NL9400932A - T-Lymphotropic primate virus L (PTLV-L) and uses thereof - Google Patents
T-Lymphotropic primate virus L (PTLV-L) and uses thereof Download PDFInfo
- Publication number
- NL9400932A NL9400932A NL9400932A NL9400932A NL9400932A NL 9400932 A NL9400932 A NL 9400932A NL 9400932 A NL9400932 A NL 9400932A NL 9400932 A NL9400932 A NL 9400932A NL 9400932 A NL9400932 A NL 9400932A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- ptlv
- epitope
- htlv
- antigen
- polynucleotide
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 23
- 241000288906 Primates Species 0.000 title claims abstract description 6
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 18
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 39
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 26
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 26
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 20
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 5
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 241000714259 Human T-lymphotropic virus 2 Species 0.000 description 35
- 241001529934 Simian T-lymphotropic virus 3 Species 0.000 description 24
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 16
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 15
- 101710150336 Protein Rex Proteins 0.000 description 12
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 12
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 8
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 241000282520 Papio Species 0.000 description 7
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 description 6
- 241000282515 Papio hamadryas Species 0.000 description 6
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 6
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 description 6
- 102100022563 Tubulin polymerization-promoting protein Human genes 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 6
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 5
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 5
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 5
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 101100181122 Arabidopsis thaliana KIN14C gene Proteins 0.000 description 3
- 101100288145 Arabidopsis thaliana KNAT2 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010044696 Tropical spastic paresis Diseases 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011392 neighbor-joining method Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 208000006961 tropical spastic paraparesis Diseases 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- 102100027723 Endogenous retrovirus group K member 6 Rec protein Human genes 0.000 description 2
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 2
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241001523672 Human T-cell lymphotropic virus type 2a Species 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010028570 Myelopathy Diseases 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 101100129406 Neurospora africana MTA-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 2
- 208000030555 Pygmy Diseases 0.000 description 2
- 108020005067 RNA Splice Sites Proteins 0.000 description 2
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 241000714266 Bovine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 241001554831 Hamadryas <angiosperm> Species 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 241001505345 Human T-cell lymphotropic virus type 2b Species 0.000 description 1
- 206010020460 Human T-cell lymphotropic virus type I infection Diseases 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000282561 Macaca nemestrina Species 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- 241000288935 Platyrrhini Species 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000032370 Secondary transmission Diseases 0.000 description 1
- 101000946719 Synechococcus elongatus (strain PCC 7942 / FACHB-805) Carboxysome assembly protein CcmN Proteins 0.000 description 1
- 101800000385 Transmembrane protein Proteins 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000007818 agglutination assay Methods 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000005546 dideoxynucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000005571 horizontal transmission Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- GGGDNPWHMNJRFN-UHFFFAOYSA-N metrizoic acid Chemical compound CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C(O)=O)=C1I GGGDNPWHMNJRFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229950000550 sodium metrizoate Drugs 0.000 description 1
- YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M sodium;3-acetamido-5-[acetyl(methyl)amino]-2,4,6-triiodobenzoate;(2r,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4s,5r)-3,4-dihydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound [Na+].CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I.O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/14011—Deltaretrovirus, e.g. bovine leukeamia virus
- C12N2740/14022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/14011—Deltaretrovirus, e.g. bovine leukeamia virus
- C12N2740/14051—Methods of production or purification of viral material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
- C12N2740/15022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
T-LYMFOTROOP PRIMATEVIRUS L (PTLV-L) EN ZIJN TOEPASSINGENT-LYMPHOTROPIC PRIMATEVIRUS L (PTLV-L) AND ITS APPLICATIONS
De onderhavige uitvinding betreft een nieuw prima-tevirus, van het virus afgeleide polynucleotiden en polype-tiden, vaccins en diagnostische tests, die hen bevatten, alsmede werkwijzen voor het aantonen van het virus in monsters .The present invention pertains to a novel primirus, virus-derived polynucleotides and polypeptides, vaccines and diagnostic assays containing them, as well as methods for detecting the virus in samples.
Het humane T-lymfotrope virus type I (HTLV-I) werd in 1980 beschreven (l). Het virus veroorzaakt onder andere T-cel leukemie in volwassenen en een chronische progressieve myelopathie, die eerst bekend stond als tropische spastische paraparese, en later eveneens als HTLV-I geassocieerde myelopathie. Twee jaar later werd een tweede type (HTLV-II), dat nauw gekoppeld is aan myelopathie, gerapporteerd (2). Vele soorten apen en mensapen uit de oude wereld zijn geïnfecteerd met stammen van het T-lymfotrope apevirus type I (STLV-I). Dit zijn retrovirussen die nauw verwant zijn aan HTLV-I en in feite ononderscheidelijk zijn op moleculair niveau (3).The human T lymphotropic virus type I (HTLV-I) was described in 1980 (1). The virus causes T cell leukemia in adults and a chronic progressive myelopathy, first known as tropical spastic paraparesis, and later also as HTLV-I associated myelopathy. Two years later, a second type (HTLV-II), closely linked to myelopathy, was reported (2). Many ancient world monkeys and apes are infected with strains of the T-lymphotropic apevirus type I (STLV-I). These are retroviruses closely related to HTLV-I and are in fact indistinguishable at the molecular level (3).
Recentelijk is er een STLV-II met meer dan 95% sequentiehomologie met HTLV-II beschreven voor apen uit de nieuwe wereld (29) . Voor de gehele groep is daarom de naam T-lymfotrope primatevirussen (PTLV) voorgesteld (4). Dit omvat zowel de HTLV's als de STLV's.Recently, an STLV-II with more than 95% sequence homology to HTLV-II has been described for new world monkeys (29). Therefore, the name T-lymphotropic primate viruses (PTLV) has been proposed for the entire group (4). This includes both the HTLVs and the STLVs.
De relatie tussen verschillende PTLV-I's lijkt meer afhankelijk te zijn van geografie dan van gastheer-soort, hetgeen aangeeft dat transmissie tussen mens en aap herhaaldelijk tijdens de evolutie is opgetreden (5). Door hun beperkte horizontale transmissie hebben de PTLV's zich ontwikkeld in onafhankelijke clusters die de evolutie in contacten van de geïnfecteerde primatepopulaties weergeven. Gedacht werd dat de evolutie van de PTLV's gescheiden was in twee geografische takken waarbij PTLV-I voorkwam in de oude wereld en PTLV-II in de nieuwe wereld, omdat de enige bekende originele populaties met endemische HTLV-II de Amerikaanse indianen waren, terwijl HTLV-I het Amerikaanse continent pas bereikt leek te hebben via de slavenhandel in de tijd na Columbus. Deze zienswijze komt echter niet overeen met de aanwezigheid van de HTLV-II type serologieën onder Afrikaanse pygmeën, die recentelijk beschreven zijn (6, 7). Aan beide zijden van de Atlantische Oceaan lijken individuen die behoren tot de oudste en Beest geïsoleerde groepen van elk continent geïnfecteerd te zijn met verwante PTLV's.The relationship between different PTLV-Is appears to be more dependent on geography than on host species, indicating that transmission between humans and ape has occurred repeatedly during evolution (5). Due to their limited horizontal transmission, the PTLVs have developed in independent clusters reflecting the evolution in contact of the infected primate populations. The evolution of the PTLVs was thought to be separated into two geographic branches with PTLV-I occurring in the Old World and PTLV-II in the New World, as the only known original populations with endemic HTLV-II were the American Indians, while HTLV -I seemed to have only reached the American continent through the slave trade in the time after Columbus. However, this view does not agree with the presence of the HTLV-II type serologies among African pygmies, which have recently been described (6, 7). On both sides of the Atlantic, individuals belonging to the oldest and Beast isolated groups of each continent appear to be infected with related PTLVs.
Ook uit pathologisch oogpunt, kunnen de humane PTLV-stammen niet gezien worden als onafhankelijke entiteit. Bij de bavianen van het Sukhumi primatencentrum in Georgië, die gevoelig zijn voor leukemie, komt bijvoorbeeld vaak STLV-I, die overeenkomt met HTLV-I, voor. De ziekte heeft een aantal kenmerken van T-celleukemie bij volwassen mensen. Omdat er een dergelijk grote verwantschap bestaat tussen de humane- en apevirussen kan kennis van apavirussen van groot belang zijn voor het bestrijden van pathologieën in humane patiënten, veroorzaakt door aan apevirussen verwante of daaraan identieke humane virussen.Also from a pathological point of view, human PTLV strains cannot be considered an independent entity. For example, the baboons of the Sukhumi primate center in Georgia, who are prone to leukemia, often have STLV-I, which corresponds to HTLV-I. The disease has a number of features of T cell leukemia in adult humans. Because there is such a close relationship between the human and apeviruses, knowledge of apaviruses can be of great importance in combating pathologies in human patients caused by apeviruses related or identical human viruses.
Volgens de uitvinding is nu een nieuw T-lymfotroop primatevirus (PTLV) gevonden. Het virus werd geïsoleerd uit een in het wild geboren baviaan van het species Papio hama-drvas uit Eritrea.According to the invention, a new T-lymphotropic primate virus (PTLV) has now been found. The virus was isolated from a wild-born baboon of the species Papio hama-drvas from Eritrea.
Uit een cDNA bibliotheek werd een 1802 baseparen lang fragment geïsoleerd dat het env-oebied. het volledige gen voor het transmembraan eiwit, en een deel van het tax/-rex-qen bevat (zie figuur 1).A 1802 base pair long fragment containing the env region was isolated from a cDNA library. contains the complete gene for the transmembrane protein, and part of the tax / -rex-qen (see Figure 1).
Daarnaast werd de sequentie bepaald van een 3846 nucleotiden lang genomische DNA-fragment dat overeenkomt met het gebied van nucleotiden 5024 tot 8629 van HTLV-I. Het bevat het tweede open leesraam van rex. het envelopgen, het pX-gebied, het derde open leesraam van tax en rex en het gedeeltelijke LTR van het PTLV-virus. De sequentie wordt getoond in de figuur 5. De sequentie van de cDNA maakt onderdeel uit van de sequentie van het genomische fragment.In addition, a 3846 nucleotide long genomic DNA fragment corresponding to the region of nucleotides 5024 to 8629 of HTLV-I was sequenced. It contains the second open reading frame from rex. the envelope gene, the pX region, the third open reading frame of tax and rex, and the partial LTR of the PTLV virus. The sequence is shown in Figure 5. The sequence of the cDNA is part of the sequence of the genomic fragment.
Op het nucleotidesequentieniveau zijn de homologieën van het prototype van het virus (STLV-PH969) met respectievelijk HTLV-I en -II 62 en 64% over het gehele gebied, 65% en 70% in het env-gebied, en 80 en 80% in de gedeeltelijke tax ƒ rex-seauentie. In het 5* deel van het pX-gebied werd slechts een significante homologie waargenomen met HTLV-II (52%). Fylogenetische analyse gebaseerd op het gen dat codeert voor het transmembraaneiwit geeft aan dat het nieuwe virus een PTLV-type vertegenwoordigt met een lange onafhankelijke evolutie, langer dan welke stam binnen de PTLV-I en -II groepen dan ook.At the nucleotide sequence level, the homologies of the virus prototype (STLV-PH969) with HTLV-I and -II are 62 and 64% over the entire region, 65% and 70% in the env region, and 80 and 80%, respectively. in the partial tax collection. In the 5 * part of the pX region, only significant homology was observed with HTLV-II (52%). Phylogenetic analysis based on the gene encoding the transmembrane protein indicates that the new virus represents a PTLV type with a long independent evolution, longer than any strain within the PTLV-I and -II groups.
Zolang het nieuwe virus nog niet taxonomisch is ingedeeld wordt in deze aanvrage de aanduiding "PTLV-L" gebruikt.As long as the new virus has not yet been classified taxonomically, the term "PTLV-L" is used in this application.
Het nieuwe virus volgens de uitvinding is gedeponeerd bij de American Type Culture Collection op 18 maart 1994 onder depottoegangsnummer ATCC CRL 11592 in de vorm van een geïnfecteerd cocultuur van baviaanlymfocyten met virusvrije lymfocyten uit humaan navelstrengbloed. De cultuur wordt aangeduid met " PTLV-L/PH969".The novel virus of the invention was deposited with the American Type Culture Collection on March 18, 1994 under deposit accession number ATCC CRL 11592 in the form of an infected coculture of baboon lymphocytes with virus-free human umbilical cord blood lymphocytes. The culture is designated "PTLV-L / PH969".
Naast het nieuwe virus in in hoofdzaak zuivere vorm betreft de uitvinding een polypeptide, al dan niet in recombinante of synthetische vorm, dat tenminste één PTLV-L epitoop bevat. Dergelijke polypeptiden kunnen bijvoorbeeld toegepast worden in vaccins en diagnostische kits. Daarnaast heeft de uitvinding betrekking op PTLV-L polynucleotiden, al dan niet in gezuiverde vorm. Bij voorkeur bevat een gezuiverd PTLV-L-polynucleotide volgens de uitvinding de coderende sequentie voor een PTLV-L epitoop. Eventueel kan~het polynucleotide een recombinant of synthetisch polynucleotide i zijn. Het bevat dan een sequentie die is afgeleid van het PTLV-genoom of van PTLV-L cDNA en bij voorkeur de coderende delen voor een PTLV-L epitoop.In addition to the novel virus in substantially pure form, the invention relates to a polypeptide, whether or not in recombinant or synthetic form, containing at least one PTLV-L epitope. Such polypeptides can be used, for example, in vaccines and diagnostic kits. In addition, the invention relates to PTLV-L polynucleotides, whether or not in purified form. Preferably, a purified PTLV-L polynucleotide of the invention contains the coding sequence for a PTLV-L epitope. Optionally, the polynucleotide can be a recombinant or synthetic polynucleotide i. It then contains a sequence derived from the PTLV genome or from PTLV-L cDNA and preferably the coding parts for a PTLV-L epitope.
De uitvinding betreft eveneens een monoklonaal antilichaam dat gericht is tegen een PTLV-epitoop. De uit-i vinding heeft ook betrekking op gezuiverde preparaten van polyklonale antilichamen die zijn gericht tegen tenminste één PTLV-L epitoop.The invention also relates to a monoclonal antibody directed against a PTLV epitope. The invention also relates to purified polyclonal antibody preparations directed against at least one PTLV-L epitope.
Het PTLV-L kan op diverse manieren toegepast worden in vaccins. Een vaccin voor de behandeling van PTLV-L i infectie kan bijvoorbeeld een farmaceutisch aanvaardbaar verdunningsmiddel omvatten samen met een immunogeen polypeptide dat een PTLV-L epitoop bevat, waarbij het immunogene polypeptide aanwezig is in een farmacologisch effectieve dosis. Daarnaast kan een dergelijk vaccin naast een farmaceutisch aanvaardbare verdunningsmiddel een geïnactiveerd PTLV-L bevatten in een farmacologisch effectieve dosis, of een verzwakt PTLV-L in een farmacologisch effectieve dosis.The PTLV-L can be used in various ways in vaccines. For example, a vaccine for the treatment of PTLV-L infection may comprise a pharmaceutically acceptable diluent together with an immunogenic polypeptide containing a PTLV-L epitope, the immunogenic polypeptide being present at a pharmacologically effective dose. In addition, such a vaccine, in addition to a pharmaceutically acceptable diluent, may contain an inactivated PTLV-L at a pharmacologically effective dose, or an attenuated PTLV-L at a pharmacologically effective dose.
De verschillende onderdelen van het PTLV-L, dat wil zeggen polypeptiden, polynucleotiden en dergelijke alsmede tegen het PTLV-L opgewekte antilichamen kunnen gebruikt worden in diagnostische kits. Een kit voor het analyseren van monsters op de aanwezigheid van polynucleotiden, afgeleid van PTLV-L, omvat bijvoorbeeld een polynucleo-tideprobe, die een nucleotidesequentie van PTLV-L van acht nucleotiden of meer bevat, in een geschikte houder. Een kit voor het analyseren van monsters op de aanwezigheid van PTLV-antigenen omvat in plaats van de polynucleotideprobe een antilichaam dat gericht is tegen het te detecteren antigeen, terwijl een kit voor het analyseren van monsters op de aanwezigheid van PTLV-L antilichamen een polypeptide omvat dat een PTLV-L epitoop uit een PTLV-L antigeen bevat.The various components of the PTLV-L, i.e., polypeptides, polynucleotides and the like, as well as antibodies raised against the PTLV-L can be used in diagnostic kits. For example, a kit for analyzing samples for the presence of polynucleotides derived from PTLV-L includes a polynucleotide probe containing a nucleotide sequence of PTLV-L of eight nucleotides or more in a suitable container. A kit for analyzing samples for the presence of PTLV antigens, instead of the polynucleotide probe, comprises an antibody directed against the antigen to be detected, while a kit for analyzing samples for the presence of PTLV-L antibodies comprises a polypeptide containing a PTLV-L epitope from a PTLV-L antigen.
De uitvinding betreft verder PTLV-L epitoop-bevat-tende polypeptiden en antilichamen gericht tegen dergelijke epitopen gebonden aan drager.The invention further relates to PTLV-L epitope-containing polypeptides and antibodies directed against such epitopes bound to a carrier.
Ook heeft de uitvinding betrekking op een werkwijze voor het detecteren van PTLV-L nucleïnezuren in een monster, omvattende de stappen: a) het in contact brengen van het monster met een probe voor een PTLV-L polynucleotide onder omstandigheden die de vorming van een polynucleotide duplex mogelijk maken; en b) het detecteren van de duplex die de probe i bevat.The invention also relates to a method for detecting PTLV-L nucleic acids in a sample, comprising the steps of: a) contacting the sample with a probe for a PTLV-L polynucleotide under conditions that form a polynucleotide enable duplex; and b) detecting the duplex containing the probe i.
Immunobepalingen voor het detecteren van PTLV-L antigeen volgens de uitvinding omvatten de stappen: a) het incuberen van een monster, waarvan vermoed wordt dat het PTLV-L antigenen bevat, met een antilichaam-i probe gericht tegen het PTLV-L antilichaam onder omstandigheden, die de vorming van een antigeen-antilichaam-complex mogelijk maken; en b) het detecteren van het gevormde antigeen-anti-lichaam-complex.Immunoassays for detecting PTLV-L antigen of the invention comprise the steps of: a) incubating a sample suspected of containing PTLV-L antigens with an antibody-i probe directed against the PTLV-L antibody under conditions , which allow the formation of an antigen-antibody complex; and b) detecting the antigen-antibody complex formed.
Immunobepalingen voor het detecteren van PTLV-L antilichamen omvatten de stappen: a) het incuberen van een monster, waarvan vermoed wordt dat het PTLV-L antilichamen bevat, met een polypepti-de-probe, die een PTLV-L epitoop bevat, onder omstandigheden die de vorming van een antigeen-antilichaam-complex mogelijk maken; en b) het detecteren van het gevormde antigeen-antilichaam-complex.Immunoassays for detecting PTLV-L antibodies include steps: a) incubating a sample suspected of containing PTLV-L antibodies with a polypeptide probe containing a PTLV-L epitope under conditions which allow the formation of an antigen-antibody complex; and b) detecting the antigen-antibody complex formed.
De uitvinding betreft tenslotte een cellijn, omvattende het PTLV-L. Een dergelijke cellijn heeft bijvoorbeeld het ATCC-toegangsnummer ATCC CRL 11592.Finally, the invention relates to a cell line comprising the PTLV-L. For example, such a cell line has the ATCC accession number ATCC CRL 11592.
In onderstaand voorbeeld wordt de uitvinding verder geïllustreerd. Dit voorbeeld is echter niet bedoeld om de uitvinding op enigerlei wijze te beperken.In the example below, the invention is further illustrated. However, this example is not intended to limit the invention in any way.
VOORBEELDEXAMPLE
1. METHODEN1. METHODS
Er werden dertien in het wild geboren Hamadryasba-vianen fPapio hamadrvasï afkomstig uit Eritrea (voormalig Noord-Ethiopië) en twaalf Hamadryasbavianen, die waren geboren en opgegroeid in gevangenschap in het Sukhumi primatencentrum in Georgië (voormalige USSR), onderzocht. De bavianen werden in isolatie gehouden in onderzoekslaboratoria van de Universiteit van Leuven, gedurende perioden van 6 tot 10 maanden.Thirteen wild-born Hamadryasba vian fPapio hamadrvasï from Eritrea (formerly Northern Ethiopia) and twelve Hamadryas baboons, born and raised in captivity in the Sukhumi primate center in Georgia (former USSR), were investigated. The baboons were kept in isolation in research laboratories of the University of Leuven for periods of 6 to 10 months.
Sera van deze bavianen werden getest op PTLV-I antilichamen met een immunofluorescentiebepaling op MT-2 (IFA/MT-2) een continu HTLV-I producerende cellijn (8) en met een HTLV-I volledig-viruslysaat ELISA (Organon Teknika) of een deeltjes-agglutinatiebepaling (Serodia-HTLV, Fujire-bio). Reactieve sera werden verder getest met een gemodificeerde HTLV-I immunoblotbepaling, gespot met recombinant transmembraaneiwit (rgp21), welke kruisreageert met zowel HTLV-I als -II, en met de recombinante eiwitten MTA-1 en K55, afgeleid van het buitenste membraaneiwit, en specifiek herkend door respectievelijk HTLV-I en HTLV-II antilichamen (9). Van deze gemodificeerde Western blot is aangetoond dat het correct STLV-I positieve sera identificeert met meer dan 90 % gevoeligheid (10). De sera werden eveneens getypeerd met type-specifieke ELISAs, die gebruik maken van synthetische peptiden, die zijn afgeleid van het matrixeiwit van HTLV-I en van het buitenmembraaneiwit van HTLV-II (Select HTLV, IAF-Biochem, Montreal) (11).Sera from these baboons were tested for PTLV-I antibodies with an immunofluorescence assay on MT-2 (IFA / MT-2) a continuous HTLV-I producing cell line (8) and with an HTLV-I full virus lysate ELISA (Organon Teknika) or a particle agglutination assay (Serodia-HTLV, Fujire bio). Reactive sera were further tested with a modified HTLV-I immunoblot assay spotted with recombinant transmembrane protein (rgp21), which cross-reacts with both HTLV-I and -II, and with the recombinant proteins MTA-1 and K55, derived from the outer membrane protein, and specifically recognized by HTLV-I and HTLV-II antibodies, respectively (9). This modified Western blot has been shown to correctly identify STLV-I positive sera with greater than 90% sensitivity (10). The sera were also typed with type specific ELISAs using synthetic peptides derived from the matrix protein of HTLV-I and from the outer membrane protein of HTLV-II (Select HTLV, IAF-Biochem, Montreal) (11).
Virusisolatie werd uitgevoerd door cocultuur met lymfocyten uit navelstrengbloed. Mononucleaire cellen uit perifeer bloed (PBMC) werden gescheiden van gehepariniseerd bloed op ficoll met natriummetrizoaat (Lymphoprep, Nycomed Pharma). Acht ml van een 106/ml suspensie van de cellen werden gecocultiveerd met een gelijk volume van met fytohae-magglutinine (PHA) gestimuleerde lymfocyten uit humaan navelstrengbloed (106/ml) in de aanwezigheid van 10 U/ml recombinant interleukine-2 (Boehringer Mannheim) en 2 μΐ/ml polybreen. Het medium werd tweemaal per week gewisseld en in de eerste weken werden verse gestimuleerde navelstrengcellen toegevoegd wanneer het celaantal daalde. De cellen werden onderzocht op onsterfelijk worden, op antigeen-expressie door indirecte immunofluorescent iebepaling (IFA) met een polyklonaal anti-HTLV-I positief humaan serum (van een patiënt met met HTLV-I geassocieerde myelopathie) en met plasma van de apen, en op de produktie van p24 kernantigeen in de kweekvloeistof door een capture-ELISA, die zowel HTLV-1 als -II detecteert (Coulter, Hyaleah). De specificiteit van de p24 antigeen-ELISA werd bevestigd door het herhalen van de bepaling na pre-incubatie van het kweeksupernatant gedurende 15 minuten bij 37 °C met 1:20 verdunningen van seropositief en seronegatief plasma. Gekweekte cellen die positief waren in de IFA met polyklonaal serum werden eveneens getest met een HTLV-I specifiek anti-pl9 (matrixeiwit) monoklonaal antilichaam 13B12 (Sigma) (12).Virus isolation was performed by coculture with umbilical cord blood lymphocytes. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were separated from heparinized blood on ficoll with sodium metrizoate (Lymphoprep, Nycomed Pharma). Eight ml of a 106 / ml suspension of the cells were co-cultivated with an equal volume of phytohae-magglutinin (PHA) stimulated human umbilical cord blood lymphocytes (106 / ml) in the presence of 10 U / ml recombinant interleukin-2 (Boehringer Mannheim ) and 2 μΐ / ml polybrene. The medium was changed twice a week and in the first weeks fresh stimulated umbilical cord cells were added when the cell number decreased. The cells were tested for immortality, for antigen expression by indirect immunofluorescence assay (IFA) with a polyclonal anti-HTLV-I positive human serum (from a patient with HTLV-I associated myelopathy) and monkey plasma, and on the production of p24 nuclear antigen in the culture broth by a capture ELISA, which detects both HTLV-1 and -II (Coulter, Hyaleah). The specificity of the p24 antigen ELISA was confirmed by repeating the assay after pre-incubation of the culture supernatant for 15 minutes at 37 ° C with 1:20 dilutions of seropositive and seronegative plasma. Cultured cells positive in the IFA with polyclonal serum were also tested with an HTLV-I specific anti-p19 (matrix protein) monoclonal antibody 13B12 (Sigma) (12).
Een cellijn (PH969), die verkregen was van een in het wild gevangen Hamadryas, waarvan het serum antilichamen met een PTLV-II-type patroon bevatte, werd verder geanalyseerd.A cell line (PH969), obtained from a wild-caught Hamadryas, whose serum contained antibodies with a PTLV-II type cartridge, was further analyzed.
De celoppervlaktemerkers van de onsterfelijk gemaakte cellen werden geanalyseerd met een reeks monoklona-le antilichamen (Simultest, Becton Dickinson) op een Fluorescent Antilichaam Cel Sorter (FACS, Becton Dickinson) .The cell surface markers of the immortalized cells were analyzed with a series of monoclonal antibodies (Simultest, Becton Dickinson) on a Fluorescent Antibody Cell Sorter (FACS, Becton Dickinson).
Voor PTLV-provirusdetectie door polymerase kettingreactie (PCR) werd een pellet van 106 gekweekte cellen behandeld met proteinase K (0,1 Mg/ml overnacht bij 56°C) gevolgd door fenol/chloroform-extractie en methanolprecipi-tatie. Een geneste PCR werd uitgevoerd op het DNA van 105 cellen met de primerset TR101-104 (13), die een deel van het tax/rex gebied van zowel HTLV-I als -II amplificeert, onder de volgende omstandigheden: 10 mM Tris-HCl pH 8,3, 50 mM KC1, .3 mM MgCl2, 200 μM dNTPs, 1 μΚ van elke primer en 0,025 ϋ/μΐ AmpliTag in een volume van 100 /tl. De buitenste PCR werd uitgevoerd op een Gene Amp PCR system 9600 (Perkin-Elmer/Cetus) met 35 cycli (30 sec. bij 95°C, 30 sec. bij 50°C, 45 sec. bij 72°C); er werd 2 μΐ overgebracht naar 100 μΐ voor de binnenste PCR op een Trio-Thermoblok (Biometra) met 25 cycli (1 min. bij 95°C, 1 min. 30 sec. bij 50°C, 1 min. 30 sec. bij 72°C). Het geneste TR103-104 PCR-produkt werd.gezuiverd op een 3% agarosegel met gebruikmaking van de Sephaglas Bandprepkit (Pharmacia) en verder geanalyseerd met het dsDNA Cycle Sequencing System (Life Technologies) met de [ -32P]ATP-gelabelde PCR primers.For PTLV provirus detection by polymerase chain reaction (PCR), a pellet of 106 cultured cells was treated with proteinase K (0.1 Mg / ml overnight at 56 ° C) followed by phenol / chloroform extraction and methanol precipitation. A nested PCR was performed on the DNA of 105 cells with the primer set TR101-104 (13), which amplifies part of the tax / rex region of both HTLV-I and -II under the following conditions: 10 mM Tris-HCl pH 8.3, 50 mM KC1, .3 mM MgCl2, 200 μM dNTPs, 1 μΚ of each primer and 0.025 μϋ / μΐ AmpliTag in a volume of 100 μl. The outer PCR was performed on a Gene Amp PCR system 9600 (Perkin-Elmer / Cetus) with 35 cycles (30 sec at 95 ° C, 30 sec at 50 ° C, 45 sec at 72 ° C); 2 μΐ was transferred to 100 μΐ for the inner PCR on a Trio Thermoblock (Biometra) with 25 cycles (1 min at 95 ° C, 1 min.30 sec at 50 ° C, 1 min.30 sec at 72 ° C). The nested TR103-104 PCR product was purified on a 3% agarose gel using the Sephaglas Band prep kit (Pharmacia) and further analyzed with the dsDNA Cycle Sequencing System (Life Technologies) with the [-32P] ATP-labeled PCR primers.
Het poly-A RNA van de PH969-cellen werd geïsoleerd met de Quick Prep zuiveringskit (Pharmacia) en gebruikt voor constructie van een cDNA-bibliotheek in de ZAP II vector (Stratagene). 105 plaques werden gescreend met het TR103-104 PCR-fragment, dat gelabeld was door inbouw van [a-32P]dCTP tijdens amplificatie (14). Een positieve plaque werd verder gezuiverd en het cDNA-insert in pBluescript werd uitgeknipt uit de ZAP II vector. Van beide strengen van het cDNA-insert werd de sequentie bepaald door de dideoxynucleotide-keten-terminatiemethode (Sequenase kit, USB) met primerwalking. De nucleotidesequentie werd geanalyseerd met gebruikmaking van de GeneWorks software (Intelligenetics). In de berekening van de percentages van homologie, scoren transities en transversies gelijk en worden inserties of deleties van verschillende naburige nucleotiden (NT) als één gebeurtenis gescoord. De fylogenetische analyse werd uitgevoerd door de "neighbor-joining"-methode (15) met het Kimura 2-parameter model (16) met gebruikmaking van het Treecon software pakket (17); inserties en deleties werden niet in beschouwing genomen. De boom werd van wortels voorzien met gebruikmaking van de automatische wortelallocatie-optie. De statische analyse werd uitgevoerd met de bootstrap sampling methode (1000 replicaten) (18).The poly-A RNA from the PH969 cells was isolated with the Quick Prep purification kit (Pharmacia) and used to construct a cDNA library in the ZAP II vector (Stratagene). 105 plaques were screened with the TR103-104 PCR fragment, which was labeled by incorporation of [α-32P] dCTP during amplification (14). A positive plaque was further purified and the cDNA insert in pBluescript excised from the ZAP II vector. Both strands of the cDNA insert were sequenced by the dideoxynucleotide chain termination method (Sequenase kit, USB) with primer walking. The nucleotide sequence was analyzed using the GeneWorks software (Intelligenetics). In the calculation of the percentages of homology, transitions and transversions score equally and insertions or deletions of several neighboring nucleotides (NT) are scored as one event. The phylogenetic analysis was performed by the neighbor-joining method (15) with the Kimura 2 parameter model (16) using the Treecon software package (17); insertions and deletions were not considered. The tree was rooted using the automatic root allocation option. Static analysis was performed using the bootstrap sampling method (1000 replicates) (18).
Geneste PCR-primers werden ontworpen uit de sequentie, die was verkregen uit PH969, en gebruikt voor de detectie van het provirus in ongekweekte mononucleaire cellen uit perifeer bloed van dezelfde baviaan. De buitenste primers MVB1, AGCTATTCCCGCCAGTAATA (sense, NT49-68 van het cDNA-insert), en MVB2, GATGCCTAGTGAAGGTGAGAACT (antisense, NT778-800), werden gebruikt voor 35 cycli op een Trio-Ther-moblok (1 min. bij 95°C, 1 min. 30 sec. bij 55°C, 1 min. 30 sec. bij 72°C). Een volume van 2 μΐ werd overgebracht naar 100 μΐ voor de binnenste PCR met 25 cycli (1 min. bij 95°C, 1 min. 30 sec. bij 58°C, 1 min. 30 sec. bij 72eC) met de primers MVB3, CAAGCCATCTCCTCGGAGAA (sense, NT 113-132) , en MVB4, TTGGTCCACTTCACGCAAC (antisense, NT 310-328). DNA-monsters uit de PH969-cellijn en van HUT78-cellen werden gebruikt als respectievelijk positieve en negatieve controles. De ander testomstandigheden waren hetzelfde als in de PCR met de set TR101-104 geneste primers.Nested PCR primers were designed from the sequence obtained from PH969 and used to detect the provirus in uncultured peripheral blood mononuclear cells from the same baboon. The outer primers MVB1, AGCTATTCCCGCCAGTAATA (sense, NT49-68 of the cDNA insert), and MVB2, GATGCCTAGTGAAGGTGAGAACT (antisense, NT778-800) were used for 35 cycles on a Trio-Ther block (1 min at 95 ° C, 1 min.30 sec at 55 ° C, 1 min.30 sec at 72 ° C). A volume of 2 μΐ was transferred to 100 μΐ for the inner PCR with 25 cycles (1 min at 95 ° C, 1 min.30 sec at 58 ° C, 1 min.30 sec at 72eC) with the primers MVB3 , CAAGCCATCTCCTCGGAGAA (sense, NT 113-132), and MVB4, TTGGTCCACTTCACGCAAC (antisense, NT 310-328). DNA samples from the PH969 cell line and from HUT78 cells were used as positive and negative controls, respectively. The other test conditions were the same as in the PCR with the set of TR101-104 nested primers.
2. RESULTATEN2. RESULTS
Vier van 12 in een kolonie opgegroeide P. hamadrv-as waren positief in de test op HTLV-antilichamen en hadden typische HTLV-I Western blot patronen inclusief reactiviteit met pl9, p24 en rgp21 en met het HTLV-I specifieke MTA-1 eiwit. Twee gekweekte isolaten van seropositieve bavianen werden gekarakteriseerd als STLV-I.Four of 12 P. hamadrv axis grown up in a colony were positive in the test for HTLV antibodies and had typical HTLV-I Western blot patterns including reactivity with p19, p24 and rgp21 and with the HTLV-I specific MTA-1 protein. Two cultured isolates of seropositive baboons were characterized as STLV-I.
Sera van 2 van de 13 in het wild gevangen Hamadry-asbavianen waren reactief, hoewel zwak, in de screeningsbe- palingen. De immunoblot van beiden toonde slechts reactiviteit met het aaa p24 en met het rgp21. Daarnaast reageerde één van de twee met het HTLV-II specifieke K55, resulterend in een patroon dat niet te onderscheiden was van het HTLV-II positieve controleserum in dezelfde run.Sera from 2 out of 13 wild-caught Hamadry asphoons were reactive, although weak, in the screening assays. The immunoblot of both showed reactivity only with the aaa p24 and with the rgp21. In addition, one of the two reacted with the HTLV-II specific K55, resulting in a pattern indistinguishable from the HTLV-II positive control serum in the same run.
Deze tweede vrouwelijke baviaan was beschikbaar voor verdere onderzoeken en van haar werd bloed afgenomen voor lymfocytische cocultuur (PH969). Aan het begin van de derde week van de cocultuur waren een paar fluorescente cellen detecteerbaar met zowel HTLV-I positief serum als met het plasma van de donorbaviaan zelf. Gestaag nam het aantal fluorescente cellen toe met rond 30 % positieve cellen vanaf week 8 in het baviaanplasma, maar een lager aantal 5-10 % en een veel zwakkere fluorescentie met HTLV-I serum. Fluorescentie met HTLV-I positief serum was constant minder uitgesproken dan met het bavianenplasma na verschillende passages van de celkweken, getest op verschillende momenten. Aan de andere kant was er slechts een zwakke fluorescentie zichtbaar met het baviaanplasma op de HTLV-I producerende MT-2 cellen. Serum van de ander seropositieve baviaan gaf dezelfde reacties. Een IFA op de cogekweekte cellen met drie HTLV-II sera van Amerikaanse oorsprong gaf met twee daarvan een zwakke reactie. Drie van de acht HTLV-II positieve sera van pygmeëen (7) toonden een zwakke reactie met de PH969 cellen in IFA. Vrij p24 antigeen werd detecteerbaar door ELISA vanaf dag 10 en steeg snel tot een niveau boven 10 maal de cut-off waarde van de test op dag 17 en bleef zo tijdens verdere kweek.This second female baboon was available for further studies and blood was collected for lymphocytic coculture (PH969). At the beginning of the third week of coculture, a few fluorescent cells were detectable with both HTLV-I positive serum and the plasma of the donor baboon itself. The number of fluorescent cells steadily increased by around 30% positive cells from week 8 in the baboon plasma, but a lower number of 5-10% and a much weaker fluorescence with HTLV-I serum. Fluorescence with HTLV-I positive serum was consistently less pronounced than with the baboon plasma after different passages of the cell cultures, tested at different times. On the other hand, only weak fluorescence was visible with the baboon plasma on the HTLV-I producing MT-2 cells. Serum from the other seropositive baboon gave the same reactions. An IFA on the co-cultured cells with three HTLV-II sera of American origin gave a weak reaction with two of them. Three of the eight HTLV-II positive sera from pygmies (7) showed a weak reaction with the PH969 cells in IFA. Free p24 antigen was detectable by ELISA from day 10 and rapidly rose above 10 times the cut-off value of the test on day 17 and remained so during further culture.
De specificiteit van de p24 antigeon-detectie werd bevestigd door blokkeringsbepalingen, die werden uitgevoerd op een supernatant-vloeistof genomen na 14 weken kweek. Plasma of serum van beide seropositieve bavianen en van een HTLV-I positief individu blokkeerden de ELISA reactie, terwijl seronegatief apeplasma geen effect had. Indirecte immunofluorescentie met het HTLV-I specifieke anti-pl9 monoklonale antilichaam 13B12 was negatief of de PH969-cellen, maar duidelijk positief met MT-2 cellen en roet een STLV-I cellijn verkregen uit een in gevangenschap geboren Hamadryasbaviaan.The specificity of the p24 antigeon detection was confirmed by blocking assays performed on a supernatant liquid taken after 14 weeks of culture. Plasma or serum from both seropositive baboons and from an HTLV-I positive individual blocked the ELISA response, while seronegative apeplasm had no effect. Indirect immunofluorescence with the HTLV-I specific anti-p19 monoclonal antibody 13B12 was negative of the PH969 cells, but clearly positive with MT-2 cells and sputtered an STLV-I cell line obtained from a captive Hamadryas baboon.
Een duidelijke spontane groei werd waargenomen vanaf de tiende week met een toename van 106/ml naar 1,5 x 106 cellen/ml elke drie tot vier dagen. Analyse van celop-pervlaktemerkers toonde een enkele CD3'CD4+CD8' leukocyten-populatie met een hoge expressie van HLA-DR en een interleu-kine-2 receptor o-keten (CD25). B-celmerkers, CD19 en CD20, en de monocytmerker CD14 waren negatief. De cellen hebben een mannelijk humaan diploïd karyotype. Cocultivatie van met mitomycine C behandelde PH969 cellen met met vers fytohemag-glutinine behandelde lymfocyten uit navelstrengbloed leverde een nieuwe antigeen-producerende cellijn op.Clear spontaneous growth was observed from the tenth week with an increase from 106 / ml to 1.5 x 106 cells / ml every three to four days. Analysis of cell surface markers showed a single CD3'CD4 + CD8 'leukocyte population with high expression of HLA-DR and an interleukin-2 receptor o chain (CD25). B cell markers, CD19 and CD20, and the monocyte marker CD14 were negative. The cells have a male human diploid karyotype. Co-cultivation of mitomycin C-treated PH969 cells with fresh phytohemag-glutinin-treated umbilical cord blood lymphocytes yielded a new antigen-producing cell line.
PBMC uit een tweede onafhankelijke bloedafname van dezelfde baviaan werden afzonderlijk gecocultiveerd met PBMC van twee seronegatieve gezonde Hamadryasbavianen. Beide coculturen produceerden continu groeiende cellen die hetzelfde antigeen tot expressie brachten, zoals aangetoond door immunofluorescentie en ELISA.PBMC from a second independent blood draw from the same baboon were co-cultivated with PBMC from two seronegative healthy Hamadryas baboons. Both cocultures produced continuously growing cells expressing the same antigen, as demonstrated by immunofluorescence and ELISA.
Met de elektronenmicroscoop worden virale van een envelop voorziene deeltjes gevonden in alle drie de culturen. De deeltjes hebben variabele grootten, waarbij de grootste 10-120 nm groot is, en kernen van variërende dichtheden. Er werd knopvorming waargenomen.Viral enveloped particles are found in all three cultures with the electron microscope. The particles have variable sizes, the largest being 10-120 nm in size, and nuclei of varying densities. Budding was observed.
Met een geneste PCR (TR101-104 primers) op de PH969 cellen werd een fragment verkregen dat homoloog is aan een zeer geconserveerde sequentie van het tax /rex-aebied van het PTLV-genoom. De homologie van het 120 baseparen (bp) lange fragment, waarvan de sequentie bepaald was, was 81,7 % met HTLV-I en 80 % met HTLV-II, terwijl HTLV-I en HTLV-II in dit gebied 85 % homologie vertonen.A nested PCR (TR101-104 primers) on the PH969 cells yielded a fragment homologous to a highly conserved sequence of the tax / rex region of the PTLV genome. The homology of the 120 base pair (bp) sequence that was sequenced was 81.7% with HTLV-I and 80% with HTLV-II, while HTLV-I and HTLV-II show 85% homology in this region. .
Met gebruikmaking van het PCR-produkt als een probe werd een 1802 bp cDNA-fragment geïsoleerd uit een cDNA-bibliotheek die was afgeleid van de PH969-cellen. Het geïsoleerde cDNA-fragment is homoloog aan de NT 5918-7560 sequentie van HTLV-I (ATK1 stam) en de NT 5903-7573 sequentie van HTLV-II (Mo-T stam) (fig. 1). Voor HTLV-I omvat dit gebied een deel van het env-oen inclusief de volledige sequentie die codeert voor het transmembraaneiwit (gp21) , de open leesramen I en II van pX (ORF I en II) en een deel van het tax / rex-aebied. De totale homologie van het SLTV-PH969 cDNA fragment is 62,4 % met HTLV-I en 64 % met HTLV-II, terwijl 66 % homologie wordt waargenomen tussen HTLV-I en -II in hetzelfde fragment.Using the PCR product as a probe, a 1802 bp cDNA fragment was isolated from a cDNA library derived from the PH969 cells. The isolated cDNA fragment is homologous to the NT 5918-7560 sequence of HTLV-I (ATK1 strain) and the NT 5903-7573 sequence of HTLV-II (Mo-T strain) (Fig. 1). For HTLV-I, this region includes part of the envone including the full sequence encoding the transmembrane protein (gp21), the open reading frames I and II of pX (ORF I and II) and part of the tax / rex- area. The overall homology of the SLTV-PH969 cDNA fragment is 62.4% with HTLV-I and 64% with HTLV-II, while 66% homology is observed between HTLV-I and -II in the same fragment.
Op matrixvergelijkingsplots (fig. 2) worden twee belangrijke homologe gebieden gevonden tussen HTLV-I, HTLV-II en STLV-PH969: in de env en in de tax /rex-aebieden. Het eny-sequentiefragment van STLV-PH969 strekt zich uit van NT 1 tot 745 en vertoont 65 % homologie met HTLV-I en 70 % met HTLV-II, terwijl voor hetzelfde fragment HTLV-I en -II voor 65 % homoloog zijn. Het deel van het tax/rex-aebied waarvan de sequentie bepaald is, omvat NT 1441-1802 en is 80 % homoloog met zowel HTLV-I als HTLV-II (de homologie tussen HTLV-I en -II is 83 %). In de matrixvergelijkingsplot die STLV-PH969 en HTLV-II vergelijkt is de lijn die de homologie in het tax/rex weergeeft naar beneden geschoven door belangrijke deleties in het HTLV-IIpX (totaal 120 bp) . Het verschil in lengte tussen HTLV-I en STLV-PH969 in dit gebied is slechts 50 bp. In het 5' deel van het pX-gebied wordt significante homologie slechts gevonden tussen STLV-PH969 en HTLV-II (52 %).On matrix comparison plots (Fig. 2), two important homologous regions are found between HTLV-I, HTLV-II and STLV-PH969: in the env and in the tax / rex areas. The eny sequence fragment of STLV-PH969 extends from NT 1 to 745 and shows 65% homology with HTLV-I and 70% with HTLV-II, while for the same fragment HTLV-I and -II are 65% homologous. The portion of the tax / rex region that has been sequenced includes NT 1441-1802 and is 80% homologous to both HTLV-I and HTLV-II (the homology between HTLV-I and -II is 83%). In the matrix comparison plot comparing STLV-PH969 and HTLV-II, the line representing the homology in the tax / rex is shifted down by important deletions in the HTLV-IIpX (total 120 bp). The difference in length between HTLV-I and STLV-PH969 in this region is only 50 bp. In the 5 'part of the pX region, significant homology is only found between STLV-PH969 and HTLV-II (52%).
Een fylogenetische analyse gebaseerd op de NT-sequentie, die codeert voor het transmembraanenvelopeiwit, wordt gegeven in fig. 3. Vertegenwoordigers van de meest divergente takken van HTLV-I (een Melanesische stam en een stam van het cosmopolitische type) en STLV-I (van een Azi-sche Macaca nemestrina) en van HTLV-II (HTLV-IIa en HTLV-Ilb) werden vergeleken met STLV-PH969. Runderleukemievirus, dat structureel verwant is aan PTLV, werd niet meegenomen, omdat onvoldoende homologie gevonden werd in dit deel van het genoom om het op de juiste manier op één lijn te kunnen brengen. Voor elke vertakkingsknoop worden hoge bootstrap-waarden verkregen.A phylogenetic analysis based on the NT sequence encoding the transmembrane envelope protein is given in Figure 3. Representatives of the most divergent branches of HTLV-I (a Melanesian strain and a cosmopolitan type strain) and STLV-I ( of an Asian Macaca nemestrina) and of HTLV-II (HTLV-IIa and HTLV-Ilb) were compared with STLV-PH969. Bovine leukemia virus, which is structurally related to PTLV, was not included because insufficient homology was found in this part of the genome to properly align it. High bootstrap values are obtained for each branch node.
Translatie van een gedeeltelijk ORF van NT 1-745 verschaft een aminozuur (AZ) -sequentie die homoloog is aan de env van HTLV-I en HTLV-II. De proteolytische splitsings- plaats van de env-glycoproteïne-voorloper is goed geconserveerd. De AZ-sequentie van het vermeende transmembraan-eiwit van STLV-PH969 heeft 75 % homologie met het overeenkomende eiwit in HTLV-I. Met 88 % is de homologie met HTLV-II hoger met een volledige overeenkomst van een intermediair gebied van 68 AZ inclusief de glycosyleringsplaats. Vergelijking van hydrofobiciteitsplots van de transmembraan-envelopeiwit-ten van HTLV-I, HTLV-II en STLV-PH969 toont geen belangrijke verschillen (niet getoond). Dit en de homologie van de AZ-sequenties is in overeenstemming met de waargenomen immunologische reactiviteiten van HTLV-I-, HTLV-II- en STLV-PH969-positieve sera met HTLV-I gp2l.Translation of a partial ORF of NT 1-745 provides an amino acid (AZ) sequence homologous to the env of HTLV-I and HTLV-II. The proteolytic cleavage site of the env glycoprotein precursor is well conserved. The AZ sequence of the putative transmembrane protein of STLV-PH969 has 75% homology to the corresponding protein in HTLV-I. Homology to HTLV-II is higher by 88% with a full agreement of an intermediate region of 68 AZ including the glycosylation site. Comparison of hydrophobicity plots of the transmembrane envelope proteins of HTLV-I, HTLV-II and STLV-PH969 shows no significant differences (not shown). This and the homology of the AZ sequences is consistent with the observed immunological reactivities of HTLV-I, HTLV-II and STLV-PH969 positive sera with HTLV-I gp2l.
In het pX-gebied gaat een korte sequentie, die overeenkomt met de splice acceptor consensus sequentie (23) (NT 1432-1443), vooraf aan twee gedeeltelijke ORFs, die coderen voor eiwitten die homoloog zijn aan tax en rex. De gedeeltelijke tax-AZ-secmentie is goed geconserveerd met 84 % en 88 % homologiën met resp. HTLV-I en HTLV-II (80 % homologie tussen HTLV-I en -II). De rex-AZ-sequentie vertoonde daarentegen slechts homologiën van 54 % en 55 % (de homologie tussen HTLV-I en -II is 65 %). Eén extra ORF (NT 796-1140) kon geïdentificeerd worden in het 5'-deel van het pX-gebied volgend op een vermoedelijke splice acceptor plaats (cursief in fig. 1). De theoretische AZ-sequentie is 125 AZ lang en heeft geen homologie met andere beschreven PTLV-eiwitten.In the pX region, a short sequence corresponding to the splice acceptor consensus sequence (23) (NT 1432-1443) precedes two partial ORFs encoding proteins homologous to tax and rex. The partial tax AZ section is well conserved with 84% and 88% homologs with resp. HTLV-I and HTLV-II (80% homology between HTLV-I and -II). In contrast, the rex-AZ sequence showed only homologs of 54% and 55% (the homology between HTLV-I and -II is 65%). One additional ORF (NT 796-1140) could be identified in the 5 'portion of the pX region following a putative splice acceptor site (italicized in Figure 1). The theoretical AZ sequence is 125 AZ in length and has no homology to other described PTLV proteins.
Genest PCR, die direct werd uitgevoerd op de PBMC van de baviaan met de primers ontworpen op basis van STLV-PH969 tax/rex-sequentie, amplificeerde een fragment van de verwachte lengte (216 bp) (fig. 4).Nested PCR, which was performed directly on the baboon's PBMC with the primers designed based on STLV-PH969 tax / rex sequence, amplified a fragment of the expected length (216 bp) (Fig. 4).
3. FIGUREN3. FIGURES
In figuur 1 wordt de nucleotidesequentie van het STLV-PH969 cDNA-fragment getoond. De afgeleide aminozuurse-quentie wordt onder de nucleotidesequentie gegeven; niet-coderende gebieden worden gegeven in kleine letters. De vermeende 3' splice acceptor plaatsen zijn onderstreept en de theoretische ORF tussen het env- en het tax/rex-qebied is cursief gedrukt. De env-proteolvtische splitsingsplaats wordt aangegeven door een pijl op het aminozuurniveau. Een omcirkeld asparagine geeft een mogelijke glycosylerings-plaats van het transmembraaneiwit weer.Figure 1 shows the nucleotide sequence of the STLV-PH969 cDNA fragment. The deduced amino acid sequence is given below the nucleotide sequence; non-coding areas are in lower case. The putative 3 'splice acceptor sites are underlined and the theoretical ORF between the env and tax / rex region is italicized. The env-proteolytic cleavage site is indicated by an arrow on the amino acid level. A circled asparagine indicates a possible glycosylation site of the transmembrane protein.
In figuur 2 worden de homologiematrixplots van het STLV-PH969 cDNA-fragment vergeleken met de overeenkomende gebieden van HTLV-I (ATK1 stam; AC K02722) (19) en HTLV-II (Mo-T stam; AC M10060) (20). Elke punt geeft een gebied van 20 nucleotiden weer met een gemiddelde score van ten minste 58 % identiciteit. In gebieden met een significante homologie vormen de stippen een meer of minder continue lijn. De nucleotide-aantallen op de as refereren naar het einde van het 5' homologiegebied en het begin van het 3' homologiege-bied. In de vergelijkingsplot tussen HTLV-II en STLV-PH969 wordt het einde van het env-gen aangegeven door een pijl. De plots werden gemaakt met de GeneWorks software (Intelligenties) .In Figure 2, the homology matrix plots of the STLV-PH969 cDNA fragment are compared to the corresponding regions of HTLV-I (ATK1 strain; AC K02722) (19) and HTLV-II (Mo-T strain; AC M10060) (20). Each dot represents a 20 nucleotide region with an average score of at least 58% identity. In areas of significant homology, the dots form a more or less continuous line. The nucleotide numbers on the axis refer to the end of the 5 'homology region and the beginning of the 3' homology region. In the comparison plot between HTLV-II and STLV-PH969, the end of the env gene is indicated by an arrow. The plots were made with the GeneWorks software (Intelligence).
In figuur 3 wordt de fylogenetische analyse van de PTLV-nucleotidesequenties, die coderen voor het transmembraaneiwit, getoond. De analyse werd uitgevoerd met de neighbor-joining methode zoals geïmplementeerd in het TREE-CON software pakket (17). De STLV-PH969 sequentie werd op één lijn gezet met volgende stammen: HTLV-I (ATK1; AC KO-2722) (19), HTLV-I (Mel5; AC L02534) (5), STLV-I (PtM3; AC 11373) (21), HTLV-IIa (Mo-T, AC M10060) (20), HTLV-IIb (GNO; AC LI1456) (22). Het percentage van bootstrapbomen (1.000 replicaten) die de monofyletische oorsprong van de stammen aan de rechter zijde van de knoop ondersteunen, worden bij elke vertakking aangegeven.Figure 3 shows the phylogenetic analysis of the PTLV nucleotide sequences encoding the transmembrane protein. The analysis was performed with the neighbor-joining method as implemented in the TREE-CON software package (17). The STLV-PH969 sequence was aligned with the following strains: HTLV-I (ATK1; AC KO-2722) (19), HTLV-I (Mel5; AC L02534) (5), STLV-I (PtM3; AC 11373 ) (21), HTLV-IIa (Mo-T, AC M10060) (20), HTLV-IIb (GNO; AC LI1456) (22). The percentage of bootstrap trees (1,000 replicates) that support the monophyletic origin of the strains on the right side of the node are indicated at each branch.
In figuur 4 ten slotte wordt de gel-elektroforese van geneste PCR-produkten, die geamplificeerd zijn met de STLV-PH969 primers MVB 1-4, getoond. Lanen 1 en 3 zijn negatieve controles; laan 2 zijn gekweekte perifere mononucleai-re bloedcellen van de Hamadryasbaviaan waaruit STLV-PH969 werd afgeleid; laan 4 toont de PH969 cellijn; laan 5 toont grootte-merkers (pBR328 Bgll, pBR328 Hinfl).Finally, in Figure 4, the gel electrophoresis of nested PCR products amplified with the STLV-PH969 primers MVB 1-4 is shown. Lanes 1 and 3 are negative controls; lane 2 are cultured peripheral blood mononuclear cells of the Hamadryas baboon from which STLV-PH969 was derived; lane 4 shows the PH969 cell line; lane 5 shows size markers (pBR328 Bgll, pBR328 Hinfl).
4. DISCUSSIE4. DISCUSSION
Door cocultivatie van gestimuleerde humane lymfo-cyten uit navelstrengbloed, met PBMC uit een in het wild geboren Hamadryasbaviaan, die antilichamen had die zwak kruisreageerde met HTLV-I en HTLV-II, werd een continue CD4+ cellijn verkregen die een PTLV-verwant provirus bevatte (STLV-PH969). Deze cellijn produceert antigenen en virionen, die herkend worden door immunologische bepalingen die gericht zijn op HTLV-I en -II. Kruisreacties in beide richtingen zijn zwak, hetgeen suggereert dat er belangrijke verschillen bestaan tussen STLV-PH969 en de bekende PTLV.Co-cultivation of stimulated human umbilical cord blood lymphocytes, with PBMC from a wild-born Hamadryas baboon, which had antibodies weakly cross-reacted with HTLV-I and HTLV-II, yielded a continuous CD4 + cell line containing a PTLV-related provirus ( STLV-PH969). This cell line produces antigens and virions, which are recognized by immunological assays that target HTLV-I and -II. Cross reactions in both directions are weak, suggesting that there are important differences between STLV-PH969 and the known PTLV.
Infectiviteit van het virus werd gedemonstreerd door secundaire transmissie naar verse lymfocyten uit navelstrengbloed .Virus infectivity was demonstrated by secondary transmission to fresh umbilical cord blood lymphocytes.
Het plasma van de PH969-baviaan herkent de antigenen, die worden geproduceerd door de provirus-dragende cellijn, zowel in een indirecte immunofluorescentiebepaling als in een blokkeringsbepaling. Het virus kon uit dezelfde baviaan geïsoleerd worden op twee afzonderlijke gelegenheden, éénmaal met humane cellen en éénmaal met baviane-cellen. De provirussequentie van STLV-PH969 kon direct in de PBMC van de baviaan gedetecteerd werd door PCR. Dit alles bewijst dat het virus inderdaad afkomstig is van deze Hamadryasbaviaan. De baviaan werd van anderen geïsoleerd tijdens gevangenschap in Leuven, maar er bestaan geen details over wat er gebeurde tussen de vangst en het moment dat zij in Leuven aankwam. Het is echter onwaarschijnlijk dat het tijdens gevangenschap geïnfecteerd zou zijn, omdat onder 14 in kolonie opgegroeide bavianen slechts typische STLV-I gevonden werd.The plasma of the PH969 baboon recognizes the antigens produced by the provirus-carrying cell line in both an indirect immunofluorescence assay and a blocking assay. The virus could be isolated from the same baboon on two separate occasions, once with human cells and once with baviane cells. The provirus sequence of STLV-PH969 could be detected directly in the baboon PBMC by PCR. All this proves that the virus indeed comes from this Hamadryas baboon. The baboon was isolated from others during captivity in Leuven, but there are no details about what happened between the catch and the moment she arrived in Leuven. However, it is unlikely to have been infected during captivity, since only 14 STLV-I were found among 14 colony-raised baboons.
De seguentiebepaling van een 1802 bp genoomfrag-ment dat zich uitstrekt van het env-gebied naar het tax/rex-gebied, bevestigd dat STLV-PH969 behoort tot de PTLV-groep, maar zeer verschillend is van zowel PTLV-I (62,4 % homologie) en PTLV-II-typen (64 % homologie). De verschillen op het nucleotide seguentieniveau tussen STLV-PH9696 en de andere bekende PTLV is van dezelfde grootteorde als het verschil tussen HTLV-I en -II (66 % homologie). Het gebied van het genoom waarvan de sequentie bepaald is, overspant een deel van het geconserveerde tax/rex-gebied, evenals van het extreem divergente 5'-deel van het pX en deel van het gematigd divergente env-gebied. De getransleerde aminozuur-sequentie van een mogelijk ORF in het 5'-deel van het pX-gebied van het STLV-PH969 genoom toont geen homologie met enig bekend PTLV-eiwit.The sequencing of a 1802 bp genomic fragment extending from the env region to the tax / rex region confirms that STLV-PH969 belongs to the PTLV group, but is very different from both PTLV-I (62.4 % homology) and PTLV-II types (64% homology). The nucleotide segregation level differences between STLV-PH9696 and the other known PTLV are of the same magnitude as the difference between HTLV-I and -II (66% homology). The region of the sequenced genome spans part of the conserved tax / rex region, as well as the extremely divergent 5 'part of the pX and part of the moderately divergent env region. The translated amino acid sequence of a possible ORF in the 5 'part of the pX region of the STLV-PH969 genome shows no homology to any known PTLV protein.
Er worden meer homologiën waargenomen tussen STLV-PH969 en HTLV-II dan tussen STLV-PH969 en HTLV-I of tussen HTLV-I en -II. Dit is niet duidelijk wanneer gekeken wordt naar de totale percentages, omdat deze beïnvloed zijn door een groot aantal deleties in HTLV-II in vergelijking met STLV-PH969. Het kan visueel beter gewaardeerd worden in de matrix-vergelijkingsplots, waar de homologie die bestaat tussen STLV-PH969 en HTLV-II in het env-gebied zich uit-breidt naar een deel van het 5'-einde van het pX, maar hier is de homologie slechts 52 %. Paarsgewijze vergelijking van de percentages homologie in verschillende gebieden, zowel op het nucleotideniveau als het aminozuurniveau, wijst eveneens op een hogere homologie van STLV-PH969 met HTLV-II dan met HTLV-I in het bijzonder in de env. Het feit dat STLV-PH969 enigszins meer verwant is met het PTLV-II dan met het PTLV-l wordt eveneens tot uitdrukking gebracht door een antili-chaampatroon in de geïnfecteerde apen dat lijkt op een HTLV-II antilichaampatroon door conventionele serologie.More homologies are observed between STLV-PH969 and HTLV-II than between STLV-PH969 and HTLV-I or between HTLV-I and -II. This is not clear when looking at the total percentages, as they are affected by a large number of deletions in HTLV-II compared to STLV-PH969. It can be better appreciated visually in the matrix comparison plots, where the homology that exists between STLV-PH969 and HTLV-II in the env region extends to part of the 5 'end of the pX, but here is homology only 52%. Pairwise comparison of the percentages of homology in different regions, both at the nucleotide level and the amino acid level, also indicates a higher homology of STLV-PH969 with HTLV-II than with HTLV-I in particular in the env. The fact that STLV-PH969 is somewhat more related to the PTLV-II than to the PTLV-1 is also expressed by an antibody pattern in the infected monkeys similar to an HTLV-II antibody pattern by conventional serology.
De fylogenetische analyse (fig. 3) werd uitgevoerd op het fragment dat codeert voor het transmembraaneiwit, omdat dit deel een entiteit is, die correct op één lijn gebracht kan worden tussen de twee virussen van deze groep (fig. 2) en die veel gebruikt is in fylogenetisch analyses door verschillende onderzoekers. Hier werden vertegenwoordigers van de meest divergente stammen van elk van de PTLV-I en PTLV-II typen voor deze vergelijking gekozen. Onder de af stands-mater ixbenaderingen, waar de lengte van de takken van de boom evenredig zijn met de afstand tussen de taxa is de neighbor-joining methode in het algemeen de beste keuze (24, 25). Aangezien transities veel algemener zijn dan transversies werd het Kimura 2-parametermodel gebruikt voor het berekenen van de afstanden. De bootstrapwaarden naar beide knopen geven het percentage weer van bomen waarvoor de geanalyseerde sequenties rechts een monofyletische groep weergeven. De hoge waarden die hier verkregen worden zijn een indicatie dat de vertakking juist is. Zoals verwacht toont de analyse dat de STVL-PH969 een PTLV type vertegenwoordigt met een lange onafhankelijke evolutie, maar die enigszins dichter bij PTLV-II ligt dan bij PTLV-I. Vanwege zijn hoge divergentie van zowel PTLV-I als PTLV-II en vanwege zijn lange onafhankelijke evolutie, langer dan enige stam binnen de PTLV-I of PTLV-II groepen, kwalificeert dit virus zich als een vertegenwoordiger van een nieuw PTLV-type. Zolang de formele klassificatie van dit virus nog niet voltooid is, wordt de naam PTLV-L voorgesteld voor dit nieuwe type, waarbij STLV-PH969 de prototypestam is.The phylogenetic analysis (Fig. 3) was performed on the fragment encoding the transmembrane protein, because this part is an entity that can be correctly aligned between the two viruses of this group (Fig. 2) and is widely used is in phylogenetic analyzes by various researchers. Here, representatives of the most divergent strains of each of the PTLV-I and PTLV-II types were chosen for this comparison. Among the distance-material approaches, where the length of the branches of the tree are proportional to the distance between the taxa, the neighbor-joining method is generally the best choice (24, 25). Since transitions are much more general than transversions, the Kimura 2 parameter model was used to calculate the distances. The bootstrap values to both nodes represent the percentage of trees for which the sequences analyzed represent a monophyletic group on the right. The high values obtained here are an indication that the branching is correct. As expected, the analysis shows that the STVL-PH969 represents a PTLV type with a long independent evolution, but is somewhat closer to PTLV-II than to PTLV-I. Due to its high divergence from both PTLV-I and PTLV-II and because of its long independent evolution, longer than any strain within the PTLV-I or PTLV-II groups, this virus qualifies as a representative of a new PTLV type. Until the formal classification of this virus is completed, the name PTLV-L is proposed for this new type, where STLV-PH969 is the prototype strain.
REFERENTIESREFERENCES
1. Poiesz, B.J., Ruscetti, F.W., Gazdar, A.F., Bunn, P.A., Minna, J.D., & Gallo, R.C. (1980) Proc. Natl. Acad.1. Poiesz, B.J., Ruscetti, F.W., Gazdar, A.F., Bunn, P.A., Minna, J.D., & Gallo, R.C. (1980) Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 77, 7415-7419.Sci. USA 77, 7415-7419.
2. Kalyanaraman, V.S., Sarngadharan, M.G., Robert-Guroff, M., Miyoshi, I., Golde, D., Gallo, R.C. (1982) Science 218, 571-573.2. Kalyanaraman, V.S., Sarngadharan, M.G., Robert-Guroff, M., Miyoshi, I., Golde, D., Gallo, R.C. (1982) Science 218, 571-573.
3. Watanabe, T., Seiki, M., Hirayama, Y., & Yoshida, M. (1986) Virology 148, 385-388.3. Watanabe, T., Seiki, M., Hirayama, Y., & Yoshida, M. (1986) Virology 148, 385-388.
4. Sherman, M.P., Saksena, N.K., Dube, D.K. Yanagihara, R., & Poiesz, B.J. (1992) J. Virol. 66, 2556-2563.Sherman, M.P., Saksena, N.K., Dube, D.K. Yanagihara, R., & Poiesz, B.J. (1992) J. Virol. 66, 2556-2563.
5. Gessain, A., Boeri, E., Yanagihara, R., Gallo, R.C., & Franchini, G. (1993) J. Virol. 67, 1015-1023.5. Gessain, A., Boeri, E., Yanagihara, R., Gallo, R.C., & Franchini, G. (1993) J. Virol. 67, 1015-1023.
6. Goubau, P., Desmyter, J., Ghesquiere, J., & Kasereka, B. (1992) Nature 359, 201.6. Goubau, P., Desmyter, J., Ghesquiere, J., & Kasereka, B. (1992) Nature 359, 201.
7. .Goubau, P., Liu, H.F., De Lange, G.G., Vandamme, A.M., & Desmyter, J. (1993) AIDS Res. Hum. Retrovir. 9, 709-713.7. Goubau, P., Liu, H.F., De Lange, G.G., Vandamme, A.M., & Desmyter, J. (1993) AIDS Res. Hum. Retrovir. 9, 709-713.
8. Miyoshi, I., Kubonishi, I., Yoshimoto, S., Akagi, T., Ohtsuki, Y., Shiraishi, Y., Nagata, T., & Hinuma, Y. (1981) Nature 294, 770-771.8. Miyoshi, I., Kubonishi, I., Yoshimoto, S., Akagi, T., Ohtsuki, Y., Shiraishi, Y., Nagata, T., & Hinuma, Y. (1981) Nature 294, 770- 771.
9. Lipka, J.J., Miyoshi, I., Hadlock, K.G., Reyes, G.R., Chow, T.P., Blattner, W.A., Shaw, G.M., Hanson, C.V., Gallo, D., Chan, L., & Foung, S.K.H. (1992) J. Infect. Dis. 165, 268-272.9. Lipka, J.J., Miyoshi, I., Hadlock, K.G., Reyes, G.R., Chow, T.P., Blattner, W.A., Shaw, G.M., Hanson, C.V., Gallo, D., Chan, L., & Foung, S.K.H. (1992) J. Infect. Dis. 165, 268-272.
10. Rudolph, D.L., Yee, J., Hone, J., Foung, S.K.H., Lipka, J.J., Reyer, 6.R., Hadlock, K., Chan, L., Villinger, F., Lairmore, M.D., Sinha, S., & Lal, R.B. (1992) J. Clin. Microbiol. 30, 858-861.10. Rudolph, DL, Yee, J., Hone, J., Foung, SKH, Lipka, JJ, Reyer, 6.R., Hadlock, K., Chan, L., Villinger, F., Lairmore, MD, Sinha, S., & Lal, RB (1992) J. Clin. Microbiol. 30, 858-861.
11. Lal, R.B., Heneine, W., Rudolph, D.L., Present, W.B., Hofhienz, D., Hartley, T.M., Khabbaz, R.F., & Kaplan, J.E. (1991) J. Clin. Microbiol. 29, 2253-2258.11. Lal, R.B., Heneine, W., Rudolph, D.L., Present, W.B., Hofhienz, D., Hartley, T.M., Khabbaz, R.F., & Kaplan, J.E. (1991) J. Clin. Microbiol. 29, 2253-2258.
12. Palker, T.J., Scearce, R.M., Ho, W., Copeland, T.D., Oroszlan, S., Popovic, N., & Hayners, B.F. (1985) J. Immunol. 135, 247-254.12. Palker, T.J., Scearce, R.M., Ho, W., Copeland, T.D., Oroszlan, S., Popovic, N., & Hayners, B.F. (1985) J. Immunol. 135, 247-254.
13. Maloney, E.M., Biggar, R.J., Neel, J.V., Taylor, M.E., Hahn, B.H., Shaw, G.M., & Blattner, W.A. (1992) J. Infect. Dis. 166, 100-107.13. Maloney, E.M., Biggar, R.J., Neel, J.V., Taylor, M.E., Hahn, B.H., Shaw, G.M., & Blattner, W.A. (1992) J. Infect. Dis. 166, 100-107.
14. Abbott, M.A., Poiesz, B.J., Byrne, B.C., Kwok, S. Sninsky, J.J., Ehrlich, G.D. (1988) J. Infect. Dis.14. Abbott, M.A., Poiesz, B.J., Byrne, B.C., Kwok, S. Sninsky, J.J., Ehrlich, G.D. (1988) J. Infect. Dis.
158, 1158-1168.158, 1158-1168.
15. Saitou, N., & Nei, M. (1987) Mol. Biol. Evol. 4, 406-. 425.15. Saitou, N., & Nei, M. (1987) Mol. Biol. Evol. 4,406-. 425.
16. Kimura, M. (1980) J. Molec. Evol. 16, 111-120.16. Kimura, M. (1980) J. Molec. Evol. 16, 111-120.
17. Van de Peer, Y., & De Wachter, R. (1993) Comput. Ap-plic. Biosci. 9, 177-182.17. Van de Peer, Y., & De Wachter, R. (1993) Comput. Ap-plic. Biosci. 9, 177-182.
18. Felsenstein, J. (1985) Evolution 39, 783-791.18. Felsenstein, J. (1985) Evolution 39, 783-791.
19. Seiki, M., Hattori, S., Hirayama, Y., & Yoshida, M. (1983) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80, 3618-3622.19. Seiki, M., Hattori, S., Hirayama, Y., & Yoshida, M. (1983) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80, 3618-3622.
20. Shimotohno, K., Takahashi, Y., Shimuzu, N., Gojobori, T., Golde, D.W., Chen, S.Y., Miwa, M., & Sugimura, T. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 3101-3105.20. Shimotohno, K., Takahashi, Y., Shimuzu, N., Gojobori, T., Golde, D.W., Chen, S.Y., Miwa, M., & Sugimura, T. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 3101-3105.
21. Watanabe, T., Seiki, Μ., Tsujimoto, Η., Miyoshi, I., Hayami, M., & Yoshida, M. (1985) Virology 144, 59-65.21. Watanabe, T., Seiki, Μ., Tsujimoto, Η., Miyoshi, I., Hayami, M., & Yoshida, M. (1985) Virology 144, 59-65.
22. Pardi, D., Switzer, W.M., Hadlock, K.G., Kaplan, J.E., Lal, R.B., & Folks, T.M. (1993) J. Virol. 67, 4659-4664.22. Pardi, D., Switzer, W.M., Hadlock, K.G., Kaplan, J.E., Lal, R.B., & Folks, T.M. (1993) J. Virol. 67, 4659-4664.
23. Shapiro, M.B., & Senapathy, P. (1987) Nucleic Acids Res. 15, 715507174.23. Shapiro, M.B., & Senapathy, P. (1987) Nucleic Acids Res. 15, 715507174.
24. Saitou, N., & Imanishi, T. (1989) Mol. Biol. Evol. 6, 514-525.24. Saitou, N., & Imanishi, T. (1989) Mol. Biol. Evol. 6,514-525.
25. Sourdis, J., & Nei, M. (1988) Mol. Biol. Evol. 5, 298-. 311.25. Sourdis, J., & Nei, M. (1988) Mol. Biol. Evol. 5, 298-. 311.
26. Rummer, H. (1992) Wiesse Affen am roten Meer (R. Piper, München), p. 427.26. Rummer, H. (1992) Wiesse Affen am roten Meer (R. Piper, Munich), p. 427.
27. Gallo, D., Penning, L.M., & Hanson, C.M. (1991) J.27. Gallo, D., Penning, L.M., & Hanson, C.M. (1991) J.
Clin. Microbiol. 29, 2345-2347.Clin. Microbiol. 29, 2345-2347.
28. . Saksena, N.K., Hervé, V., Sherman, M.P., Durand, J.P.,28.. Saksena, N.K., Hervé, V., Sherman, M.P., Durand, J.P.,
Mathiot, C., Muller, M., Love, J.L., LeGuenno, B., Barré-Sinoussi, F., Dube, D.K., & Poiesz, B.J. (1993) Virology 192, 312-320.Mathiot, C., Muller, M., Love, J.L., LeGuenno, B., Barré-Sinoussi, F., Dube, D.K., & Poiesz, B.J. (1993) Virology 192, 312-320.
29. Chen et al. (1993) International Conference on AIDS, Berlijn.29. Chen et al. (1993) International Conference on AIDS, Berlin.
Claims (24)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/BE1995/000026 WO1995026405A1 (en) | 1994-03-25 | 1995-03-23 | T-lymphotropic primate virus l (ptlv-l) and its applications |
| AU20637/95A AU2063795A (en) | 1994-03-25 | 1995-03-23 | T-lymphotropic primate virus l (ptlv-l) and its applications |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP94200804 | 1994-03-25 | ||
| EP94200804 | 1994-03-25 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL9400932A true NL9400932A (en) | 1995-11-01 |
Family
ID=8216746
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL9400932A NL9400932A (en) | 1994-03-25 | 1994-06-08 | T-Lymphotropic primate virus L (PTLV-L) and uses thereof |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| NL (1) | NL9400932A (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1987002892A1 (en) * | 1985-11-14 | 1987-05-21 | President And Fellows Of Harvard College | T-lymphotrophic virus |
| US5212084A (en) * | 1988-06-01 | 1993-05-18 | Emory University | Retrovirus and related method used for producing a model for evaluating the antiretroviral effects of drugs and vaccines |
-
1994
- 1994-06-08 NL NL9400932A patent/NL9400932A/en active Search and Examination
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1987002892A1 (en) * | 1985-11-14 | 1987-05-21 | President And Fellows Of Harvard College | T-lymphotrophic virus |
| US5212084A (en) * | 1988-06-01 | 1993-05-18 | Emory University | Retrovirus and related method used for producing a model for evaluating the antiretroviral effects of drugs and vaccines |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| PATRICK GOUBAU ET AL.: "A PRIMATE T-LYMPHOTROPIC VIRUS, PTLV-L, DIFFERENT FROM HUMAN T-LYMPHOTROPIC VIRUSES TYPES I AND II, IN A WILD-CAUGHT BABOON (PAPIO HAMADRYAS).", PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF USA., vol. 91, no. 7, 29 March 1994 (1994-03-29), WASHINGTON US, pages 2848 - 2852 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Goubau et al. | A primate T-lymphotropic virus, PTLV-L, different from human T-lymphotropic viruses types I and II, in a wild-caught baboon (Papio hamadryas). | |
| Gessain et al. | Isolation and molecular characterization of a human T-cell lymphotropic virus type II (HTLV-II), subtype B, from a healthy Pygmy living in a remote area of Cameroon: an ancient origin for HTLV-II in Africa. | |
| Hunter et al. | Retrovirus envelope glycoproteins | |
| Olmsted et al. | Worldwide prevalence of lentivirus infection in wild feline species: epidemiologic and phylogenetic aspects | |
| Gessian et al. | Highly divergent molecular variants of human T-lymphotropic virus type I from isolated populations in Papua New Guinea and the Solomon Islands. | |
| Müller et al. | Simian immunodeficiency viruses from central and western Africa: evidence for a new species-specific lentivirus in tantalus monkeys | |
| Shioda et al. | In vivo sequence variability of human immunodeficiency virus type 1 envelope gp120: association of V2 extension with slow disease progression | |
| Beer et al. | Simian immunodeficiency virus (SIV) from sun-tailed monkeys (Cercopithecus solatus): evidence for host-dependent evolution of SIV within the C. lhoesti superspecies | |
| Giri et al. | Isolation of a novel simian T-cell lymphotropic virus from Pan paniscus that is distantly related to the human T-cell leukemia/lymphotropic virus types I and II | |
| Ibrahim et al. | Isolation and characterization of a new simian T-cell leukemia virus type 1 from naturally infected celebes macaques (Macaca tonkeana): complete nucleotide sequence and phylogenetic relationship with the Australo-Melanesian human T-cell leukemia virus type 1 | |
| Liégeois et al. | Identification and molecular characterization of new STLV-1 and STLV-3 strains in wild-caught nonhuman primates in Cameroon | |
| Fauci et al. | Development and evaluation of a vaccine for human immunodeficiency virus (HIV) infection | |
| Whetter et al. | Equine infectious anemia virus derived from a molecular clone persistently infects horses | |
| Digilio et al. | The simian T-lymphotropic/leukemia virus from Pan paniscus belongs to the type 2 family and infects Asian macaques | |
| Buonaguro et al. | Heteroduplex mobility assay and phylogenetic analysis of V3 region sequences of human immunodeficiency virus type 1 isolates from Gulu, northern Uganda. The Italian-Ugandan Cooperation AIDS Program | |
| Gessain et al. | Phylogenetic study of ten new HTLV-I strains from the Americas | |
| Van Brussel et al. | The discovery of two new divergent STLVs has implications for the evolution and epidemiology of HTLVs | |
| Delebecque et al. | A chimeric human T-cell lymphotropic virus type 1 with the envelope glycoprotein of Moloney murine leukemia virus is infectious for murine cells | |
| Devare et al. | Genomic diversity of the acquired immunodeficiency syndrome retroviruses is reflected in alteration of its translational products. | |
| NL9400932A (en) | T-Lymphotropic primate virus L (PTLV-L) and uses thereof | |
| Lairmore et al. | Characterization of a B-cell immunodominant epitope of human T-lymphotropic virus type 1 (HTLV-I) envelope gp46 | |
| Arp et al. | A source of glycosylated human T-cell lymphotropic virus type 1 envelope protein: expression of gp46 by the vaccinia virus/T7 polymerase system | |
| Loh | Spumaviruses | |
| Dube et al. | The complete genomic sequence of an HTLV-II isolate from a Guahibo Indian from Venezuela | |
| Gessain et al. | Genetic diversity and molecular epidemiology of primate T cell lymphotropic viruses: human T cell leukaemia/lymphoma viruses types 1 and 2 and related simian retroviruses (STLV-1, STLV-2 pan-p and PTLV-L) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1B | A search report has been drawn up | ||
| A1M | The application is based on a (several) micro-organism(s) | ||
| BC | A request for examination has been filed | ||
| BN | A decision not to publish the application has become irrevocable |