NL8104304A - AGENT FOR ELIMINATING ANTURITY IN AN ORGANIC SAMPLE. - Google Patents
AGENT FOR ELIMINATING ANTURITY IN AN ORGANIC SAMPLE. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8104304A NL8104304A NL8104304A NL8104304A NL8104304A NL 8104304 A NL8104304 A NL 8104304A NL 8104304 A NL8104304 A NL 8104304A NL 8104304 A NL8104304 A NL 8104304A NL 8104304 A NL8104304 A NL 8104304A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- agent according
- surfactant
- agent
- amount
- enzyme
- Prior art date
Links
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 47
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 43
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 41
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 30
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 30
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 23
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 20
- 108010055297 Sterol Esterase Proteins 0.000 claims description 19
- 102000000019 Sterol Esterase Human genes 0.000 claims description 19
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 16
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 14
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 14
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 12
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000008030 elimination Effects 0.000 claims description 8
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 claims description 8
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical group OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 claims description 8
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- ZZNDQCACFUJAKJ-UHFFFAOYSA-N 1-phenyltridecan-1-one Chemical compound CCCCCCCCCCCCC(=O)C1=CC=CC=C1 ZZNDQCACFUJAKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 6
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- AOMUHOFOVNGZAN-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)dodecanamide Chemical group CCCCCCCCCCCC(=O)N(CCO)CCO AOMUHOFOVNGZAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 5
- 229940031957 lauric acid diethanolamide Drugs 0.000 claims description 5
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 4
- LPMBTLLQQJBUOO-KTKRTIGZSA-N (z)-n,n-bis(2-hydroxyethyl)octadec-9-enamide Chemical group CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)N(CCO)CCO LPMBTLLQQJBUOO-KTKRTIGZSA-N 0.000 claims description 3
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 claims description 3
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 claims description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 claims description 3
- 210000004923 pancreatic tissue Anatomy 0.000 claims description 3
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 2
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 claims description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical group CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 claims 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 claims 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 45
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 17
- 230000001000 lipidemic effect Effects 0.000 description 7
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DRBBFCLWYRJSJZ-UHFFFAOYSA-N N-phosphocreatine Chemical compound OC(=O)CN(C)C(=N)NP(O)(O)=O DRBBFCLWYRJSJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 150000001840 cholesterol esters Chemical class 0.000 description 5
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 5
- 108010089254 Cholesterol oxidase Proteins 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 4
- OFGDSGVGRWPQJQ-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazol-1-ium;acetate Chemical compound CC(O)=O.C1=CNC=N1 OFGDSGVGRWPQJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- SHPKCSFVQGSAJU-UAIGNFCESA-L dipotassium;(z)-but-2-enedioate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C(=O)\C=C/C([O-])=O SHPKCSFVQGSAJU-UAIGNFCESA-L 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 2
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 2
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 208000020346 hyperlipoproteinemia Diseases 0.000 description 2
- BPXGKRUSMCVZAF-UHFFFAOYSA-N n,n-bis(2-hydroxyethyl)decanamide Chemical compound CCCCCCCCCC(=O)N(CCO)CCO BPXGKRUSMCVZAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SKDZEPBJPGSFHS-UHFFFAOYSA-N n,n-bis(2-hydroxyethyl)tetradecanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)N(CCO)CCO SKDZEPBJPGSFHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ORLFVWPPBMVPNZ-UHFFFAOYSA-N 1-(6-methylheptyl)-4-[4-(6-methylheptyl)phenoxy]benzene Chemical compound C1=CC(CCCCCC(C)C)=CC=C1OC1=CC=C(CCCCCC(C)C)C=C1 ORLFVWPPBMVPNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 1
- 238000008620 Cholesterol Assay Methods 0.000 description 1
- 206010014486 Elevated triglycerides Diseases 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- ABBQHOQBGMUPJH-UHFFFAOYSA-M Sodium salicylate Chemical compound [Na+].OC1=CC=CC=C1C([O-])=O ABBQHOQBGMUPJH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000179532 [Candida] cylindracea Species 0.000 description 1
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 108010087173 bile salt-stimulated lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 description 1
- GGCLNOIGPMGLDB-GYKMGIIDSA-N cholest-5-en-3-one Chemical compound C1C=C2CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 GGCLNOIGPMGLDB-GYKMGIIDSA-N 0.000 description 1
- NYOXRYYXRWJDKP-UHFFFAOYSA-N cholestenone Natural products C1CC2=CC(=O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 NYOXRYYXRWJDKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 cholesterol ester ester Chemical class 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 201000005577 familial hyperlipidemia Diseases 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000010705 glucose-6-phosphate dehydrogenase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040005050 glucose-6-phosphate dehydrogenase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid group Chemical group C(CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)(=O)O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical class [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000003385 sodium Chemical class 0.000 description 1
- ZLVSYODPTJZFMK-UHFFFAOYSA-M sodium 4-hydroxybenzoate Chemical compound [Na+].OC1=CC=C(C([O-])=O)C=C1 ZLVSYODPTJZFMK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000008137 solubility enhancer Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940035024 thioglycerol Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
Description
• f · ·* * -1- 21997/Vk/ts• f · * * -1- 21997 / Vk / ts
Korte aanduiding: Middel voor het opheffen van een troebelheid in een biologisch monster.Short designation: Means for removing turbidity in a biological sample.
De uitvinding heeft betrekking op een middel voor het opheffen van 5 de troebelheid in een biologisch monster en op een werkwijze waarin een dergelijk middel wordt toegepast. Met name heeft de uitvinding betrekking op het effectief opheffen van een troebeling in een biologisch monster, zoals een menselijk serum, meer in het bijzonder op een reagens, dat een oppervlakte, actief middel bevat en een enzym en op de toepassing van een der-10 gelijk middel om de troebelheid te verwijderen.The invention relates to an agent for removing the turbidity in a biological sample and to a method in which such an agent is used. In particular, the invention relates to the effective elimination of cloudiness in a biological sample, such as a human serum, more particularly to a reagent containing a surface active agent and an enzyme, and to the use of any one of equal means to remove the turbidity.
De troebelheid in een biologisch monster kan diverse problemen veroorzaken. De troebelheid kan resulteren in een slechte of onnauwkeurige aflezing en zodoende tot bepalingen die niet goed reproduceerbaar zijn. De troebelheid in een monster van een serum en plasma veroorzaakt gewoonlijk 15 een ernstig probleem bij de klinische fotometrische analyse. Hierdoor worden foutieve gegevens verkregen en vaak een misleidende fotometrische bepaling van serumbestanddelen. Er wordt aangenomen, dat de troebelheid vooral wordt veroorzaakt door het verhogen van het gehalte aan tri-glyceriden in het serum van patiënten met hyperlipoproteinemia al of niet met een verhoogd 20 totaal cholesterolgehalte. Een abnormale verhoging van het cholesterolgehalte in een serum blijkt samen te hangen met een hoog risiko aan arthero-sclerosis. De bepaling van cholesterol en triglyceriden is belangrijk omdat nauwkeurige gegevens een ondersteuning zijn voor de geneesheer om de diagnose te stellen voor patiënten met hyperlipoproteinemia en om bepaalde 25 hartafwijkingen te voorspellen. Andere bepalingen zoals van aspartate aminotransferase (GOT), alanine aminotransferase (GPT) en lactaat dehydrogenase (LDH) en dergelijke worden ook nadelig beinvloed door dezelfde problemen als bij de cholesterol- of triglyceridebepaling zoals boven vermeld, wanneer troebele monsters worden onderzocht.The turbidity in a biological sample can cause various problems. Turbidity can result in poor or inaccurate readings and therefore in readings that are not reproducible. The turbidity in a sample of a serum and plasma usually causes a serious problem in the clinical photometric analysis. This provides incorrect data and often misleading photometric determination of serum ingredients. Turbidity is believed to be caused primarily by increasing the serum tri-glycerides content of patients with hyperlipoproteinemia with or without elevated total cholesterol. An abnormal increase in serum cholesterol levels appears to be associated with a high risk of arthero sclerosis. The determination of cholesterol and triglycerides is important because accurate data support the physician in making the diagnosis for patients with hyperlipoproteinemia and predicting certain cardiac abnormalities. Other assays such as aspartate aminotransferase (GOT), alanine aminotransferase (GPT), and lactate dehydrogenase (LDH) and the like are also adversely affected by the same problems as in the cholesterol or triglyceride assay as noted above when turbid samples are examined.
30 Klinische bepalingen van troebele monsters worden verwerkt door de monsters met een hoge concentratie aan oppervlakte actief middel zoals polyoxy-geëthyleerd laurinezuur te verwerken, zoals beschreven in de Amerikaanse octrooischriften 3.853.465 en 4.184.848. Omdat alleen oppervlakte actieve middelen worden gebruikt is een tamelijk hoge concentratie aan 35 oppervlakte actief middel nodig voor een effectieve zuivering. Een hoge concentratie aan oppervlakte actieve middelen is vaak de oorzaak van andere chemische of enzymatische reacties en veroorzaakt problemen bij de analyse.Clinical determinations of cloudy samples are processed by processing the samples with a high surfactant concentration such as polyoxyethylated lauric acid, as described in U.S. Pat. Nos. 3,853,465 and 4,184,848. Since only surfactants are used, a fairly high concentration of surfactant is required for effective purification. A high concentration of surfactants often causes other chemical or enzymatic reactions and causes analysis problems.
Bij het middel volgens de uitvinding wordt een relatief lage con- 8104304 __ 1 .With the agent according to the invention a relatively low concentration of 8104304 __ 1.
-2- 21997/Vk/ts * centratie aan oppervlakte; actief middel toegepast. Dit wordt bewerkstelligd door een middel volgens de uitvinding voor het opheffen van de troebelheid in een biologisch monster en dit wordt hierdoor gekenmerkt, dat dit ten minste één oppervlakte actief middel omvat met formule 5 | ^^^cn2cn2o) ^-2- 21997 / Vk / ts * surface concentration; active agent applied. This is accomplished by an inventive means for eliminating turbidity in a biological sample and is characterized in that it comprises at least one surfactant of formula 5 | ^^^ cn2cn2o) ^
^ ^ ‘(CH2CH20)yH^ ^ "(CH2CH2O) yH
waarbij R een alk(en)yl groep is met 5-17 koolstofatomen, x en y zijn gehele 10 getallen, waarvan de som niet groter is dan 11 en een enzym gekozen uit cholesterolesterase of lipase of mengsels daarvan.where R is an alk (en) yl group of 5-17 carbon atoms, x and y are integers 10, the sum of which does not exceed 11 and an enzyme selected from cholesterol esterase or lipase or mixtures thereof.
Het exacte mechanisme voor het opheffen van de troebelheid met het middel volgens de uitvinding is niet bekend. Het is mogelijk om aan te nemen, dat wanneer patiënten met hyperlipemia worden onderzocht, de monsters van 1 5 deze patiënten een troebelheid bevatten in de serummonsters, welke troebelheid in eerste instantie wordt veroorzaakt door een verhoogd triglyceride-gehalte.The exact mechanism for eliminating turbidity with the agent of the invention is not known. It is possible to assume that when patients with hyperlipemia are examined, the samples from these patients contain turbidity in the serum samples, which turbidity is primarily caused by an elevated triglyceride content.
Triglyceriden zijn in water onoplosbaar en gewoonlijk aanwezig in het binnenste van een vethoudende kern met cholesterolesters in een lipo-20 proteïneoomplex. Het heldermaken van een lipemisch monster moet worden bewerkstelligd door·de verbreking van lipoproteïne door een oppervlakte actief middel zoals laurinezuurdiethanolamide (DEA), gevolgd door hydrolyse van triglyceriden door de enzym-base. Het oppervlakte actief middel zal het doen oplossen van de vetzuren, die hierin woeden vrijgemaakt,ondersteunen.Triglycerides are water-insoluble and usually present in the interior of a fat-containing core with cholesterol esters in a lipo-20 protein complex. Clarification of a lipemic sample is to be accomplished by the lipoprotein disruption by a surfactant such as lauric diethanolamide (DEA), followed by hydrolysis of triglycerides by the enzyme base. The surfactant will support the dissolution of the fatty acids released herein.
25 Zonder enzym zal geen opheffing van de troebelheid plaatsvinden.No turbidity will be eliminated without enzyme.
Een van de doelstellingen volgens de uitvinding is het verkrijgen van een middel dat een effectieve opheffing van de troebelheid bewerkstelligt in biologische monsters en het verkrijgen van een werkwijze om dit te bewerkstelligen, met name bij monsters die moeten worden onderworpen aan een foto-30 metrische analyse of bepaling met name voor het bepalen van bijvoorbeeld cholesterol.One of the objects of the invention is to obtain an agent that effects effective turbidity elimination in biological samples and to obtain a method of accomplishing this, especially in samples to be subjected to photo-metric analysis or determination in particular for determining, for example, cholesterol.
Hiertoe wordt een middel toegepast, welk een oppervlakte actief middel bevat met de bovenvermelde formule die ook kan worden weergegeven door R-C(=0)-N ^(ΌΗ20Η20)χΗ j ^(CH2CH20)yH ], 35 waarbij R een alkyl of alkenylgroep is met 5-17 koolstofatomen, x en y beide gelijk zijn aan 1, en een enzym gekozen uit cholesterolesterase of lipase of mengsels hiervan.To this end, an agent is used which contains a surfactant of the above formula which may also be represented by RC (= 0) -N ^ (ΌΗ20Η20) χΗj ^ (CH2CH20) yH], where R is an alkyl or alkenyl group having 5-17 carbon atoms, x and y are both equal to 1, and an enzyme selected from cholesterol esterase or lipase or mixtures thereof.
Bij voorkeur bevat het bovenvermelde middel in waterige, gebufferde 8104304 ~ -i -3- 21997/Vk/ts £ vorm ongeveer 0,05 g/dl tot 2,5 g/dl oppervlakte actief middel met name 0,1 g/dl tot 0,5 g/dl en ten minste ongeveer 0,025 eenheden/ml enzym (cholesterolesterase) gebaseerd op de totale samenstelling. De verkregen samenstelling zal zodoende een pH-waarde hebben tussen ongeveer 5,5 en on-\ 5 geveer 7,0.Preferably, the above-mentioned agent in aqueous buffered 8104304 -i -3- 21997 / Vk / ts form contains about 0.05 g / dl to 2.5 g / dl surfactant, especially 0.1 g / dl to 0.5 g / dl and at least about 0.025 units / ml enzyme (cholesterol esterase) based on the total composition. The resulting composition will thus have a pH value between about 5.5 and about 7.0.
Wanneer de samenstelling een lipase-enzym bevat, wordt het oppervlakte actief middel gebruikt in een hoeveelheid van 0,05 g/dl tot ongeveer 2,5 g/dl en bij voorkeur in een hoeveelheid tussen 0,1 g/dl tot 0,5 g/dl en is het enzym aanwezig in een hoeveelheid van ten minste 1,0 eenheden/ml 10 berekend op de verkregen samenstelling, die dan een pH-waarde heeft tussen ongeveer 5,5 en 8,0.When the composition contains a lipase enzyme, the surfactant is used in an amount from 0.05 g / dl to about 2.5 g / dl and preferably in an amount between 0.1 g / dl to 0.5 g / dl and the enzyme is present in an amount of at least 1.0 units / ml based on the obtained composition, which then has a pH value between about 5.5 and 8.0.
Bij beide enzymsamenstellingen kan een buffer worden toegepast zoals een maleaat in de vorm van een natrium- of kaliumzout, een fosfaat, boraat, citraat, succinaat, imidazool-acetaatbuffer, Tris en dergelijk.Both enzyme compositions may use a buffer such as a maleate in the form of a sodium or potassium salt, a phosphate, borate, citrate, succinate, imidazole acetate buffer, Tris and the like.
15 Elke geschikte buffer kan echter worden toegepast. Dergelijke buffers zullen de pH constant houden in het aangegeven gewenste gebied, zonder in reactie te treden met één van de aanwezige componenten.However, any suitable buffer can be used. Such buffers will keep the pH constant in the indicated desired range, without reacting with any of the components present.
Wanneer een maleaat-buffer wordt toegepast, zoals het kalium- of natriumzout, wordt dit toegevoegd in een hoeveelheid tussen 0,05 M tot 20 ongeveer 0,5 M en de pH van de verkregen samenstelling ligt dan tussen ongeveer 5,0 en 7,0.When a maleate buffer is used, such as the potassium or sodium salt, it is added in an amount between 0.05 M to about 0.5 M and the pH of the obtained composition is then between about 5.0 and 7, 0.
Vergelijkbare concentraties worden toegepast voor andere buffers. Naast de bovenvermelde verbindingen, zal een middel worden toegevoegd dat de oplosbaarheid verbetert van de bovenvermelde enzymsamenstellingen. Der-25 gelijke middelen om de oplosbaarheid te verbeteren, omvatten stoffen, die de oplosbaarheid van het oppervlakte actieve middel zullen ondérsteunen. Hiertoe kunnen zouten worden toegepast zoals natriumcholaat, natriumdeoxy-cholaat en dergelijke.Similar concentrations are used for other buffers. In addition to the above-mentioned compounds, an agent will be added that improves the solubility of the above-mentioned enzyme compositions. Such solubility enhancers include those which will support the solubility of the surfactant. For this purpose, salts such as sodium cholate, sodium deoxycholate and the like can be used.
Volgens een andere bij voorkeur toe te passen uitvoeringsvorm, 30 heeft het oppervlakte actieve middel„de bovenvermelde formule, waarbij R een alkylgroep is zoals laurinezuunjiethanolamide of oliezuurdiethanol-amide.In another preferred embodiment, the surfactant has the above-mentioned formula, wherein R is an alkyl group such as lauric zujiethanolamide or oleic diethanol amide.
Het enzym kan worden verkregen uit dieren, zoals dierlijk pancrea-tisch weefsel of uit een microbiële bron. Biologische monsters, die hiermee 35 kunnen worden behandeld omvatten menselijk serum of plasma. Het reagens dat boven is vermeld zal wanneer het wordt gecombineerd met een biologisch monster op effectieve wijze de troebelheid opheffen. Het reagens wordt gewoonlijk toegepast in een waterige gebufferde vorm.The enzyme can be obtained from animals, such as animal pancreatic tissue or from a microbial source. Biological samples that can be treated with this include human serum or plasma. The reagent mentioned above will effectively remove turbidity when combined with a biological sample. The reagent is usually used in an aqueous buffered form.
81043048104304
*= V* = V
-4- 21997/Vk/ts-4- 21997 / Vk / ts
Bij een fotometrische analyse of bepaling, wordt een middel volgens de uitvinding toegepast om de troebelheid van het biologische monster op te heffen, waarbij ten minste een oppervlakte actief middel wordt toegepast met de · bovenvermelde formule, waarbij R een alkyl of alkenylgroep is met 5 5-17 koolstofatomen, de som van x en y niet hoger is dan 11 en waarbij een enzym wordt toegevoegd gekozen uit cholesterolesterase of lipase of mengsels hiervan. Een bij voorkeur toegepast middel bevat een oppervlakte actief middel met de bovenvermelde formule, waarbij R een alkylgroep is bij voorkeur lauryl en de som van x en y is 5 en als enzym wordt lipase toegepast.In a photometric analysis or determination, an agent of the invention is used to eliminate the turbidity of the biological sample, using at least one surfactant of the above formula, wherein R is an alkyl or alkenyl group having 5 -17 carbon atoms, the sum of x and y does not exceed 11 and adding an enzyme selected from cholesterol esterase or lipase or mixtures thereof. A preferred agent contains a surfactant of the above formula, wherein R is an alkyl group preferably lauryl and the sum of x and y is 5 and lipase is used as the enzyme.
10 Samenstellingen met dit reagens bevatten bij voorkeur polyethyleenglycol-p-isooctylfenylether of andere geschikte oppervlakte actieve middelen.Compositions with this reagent preferably contain polyethylene glycol p-isooctylphenyl ether or other suitable surfactants.
Een ander bij voorkeur toegepast reagens dat heldere monsters zal kunnen bewerkstelligen, met een pH van 2-10, bestaat uit een mengsel van twee oppervlakte actieve middelen namelijk laurinezuurdiethanolamide 15 (x=y=1) en geëpoxyleerd layrinezuur (x + y = 5). Enzymsamenstellingen zoals boven beschreven, worden bereid onder toepassing van dit oppervlakte actief middel.Another preferred reagent that will be able to produce clear samples, with a pH of 2-10, consists of a mixture of two surfactants namely lauric acid diethanolamide 15 (x = y = 1) and epoxylated layric acid (x + y = 5) . Enzyme compositions as described above are prepared using this surfactant.
Geschikte oppervlakte actieve middelen die vallen onder de bovenvermelde formule omvatten laurinezuurdiethanolamide, myristinezuurdiethanol-20 amide, caprinezuurdiethanolamide, oliezuurdiethanolsmide en cocoszuurdietha-nolamide.Suitable surfactants covered by the above formula include lauric diethanolamide, myristic diethanol amide, capric acid diethanol amide, oleic diethanol smid and coconut diethanolamide.
Dit reagens zal wanneer het wordt gecombineerd met een biologisch monster de helderheid van het monster bewerkstelligen en maakt een nauwkeurige fotometrische analyse of bepaling mogelijk. Op deze wijze kan een 25 monster fotometrisch worden geanalyseerd met betrekking tot het cholesterolgehalte.This reagent, when combined with a biological sample, will effect the clarity of the sample and allow an accurate photometric analysis or determination. In this manner, a sample can be analyzed photometrically with respect to the cholesterol level.
Zodoende wordt volgens de uitvinding een reagens en een werkwijze verkregen, die effectief zijn om de troebelheid op te heffen van een biologisch monster door het toepassen van een bepaald oppervlakte actief middel 30 en enzym. Hierbij wordt een oppervlakte actief middel toegepast met formule R-G(=0)-N ^ (CH2CH20)xH I ^(CH2CH20)yH | , waarbij R een alkyl of alkenylgroep is met 5-17 koolstofatomen, en waarbij x en y beide gelijk zijn aan 1. Bij voorkeur is er een alkylgroep overeenkomend met laurinezuurdiethanolamide. Het toegepaste enzym is cholesteresterase of lipase of een mengsel van beide 35 enzymen. De verkregen samenstelling is effectief gebleken voor het opheffen van troebelheid in een biologisch monster. Het is daarom zie er geschikt om een biologisch monster dat troebel is om te zetten in een helder monster.Thus, according to the invention, a reagent and method are obtained which are effective to remove the turbidity of a biological sample using a certain surfactant and enzyme. Here a surfactant is used with formula R-G (= 0) -N ^ (CH2CH20) xH I ^ (CH2CH20) yH | wherein R is an alkyl or alkenyl group of 5-17 carbon atoms, and x and y are both equal to 1. Preferably there is an alkyl group corresponding to lauric diethanolamide. The enzyme used is cholesteresterase or lipase or a mixture of both enzymes. The resulting composition has been shown to be effective in eliminating turbidity in a biological sample. It is therefore suitable to convert a biological sample that is turbid into a clear sample.
Het aldus behandelde monster kan colorimetrisch worden geanalyseerd 8104304 ft :# -5- 21997/Vk/ts met betrekking tot een bepaalde component, zolang als de teegepaste reagentia in het monster geen interactie aangaan met het oppervlakte actief middel en het enzym en omgekeerd. Een voorbeeld van een bepaling kan zijn het bepalen van cholesterol, triglyceriden en creatinefosfaatkinase.The sample thus treated can be analyzed colorimetrically 8104304 ft: # -5-21997 / Vk / ts with respect to a particular component, as long as the reagents used in the sample do not interact with the surfactant and the enzyme and vice versa. An example of an assay may be to determine cholesterol, triglycerides, and creatine phosphate kinase.
5 Het enzym kan worden verkregen uit een dierlijke bron zoals pancrea- tisch weefsel of uit een microbiële bron.The enzyme can be obtained from an animal source such as pancreatic tissue or from a microbial source.
Anderzijds wordt volgens de uitvinding een reagens en een werkwijze verkregen die effectief zijn bij het opheffen van troebelheid en met name geschikt zijn voor een fotometrische bepaling. Het reagens omvat ten minste 10 een oppervlakte actief middel met formule R-C(=0)-N ^CHgCHgO^H jjCCHgCHgOiyHj waarbij R alkyl -is of alkenyl met 5-17 koolstofatomen, x en y gehele getallen zijn waarvan de som niet hoger is dan 11 en verder· een enzym gekozen uit cholesterolesterase of lipase of mengsels hiervan.On the other hand, according to the invention there is obtained a reagent and a method which are effective in the removal of turbidity and which are particularly suitable for a photometric determination. The reagent comprises at least 10 a surfactant of formula RC (= 0) -N ^ CHgCHgO ^ HjjCCHgCHgOiHj where R is alkyl -is or alkenyl of 5-17 carbon atoms, x and y integers the sum of which does not exceed 11 and further · an enzyme selected from cholesterol esterase or lipase or mixtures thereof.
Bij voorkeur is de betekenis van R alkyl en zijn x en y beide gelijk 15 aan 1. Voorbeelden van deze oppervlakte actieve stoffen zijn laurinezuurdi-ethanolamide,myristinezuurdiethanolamide en caprinezuurdiethanolamide.Andere bij voorkeur toe te passen oppervlakte actieve middelen waarbij R is alkenyl en x en y zijn 1, zijn ollezuurdiethanolamide en cocoszuurdiethanolaraide. Volgens een andere bij voorkeur toegepaste uitvoeringsvorm is het oppervlakte 20 actieve middel zodanig dat R alkyl is en de som van x en y is 5.Preferably the meaning of R is alkyl and x and y are both equal to 1. Examples of these surfactants are lauric diethanolamide, myristic diethanolamide and capric acid diethanolamide. Other preferred surfactants where R is alkenyl and x and y are 1, are oleic diethanolamide and coconut diethanolaraide. In another preferred embodiment, the surfactant is such that R is alkyl and the sum of x and y is 5.
Wanneer de bovenvermelde middelen worden toegepast door het uitvoeren van bepalingen, wordt het middel gecombineerd in een waterige gebufferde vorm met een biologisch monster. Het troebele monster wordt helder gemaakt en kan dan worden geanalyseerd. Monsters die op effectieve wijze 25 kunnen worden helder gemaakt en dan worden geanalyseerd omvatten menselijk serum en plasma.When the above agents are used by making assays, the agent is combined in an aqueous buffered form with a biological sample. The cloudy sample is clarified and can then be analyzed. Samples that can be effectively clarified and then analyzed include human serum and plasma.
De werkwijze en het reagens volgens de uitvinding zijn nieuw met betrekking tot twee punten. Zij maken het mogelijk om componenten in een biologisch monster te bepalen in een heldere vrije toestand zonder dat 30 troebeling optreedt en bovendien.! door de interactie tussen het bepaalde oppervlakte actieve middel en het toegepaste enzym, waardoor het mogelijk wordt om kleinere hoeveelheden enzym toe te passen dan normaal toegepast zoals bij een cholesterolbepaling. Het gebruik van kleinere hoeveelheden hiervan zonder de reactiesnelheid te verlagen kan worden beschouwd als een belang-35 rijke verbetering bij enzymatische reacties.The method and reagent of the invention are new in two respects. They make it possible to determine components in a biological sample in a clear free state without turbidity and moreover. by the interaction between the particular surfactant and the enzyme used, making it possible to use smaller amounts of enzyme than normally used, such as in a cholesterol assay. The use of smaller amounts of these without lowering the reaction rate can be considered a significant improvement in enzymatic reactions.
De meest gebruikelijk uitgevoerde klinische bepaling fcan cholesterol in een biologische vloeistof is vde bepaling van het totale cholesterolgehalte dus zowel vrije cholesterol als cholesterolesters. Beide choleste- 8104304 -6- 21997/Vk/ts rolsoorten en de esters hiervan zijn aanwezig in serum met andere lipiden en verschillende eiwitten in mieromoleculair complexen die lipoprotei'nen worden genoemd en gewoonlijk cholesterolesters omvatten als hoofdbestanddeel (60—80%) van het totale cholesterolgehalte. Ze zijn in het alge-5 meen in water onoplosbaar 'en worden binnen het complex gehouden en zijn niet toegankelijk voor enzymen. Bij de bepaling van het totale cholesterolgehalte door een enzymatische bepaling die automatisch of met de hand kan worden bewerkstelligd, moeten eerst zowel cholesterol als cholesterolesters worden vrijgemaakt met behulp van een hiertoe geschikt oppervlakte actief 10 middel. Cholesterolesters worden dan gehydrolyseerd door'cholesterolester-ase ter verkrijging van de vrije cholesterol die i.op zijn beurt wordt geoxydeerd door cholesteroloxydase ter vorming van cholestenon en waterstof-peroxyde.The most commonly performed clinical determination of cholesterol in a biological fluid is the determination of the total cholesterol level, i.e. both free cholesterol and cholesterol esters. Both cholesterol 8104304-621997 / Vk / ts roles and their esters are present in serum with other lipids and different proteins in mieromolecular complexes called lipoproteins and usually comprising cholesterol esters as the major constituent (60-80%) of the total cholesterol levels. They are generally water insoluble and are kept within the complex and are not accessible to enzymes. In determining the total cholesterol level by an enzymatic determination which can be effected automatically or manually, both cholesterol and cholesterol esters must first be released using an appropriate surfactant. Cholesterol esters are then hydrolyzed by cholesterol ester ase to give the free cholesterol which in turn is oxidized by cholesterol oxidase to form cholestenone and hydrogen peroxide.
De hierbij beschreven werkwijze kan worden uitgevoerd volgens ge-15 automatiseerde wijze zoals door het gebruik van een automatische analyse-apparaat of kan met de hand worden uitgevoerd.The method described herein can be performed in an automated manner such as through the use of an automatic analyzer or can be performed manually.
Bij het bereiden van de samenstellingen, die kunnen worden toegepast bij de bepalingen volgens de uitvinding wordt een waterige oplossing samengesteld, die naast het oppervlakte actief middel en het enzym andere refe-20 rentiestoffen bevat, die op zich bekend zijn en die voor dit doel worden toegepast.In preparing the compositions usable in the assays of the invention, an aqueous solution is formulated which contains, in addition to the surfactant and the enzyme, other reference substances known per se and used for this purpose. applied.
Bij het bepalen van cholesterol kunnen bijvoorbeeld de volgende oomponenten worden toegepast in hoeveelheden die hierbij zijn vermeld: 25 component cholesterolbepaling peroxydase 0,8 - 0,2 E/l (eenheden/1) cholesteroloxydase 0,025 - 0,3 E/l cholesterolesterase 0,025 - 0,3 E/l oppervlakte actief middel 0,05 - 0,5 g/dl 30 natriumeholaat 0,05 - 0,5 g/dl natrium-p-hydroxybenzoaat 2,5 - 6 g/dlFor example, in determining cholesterol, the following components may be used in the amounts stated herein: component cholesterol determination peroxidase 0.8 - 0.2 U / l (units / l) cholesterol oxidase 0.025 - 0.3 U / l cholesterol esterase 0.025 - 0.3 U / l surfactant 0.05 - 0.5 g / dl 30 sodium holate 0.05 - 0.5 g / dl sodium p-hydroxybenzoate 2.5 - 6 g / dl
4-aminoantipyrine 0,5 - 2,0 mM4-aminoantipyrine 0.5-2.0 mM
malei'nezuur ___0,1 - 0,5 Mmaleic acid 0.1-0.5 M
pH 5,5 - 7,0 35 verhouding monster/reagens T00 - 400pH 5.5 - 7.0 sample / reagent ratio T00 - 400
Bij de bovenvermelde samenstelling verdient het de voorkeur om cholesterolesterase te gebruiken afkomstig uit een dierlijke bron zoals 8104304 f 1· 't -7- 21997/Vk/ts pancreas, hoewel equivalente resultaten kunnen worden verkregen met choles-terolesterase uit een microbiële bron.In the above composition, it is preferable to use cholesterol esterase from an animal source such as 8104304 f1 · t-7-21997 / Vk / ts pancreas, although equivalent results can be obtained with cholesterol ester ester from a microbial source.
De uitvinding wordt nader toegelicht aan de hand van^de volgende voorbeelden.The invention is further elucidated by means of the following examples.
5 VOORBEELD I.5 EXAMPLE I.
Het opheffen van troebelheid in afhankelijkheid van cholesteroles- terase.The elimination of turbidity in dependence on cholesterol esterase.
3 ml Reagens om troebelheid op te heffen, welk reagens 0,1 M kalium-maleaat, 0,25 g/dl natriumcholaat, 0,2 g/dl laurinezuurdiethanolamide en 10 0,08 E/ml tot 0,8 E/ml cholesterolesterase bevatte met een pH van 6,0 werd gemengd met 0,025 ml lipemisch serum ( 1400 mg/dl triglyceride). Het reac-tiemengsel werd helder binnen 10 minuten bij een temperatuur van 45 °C. Cholesterolesterase voor het opheffen van de troebelheid kan afkomstig zijn uit pancreas of uit microorganismen.3 ml Turbidity Elimination Reagent, which reagent 0.1 M potassium maleate, 0.25 g / dl sodium cholate, 0.2 g / dl lauric diethanolamide and 0.08 U / ml to 0.8 U / ml cholesterol esterase containing a pH of 6.0 was mixed with 0.025 ml lipemic serum (1400 mg / dl triglyceride). The reaction mixture became clear within 10 minutes at a temperature of 45 ° C. Cholesterol esterase for clearing the turbidity may come from pancreas or microorganisms.
15 VOORBEELD II.EXAMPLE II.
Toepassing van het middel voor de cholesterolbepaling.Application of the agent for the determination of cholesterol.
Voor de bepaling van het eindpunt zoals verder aangegeven in dit voorbeeld, werden stoffen voor een cholesterolbepaling gebruikt, die aanwezig zijn in het middel om de troebelheid op te heffen.For the determination of the endpoint as further indicated in this example, cholesterol determination substances contained in the cloudiness control agent were used.
20 3 ml Van een samenstelling die 0,125 E/ml cholesterolesterase, 0,125 E/ml cholesteroloxydase, 1,6 E/ml peroxydase, 0,6 mM 4-aminoantipyrine 25 mM natriumhydroxybenzoaat, 0,25 g/dl natriumcholaat, 0,2 g/dl laurine-zuur-diethanolamide en 0,1 M kaliummaleaat bevatte had een pH van 6,0. Dit reagens werd gemengd met 0,025 ml lipemisch serum als monster. Het mengsel 25 werd vervolgens gedurende 4-5 minuten bewaard bij een temperatuur van 45 °C. Het totale cholesterolgehalte werd vervolgens bepaald door het meten van de kleurintensiteit bij 520 nm. Zonder toevoeging van het middel om de troebelheid op te heffen dat launinezuurdiethanolamide en cholesterolesterase bevatte hafi de bepaling van cholesterol altijd plaats in troebele monsters 30 waardoor foutieve resultaten werden verkregen.20 3 ml of a composition containing 0.125 U / ml cholesterol esterase, 0.125 U / ml cholesterol oxidase, 1.6 U / ml peroxydase, 0.6 mM 4-aminoantipyrine 25 mM sodium hydroxybenzoate, 0.25 g / dl sodium cholate, 0.2 g / dl lauric acid diethanolamide and 0.1 M potassium maleate had a pH of 6.0. This reagent was mixed with 0.025 ml lipemic serum as a sample. The mixture was then stored at a temperature of 45 ° C for 4-5 minutes. The total cholesterol level was then determined by measuring the color intensity at 520 nm. Without the addition of the turbidity elimination agent containing launinic acid diethanolamide and cholesterol esterase, hafi always determined the determination of cholesterol in cloudy samples, giving erroneous results.
VOORBEELD III.EXAMPLE III.
Het opheffen van troebelheid in een monster door candidalipase (candida cylindracea).The elimination of turbidity in a sample by candidalipase (candida cylindracea).
3 ml Van een reagens om troebelheid op te heffen dat 0,2 g/dl laurine-35 zuurdiethanolamide, 0,25 g/dl natriumcholaat en 25 E/ml lipase bevatte en 0,1 M maleaat buffer had een pH van 6,0 en werd gemengd met 0,025 ml lipemisch serum. Het troebele monster werd helden na ongeveer 5 minuten bij een temperatuur van 45 °C.3 ml of a turbidity control reagent containing 0.2 g / dl lauric-35 acid diethanolamide, 0.25 g / dl sodium cholate and 25 U / ml lipase and 0.1 M maleate buffer had a pH of 6.0 and was mixed with 0.025 ml lipemic serum. The turbid sample became heroes after about 5 minutes at a temperature of 45 ° C.
8104304 -8- _ 21997/Vk/ts t *8104304 -8- _ 21997 / Vk / ts t *
Wanneer een equivalente hoeveelheid aan middel om de troebelheid op te heffen werd gebruikt bevattende een mengsel van laurinezuurdiethanol-amide en geëpoxyleerd laurinezuur ( x + y * 5), werden vergelijkbare resultaten verkregen met betrekking tot het opheffen tyan de troebelheid.When an equivalent amount of a turbidity eliminator was used containing a mixture of lauric diethanol amide and epoxylated lauric acid (x + y * 5), similar results were obtained with respect to the removal of turbidity.
5 voorbeeld IV.Example IV.
3 ml Van een middel om de troebelheid op te heffen bevatte als oppervlakte actief middel een stof met formule:3 ml Of a turbidness-eliminating agent, the surfactant contained a substance of the formula:
o (CH»CH-0) Ho (CH »CH-O) H
II X ί ί XII X ί ί X
CUH25-C-N\CUH25-C-N \
IU (CH-CH,0) HIU (CH-CH, O) H
L y waarbij x + y s 5, in een hoeveelheid van 0,2 g/dl en verder 0,4 g/dl Triton X-100, 0,2 M kaliummaleaat en 25 E/ml lipase. Dit middel had een pH van 6,0 en werd gemengd met 0,05 ml lipemisch monster en bewaard bij 15 een temperatuur van 45 °C. Het troebele monster werd helder na drie minuten.L y where x + y s 5, in an amount of 0.2 g / dl and further 0.4 g / dl Triton X-100, 0.2 M potassium maleate and 25 U / ml lipase. This agent had a pH of 6.0 and was mixed with 0.05 ml of lipemic sample and stored at a temperature of 45 ° C. The cloudy sample became clear after three minutes.
De snelheid waarmee de troebelheid werd opgeheven werd verhoogd door het verhogen van de concentratie van de buffer.The rate of clearing the turbidity was increased by increasing the concentration of the buffer.
Vergelijkbare resultaten werden verkregen door hogere concentraties te gebruiken aan geëpoxyleerd laurinezuur ( x + y = 5) zonder dat 20 Triton X-100 werd gebruikt.Similar results were obtained using higher concentrations of epoxylated lauric acid (x + y = 5) without using Triton X-100.
VOORBEELD V.EXAMPLE V.
a) Samenstelling.a) Composition.
Een diagnostisch reagens werd bereid als een oplossing van een liter water onder toepassing van de volgende stoffen in de aangegeven hoe-25 veelheden.A diagnostic reagent was prepared as a solution of one liter of water using the following substances in the indicated amounts.
stof concentratie appelzuur 11,6 g KOH 10,0 gsubstance concentration malic acid 11.6 g KOH 10.0 g
30 EDTA (K2) 2,7 mMEDTA (K2) 2.7 mM
Na-cholaat 5,8 mMPost-cholate 5.8 mM
Na-p-hydroxybenzoaat 25,0 mMNa-p-hydroxybenzoate 25.0 mM
4-aminoantipyrine 0,6 mM4-aminoantipyrine 0.6 mM
laurinezuurdiethanolamide 2,0 g 35 cholesterolesterase 125 eenheden cholesteroloxydase 125 eenheden "horseradish" peroxydase 800 eenhedenlauric acid diethanolamide 2.0 g 35 cholesterol esterase 125 units cholesterol oxidase 125 units "horseradish" peroxidase 800 units
De pH werd ingesteld op een waarde van 6,0, 8104304 -9- 21997/Vk/tsThe pH was adjusted to a value of 6.0, 8104304-9-21997 / Vk / ts
Het reagens werd bewaard en toegepast in de vorm van een waterige oplossing of de oplossing werd gevriesdroogd op bekende wijze en aangevuld met water wanneer het moest worden toegepast.The reagent was stored and used in the form of an aqueous solution or the solution was lyophilized in a known manner and supplemented with water when it was to be used.
b) Bepaling:totale cholesterolbepaling.b) Determination: total cholesterol determination.
5 3 ml Van het bovenvermelde reagens werd gemengd met 0,025 ml serum of opnieuw samengesteld serum, dat tot 500 mg/dl cholesterol bevatte. De reactie werd gestart bij een temperatuur van 45 °C gedurende 4-5 minuten.3 ml of the above reagent was mixed with 0.025 ml serum or reconstituted serum containing up to 500 mg / dl cholesterol. The reaction was started at a temperature of 45 ° C for 4-5 minutes.
De absorptie van monsters bij 525 nm werd gemeten tegen een blaneo-reagens. VOORBEELD VI.The absorbance of samples at 525 nm was measured against a blane reagent. EXAMPLE VI.
10 Opheffen van de troebelheid bij het bepalen van creatinefosfaatkina- se (CPK)-activiteit van een lipemisch serum.10 Elimination of turbidity in determining creatine phosphate kinase (CPK) activity of a lipemic serum.
2 ral Van een imidazool-acetaat buffer (0,1 M) met een pH van 6,7 dat 0,4 $ laurinezuurdiethanolamide, 25 E/dl pancreatisch cholesterolesterase, 0,25 gew. $ natriumcholaat en 20 mM thioglycerol bevatte werd gemengd met 15 0,05 ml lipemisch serum. Nadat het mengsel gedurende 15 minuten was bewaard bij een temperatuur van 37 °C, werd de troebelheid gemeten bij 340 nm en er bleek, dat de troebelheid daalde van 2,3 0.D. tot 0,02 0.D. Het heldere monster werd vervolgens gemengd met 1 ml CPK-reagens dat 116,7 mM creatine-fosfaat, 6,7 mM ADP, 16,7 mM AMP, 6,7 mM EDTA, 6,7 mM NADP, 125 E/dl hexo-20 kinase, 100 E/dl glucose-6-fosfaatdehydrogenase, G6PDH, bevatte, bereid in een 0,1 .M imidazoolacetaatbuffer bij een pH van 6,7. De activiteit van CPK werd bepaald bij 340 nm en bij een temperatuur van 37 °C volgens een bekende methode.2 ral Of an imidazole acetate buffer (0.1 M) with a pH of 6.7 containing 0.4% lauric acid diethanolamide, 25 U / dl pancreatic cholesterol esterase, 0.25 wt. Sodium cholate and 20 mM thioglycerol were mixed with 0.05 ml lipemic serum. After the mixture was stored at a temperature of 37 ° C for 15 minutes, the turbidity was measured at 340 nm and the turbidity was found to drop from 2.3-0D. up to 0.02 0.D. The clear sample was then mixed with 1 ml CPK reagent containing 116.7 mM creatine phosphate, 6.7 mM ADP, 16.7 mM AMP, 6.7 mM EDTA, 6.7 mM NADP, 125 U / dl hexo -20 kinase, 100 U / dl glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PDH, prepared in a 0.1 µM imidazole acetate buffer at pH 6.7. The activity of CPK was determined at 340 nm and at a temperature of 37 ° C by a known method.
-CONCLUSIES- 8104304- CONCLUSIONS - 8104304
Claims (26)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US19265180A | 1980-10-01 | 1980-10-01 | |
| US19265180 | 1980-10-01 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8104304A true NL8104304A (en) | 1982-05-03 |
Family
ID=22710512
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8104304A NL8104304A (en) | 1980-10-01 | 1981-09-18 | AGENT FOR ELIMINATING ANTURITY IN AN ORGANIC SAMPLE. |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (2) | JPS5780560A (en) |
| AU (1) | AU543239B2 (en) |
| BE (1) | BE890479A (en) |
| CA (1) | CA1163908A (en) |
| CH (1) | CH657919A5 (en) |
| DE (1) | DE3138602A1 (en) |
| FR (1) | FR2495184B1 (en) |
| GB (1) | GB2084726B (en) |
| IT (1) | IT1144750B (en) |
| NL (1) | NL8104304A (en) |
| SE (1) | SE449005B (en) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60227171A (en) * | 1984-04-25 | 1985-11-12 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | Measuring method of glucose conjugated to hemoglobin |
| FR2599149B1 (en) * | 1986-05-21 | 1988-08-26 | Univ Nancy | REAGENT FOR TRANSPARIZING BIOLOGICAL MEDIA AND ITS ANALYTICAL APPLICATIONS. |
| DE3620817A1 (en) * | 1986-06-21 | 1987-12-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | METHOD FOR THE SPECIFIC DETERMINATION OF THE SERUM FRUCTOSAMINE CONTENT, AND A REAGENT MIXTURE SUITABLE FOR THIS |
| EP1013774B8 (en) | 1998-12-22 | 2006-12-06 | Olympus Life and Material Science Europa GmbH | Liquid reagent for the detection of creatine kinase |
| US7790768B2 (en) | 2003-02-28 | 2010-09-07 | E-L Management Corp. | Method for increasing hair growth |
| JP2006071574A (en) * | 2004-09-06 | 2006-03-16 | Denka Seiken Co Ltd | Immunoturbidimetry and reagent therefor |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2089212A (en) * | 1936-06-08 | 1937-08-10 | Kritchevsky Wolf | Hydrotropic fatty material and method of making same |
| US2531190A (en) * | 1946-11-12 | 1950-11-21 | Drew & Co Inc E F | Emulsifier consisting of alkylolamine-fatty acid condensation products and esters ofpolyglycols |
| US3260648A (en) * | 1963-08-16 | 1966-07-12 | Warner Lambert Pharmaceutical | Diagnostic aid |
| US3853465A (en) * | 1972-06-09 | 1974-12-10 | Technicon Instr | Turbidity reduction in serum and plasma samples using polyoxyethylated lauric acid compounds |
| US3898130A (en) * | 1974-03-18 | 1975-08-05 | American Hospital Supply Corp | Rapid enzymatic hydrolysis of triglycerides |
| DE2724757C2 (en) * | 1977-06-01 | 1979-08-23 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Means for removing cloudiness in serum and process for its preparation |
| DE2816229C2 (en) * | 1978-04-14 | 1983-11-10 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Methods and means for removing opacities |
-
1981
- 1981-06-23 CA CA000380441A patent/CA1163908A/en not_active Expired
- 1981-07-15 AU AU72876/81A patent/AU543239B2/en not_active Ceased
- 1981-07-30 IT IT68070/81A patent/IT1144750B/en active
- 1981-08-27 JP JP56133441A patent/JPS5780560A/en active Granted
- 1981-09-18 NL NL8104304A patent/NL8104304A/en not_active Application Discontinuation
- 1981-09-24 GB GB8128928A patent/GB2084726B/en not_active Expired
- 1981-09-24 BE BE0/206050A patent/BE890479A/en not_active IP Right Cessation
- 1981-09-28 FR FR8118203A patent/FR2495184B1/en not_active Expired
- 1981-09-29 SE SE8105737A patent/SE449005B/en not_active IP Right Cessation
- 1981-09-29 DE DE19813138602 patent/DE3138602A1/en active Granted
- 1981-10-01 CH CH6335/81A patent/CH657919A5/en not_active IP Right Cessation
-
1989
- 1989-04-18 JP JP1096552A patent/JPH01304898A/en active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CH657919A5 (en) | 1986-09-30 |
| BE890479A (en) | 1982-03-24 |
| GB2084726A (en) | 1982-04-15 |
| FR2495184B1 (en) | 1985-06-28 |
| SE449005B (en) | 1987-03-30 |
| AU7287681A (en) | 1982-04-08 |
| JPH0151782B2 (en) | 1989-11-06 |
| IT8168070A0 (en) | 1981-07-30 |
| CA1163908A (en) | 1984-03-20 |
| GB2084726B (en) | 1983-11-23 |
| JPH01304898A (en) | 1989-12-08 |
| DE3138602A1 (en) | 1982-06-24 |
| JPS5780560A (en) | 1982-05-20 |
| DE3138602C2 (en) | 1993-02-11 |
| FR2495184A1 (en) | 1982-06-04 |
| IT1144750B (en) | 1986-10-29 |
| AU543239B2 (en) | 1985-04-04 |
| JPH0474000B2 (en) | 1992-11-25 |
| SE8105737L (en) | 1982-04-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS62182651A (en) | Turbidity removing agent | |
| JP4836196B2 (en) | Lipase activity measuring composition and activity measuring method | |
| US9360432B2 (en) | Method for measuring triglyceride in low-density lipoprotein | |
| JP3614514B2 (en) | Method for quantifying cholesterol in high-density lipoprotein fraction and reagent kit for quantification | |
| US4503146A (en) | Method for eliminating turbidity in a biological fluid and reagent therefor | |
| NL8104304A (en) | AGENT FOR ELIMINATING ANTURITY IN AN ORGANIC SAMPLE. | |
| JP4200102B2 (en) | Method and reagent composition for determination of cholesterol in high density lipoprotein | |
| JPWO2004055204A1 (en) | Multiple determination of cholesterol in low density lipoprotein | |
| US4816411A (en) | Method for eliminating turbidity in a biological fluid and reagent therefor | |
| JPH01108997A (en) | Method and reagent for particularly determining fructosamine content of serum in blood or specimen derived from blood,and method for removing specimen component causing nonspecific reductive action or/and suspension | |
| KR20010108370A (en) | Method for quantitating cholesterol | |
| JP3601648B2 (en) | Biological component measuring reagent and measuring method | |
| JPH07155196A (en) | Method for measuring biological component | |
| JP4013108B2 (en) | Method for stabilizing lipase | |
| CA2017509C (en) | Lipase single reagent system | |
| US4007091A (en) | Method for measuring the activity of lecithin cholesterol acyl transferase and lecithin substrate solution useful therefor | |
| CA2287129C (en) | Stabilization of biological fluids by addition of sterol esters | |
| US5378609A (en) | Lipase single reagent system | |
| JP4130724B2 (en) | Reagent containing chelating substance | |
| JP4018237B2 (en) | Lipase substrate solution for enzyme activity measurement and reagent kit for lipase activity measurement | |
| JP2000287700A (en) | Measurement of lipase activity value, cholesterol concentration and neutral lipid concentration | |
| JP2003227798A (en) | Method for stabilizing reagent composition and stabilized reagent composition | |
| JPS59162454A (en) | Removal of turbidity in humor | |
| JP4081709B2 (en) | How to avoid the effects of contaminants | |
| KR19980086568A (en) | Determination of LDL-Cholesterol |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1A | A request for search or an international-type search has been filed | ||
| BB | A search report has been drawn up | ||
| A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
| BC | A request for examination has been filed | ||
| CNR | Transfer of rights (patent application after its laying open for public inspection) |
Free format text: TECHNICON INSTRUMENTS CORPORATION (A DELAWARE |
|
| BV | The patent application has lapsed |