NL7906539A

NL7906539A - IMPROVEMENTS IN ARTIFICIAL INSEMINATION.

Info

Publication number: NL7906539A
Application number: NL7906539A
Authority: NL
Original assignee: Harald Skjervold Torbjorn Alml
Priority date: 1978-09-01
Filing date: 1979-08-30
Publication date: 1980-03-04
Also published as: AU5033979A; DD151107A5; IT1207234B; FI792718A; ZA794504B; PT70120A; NO782997L; DE2935285A1; FR2435948A1; SE7907157L; JPS5547868A; HU178736B; IL58099A0; GB2031456A; ES483763A1; BE878519A; DK360479A; IT7925426A0

Description

X? 3X? 3

' * V* V

κ VO 8335κ VO 8335

Barald Skjervold, Torbjorn Almlid, Kare F os sum en Ola Onstad As, As, Oslo en Gjettum, Hoorwegen.Barald Skjervold, Torbjorn Almlid, Kare Fo sum sum and Ola Onstad As, As, Oslo and Gjettum, Hoorwegen.

Verbeteringen bij kunstmatige inseminatie.Improvements in artificial insemination.

In de moderne veehouderij en fokkerij is kunstmatige inseminatie de meest geschikte en economische inseminatiemethode.In modern livestock and breeding, artificial insemination is the most suitable and economical insemination method.

De vele voordelen worden verkregen via K.I.; onder meer is het mogelijk, met zaad van éên mannelijk dier een aanmerke-5 lijk groter aantal vrouwtjes te insemineren, dan op de normale wijze mogelijk is. Semen van mannelijke dieren met een bijzonder goede erfelijke kwaliteit kan na diepvriezen zeer lang worden bewaard en op ieder gewenst tijdstip voor insemineren van vrouwtjes worden gebruikt, wanneer de goede erfelijke eigenschappen daarvan worden gewenst. K.I.The many benefits are obtained through K.I .; inter alia, it is possible to inseminate a considerably larger number of females with seed of one male animal than is normally possible. Semen of male animals with a particularly good hereditary quality can be stored for a very long time after freezing and can be used at any time for insemination of females, if the good hereditary properties thereof are desired. K.I.

10 maakt het voor veehouder en veefokker mogelijk bwaliteitsdieren te •produceren met gewenste eigenschappen zonder het gevaar van inteelt en zonder dat het nodig is éên of meer (onproduktieve) mannelijke dieren plaatselijk voor fokdoeleinden beschikbaar te houden.10 makes it possible for livestock farmer and cattle breeder to produce quality animals with • desired properties without the danger of inbreeding and without the need to keep one or more (unproductive) male animals locally available for breeding purposes.

Het is echter bekend, dat K.I. resulteert in een 15 iets lagere vruchtbaarheidsgraad vergeleken met wat wordt bereikt bij natuurlijke inseminatie. De uitvinding beoogt dit nadeel op te heffen.However, it is known that K.I. results in a slightly lower fertility rate compared to what is achieved with natural insemination. The object of the invention is to eliminate this drawback.

Het is voor een fokker van groot economosch belang, indien de nestgrootte kan worden verhoogd boven het normale aantal 20 bij K.I., vooral bij dieren met grote nesten, zoals varkens, dan wel, dat het aantal gezonde geboortes per kunstmatige seminatie wordt verhoogd bij dieren, die gewoonlijk slechts één jong tegelijk ter wereld brengen, zoals paarden en koeien.It is of great economic importance for a breeder if the nest size can be increased above the normal number in AI, especially in animals with large nests, such as pigs, or that the number of healthy births per artificial seminar is increased in animals, who usually only give birth to one young at a time, such as horses and cows.

Bij mensen is recentelijk gevonden dat een wisseling 25 in de vruchtbaarheid te maken kan hebben met immunologische oorzaken (Beer & Billingham, The Immunologi of Mammalian Reproduction (Prentreehall: Englewood Cliffs, II.J.) 1976, Scott J.S. en Jones W.R. immunology of Human Reproduction, Academie Press, Bondon, 1976.In humans, it has recently been found that a change in fertility may be related to immunological causes (Beer & Billingham, The Immunologi of Mammalian Reproduction (Prentreehall: Englewood Cliffs, II.J.) 1976, Scott JS and Jones WR Immunology of Human Reproduction, Academy Press, Bondon, 1976.

Indien deze veronderstelling juist is, is het moge- 7906539If this assumption is correct, it is possible 7906539

VV

“ τ 2 lijk, via immunologische mechanismen een aantal natuurlijke verschijnselen, die direct of indirect met de vruchtbaarheid te maken hebben, te verklaren. Van deze verschijnselen kunnen de volgende worden genoemd : 5 Het paren van dieren van verschillende rassen levert vaak een verhoogde vruchtbaarheid op, die in- de genetica wordt aangeduid met heterosis, maar heterosis geeft op zichzelf geen enkele fysiologische verklaring voor dit verschijnsel. Indien heterosis uit fysiologisch oogpunt immunologisch zou kunnen worden verklaard, dan 10 zou de immunologische respons moeten toenemen, wanneer de dieren niet verwant zijn en zo zou men dan theoretisch een hoger heterosis-effect kunnen waarnemen, t.w. een toename in de vruchtbaarheid.“Τ 2 seems to explain, through immunological mechanisms, a number of natural phenomena directly or indirectly related to fertility. Of these phenomena, the following can be mentioned: Mating animals of different breeds often results in increased fertility, which in genetics is referred to as heterosis, but heterosis in itself does not provide any physiological explanation for this phenomenon. If heterosis could be explained immunologically from a physiological point of view, then the immunological response should increase if the animals are unrelated and thus theoretically a higher heterosis effect could be observed, i.e. an increase in fertility.

Als bekend resulteert het paren van verwante' dieren in een soort inteelt en o.m. een verlaagde vruchtbaarheid. Indien 15 de fysiologische oorzaak op een immunologische reactie berust, mag men in dit geval een lagere immunologische respons verwachten naarmate de dieren nauwer zijn verwant en aldus een verhoogde inteelt.As is known, mating related animals results in a type of inbreeding and, among other things, a reduced fertility. In this case, if the physiological cause is based on an immunological response, a lower immunological response may be expected as the animals are more closely related and thus an increased inbreeding.

Goede resultaten kunnen ook worden verkregen door toepassing van een mengsel van semen van diverse mannelijke dieren 20 van dezelfde soort; in dit geval zal het percentage zwangerschappen hoger zijn, dan kon worden verwacht indien alleen het sperma van de meest vruchtbare mannelijke dieren zou zijn gebruikt. Yan fokkersstand-punt is het echter niet gunstig mengsels van semen van diverse mannelijke dieren van dezelfde soort te gebruiken, aangezien men niet kan 25 voorspellen welk mannelijk dier de biologische vader van de nakome-lingsschap zal worden.Good results can also be obtained by using a mixture of semen from several male animals of the same species; in this case, the pregnancy rate will be higher than could be expected if only the semen of the most fertile male animals had been used. However, it is not favorable from a breeder's point of view to use mixtures of semen from various male animals of the same species, since it is not possible to predict which male animal will become the biological father of the offspring.

Vergelijking van nestgrootte, na een natuurlijke dekking en na gebruik van K.I. bij varkens heeft duidelijk aangetoond, als boven gezegd, dat bij gebruik van K.I. kleinere nesten resulte-30 ren. Indien dit wordt veroorzaakt, doordat het ejaculaat belangrijke antigenen bevat, kan de verklaring zijn, dat de sterke verdunning van het semen kan resulteren in kleinere nesten. Onderzoek bij hybride-varkens in Hoorwegen heeft aangetoond,, dat bij gebruik van K.I. zeer weinig heterosis bij de nestgrootten is waargenomen, terwijl het eorre-35 sponderende heterosis-effect nagenoeg 1,0 big bedraagt'bij natuurlijke 7906539 * 3 * *r dekking. De fysiologische verklaring kan als hoven aangeduid luiden.Nest size comparison, after natural coverage and after using K.I. in pigs has clearly shown, as stated above, that when using K.I. smaller litters resulted. If this is caused by the fact that the ejaculate contains important antigens, the explanation may be that the strong dilution of the semen can result in smaller nests. Research in hybrid pigs in Hoorwegen has shown that when using K.I. very little heterosis has been observed in litter sizes, while the eorre-sputtering heterosis effect is almost 1.0 piglet with natural 7906539 * 3 * * coverage. The physiological explanation may be indicated as courts.

Tevens is aangetoond, dat de mannelijke varkens een duidelijke invloed op de nestgrootte hehhen. Indien er een correlatie bestaat tussen immunorespons en nestgrootte (embryo-dood) bestaan er goede rede-5 nen om aan te nemen, dat de ouders een duidelijke invloed hebben op de nestgrootste.It has also been shown that the male pigs have a clear influence on the nest size. If there is a correlation between immunoresponse and litter size (embryo death), there are good reasons to believe that the parents have a clear influence on the litter size.

Onderzoek heeft aangetoond, dat men volgens de uitvinding een verbeterde vruchtbaarheid kan verkrijgen, indien anti-genen worden gemengd met het semen, speciaal indien het semen wordt 10 verdund met een verdunningsmiddel. Dit verdunningsmiddel wordt gebruikt ter verdunning van het ejaculaat tot een groot aantal insemi-natiedoses en dit verdunningsmiddel kan bestaan uit verschillende buffeimengsels, die voorts middelen bevatten om het temperatuurschokeffect te verminderen indien de doses worden gekoeld of in diepge-15 vroren toestand bewaard, verder uit antibiotica, voedingsstoffen, enz.Research has shown that according to the invention an improved fertility can be obtained if antigens are mixed with the semen, especially if the semen is diluted with a diluent. This diluent is used to dilute the ejaculate to a large number of insemination doses, and this diluent may consist of various buffalo mixtures, which further contain agents to reduce the temperature shock effect when the doses are cooled or frozen, further from antibiotics, nutrients, etc.

Het verdunningsmiddel kan ook zijn gebaseerd op eierdooier,’ magere melk, melkpoeder, enz.The diluent may also be based on egg yolk, skim milk, powdered milk, etc.

Het gebruik en de samenstelling van het verdunningsmiddel zijn aan deskundigen wel bekend en volstaan kan worden met 20 verwijzing naar het klassieke boek van Hafez, Reproduction in Farm Animals, blz. 153-15^-, Lea & Felsiger, Philadelphia 1966. Voorts wordt verwezen naar Pdlson Einarsson, Allanbane Insemination och Insemination Teknik Centraltrykkeriet AB Boras 1972. Uit deze literatuurplaatsen blijkt duidelijk, dat bij het bereiden van een passend zaadverdunnings-25 middel men de gunstigst mogelijke levensvoorwaarden voor het zaad moet nastreven om zoveel mogelijk viriel sperma te laten overleven en aldus aan de bevruehtiging te laten deelnemen.The use and composition of the diluent are well known to those skilled in the art and will suffice to refer to Hafez's classic book, Reproduction in Farm Animals, pp. 153-15-, Lea & Felsiger, Philadelphia 1966. Further reference to Pdlson Einarsson, Allanbane Insemination och Insemination Teknik Centraltrykkerite AB Boras 1972. It is clear from these references that in preparing an appropriate seed thinner one should strive for the most favorable possible conditions for the seed to survive as much virile sperm as possible and thus to participate in fertilization.

Ih het Amerikaanse octroorschrift 3.718.7^-0 is weergegeven, dat de bewegelijkheid en vruchtbaarheid van spermatozo’ên bij 30 mannelijke semenpreparaten worden verhoogd, wanneer daaraan (3- glucuronidase wordt toegevoegd. Dit verhoogt de motiliteit van het sperma na opslag zeer duidelijk. Tevoren is echter niet gezegd of gesuggereerd, dat zaad of zaad met een verdunningsmiddel kan worden gemengd met stoffen, die de vruchtbaarheid positief verbeteren. Volgens 35 de uitvinding bleek nu zaad/verdunningsmiddel met antigenen te kunnen 7906539 1+ ♦? worden gemengd en daardoor positief grotere nesten te kunnen worden verkregen of de kansen op een goed groeiend jong per inseminatie te worden verbeterd. Passende antigenen kunnen worden toegevoegd inde vorm van leucocyten aan het zaad/verdunningsmiddel. Volledig bloed 5 kan niet worden toegevoegd, omdat de erytrocyten rond de spermatosoën kunnen agglomereren en deze aldus kunnen inactiveren.In U.S. Pat. No. 3,718.7-1-0 it is shown that the motility and fertility of spermatozoa in 30 male semen preparations are increased when (3-glucuronidase is added. This greatly increases sperm motility upon storage. However, it has not been said or suggested in advance that seed or seed can be mixed with a diluent with substances that positively improve fertility According to the invention, it has now been found that seed / diluent can be mixed with antigens 7906539 1+ ♦? larger litters can be obtained or the chances of a well-growing pup per insemination improved Appropriate antigens can be added in the form of leucocytes to the seed / diluent Whole blood 5 cannot be added, because the erythrocytes can surround the spermatoso agglomerate and thus can inactivate it.

In een publicatie van L.V. Swanson and A.G. Hunter: "Egg Yolk antigens and their effect, on fertility in rabbits” (Biology of Reproduction 1, (k) 32^-329, 1969 zijn experimenten beschreven om 10 te bepalen welke proteïnen in eierdooier antigeen zijn om ze immunologisch te definiëren en om te bepalen of antilichamen tegen eierdooier de vruchtbaarheid kunnen beïnvloeden wanneer ze worden gemengd met konijnensemen gesuspendeerd in een eierdooierverdunning. Vroeger is evenwel niet gesuggereerd, dat de aanwezigheid van antigenen 15 in semenpreparaten de vruchtbaarheid kan verhogen.In a publication by L.V. Swanson and A.G. Hunter: "Egg Yolk antigens and their effect, on fertility in rabbits" (Biology of Reproduction 1, (k) 32 ^ -329, 1969) have described experiments to determine which proteins in egg yolk are antigenic to define them immunologically and to to determine whether egg yolk antibodies may affect fertility when mixed with rabbit semen suspended in an egg yolk dilution, however, it has not previously been suggested that the presence of antigens in semen preparations may enhance fertility.

De antigenen kunnen eveneens in de vagina en/of uterus worden gebracht alvorens natuurlijke of kunstmatige inseminatie plaatsvindt.The antigens can also be introduced into the vagina and / or uterus before natural or artificial insemination takes place.

Met antigenen worden in deze beschrijving middelen 20 bedoeld, die het vrouwelijke immunosysteem stimuleren; deze antigenen kunnen aanwezig zijn in de vorm van cellulaire antigenen of ’’zuivere" antigenen, geïsoleerd uit cellen of celweefsels. Bij voorkeur worden de antigenen gebruikt in de vorm van leucocyten of lymfocyten van dezelfde species of van een andere species, dan wel van vreemde cel-25 len met inbegrip van diverse microorganismen en cellen uit weefselcul-turen. Het is eveneens mogelijk, dat een synergistisch effect kan worden verkregen bij toepassing· van verschillende antigenen, verkregen uit dezelfde species en uit andere dierlijke species.By antigens in this specification are meant agents that stimulate the female immunosystem; these antigens may be in the form of cellular antigens or "pure" antigens isolated from cells or tissues. Preferably, the antigens are used in the form of leucocytes or lymphocytes of the same species or of a different species, or of foreign cells including various microorganisms and cells from tissue cultures It is also possible that a synergistic effect can be obtained using different antigens obtained from the same species and from other animal species.

Een antigeen kan worden gedefinieerd als iedere stof, 30 die de produktie van antilichamen stimuleert. De meeste antigenen zijn eiwitten., maar tevens is gevonden, dat bepaalde andere grote moleculen eveneens als antigenen kunnen fungeren. Zie b.v. Stanier, Doudoroff and Adelberg: "The Microbial World” (Prentic. Hall, Ine. 1958), pp. 59^-871.An antigen can be defined as any substance that stimulates the production of antibodies. Most antigens are proteins, but it has also been found that certain other large molecules can also act as antigens. See e.g. Stanier, Doudoroff and Adelberg: "The Microbial World" (Prentic. Hall, Ine. 1958), pp. 59-871.

35 De uitvinding wordt nader toegelicht door de volgende 7906539 5 , ·? \ voorbeelden, waarbij als antigenen leucocyten werden toegepast.The invention is further elucidated by the following 7906539 5,? examples, in which leucocytes were used as antigens.

I.I.

T3 Jonge zeugen van bet Noorse spekras werden op de speningsleeftijd aangeschaft, terwijl zij elk ca 20 kg wogen. Na de 5 tweede tochtigheidsperiode werden deze zeugen verdeeld in drie groepen: a) 1/3 van de zeugen werd op een gebruikelijke wijze geïnsemineerd (controlegroep); b) 1/3 van de zeugen werd geïnsemineerd met zaad, waaraan cellulaire antigenen (leucocyten) van dezelfde beer, die het 10 zaad had geproduceerd, waren toegevoegd; en c) 1/3 van de zeugen werd geïnsemineerd met zaad, waaraan cellulaire antigenen (leucocyten) van een andere beer van een verschillend varkensras (Yorkshire) waren toegevoegd.T3 Norwegian sows of the Norwegian bacon breed were purchased at the weaning age, each weighing about 20 kg. After the second heat period, these sows were divided into three groups: a) 1/3 of the sows were inseminated in a usual manner (control group); b) 1/3 of the sows were inseminated with seed to which were added cellular antigens (leucocytes) from the same boar that produced the seed; and c) 1/3 of the sows were inseminated with seed, to which cellular antigens (leucocytes) of another boar of a different breed of pig (Yorkshire) had been added.

- 5 Weken na deze kunstmatige inseminatie werden 15 de zeugen geslacht en het volgende waargenomen: het aantal corpora lutea, het aantal normale (levende) foetussen, het aantal dode foetussen en de groottewan de foetussen.- 5 weeks after this artificial insemination, the sows were slaughtered and the following was observed: the number of corpora lutea, the number of normal (living) fetuses, the number of dead fetuses and the size of the fetuses.

20 De foetussen werden gefixeerd om later de sexverhou- ding te bepalen en de oorzaken van de embryonale dood.The fetuses were fixed to later determine the sex ratio and the causes of the embryonic death.

De resultaten van dit experiment kunnen als volgt worden opgesomd:The results of this experiment can be summed up as follows:

De toevoeging van cellulaire antigenen aan het semen 25 resulteerde in significant grotere nesten (een groter aantal foetussen) vergeleken met het gebruik van de gebruikelijke spermadosis.The addition of cellular antigens to the semen resulted in significantly larger litters (a greater number of fetuses) compared to the use of the usual sperm dose.

Toevoeging van antigenen aan het semen resulteerde in een 12$fs toename van de nestgrootte. De waarschijnlijkheid dat het waargenomen verschil berustte op een natuurlijke variatie was 30 minder dan 2,5$. De gemiddelden voor deze proef waren:Addition of antigens to the semen resulted in a 12 $ fs increase in nest size. The probability that the observed difference was due to a natural variation was less than $ 2.5. The means for this test were:

Groep Aantal Normale foetussen als percentage Relatieve _dieren_van het aantal corpora lutea_cijfers A (controle)26 72,57$ 100 B 25 83,11^,7 35 C 21 81,88 112,9 7906539 y •1 .· 6Group Number Normal fetuses as a percentage Relative animals of the number of corpora lutea figures A (control) 26 72.57 $ 100 B 25 83.11 ^ .7 35 C 21 81.88 112.9 7906539 y • 1. · 6

Het percentage normale foetussen in de controlegroep was als gewoonlijk, terwijl de percentages bij de groepen (b) en (c) veel hoger waren dan gebruikelijk.The percentage of normal fetuses in the control group was as usual, while the percentages in groups (b) and (c) were much higher than usual.

II.II.

5 Om deze veelbelovende resultaten te verifiëren wer den nogmaals 68 jonge zeugen in drie groepen verdeeld en geïnsemineerd: a) controlegroep, geïnsemineerd op de gebruikelijke wi j ze; b) geïnsemineerd met semen, gemengd met antigenen in 10 de vorm van gemengde leucocyten van varkens van het Yorkshireras; c) geïnsemineerd met semen, gemengd met antigenen in de vorm van gemengde leucocyten van Noors roodbont vee.5 To verify these promising results, another 68 young sows were divided into three groups and inseminated: a) control group, inseminated in the usual way; b) inseminated with semen mixed with antigens in the form of mixed leucocytes from swine of the Yorkshire breed; c) inseminated with semen mixed with antigens in the form of mixed leucocytes from Norwegian red-and-white cattle.

De mate van vruchtbaarheid werd bepaald als boven beschreven.The fertility rate was determined as described above.

15 Groep Aantal Normale foetussen als percentage Relatieve dieren_van het aantal corpora lutea_cijfers_ A (controle) 2h 68 100 B 22 T9 116 C 22 77 113 20 De resultaten van deze proef bevestigen de boven weergegeven resultaten.15 Group Number Normal fetuses as a percentage Relative animals_ of the number of corpora lutea_digits_ A (control) 2h 68 100 B 22 T9 116 C 22 77 113 20 The results of this test confirm the results shown above.

Variantie analyse van de samengevoegde resultaten van deze twee proeven I en II leveren de volgende resultaten: 25 Groep Aantal Gemiddelde cijfers Rel.Analysis of variance of the combined results of these two tests I and II yield the following results: 25 Group Number Average figures Rel.

zeugen corpus luteum normale foetussen cijfers _X Cr XA_Cf__sows corpus luteum normal fetuses numbers _X Cr XA_Cf__

Controle (i) 50 13,92 2,U2 9,30 3, te 100Control (i) 50 13.92 2, U2 9.30 3, 100

Leucocyten van de 30 semen donor(II) 25 13,52 2,50 10,69 3, te 11^.9Leucocytes from the 30 semen donor (II) 25 13.52 2.50 10.69 3, 11 ^ .9

Leucocyten van een ander (lil) hk 1U,32 2,23 10,53 3,53 113,2Leucocytes from another (III) hk 1U, 32 2.23 10.53 3.53 113.2

Leucocyten van veeLivestock white blood cells

(IV) 22 ïh,23 9,93 10,27 3,08 110,U(IV) 22h, 23 9.93 10.27 3.08 110, U

35 Het resultaat is· hierbij gecorrigeerd voor de variatie in het aantal 7906531 7 . „ corpora lutea.35 The result has been corrected for the variation in the number of 7906531 7. Corpora lutea.

De -waarschijnlijkheid omtrent het bestaan van een werkelijk verschil in het aantal normale foetussen in de controlegroep en de proefgroepen levert de volgende F-ratio's: 5 Niet-gecorrigeerd voor een variatie in het aantal corpora lutea: k,J3i Gecorrigeerd voor de variatie in het aantal corpora lutea: 5,05 Deze resultaten bewijzen, dat er een zeer significant (99%) verschil bestaat tussen de resultaten verkregen bij de controlegroep en de proefgroepen.The probability of a true difference in the number of normal fetuses in the control and test groups yields the following F ratios: 5 Unadjusted for a variation in the number of corpora lutea: k, J3i Corrected for the variation in the number of corpora lutea: 5.05 These results prove that there is a very significant (99%) difference between the results obtained in the control group and the test groups.

10 Het is bekend, dat de vruchtbaarheid van zoogdieren voor een hoog percentage wordt bepaald door het percentage dode foetussen. Premature foetussterfte is de hoofdoorzaak voor de noodzaak dieren opnieuw te dekken. Bij paarden is b.v. aangetoond, dat 100 dekkingen resulteerden in kO veulens en 2k prematuur dode foetussen, 15 zie E.P. Cunningham, Annual Meeting of the European Association of Animal Production (E.A.A.P.) Stockholm 1978.It is known that a high percentage of mammal fertility is determined by the percentage of dead fetuses. Premature fetal death is the main reason for the need to re-cover animals. In horses, e.g. demonstrated that 100 mating resulted in kO foals and 2k premature dead fetuses, see E.P. Cunningham, Annual Meeting of the European Association of Animal Production (E.A.A.P.) Stockholm 1978.

Toevoeging van antigenen aan het semen van varkens en runderen heeft geresulteerd in een duidelijke verlaging van de premature foetusdood en aldus in een verhoging van de vruchtbaarheid.Addition of antigens to the semen of pigs and cattle has resulted in a marked decrease in premature fetal death and thus in an increase in fertility.

20 Dit kan ook worden verwacht bij paarden.20 This can also be expected in horses.

Een goed artikel omtrent de isolatie van leucocyten kan worden gevonden in: B^yum, A. Isolation of Lymphocytes, Granulocytes and Macrophages. Scand. J. Immunol. Vol. 5, Suppl. 5. 1976.A good article on leucocyte isolation can be found in: B ^ yum, A. Isolation of Lymphocytes, Granulocytes and Macrophages. Scand. J. Immunol. Full. 5, Suppl. 5.1976.

33

Aan een zaaddosxs voor varkens kan 1 cm van de als 25 boven verkregen leucocyten worden toegevoegd. Aan een zaaddosis voor 3 runderen kan ca 0,5 cm van de antxgenen worden toegevoegd en de xnse-minatie op een bekende wijze worden uitgevoerd. Als aangegeven door de experimentele resultaten werd een toename van ca 12# wat betreft de nestgrootte bereikt, hetgeen van groot belang mag worden geacht.1 cm of the leucocytes obtained as above can be added to a seed dose for pigs. About 0.5 cm of the antx genes can be added to a seed dose for 3 cattle and the xnse-mination can be carried out in a known manner. As indicated by the experimental results, an approx. 12 # increase in nest size was achieved, which may be considered of great importance.

30 Volgens de FAO bedraagt de varkenspopulatie van de wereld nl. ca 670 miljoen, waarvan ca 6θ miljoen fokzeugen.30 According to the FAO, the world's pig population is approximately 670 million, of which approximately 6θ million are breeding sows.

Aangenomen wordt, dat 10# van deze zeugen kunstmatig wordt gexnsemineerd, zodat bij een vruehtbaarheidstoename overeenkomend met een halve big/zeug, ca 3 miljoen extra biggen per jaar wor- 7906539 * a ’ 8 den verkregen.It is believed that 10 # of these sows are artificially inseminated, so that with an increase in fertility corresponding to half a piglet / sow, approximately 3 million additional piglets per year are obtained 7906539 * 8.

Stelt men de waarde van 1 big op ca f. 100,—, fln.n bedraagt de totale vooruitgang op wereldbasis ca f. 300.000.000,— pèr jaar.Set the value of 1 piglet to approx. 100, -, fln.n total progress on a worldwide basis is approx. F. 300,000,000 per year.

5 In landen, waarin kunstmatige inseminatie gebruike lijk is, is een toename van de nestgrootte van de orde van 12$ dus van groot belang.5 In countries where artificial insemination is customary, an increase in nest size of the order of $ 12 is therefore of great importance.

Vele experimenten zijn uitgevoerd om het minimale aantal spermatozoën voor een goede conceptie te bepalen. Uit de bijgevoeg-10 de tekening van Gr.W. Salisbury, N.L. van Denmark and J.R. Lodge,Many experiments have been performed to determine the minimum number of spermatozoa for good conception. From the attached 10 the drawing by Gr.W. Salisbury, N.L. by Denmark and J.R. Lodge,

Physiology of Reproduction and Artifical Insemination of Cattle. W.H.Physiology of Reproduction and Artifical Insemination of Cattle. W.H.

Friedmand & Co. San Francisco 1978 kan worden afgelezen, dat de waarschijnlijkheid van conceptie snel afneemt met een af nemend aantal geïnsemineerde spermatozoën. Over het algemeen wordt aangenomen, dat 15 8-12 miljoen spermatozoën moeten worden geïnsemineerd voor een be vredigende mate van conceptie, d.w.z. in de orden van 65 - 68$.Friedmand & Co. San Francisco 1978 can be read that the likelihood of conception decreases rapidly with a decreasing number of inseminated spermatozoa. It is generally believed that 8-12 million spermatozoa should be inseminated for a satisfactory degree of conception, i.e. in the order of 65-68 $.

Voor semendoses van ca 1 miljoen spermatozoën mag men per 10 inseminaties ten hoogste Π kalveren verwachten. Als blijkt uit het diagram zijn de X-as, de Y-as en de kromme geëxtra-20 poleerd in het traject beneden 2 miljoen spermatozoën/dosis.For semosections of approximately 1 million spermatozoa, a maximum of Π calves can be expected per 10 inseminations. As can be seen from the diagram, the X axis, the Y axis and the curve are extrapolated in the range below 2 million spermatozoa / dose.

Om te onderzoeken of toevoeging van antigenen een vermindering in het aantal spermatozoën/dosis kan compenseren, is het volgende experiment uitgevoerd: 10 Koeien van het Noorse roodbonte ras werden geïn- 25 semineerd met een semendosis met daarin ca. 1 miljoen spermatozoën, 9 waaraan 3 x 10 spermatozoën van varkens waren toegevoegd, d.w.z. sperma van een andere soort, hetgeen resulteerde in 9 goed geboren kalveren., hetgeen een zeer goed en onverwacht resultaat mag worden genoemd. Bij dit experiment waarbij stierensemen was gemengd met anti-30 genen in de vorm van varkens semen, bedroeg, de. drachtigheid en het aantal goed geboren kalveren ca 90$ (.hetgeen duidelijk uitgaat boven de schaal van het weergegeven diagram). Het.feit,, dat de mate van vruchtbaarheid volgens de uitvinding kan worden verhoogd is van groot ' economisch belang, hetgeen hieronder nog nader wordt, toegelicht.In order to investigate whether the addition of antigens can compensate for a reduction in the number of spermatozoa / dose, the following experiment was carried out: 10 Cows of the Norwegian red pied breed were inseminated with a semi-dose containing approximately 1 million spermatozoa, 9 of which 3 x 10 pig spermatozoa were added, ie sperm from another species, resulting in 9 well-born calves, which may be called a very good and unexpected result. In this experiment in which bull semen was mixed with anti-30 genes in the form of pig semen, the. pregnancy and the number of well-born calves about 90 $ (which clearly exceeds the scale of the diagram shown). The fact that the degree of fertility according to the invention can be increased is of great economic importance, which is further explained below.

35 Elk procent verbetering bij de produktie van runde- 7906539 9 .35 Each percent improvement in beef production 7906539 9.

ren kan volgens ΠΒ Lindstr^m, Uordiske Jordbruksforskeres Kongress i Oslo, July 1979 op ca f. 1,2Q per koe per jaar worden berekend.According to ΠΒ Lindstr. m, Uordiske Jordbruksforskeres Kongress i Oslo, July 1979, it is possible to run. 1,2Q per cow per year are calculated.

Volgens F.A.O. bedraagt de populatie aan melkkoeien in de V.S., Europa en Rusland ca 430 miljoen. In vele landen wordt 5 meer dan 75% van de koeien kunstmatig gelnsemineerd; neemt men echter aan, dat het gemiddelde voor de genoemde landen 50% bedraagt, dan betekent dit nog altijd dat ca 215 miljoen koeien elk jaar kunstmatig worden geinsemineerd.According to F.A.O. the population of dairy cows in the U.S., Europe and Russia is approximately 430 million. In many countries more than 75% of the cows are artificially inseminated; if, however, it is assumed that the average for the countries mentioned is 50%, this still means that approximately 215 million cows are artificially inseminated each year.

Een groot aantal kunstmatige inseminaties wordt te-10 vens uitgevoerd in Zuig Amerika, Australië en Azië. Bovendien wordt een groot aantal vleeskoeien elk jaar kunstmatig geinsemineerd. Berekend op 200 miljoen inseminaties per jaar betekent een verbetering van de conceptieverhouding van 2 1/2% een winst van ca f. 400.000.000,— per jaar.A large number of artificial inseminations are also performed in Suction America, Australia and Asia. In addition, a large number of beef cows are artificially inseminated every year. Calculated on 200 million inseminations per year, an improvement in the conception ratio of 2 1/2% means a gain of approx. 400,000,000 per year.

15 Verdere experimenten hebben aangetoond, dat toevoe ging van antigenen aan het semen of verdunde semen het percentage goed geboren jongen per inseminatie verhoogt. De antigenen kunnen worden toegevoegd aan het semen zelf of aan met een verdunningsmiddel verdund semen, maar om praktische redenen geniet het de voorkeur, 20 dat een antigeen wordt verwerkt in een verdunningsmiddel of in een bestanddeel, waaruit het verdunningsmiddel wordt bereid, b.v. door toevoeging van water. De antigenen kunnen ook in de vagina en/of de uterus worden gebracht alvorens een natuurlijke dekking of kunstmatige inseminatie plaatsvindt.Further experiments have shown that addition of antigens to the semen or diluted semen increases the percentage of well-born pups per insemination. The antigens can be added to the semen itself or to dilute semen diluted, but for practical reasons it is preferred that an antigen be incorporated in a diluent or a component from which the diluent is prepared, e.g. by adding water. The antigens can also be introduced into the vagina and / or the uterus before natural cover or artificial insemination.

» φ 7906539»Φ 7906539

Claims

Method according to claim 1, characterized in that antigens are added to the semose dose.

Method according to claim 1, characterized in that a dose of cellular antigens, such as white blood cells, lymphocytes or other foreign cells, including micro-organisms and cells from tissue cultures, is added to the semen. k. Method according to claim 1, characterized in that the semosection is mixed with seed of an animal of another species.

A method of treating semen, whether or not diluted with a diluent, characterized in that the seed 15 is mixed with at least one agent that stimulates the immunosystem of the female animal.

6. A method according to claim 5, characterized in that antigens are added to the semen.

Method according to claim 5, characterized in that cellular antigens, such as leucocytes, lymphocytes or other foreign cells, including microorganisms and cells from tissue cultures, are added to the semen.

Method according to claim 5, characterized in that the semen is mixed with semen from an animal of another species. Semen diluent based on buffers, nutrients, emulsifiers and other excipients, characterized in that it also contains at least one that stimulates the female immunosystem.

Semen diluent according to claim 9, characterized in that it contains antigens. II. Semen diluent according to claim 9, characterized in that the cellular antigens, such as leucocytes, lymphocytes or other foreign cells, including microorganisms and cells 7906539 * Λ. from tissue cultures, "contains *

12. A method of improving fertility by artificial or natural insemination, characterized in that a liquid is introduced into the vagina and / or the uterus, which contains at least one substance, which stimulates the female immune system.

Method according to claim 12, characterized in that it contains antigens.

14. A method according to claim 12, characterized in that a liquid containing cellular antigens such as leucocytes, lymphocytes or other foreign cells, such as micro-organisms and cells from tissue cultures, is introduced.

A method according to claim 12, characterized in that a liquid is added which contains semen from an animal of a different species.

16. Artificial insemination material which, in addition to conventional semen, contains a substance which stimulates the immune system of the female animal. 7906539