NL8700240A - Werkwijze voor het bereiden van thiolverbindingen. - Google Patents

Werkwijze voor het bereiden van thiolverbindingen. Download PDF

Info

Publication number
NL8700240A
NL8700240A NL8700240A NL8700240A NL8700240A NL 8700240 A NL8700240 A NL 8700240A NL 8700240 A NL8700240 A NL 8700240A NL 8700240 A NL8700240 A NL 8700240A NL 8700240 A NL8700240 A NL 8700240A
Authority
NL
Netherlands
Prior art keywords
cysteine
process according
pulegone
conjugate
lyase
Prior art date
Application number
NL8700240A
Other languages
English (en)
Original Assignee
Tno
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tno filed Critical Tno
Priority to NL8700240A priority Critical patent/NL8700240A/nl
Priority to US07/148,418 priority patent/US5182194A/en
Priority to AT88200141T priority patent/ATE96464T1/de
Priority to DE88200141T priority patent/DE3885115T2/de
Priority to EP88200141A priority patent/EP0277688B1/en
Priority to ES88200141T priority patent/ES2061622T3/es
Priority to JP63018582A priority patent/JPS63240793A/ja
Publication of NL8700240A publication Critical patent/NL8700240A/nl
Priority to US08/232,357 priority patent/US5578470A/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/57—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C323/58—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/20—Synthetic spices, flavouring agents or condiments
    • A23L27/203—Alicyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/20—Synthetic spices, flavouring agents or condiments
    • A23L27/205—Heterocyclic compounds
    • A23L27/2052—Heterocyclic compounds having oxygen or sulfur as the only hetero atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P11/00—Preparation of sulfur-containing organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P33/00—Preparation of steroids

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Seasonings (AREA)

Description

1 4
• ' Μ.O. 34276 -C
Werkwijze voor het bereiden van thiolverbindingen.
De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor het bereiden van thiolverbindingen.
5 In Pesticide Biochemistry and Physiology 14, blz. 50-61 (1980) wordt het in-vitro-metabolisme van pentachloornitrobenzeen (PCNB) in pentachloormethylthiobenzeen (PCTA) met behulp van een uit uien gewonnen enzymsysteem beschreven. Meer in het bijzonder betreft deze literatuurplaats de in-vitro-bereiding van PCTA uit PCNB bij een pH van 7,9 met 10 behulp van een enzymsysteem» dat dithiothreitol, glutathion en S-adeno-sylmethionine bevat. Dit enzymsysteem werd door ammoniumsulfaat-fractio-nering en differentiële centrifugatie uit uiwortels bereid. Het enzymsysteem bevatte glutathion-S-transferase-aktiviteit met PCNB, C-S-lyase--aktiviteit (ook B-lyase-aktiviteit genoemd) met S-(pentachloorfenyl)-15 -cystefne, $-adenosylmethionine-methyl-transferase-aktiviteit met pentachloorthiofenol (PCTP) en vermoedelijk enige andere peptidase-akti-viteiten. De opbrengst aan de desbetreffende thiol verbinding, namelijk pentachloorthiofenol (PCTP) is bij deze bekende werkwijze echter te verwaarlozen ten aanzien van de opbrengst aan PCTA (zie blz. 55, rechter 20 kolom, regels 10-13 van onderen), zodat deze werkwijze ongeschikt geacht wordt voor het bereiden van thiol verbindingen.
Gevonden werd een in de aanhef omschreven werkwijze, welke gekenmerkt wordt, doordat men cystefne via een -S-brug aan een koolwater-stofverbinding koppelt en vervolgens het verkregen cystefne-conjugaat 25 omzet met een β-lyase onder vorming van de betreffende thiolverbinding (en) alsmede NH3 en CH3-CO-COOH.
Uit het bovenstaande kan worden afgeleid, dat de werkwijze volgens de uitvinding in een tweetal trappen kan worden onderverdeeld: a) de bereiding van het cystefne-conjugaat; en 30 b) de splitsing van dit cystefne-conjugaat in o.a. de betreffende thiolverbinding(en).
De bereiding van het cystefne-conjugaat kan bijvoorbeeld door een additie- of substitutiereactie plaatsvinden. Meer in het bijzonder kan de additiereactie van cystefne aan een verbinding met de formule 35 (Ri)(R2)C=C(R3)-C0-R4 worden uitgevoerd, waarin de symbolen R1-R4 een waterstofatoom of een al dan niet verzadigde en/of heterogene koolwaterstofgroep voorstellen of tezamen met de koolwaterstofatomen, waaraan de symbolen gebonden zijn ppn of twee, al dan niet verzadigde en/of heterogene ringsystemen vormen. Bijvoorbeeld stellen de sym-40 bolen R1-R4 een waterstofatoom, een alkyl groep met 1-5 koolstofato- 67·:. : · o 2 ïr ‘ men, een alkenyl groep met 2-5 kool stof atomen, een cycloalkyl- of cyclo-alkenyl groep met 5-10 kool stofatomen of een aryl groep met 6-10 koolstof-atomen voor, welke voornoemde groepen door een of meer halogeenatomen en/of C, N, S, 0 en/of halogeenatomen houdende groepen kunnen zijn ge-5 substitueerd. Bij voorkeur stellen de symbolen R2 en R3 een waterstofatoom of een alkyl groep met 1-3 kool stofatomen en R4 een via een -0-brug gebonden, al dan niet heterogene koolwaterstofgroep voor. De additie kan op louter chemische wijze maar ook op biochemische wijze onder invloed van een enzym zoals esterase of lipase plaatsvinden.
10 De bereiding van een cysteTne-conjugaat met behulp van een sub-stitutiereactie kan plaatsvinden door middel van nucleofiele substitutie van glutathion bij aanwezigheid van glutathion-transferase, waarbij als te vervangen groep Cl, NO2 en H kunnen optreden. Het glutathion-conju-gaat wordt enzymatisch in het cysteTne-conjugaat omgezet (het gluta-15 thion-conjugaat wordt met behulp van een carboxy-peptidase in het ^-glutamylcysteTne-conjugaat omgezet, dat weer onder invloed van y -glutamyl-transpeptidase in het cysteTne-conjugaat wordt omgezet). Een dergelijke syntheseroute wordt echter op grond van de extra bewer-kingstrappen vooralsnog niet met voordeel toegepast.
20 Uit de stand der techniek zijn velerlei cysteTne-conjugaten als zodanig bekend. Bijvoorbeeld is uit Applied and Environmental Microbiology, mei 1985, blz. 1146-1153 de bereiding van een dergelijk cysteTne-conjugaat bekend. In deze literatuurplaats wordt namelijk 16-de-hydroprogesteron met L-cysteTne op niet-enzymatische wijze in 25 16-S-cysteTnylprogesteron omgezet. Met behulp van de tweede trap van de werkwijze volgens de uitvinding kan deze cysteTnylverbinding bij aanwezigheid van B-lyase in 16-mercapto-progesteron worden omgezet. Het onderstaande schema verduidelijkt de bovenbeschreven syntheseweg: P «·/ '-V *"- ƒ. f* & * v ,ν "ί Ό i' ï 3 fig 1 c=o ch3 c-o NHj 5C^-CHi .Cu “ CH, i
C»D
Het bovenaangeduide thiolsteroide bezit specifieke farmacologische eigenschappen.
In Biochimica et Biophysica Acta 672 (1981), blz. 151-157 wordt de vorming van cysteine-conjugaten van 3-(3,4-dihydro^yfenyl)analine ver-5 meld. Zoals op blz. 155 van deze literatuurplaats wordt aangegeven kunnen naast enige mono-conjugaten tevens poly-conjugaten worden verkregen. Gok deze enkel- of meervoudig geconjugeerde verbindingen kunnen met behulp van het volgens de uitvinding toe te passen B-lyase tot de overeenkomstige mono- of polythiolderivaten worden omgezet.
' 10 Als verdere literatuurplaatsen inzake specifieke cystefne-conju-gaten respektievelijk daarvan afgeleide derivaten kan worden verwezen naar: 1) J.Chem.Soc.Chem. Commun. 1986, blz. 1331-1333; • 8700240 4 s « 2) Journal of Food Science, vol. 51, no.5, 1986, blz.1191-1194; 3) Planta (1986) 169: 208-215; en 4) Carbohydrate Research 142 (1985) blz. 93-105.
Het bij de werkwijze volgens de uitvinding toegepaste cystefne 5 bezit de formule HS-CH2-CH(NH2)-C00H. Met het oog op het werkings-spectrum van het bij de werkwijze volgens de uitvinding toe te passen β-lyase wordt L-cystefne toegepast.
Het bij de werkwijze volgens de uitvinding toegepaste β-lyase (ook wel C-S-lyase of cystefne-conjugaat β-lyase genoemd) is een pyri-10 doxaal-5-fosfaat (vitamine B6) afhankelijk enzym. Het β-lyase is behalve in een groot aantal darmbacteriën (in 24 van de 43 onderzochte darm-bacteriën) ook in sommige plante- en dierlijke cellen aanwezig (Larsen G.L. "Distribution of cysteine conjugaat β-lyase in gastrointestinal bacteria and in the environment, Xenobiotica 15, 199-209 (1985)). De 15 bacteriële β-lyases kunnen een breed spectrum van substraten, namelijk zowel S-alkyl- als S-aryl-cystefne-conjugaten, omzetten terwijl het werkingsspectrum van β-lyases van plantaardige of dierlijke oorsprong beperkt is. Het β-lyase, afkomstig van de anaerobe darmbacterie Eubac-terium limosum is, gemeten met het cystefne-propachlor-conjugaat (een 20 S-alkyl-cystefne conjugaat), het meest actieve enzym en heeft de laagste substraat-specificiteit (Larsen l.c.). Indien echter de omzetting van S-(2-benzothiazolyl)cysteTne (een S-aryl-cystefne-conjugaat) in ogenschouw wordt genomen, blijkt, dat het β-lyase uit een anaëroob Fuso-bacteriurn species een nagenoeg gelijke activiteit bezit. β-Lyase uit 25 F.necrophorum en E.limosum verschillen behalve in substraat-specificiteit, ook in grootte, namelijk 228 kD en 75 kD (2x38 kD) alsook in stabiliteit. Het enzym uit F.necrophorum heeft pyridoxaal-5-fosfaat nodig voor de stabiliteit, maar is dan ook meer hitte-stabiel. β-Lyases uit E.limosum en F.variurn vertonen geen activiteit met D-cystefne-conjuga-30 ten en bezitten in het algemeen een lagere activiteit voor S-alkyl-cys-tefne-conjugaten dan voor S-aryl-cystefne-conjugaten.
De isolatie van β-lyase uit zowel E.limosum als F.varium behoeft niet onder anaerobe omstandigheden plaats te vinden. Dit duidt erop, dat het enzym niet zuurstofgevoelig is. Tevens blijkt uit de isolatiemetho-35 de, dat het enzym zich in de cel bevindt. De bovenbeschreven tweede trap van de werkwijze volgens de uitvinding kan derhalve met gezuiverd/gewon-nen β-lyase of wanneer de substraten door de bacteriecellen worden opgenomen en daarin worden omgezet, met de betreffende bacteriën zelve worden uitgevoerd.
40 De werkwijze volgens de uitvinding leidt tot velerlei thiolverbin- 8700240 ί « 5 dingen met uiteenlopende toepassingen. Voorbeelden van te bereiden stoffen behoren tot het gebied van de reuk- en smaakstoffen (p-mentha-8--thiol one, Dasmascone-derivaat), farmacologische steroid-verbindingen en repellants (Warburganal.).
5 Voorts heeft de uitvinding betrekking op het zuiveren respektieve-lijk afscheiden van α,β-onverzadigde alsook verzadigde aldehyden en ke-tonen uit in het bijzonder complexe plantaardige produkten onder toepassing van de daarvan afgeleide cystefne-conjugaten alsmede op de daarmee samenhangende verrijking van de eveneens in deze produkten aanwezige 10 reststoffen. De gevormde cysteTne-conjugaten worden na afscheiden uit het oorspronkelijke produkt door middel van bijvoorbeeld stoomdestilla-tie in het gezuiverde aldehyde of keton en het cystefne gesplitst. Dit teruggewonnen cysteïne kan vervolgens weer bij de cysteTne-conju-gaat-bereiding worden ingezet.
15 Aan de hand van het onderstaande schema wordt voor α,β-onverzadigde aldehyden en ketonen (I) met de formule {Ri){R£)C=C(R3)-(O-R4), / waarin R1-R4 de bovenvermelde betekenis bezitten, de vorming van het cysteTne-conjugaat (II) weergegeven; deze conjugaat-vorming wordt vaak gevolgd door de aanhechting van een cysteïne-molecuul aan de carbonyl-20 groep van het aldehyde of keton onder vorming van een thiazolidine-4--carbonzuurderivaat fill).
ytf
^ jJOOH K
X cb2-gr n HH2
j 3 B
Γ COOH
—^4h2 S pOOH R 2
Vf1 HH2
87 0 0 24 C
2 C
6
Als voorbeelden van dergelijke a,$-onverzadigde aldehyden en ketonen kunnen worden genoemd: H ^CH3 - pulegone met de formule if
II
CH^ XH3 cj*3 CH3 - α-ionone met de formule LAai3 CH3 ch3
- carvone met de formule O
V
pU
H3C Ln2 en - cltral met de formule (CH3)2 C=CH-CH2-CH2-(CH3)C=CH-CH0.
Voor verzadigde aldehyden en ketonen met de formule (Ri)(R2)C=0 waarin Ri en R2 de bovengenoemde betekenis bezitten, kan de vorming van de daarvan afgeleide thiazolidine-4-carbonzuurderivaten als volgt worden voorgesteld.
H
Ri Ri N-CH-COOH
\ \ /
OO + cysteTne-^ C
R2/‘ R2/ N-CH2
Als voorbeelden van dergelijke verzadigde aldehyden en ketonen
8 ? 0' 0 2 C
7 ‘ kunnen worden genoemd:
- thujone met de formule [\ I
c H3c' vCH3 en - fenchone met de formule / V=0 H3C CH3
Een belangrijk voordeel van de bovenbeschreven zuivering is gelegen in het feit, dat geen biologisch vreemde reagentia zoals bisulfiet (niet bruikbaar bij o,β-οηverzadigde carbonylverbindingen), hydroxylamine, l-naftylamine-5-sulfonzuur, hydrazine, thiosemicarbazide enz. behoeven 5 te worden toegepast. Tevens kan de zuivering onder milde omstandigheden voor wat betreft pH en temperatuur worden uitgevoerd en wordt het cys-teTne teruggewonnen.
De uitvinding wordt aan de hand van de onderstaande voorbeelden toegelicht, waarbij de voorbeelden I en II de thiolbereiding betreffen 10 en voorbeeld III op de zuiveringsmethode betrekking heeft; deze voorbeelden dienen niet beperkend te worden uitgelegd.
Voorbeeld I
In dit voorbeeld wordt uitgegaan van pulegone, dat via het S-cys-15 teinyl-L-pulegone in p-mentha-8-thiol-3 one wordt omgezet. Deze 87 0 0 2 ' Γ- ύ δ bereiding wordt in het onderstaande schema verduidelijkt.
fig 2 ** CH3 h chs h ch3
0 COOH
CH3-C-S-&Hz-CH CHr&-5H
Ij j CH3 nh2 ch3 15 Trap 1) Bereiding van S-cysteTnyl-L-pulegone.
12,2 g L-cysteTne (0,1 mol) (puriss. p.a. kwaliteit Fluka A.G.), 16,3 ml L-pulegone (0,1 mol) en 2,0 g KHCO3 (0,02 mol) werden in 100 ml H2O gedurende 22 uren bij kamertemperatuur geroerd. De dan niet meer roerbare yoghurtachtige massa liet men vervolgens 3 dagen staan. 20 Het verkregen produkt werd hierna afgezogen en respectievelijk gewassen met 100 en 2 x 50 ml H2O. Na drogen in vacuum over CaCl2 werd het produkt gewassen met aceton. De opbrengst bedroeg 17,9 g. In bijlage 1 wordt het 90 MHz H-NMR spectrum van het verkregen produkt weergegeven. Meer in het bijzonder wijst een element-analyse van het volgens 25 dunne-laag-chromatografie zuivere preparaat duidelijk op een 1:1 reac-tieprodukt.
Element-analyse (duplo) 30 Gevonden: Berekend (stof + 1/2 mol H2O): °/o C: 54,76 55,29 °/o H: 8,36 8,57 °/o N: 5,01 4,96 °/o 0: 19,60 19,83 35 °/o S: 11,13 11,35
Trap 2) Splitsing van het S-cysteTnyl-L-pulegone.
Het bij deze trap toegepaste organisme is Eubacterium limosum met het ATTC nr. 10825. Dit organisme werd onder anaerobe omstandigheden bij 40 37°C gekweekt op een P-medium dat de onderstaande samenstelling bezat: 87 0 0 24 0 ♦ * 9
Samenstelling P-medium:
Caseïne Pepton {Difco) 10 g/1
Beef Extract (Difco) 3 g/1 5 Yeast Extract (Difco) 3 g/1
Glucose (Merck) 2 g/1
Tween 80 (Serva) 1 g/1
Cystefne-HCl (Fluka) 0,5 g/1
Resazurine (Serva) 0,25 g/1 10 zoutoplossing (p.a) 40 ml/1
Eind pH: 7,2.
15 De zoutoplossing bestond uit:
CaCl2 0,2 g/1
MgS04.7H20 0,2 g/1 K2HP04 1,0 g/1 20 KH2P04 1,0 g/1
NaHC03 10,0 g/1
NaCl 2,0 g/1
Het celmateriaal voor de produktie van ¢-lyase werd verkregen door 25 E.limosum (3°/o ent) te kweken op het bovengenoemde P-medium in serum-flessen met een inhoud van 300 ml. Door de fles tot enkele centimeters onder de rand te vullen met P-medium werd het medium door sterilisatie voldoende zuurstof-arm om groei van E.limosum mogelijk te maken. Na een incubatietijd van 1 dag bij 37”C werden de cellen geoogst door deze 20 30 minuten bij 50.000 x g te centrifugeren. Vervolgens werden de cellen 2x gewassen met een buffer met een pH van 7, welke 50 mM fosfaat; en 50 mM pyridoxal-HCl bevatte. De pellet (ca. 1 gram natgewicht uit 300 ml) werd in 10 ml buffer opgenomen.
S-Cysteïnyl-L-pulegone (0,3 g/1 = 1,1 mM) werd met de bovenbe-35 schreven geconcentreerde cel suspensie van E.limosum (eindconcentratie: 1,6 mg droog gewicht/ml) in de buffer omgezet. De reactie werd gedurende 1 uur aëroob bij 30*C uitgevoerd en werd beëindigd door het reactiemeng-sel 5 minuten bij 11.000 x g te centrifugeren.
Ter controle werden een tweetal proeven uitgevoerd: 40 a) Als controle werden gekookte cellen (gedenatureerde enzymen) bij de 8*7 f* Λ. = ' Λ / V- V . v
-i V
ΙΟ bovenbeschreven proef toegepast b) Om te kunnen beoordelen of het SH-produkt (p-mentha-8-thiol-3 one) door het S-methyl transferase tot het S-methyl produkt (p-mentha-8--thiomethyl-3 one) werd omgezet, zijn de cellen ook met p-mentha-8-5 -thiol-3 one geïncubeerd.
De gaschromatografie-analyse-resultaten van dit voorbeeld (monster nr.1) en de beide controleproeven (monsters 2 en 3) worden in bijlage 2 weergegeven.
Voor het uitvoeren van de bovenvermelde gaschromatografische analy-10 se werd 1 deel chloroform (CHCI3) gemengd met 1 deel van het verkregen reactiemengsel. Van dit extract werd 1 /ul op een gaschromatograaf met een 20 M carbowax-kolom geïnjecteerd (1,3 m RVS, kol omtemperatuur: 145eC, injectiepoort- en TCD-temperatuur: 160eC).
Voorbeeld II
15 De werkwijze volgens voorbeeld I werd herhaald maar met het verschil, dat in plaats van op een 1 ml-schaal de proef op een 10 ml-schaal werd uitgevoerd. Bij deze proef werden de cellen in een dubbele concentratie t.w. 3,2 mg droog gewicht/ml eindconcentratie toegepast en werd de incubatie gedurende 3 uren bij 37UC uitgevoerd. Voor een gaschromato-20 grafische analyse werd hiervan op de volgende wijze een monster (monster B) getrokken.
Een deel dichloormethaan (CH2CI2) werd met 4 delen van het reactiemengsel gemengd. Van dit extract werd 0,4 /ul op een Varian gaschromatograaf geïnjecteerd, waarin een 10°/o FFAP-chromosorb op 25 WAW- kolom (2m RVS, i.d. 1/8") aangebracht was (kolomtemperatuur: 160eC; injectiepoort- en FID-temperatuur: 180eC).
Ter vergelijking zijn naast het in bijlage 3 weergegeven gaschro-matogram van monster B als controle tevens de gaschromatogrammen van a) p-mentha-8-thiol-3 one; b) p-mentha-8-thiomethyl-3 one; c) L-pulegone en 30 d) S-cysteïnyl-L-pulegone, zonder dat daarbij cellen werden gebruikt, opgenomen.
Uit de in bijlage 3 weergegeven chromatogrammen volgt o.a., dat geen detecteerbaar p-mentha-8-thiomethyl-3 one is gevormd. (Vergelijk 3b met 3e). De pulegone- piek in fig. 3d en 3e (retentietijd 2,7 min.) kan 35 verklaard worden doordat een deel van het S-cysteïnyl-L-pulegone in het extractiemiddel oplost en in de gaschromatograaf (160eC) wordt ontleed.
Het chromatogram van chemisch gesynthetiseerd p-mentha-8-thiol-3 one (fig. 3a) geeft een isomeerverhouding te zien van ongeveer 2:1. Het 40 biologisch bereide p-mentha-8-thiol-3 one (fig. 3e) heeft een geheel andere verhouding van de beide isomeren en bedraagt ongeveer 9:1.
R 7 (l * O /. A
V f V· v ‘j V
11
Voorbeeld III
Als uitgangsprodukt werd een pulegoneprodukt van plantaardige oorsprong met een gaschromatografisch bepaald L-pulegonegehalte van 87,7 gew.°/o toegepast. Als verontreinigingen in een dergelijk produkt 5 worden o.a.
H3C H
Λ - L-menthone met de formule 10 ' Η X - CH, u/l H CH3 15 en
/ H3C H
- iso-pulegone met de formule L Ja.
20 0 H- C\ H3C7 ^CH2 25 genoemd, welke bijvoorbeeld door middel van gefractioneerde destillatie niet of nauwelijks van L-pulegone kunnen worden afgescheiden.
Overeenkomstig de in trap (1) van Voorbeeld I vermelde wijze werd 30 2,5 g S-cystefnyl-L-pulegone · 1/2 H2O bereid. Dit produkt werd aan een stoomdestillatie onderworpen totdat geen L-pulegone meer overdes-tilieerde. Vervolgens werd het destillaat met tetrachloorkoolstof geëxtraheerd, waarna het verkregen extrakt, na drogen op natriumsul-faat, onder vacuum werd ingedampt. De opbrengst bedroeg 1,3 g L-pulegone 35 (96,4°/o van de theoretische hoeveelheid), dat een gaschromatografisch bepaalde zuiverheid van 97,9°/o bezat.
87 0 0 2*0

Claims (13)

1. Werkwijze voor het bereiden van thiolverbindingen, met het kenmerk, dat men cysteTne via een -S-brug aan een koolwaterstof- 5 verbinding koppelt en vervolgens het verkregen cysteTne-conjugaat omzet met B-lyase onder vorming van een of meer thiolverbindingen.
2. Werkwijze volgens conclusie l,met het kenmerk, dat men cysteTne door middel van additie aan een verbinding met de formule (Ri)(R2)C=C(R3)-C0-R4 koppelt, waarin de symbolen
3. Werkwijze volgens conclusie 2, met het kenmerk, dat 15 men cysteTne door middel van additie aan een verbinding met de formule (Rl)(R2)C=C(R3)-CO-R4 koppelt, waarin Ri de in conclusie 2 vermelde betekenis bezit, R2 en R3 een waterstofatoom of een alkyl-groep met 1-3 koolstofatomen voorstellen en R4 een via een -0-brug gebonden, al dan niet heterogene koolwaterstofgroep voorstelt.
4. Werkwijze volgens conclusie 2 of 3, met het kenmerk, dat men de additie op biologische wijze onder invloed van een enzym zoals esterase of lipase uitvoert.
5. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat men cysteTne in de vorm van glutathion door middel van nucleofiele 25 substitutie onder invloed van glutathion-transferase aan een koolwaterstof verbinding koppelt.
6. Werkwijze volgens een of meer der conclusies 1-5, met het k en m e r k, dat men het cysteTne-conjugaat met behulp van bacterieel β-lyase splitst.
7. Werkwijze volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat men B-lyase van Eubacterium limosum toepast.
8. Werkwijze volgens conclusie 1, 6 of 7, met het ken m er k, dat men β-lyase in de vorm van bacteriële cellen toepast.
9. Werkwijze volgens een of meer der conclusies 1-8, met het 35. e n m e r k, dat men uitgaande van L-pulegone het aroma p-mentha-8-thiol-3 one bereidt.
10. Werkwijze volgens een of meer der conclusies 1-8, met het kenmerk, dat men uitgaande van 16-dehydroprogesteron de verbinding 16-mercapto-progesteron bereidt.
10 R1-R4 een waterstofatoom of een al dan niet verzadigde en/of heterogene koolwaterstofgroep voorstellen respektievelijk tezamen met de kool-stofatomen, waaraan de symbolen gebonden zijn, een of twee al dan niet verzadigde en/of heterogene ringsysternen vormen.
11. CysteTne-conjugaten, verkregen bij de werkwijze volgens een 87 0 0 2-' 0 of meer der conclusies 1-10, mét dien verstande, dat S-(pentach1oorfe-nylJcysteïne, 16-S-cysteïnylprogesteron en de cysteïnylderivaten van 3-{3,4-dihydro)<yfenyl}alanine zijn uitgesloten.
12. Werkwijze voor het zuiveren respektievelijk afscheiden van 5 aldehyden en ketonen, in het bijzonder α,β-onverzadigde aldehyden en ketonen uit dergelijke carbonyl verbindingen bevattende produkten, met het kenmerk, dat men cysteine via een -S-brug aan het betreffende aldehyde of keton bindt, het verkregen cysteTne-conjugaat uit het reaktiemengsel isoleert en vervolgens het gewonnen conjugaat in 10 cysteine en het betreffende aldehyde of keton splitst.
13. Werkwijze volgens conclusie 12, m e t het k e n m e r k, dat men verontreinigd L-pulegone met cysteine in het S-cysteinyl-L--pulegone omzet en het verkregen geïsoleerde conjugaat aan een stoomdestillatie onderwerpt onder winning van gezuiverd L-pulegone. 8700240= *5/ si V 4 . ,jt,, j BI3LAGE 1 : >--———.——z~~r :'-^ ^ t "''·.,·';' ; φ.·:'$···· ±-η··,· TE). -;s‘vpi· 1 ;-. '·'· ·'.·- J I ·. 1°»““ - --!·:· -......... . - -.......J Ί ""2’""ii · · - · · -. I - · ! . · g · « * : ' Wi% -.:.5 . ι ί -- -i '•fc-l-a H • . * 15 I 4 ~£ 3 ξ ; ; ii i ° © ·: _ s s ê 2 “I ; £ S É S _. jr ._ o ':! ..- .... f · 1 t - : i ^ 1¾1 ï • _· “-"·· 1 :; . · · - .:¾ 'rf 3 • · * ·· f " ' : . s i i I fëglcf —- -e**ifcs M < < « fi · r C ^ 5 £ • : sisi;^ • "* - ^ M »Sz ïVS' __ __,_J W V» - M _ ï ft ·? A f. ft ? ifd ..... • SH\ I·. ,y -d Η -V - - ,y. ?. -ysT+ir^^^r:.·. “ - .·*··7"; * * \'^K'^:· ...-#-··/;-..· «J» \ · < " · · t·^ · · t'_t · )'i( Y.« V.t *’.« VU *·* V.» t*.i R:: -WK r. · *«* hr: S:SS % \ * : " V_ ‘ " 'i'.i ' V.e 1 V.» 1' V.e 1 ' »'.· ' ' V.· '' V.è '' ' ' V.» ‘n.i Sr.; 4:ü*,:: «·«<·’<* ïïr: :*.£ I \ \ S.V* . : v * l'.o y.o i'.o V.·? V.ê c V.ö i'.t* ' J V.» »V.rf H*ri MIO .· . . m u r r · * *··' ?'??S m«i -«.m? .. " · " v ' 1 t t~» *.··« BIJLAGE 2: Chromatogrammen van de ^ monsters van - Voorbeeld II a. monster no. 1 b. monster no. 2 c. monster no. 3 opmerking: De monsters zijn met CHC13 geëxtraheerd (1 op X). Van dit extract is 1 pl op de GC geanalyseerd. ® ^ V ' S V . . rr.-.‘··. '·.·.·; i».·;·.· .· - - , ’· ' ' .X x _ s « * 1. i n K ' - i Pi pi L a b c / «Si R tX K- •“U.,0 · ~ ί3ι Π * y 3 ΙΛ . . \1A l VjisM "\βκ* d ë BIJLAGE 3: chromatogrammen van enkele extracten van exp.2 a 0,022 TF in buffer (recorder: 1 mV F.S.) b 0,0221 TFM in buffer (recorder: 2 mV F.S.) c 0,022 L-pulegone in buffer (recorder: 2 mV F.S.) d 0,032 S-cysteïnyl-L-pulegone in buffer (recorder: \ mV F.S.) e monster B (recorder: £ mV F.S.) opmerking: De monsters zijn met CH2C12 geëxtraheerd (A op l). Van dit extract is 0,A ul op de GC geanalyseerd. F.5. = full scale. TF = p-mentha-8-thiol-3 one TFM = p-mentha-8-thiomethyl-3 one 8700240 --- - - ...: . . : .y» ·.. ·- *.,
NL8700240A 1987-01-30 1987-01-30 Werkwijze voor het bereiden van thiolverbindingen. NL8700240A (nl)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL8700240A NL8700240A (nl) 1987-01-30 1987-01-30 Werkwijze voor het bereiden van thiolverbindingen.
US07/148,418 US5182194A (en) 1987-01-30 1988-01-26 Method for preparing p-mentha-8-thiol-3-one
AT88200141T ATE96464T1 (de) 1987-01-30 1988-01-27 Verfahren zur herstellung von thiolen.
DE88200141T DE3885115T2 (de) 1987-01-30 1988-01-27 Verfahren zur Herstellung von Thiolen.
EP88200141A EP0277688B1 (en) 1987-01-30 1988-01-27 Method for preparing thiol compounds
ES88200141T ES2061622T3 (es) 1987-01-30 1988-01-27 Metodo para la preparacion de tioles.
JP63018582A JPS63240793A (ja) 1987-01-30 1988-01-30 チオール化合物の製法
US08/232,357 US5578470A (en) 1987-01-30 1994-04-22 Method for preparing thiol compounds with bacterial β-lyase

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL8700240 1987-01-30
NL8700240A NL8700240A (nl) 1987-01-30 1987-01-30 Werkwijze voor het bereiden van thiolverbindingen.

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NL8700240A true NL8700240A (nl) 1988-08-16

Family

ID=19849500

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NL8700240A NL8700240A (nl) 1987-01-30 1987-01-30 Werkwijze voor het bereiden van thiolverbindingen.

Country Status (7)

Country Link
US (1) US5182194A (nl)
EP (1) EP0277688B1 (nl)
JP (1) JPS63240793A (nl)
AT (1) ATE96464T1 (nl)
DE (1) DE3885115T2 (nl)
ES (1) ES2061622T3 (nl)
NL (1) NL8700240A (nl)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0770686A1 (fr) 1995-10-25 1997-05-02 Societe Des Produits Nestle S.A. Procédé de préparation de thiols
US6340746B1 (en) * 1997-08-07 2002-01-22 University Of Utah Prodrugs and conjugates of thiol- and selenol- containing compounds and methods of use thereof
US7425635B2 (en) 1997-08-07 2008-09-16 University Of Utah Research Foundation Prodrugs and conjugates of thiol- and selenol-containing compounds and methods of use thereof
US6841536B2 (en) 1997-08-07 2005-01-11 University Of Utah Research Foundation Prodrugs and conjugates of thiol- and selenol-containing compounds and methods of use thereof
US7060315B2 (en) 2001-03-23 2006-06-13 Nestec S.A. Aroma-containing components
US7597922B2 (en) * 1999-05-18 2009-10-06 Nestec S.A. System for dispensing a liquid beverage concentrate
AU4250501A (en) * 2000-04-06 2001-10-23 Societe Des Produits Nestle S.A. Preparation of thiols and derivatives by bio-conversion
DE10064085A1 (de) * 2000-12-21 2002-07-04 Consortium Elektrochem Ind Verfahren zur Entfernung von freien Aldehyden
KR100904978B1 (ko) * 2001-03-23 2009-06-26 소시에떼 데 프로듀이 네슬레 소시에떼아노님 안정화된 아로마 제공 성분 및 그를 함유하는 식료품
WO2010066661A1 (en) * 2008-12-10 2010-06-17 Unilever Nv Process to prepare a meat flavouring agent
CN104109109B (zh) * 2014-05-21 2016-09-14 陕西科技大学 一种利用长叶薄荷酮和硫化钠制备食用香精8-巯基马来酮的方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4034044A (en) * 1969-02-27 1977-07-05 Firmenich S.A. Menthone-8-thiol, carvomenthone-8-thiol and process for preparing same
CH543584A (fr) * 1969-02-27 1973-10-31 Firmenich & Cie Utilisation de cétone-thiols cycliques comme agents parfumants
US4032478A (en) * 1969-09-10 1977-06-28 Givaudan Corporation Perfume compositions containing p-menthane-8-thiol-3-one
CH530459A (de) * 1969-09-10 1972-11-15 Givaudan & Cie Sa Riech- und/oder Geschmackstoffkompositionen
CH540235A (de) * 1970-11-20 1973-08-15 Givaudan & Cie Sa Verfahren zur Herstellung eines neuen p-Menthan-derivates
US4328311A (en) * 1978-02-10 1982-05-04 Syva Company Enzyme-aminoglycoside conjugates
JPS60105661A (ja) * 1983-11-15 1985-06-11 Tokawa Tetsuo シアノグアニジン誘導体及びその製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
DE3885115T2 (de) 1994-03-10
ATE96464T1 (de) 1993-11-15
US5182194A (en) 1993-01-26
EP0277688A3 (en) 1988-11-02
EP0277688B1 (en) 1993-10-27
EP0277688A2 (en) 1988-08-10
JPS63240793A (ja) 1988-10-06
ES2061622T3 (es) 1994-12-16
DE3885115D1 (de) 1993-12-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Prestera et al. Comprehensive chromatographic and spectroscopic methods for the separation and identification of intact glucosinolates
Guichardant et al. Covalent modifications of aminophospholipids by 4-hydroxynonenal
Natsch et al. Identification of Odoriferous Sulfanylalkanols in Human Axilla Secretions and Their Formation through Cleavage of Cysteine Precursors by a C S Lyase Isolated from Axilla bacteria
Delpierre et al. Identification, cloning, and heterologous expression of a mammalian fructosamine-3-kinase
NL8700240A (nl) Werkwijze voor het bereiden van thiolverbindingen.
Gray et al. Dietary phosphate deprivation increases 1, 25-dihyroxyvitamin D3 synthesis in rat kidney in vitro.
Schlame et al. Relationship between lipid saturation and lipid-protein interaction in liver mitochondria modified by catalytic hydrogenation with reference to cardiolipin molecular species
Starkenmann et al. Identification of the precursor of (S)‐3‐methyl‐3‐sulfanylhexan‐1‐ol, the sulfury malodour of human axilla sweat
Pau et al. Molybdenum-independent nitrogenases of Azotobacter vinelandii: a functional species of alternative nitrogenase-3 isolated from a molybdenum-tolerant strain contains an iron-molybdenum cofactor
Hovik et al. Metabolism of acetyl-CoA by isolated peroxisomal fractions: formation of acetate and acetoacetyl-CoA.
WO2019138817A1 (ja) 分析方法
Scalone et al. Cocoa-specific flavor components and their peptide precursors
Putty et al. A liquid chromatography–tandem mass spectrometry assay for D-Ala-D-Lac: a key intermediate for vancomycin resistance in vancomycin-resistant enterococci
Clark et al. Changes in renal phospholipid fatty acids in diabetes mellitus: correlation with changes in adenylate cyclase activity
Huszcza et al. Surfactin isoforms from Bacillus coagulans
Ani-Kibangou et al. Improved absorption of caseinophosphopeptide-bound iron: role of alkaline phosphatase
JP5530696B2 (ja) プラズマローゲン型リン脂質
CN1160082A (zh) 硫醇的制备方法
Yankeelov Jr et al. Peptide-gap inhibitors. 2. Stereoselective synthesis of enantiomeric dipeptide analogs of glycylleucine which contain methylene thioether groups substituted for peptide linkages
Meixner et al. Effect of manganese deficiency on plasma-membrane lipid composition and glucose uptake in Aspergillus niger
Ghiron et al. Studies on the role of 3-deoxy-D-erythro-glucosulose (3-deoxyglucosone) in nonenzymic browning. Evidence for involvement in a Strecker degradation
Mitchell et al. Chlorosis-inducing products from Pseudomonas syringae pathovars: new N-coronafacoyl compounds
US5578470A (en) Method for preparing thiol compounds with bacterial β-lyase
Cooke et al. Fluidity and lipid composition of oat and rye shoot plasma membrane: effect of sterol perturbation by xenobiotics
JP5081346B2 (ja) 酸化防止活性を有する化合物、該化合物を含有する食品インテグレーターとして有用な組成物及び該化合物の製法

Legal Events

Date Code Title Description
A1B A search report has been drawn up
BV The patent application has lapsed