NL192917C - Stable pharmaceutical preparation containing granulocyte colony-stimulating factor. - Google Patents

Stable pharmaceutical preparation containing granulocyte colony-stimulating factor.

Info

Publication number
NL192917C
NL192917C NL8701640A NL8701640A NL192917C NL 192917 C NL192917 C NL 192917C NL 8701640 A NL8701640 A NL 8701640A NL 8701640 A NL8701640 A NL 8701640A NL 192917 C NL192917 C NL 192917C
Authority
NL
Grant status
Grant
Patent type
Prior art keywords
csf
pharmaceutical preparation
serum albumin
stable pharmaceutical
characterized
Prior art date
Application number
NL8701640A
Other languages
Dutch (nl)
Other versions
NL192917B (en )
NL8701640A (en )
Inventor
Minoru Machida
Original Assignee
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Grant date

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193Colony stimulating factors [CSF]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38Cellulose; Derivatives thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein

Description

1 192917 1 192917

Stabiele farmaceutische bereiding die granulocytkolonie-stimulerende factor bevat Stable pharmaceutical preparation containing granulocyte colony-stimulating factor

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een stabiele farmaceutische bereiding die als actief bestanddeel het fysiologisch actieve polypeptide granulocytkolonie-stimulerende factor en een stabiliserende 5 stof of adsorptie-voorkomende stof omvat. The present invention relates to a stable pharmaceutical preparation comprising as active ingredient the physiologically active polypeptide is granulocyte colony-stimulating factor, and a stabilizing substance 5 or adsorption-preventing substance.

Deze bereiding is bekend uit de niet-voorgepubliceerde Europese octrooiaanvrage 0.215.126 van oudere rang. This preparation is known from the non pre-published European Patent Application No. 0,215,126 of earlier rank. Bij de bekende bereiding wordt gebruik gemaakt van serumalbumine van muizen. In the known preparation, use is made of murine serum albumin.

Om granulocytkolonie-stimulerende factor in een farmaceutische bereiding toe te passen, is het wenselijk dat verlies of inactivatie van de factor - het actieve bestanddeel - door adsorptie aan de wand van de 10 houder waarin de bereiding is aangebracht, of door associatie, polymerisatie of oxidatie van de factor, wordt vermeden. In order granulocyte colony-stimulating factor in to apply a pharmaceutical preparation, it is desirable that the loss or inactivation of the factor - the active component - by adsorption to the wall of the 10 container in which the preparation has been applied, or by association, polymerization or oxidation the factor is avoided.

Deze doelstelling wordt bereikt door de bereiding volgens de onderhavige uitvinding, die is gekenmerkt doordat de bereiding als stabiliserende stof of adsorptie-voorkomende stof ten minste één stof omvat die is gekozen uit de groep bestaande uit een farmaceutisch aanvaardbare niet-eiwitachtige oppervlakte-actieve 15 stof, een sacharide, een niet-eiwitachtige verbinding met een hoog moleculegewicht, en een eiwit, onder uitsluiting van serumalbumine van muizen. This object is achieved by the preparation according to the present invention, which is characterized in that the preparation as a stabilizing agent, or adsorption-preventing substance is at least one substance which is selected from the group consisting of a pharmaceutically acceptable non-proteinaceous surface-active 15 substance , a saccharide, a non-proteinaceous compound having a high molecular weight, and a protein, in the absence of serum albumin from mice.

Uit de Britse octrooiaanvrage 2.016.477 is een uit urine afgezonderd HGI-glycoproteïne bekend, dat tegen virussen kan worden gestabiliseerd door de aanwezigheid van albumine of urinaire eiwitten. From the British patent application 2,016,477 is a urinary separated HGI-glycoprotein is known, which can be stabilized against viruses by the presence of albumin or urinary proteins. Het HGI-glycoproteïne verschilt van de granulocytkolonie-stimulerende factor. The HGI-glycoprotein differs from the granulocyte colony-stimulating factor.

20 Uit de Europese octrooiaanvrage 0.162.332 is een werkwijze voor het stabiliseren van een fysiologisch actieve stof, zoals interferon, interieukine 2, lysozym of een antilichaam-complement bekend, waarbij een gemodificeerde gelatine wordt toegepast. 20 From the European Patent Application No. 0162332 is a method for stabilizing a physiologically active substance such as interferon, interleukin-2, lysozyme, or an antibody-complement is known, in which a modified gelatin is applied. Enkele met albumine gepaard gaande problemen kunnen hierdoor worden vermeden. Some of the problems associated with albumin can thus be avoided.

Uit de Europese octrooiaanvrage 0.178.576 is een werkwijze en een samenstelling voor het stabiliseren 25 van erytropoiëtine bekend. From European patent application No. 0178576 is a method and a composition for stabilizing 25 of erythropoietin is known. Tenslotte is uit de Europese octrooiaanvrage 0.098.110 een langdurig werkzame samenstelling van een fysiologisch actief polypeptide of glycoproteïne bekend, die wordt bereid door te koppelen aan een kunststof-copolymeer. Finally, from the European patent application 0,098,110 a long-acting composition of a physiologically active polypeptide or glycoprotein is known, which is prepared by linking it to a synthetic copolymer.

Chemotherapie wordt toegepast als één van de werkwijzen voor het behandelen van verschillende infectieuze ziekten, maar onlangs is gevonden dat chemotherapie enkele ernstige klinische problemen 30 veroorzaakt, zoals het ontstaan van geneesmiddel-resistente organismen, het veranderen van de veroorzakende organismen, en aanzienlijke neveneffecten. Chemotherapy is used as one of the methods for the treatment of various infectious diseases, but has recently been found that chemotherapy causes some serious clinical problems 30, such as the emergence of drug-resistant organisms, change of causative organisms, and significant side effects. Om de problemen te vermijden die gepaard gaan met chemotherapie waarbij de toepassing van therapeutische stoffen zoals antibiotica en bactericide stoffen is betrokken, zijn pogingen ondernomen om gebruik te maken van een stof die de profylactische vermogens van de gastheer van een infectie veroorzakend organisme activeert, en daardoor een volledige oplossing 35 voor de hierboven vermelde problemen van chemotherapie verschaft. In order to avoid the problems that accompany with chemotherapy involving the use of therapeutic agents such as antibiotics and bactericidal substances is concerned, efforts have been made to make use of a substance that activates the prophylactic capabilities of the host of an infection-causing organism and thereby 35 provides a complete solution to the problems of chemotherapy mentioned above. Aangenomen wordt dat van de verschillende profylactische vermogens van de gastheer, de fagocytische bactericide werking van leukocy-ten haar sterkste invloed heeft tijdens de beginperiode van een bacteriêie infectie, en derhalve wordt aangenomen dat het belangrijk is de tegen infectie beschermende vermogens van de gastheer te verhogen door het bevorderen van de groei van neutrofielen en hun differentiatie tot gerijpte toestand. It is assumed that the various prophylactic capabilities of the host, the phagocytic bactericidal action of leukocy-at its strongest influence in the initial period of a bacteriêie infection, and is therefore believed that it is important to increase the against infection protecting capabilities of the host by promoting the growth of neutrophils and their differentiation into mature state. Een 40 granulocytkolonie-stimulerende factor (G-CSF) is één van de zeer nuttige stoffen die dergelijke werkingen vertonen, en de houder van het onderhavige octrooi heeft eerder een octrooiaanvrage ingediend met betrekking tot een tegen infectie beschermend middel waarbij wordt gebruik gemaakt van G-CSF (Japanse octrooiaanvrage 23.777/1985). A 40 granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) is one of the very useful substances that exhibit such actions, and the holder of the present patent application has previously filed a patent application with respect to a counter-infection protective agent which use is made of G- CSF (Japanese patent application No. 23,777 / 1985).

Zoals boven aangegeven brengt de chemotherapie, zoals deze tegenwoordig wordt toegepast, verschil-45 lende onvermijdbare problemen met zich mee en intensief onderzoek is uitgevoerd om een geneesmiddel te kunnen gebruiken dat in staat is om de profylactische werkingen van de gastheer of de persoon die is geïnfecteerd, te activeren. As indicated above, brings the chemotherapy, as it is used today, a difference of-45 lumbar unavoidable problems with it, and intensive research has been carried out in order to use a drug that is capable of the prophylactic effects of the host or the person who is infected to activate.

Het is waarschijnlijk onnodig te vermelden dat G-CSF zelf de mogelijkheid heeft de profylactische functies van de gastheer te activeren en het is ook gebleken dat de G-CSF een grotere therapeutische 50 werking vertoont bij klinische toepassingen indien het wordt gebruikt in combinatie met een stof die de profylactische mogelijkheden van de gastheer activeert. It is likely to mention unnecessary that G-CSF itself has the ability to activate the prophylactic functions of the host and it has also been found that G-CSF exhibits greater therapeutic 50 functioning in clinical applications if it is used in combination with a substance that activates the prophylactic capabilities of the host.

G-CSF wordt toegepast in een zeer kleine hoeveelheid en een farmaceutisch preparaat dat 0,1-500 μg (bij voorkeur 5-50 pg) G-CSF bevat wordt gewoonlijk toegediend bij een doseringssnelheid van 1-7 keer per week per volwassene. G-CSF is used in a very small amount and a pharmaceutical preparation containing 0.1-500 ug (preferably 5-50 pg) contains G-CSF is usually administered at a dose rate of 1-7 times per week per adult. G-CSF heeft echter de neiging te worden geadsorbeerd aan de wand van de 55 houder zoals een injectie-ampul of spuit. G-CSF, however, has the tendency to be adsorbed to the wall of the container 55, such as an injection syringe, or ampoule. Wanneer het geneesmiddel ais een injectie wordt toegepast in een vorm als een waterige oplossing, zal het dan ook worden geadsorbeerd aan de wand van de houder zoals een ampul of een spuit. When the drug ais an injection is used in a form as an aqueous solution, it will therefore be adsorbed to the wall of the container such as a vial or a syringe. Dit resulteert in het falen van G-CSF om een volledige activiteit te geven als een 192917 2 farmaceutisch middel, of maakt het verwerken noodzakelijk van G-CSF in een meer dan noodzakelijke hoeveelheid om te compenseren voor eventuele verlies door adsorptie. This results in the failure of G-CSF to provide a full activity as a pharmaceutical agent 2 192 917, or makes the necessary processing of G-CSF in a more than necessary amount to compensate for any loss due to adsorption.

Verder is G-CSF labiel en sterk onderhevig aan omgevingsfactoren zoals temperatuur, vochtigheid, zuurstof en ultraviolette stralen. Further, G-CSF is labile and highly susceptible to environmental factors such as temperature, humidity, oxygen and ultraviolet rays. Door de werking van dergelijke factoren ondergaat G-CSF fysische of 5 chemische veranderingen zoals associatie, polymerisatie en oxidatie en gaat zodoende een groot gedeelte van de activiteit verloren. By the action of such factors, G-CSF undergoes physical or chemical changes such as 5 association, polymerization and oxidation and thus is lost a large part of the activity. Deze verschijnselen maken het moeilijk om een volledige voltooiing van een therapeutische behandeling te verzekeren door de toediening van een zeer kleine hoeveelheid G-CSF op een zeer nauwkeurige manier. These symptoms make it difficult to ensure full completion of a therapeutic treatment by administering a very small amount of G-CSF in a very precise way.

Het is daarom noodzakelijk een stabiel farmaceutisch preparaat van G-CSF te ontwikkelen dat volledig is 10 beschermd tegen een daling van de activiteit van het werkzame bestanddeel hiervan. It is therefore necessary to develop a stable pharmaceutical preparation of G-CSF which is fully protected against a 10 decrease in the activity of the active ingredient thereof. Dit is de belangrijkste doelstelling volgens de onderhavige uitvinding waarmee een stabiel farmaceutisch preparaat van G-CSF wordt verkregen. This is the main object of the present invention which provides a stable pharmaceutical preparation of G-CSF is obtained.

Het G-CSF dat aanwezig is in het farmaceutisch preparaat volgens de onderhavige uitvinding kan worden verkregen volgens een van de werkwijzen zoals beschreven in de beschrijvingen van de Japanse 15 octrooiaanvragen 153.273/1984, 269.455/1985, 269.456/1985, 270.838/1985 en 270.839/1985. The G-CSF which is present in the pharmaceutical composition of the present invention can be obtained by any of the methods as described in the specifications of Japanese 15 Patent Application 153,273 / 1984, 269,455 / 1985, 269,456 / 1985, 270,838 / 1985 and 270,839 / 1985. Zo kan bijvoorbeeld een menselijk G-CSF worden bereid door kweken van een celstam (CNCM verwijzingsnummer 1-315 of I-483) verzameld uit tumorcellen van patiënten met kanker aan orale holte of door tot expressie brengen van een recombinant DNA (bereid met behulp van voor menselijk G-CSF coderend gen) in een geschikte gastheercel (zoel E. co|i, C 127-cel of ovariumcellen van een Chinese hamster). For example, a human G-CSF can be prepared by cultivating a cell strain (CNCM reference number 1-315 or I-483) were collected from tumor cells of patients with oral cavity cancer, or by expressing a recombinant DNA (prepared using for human G-CSF encoding gene) in an appropriate host cell (E. coli zoel | i, C 127 cell or ovary cells of a Chinese hamster).

20 Elk menselijk G-CSF, dat tot een hoge graad is gezuiverd, kan worden gebruikt als het G-CSF, dat aanwezig is in het farmaceutisch preparaat volgens de onderhavige uitvinding. 20 Each human G-CSF, which is purified to a high degree, can be used as the G-CSF, which is present in the pharmaceutical composition of the present invention. Bij voorkeur zijn menselijke G-CSF's stoffen die zijn verkregen door afscheiden van de bovenstaande vloeistof van de cultuur van een menseiijk G-CSF producerende cel, en een polypeptide of glycoprotei'ne met de menselijke G-CSF activiteit verkregen door transformeren van een gastheer met een recombinante vector met hierin opgenomen een 25 gen dat codeert voor een polypeptide met de menselijke G-CSF activiteit. Preferably, human G-CSF's fabrics which have been obtained by separation of the supernatant of the culture of a menseiijk G-CSF producing cell, and a polypeptide or glycoprotei'ne with the human G-CSF activity is obtained by transforming a host with a recombinant vector having incorporated therein a gene 25 encoding a polypeptide having the human G-CSF activity.

Twee in het bijzonder de voorkeur verdienende voorbeelden van menselijk G-CSF zijn hieronder vermeld: (1) menselijk G-CSF met de volgende fysisch-chemische eigenschappen: a) moleculegewicht: ongeveer 19.000 ± 1.000, gemeten volgens elektroforese door een natriumdodecyl-30 sulfaat - polyacrylamidegei, b) isoëlektrisch punt: met ten minste één van de drie isoëlektrische punten, pl = 5,5 ± 0,1, pi = 5,8 ± 0,1, en pl = 6,1 ± 0,1, c) ultraviolette absorbtie: met een maximale absorbtie bij 280 nm en een minimale absorptie bij 250 nm, d) aminozuurvolgorde van de 21 residu's met eindstandige N: H2N-Thr-Pro-Leu-Gly-Pro-Ala-Ser-Ser-35 Leu-Pro-GIn -Ser-Phe-Leu-Leu-Lys-Cys-Leu-Glu-GIn-Val- (2) menselijk G-CSF met een polypeptide met de menselijke granulocyt stimulerende factor-activiteit, weergegeven door de volledige of gedeeltelijke aminozuurvolgorde zoals hierna is vermeld, of een glycoproteïne met zowel het vermelde polypeptide als een suikerketendeel: (Met)„ Thr Pro Leu Gly Pro Ala Two particularly preferable examples of human G-CSF are mentioned below: (1) human G-CSF having the following physico-chemical properties: a) Molecular weight: about 19,000 ± 1,000 as measured by electrophoresis through a sodium dodecyl-30 sulfate - polyacrylamidegei, b) isoelectric point: having at least one of the three isoelectric points, pl = 5.5 ± 0.1, pI = 5.8 ± 0.1, and pl = 6.1 ± 0.1, c ) ultraviolet absorption: having a maximum absorption at 280 nm and a minimum absorption at 250 nm, d) amino acid sequence of the 21 residues of N-terminal: H2 N-Thr-Pro-Leu-Gly-Pro-Ala-Ser-Ser-35 Leu -Pro-Gln-Ser-Phe-Leu-Leu-Lys-Cys-Leu-Glu-Gln-Val (2) human G-CSF with a polypeptide having the human granulocyte stimulating factor activity, represented by the total or partial amino acid sequence as is set out below, or a glycoprotein having both said polypeptide and a sugar chain portion: (Met) "Thr Pro Leu Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro 40 Gin Ser Phe Leu Leu Lys Cys Leu Glu Gin Val Ser Ser Leu Pro 40 Gln Ser Phe Leu Leu Lys Cys Leu Glu Gln Val

Arg Lys He Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Arg Gln Lys He Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gln

Glu Lys Leu (Val Ser Glu)m Cys Ala Thr Tyr Lys Glu Lys Leu (Val Ser Glu) m Cys Ala Thr Tyr Lys

Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Gly Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Gly

His Ser Leu Gly He Pro Trp Ala Pro Leu Ser 45 Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly His Ser Leu Gly He Pro Trp Ala Pro Leu Ser 45 Ser Cys Pro Ser Gln Ala Leu Gln Leu Ala Gly

Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Cys Leu Ser Gln Leu His Ser Gly Leu Phe Leu

Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly He Tyr Gly Gln Leu Leu Gln Ala Leu Gly Glu Hey

Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu

Gin Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr He 50 Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Gln Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr He Trp Gin Gin 50 with Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro

Ala Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Ala Leu Gln Pro Thr Gln Gly Ala Pro Ala With

Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Gly Phe Ala Ser Ala Phe Gln Arg Arg Ala Gly Gly

Val Leu Val Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Leu Val Leu Val Ala Ser His Leu Gln Ser Phe Leu

Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala 55 Gin Pro (mits m is 0 of n is 0 of 1). Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala 55 Gln Pro (provided that m is 0 or n is 0 or 1).

Voor verdere bijzonderheden van de werkwijze ter bereiding van deze twee soorten G-CSF wordt 3 192917 verwezen naar de Japanse octrooipublicaties 153.273/1984, 269.455/1985, 269.456/1985, 270.838/1985 en 270.839/1985, alle ingediend ten name van de houder van de onderhavige octrooiaanvrage. For further details of the process for preparing these two types of G-CSF 3 192917 reference is made to Japanese Patent Publication 153,273 / 1984, 269,455 / 1985, 269,456 / 1985, 270,838 / 1985 and 270,839 / 1985, all filed in the name of the holder of the present patent application.

Een andere werkwijze die kan worden toegepast bestaat uit het uitvoeren van een samensmelting van een G-CSF-producerende cel met een zelf-profilerende, kwaadaardige tumorcel en kweken van het 5 verkregen hybridoma in aanwezigheid of afwezigheid van een mitogene stof. Another method that can be employed consists of performing fusion of a G-CSF producing cell with a self-proliferating malignant tumor cell and cultivating the resulting hybridoma in 5 the presence or absence of a mitogen.

De menselijke G-CSF-houdende verkregen oplossing kan worden bewaard in een bevroren toestand na verder te zijn gezuiverd en indien nodig ingedampt volgens een op zich bekende techniek. The human G-CSF containing solution obtained may be stored in a frozen state after being further purified and concentrated by evaporation, if necessary, by a per se known technique. Anderzijds kan de oplossing worden bewaard na te zijn gedehydrateerd door technieken als vriesdrogen. Alternatively, the solution may be stored after being dehydrated by techniques such as freeze-drying.

Alle aldus bereide menselijke G-CSFs kunnen worden verwerkt zoals vermeld volgens de onderhavige 10 uitvinding teneinde stabiel G-CSF houdende farmaceutische preparaten te verkrijgen. All the thus-prepared can be processed human G-CSFs as mentioned according to the present invention 10 in order to obtain stable G-CSF containing pharmaceutical preparations.

Met name te noemen voorbeelden van het oppervlakte-actief middel dat wordt toegepast ter verkrijging van het stabiele G-CSF houdend farmaceutisch preparaat volgens de onderhavige uitvinding zijn hierna vermeld: niet-ionische oppervlakte-actieve middelen met HLB van 6-18 zoals sorbitan-alifatische zure esters (zoals sorbitanmonocaprylaat, sorbitanmonolauraat en sorbitanmonopalmitaat), glycerol-alifatische zure 15 esters (zoals glycerolmonocaprilaat, glycerolmonomyristaat, en glycerolmonostearaat), polyglycerol- alifatische zure esters (zoals decaglycerylmonostearaat, decaglyceryldistearaat en decaglycerylmonolinole-aat), polyoxiethyleensorbitan-alifatisch zure esters (zoals polyoxiethyleensorbitanmonolauraat, polyoxiethy-leensorbitanmonooleaat, polyoxiethyleensorbitanmonostearaat, polyoxiethyleensorbitanmonopalminaat, polyoxiethyleensorbitantrioleaat, en polyoxiethyleensorbitantristearaat), polyoxiethyleensorbitolalifatische zure 20 esters (zoals polyoxiethyleensorbitoltetrastearaat en In particular, referred to as examples of the surface-active agent which is employed in order to obtain the stable G-CSF containing pharmaceutical preparation are given below in accordance with the present invention: non-ionic surface-active agents with HLB of 6-18 such as sorbitan aliphatic acid esters (such as sorbitan monocaprylate, sorbitan monolaurate and sorbitan monopalmitate), glycerin-aliphatic acid 15 esters (such as glycerol monocaprylate, glycerolmonomyristaat, and glycerol monostearate), polyglycerol aliphatic acid esters (such as decaglycerylmonostearaat, decaglyceryl distearate, and decaglycerylmonolinole-oleate), polyoxyethylene sorbitan aliphatic acid esters (such as polyoxiethyleensorbitanmonolauraat, polyoxiethy-leensorbitanmonooleaat, polyoxiethyleensorbitanmonostearaat, polyoxiethyleensorbitanmonopalminaat, polyoxiethyleensorbitantrioleaat, and polyoxiethyleensorbitantristearaat), 20 polyoxiethyleensorbitolalifatische acid esters (such as polyoxiethyleensorbitoltetrastearaat and polyoxiethyleensorbitoltetraoleaat), polyethyleenglycerol-alifatisch zure esters (zoals polyoxiethyieenglycerylmonostearaat), polyethyieenglycol-alifatisch zure esters (zoals polyethyleenglycoldistearaat), polyoxiethyleenalkylethers (zoals poiyoxiethyleenlaurylether), polyoxie-thyleenpolyoxipropyleenalkylethers (zoals polyoxiethyleenpolyoxipropyleenglycolether, polyoxiethyleenpo-lyoxipropyleenpropylether, en polyoxiethyleenpolyoxipropyleencetylether), polyoxiethyieenalkylfenylethers 25 (zoals polyoxiethyleennonylfenylether), polyoxi-geëthyleerd recinusolie, gepolyoxiethyleerd geharde recinusolie (gepolyoxiethyleerde gehydrogeneerde recinusolie), gepolyoxiethyleerde bijenwasderivaten (zoals gepolyoxiethyleerde sorbitolbijenwas), polyoxiethyleen-lanolinederivaten (zoals polyoxiethylen-lanoline), en polyoxiethyleen-alifatische zuuramiden (zoals polyethyleenstearinezuuramide); polyoxiethyleensorbitoltetraoleaat), polyethylene glycerin aliphatic acid esters (such as polyoxiethyieenglycerylmonostearaat), polyethyieenglycol-aliphatic acid esters (such as polyethylene glycol distearate), polyoxyethylene alkyl ethers (such as poiyoxiethyleenlaurylether), polyoxie-thyleenpolyoxipropyleenalkylethers (such as polyoxiethyleenpolyoxipropyleenglycolether, polyoxiethyleenpo-lyoxipropyleenpropylether, and polyoxiethyleenpolyoxipropyleencetylether), polyoxiethyieenalkylfenylethers 25 (as polyoxiethyleennonylfenylether) , polyoxyethylene-ethylated castor oil, hardened castor oil gepolyoxiethyleerd (polyoxyethylated hydrogenated castor oil), polyoxyethylated beeswax derivatives (such as polyoxyethylated sorbitolbijenwas), polyoxyethylene lanolin derivatives (such as polyoxiethylen-lanolin), and polyoxyethylene aliphatic acid amides (such as polyethyleenstearinezuuramide); niet-ionische oppervlakte-actieve middelen zoals alkylzwavelzure zouten met een C10-C18 alkylgroep (zoals natriumcetyl-30 sulfaat, natriumlaurylsulfaat en natriumleylsulfaat), polyoxiethyleenalkylether zwavelzure zouten waarin het gemiddeld molair aantal ethyleenoxide-additie 2-4 bedraagt en de alkylgroep 10-18 koolstofatomen heeft (zoals polyoxiethyleennatriumlaurylsulfaat), zouten van alkylsulfobamsteenzure esters waarin de alkylgroep 8-18 koolstofatomen heeft (zoals natriumlaurylsulfobamsteenzure ester); non-ionic surface-active agents such as alkylzwavelzure salts having a C10-C18 alkyl group (such as natriumcetyl-30 sulfate, sodium lauryl sulfate and natriumleylsulfaat), polyoxyethylene alkyl ether sulfuric acid salts wherein the average molar number of ethylene oxide addition is 2-4 and the alkyl group has 10-18 carbon atoms has (such as polyoxiethyleennatriumlaurylsulfaat), salts of alkylsulfobamsteenzure esters in which the alkyl group has 8-18 carbon atoms (such as natriumlaurylsulfobamsteenzure ester); en natuurlijke oppervlakte-actieve stoffen zoals lecithine, glycerofosfolipide, sfingofosfolipide (zoals sfingomyeline) en saccharose-alifatisch 35 zure esters waarin het alifatisch zuur 12-18 koolstofatomen heeft. and natural surface active agents such as lecithin, glycerophospholipid, sphingophospholipid (such as sphingomyelin), and sucrose aliphatic acid esters 35 in which the aliphatic acid has 12-18 carbon atoms. Deze oppervlakte-actieve stoffen kunnen natuurlijk onafhankelijk van elkaar of als mengsel worden toegepast. These surface-active agents can, of course, be used independently of each other or as a mixture.

De bovenvermelde oppervlakte-actieve stoffen worden bij voorkeur toegepast in een hoeveelheid van 1-10.000 gewichtsdelen per gewichtsdeel G-CSF. The above-mentioned surface-active substances are preferably used in an amount of 1-10,000 parts by weight per part by weight of G-CSF.

Het saccharide dat wordt toegepast bij het stabiliseren van het G-CSF houdend farmaceutisch preparaat 40 volgens de onderhavige uitvinding kan worden gekozen uit monosacchariden, oligosacchariden en polysacchariden evenals fosfaatesters en nucleotidederivaten hiervan, zo lang ze farmaceutisch acceptabel zijn. The saccharide to be used can be selected in the stabilization of the G-CSF containing pharmaceutical preparation 40 according to the present invention from monosaccharides, oligosaccharides and polysaccharides as well as phosphate esters and nucleotide derivatives thereof so long as they are pharmaceutically acceptable. Met name te noemen voorbeelden zijn hieronder vermeld te weten: driewaardige en hogere suikeralco-holen zoals glycerol, erythrytol, arabitol, xylitol, sorbitol en mannitol; With Typical examples are listed below namely: suikeralco trivalent and higher alcohols such as glycerol, erythrytol, arabitol, xylitol, sorbitol and mannitol; zure suikers zoals glucuronzuur, iduronzuur, neuraminezuur, galaturonzuur, gluconzuur, mannuronzuur, ketoglycolzuur, ketogalactonzuur en 45 ketogulonzuur; acidic sugars such as glucuronic acid, iduronic acid, neuraminic acid, galaturonzuur acid, gluconic acid, mannuronic acid, ketoglycolzuur, ketogalactonzuur 45 and ketogulonic acid; hyaluronzuur en zouten hiervan, chondroitinesulfaat en zouten hiervan, heparine, inuline, chitine en derivaten hiervan, chitosan en derivaten hiervan, dextrine, dextran met een gemiddeld molecule-gewicht van 5.000-150.000 en alginezuur en zouten hiervan. hyaluronic acid and salts thereof, chondroitin sulfate and salts thereof, heparin, inulin, chitin and derivatives thereof, chitosan and derivatives thereof, dextrin, dextran with an average molecular weight of from 5000 to 150,000, and alginic acid and salts thereof. Al deze sacchariden kunnen met voordeel worden toegepast in een onafhankelijke vorm of als mengsel. All of these saccharides may be used to advantage in an independent form or as a mixture.

De bovenvermelde sacchariden worden bij voorkeur toegepast in een hoeveelheid van 1-10.000 50 gewichtsdelen per gewichtsdeel G-CSF. The above-mentioned saccharides are preferably used in an amount of 1-10,000 50 parts by weight per part by weight of G-CSF.

Met name te noemen voorbeelden van het toe te passen eiwit bij het stabiliseren van G-CSF houdende farmaceutische preparaten volgens de onderhavige uitvinding omvatten menselijk serumalbumine, menselijk serum globuline, gelatine, met zuur-behandelde gelatine (met een gemiddeld moleculegewicht van 7.000-100.000) met een alkalische stof behandelde gelatine (gemiddeld moleculegewicht 7.000-100.000) 55 en collageen. In particular, referred to as examples of the protein to be used in the stabilization of G-CSF containing pharmaceutical preparations according to the present invention include human serum albumin, human serum globulin, gelatin, acid-treated gelatin (having an average molecular weight of from 7000 to 100,000) with an alkali-treated gelatin (average molecular weight 7000-100000) 55 and collagen. Het zal duidelijk zijn dat deze eiwitten onafhankelijk van elkaar kunnen worden toegepast of als mengsel. It will be appreciated that these proteins may be used independently of each other or as a mixture.

De bovenvermelde eiwitten worden bij voorkeur toegepast in hoeveelheden van 1-20.000 delen per 192917 4 gewichtsdeel G-CSF. The above-mentioned proteins are preferably used in amounts of 1-20,000 parts per 192917 4 part by weight of G-CSF.

Typische voorbeelden van de verbinding met een hoog moleculegewicht, toe te passen bij het stabiliseren van G-CSF houdende farmaceutische preparaten volgens de onderhavige uitvinding omvatten: natuurlijke polymeren zoals hydroxipropylcellulose, hydroximethylcellulose, natriumcarboximethylcellulose en 5 hydroxiethylcellulose en synthetische polymeren zoals polyethyleencellulose (moleculegewicht = 300-6.000), polyvinylalcolhol (moleculegewicht = 20.000-100.000) en polyvinylpyrrolidon (moleculegewicht = 20.000- 100.000). Typical examples of the compound having a high molecular weight, to be used in the stabilization of G-CSF containing pharmaceutical preparations according to the present invention include: natural polymers such as hydroxypropylcellulose, hydroxymethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and 5, hydroxyethylcellulose, and synthetic polymers such as polyethylene cellulose (molecular weight = 300- 6,000), polyvinyl alcolhol (molecular weight = 20,000-100,000), and polyvinylpyrrolidone (molecular weight = 20.000- 100,000). Het zal duidelijk zijn dat deze verbindingen met een hoog moleculegewicht enkelvoudig kunnen worden toegepast of in combinatie. It will be appreciated that these compounds having a high molecular weight can be used singly or in combination.

De verbindingen met een hoog moleculegewicht zoals bovenvermeld worden bij voorkeur toegepast in 10 hoeveelheden van 1-20.000 gewichtsdelen per gewichtsdeel G-CSF. The compounds with a high molecular weight as mentioned above are preferably used in amounts of from 10 1-20,000 parts by weight per part by weight of G-CSF.

Naast het oppervlakte-actieve middel, saccharide, eiwit of verbinding met een hoog moleculegewicht zoals bovenvermeld, kan ten minste één stof gekozen uit de groep bestaande uit een aminozuur, een zwavelhoudend reductiemiddei en een antioxidatiemiddel, ook hierin worden opgenomen bij het bereiden van het G-CSF houdende farmaceutische preparaat volgens de uitvinding. In addition to the surfactant, saccharide, protein, or compound having a high molecular weight as mentioned above, may be at least one substance selected from the group consisting of an amino acid, a sulfur-containing reductiemiddei and an anti-oxidant, may also be included herein in the preparation of the G -CSF-containing pharmaceutical composition according to the invention. Voorbeelden van de toe te 15 passen aminozuren zijn glycine, threonine, tryptofan, lysine, hydroxilysine, histidine, arginine, cysteTne, cystine en methionine. Examples of the allow 15 to modify amino acids are glycine, threonine, tryptophan, lysine, hydroxylysine, histidine, arginine, cysteine, cystine, and methionine. Voorbeelden van zwavelhoudende reductiemiddelen omvatten: N-acetylcysteTne, N-acetylhomocysteïne, thiotinezuur, thiodiglycol, thioethanolamine, thioglycerol, thiosorbitol, thioglycolzuur en zouten hiervan, natriumthiosulfaat, natriumwaterstofsuifiet, natriumpyrosulfiet, natriumsulfiet, thiomelkzuur, dithiothreïtol, glutathion en een mild zwavelhoudend reductiemiddei met een sulfhydrylgroep zoals een 20 thioalkaanzuur met 1-7 koolstofatomen. Examples of sulfur-containing reducing agents include: N-acetylcysteTne, N-acetylhomocysteïne, thiotinezuur, thiodiglycol, thioethanolamine, thioglycerol, thiosorbitol, thioglycolic acid and salts thereof, sodium thiosulfate, natriumwaterstofsuifiet, sodium pyrosulfite, sodium sulfite, thiolactic acid, dithiothreitol, glutathione, and a mild sulfur-containing reductiemiddei with a sulfhydryl group 20, such as a thioalkanoic acid of 1-7 carbon atoms. Voorbeelden van anti-oxidatiemiddelen omvatten erythorbinezuur, dibutylhydroxitolueen, butylhydroxianisol, dk-oc-tocoferol, tocoferolacetaat, L-ascorbinezuur en zouten hiervan, L-ascorbinezuurpaiminaat, L-ascominezuurstearaat, triamylgallaat, propyigallaat en chelaterende middelen zoals dinatriumethyleendiaminetetra-acetaat (EDTA), natriumpyrofosfaat en natriummetafosfaat. Examples of anti-oxidants include erythorbic acid, dibutylhydroxytoluene, butylhydroxyanisol, dk-oc-tocopherol, tocopherol acetate, L-ascorbic acid and salts thereof, L-ascorbinezuurpaiminaat, L-ascominezuurstearaat, triamylgallaat, propyigallaat and chelating agents such as disodium ethylenediaminetetraacetate (EDTA), sodium pyrophosphate and sodium metaphosphate.

De bovenvermelde aminozuren, zwavelhoudende reductiemiddelen en anti-oxidatiemiddelen of mengsels 25 hiervan worden bij voorkeur toegepast in hoeveelheden van 1-10.000 gewichtsdelen per gewichtsdeel G-CSF. The above-mentioned amino acids, sulfur-containing reducing agents and antioxidants or mixtures 25 thereof are preferably used in amounts of 1-10,000 parts by weight per part by weight of G-CSF.

Om het stabiele G-CSF-houdende preparaat volgens de onderhavige uitvinding te formuleren in een geschikte doseringsvorm kan een of meer van de volgende stoffen hierin worden verwerkt: een verdun-ningsmiddel, oplosbaar makende hulpstof, een isotoon middel, een excipieus, een pH-modificerend middel, 30 een gelijkmatig makend middel en een buffer. In order to formulate the stable G-CSF containing preparation of the present invention in a suitable dosage form to one or more of the following substances can be incorporated therein: a diluent, solubilizing aid, an isotonic agent, a excipieus, a pH- modifier, 30 a uniformly agent and a buffer.

Het gestabiliseerde G-CSF-houdende farmaceutische preparaat volgens de onderhavige uitvinding kan op verschillende wijzen worden geformuleerd voor orale toediening of voor parenterale toediening zoals door injectie en verschillende doseringsvormen kunnen worden toegepast afhankelijk van de specifieke wijze van toediening. The stabilized G-CSF containing pharmaceutical preparation of the present invention can be formulated in various ways for oral administration or for parenteral administration such as by injection, and various dosage forms can be used depending on the particular mode of administration.

35 Met name te noemen doseringsvormen omvatten: de vormen die zijn bedoeld voor orale toediening zoals tabletten, pillen, capsules, granules en suspensies; 35 In particular, to mention include dosage forms: the forms intended for oral administration such as tablets, pills, capsules, granules and suspensions; oplossingen, suspensie en gevriesdroogde preparaten die in wezen zijn bedoeld voor intraveneuze injectie, intramusculaire injectie, subcutane injectie en intracutane injectie en de preparaten die zijn bedoeld voor transmucosale toediening zoals rectale zetpillen, nasale geneesmiddelen en vaginale zetpillen. solutions, suspensions and lyophilized compositions which, in essence, are intended for intravenous injection, intramuscular injection, subcutaneous injection and intracutaneous injection, and the preparations which are intended for transmucosal administration such as rectal suppositories, nasal drugs, and vaginal suppositories.

40 Het gedetailleerde mechanisme waardoor de bovenvermelde stoffen G-CSF stabiliseren of waarmee wordt voorkomen dat dit wordt geadsorbeerd is nog niet duidelijk. 40, the detailed mechanism by which to stabilize the above substances which is G-CSF or prevent it from being adsorbed is not yet clear. In aanwezigheid van een oppervlakte-actief middel zou het oppervlak van G-CSF, hetgeen een hydrofoob eiwit is, worden bedekt met een oppervlakte-actief middel om in oplossing te komen waardoor effectief wordt voorkomen dat G-CSF dat in een sporenhoeveelheid aanwezig is, wordt geadsorbeerd om de wand van de houder of een spuit. In the presence of a surface-active agent would be the area of ​​G-CSF, which is a hydrophobic protein would be covered with a surface-active agent to come into solution, thereby effectively preventing that G-CSF which is present in a trace amount, is adsorbed to the wall of the container or a syringe. Een 45 sacharide of een hydrofiele verbinding met een hoog moleculegewicht zou een gehydrateerde laag vormen tussen G-CSF en het adsorberende oppervlak van de wand van de houder of een spuit, waardoor adsorptie van G-CSF op een effectieve wijze wordt voorkomen. A 45-saccharide or a hydrophilic compound having a high molecular weight would form a hydrated layer between G-CSF and the adsorptive surface of the wall of the container or a syringe, whereby adsorption of G-CSF is prevented in an effective manner. Een eiwit zou met G-CSF in competitie treden voor de adsorptie op de wand van de houder of een spuit waardoor effectief de adsorptie van G-CSF wordt voorkomen. A protein with G-CSF could compete for adsorption on the wall of the container or a syringe thereby effectively preventing the adsorption of G-CSF.

50 Naast het voorkomen van G-CSF adsorptie zouden de hierboven vermelde stoffen ook een bijdrage leveren tot het voorkomen van de associatie of polymerisatie van de G-CSF-moleculen. 50 In addition to preventing G-CSF adsorption, the substances mentioned above would also contribute to the prevention of association or polymerization of the G-CSF molecules. In aanwezigheid van een oppervlakte-actief middel, saccharide, eiwit of hoog-moleculaire verbinding worden de afzonderlijke moleculen van G-CSF in deze stoffen gedispergeerd en wordt de interactie tussen G-CSF moleculen voldoende verminderd om een significante daling te veroorzaken van de waarschijnlijkheid van hun 55 associatie of polymerisatie. In the presence of a surfactant, saccharide, protein or high-molecular compound, the individual molecules of G-CSF in these substances are dispersed, and is the interaction between G-CSF molecules is reduced enough to cause a significant decrease in the probability of 55 of their association or polymerization. Verder zouden deze stoffen de auto-oxidatie van G-CSF vertragen onder een hoge temperatuur of vochtigheid wordt versneld of zouden ze voorkomen dat G-CSF samenklontert of polymeriseert als resultaat van de auto-oxidatie hiervan. In addition, these substances would retard the autoxidation of G-CSF under a high temperature or humidity is accelerated or they would prevent that G-CSF agglomerate, or polymerized as a result of the auto-oxidation thereof. Deze invloeden van het vertragen van de 5 192917 auto-oxidatie van G-CSF of het voorkomen van associatie of polymerisatie zou verder worden verbeterd door de toevoeging van een aminozuur, een zwavelhoudend reductiemiddel of een anti-oxidatiemiddel. These influences of the delay of the 5 192917 auto-oxidation of G-CSF or the prevention of association or polymerization would be further improved by the addition of an amino acid, a sulfur-containing reducing agent or an anti-oxidant.

De bovenvermelde problemen zijn met name waarneembaar in oplossingen voor injectie en in suspensies maar ze kunnen ook optreden tijdens het formuleren van G-CSF in andere doseringsvormen zoals 5 tabletten. The above problems are particularly noticeable in solutions for injection and in suspensions but they also occur during the formulation of G-CSF in other dosage forms such as 5 tablets. Verder is ook de toevoeging van oppervlakte-actieve middelen, sacchariden, eiwitten of verbindingen met een hoog moleculegewicht in dit laatste geval effectief. Furthermore, also the addition of surface-active agents, saccharides, proteins, or compounds having a high molecular weight, in the latter case, effective.

Door de uitvinding wordt G-CSF sterk gestabiliseerd en handhaaft zijn activiteit gedurende een lange tijdsduur zoals aangetoond in de volgende voorbeelden. The invention G-CSF significantly stabilized and maintains its activity for a long period of time as shown in the following examples. Om deze resultaten te bereiken wordt de hoeveelheid van elk van deze stoffen, met name de ondergrens hiervan, kritisch en de volgende trajecten verdienen 10 de voorkeur: 1-10.000 gewichtsdelen oppervlakteactief middel, 1-10.000 gewichtsdelen saccharide, 1-20.000 gewichtsdelen eiwit en 1-20.000 gewichtsdelen verbinding met een hoog moleculegewicht per een gewichtsdeel G-CSF. In order to achieve these results, the amount of each of these substances, particularly the lower bound thereof, critical and the following ranges are preferred earn 10: 1 to 10,000 parts by weight of surfactant, 1-10,000 parts by weight of saccharide, 1-20,000 parts by weight of protein and 1 -20,000 parts by weight of compound having a high molecular weight per one part by weight of G-CSF.

Volgens de onderhavige uitvinding wordt een oppervlakte-actief middel, een saccharide, een eiwit en een verbinding met een hoog moleculegewicht toegepast in een bepaalde concentratie en dit is niet alleen 15 effectief bij het voorkomen van het adsorberen op de wand van de houder of de spuit van G-CSF maar ook ter verbetering van de stabiliteit van een G-CSF houdend farmaceutisch preparaat. According to the present invention, a surface-active agent, a saccharide, a protein and a compound having a high molecular weight used in a certain concentration, and this is not only 15 effective in the prevention of adsorption to the wall of the container or the syringe of G-CSF as well as for the improvement of the stability of a G-CSF containing pharmaceutical preparation. Als gevolg hiervan wordt het mogelijk om de toediening te verzekeren van een kleine maar zeer nauwkeurige dosering van G-CSF aan patiënten; As a result, it becomes possible to ensure the administration of a small but highly precise dose of G-CSF to patients; omdat G-CSF duur is zal het efficiënte gebruik hiervan leiden tot een verlaging van de kosten voor de bereiding van G-CSF-houdende farmaceutische preparaten. since G-CSF is costly will lead to the efficient use of this to a reduction of the costs for the preparation of G-CSF containing pharmaceutical preparations.

20 De volgende voorbeelden worden slechts ter toelichting van de onderhavige uitvinding gegeven maar moeten niet als beperkend worden opgevat. 20 The following examples are given to illustrate the present invention but should not be construed as limiting. In deze voorbeelden werd de resterende activiteit van G-CSF bepaald volgens een van de volgende methoden. In these examples, the residual activity of G-CSF was determined by one of the following methods.

(a) Zachte agar-methode onder toepassing van beenmergcellen van muizen 25 Een paardenserum werd in een hoeveelheid van 0,4 ml gemengd met 0,1 ml monster, 0,1 ml suspensie van C3H/He (vrouwelijke) muizenbeendermergcellen (0,5-1 x105 kemcellen) en 0,4 ml gemodificeerde McCoy 5A kweekoplossing die 0,75% agar bevatte, uitgegoten in een schaaltje van kunststof voor de weefsel-cultuur (diameter 35 mm) gecoaguleerd en gedurende 5 dagen gekweekt bij 37°C in 5% COj>/95% lucht en bij 100% vochtigheid. (A) Soft agar method using mouse bone marrow cells was 25 A horse serum in an amount of 0.4 ml mixed with 0.1 ml of the sample, 0.1 ml of a suspension of C3H / He (female) muizenbeendermergcellen (0.5 -1 x105 kemcellen) and 0.4 ml of modified McCoy's 5A culture solution containing 0.75% of agar, then poured into a dish made of plastic for the tissue-culture (diameter 35 mm), coagulated, and cultured for 5 days at 37 ° C in 5 % COJ> / 95% air and at 100% humidity. Het aantal gevormde kolonies werd geteld (een kolonie bestond ten minste uit 50 30 cellen) en de activiteit werd bepaald met een eenheid die de activiteit is ter vorming van één kolonie. The number of colonies formed was counted (one colony consisting of at least 50 30 cells) and the activity was determined using a unit which is the activity for forming one colony.

De gemodificeerde McCoy 5A kweekoplossing die is toegepast in methode (a) werd als volgt bereid. The modified McCoy's 5A culture solution which is applied in method (a) was prepared as follows. Gemodificeerde McCoy's 5A kweekoplossing (dubbele concentratie). Modified McCoy's 5A culture solution (double concentration).

In 500 ml gedestilleerd water werden twaalf gram McCoy's 5A kweekoplossing (Gibco), 2,55 g MEM aminozuur-vitaminemengsel (Nissui Seiyaky Co., Ltd.), 2,18 g natriumbicarbonaat en 50.000 eenheden 35 kaliumpenicilline G twee keer opgelost en de oplossing werd aseptisch gefiltreerd over een Millipore-filter (0,22 pm). In 500 ml of distilled water were dissolved Twelve grams of McCoy's 5A culture solution (Gibco), 2.55 g of MEM amino acid-vitamin mixture (Seiyaky Nissui Co., Ltd.), 2.18 g of sodium bicarbonate and 50,000 units of potassium penicillin G, 35 twice, and the solution was aseptically filtered through a Millipore filter (0.22 .mu.m).

(b) Omgekeerde fase - hoge druk - vloeistofchromatografie (B) Reverse phase - high - pressure liquid chromatography

Onder toepassing van een C8-kolom met een omgekeerde fase (4,6 mm x 300 mm; 5 pm) en een 40 n-propanol/trifluorazijnzuurmengsel als mobiele fase, werd de Testactiviteit van G-CSF (geïnjecteerd in een hoeveelheid equivalent aan één pg) bepaald onder de volgende gradiënt-omstandigheden: tijd (sec) oplosmiddel (A) oplosmiddel (B) gradiënt 45 0 100% 0% } lineair 15 0% 100% } lineair 25 100% 0% By using a C8-column with a reverse phase (4.6 mm x 300 mm; 5 pm), and a 40 n-propanol / trifluoroacetic acid mixture as a mobile phase, the Test The activity of G-CSF (was injected in an amount equivalent to a single pg) was determined under the following gradient conditions: time (sec) solvent (A) solvent (B), gradient 45% 0100 0% 15 0% linearly}} 100% 25 100% 0% linear

Oplosmiddel (A): 30% n-propanol en 0,1% trifluorazijnTuur. Solvent (A): 30% n-propanol and 0.1% trifluorazijnTuur.

50 Oplosmiddel (B): 60% n-propanol en 0,1% tiifluorazijnzuur. 50 Solvent (B): 60% n-propanol and 0.1% tiifluorazijnzuur.

De bepaling werd uitgevoerd bij een golflengte van 210 nm en het percentage resterende G-CSF activiteit werd berekend met behulp van de volgende formule: 55 resterende G-CSF _ de resterende hoeveelheid G-CSF na het verstrijken van een bepaalde tijd 1fin The assay was performed at a wavelength of 210 nm and the percentage of remaining G-CSF activity was calculated using the following formula: 55 remaining G-CSF _ the amount of remaining G-CSF after the lapse of a certain period of time 1fin

activiteit (%) " de beginhoeveelheid G-CSF activity (%) "the initial amount of G-CSF

192917 6 192917 6

De resterende hoeveelheid G-CSF, bepaald volgens deze methode correleerde zeer goed met het resultaat verkregen bij de meting volgens de zachte agar-methode (a) onder toepassing van de beenmergcellen van muizen. The residual ratio of G-CSF, determined by this method correlated very well with the results obtained with the measurement according to the soft agar method (a) using the bone marrow cells of mice.

5 Voorbeeld I Example I 5

Aan 5 pg G-CSF werd een van de in Tabel A vermelde stabiliserende middelen toegevoegd en het mengsel werd aseptisch opgelost in een 20 mM bufferoplossing (met 200 mM natriumchloride; pH is 7,4) om een farmaceutisch preparaat te bereiden dat 5 pg G-CSF per ml bevatte, dat vervolgens werd gevriesdroogd. To 5 pg G-CSF, one of the stabilizing agents listed in Table A was added, and the mixture was aseptically dissolved in a 20 mM buffer solution (containing 200 mM sodium chloride; pH 7.4) to prepare a pharmaceutical composition containing 5 pg G -CSF per ml, which was then freeze-dried. De tijdsafhankelijke verandering van de G-CSF activiteit werd gemeten volgens methode (a) en de resultaten 10 zijn weergegeven in Tabel A. De uitdrukking "activiteit (%)” in de tabel geeft de Testactiviteit aan van G-CSF ten opzichte van de begin-eenheid en wordt gedefinieerd door de volgende formule: ji.,* /»/ x activiteit-eenheid na verloop van een bepaalde tijd.. .,ΛΛ activiteit (%) =-beginactiviteit^enheid - x 100 The time-dependent change of the G-CSF activity was measured by method (a), and the results 10 are shown in Table A. The term "activity (%)" in the table indicates the Test The activity of G-CSF relative to the initial moiety and is defined by the following formula: ji, * / »/ x activity unit after lapse of a certain period of time .., ΛΛ activity (%) = -beginactiviteit CTION ^ - x 100..

Het vriesdrogen werd als volgt uitgevoerd. The freeze-drying was carried out as follows.

15 De G-CSF oplossing die een stabiliserend middel bevatte werd in een steriel met sulfa behandeld glazen flesje gedaan, gedurende 4 uren ingevroren bij -40°C of lager, onderworpen aan een eerste droging door verwarmen van -40°C tot 0°C, gedurende een periode van 48 uren met een druk die toenam van 0,03 tot 0,1 torr, waarna een tweede droging werd uitgevoerd door verwarmen van 0°C tot 20°C gedurende een periode van 12 uren bij een druk die toenam van 0,03 tot 0,08 torr, waarna het binnenste van het glazen 20 flesje werd gevuld met steriele, droge gasvormige stikstof om een atmosferische druk te bereiken en daarna werd het flesje afgesloten met een rubberen stop voor vriesdrogen, en daarna afgesloten met een aluminiumkap. 15 The G-CSF solution containing a stabilizing agent was placed in a sterile covered glass vial with sulfa, for 4 hours, frozen at -40 ° C or less, subjected to a first drying by heating from -40 ° C to 0 ° C , for a period of 48 hours with a pressure which increased from 0.03 to 0.1 torr, and then a second drying was carried out by heating from 0 ° C to 20 ° C over a period of 12 hours at a pressure which increased from 0.03 to 0.08 torr, after which the interior of the glass vial was filled with 20 sterile dry nitrogen gas to reach an atmospheric pressure, and then the vial was sealed with a rubber stopper for freeze-drying, and then capped with an aluminum cap .

TABEL A TABLE A

25 ----- — - —----— ----- stabiliserend middel hoeveelheid activiteit (%) (gewichtsdelen) -- na opslaan bij na opslaan bij 4°C gedurende 37°C gedurende 30 6 maanden 1 maand xylitol 10.000 92 86 mannitol 10.000 91 85 35 ---------------—---------- glucuronzuur 10.000 86 82 hyaluronzuur 2.000 92 89 40 dextran (mol.gew. 40.000) 2.000 95 90 heparine 5.000 85 80 chitosan 2.000 93 91 45 —----------- — ----- alginezuur 2.000 90 90 menselijk serumalbumine 1.000 98 99 50 menselijk serumglobuline 1.000 98 95 met alkalische stof behandelde gelatine 1.000 99 96 collageen 2.000 95 90 55 - polyethyleenglycol (mol.gew. 4.000) 10.000 94 90 7 192917 TABEL A (vervolg) stabiliserend middel hoeveelheid activiteit (%) (gewichtsdeien) - 5 na opslaan bij na opslaan bij 4°C gedurende 37°C gedurende 6 maanden 1 maand hydroxipropylcellulose 1.000 98 94 10 - natriumcarboximethylceilulose 1.000 88 80 hydroximethylceilulose 5.000 92 90 15 polyvinylalcohol (mol.gew. 50.000) 2.000 96 95 polyvinylpyrro 25 ----- - - ----- ------ stabilizing agent amount of activity (%) (parts by weight) - After storing at after storage at 4 ° C for 37 ° C for 30, 6 months 1 month xylitol mannitol 10,000 92 86 10,000 91 85 35 86 82 10 000 -------------------------- glucuronic acid, hyaluronic acid 2.000 92 89 40 dextran (mol. 40,000) 2.000 95 90 5.000 85 80 chitosan, heparin 2,000 93 ------------ 91 45 - 2,000 90 90 ----- alginic acid, human serum albumin human serum globulin 1.000 98 99 50 1.000 98 95 with alkali, collagen-treated gelatin 1.000 99 96 2.000 95 90 55 - polyethylene glycol 10000 94 90 7 192 917 TABLE A (continued) stabilizing agent amount of activity (%) (gewichtsdeien) (molecular weight 4,000.) - 5 after storing at after storage at 4 ° C for 37 ° C for 6 months 1 month hydroxypropylcellulose 1.000 98 94 10 - natriumcarboximethylceilulose hydroximethylceilulose 1.000 88 80 5.000 92 90 2.000 96 15 polyvinyl alcohol 95 polyvinylpyrro (MW 50,000). lidon (mol.gew. 50.000) 2.000 95 94 menselijk serumalbumine 2.000 20 mannitol 2.000 100 97 cysteine 100 menselijk serumalbumine 2.000 polyoxiethyleensorbitanmonolauraat 100 99 96 25 manitol 2.000 menselijk serumalbumine 2.000 hydroxipropylcellulose 500 98 92 dextran (mol.gew. pyrrolidone (mol. 50,000) 2,000 95 94 20 mannitol, human serum albumin 2.000 2.000 100 97 100 cysteine ​​of human serum albumin polyoxiethyleensorbitanmonolauraat 2.000 100 99 2.000 96 25 mannitol, human serum albumin, hydroxypropylcellulose 2.000 500 98 92 dextran (mol. 40.000) 2.000 30 - polyoxiethyleensorbitanmonolauraat 100 sorbitol 2.000 98 96 gepolyoxiethyleerde geharde ricinusolie 100 g4 g2 35 dextran (mol.gew. 40.000) 2.000 zonder toevoeging - 74 58 40,000) 2,000 30 - 2,000 98 96 sorbitol 100 polyoxiethyleensorbitanmonolauraat polyoxyethylated hardened castor oil 100 35 g2 g4 dextran (molecular weight 40,000) 2.000 without addition -. 74 58

40 Voorbeeld II 40 EXAMPLE II

Aan 10 pg G-CSF werd een van de in tabel B vermelde stabiliserende middelen toegevoegd en het mengsel werd aseptisch opgelost in 20 mM fosfaat buffer-oplossing (met 100 mM natriumchloride; pH is 7,4) om een farmaceutisch preparaat te bereiden dat 10 pg G-CSF per ml bevatte. To 10 pg G-CSF, one of the stabilizing agents listed in Table B was added, and the mixture was aseptically dissolved in 20 mM phosphate buffer solution (containing 100 mM sodium chloride; pH 7.4) to prepare a pharmaceutical composition containing 10 pg G-CSF per ml. Het preparaat werd aseptisch in een met sulfa behandeld glazen flesje gebracht en afgesloten, om een G-CSF oplossing te 45 bereiden. The preparation was aseptically charged into a sulfa with treated glass vial and sealed, in order to prepare a G-CSF solution 45. De tijdsafhankelijke verandering van de activiteit van G-CSF in deze oplossing werd gemeten volgens dezelfde methode als toegepast In voorbeeld I en de resultaten zijn weergegeven in tabel B. The time-dependent change of the activity of G-CSF in this solution was measured by the same method as used in Example I and the results are shown in Table B.

192917 8 192917 8

TABEL B TABLE B

stabiliserend middel hoeveelheid activiteit (%) (gewichtsdelen) -—-—— 5 na opslaan bij na opslaan bij na opslaan bij 4°C gedurende 4°C gedurende kamertempera-7 dagen 2 maanden tuur gedurende 1 maand 10 mannitol 5.000 91 87 82 hyaluronzuur 2.000 93 87 70 dextran (mol.gew. 40.000) 2.000 96 95 85 15 -:-——— glycerol 10.000 90 90 88 neuraminezuur 5.000 93 91 84 20 chitine 2.000 95 92 86 dextrine 2.000 90 92 87 menselijk serumalbumine 1.000 99 95 92 25 - menselijk serumglobuline 1.000 98 94 90 met zuur behandelde gelatine 2.000 97 96 87 30 met alkalische stof behandelde gelatine 500 99 95 92 collageen 2.000 99 94 88 35 polyethyleenglycol (mol.gew. stabilizing agent amount of activity (%) (parts by weight) ----- 5 after storing at after storage at after storage at 4 ° C for 4 ° C for 7 days room tempera-ture for 1 month 2 months 10 91 87 82 Hyaluronic acid 5.000 mannitol 2.000 93 87 70 2.000 96 95 85 15 dextran (molecular weight 40,000.) -: ---- glycerol 10,000 90 90 88 5,000 neuraminic acid 93 91 84 20 95 92 86 dextrin chitin 2.000 2.000 90 92 87 1.000 99 95 human serum albumin 92 25 - human serum globulin 1.000 98 94 90 acid-treated gelatin 2000 97 96 87 30 with alkali-treated gelatin 500 99 95 2.000 92 collagen 99 94 88 35 polyethylene glycol (mol.

4.000) 10.000 94 89 90 hydroxipropylcellulose 2.000 98 95 92 40 natriumcarboximethylcellulose 2.000 92 91 80 hydroxiethylcellulose 4.000 92 94 90 polyvinylalcohol (mol.gew. 50.000) 4.000 97 93 90 45 - polyvinylpyrrolidon (mol.gew. 4,000) 10.000 94 89 90 2.000 hydroxypropyl cellulose 98 95 sodium carboxymethylcellulose 92 40 2.000 92 91 80 92 94 90 hydroxyethylcellulose 4.000 polyvinyl alcohol (molecular weight 50,000) 4.000 97 93 90 45 -. Polyvinyl pyrrolidone (mol.

50.000) 4.000 95 95 92 sorbitanmonolauraat 400 97 96 95 50 - polyoxiethyleensorbitanmo- nolauraat 400 100 96 94 polyoxiethyleensorbitanmonos- 55 tearaat 400 98 97 94 9 192917 TABEL B (vervolg) stabiliserend middel hoeveelheid activiteit (%) (gewichtsdelen) - 5 na opslaan bij na opslaan bij na opslaan bij 4°C gedurende 4eC gedurende kamertempera- 7 dagen 2 maanden tuur gedurende 1 maand 10 polyoxiethyleenpolyoxipropy- leengiycolether 400 100 94 93 gepolyoxiethyleerde geharde ricinusoiie 400 99 98 90 15 - natriumlaurylsulfaat 2.000 97 93 87 lecithine 2.000 97 94 90 20 menselijk serumalbumine 2.000 mannitol 2.000 cysteïne 100 100 99 497 menselijk serumalbumine 2.000 25 polyoxiethyleensorbitanmo- nolauraat 100 99 97 95 mannitol 2.000 menselijk serumalbumine 1.000 30 hydroxipropylcellulose 500 99 97 95 dextran (mol.gew. 40.000) 2.000 polyoxiethyleensorbitanmono- palmitaat 100 35 sorbitol 2.000 96 96 93 gepolyoxiethyleerde geharde ricinusolie 100 dextran (mol.gew. 40.000) 2.000 95 92 92 40 50.000) 4.000 95 sorbitan monolaurate 95 92 400 97 96 95 50 - 400 100 96 94 polyoxiethyleensorbitanmo- monolaurate polyoxiethyleensorbitanmonos- monostearate 55 400 98 97 94 9 192 917 TABLE B (continued) stabilizing agent amount of activity (%) (parts by weight) - 5 after storing at after storing after storing at 4 ° C for at 4EC for kamertempera- 7 days, 2 months temperature for 1 month 10 94 93 400 100 polyoxiethyleenpolyoxipropy- leengiycolether polyoxyethylated hardened ricinusoiie 400 99 98 90 15 - sodium lauryl sulphate 2.000 2.000 97 93 87 lecithin 97 94 90 20 human serum albumin, mannitol 2.000 2.000 100 100 99 497 cysteine ​​of human serum albumin 2.000 polyoxiethyleensorbitanmo- monolaurate 25 100 99 97 95 mannitol, human serum albumin 2.000 1.000 30 500 99 97 95 hydroxypropylcellulose dextran (Mw. 40,000) polyoxiethyleensorbitanmono- palmitate 2,000 100 35 2,000 96 96 sorbitol polyoxyethylated hardened castor oil 93 dextran 100 (mol. 40,000) 2,000 95 92 92 40 - zonder toevoeging - 72 61 47 - without addition - 72 61 47

Voorbeeld III Example III

45 Aan 10 pg G-CSF werd een van de stabiliserende middelen toegevoegd zoals vermeld in tabel C en het mengsel werd aseptisch opgelost in een 20 mM fosfaat buffer-oplossing (met 100 mM natriumchloride; pH Is 7,4) om een farmaceutisch preparaat te bereiden dat 10 pg G-CSF per ml bevatte. 45 to 10 pg of G-CSF, one of the stabilizing agents were added, as reported in Table C and the mixture was aseptically dissolved in a 20 mM phosphate buffer solution (containing 100 mM sodium chloride; pH, 7.4) to a pharmaceutical preparation to be prepare 10 pg G-CSF per ml. Van het preparaat werd een milliliter toegevoegd aan een met sulfa behandeld met silicon bedekt glazen flesje en bewaard bij 4°C. From the composition is a milliliter was added to a sulfa treated with silicone-coated glass vial and stored at 4 ° C. De werkzaamheid van elk stabiliserend middel ter voorkoming van G-CSF adsorptie werd bepaald door het 50 meten van de Testactiviteit van G-CSF in de oplossing na 0,5 en na 2 en na 24 uren. The effectiveness of each stabilizing agent for the prevention of G-CSF adsorption was determined by measuring the 50 Test The activity of G-CSF in the solution after 0.5, and after 2 and after 24 hours. De meting werd uitgevoerd volgens methode (b) onder toepassing van omgekeerde fase - hoge druk - vloeistof-chromatografie. The measurement was conducted by method (b) using reverse phase - high - pressure liquid chromatography. De resultaten zijn weergegeven in Tabel C. The results are shown in Table C.

192917 10 192917 10

TABEL C TABLE C

stabiliserend middel hoeveelheid Testactiviteit (%) (gewichtsde- - 5 len begin 0,5 uur 2 uren 24 uren mannitol 5.000 100 93 90 91 hyaluronzuur 2.000 100 97 92 92 10 - dextran (mol.gew. 40.000) 2.000 100 98 95 96 glycerol 10.000 100 94 91 90 15 heparine 2.000 100 92 90 90 glucuronzuur 5.000 100 96 90 91 ketoglycolzuur 5.000 100 92 88 90 20 - menselijk serumalbumine 1.000 100 100 101 99 menselijk serumglobuline 1.000 100 98 100 98 25 met alkalische stof behandelde gelatine 500 100 99 98 99 met zuur behandelde gelatine 2.000 100 99 97 97 30 collageen 2.000 100 100 98 99 polyethyleenglycol (mol.gew. amount of stabilizing agent Activity Test (%) (gewichtsde- - 5 s for 0.5 hours beginning 2 hours, 24 hours, mannitol 5.000 100 93 2.000 100 90 91 Hyaluronic acid 97 92 92 10 - Dextran (molecular weight 40,000) 2.000 100 98 95 96 glycerol. 10 000 100 94 91 90 15 heparin 2000 100 92 90 90 glucuronic acid 5.000 100 96 90 91 ketoglycolzuur 5.000 100 92 88 90 20 - human serum albumin 1,000 100 100 101 99 human serum globulin 1.000 100 98 100 98 25 with alkali-treated gelatin 500 100 99 98 acid-treated gelatin 99 2.000 100 99 97 2.000 97 30 collagen 100 100 98 99 polyethylene glycol (mol.

4.000) 10.000 100 100 100 99 35 hydroxipropylcellulose 2.000 100 100 100 99 natriumcarboximethylcellulose 2.000 100 98 96 95 hydroxiethylcellulose 4.000 100 96 93 92 40 - polyvinylalcohol (mol.gew. 4,000) 10,000 100 100 100 99 35 hydroxypropylcellulose 2.000 100 100 100 99 2000 100 98 96 95 sodium carboxymethylcellulose hydroxyethylcellulose 4.000 100 96 93 92 40 - polyvinyl alcohol (mol.

50.000) 4.000 100 99 100 98 polyvinylpyrrolidon (mol.gew. 50,000) 4,000 100 99 100 98 polyvinylpyrrolidone (mol.

45 50.000) 4.000 100 98 98 96 sorbitanmonocaprylaat 400 100 100 100 98 polyoxiethyleensorbitan- 50 stearaat 400 100 100 98 100 gepolyoxiethyleerde geharde ricinusolie 400 100 99 101 99 55 natriumlaurylsulfaat 2.000 100 100 99 97 45 50,000) 4,000 100 98 98 96 Sorbitan monocaprylate 400 100 100 100 98 polyoxiethyleensorbitan- stearate 50 400 100 100 98 100 polyoxyethylated hardened castor oil 400 100 99 101 99 55 sodium lauryl sulfate 2.000 100 100 99 97

Claims (7)

    11 192917 TABEL C (vervolg) stabiliserend middel hoeveelheid Testactiviteit (%) (gewichtsde- - 5 len begin 0,5 uur 2 uren 24 uren iecithine 2.000 100 99 100 98 menselijk serumalbumine 2.000 10 mannitol 2.000 100 100 100 101 cysteïne 100 menselijk serumalbumine 2.000 polyoxiethyleensorbitanmo- 15 nolauraat 100 100 100 98 99 mannitol 2.000 menselijk serumalbumine 1.000 hydroxipropylcellulose dextran 500 100 101 99 100 20 (mol.gew. 40.000) 2.000 polyoxiethyleensorbitanmo- nolauraat 100 100 100 99 99 sorbitol 2.000 25 - gepolyoxiethyleerde geharde ricinusolie 100 100 100 98 97 dextran (mol.gew. 40.000) 2.000 30 zonder toevoeging - 100 91 72 73 11 192917 TABLE C (continued) stabilizing agent quantity Test Activity (%) (gewichtsde- - 5 len beginning 0.5 hours 2 hours 24 hours iecithine 2.000 100 99 100 98 human serum albumin 2.000 10 Mannitol 2000 100 100 100 101 Cysteine ​​100 human serum albumin 2.000 polyoxiethyleensorbitanmo- monolaurate 15 100 100 100 98 99 mannitol 2.000 1.000 hydroxypropyl dextran, human serum albumin 500 100 101 99 100 20 2000 polyoxiethyleensorbitanmo- monolaurate 100 100 100 99 99 25 sorbitol 2,000 (Mw 40,000.) - polyoxyethylated hardened castor oil 100 100 100 98 97 without the addition of dextran 2,000 30 (molecular weight 40,000.) - 100 91 72 73
  1. 1. Stabiele farmaceutische bereiding die als actief bestanddeel het fysiologisch actieve polypeptide granulocytkoionie-stimulerende factor en een stabiliserende stof of adsorptie-voorkomende stof omvat, met het kenmerk, dat de bereiding als stabiliserende stof of adsorptie-voorkomende stof ten minste één stof omvat die is gekozen uit de groep bestaande uit een farmaceutisch aanvaardbare niet-eiwitachtige oppervlakte-actieve stof, een saccharide, een verbinding met een hoog moleculegewicht, en een eiwit, 40 onder uitsluiting van serumalbumine van muizen. 1. A stable pharmaceutical preparation comprising as active ingredient the physiologically active polypeptide granulocytkoionie-stimulating factor, and a stabilizing agent, or adsorption-preventing substance, characterized in that the preparation as a stabilizing agent, or adsorption-preventing substance is at least one substance which is selected from the group consisting of a pharmaceutically acceptable non-proteinaceous surface-active agent, a saccharide, a compound having a high molecular weight, and a protein, with the exclusion of 40 of mouse serum albumin.
  2. 2. Stabiele farmaceutische bereiding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de oppervlakte-actieve stof is gekozen uit de groep bestaande uit polyoxiethyleensorbitanmonostearaat, polyoxiethyleensorbitanmo-noöleaat en polyoxiethyieenlaurylether. 2. Stable pharmaceutical preparation according to claim 1, characterized in that the surface-active agent is selected from the group consisting of polyoxiethyleensorbitanmonostearaat, polyoxiethyleensorbitanmo-monooleate and polyoxiethyieenlaurylether.
  3. 3. Stabiele farmaceutische bereiding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat het saccharide is gekozen 45 uit de groep bestaande uit mannitol en sorbitol. 3. Stable pharmaceutical preparation according to claim 1, characterized in that the saccharide is selected 45 from the group consisting of mannitol and sorbitol.
  4. 4. Stabiele farmaceutische bereiding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat het eiwit is gekozen uit de groep bestaande uit menselijk serumalbumine en met een zure of alkalische stof behandelde gelatine. 4. Stable pharmaceutical preparation according to claim 1, characterized in that the protein is selected from the group consisting of human serum albumin and with an acidic or alkali-treated gelatin.
  5. 5. Stabiele farmaceutische bereiding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de bereiding een combinatie van menselijk serumalbumine, mannitol en cysteïne omvat. 5. Stable pharmaceutical preparation according to claim 1, characterized in that the preparation comprises a combination of human serum albumin, mannitol, and cysteine.
  6. 6. Stabiele farmaceutische bereiding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de bereiding een combinatie van menselijk serumalbumine, mannitol en polyoxiethyleensorbitanmonolauraat omvat. 6. Stable pharmaceutical preparation according to claim 1, characterized in that the preparation comprises a combination of human serum albumin, mannitol and polyoxiethyleensorbitanmonolauraat.
  7. 7. Stabiele farmaceutische bereiding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de bereiding een combinatie van polyoxiethyleensorbitanmonolauraat en sorbitol omvat. 7. Stable pharmaceutical preparation according to claim 1, characterized in that the preparation comprises a combination of polyoxiethyleensorbitanmonolauraat and sorbitol.
NL8701640A 1986-07-18 1987-07-13 Stable pharmaceutical preparation containing granulocyte colony-stimulating factor. NL192917C (en)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP16948786 1986-07-18
JP16948986 1986-07-18
JP16948886 1986-07-18
JP16948686 1986-07-18
JP16948686 1986-07-18
JP16948786 1986-07-18
JP16948986 1986-07-18
JP16948886 1986-07-18

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NL8701640A true NL8701640A (en) 1988-02-16
NL192917B true NL192917B (en) 1998-01-05
NL192917C true NL192917C (en) 1998-05-07

Family

ID=27474266

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NL8701640A NL192917C (en) 1986-07-18 1987-07-13 Stable pharmaceutical preparation containing granulocyte colony-stimulating factor.

Country Status (10)

Country Link
KR (1) KR930004597B1 (en)
CN (1) CN1033738C (en)
BE (1) BE1000253A3 (en)
CA (1) CA1297007C (en)
DE (1) DE3723781C2 (en)
DK (1) DK171308B1 (en)
ES (1) ES2010226A6 (en)
FR (1) FR2601591B1 (en)
GB (1) GB2193631B (en)
NL (1) NL192917C (en)

Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4847325A (en) * 1988-01-20 1989-07-11 Cetus Corporation Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1
CA1336676C (en) * 1988-03-11 1995-08-15 Takeru Fujii Intravaginal delivery of biologically active polypeptides
US5349052A (en) * 1988-10-20 1994-09-20 Royal Free Hospital School Of Medicine Process for fractionating polyethylene glycol (PEG)-protein adducts and an adduct for PEG and granulocyte-macrophage colony stimulating factor
US6132763A (en) * 1988-10-20 2000-10-17 Polymasc Pharmaceuticals Plc Liposomes
GB8824591D0 (en) 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Fractionation process
US5104651A (en) * 1988-12-16 1992-04-14 Amgen Inc. Stabilized hydrophobic protein formulations of g-csf
JP3249147B2 (en) * 1990-06-01 2002-01-21 キリン−アムジエン・インコーポレーテツド Physiologically active protein-containing oral formulation
EP0459516A1 (en) * 1990-06-01 1991-12-04 Kirin-Amgen, Inc. Oral dosage form of biologically active proteins
FR2686900B1 (en) * 1992-01-31 1995-07-21 Rhone Poulenc Rorer Sa New polypeptides having an activity to stimulate granulocyte colony, their preparation and pharmaceutical compositions containing them.
FR2686899B1 (en) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa New biologically active polypeptides, their preparation and pharmaceutical compositions containing them.
FR2693907B1 (en) * 1992-07-23 1994-09-02 Rhone Poulenc Rorer Sa The method of administration of granulocyte colony stimulating factor solutions.
EP0582932A1 (en) * 1992-08-11 1994-02-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapeutic system for the parenteral administration of hematopoietic growth factors
DE4242919A1 (en) * 1992-12-18 1994-06-23 Boehringer Mannheim Gmbh A process for the preparation of storage stable aqueous pharmaceutical preparations of G-CSF
DE4242863A1 (en) * 1992-12-18 1994-06-23 Boehringer Mannheim Gmbh Stable lyophilized pharmaceutical preparations of G-CSF
US20030053982A1 (en) 1994-09-26 2003-03-20 Kinstler Olaf B. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5824784A (en) 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
WO1996024369A1 (en) * 1995-02-06 1996-08-15 Genetics Institute, Inc. Formulations for il-12
CA2215315A1 (en) * 1995-03-15 1996-09-19 Naoki Otsuki Methods for preventing adsorption of thrombopoietin (tpo) and stable tpo-containing compositions
WO1996028182A1 (en) * 1995-03-15 1996-09-19 Kirin Brewery Company, Limited Method of preventing tpo adsorption and stable tpo-containing composition
GB9526733D0 (en) 1995-12-30 1996-02-28 Delta Biotechnology Ltd Fusion proteins
US20030190307A1 (en) 1996-12-24 2003-10-09 Biogen, Inc. Stable liquid interferon formulations
EP1060746A4 (en) * 1998-03-06 2002-06-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Protein-free preparations
US6979442B1 (en) * 1998-08-17 2005-12-27 Pfizer Inc. Stabilized protein compositions
US7253142B1 (en) 1999-09-08 2007-08-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Protein solution preparation and method of stabilizing the same
WO2001064241A1 (en) * 2000-02-29 2001-09-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preparations stabilized over long time
DK1129720T3 (en) 2000-02-29 2004-09-27 Pfizer Prod Inc Stabilized granulocyte-colony stimulating factor
US7507413B2 (en) 2001-04-12 2009-03-24 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US6946134B1 (en) 2000-04-12 2005-09-20 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
CA2405525A1 (en) 2000-04-12 2001-10-25 Principia Pharmaceutical Corporation Albumin fusion proteins
CA2420850A1 (en) 2000-09-01 2003-02-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Solution formulations having long-term stability
US8435939B2 (en) 2000-09-05 2013-05-07 Biokine Therapeutics Ltd. Polypeptide anti-HIV agent containing the same
EP2261250B1 (en) 2001-12-21 2015-07-01 Human Genome Sciences, Inc. GCSF-Albumin fusion proteins
CA2537158C (en) 2002-08-27 2014-07-22 Hirokazu Tamamura Cxcr4 antagonist and use thereof
CA2517310C (en) 2003-02-28 2015-11-24 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Stabilized protein-containing formulations comprising a poloxamer
DE202006020194U1 (en) 2006-03-01 2007-12-06 Bioceuticals Arzneimittel Ag G-CSF liquid formulation
CA2673719A1 (en) 2006-12-21 2008-06-26 Biokine Therapeutics Ltd. T-140 peptide analogs having cxcr4 super-agonist activity for bone marrow recovery
WO2010092571A3 (en) 2009-02-11 2010-10-07 Yeda Research And Development Co. Ltd. Short beta-defensin-derived peptides
US9867777B2 (en) 2010-01-19 2018-01-16 Hanmi Science Co., Ltd. Liquid formulations for long-acting G-CSF conjugate
EP2399572A1 (en) 2010-06-22 2011-12-28 Sandoz AG Long-term storage of non-glycosylated recombinant human G-CSF

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2652636A1 (en) * 1976-11-19 1978-05-24 Hans Uwe Dr Rer Nat Wolf Stabilising protein during separation, purification and storage - by adding amphiphilic cpds., esp. lipid(s), ionic and or nonionic detergents
FR2420541B1 (en) * 1978-03-20 1983-05-06 Morinaga Milk Industry Co Ltd
US4609546A (en) * 1982-06-24 1986-09-02 Japan Chemical Research Co., Ltd. Long-acting composition
JPH0481573B2 (en) * 1984-04-26 1992-12-24 Suntory Ltd
JPS6191131A (en) * 1984-10-09 1986-05-09 Chugai Pharmaceut Co Ltd Method and composition for preventing adsorption of pharmaceutical

Also Published As

Publication number Publication date Type
FR2601591B1 (en) 1991-04-26 grant
CN1033738C (en) 1997-01-08 grant
BE1000253A3 (en) 1988-09-27 grant
KR930004597B1 (en) 1993-06-01 grant
ES2010226A6 (en) 1989-11-01 application
GB2193631A (en) 1988-02-17 application
DK368387A (en) 1988-01-19 application
GB8716904D0 (en) 1987-08-26 grant
DE3723781A1 (en) 1988-01-21 application
DK368387D0 (en) 1987-07-15 grant
DE3723781C2 (en) 1999-09-02 grant
DK171308B1 (en) 1996-09-02 grant
FR2601591A1 (en) 1988-01-22 application
NL192917B (en) 1998-01-05 application
CN87104963A (en) 1988-02-24 application
GB2193631B (en) 1990-11-21 grant
NL8701640A (en) 1988-02-16 application
CA1297007C (en) 1992-03-10 grant

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6250469B1 (en) Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
US4879272A (en) Method and composition for preventing the adsorption of a medicine
US5202311A (en) Stabilized fgf composition
US5602232A (en) Method for producing metal-interferon-α crystals
US5919757A (en) Aqueous pharmaceutical preparations of G-CSF with a long shelf life
US5078997A (en) Pharmaceutical composition for interleukin-2 containing physiologically compatible stabilizers
US4913908A (en) Preparation of submicroscopic particles, particles thus obtained and pharmaceutical compositions containing them
US5705485A (en) Gel formulations containing growth factors
US4496537A (en) Biologically stable alpha-interferon formulations
US4647454A (en) Stable interferon β composition and a method of stabilizing interferon β
US4895716A (en) Stabilized formulations of gamma interferons
US6004549A (en) Crystalline protein controlled release compositions
US20090247450A1 (en) G-csf liquid formulation
EP0391444A2 (en) Interleukin-1 Formulation
WO1990003784A1 (en) Cyclodextrin-peptide complexes
US20070292391A1 (en) Stabilized Interferon Liquid Formulations
US5416071A (en) Water-soluble composition for sustained-release containing epo and hyaluronic acid
EP0410207A2 (en) Stabilization of highly purified proteins
US5609868A (en) Pharmaceutical compositions comprising hybrid α-interferon
WO1995026750A1 (en) Pharmaceutical formulation for subcutaneous, intramuscular or intradermal administration of factor viii or factor ix
WO2006104852A2 (en) Vegf antagonist formulations
US5344644A (en) Water-soluble composition for sustained-release
US5919443A (en) Stable lyophilized pharmaceutical preparations of G-CSF
EP0503583A1 (en) Composition for sustained release of erythropoietin
WO1993005799A1 (en) Lyophilized stable pharmaceutical compositions containing a granulocyte macrophage colony stimulating factor

Legal Events

Date Code Title Description
BA A request for search or an international-type search has been filed
BB A search report has been drawn up
BC A request for examination has been filed
V4 Lapsed because of reaching the maximum lifetime of a patent

Effective date: 20070713