NL8501105A - PROCESS FOR THE PURIFICATION OF INSULIN. - Google Patents
PROCESS FOR THE PURIFICATION OF INSULIN. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8501105A NL8501105A NL8501105A NL8501105A NL8501105A NL 8501105 A NL8501105 A NL 8501105A NL 8501105 A NL8501105 A NL 8501105A NL 8501105 A NL8501105 A NL 8501105A NL 8501105 A NL8501105 A NL 8501105A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- process according
- insulin
- fractionation
- acid
- salts
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
- C07K14/625—Extraction from natural sources
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
N.0. 33138 '*N.0. 33138 '*
Werkwijze voor de zuivering van insulineMethod for the purification of insulin
De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor de nauwkeurige zuivering van insuline onder toepassing van ionenuitwisselaars met hydrofobe matrix.The invention relates to a method for the precise purification of insulin using hydrophobic matrix ion exchangers.
Een technisch op grote schaal toegepaste werkwijze voor de winning 5 van insuline uit dierlijk en menselijk uitgangsmateriaal is de extractie van pancreas met oplosmiddel bevattende mengsels. De extracten kunnen door toevoeging van zouten en pH-omschakelingen, alsmede afkoelen tot lage temperaturen van een groot deel van de aanwezige ballast-stof-fen bevrijd worden. Na de voorzichtige afscheiding van de voor de ex-10 tractie gebruikte oplosmiddelen verkrijgt men insuline bevattende oplossingen in water, waaruit het insuline in onzuivere vorm, bijvoorbeeld door uitzouten in vaste vorm, kan worden afgescheiden. Door ge-fractioneerde precipitatie met keukenzout of ammoniumsulfaat en/of door precipitatie van het insuline in de nabijheid van het iso*élektrische 15 punt ervan, verkrijgt men neerslagen, waaruit insuline in relatief zuivere vorm door kristallisatie verkregen kan worden. Analyseert men het aldus verkregen produkt met gevoelige methoden, zoals schijf-elektrofo-rese of HPLC, dan blijkt, dat naast een of twee hoofdbestanddelen een reeks nevenbestanddelen aanwezig is.A widely used technique for the recovery of insulin from animal and human starting material is the extraction of pancreas with solvent-containing mixtures. The extracts can be freed from a large part of the bulking substances present by adding salts and pH-switching, as well as cooling to low temperatures. After the careful separation of the solvents used for the ex-traction, insulin-containing solutions in water are obtained, from which the insulin can be separated in an impure form, for example by salting out in a solid form. By fractional precipitation with table salt or ammonium sulfate and / or by precipitation of the insulin in the vicinity of its isoelectric point, precipitates are obtained from which insulin can be obtained in relatively pure form by crystallization. If the product thus obtained is analyzed by sensitive methods, such as disk electrophoresis or HPLC, it is found that a series of secondary components are present in addition to one or two main components.
20 Zo kan worden aangetoond, dat dergelijke bestanddelen, die bioche mische synthesevoortrappen van het insuline zijn, in het volgens hiervoor beschreven werkwijzen verkregen insuline steeds in aanzienlijke hoeveelheid aanwezig zijn.It can thus be shown that such components, which are biochemical synthesis steps of the insulin, are always present in considerable quantity in the insulin obtained according to the above-described methods.
Omvangrijke biologische, farmacologische en medische onderzoekin-25 gen hebben opgeleverd, dat dergelijke nevenbestanddelen met een aanzienlijk grotere moleculaire massa dan het insuline voor storende bijwerkingen van de uit dergelijke insulinen bereide farmaceutische specialiteiten verantwoordelijk zijn.Extensive biological, pharmacological and medical studies have shown that such side-components with a considerably greater molecular mass than the insulin are responsible for disturbing side effects of the pharmaceutical specialties prepared from such insulins.
Voor de bereiding van bijzonder hoogwaardige insulinespecialitei-30 ten werden methoden voor de afscheiding van dergelijke verontreinigingen ontwikkeld.Methods for the separation of such impurities have been developed for the preparation of particularly high-quality insulin specialties.
In het Britse octrooischrift 1.285.024 wordt een werkwijze voorgesteld voor de chromatografische zuivering van insuline over anionenuit-wisselaars bij aanwezigheid van met water mengbare, organische oplos-35 middelen bij een pH-traject van 6-10. Nadelig bij deze werkwijze is de relatief grote behoefte aan uitwisselaars (ten minste 30/1 uitwisselaar/ insuline) en de geringe insuline-opbrengsten (maximaal 60%).British Patent 1,285,024 proposes a method for the chromatographic purification of insulin over anion exchangers in the presence of water-miscible organic solvents at a pH range of 6-10. A disadvantage of this method is the relatively high need for exchangers (at least 30/1 exchanger / insulin) and the low insulin yields (maximum 60%).
Als alternatief wordt in de Oostduitse octrooischriften 119.216 en *501105 4 '» 2 119.217 overeenkomstig de Westduitse octrooischriften 2.505.306/307 de zuivering van ammonium- of alkalimetaalinsuline door gelfiltratie voorgesteld. Naast de hoge kosten aan gel (1000 ml/4,5 g insuline), de mechanische en chemische instabiliteit van het gelbed, in het bijzonder 5 in het pH-traject boven 7,0, is het relatief hoge gehalte aan proinsu-line een nadeel van deze werkwijze. Voorts is storend, dat slechts gering geconcentreerde oplossingen volgens chromatografie verkregen kunnen worden.Alternatively, East German Pat. Nos. 119,216 and 501105 4,111,211,217 in accordance with West German Pat. Nos. 2,505,306 / 307 propose the purification of ammonium or alkali metal insulin by gel filtration. In addition to the high gel cost (1000 ml / 4.5 g insulin), the mechanical and chemical instability of the gel bed, especially 5 in the pH range above 7.0, the relatively high content of proinsulin is a disadvantage of this method. It is also disturbing that only slightly concentrated solutions can be obtained by chromatography.
In het Duitse Offenlegungsschrift 2.701.092 wordt een werkwijze 10 voor de bereiding van zuiver insuline voorgesteld, die tijdens het totale proces van de winning het insuline zonder faseverandering in opgeloste toestand houdt. Nadelig is hier het gebruik van kostbare technieken, zoals bijvoorbeeld omgekeerde osmose en de toepassing van zeer lage temperaturen. Bovendien volgt uit dit Offenlegungsschrift geen leer 15 over de zuivering van onzuiver kristalinsuline.German Offenlegungsschrift 2,701,092 proposes a process for the preparation of pure insulin, which keeps the insulin in the dissolved state without phase change during the entire recovery process. A disadvantage here is the use of expensive techniques, such as, for example, reverse osmosis and the use of very low temperatures. Moreover, this Offenlegungsschrift does not teach about the purification of impure crystal insulin.
Het Duitse Offenlegungsschrift 2.757.377 geeft de voorkeur aan het reeds bij de trappen van het pancreasextract erbij betrekken van het zuiveringsproces aan kationen- en anionenuitwiselaars voor het verkrijgen van een zuiver insuline. Nadelig is hierbij onder andere de zeer 20 grote behoefte aan ionenuitwisselaars, alsmede het gebruik van kationen- en anionenuitwisselaars. Niettegenstaande deze kosten is een daaropvolgende nauwkeurige zuivering door middel van gelchromatografie noodzakelijk.German Offenlegungsschrift 2,757,377 prefers to involve the purification process of cation and anion exchangers to obtain a pure insulin already at the stages of the pancreatic extract. One of the disadvantages here is the very great need for ion exchangers, as well as the use of cation and anion exchangers. Notwithstanding these costs, subsequent accurate purification by gel chromatography is necessary.
In het Duitse Offenlegungsschrift 2.629.568 wordt de zuivering van 25 peptiden, in het bijzonder insuline, door ionenuitwisselingschromato-grafie bij aanwezigheid van niet-ionogene detergentia voorgesteld. Nadelig zijn hierbij naast het gebruik van relatief dure en moeilijk toegankelijke hulpstoffen, de geringe concentratie van het insuline in de volgens chromatografie verkregen fracties (bijvoorbeeld 0,35%), alsmede 30 de geringe insulineopbrengsten.German Offenlegungsschrift 2,629,568 proposes the purification of peptides, in particular insulin, by ion exchange chromatography in the presence of non-ionic detergents. In addition to the use of relatively expensive and difficult-to-access auxiliary substances, the low concentration of the insulin in the fractions obtained by chromatography (for instance 0.35%), as well as the low insulin yields, are disadvantageous here.
Het doel van de uitvinding bestaat daarin, een werkwijze voor het zuiveren van insuline aan te geven, die de voorgaand beschreven gebrer-ken zoveel raogelijk vermijdt.The object of the invention is to provide a method of purifying insulin which avoids as far as possible the above described uses.
Het doel van de uitvinding bestaat daarin een nieuwe werkwijze aan 35 te geven, die de zuivering van insuline mogelijk maakt, zonder dat hoge verliezen aan insuline optreden en dure of mechanisch en/of chemisch instabiele systemen toegepast worden. Voorts dienen de doelen van de uitvinding met gemakkelijk toegankelijke hulpstoffen bereikt te worden.The object of the invention is to provide a new method which enables the purification of insulin, without high insulin losses occurring and expensive or mechanically and / or chemically unstable systems being used. Furthermore, the objects of the invention are to be achieved with readily accessible auxiliaries.
40 Doel van de uitvinding is een werkwijze, die met mechanisch en 8501105 3 chemisch zoveel mogelijk stabiele ionenuitwisselaars bij een groot be-ladingsvermogen een eenvoudige en doelmatige zuiveringsmogelijkheid voor insuline bij hoge opbrengsten mogelijk maakt, aan te geven. Bovendien dient de oplossing volgens de uitvinding een direkte kristallisa-5 tie uit de bij de zuivering verkregen insulineoplossingen mogelijk te maken. Hoewel de toegepaste grondstoffen goedkoop zijn, is het mogelijk, deze met geringe kosten terug te winnen. Volgens de uitvinding wordt dit doel bereikt, doordat het insuline en de verontreinigingen ervan aan een zwakke zure ionenuitwisselaar met hydrofobe matrix in het 10 zure pH-traject bij verschillende concentraties oplosmiddelen eventueel onder toevoeging van aromatische stoffen, alsmede zouten, gefractio-neerd wordt.The object of the invention is to provide a method which, with mechanical and 8501105 3 chemically stable ion exchangers, makes it possible to provide a simple and efficient purification possibility for insulin at high yields with a high loading capacity. In addition, the solution according to the invention must enable direct crystallization from the insulin solutions obtained during purification. Although the raw materials used are cheap, it is possible to recover them at low cost. According to the invention, this object is achieved in that the insulin and its impurities are fractionated on a weak acidic ion exchanger with hydrophobic matrix in the acidic pH range at different concentrations of solvents, optionally with the addition of aromatics, as well as salts.
Verrassend is daarbij, dat naast een fractionering volgens de lading ook een fractionering volgens de molecuulgrootte bereikt wordt.It is surprising that in addition to fractionation according to the charge, fractionation according to the molecular size is also achieved.
15 Geschikte ionenuitwisselaars zijn macroporeuze copolymeren, die uit acrylzuurderivaten met divinylbenzeen en functionalisering verkregen worden (bijvoorbeeld Wofatite ^ van CKB uit de handel).Suitable ion exchangers are macroporous copolymers obtained from acrylic acid derivatives with divinylbenzene and functionalization (for example, Wofat® from commercial CKB).
Geschikte organische oplosmiddelen zijn vloeibare, alifatische alcoholen zoals bijvoorbeeld methanol, ethanol, tt-propanol, isopropanol, 20 vloeibare, laagkokende alifatische ketonen zoals bijvoorbeeld aceton, halfacetalen zoals bijvoorbeeld methylal en ten minste ten dele met water mengbare esters, zoals bijvoorbeeld ethylacetaat, alsmede mengsels daarvan.Suitable organic solvents are liquid, aliphatic alcohols such as, for example, methanol, ethanol, t-propanol, isopropanol, liquid, low-boiling aliphatic ketones such as, for example, acetone, semi-acetals such as, for example, methylal and at least partly water-miscible esters, such as, for example, ethyl acetate, and mixtures thereof.
Geschikte zuren voor de instelling van de pH-waarden zijn organi-25 sche zuren zoals bijvoorbeeld mierezuur, azijnzuur, propionzuur, wijnsteenzuur, citroenzuur, anorganische zuren zoals bijvoorbeeld zoutzuur, zwavelzuur, fosforzuur alsmede zuurzouten van deze zuren.Suitable acids for adjusting the pH values are organic acids such as, for example, formic acid, acetic acid, propionic acid, tartaric acid, citric acid, inorganic acids such as, for example, hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid and acid salts of these acids.
Geschikte zouten zijn alkalimetaal- en ammoniumzouten van de hiervoor genoemde aangegeven zuren, zoals bijvoorbeeld natriumacetaat, am-30 moniumfosfaat voor de instelling van de pH.Suitable salts are alkali metal and ammonium salts of the aforementioned indicated acids, such as, for example, sodium acetate, ammonium phosphate for adjusting the pH.
Geschikte aromatische stoffen zijn benzeen en derivaten daarvan.Suitable aromatics are benzene and its derivatives.
De afscheiding van de verontreinigingen van het insuline kan zowel volgens een discontinue werkwijze, alsook in een kolomwerkwijze plaats hebben. Daarbij vindt de discontinue werkwijze doelmatig toepassing ter 35 zuivering vooraf, kolomwerkwijzen voor een nauwkeurige zuivering toepassing. Terwijl bekende werkwijzen voor de zuivering van insuline op een verandering van de ionensterkte en/of de pH-waarde berusten, worden bij de voorgestelde oplossing de aan deze methoden klevende nadelen, zoals bijvoorbeeld een verontreiniging van de eluaten met zouten en een 40 omlading van de ionenuitwisselaar vermeden, doordat de fractionering B50 110 5 4The impurities from the insulin can be separated off by either a discontinuous method or a column method. In addition, the discontinuous method finds effective use for pre-purification, column methods for precise purification use. While known methods of purification of insulin rely on a change in ionic strength and / or pH value, the proposed solution addresses the drawbacks associated with these methods, such as, for example, contamination of the eluates with salts and a recharge of the ion exchanger, because the fractionation B50 110 5 4
9 K9 K
door trapsgewijze of continue verandering van de oplosmiddelconcentra-tie bij de elutie bereikt wordt.is achieved by stepwise or continuous change of the solvent concentration at the elution.
De werkwijze wordt in het algemeen zodanig uitgevoerd, dat uit geschikte oplossingen insuline met voldoende zuiverheid, zoals bijvoor-5 beeld verontreinigd kristalinsuline met de structuur van het menselijk of dierlijk insuline of technologische voortrappen, zoals uitzoutings-neerslagen of isoëlektrische precipitaties, aan de ionenuitwisselaar in een doorstroomreactor gebonden worden. Vervolgens heeft als eigenlijke zuiveringstrap de elutie plaats met zure water-oplosmiddelmengsels met 10 pH-waarden van 1,3-5,0 bij temperaturen van 0,27-032 KK bij toenemende oplosmiddelconcentratie. Daarbij kan insuline vrij van grootmoleculige verontreinigingen ge'élueerd worden. Door variatie van de belading van de uitwisselaar en de doorstroomsnelheid kan voorts een fractionering van het insuline in een bij de schijf-elektroforese nagenoeg homogene 15 insulinecomponent, alsmede in fracties, die aan zure insulinebestandde-len, zoals de gedesamideerde vormen en fracties, die aan basische insu-linebestanddelen, zoals de argininederivaten of insuline-esters verrijkt zijn, bereikt worden.The process is generally carried out such that from suitable solutions insulin of sufficient purity, such as, for example, contaminated crystal insulin with the structure of human or animal insulin or technological precursors, such as salt deposits or isoelectric precipitations, is fed to the ion exchanger in a flow-through reactor. Subsequently, as the actual purification step, the elution takes place with acidic water-solvent mixtures with 10 pH values of 1.3-5.0 at temperatures of 0.27-032 KK with increasing solvent concentration. Insulin can be eluted free of large molecular impurities. Furthermore, by varying the loading of the exchanger and the flow rate, a fractionation of the insulin in an insulin component which is substantially homogeneous in the disk electrophoresis, as well as in fractions containing acidic insulin components, such as the desamidated forms and fractions, which basic insulin components, such as the arginine derivatives or insulin esters are enriched.
Volgens deze vorm van de fractionering door een desorptieproces 20 leidt ook de analoge vorm van de adsorptie van verontreinigingen aan de uitwisselaar "discontinu" bij zodanige oplosmiddelconcentraties, die juist voor de verhindering van de insulineadsorptie voldoende zijn, tot een zuiveringseffect.According to this form of fractionation by a desorption process, the analogous form of adsorption of impurities to the exchanger "discontinuously" at solvent concentrations sufficient to prevent insulin adsorption also leads to a purification effect.
Voorbeeld IExample I
25 Op een kolom met een hoogte van 300 mm en een wijdte van 80 mm met een volume van 1,5 liter, waarin zich 900 ml Wofatit bevinden, worden 9 g varkensinsuline, opgelost in 1800 ml IN azijnzuur, met een snelheid van 600 ml/h gebracht. Vervolgens wordt de kolom met een oplosmiddel-gradiënt van 0-60% isopropanol, IN azijnzuur geëlueerd. Het geëlueerde 30 insuline is vrij van proïnsuline (PAAGE, pH 8,4; Coomassie-blauw).25 On a column with a height of 300 mm and a width of 80 mm with a volume of 1.5 liters, containing 900 ml of Wofatit, 9 g of pig insulin are dissolved in 1800 ml of IN acetic acid, at a rate of 600 ml / h brought. The column is then eluted with a solvent gradient of 0-60% isopropanol, 1N acetic acid. The eluted insulin is free from proinsulin (PAAGE, pH 8.4; Coomassie blue).
De opbrengst bedraagt 72 g.The yield is 72 g.
Voorbeeld IIExample II
Op een kolom met een hoogte van 300 mm en een wijdte van 80 mm worden op 900 ml Wofatit CA 20, 90 g insuline, in 1800 ml 0,02 N zout-35 zuur opgelost, met een snelheid van 600 ml/h gebracht. Insuline wordt met 9 liter 0,02 N zoutzuur verzadigd met methylacetaat/benzeen ge-elueerd.90 g of insulin, dissolved in 1800 ml of 0.02 N salt-35 acid, at a rate of 600 ml / h are placed on a column with a height of 300 mm and a width of 80 mm on 900 ml of Wofatit CA 20. Insulin is eluted with 9 liters of 0.02 N hydrochloric acid saturated with methyl acetate / benzene.
Voorbeeld IIIExample III
Op een kolom met een lengte van 150 mm en een wijdte van 9 mm (vo-40 lume 9,5 ml) worden 500 mg insuline, opgelost in 10 ml azijnzuur, met 8 5 0 1'! ΰ c 5 t · * * ♦ een snelheid van 10 ml/h gebracht en met een keukenzoutgradi'ént van 0-0,2 N natriumchloride; 25% methylal, IN azijnzuur ge'élueerd. De elu-tie werd in fracties opgevangen, de extinctie werd gemeten en de afzonderlijke bestanddelen werden verder verwerkt.500 mg of insulin, dissolved in 10 ml of acetic acid, with 8 5 0 1! On a 150 mm long and 9 mm wide column (volume 40 ml 9.5 ml). 5 c 5 t * * ♦ brought to a rate of 10 ml / h and with a table salt gradient of 0-0.2 N sodium chloride; 25% methylal, 1N acetic acid eluted. The elution was collected in fractions, the absorbance was measured and the individual components were further processed.
5 Voorbeeld IVExample IV
Op een kolom met een lengte van 150 mm en een wijdte van 9 mm (voltime * 9,5 ml) worden 500 mg insuline, opgelost in 10 ml IN zoutzuur, met een snelheid van 10 ml/h gebracht en met 250 ml IN azijnzuur, 25% ethanol, 0,05 N natriumchloride, ge’élueerd. Na kristallisatie werden 10 400 mg gezuiverd insuline verkregen.500 mg of insulin dissolved in 10 ml IN hydrochloric acid at a rate of 10 ml / h and with 250 ml IN acetic acid are placed on a column 150 mm long and 9 mm wide (voltime * 9.5 ml). , 25% ethanol, 0.05 N sodium chloride, eluted. After crystallization, 400 mg of purified insulin were obtained.
Voorbeeld VExample V
Op een kolom een hoogte van 300 mm en een wijdte van 80 mm (voltime * 1.5 liter) worden 90 g insuline, opgelost in 1800 ml 0,03 N fosfor-zuur, gebracht en met een gradiënt van 0,03 N fosforzuur, 40% aceton 15 van elk 12 liter geelueerd. Het insuline bevattende eluaat wordt met citroenzuur op een concentratie van 0,5 ingesteld en bij aanwezigheid van zinkzout direkt gekristalliseerd.90 g of insulin, dissolved in 1800 ml of 0.03 N phosphoric acid, are applied to a column with a height of 300 mm and a width of 80 mm (voltime * 1.5 liters) and with a gradient of 0.03 N phosphoric acid, 40 % acetone 15 of 12 liters each eluted. The insulin-containing eluate is adjusted to 0.5 with citric acid and crystallized immediately in the presence of zinc salt.
De opbrengst bedraagt 85%.The yield is 85%.
Voorbeeld VIExample VI
20 Op een kolom met een lengte van 150 ml en een wijdte van 9 mm (vo- ltme 9,5 ml. Wofatit CP) worden 500 mg menselijk insuline, opgelost in 10 ml IN azijnzuur, gebracht. Na wassen van de kolom wordt het insuline met 60% ethanol, IN azijnzuur en 0,1N natriumchloride met een snelheid van 5 ml/h geelueerd.500 mg of human insulin, dissolved in 10 ml of IN acetic acid, are applied to a column of 150 ml length and 9 mm width (9.5 ml volume. Wofatit CP). After washing the column, the insulin is eluted with 60% ethanol, 1N acetic acid and 0.1N sodium chloride at a rate of 5 ml / h.
25 Voorbeeld VIIExample VII
1 g Varkensinsuline worden in 100 ml 45-procents ethanol, IN azijnzuur, opgelost en aan 10 ml in 45-procents ethanol, IN azijnzuur, in evenwicht gebracht Amberlite IRC-50 geadsorbeerd. Na 3 uren roeren bij 40°C is de evenwichtstoestand bereikt.1 g Pig insulin is dissolved in 100 ml of 45% ethanol, 1N acetic acid and adsorbed on 10 ml of 45% ethanol, 1N acetic acid, balanced Amberlite IRC-50. The equilibrium state is reached after stirring for 3 hours at 40 ° C.
30 De ionenuitwisselaar wordt afgefiltreerd en gewassen. Het filtraat bevat de van grootmoleculige bestanddelen vrije C-component van het insuline. De verdere verwerking van insuline heeft via destillatie en daaropvolgende kristallisatie plaats.The ion exchanger is filtered and washed. The filtrate contains the high-molecular-weight C-component of the insulin. The further processing of insulin takes place via distillation and subsequent crystallization.
85 0 1 1 ö 585 0 1 1 ö 5
Claims (24)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8509442 | 1985-04-12 | ||
| GB08509442A GB2173503A (en) | 1985-04-12 | 1985-04-12 | Purification of insulin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8501105A true NL8501105A (en) | 1986-11-03 |
Family
ID=10577556
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8501105A NL8501105A (en) | 1985-04-12 | 1985-04-15 | PROCESS FOR THE PURIFICATION OF INSULIN. |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE3511269A1 (en) |
| FR (1) | FR2581647A1 (en) |
| GB (1) | GB2173503A (en) |
| NL (1) | NL8501105A (en) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3726655A1 (en) * | 1987-08-11 | 1989-02-23 | Hoechst Ag | METHOD FOR ISOLATING BASIC PROTEINS FROM PROTEIN MIXTURES CONTAINING SUCH BASIC PROTEINS |
| BR8803345A (en) * | 1988-06-30 | 1990-02-13 | Biobras Bioquimica Do Brasil S | PERFECT PROCESS FOR WIDE-SCALE PRODUCTION OF PURIFIED HUMAN INSULIN CRYSTALS |
| BR8803346A (en) * | 1988-06-30 | 1990-02-13 | Biobras Bioquimica Do Brasil S | PERFECT PROCESS FOR WIDE SCALE PRODUCTION OF PURIFIED INSULIN CRYSTALS |
| RU2251426C1 (en) * | 2003-09-18 | 2005-05-10 | Цыганков Владимир Владимирович | Method for obtaining insulin out of natural source and insulin |
| KR20140007377A (en) | 2011-02-01 | 2014-01-17 | 노보 노르디스크 에이/에스 | Purification of insulin |
| PL2748181T3 (en) | 2011-09-30 | 2016-08-31 | Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab | Method for purification of cleaved pro-insulin |
| CN103709244B (en) * | 2012-09-29 | 2015-10-14 | 宜昌东阳光长江药业股份有限公司 | The purification process of a kind of insulin crystals or insulin analog crystals |
| EP2931301B2 (en) | 2012-12-17 | 2021-09-15 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Process for purifying insulin and analogues thereof |
| EP3442998A4 (en) * | 2016-04-12 | 2020-04-01 | Cell And Molecular Tissue Engineering, LLC | Systems, methods and products for minimizing tissue reactions and tissue injury at an infusion site |
| CN112359901A (en) * | 2020-11-04 | 2021-02-12 | 刘龙龙 | Conveniently carry out building construction that collects with earthwork and use building site device of filling out soil |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2878159A (en) * | 1955-02-10 | 1959-03-17 | Vitrum Apoteksvar | Alginic acid purification of insulin |
| BE567852A (en) * | 1957-05-21 | |||
| GB1054523A (en) * | 1965-11-17 | 1900-01-01 | ||
| GB1285024A (en) * | 1968-08-09 | 1972-08-09 | Novo Terapeutisk Labor As | Process of purifying insulin |
| DE2212695A1 (en) * | 1972-03-16 | 1973-09-20 | Hoechst Ag | Insulin purifcn - by partition chromatography on crosslinked dextran gel |
| DE2629568C3 (en) * | 1976-07-01 | 1981-09-10 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Process for the purification of insulin, its analogs and derivatives |
| AU5397579A (en) * | 1978-12-26 | 1980-07-03 | Eli Lilly And Company | Purifying insulin |
| DE3147842A1 (en) * | 1981-12-03 | 1983-06-23 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | "METHOD FOR SEPARATING MIXTURES FROM INSULIN, INSULINE DERIVATIVES AND, IF NECESSARY, IMPURITIES" |
-
1985
- 1985-03-28 DE DE19853511269 patent/DE3511269A1/en not_active Withdrawn
- 1985-04-12 GB GB08509442A patent/GB2173503A/en not_active Withdrawn
- 1985-04-15 NL NL8501105A patent/NL8501105A/en not_active Application Discontinuation
- 1985-04-17 FR FR8505805A patent/FR2581647A1/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB2173503A (en) | 1986-10-15 |
| FR2581647A1 (en) | 1986-11-14 |
| DE3511269A1 (en) | 1986-10-09 |
| GB8509442D0 (en) | 1985-05-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3262128B2 (en) | Protein purification method | |
| US3715345A (en) | Glucagon separation process | |
| US3719655A (en) | Process for the crystallization of the ammonium and alkali metal salts in insulin | |
| NL8501105A (en) | PROCESS FOR THE PURIFICATION OF INSULIN. | |
| CA1234047A (en) | Process for preparing the principal proteins of haemolyzed blood in the non-denatured form | |
| JP2002511484A (en) | Novel protein separation method using eluent containing Ca ++ | |
| KR890001010B1 (en) | Process for the recovery and purification of ceftazidine | |
| Green | [73] Purification of avidin | |
| US4584399A (en) | Purification of L-phenylalanine | |
| EP0013826A1 (en) | Process for purifying insulin and insulin so prepared | |
| JPH0261935B2 (en) | ||
| CA2133644C (en) | Process for making vancomycin | |
| US4384136A (en) | Process for recovering amino acids from protein hydrolysates | |
| KR900006229B1 (en) | Furifying method for lactulose | |
| US6080844A (en) | Process for the recovery and purification of a recombinant protein from a cell | |
| US3959249A (en) | Method for isolating transferrines from biological materials | |
| Sheehan et al. | A new isolation of hydroxylysine | |
| JP3315158B2 (en) | Glutathione purification method | |
| US3875138A (en) | Process for recovering glucagon | |
| US3994782A (en) | Methods for extracting and purifying kallidinogenase | |
| Dimitrov et al. | Fractionation of some bee venom components on a new type of modified cellulose | |
| EP0207727A2 (en) | A process for recovering glucagon from pancreas glands | |
| HU213477B (en) | Process for preparing framycetin sulphate | |
| JPS6127999A (en) | Method for purifying glutathione | |
| RU2334511C1 (en) | Method of coproporphyrin iii extraction and purification |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BV | The patent application has lapsed |