-omstandigheden van de cellen relatief ongewijzigd te houden wannej·· deze worden verdund en voorbereid voor automatische bepalingen van het aantal en de grootte van de bloedcellen. Wanneer het verdunningsmiddel samen met een geschikt lyseermiddel wordt gebruikt kan een verbetering worden verkregen ten opzichte van de bekende werkwijzen door over leukocyten informatie te verschaffen op basis van twee volume-verdelingen.The primary objective of this dilution system is to stabilize the cell size, shape and integrity of all blood-cellular components to a degree that has not yet been achieved, so that the accuracy for the diagnostic determination of blood hemograms derived from an automated volume distribution analysis and count are improved. Due to the results of the studies conducted, it is possible to obtain an improvement and extension over the known techniques by keeping the blood flow conditions of the cells relatively unchanged when diluted and prepared for automatic number and the size of the blood cells. When the diluent is used together with a suitable lysing agent, an improvement over the known methods can be obtained by providing leukocyte information on the basis of two volume distributions.
Het aangegeven verdunningsmiddel zal nauwkeurige hemogrammen kunnen produceren met een half-geautomatiseerd of geautomatiseerd Coulter-bloedceltel apparaat, maar zal alleen twee volume-leukocytenhistogrammen geven wanneer het samen met het lyseermiddel volgens de uitvinding wordt gebruikt.The indicated diluent will be able to produce accurate hemograms with a semi-automated or automated Coulter blood cell counting device, but will only yield two volume leukocyte histograms when used in conjunction with the inventive lysing agent.
Het verdunningsmiddel is in staat het 1eukocytenmembraan voldoende te stabiliseren om de kinetiek van de reactie van het lyseermiddel te vertragen tot een punt waarbij het mogelijk is het kleinere volume van de lymfoïde cellen te onderscheiden van het grotere volume van de myeloïde cellen, zoals neutrofielen, monocyten, eosinofielen en basofielen. Herhaalde metingen van de grootteverdeling van de leukocyten . hebben aangetoond dat de histogrammen stabiel zijn gedurende 30 seconden voordat degeneratie plaatsheeft. Experimentele resultaten geven aan de de lymfoïde cellen binnen de lyseringstijd van 7,5 seconden worden gereduceerd tot het minimale cellulaire volume. De myeloïde cellen komen tot 2 tot 3 keer het eindvolume binnen 30 seconden na het toevoegen van het lyseermiddel, waarna het volume langzaam vermindert totdat de myeloïde fractie samensmelt met de lymfoïde fractie.The diluent is able to stabilize the 1stukocyte membrane sufficiently to slow the kinetics of the reaction of the lysing agent to a point where it is possible to distinguish the smaller volume of the lymphoid cells from the larger volume of the myeloid cells, such as neutrophils, monocytes , eosinophils and basophils. Repeated measurements of the size distribution of the leukocytes. have shown that the histograms are stable for 30 seconds before degeneration occurs. Experimental results indicate that the lymphoid cells are reduced to the minimum cellular volume within the 7.5 second lysis time. The myeloid cells reach 2 to 3 times the final volume within 30 seconds of adding the lysing agent, after which the volume slowly decreases until the myeloid fraction merges with the lymphoid fraction.
Onder toepassing van een met erythrocyten geijkt Coulter Model S Plus-apparaat en een geijkte Coulter Model C-1000 Channelyzer (merkaanduiding) bleken de volumes van de lymfoïde en de myeloïde pieken na behandeling met het reagenssysteem in de nabijheid te liggen van respectievelijk 85 jL/m3 en 260 jL/m3 met een smalle verdelingsbreedte. De leukocyten die uit een vers volledig bloedmonster zijn verkregen door eenvoudige sedimentatie door een "Ficoll-Plaque"(merkaanduiding)-gradiënt bleken een volume te hebben van ongeveer 260 μηι3 voor de lymfoïde piek en 500 μπι3 voor de myeloïde piek met een veel ruimere verdelingsbreedte. Een monster vers bloed, gescheiden door centrifugatie door een Ficoll-Paque-gradiënt onder toepassing van een standaard-techniek gaf mononucleaire cellen (lymfocyten en monocyten) gescheiden van granulocyten (neutrofielen, eosinofielen en basofielen). De lymfocyten bleken samen te vallen met de lymfoïde piek bij 260 μηι3 terwijl de monocyten gecentreerd bleken bij ongeveer 550 μπι3. De scheiding van de twee populaties was veel duidelijker met het chemisch gelyseerde bloed verkregen door de Coulter Counter Model S Plus-experimenten dan met de levende leukocyten verkregen volgens de Ficoll-Paque-methode. Het is daarom duidelijk dat het lyseermiddel de leukocyten aanzienlijk beschadigt, aangezien hun volume twee- tot drievoudig wordt gereduceerd in vergelijking met leukocyten die verkregen zijn door de Ficol1-Paque-scheiding van hetzelfde bloedmonster.Using an erythrocyte calibrated Coulter Model S Plus device and a calibrated Coulter Model C-1000 Channelyzer (brand designation), the volumes of the lymphoid and myeloid peaks after treatment with the reagent system were found to be in the vicinity of 85 µL / ml, respectively. m3 and 260 jL / m3 with a narrow distribution width. The leukocytes obtained from a fresh whole blood sample by simple sedimentation through a "Ficoll-Plaque" (brand name) gradient were found to have a volume of approximately 260 μηι3 for the lymphoid peak and 500 μπι3 for the much wider distribution width . A sample of fresh blood separated by centrifugation through a Ficoll-Paque gradient using a standard technique gave mononuclear cells (lymphocytes and monocytes) separated from granulocytes (neutrophils, eosinophils and basophils). The lymphocytes were found to coincide with the lymphoid peak at 260 μl 3 while the monocytes were centered at about 550 μl 3. The separation of the two populations was much more evident with the chemically lysed blood obtained by the Coulter Counter Model S Plus experiments than with the live leukocytes obtained by the Ficoll-Paque method. It is therefore clear that the lysing agent significantly damages the leukocytes, since their volume is reduced by two to three fold compared to leukocytes obtained by the Ficol1-Paque separation of the same blood sample.
Bij de werkwijze volgens de uitvinding is gebleken dat dodecyl tri methyl ammoniumchl or i de bij voorkeur het volume van de lymfoïde cellen reduceert (een drievoudige vermindering van het volume van 260 /vm3 tot 85 /im3) terwijl het volume van de myeloïde cellen aanzienlijk minder wordt beïnvloed (te weten een tweevoudige vermindering van het volume van 500 //m3 tot 260 /Tm3). Dodecyltrimethylammoniumchloride is zelf in feite een zwak lyseermiddel. Het is gebleken dat het de sterk lytische werking van Mytab (merkaanduiding) mildert, waarbij de lyseerkinetiek wordt vertraagd tot een mate waarin de meting van de verschillende volumes van de celkernen mogelijk is. Het gebruik van dodecyltrimethylammoniumbromide geeft ook een veel snellere en zuiverdere lyse van de erythrocyten en een snellere omzetting van hemoglobine met lagere concentraties aan Mytab (merkaanduiding) zodat een betere stabiliteit wordt verkregen ten aanzien van de leukocytenpopulaties.In the method according to the invention it has been found that dodecyl trimethyl ammonium chloride preferably reduces the volume of the lymphoid cells (a threefold reduction in the volume from 260 / vm3 to 85 / im3) while the volume of the myeloid cells is considerably less is affected (i.e. a two-fold reduction in volume from 500 / m3 to 260 / Tm3). Dodecyl trimethyl ammonium chloride itself is in fact a weak lysing agent. It has been found to mitigate the strong lytic activity of Mytab (brand designation), slowing lysis kinetics to the extent that allows measurement of the different volumes of the cell nuclei. The use of dodecyltrimethylammonium bromide also gives a much faster and purer lysis of the erythrocytes and a faster conversion of hemoglobin with lower concentrations of Mytab (brand designation) so that better stability is obtained with regard to the leukocyte populations.
Voorlopige gegevens met betrekking tot meer dan honderd normale en abnormale verse bloedmonsters, verkregen via een bloeddonor-centrum en lokale ziekenhuizen, geven een hoge mate van correlatie aan tussen gegevens met betrekking tot de de leukocytenpopulaties afkomstig van het Coulter Counter Model S Plus-Channelyzer systeem (merkaanduidingen) en 100 met de hand verrichte differentiële tellingen. Hoewel een lichte variatie werd waargenomen met betrekking tot de myeloïde en lymfoïde fracties, werden geen aanzienlijke afwijkingen van de correlatie waargenomen.Preliminary data on more than 100 normal and abnormal fresh blood samples, obtained from a blood donor center and local hospitals, indicate a high degree of correlation between data related to the leukocyte populations from the Coulter Counter Model S Plus-Channelyzer system (brand designations) and 100 manual differential counts. Although slight variation was observed with regard to the myeloid and lymphoid fractions, no significant deviations from the correlation were observed.
Onder toepassing van de combinatie van een verdunnings-middel en het lyseermiddel volgens de uitvinding produceerden spectrofoto-metrische scans (golflengte ten opzichte van absorptie) van gelyseerd bloed uit het leukocytenbad van het Coulter Counter Model S Plus apparaat hemoglobinecurves die nagenoeg identiek waren aan de curves die zijn geproduceerd door Lyse S II (merkaanduiding). De absorptie bij 540 nm en de verkregen berekende hemoglobinewaarden waren echter ongeveer 0,2 g/1 hoger dan met de combinatie van Isoton II en Lyse S II (merkaanduidingen). Bovendien werd vastgesteld dat de gemiddelde waarden voor de cel volumes 1,0 tot 1,5 jL/m3 hoger waren in het nieuwe systeem van twee reagentia. Alle andere parameters waren nagenoeg gelijk aan degene die waren verkregen door de combinatie van Isoton II en Lyse S II (merkaanduiding).Using the combination of a diluent and the lysing agent of the invention, spectrophotometric scans (wavelength relative to absorption) of lysed blood from the leukocyte bath of the Coulter Counter Model S Plus device produced hemoglobin curves that were nearly identical to the curves manufactured by Lyse S II (brand designation). However, the absorbance at 540 nm and the calculated hemoglobin values obtained were about 0.2 g / l higher than with the combination of Isoton II and Lyse S II (brand designations). In addition, it was determined that the mean values for the cell volumes were 1.0 to 1.5 µL / m3 higher in the new two reagent system. All other parameters were virtually the same as those obtained by the combination of Isoton II and Lyse S II (brand designation).
Claims (8)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL9500639A NL9500639A (en) | 1980-06-16 | 1995-04-19 | Isotonic diluent for diluting whole blood, diluent in combination with a lysing agent, and method for treating a sample of whole blood |
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US15978280 | 1980-06-16 | ||
| US06/159,782 US4346018A (en) | 1980-06-16 | 1980-06-16 | Multi-purpose blood diluent and lysing agent for differential determination of lymphoid-myeloid population of leukocytes |
| NL8102855 | 1981-06-15 | ||
| NL8102855A NL191719B (en) | 1980-06-16 | 1981-06-15 | Lysing agent for whole blood. |
| NL9500639 | 1995-04-19 | ||
| NL9500639A NL9500639A (en) | 1980-06-16 | 1995-04-19 | Isotonic diluent for diluting whole blood, diluent in combination with a lysing agent, and method for treating a sample of whole blood |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL9500639A true NL9500639A (en) | 1995-08-01 |
Family
ID=26645706
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL9500639A NL9500639A (en) | 1980-06-16 | 1995-04-19 | Isotonic diluent for diluting whole blood, diluent in combination with a lysing agent, and method for treating a sample of whole blood |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| NL (1) | NL9500639A (en) |
-
1995
- 1995-04-19 NL NL9500639A patent/NL9500639A/en not_active Application Discontinuation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NL8102855A (en) | METHOD FOR PREPARING AN ISOTONE BLOOD DILUTION, METHOD FOR PREPARING A MULTI-FUNCTIONAL BLOOD DETERMINATION, AND METHOD FOR PERFORMING A BLOOD DETERMINATION | |
| US4521518A (en) | Multi-purpose blood diluent and lysing agent for differential determination of lymphoid-myeloid population of leukocytes | |
| JP4263247B2 (en) | Cyanide-free lysis reagent composition and method for hemoglobin and cell analysis | |
| EP0305491B1 (en) | System for isolating and identifying leukocytes | |
| US5486477A (en) | Reagent system for improved multiple species blood analysis | |
| US8101414B2 (en) | Reagent for sample analysis, reagent kit for sample analysis and method for sample analysis | |
| EP0598663B1 (en) | A pretreatment method for blood analysis | |
| JP3883012B2 (en) | Reagent and method for differential measurement of leukocytes in blood | |
| US8163471B2 (en) | Reagent for sample analysis, kit for sample analysis and method for sample analysis | |
| US4962038A (en) | Multi-purpose blood diluent and lysing agent for differential determination of lymphoid-myeloid population of leukocytes | |
| AU2005297497B2 (en) | Lysing reagent for simultaneous enumeration of different types of blood cells in a blood sample | |
| EP2166353B1 (en) | Reagent and reagent kit for analysis of primitive leukocyte | |
| JPH07181177A (en) | Reagent for analysis of white corpuscles | |
| US6632676B1 (en) | Multi-purpose reagent system and method for enumeration of red blood cells, white blood cells and thrombocytes and differential determination of white blood cells | |
| US11835532B2 (en) | Green concentrated reagent for hemotology systems | |
| NL9500639A (en) | Isotonic diluent for diluting whole blood, diluent in combination with a lysing agent, and method for treating a sample of whole blood | |
| JP3997538B2 (en) | Erythrocyte hemolytic agent, leukocyte classification reagent and reagent | |
| JP2003344388A (en) | Erythrocyte hemolyzing agent, reagent for classifying leucocyte, and reagent |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1A | A request for search or an international-type search has been filed | ||
| BB | A search report has been drawn up | ||
| BC | A request for examination has been filed | ||
| CNR | Transfer of rights (patent application after its laying open for public inspection) |
Free format text: COULTER CORPORATION |
|
| BV | The patent application has lapsed |