NL1012394C2 - Method and device for simultaneously and independently sampling frozen cultures of microorganisms and / or eukaryotic cells. - Google Patents
Method and device for simultaneously and independently sampling frozen cultures of microorganisms and / or eukaryotic cells. Download PDFInfo
- Publication number
- NL1012394C2 NL1012394C2 NL1012394A NL1012394A NL1012394C2 NL 1012394 C2 NL1012394 C2 NL 1012394C2 NL 1012394 A NL1012394 A NL 1012394A NL 1012394 A NL1012394 A NL 1012394A NL 1012394 C2 NL1012394 C2 NL 1012394C2
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- carrier
- pin
- cultures
- pins
- transfer member
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/02—Devices for withdrawing samples
- G01N1/04—Devices for withdrawing samples in the solid state, e.g. by cutting
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/10—Devices for transferring samples or any liquids to, in, or from, the analysis apparatus, e.g. suction devices, injection devices
- G01N35/1065—Multiple transfer devices
- G01N2035/1076—Multiple transfer devices plurality or independently movable heads
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
Titel: Werkwijze en inrichting voor het gelijktijdig en onafhankelijk van elkaar bemonsteren van ingevroren 5 cultures van micro-organismen en/of eukaryote cellen.Title: Method and device for simultaneously and independently sampling frozen cultures of microorganisms and / or eukaryotic cells.
De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor het bemonsteren van ingevroren cultures van micro-10 organismen, eukaryote cellen, en dergelijke, welke cultures zijn ondergebracht in van elkaar gescheiden compartimenten in een gezamenlijke houder, waarbij een monster wordt genomen door een culture in contact te brengen met een overbrengorgaan, alsmede op een inrichting voor het 15 uitvoeren van een dergelijke werkwijze.The invention relates to a method for sampling frozen cultures of microorganisms, eukaryotic cells, and the like, which cultures are housed in separated compartments in a common container, a sample being taken by contacting a culture transfer with a transfer member, as well as to a device for carrying out such a method.
Er zijn tegenwoordig zeer vele verschillende soorten micro-organismen en eukaryote cellen bekend en er worden er nog steeds meer ontdekt. Veel van genoemde micro-organismen en eukaryote cellen kunnen worden gekweekt en/of 20 vermeerderd in microbiologische labaratoria. Daarnaast worden veel van de genoemde micro-organismen en eukaryote cellen genetisch gemanipuleerd waardoor zij in een of meerdere eigenschappen verschillen van het uitgangsmateriaal. Om te kunnen beschikken over al deze 25 verschillende organismen en cellen zijn opslagwerkwijzen ontwikkeld voor het langdurig bewaren in levensvatbare vorm. Vaak worden cultures van micro-organismen en/of eukaryote cellen bevroren in de aanwezigheid van 15-20% % glycerol. De micro-organismen en/of eukaryote cellen kunnen 30 dan vervolgens worden opgeslagen bij temperaturen beneden de -20 °C.Many different types of microorganisms and eukaryotic cells are known today and more are still being discovered. Many of said microorganisms and eukaryotic cells can be cultured and / or propagated in microbiological laboratories. In addition, many of the aforementioned microorganisms and eukaryotic cells are genetically engineered so that they differ in one or more properties from the starting material. In order to access all these different organisms and cells, storage methods have been developed for long-term preservation in viable form. Often cultures of microorganisms and / or eukaryotic cells are frozen in the presence of 15-20% glycerol. The microorganisms and / or eukaryotic cells can then be stored at temperatures below -20 ° C.
Het bevriezen van dergelijke cultures, meestal in aanwezigheid van 15 of 20% glycerol, bij een temperatuur lager dan -70°C is een veel gebruikte en tevens eenvoudige 35 methode voor lange termijn (meerdere jaren) opslag. De methode wordt met name vaak gebruikt voor het opslaan van reincultures van cellulaire en virale micro-organismen. Ten ! « ' < * •uf J «*· 2 einde vanuit deze opgeslagen reincultures tot groeiende cultures te komen wordt een kleine hoeveelheid van de bevroren reincultuur van het bevroren oppervlak afgeschrapt, bijvoorbeeld met behulp van een steriele 5 spatel of naald, en vervolgens overgebracht naar een groeimedium (bijvoorbeeld een agar voedingsbodem). Hierna kan het groeimedium bij een geschikte temperatuur worden geincubeerd ten einde vermenigvuldiging van het betreffende micro-organisme te bewerkstelligen. Hoewel deze techniek 10 goed voldoet voor standaard laboratorium werk, blijkt de werkwijze dermate arbeidsintensief te zijn dat zij een belemmering vormt voor het opschalen naar grotere aantallen cultures. In verscheidene onderzoeksgebieden is het wenselijk om snel en tegelijkertijd de beschikking te 15 hebben over meerdere duizenden groeiende cultures van micro-organismen en/of eukaryote cellen. In die gevallen wordt de voortgang gelimiteerd door de tijd, mankracht en apparatuur benodigd om de beschikbare ingevroren cultures weer tot vermenigvuldigen te brengen cq. op te kweken.Freezing such cultures, usually in the presence of 15 or 20% glycerol, at a temperature below -70 ° C is a widely used and also simple method for long term (multi-year) storage. In particular, the method is often used to store pure cultures of cellular and viral micro-organisms. Ten! To obtain growing cultures from these stored pure cultures, a small amount of the frozen pure culture is scraped off the frozen surface, for example using a sterile spatula or needle, and then transferred to a growing medium (for example, an agar medium). After this, the growth medium can be incubated at a suitable temperature in order to effect multiplication of the relevant microorganism. Although this technique is satisfactory for standard laboratory work, the method proves to be so labor-intensive that it is an obstacle to scaling up to larger numbers of cultures. In several research areas it is desirable to have several thousands of growing cultures of microorganisms and / or eukaryotic cells available quickly and simultaneously. In those cases, progress is limited by the time, manpower and equipment required to reproduce or multiply the available frozen cultures. to cultivate.
20 Daarom is het vaak niet of niet goed mogelijk om grote aantallen cultures tegelijk te hanteren.Therefore, it is often not or not entirely possible to handle large numbers of cultures at the same time.
Met de uitvinding wordt beoogd de tijd en/of mankracht benodigd voor het opkweken van grote aantallen verschillende micro-organismen en/of eukaryote cellen 25 aanzienlijk te reduceren.The object of the invention is to considerably reduce the time and / or manpower required for cultivating large numbers of different micro-organisms and / or eukaryotic cells.
Het doel wordt volgens de onderhavige uitvinding bij een werkwijze van de in de aanhef omschreven soort bereikt, door het gelijktijdig nemen van meerdere monsters doordat elke bemonsterde culture in contact wordt gebracht met 30 telkens een overbrengorgaan, waarbij de overbrengorganen onafhankelijk ten opzichte van elkaar verend beweegbaar worden gedragen door een gemeenschappelijke drager, die zodanig en zolang wordt bediend, dat door onderlinge verplaatsing van de diverse overbrengorganen elke te 35 bemonstèren culture met een overbrengorgaan in contact is gebracht. Door het gebruiken van een drager met meerdere -.-314« 3 overbrengorganen is het mogelijk om meerdere ingevroren cultures tegelijk te bemonsteren en kan een aanzienlijk reductie in tijd en/of mankracht worden verkregen bij het in culture nemen van ingevroren cultures. Evenwel‘doet zich 5 in de praktijk veelvuldig de situatie voor dat de hoogten van de oppervlakken van de ingevroren cultures zich niet op één, voor iedere culture, gelijke hoogte bevinden. Zo is het heel normaal dat niet alle bakjes van een houder met. dezelfde hoeveelheid vloeistof worden gevuld. Ook kan de 10 vorm van het bevroren oppervlak op een niet voorspelbare manier variëren, waardoor de hoogte van het oppervlak van één ingevroren culture variabel is. Dit probleem nu wordt bij de werkwijze volgens de uitvinding ondervangen door de diverse overbrengorganen onafhankelijk ten opzichte van 15 elkaar verend te laten bewegen. Hierdoor is met één enkele handeling te bewerkstelligen dat van al de cultures gelijktijdig een monster wordt genomen, waarna al de monsters gelijktijdig zijn over te brengen naar en te deponeren op bijvoorbeeld een groeimedium.The object is achieved according to the present invention in a method of the type described in the preamble, by taking several samples at the same time by bringing each sampled culture into contact with a transfer member in each case, the transfer members movable independently of one another are carried by a common carrier, which is operated in such a manner and for so long that each culture to be sampled is brought into contact with a transfer member by mutual displacement of the various transfer members. By using a carrier with multiple transfer means, it is possible to sample multiple frozen cultures simultaneously and a significant reduction in time and / or manpower can be obtained when culturing frozen cultures. However, in practice the situation frequently arises that the heights of the surfaces of the frozen cultures are not at one, equal height for each culture. For example, it is quite normal that not all containers of a container with. the same amount of liquid. Also, the shape of the frozen surface can vary in an unpredictable manner, so that the height of the surface of one frozen culture is variable. This problem is now obviated in the method according to the invention by having the various transfer members move resiliently relative to each other. This makes it possible to ensure that a sample is taken from all the cultures simultaneously with a single operation, after which all the samples can be simultaneously transferred to and deposited on, for example, a growth medium.
20 Als overbrengorgaan kunnen diverse welbekende elementen worden gebruikt, zoals spatels e.d.As the transfer member, various well-known elements can be used, such as spatulas, etc.
Overeenkomstig verdere uitvoeringsvormen van de uitvinding verdient het echter de voorkeur dat, als overbrengorganen langgerekte pinnen worden gebruikt, die zodanig onderling 25 in hoofdzaak evenwijdig in de gemeenschappelijke drager worden aangebracht dat elke pin althans in zijn t langsrichting ten opzichte van de drager verend verplaatsbaar is. De voordelen van een dergelijke verplaatsing is dat relatief gróte verschillen in afstand 30 overbrugd kunnen worden. Alternatief zouden de pinnen ook in een verende drager kunnen zijn ingebed; verend ten opzichte van de drager verplaatsbare pinnen verdienen echter vanwege hun betere hanteerbaarheid de voorkeur.In accordance with further embodiments of the invention, however, it is preferred that elongated pins are used as transfer elements, which are arranged mutually substantially parallel in the common carrier such that each pin is resiliently movable at least in its longitudinal direction relative to the carrier. The advantages of such a displacement are that relatively large differences in distance 30 can be bridged. Alternatively, the pins could also be embedded in a resilient carrier; Pins which are resiliently movable with respect to the carrier are however preferred because of their better handling.
Om alle pinnen met eenzelfde aandrukkracht in 35 contact te brengen met de diverse cultures, verdient het verder de voorkeur dat elke pin zodanig verend in de 4 gemeenschappelijke drager wordt aangebracht, dat bij het verend verplaatsen van bedoelde pin een in hoofdzaak gelijkblijvende veerkracht wordt opgewekt. Een in hoofdzaak gelijkblijvende veerkracht heeft tot voordeel dat‘om en 5 nabij gelijke monsters kunnen worden getrokken van de ingevroren cultures.In order to bring all pins into contact with the various cultures with the same contact force, it is further preferred that each pin is resiliently mounted in the common carrier so that a substantially constant resilience is generated when the said pin is resiliently displaced. An essentially constant resilience has the advantage that it is possible to draw nearly identical samples from the frozen cultures.
Bij voorkeur wordt elk overbrengorgaan voor het in contact brengen met een ingevroren culture op een zodanige temperatuur gebracht, dat een klein gedeelte van bedoelde 10 ingevroren culture door contact met bedoeld overbrengorgaan wordt ontdooid. Bij deze voorkeurswerkwijze wordt het oppervlak van de ingevroren culture dat in aanraking komt met de pin vloeibaar gemaakt door warmteoverdracht van de pin naar het oppervlak van de ingevroren culture. Na 15 terugtrekking van pin blijft dan een gedeelte van de vloeistof, met daarin een gedeelte van de ingevroren culture van micro-organismen en/of eukaryote cellen, hechten aan het uiteinde van de pin. Om warmteoverdracht te bevorderen kan tenminste het uiteinde van de pin worden 20 uitgevoerd in een materiaal met een relatief grote warmte geleidingscapaciteit. Voor een verdere verbetering van de warmteoverdracht wordt het uiteinde van de pin dat in contact wordt gebracht met de culture bij voorkeur uitgevoerd in een stompe en bij voorkeur enigszins 25 afgeronde vorm.Preferably, each transfer member for contacting with a frozen culture is brought to such a temperature that a small portion of said frozen culture is thawed by contact with said transfer member. In this preferred method, the surface of the frozen culture that contacts the pin is liquefied by heat transfer from the pin to the surface of the frozen culture. After withdrawal of the pin, part of the liquid, containing part of the frozen culture of microorganisms and / or eukaryotic cells, then adheres to the end of the pin. To promote heat transfer, at least the end of the pin can be made of a material with a relatively large heat conducting capacity. For further improvement of the heat transfer, the end of the pin which is brought into contact with the culture is preferably made in a blunt and preferably slightly rounded shape.
Bij het overenten van micro-organismen en/of eukaryote cellen is het van belang te kunnen constateren v dat ook inderdaad van alle ingevroren cultures een monster van het bevroren oppervlak is genomen; dit terwijl het 30 zicht door de in de bakjes reikende pinnen met drager wordt belemmerd. In verband hiermee verdient het overeenkomstig een verdere uitvoeringsvorm van de uitvinding de voorkeur dat elk overbrengorgaan wordt voorzien van een indicatiemechanisme, dat actief wordt wanneer bedoeld 35 overbrengorgaan verend is verplaatst.When transferring microorganisms and / or eukaryotic cells, it is important to note that indeed a sample of the frozen surface has been taken from all frozen cultures; this while the view is obstructed by the pins with carrier extending into the trays. In this connection, according to a further embodiment of the invention, it is preferable that each transmission member is provided with an indication mechanism, which becomes active when said transmission member is resiliently displaced.
1012394» 51012394 »5
De onderhavige uitvinding heeft tevens betrekking op een inrichting voor het toepassen bij een werkwijze van de uitvinding, welke inrichting voorzien is van tenminste een overbrengorgaan met een hanteringsdeel. Overeenkomstig de 5 uitvinding is er daarbij in voorzien, dat het hanteringsdeel een drager omvat, die tenminste twee verend ten opzichte van elkaar beweegbare overbrengorganen draagt, zodat een onafhankelijk van elkaar, met een ingevroren culture in contact brengen van de diverse overbrengorganen 10 mogelijk is. Met een dergelijke inrichting wordt de tijd en/of de mankracht benodigd voor het bemonsteren van grote hoeveelheden ingevroren cultures aanzienlijk verminderd.The present invention also relates to a device for use in a method of the invention, which device is provided with at least one transfer member with a handling part. In accordance with the invention, it is provided that the handling part comprises a carrier which carries at least two resiliently movable transfer members, so that the various transfer members 10 can be brought into contact independently with a frozen culture. With such a device, the time and / or manpower required for sampling large quantities of frozen cultures is considerably reduced.
Als de overbrengorganen bestaan uit pinnen, die onderling in de hoofdzaak evenwijdig verend zijn 15 aangebracht ten opzichte van de uit een relatief stijf materiaal vervaardigde drager, is de inrichting relatief eenvoudig en goedkoop te realiseren.If the transfer members consist of pins, which are arranged mutually substantially resiliently relative to the carrier made of a relatively rigid material, the device can be realized relatively simply and inexpensively.
Bij voorkeur zijn de pinnen over een door stuitorganen bepaald traject in langsrichting verschuifbaar 20 opgesteld in de drager, waarbij de pinnen elk door veerkracht naar een door een stuitorgaan bepaalde eindstand worden gedrukt. Aldus is een eenduidige uitgangsstand met alle pinuiteinden in eenzelfde vlak te verkrijgen. Een min of meer zelfde pinuiteindenvlak is met name voordelig bij 25 het plaatsen van de inrichting op de houder met de ingevroren cultures.Preferably, the pins are longitudinally displaceably disposed in the carrier along a path defined by rams, the pins each being pressed by spring force to an end position defined by a runner. An unambiguous starting position with all pin ends in the same plane can thus be obtained. A more or less the same pin end face is particularly advantageous when the device is placed on the container with the frozen cultures.
Als de drager is voorzien van een binnenruimte waarin zich voor elk overbrengorgaan ten minste een veer bevindt, zijn de diverse veren onderhoudsvriendelijk 30 ondergebracht in een omsloten ruimte. Daarnaast is de onderbrenging van de veren in een omsloten ruimte voordelig bij het steriliseren van de inrichting.If the carrier is provided with an inner space in which there is at least one spring for each transfer member, the various springs are housed in an enclosed space in a maintenance-friendly manner. In addition, the housing of the springs in an enclosed space is advantageous in sterilizing the device.
Een andere omsloten uitvoering is te verkrijgen als een pin telescopisch verend verschuifbaar is opgenomen in 35 een hulsdeel dat is vastgezet in de drager.Another enclosed embodiment is available if a pin is telescopically resiliently received in a sleeve part which is fixed in the carrier.
i- U ? / 7' ··' 6i- You? / 7 '··' 6
Verder kan er de voorkeur aan worden gegeven dat de pinnen wat betreft de aandrukkingskracht gefaseerd in contact komen met een ingevroren culture. In dat geval kan er in zijn voorzien dat voor elk overbrengorgaan ten minste 5 . twee in serie geschakelde veren met onderling verschillende veerconstanten aanwezig. Het voordeel hiervan is dat dezelfde inrichting onder twee of meer verschillende werkdrukken kan worden gebruikt waardoor verschillende bemonsteringwijzen mogelijk worden gemaakt. Daarnaast kan 10 op deze wijze (door het toenemen van de voor het indrukken benodigde druk) een controle mechanisme voor doordrukken van de overbrengorganen worden ingebouwd, bijvoorbeeld voor het voorkomen van doordrukken van agarbodems.Furthermore, it may be preferred that the pins contact the frozen culture in phases with regard to the contact force. In that case, provision may be made for at least 5 for each transfer member. two series-connected springs with mutually different spring constants. The advantage of this is that the same device can be used under two or more different operating pressures allowing different sampling modes. In addition, in this way (by increasing the pressure required for pressing), a control mechanism for pushing through the transfer members can be built in, for instance for preventing pushing through of agar bottoms.
Zou het uitsluitend drukken niet voldoende zijn om 15 bepaalde cultures te bemonsteren of over te brengen, dan verdient het overeenkomstig een verdere uitvoeringsvorm van de uitvinding de voorkeur dat elke pin zodanig is bevestigd, dat althans het begin van een langsverplaatsing uit bedoelde eindstand gepaard gaat met een 20 rotatiebeweging. Met een rotatiebeweging wordt een meer schrapend contact van de overbrengorganen met het aan te raken oppervlak bewerkstelligd.If printing alone is not sufficient to sample or transfer certain cultures, it is preferable according to a further embodiment of the invention that each pin is fixed in such a way that at least the start of a longitudinal displacement from said end position is accompanied by a rotational movement. A more scraping contact of the transfer members with the surface to be touched is achieved with a rotary movement.
Voor het bevorderen van een gelijkmatig contact tussen de pinnen en de cultures wordt er een voorkeur voor 25 uitgesproken dat het hanteringsdeel is voorzien van een geleidingsinrichting waarin de drager in slechts een richting verschuifbaar is, welke richting veelal de v langsrichting van de pinnen zal zijn. Verder kan het daarbij de voorkeur verdienen, dat het hanteringsdeel is 30 voorzien van positioneringsmiddelen voor het richten van de inrichting ten opzichte van een houder met een aantal bakvormige compartimenten voor het onderling gescheiden opnemen van een aantal ingevroren cultures.In order to promote an even contact between the pins and the cultures, it is preferred that the handling part is provided with a guiding device in which the carrier is slidable in only one direction, which direction will usually be the longitudinal direction of the pins. It may furthermore be preferred that the handling part is provided with positioning means for aligning the device with respect to a holder with a number of box-shaped compartments for receiving a number of frozen cultures mutually separated.
Om aan de van de pinnen afgekeerde zijde van de 35 drager te kunnen waarnemen dat elke pin in contact is gebracht met een culture, kan er overeenkomstig een verdere «n . : ., ’' i ί! ^ Ν· 7 uitvoeringsvorm van de uitvinding in zijn voorzien dat elke pin is voorzien van een uiteinde met een eindvlak dat in genoemde eindstand deel uitmaakt van een groter vlak en bij *· een langsverplaatsing van bedoelde pin uit dat groter vlak 5 treedt. Bij voorkeur is bedoeld groter vlak een bij gebruik van de inrichting in het zicht liggend vlak van de drager.In order to be able to detect on the side of the carrier facing away from the pins that each pin has been brought into contact with a culture, a further one may be carried out. :., "I ί! In the embodiment of the invention, it is provided that each pin is provided with an end with an end surface which in said end position forms part of a larger surface and exits from said larger surface 5 at a longitudinal displacement of said pin. Preferably, the larger surface is a surface of the carrier which is visible when the device is used.
Bij het overenten van micro-organismen en/of eukaryote cellen is het in het algemeen van belang geen _ andere dan de bedoelde micro-organismen en/of eukaryote 10 cellen over te enten. Om dit te bewerkstelligen moet steriel worden gewerkt. Dit betekent dat tenminste het uiteinde van de pinnen dat in contact wordt gebracht met genoemde cultures gesteriliseerd moet kunnen worden. Daarom wordt tenminste het uiteinde van de pinnen dat in contact 15 kan worden gebracht met de genoemde cultures vervaardigd van een steriliseerbaar materiaal. Sterilisatie kan op verschillende manieren gebeuren zoals bijvoorbeeld door hitte, onderdompeling in een desinfecterend middel en/of door dodende straling zoals ultraviolet licht of 20 radioactieve straling. Bij voorkeur wordt tenminste het uiteinde van de pinnen dat in contact kan worden gebracht met de genoemde cultures gemaakt van een materiaal dat meerdere malen kan worden gesteriliseerd. Een voorbeeld van een meerdere malen steriliseerbaar materiaal is roestvrij v 25 staal.When seeding microorganisms and / or eukaryotic cells, it is generally important not to inoculate other microorganisms and / or eukaryotic cells than those intended. To achieve this, work must be done sterile. This means that it must be possible to sterilize at least the end of the pins that is brought into contact with said cultures. Therefore, at least the end of the pins that can be brought into contact with said cultures is made of a sterilizable material. Sterilization can be done in various ways, such as, for example, by heat, immersion in a disinfectant and / or by killing radiation such as ultraviolet light or radioactive radiation. Preferably, at least the end of the pins that can be contacted with said cultures is made of a material that can be sterilized several times. An example of a material that can be sterilized several times is stainless steel.
In een andere uitvoering van een inrichting van de uitvinding is tenminste het uiteinde van de pinnen dat in % contact kan worden gebracht met de genoemde cultures gemaakt van een plastic materiaal. Ook kan de gehele 30 inrichting zijn gemaakt van plastic. Een van de voordelen van een uitvoering in plastic is dat de inrichting zodanig goedkoop kan worden gefabriceerd dat eenmalig gebruik voor de meeste toepassingen niet op financiële bezwaren stuit bij de eindgebruiker.In another embodiment of a device of the invention, at least the end of the pins that can be brought into contact with the said cultures is made of a plastic material. The entire device can also be made of plastic. One of the advantages of a plastic version is that the device can be manufactured at such a low cost that single use for most applications does not encounter financial concerns from the end user.
35 Het is duidelijk dat een inrichting van de uitvinding niet alleen geschikt is voor monstername van 'i 01 239 49 8 ingevroren cultures. Zij is ook uitermate geschikt voor monstername van gevriesdroogde cultures. Ook kan de inrichting van de uitvinding worden gebruikt voor het overenten van vloeibare cultures en cultures die groeien op 5 een zachte voedingsbodem zoals agar.It is clear that a device of the invention is not only suitable for sampling frozen cultures. It is also extremely suitable for sampling freeze-dried cultures. The device of the invention can also be used for transferring liquid cultures and cultures growing on a soft culture medium such as agar.
Onder verwijzing naar in de figuren weergegeven uitvoeringsvoorbeelden zullen thans, uitsluitend bij wijze van voorbeeld, de werkwijze en inrichting volgens de onderhavige uitvinding nader worden verduidelijkt. Daarbij 10 toont:With reference to exemplary embodiments shown in the figures, the method and device according to the present invention will now be further elucidated, by way of example only. Thereby 10 shows:
Fig. 1 een eerste uitvoeringsvorm van de inrichting volgens de uitvinding in vooraanzicht;Fig. 1 a front view of a first embodiment of the device according to the invention;
Fig. 2 een bovenaanzicht van Fig. 1;Fig. 2 is a top view of FIG. 1;
Fig. 3 de toepassing van een inrichting volgens de 15 uitvinding;Fig. 3 the use of a device according to the invention;
Fig. 4 een tweede uitvoeringsvorm van de inrichting volgens de uitvinding in vooraanzicht; .Fig. 4 a front view of a second embodiment of the device according to the invention; .
Fig. 5 op vergrote schaal een alternatieve uitvoering van een pin-dragerverbinding; en 20 Fig. 6 op vergrote schaal een verdere variant van een pin-dragerverbinding.Fig. 5 an enlarged alternative embodiment of a pin-carrier connection; and FIG. 6 on a larger scale a further variant of a pin-carrier connection.
In Fig. 1 en 2 is een monstername-inrichting weergegeven die voorzien is van een drager 1 met een handvat 2. De drager 1 is voorzien van een aantal boringen 25 waar overbrengorganen in de vorm van pinnen 3 in langsrichting verschuifbaar doorheen reiken. Elke pin 3 is aan zijn ene uiteinde voorzien van een kop 4 en aan zijnIn FIG. 1 and 2, a sampling device is shown which is provided with a carrier 1 with a handle 2. The carrier 1 is provided with a number of bores 25 through which transfer elements in the form of pins 3 extend in the longitudinal direction. Each pin 3 is provided with a head 4 at one end and at its end
VV
andere uiteinde van een afgeronde punt 5. In de in Fig. 1 weergegeven ruststand van de inrichting rusten alle koppen 30 4 op de bovenzijde van de drager 1 en worden in die stand gehouden door veren 6, die enerzijds steun nemen tegen de onderzijde van de drager 1 en anderzijds tegen een op elke pin 3 vastgezette ring 7. De drager 1 is verder nabij zijn vier hoekpunten telkens voorzien van een daarin star 35 bevestigde geleidepin 8 met een zoekpunt 9, die tot voorbij de afgeronde punten 5 van de pinnen 3 reikt. Zoals uit Fig.other end of a rounded tip 5. In the position shown in FIG. 1, the rest position of the device shown, all heads 30 rest on the top side of the carrier 1 and are held in that position by springs 6, which on the one hand take support against the underside of the carrier 1 and on the other hand against a ring 7 fixed on each pin 3 The carrier 1 is further provided near its four corners with a guide pin 8 rigidly fixed therein, with a locating point 9, which extends beyond the rounded points 5 of the pins 3. As shown in Fig.
9 2 blijkt, is de drager voorzien van 96 pinnen 3 en 4 geleidepinnen 8.9 2, the carrier is provided with 96 pins 3 and 4 guide pins 8.
In Fig. 3 is het bemonsteren van cultures 10 met behulp van een inrichting volgens Fig. 1 en 2 weergegeven.In FIG. 3 is the sampling of cultures 10 using an apparatus according to FIG. 1 and 2 are shown.
5 De te bemonsteren cultures 10 zijn ondergebracht in een in doorsnee weergegeven houder 11, die op de inrichting is afgestemd, dat wil zeggen een houder met 96 onderling gescheiden compartimenten 12 in een met de opstelling van de pinnen 3 corresponderend patroon en van 4 10 geleideboringen 13 in een patroon dat correspondeert met de opstelling van de geleidepinnen 8.The cultures 10 to be sampled are accommodated in a cross-section holder 11, which is adapted to the device, that is to say a holder with 96 mutually separated compartments 12 in a pattern corresponding to the arrangement of the pins 3 and of guide bores. 13 in a pattern corresponding to the arrangement of the guide pins 8.
Voor het op de houder 11 plaatsen van de inrichting wordt de inrichting met behulp van het handvat 2 zodanig boven de inrichting gebracht, dat de geleidepinnen 8 15 stroken met de geleideboringen 13. Bij het vervolgens omlaag brengen van de inrichting zorgen de zoekpunten 9 ervoor dat de geleidepinnen 8 soepel in de geleideboringen 13 kunnen schuiven, waardoor de pinnen 3 zodanig ten opzichte van de compartimenten 12 worden gepositioneerd, 20 dat zich boven elk compartiment 12 één pin 3 bevindt. Bij het door middel van het handvat 2 verder omlaag bewegen van de inrichting reiken de pinnen 3 elk in een compartiment 12. Zoals uit Fig. 3 blijkt, is het niveau van de diverse cultures 10 in de diverse compartimenten 12 verschillend.For placing the device on the holder 11, the device is brought above the device with the aid of the handle 2, so that the guide pins 8 are in line with the guide bores 13. When the device is subsequently lowered, the search points 9 ensure that the guide pins 8 can slide smoothly into the guide bores 13, whereby the pins 3 are positioned relative to the compartments 12 such that one pin 3 is located above each compartment 12. When the device is lowered further by means of the handle 2, the pins 3 each reach into a compartment 12. As shown in FIG. 3, the level of the various cultures 10 in the various compartments 12 is different.
25 Bij de in Fig. 3 weergegeven situatie is het niveau in het derde compartiment van links het hoogst en in het meest rechtse compartiment het laagst. Omdat de geleidepinnen 8 er zorg voor dragen, dat de drager 1 een horizontale stand heeft en blijft houden tijdens het omlaag bewegen, zal de 30 pin 3 in het derde compartiment van links met zijn afgeronde punt 5 het eerst tegen het oppervlak van een bevroren culture stuiten. Op dat moment bevinden zich derhalve de overige punten 5 van de overige pinnen 3 nog op afstand van de oppervlakken van de diverse cultures.In the case shown in FIG. 3, the level in the third compartment from the left is highest and the level in the right-most compartment is lowest. Since the guide pins 8 ensure that the carrier 1 maintains and maintains a horizontal position during the downward movement, the pin 3 in the third compartment from the left with its rounded point 5 will first touch the surface of a frozen culture bounce. At that time, therefore, the other points 5 of the other pins 3 are still at a distance from the surfaces of the various cultures.
35 Voortgezette neerwaartse beweging van de drager 1 is mogelijk doordat de pin 3 in het derde compartiment van 1012394¾ 10 links verend kan verplaatsen ten opzichte van de drager 1, dat wil zeggen stil blijven staan terwijl de drager 1 verder neerwaarts wordt verplaatst. Aldus kunnen successievelijk alle afgeronde punten 5 van alle pinnen 3 5 met het oppervlak van de bijbehorende culture 10 in contact worden gebracht. Dit nu is de situatie weergegeven in Fig.Continued downward movement of the carrier 1 is possible because the pin 3 in the third compartment of 1012394¾ 10 can move resiliently to the left with respect to the carrier 1, ie remain stationary while the carrier 1 is moved further down. Thus, all rounded tips 5 of all pins 3 can be successively brought into contact with the surface of the associated culture 10. This is now the situation shown in Fig.
3, waarbij de afgeronde punt 5 van de pin 3 in het meest rechtse compartiment net contact maakt met het oppervlak van de culture 10 in dat compartiment.3, the rounded tip 5 of the pin 3 in the rightmost compartment just making contact with the surface of the culture 10 in that compartment.
10 Opgemerkt wordt dat in de situatie van Fig. 3 alle koppin 4 op één na zijn losgekomen van de bovenzijde van de drager 1. Dit is een teken dat de betreffende punten 5, die niet meer van bovenaf zichtbaar zijn, in contact zijn gekomen met een culture 10. Door de neerwaartse beweging 15 van de drager 1 voort te zetten tot ook de laatste kop 4 is losgekomen van de bovenzijde van de drager 1, is men ervan verzekerd, dat de punten 5 van alle pinnen 3 in contact verkeren met de oppervlakken van de diverse cultures 10. Bovendien is door de veerwerking verzekerd, dat het contact 20 tussen de diverse pinnen 3 en cultures 10 met een door de veren 6 vooraf in te stellen kracht plaatsvindt, zodat aan elk compartiment 12 bij het weer omhoog bewegen van de drager 1 waardoor de pinnen 3 weer loskomen van de cultures 10, de gewenste hoeveelheid culture 10 is te onttrekken en 25 over te brengen naar een voedingsbodem of dergelijke.It is noted that in the situation of FIG. 3 all coupling 4 except one have come loose from the top of the carrier 1. This is a sign that the relevant points 5, which are no longer visible from above, have come into contact with a culture 10. Due to the downward movement 15 of to continue the carrier 1 until the last head 4 has also come off the top of the carrier 1, it is ensured that the tips 5 of all pins 3 are in contact with the surfaces of the various cultures 10. Moreover, the spring action ensures that the contact 20 between the various pins 3 and cultures 10 takes place with a force which can be preset by the springs 6, so that at each compartment 12 when the carrier 1 moves upwards again, causing the pins 3 to separate from the cultures 10, the desired amount of culture 10 can be extracted and transferred to a culture medium or the like.
In Fig. 4 is een inrichting volgens de uitvinding weergegeven die voorzien is van een drager 21, die is samengesteld uit een bovenplaat 22, een· zijrand 23 en een onderplaat 24. Aldus wordt een omsloten ruimte 25 gevormd 30 waar een aantal pinnen 26 doorheen reikt. Elke pin 26 draagt aan zijn ene uiteinde een kop 27 en is aan het andere uiteinde voorzien van een van scherpe uitsteeksels voorzien uiteinde 28. De bovenplaat 22 en de onderplaat 24 zijn voorzien van in lijn gelegen boringen voor het met een 35 schuifpassing geleidend opnemen van een pin 26. De bovenplaat 22 is verder voorzien van verdiepingen 29, die 11 een hoogte hebben gelijk aan die van een kop 27 en al de koppen zodanig kunnen opnemen, dat deze met hun bovenvlakken in het bovenvlak van de bovenplaat 22 zijn gelegen. In de omsloten ruimte is rond elke pin 26 een veer 5 30 aangebracht die enerzijds steunneemt tegen de onderzijde van de bovenplaat 22 en anderzijds via een vast met de pin verbonden ring 31 tegen de bovenzijde van de onderplaat 24 aanligt. De veren 30 en de plaatsing van de ringen 31 op.de pinnen 26 is zodanig gekozen, dat in de ruststand van de 10 inrichting, zoals weergegeven in Fig. 4, de koppen 27 in de verdiepingen 29 zijn gelegen en de bovenvlakken van die koppen 27 in één vlak liggen met het bovenvlak van de bovenplaat 22. Deze laatste is voorzien van uitstekende randgedeelten 22a, die dienst doen als handvatten. De 15 werking van deze inrichting wat betreft het in contact brengen van alle uiteinden 28 van de pinnen 26 met de oppervlakken van verder niet weergegeven cultures is gelijk aan die volgens Fig. 3, zodat deze werking niet verder zal worden beschreven.In FIG. 4 shows a device according to the invention which is provided with a carrier 21, which is composed of a top plate 22, a side edge 23 and a bottom plate 24. Thus, an enclosed space 25 is formed through which a number of pins 26 extend. Each pin 26 carries a head 27 at one end and is provided at the other end with a sharply protruded end 28. The top plate 22 and the bottom plate 24 are provided with aligned bores for the conductive sliding fit of a pin 26. The top plate 22 is further provided with recesses 29, 11 of which have a height equal to that of a head 27 and can accommodate all the heads in such a way that they lie with their top surfaces in the top surface of the top plate 22. A spring 5 is arranged around each pin 26 in the enclosed space, which on the one hand supports against the underside of the top plate 22 and on the other hand rests against the top of the bottom plate 24 via a ring 31 fixedly connected to the pin. The springs 30 and the arrangement of the rings 31 on the pins 26 are selected such that in the rest position of the device, as shown in FIG. 4, the heads 27 are located in the recesses 29 and the top surfaces of those heads 27 are flush with the top surface of the top plate 22. The latter is provided with projecting edge portions 22a, which serve as handles. The operation of this device in contacting all ends 28 of the pins 26 with the surfaces of cultures not shown further is the same as in FIG. 3, so that this operation will not be described further.
20 Opgemerkt wordt, dat het kiezen van pinuiteinden met scherpe uitsteeksels, zoals weergegeven in Fig. 4, in sommige gevallen de voorkeur kan hebben boven afgeronde uiteinden, zoals weergegeven in Fig. 1. Verder kunnen de koppen 27 een gekleurde zijomtreksrand hebben, zodat beter 25 en gemakkelijker waarneembaar is wanneer een pin 26 is verschoven, en zijn punt 28 dus contact heeft gemaakt met het oppervlak van een culture. Immers dan zal de gekleurde zijomtreksrand van de kop 27 uit de verdieping 29 treden en aldus een duidelijke indicatie van de verplaatsing van de 30 pin 26 geven.It should be noted that choosing pin ends with sharp protrusions, as shown in FIG. 4, in some cases may be preferable to rounded ends, as shown in FIG. 1. Furthermore, the heads 27 may have a colored side peripheral edge, so that it is better 25 and easier to detect when a pin 26 is shifted, and thus its tip 28 has made contact with the surface of a culture. After all, the colored side peripheral edge of the head 27 will exit the recess 29 and thus give a clear indication of the movement of the pin 26.
Een verdere mogelijke uitvoering van een pin-dragerverbinding is weergegeven in Fig. 5. Daarbij is voorzien in een (deels weergegeven) plaatvormige drager waaraan een aantal geleidingshulzen 42 is bevestigd. Het 35 van de dr.ager 41 af gekeerde uiteinde van de geleidingshuls 42 is vernauwd tot een doorgang voor het schuivend 12 doorlaten van een pin 43. Bij zijn bovenuiteinde eindigt de pin 43 in een verdikking 44 die met een schuifpassing in de geleidingshuls 42 verplaatsbaar is. Uitgaande van de bovenzijde van de verdikking 44 strekt zich een 5 indicatiestift 45 uit die door een in de drager 41 aangebrachte boring 46 reikt. Tussen de verdikking 44 en de onderzijde van de drager 41 is in de geleidingshuls 42 rond de indicatiestift 45 een veer 47 aangebracht, die de verdikking 44 tegen het vernauwde ondereinde van de 10 geleidingshuls 42 tracht te drukken.A further possible embodiment of a pin-carrier connection is shown in Fig. 5. A plate-shaped support (partly shown) is herein provided to which a number of guide sleeves 42 are attached. The end of the guide sleeve 42 remote from the bearing 41 is narrowed to a passage for sliding pin 43 through sliding. At its upper end, the pin 43 terminates in a boss 44 which is slidable in the guide sleeve 42 is. Starting from the top of the thickening 44, an indicator pin 45 extends through a bore 46 provided in the carrier 41. Between the thickening 44 and the underside of the carrier 41, a spring 47 is arranged in the guide sleeve 42 around the indicator pin 45, which tries to press the thickening 44 against the narrowed lower end of the guide sleeve 42.
In Fig. 5 is de situatie weergegeven, waarbij het niet getoonde ondereinde van de pin 43 in contact is gebracht met het oppervlak van een culture, waarna neerwaartse verplaatsing van de drager 41, om redenen als 15 bovenstaand besproken, is voortgezet. Voordat bedoeld contact tot stand kwam, lag door de werking van de veer 47 de verdikking 44 aan tegen het vernauwde uiteinde van de geleidingshuls 42 en bevond het bovenuiteinde van de indicatiestift 45 zich in het bovenvlak van de drager 41.In FIG. 5 shows the situation where the lower end of the pin 43, not shown, has been brought into contact with the surface of a culture, after which downward movement of the carrier 41, for reasons as discussed above, has continued. Before the intended contact was made, the action of the spring 47 caused the bead 44 to rest against the narrowed end of the guide sleeve 42 and the upper end of the indicator pin 45 to be located in the top surface of the carrier 41.
20 De verplaatsing van de pin 43 is aldus snel en betrouwbaar waar te nemen door de uitstekende indicatiestift 45, zoals getoond in Fig. 5.The displacement of the pin 43 can thus be detected quickly and reliably by the protruding indicator pin 45, as shown in Figs. 5.
Fig. 6 toont weer een andere uitvoeringsmogelijkheid voor de pin-dragerverbinding. De 25 pin 51 is vastgezet in een blok 52 van veerkrachtig of elastisch materiaal, welk blok op zijn beurt weer is vastgezet in een drager 53. De pin 51 kan nu verplaatsenFig. 6 shows yet another embodiment for the pin-carrier connection. The pin 51 is secured in a block 52 of resilient or elastic material, which block in turn is secured in a support 53. The pin 51 can now move
VV
ten opzichte van de drager 53 door een verende uitwijking van het blok 52. Om de verende uitwijking te 30 vergemakkelijken kan het blok 52 zijn voorzien van twee groeven zoals in Fig. 6 met een dunne lijn 54 is aangeduid.with respect to the carrier 53 by a resilient deflection of the block 52. To facilitate the resilient deflection, the block 52 can be provided with two grooves as shown in Figs. 6 is indicated by a thin line 54.
Het spreekt voor zich, dat er binnen het kader van de uitvinding, zoals neergelegd in de bijgaande conclusies, nog vele wijzigingen en varianten mogelijk zijn. Zo kan bij 35 de uitvoeringsvorm van Fig. 4 voorzien zijn in een geleiding van de drager ten opzichte van een 101 239 4* 13 cultureshouder, al dan niet op de wijze zoals getoond in Fig. 3. Ook kunnen de punten op elke geschikte of gewenste wijze worden uitgevoerd en is het aantal pinnen per drager naar wens te kiezen. Verder kunnen er voorzieningen 5 aanwezig zijn, die een pin bij een langsverschuiving tevens een draaiing laten maken, bijvoorbeeld door de verdikking 44 in Fig. 5 de vorm van een wormwiel te geven en de geleidingshuls 42 te voorzien van een corresponderende schroefdraad.It goes without saying that many modifications and variants are possible within the scope of the invention, as laid down in the appended claims. Thus, in the embodiment of FIG. 4, the carrier is guided with respect to a 101 239 4 * 13 culture container, whether or not in the manner as shown in FIG. 3. The points can also be designed in any suitable or desired manner and the number of pins per carrier can be chosen as desired. Furthermore, provisions 5 may be present which also cause a pin to make a rotation during a longitudinal shift, for example by the thickening 44 in Fig. 5 to give the shape of a worm gear and to provide the guide sleeve 42 with a corresponding screw thread.
1010
Ui twerkingsvoorbeeld:Onion twerking example:
Een inrichting van de uitvinding en een procedure voor opslag en groei van aërobe bacteriën is getest voor een collectie van 48 verschillende bodemisolaten. De 15 verschillende bacteriestammen zijn geïsoleerd uit zestien verschillende bodemmonsters uit verschillende delen van Nederland en vervolgens gekarakteriseerd met behulp van 16SRNA analyse. De moeder-microtiter plaat werd als volgt bereid: aan alle 96 wells van een steriele deepwell 20 microtiterplaat werd 500 ul steriele nutriënt-broth agar (8 g/1 nutriënt broth, 2 g/1 bacto-agar) toegevoegd. Na stolling van de nutriënt-broth agar werden 48 wells aangeënt, elk met één van de 48 stammen (die 3 dagen tevoren op nutriënt broth agarplaten uitgestreken waren).An apparatus of the invention and a procedure for storage and growth of aerobic bacteria has been tested for a collection of 48 different soil isolates. The 15 different bacterial strains have been isolated from sixteen different soil samples from different parts of the Netherlands and subsequently characterized using 16SRNA analysis. The master microtiter plate was prepared as follows: 500 µl of sterile nutrient broth agar (8 g / 1 nutrient broth, 2 g / 1 bacto agar) was added to all 96 wells of a sterile deepwell 20 microtiter plate. After solidification of the nutrient broth agar, 48 wells were seeded, each containing one of the 48 strains (streaked 3 days previously on nutrient broth agar plates).
25 Hierbij werd alternerend één well aangeënt en één well niet aangeënt. Hierdoor ontstond een patroon waarbij iedere aangeënte well omringd is door 2-4 niet-aangeënte wells. Na twee dagen van groei werd aan alle 96 wells 500 μΐ vloeibaar nutriënt broth medium (8 g/1) toegevoegd. De 30 microtiterplaat werd vervolgens afgedekt met een steriele deksel bestaande uit een met 96 gaten geperforeerde rubber laag en daarboven op een laag watten. Het geheel werd samengeklemd en gedurende twee dagen bij 25 °C geschud op een orbitale schudder (300 toeren per minuut). Na deze twee 35 dagen groei werd aan alle wells 150 μΐ van een steriel glycerol:water (60:40 v/v) mengsel toegevoegd en gemengd. Vervolgens werd de microtiterplaat ingevroren bij -70 °C.25 One well was inoculated and one well not inoculated. This created a pattern where each inoculated well is surrounded by 2-4 non-inoculated wells. After two days of growth, 500 μΐ liquid nutrient broth medium (8 g / l) was added to all 96 wells. The 30 microtiter plate was then covered with a sterile lid consisting of a 96-hole perforated rubber layer and a cotton wool layer on top. The whole was clamped together and shaken on an orbital shaker (300 rpm) for two days at 25 ° C. After these two 35 days of growth, 150 µl of a sterile glycerol: water (60:40 v / v) mixture was added to all wells and mixed. The microtiter plate was then frozen at -70 ° C.
1414
Na een aantal dagen werd deze moeder microtiterplaat gedurende zo kort mogelijke tijd uit de vriezer genomen en met behulp van een inrichting van de uitvinding werd een kleine hoeveelheid (ongeveer 0.3 μΐ) uit iedere wèll 5 opgenomen en overgebracht naar een steriele microtiterplaat gevuld met 150 μΐ steriele kaliumfosfaat buffer (50 mM, pH 7.0). De inhoud van alle 96 wells van deze plaat werd in verschillende verdunningen uitgeplaat op nutriënt-broth platen en na drie dagen incubatie werden de kolonies geteld 10 en gecontroleerd op reinheid. Uit deze gegevens werd berekend hoeveel kolonie-vormende eenheden uit elk van de wells van de moeder-microtiterplaat waren opgenomen (zie tabel 1). Het aantal door de inrichting overgeënte kolonie-vormende eenheden varieerde voor de verschillende stammen 15 tussen de 180 en 50 000 (zie tabel 1). In geen van de 48 wells van de moeder-microtiterplaat die niet aangeënt waren werden kolonievormende eenheden aangetroffen. Dit geeft aan dat gedurende de beschreven procedure de steriele wells niet werden geïnfecteerd door de aangeënte wells. In een.After a few days, this master microtiter plate was taken out of the freezer for the shortest possible time and using a device of the invention, a small amount (approximately 0.3 μΐ) was taken from each well and transferred to a sterile microtiter plate filled with 150 μ gevuld sterile potassium phosphate buffer (50 mM, pH 7.0). The contents of all 96 wells from this plate were plated at nutrient broth plates in various dilutions and after three days of incubation the colonies were counted and checked for purity. From this data, it was calculated how many colony-forming units were taken up from each of the wells of the master microtiter plate (see Table 1). The number of colony-forming units grafted by the device varied between 180 and 50,000 for the different strains (see Table 1). Colony-forming units were not found in any of the 48 wells of the master microtiter plate that had not been seeded. This indicates that during the described procedure, the sterile wells were not infected by the inoculated wells. In a.
20 tweede experiment werd de inrichting op eenzelfde wijze gebruikt om een klein volume uit de moeder-microtiterplaat op te nemen. De inrichting werd vervolgens direct op een nutriënt broth agarplaat overgebracht. Na twee dagen was op deze agarplaat een regelmatig patroon van gevormde kolonies 25 te zien, geheel in overeenstemming met het patroon van de aangeënte wells in de moeder-microtiterplaat. Vervolgens kon een deel van het celmateriaal van de individuele kolonies op deze agarplaat met behulp van een inrichting van de uitvinding overgebracht worden naar een 30 deepwellplate gevuld met een vloeibaar groeimedium (750 ul/well). Na incubatie op een orbitale schudder gedurende 2 dagen (zoals hierboven beschreven) werden celdichtheden in de orde van 2-8 g/1 bereikt, hetgeen voldoende is voor de meeste toepassingen (bijvoorbeeld tests op de aanwezigheid 35 van een specifiek enzym).In the second experiment, the device was similarly used to record a small volume from the master microtiter plate. The device was then transferred directly to a nutrient broth agar plate. After two days, a regular pattern of colonies formed was seen on this agar plate, fully consistent with the pattern of the inoculated wells in the master microtiter plate. Then, part of the cellular material from the individual colonies on this agar plate could be transferred to a deep well plate filled with a liquid growth medium (750 µl / well) using a device of the invention. After incubation on an orbital shaker for 2 days (as described above), cell densities on the order of 2-8 g / l were achieved, which is sufficient for most applications (eg tests for the presence of a specific enzyme).
1515
Tabel 1.Table 1.
Aantal kolonievormende eenheden opgenomen uit de moeder-microtiterplaat, opgesplitst per bacteriesoort.Number of colony-forming units taken up from the master microtiter plate, broken down by bacterial species.
aantal kolonievormende eenheden opgenomen '* door de inrichting aantal laagste gemiddeld standaard stammen deviatienumber of colony forming units included '* by the device number of lowest average standard strains deviation
Pseudomonas viridiflava 1 5000 5000Pseudomonas viridiflava 1 5000 5000
Pseudomonas syringae 6 6400 39400 35290Pseudomonas syringae 6 6400 39400 35290
Pseudomonas stutzeri 3 10000 26667 20817Pseudomonas stutzeri 3 10000 26667 20817
Pseudomonas putida 5 180 4132 4028.Pseudomonas putida 5 180 4132 4028.
Pseudomonas mendocina 1 20000 20000Pseudomonas mendocina 1 20000 20000
Pseudomonas marginalis 6 10000 50000 40988Pseudomonas marginalis 6 10000 50000 40988
Pseudomonas fulva 2 20000 20000 0Pseudomonas fulva 2 20000 20000 0
Pseudomonas fluorescence 2 20000 35000 21213Pseudomonas fluorescence 2 20000 35000 21213
Pseudomonas cepacia ·1 50000 50000Pseudomonas cepacia · 1 50000 50000
Pseudomonas azotoformans 2 20000 35000 21213Pseudomonas azotoformans 2 20000 35000 21213
Rhodococcus opacus 6 513 2679 2124Rhodococcus opacus 6 513 2679 2124
Rhodococcus globerulus 5 500 7560 7807Rhodococcus globerulus 5 500 7560 7807
Rhodococcus erythropolis 2 15000 57500 60104Rhodococcus erythropolis 2 15000 57500 60104
Alcaligenes sp. 3 8000 9333 1414Alcaligenes sp. 3 8000 9333 1414
Achromobacter xylosoxydans 1 10000 10000 -Achromobacter xylosoxydans 1 10000 10000 -
Variovorax sp. 1 50000 50000Variovorax sp. 1 50000 50000
VV
101 2394a101 2394a
Claims (16)
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
NL1012394A NL1012394C2 (en) | 1999-06-21 | 1999-06-21 | Method and device for simultaneously and independently sampling frozen cultures of microorganisms and / or eukaryotic cells. |
PCT/NL2000/000426 WO2000079237A1 (en) | 1999-06-21 | 2000-06-20 | Method and device for sampling frozen cultures of microorganisms and/or eukaryotic cells simultaneously and independently of each other |
AU57154/00A AU5715400A (en) | 1999-06-21 | 2000-06-20 | Method and device for sampling frozen cultures of microorganisms and/or eukaryotic cells simultaneously and independently of each other |
EP00942549A EP1192438A1 (en) | 1999-06-21 | 2000-06-20 | Method and device for sampling frozen cultures of microorganisms and/or eukaryotic cells simultaneously and independently of each other |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
NL1012394A NL1012394C2 (en) | 1999-06-21 | 1999-06-21 | Method and device for simultaneously and independently sampling frozen cultures of microorganisms and / or eukaryotic cells. |
NL1012394 | 1999-06-21 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NL1012394C2 true NL1012394C2 (en) | 2000-12-22 |
Family
ID=19769424
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NL1012394A NL1012394C2 (en) | 1999-06-21 | 1999-06-21 | Method and device for simultaneously and independently sampling frozen cultures of microorganisms and / or eukaryotic cells. |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1192438A1 (en) |
AU (1) | AU5715400A (en) |
NL (1) | NL1012394C2 (en) |
WO (1) | WO2000079237A1 (en) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7807446B2 (en) | 2006-02-13 | 2010-10-05 | Monsanto Technology Llc | High throughput system and methods for analyzing liquid formulations |
EP2727674A1 (en) | 2012-10-30 | 2014-05-07 | HOLZ-HER GmbH | Saw unit |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3600772A (en) * | 1970-03-12 | 1971-08-24 | Walter Farris | Immunoelectrophoresis agar-gel punch |
WO1990004775A1 (en) * | 1988-10-21 | 1990-05-03 | Biotrace Ltd. | Luminescence or fluorescence monitoring apparatus and method |
EP0514948A1 (en) * | 1987-03-11 | 1992-11-25 | Sumitomo Electric Industries Limited | Apparatus for controlling pipets displaceable relatively to wells of liquid and a culture tray |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
HUP0003296A3 (en) | 1997-07-22 | 2001-09-28 | Qiagen Genomics Inc Bothell | Apparatus and methods for arraying solution onto a solid support |
HUP0100697A2 (en) * | 1997-12-31 | 2001-06-28 | Qiagen Genomics, Inc. | Solid-phase tips and uses relating thereto |
-
1999
- 1999-06-21 NL NL1012394A patent/NL1012394C2/en not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-06-20 AU AU57154/00A patent/AU5715400A/en not_active Abandoned
- 2000-06-20 WO PCT/NL2000/000426 patent/WO2000079237A1/en active Application Filing
- 2000-06-20 EP EP00942549A patent/EP1192438A1/en not_active Withdrawn
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3600772A (en) * | 1970-03-12 | 1971-08-24 | Walter Farris | Immunoelectrophoresis agar-gel punch |
EP0514948A1 (en) * | 1987-03-11 | 1992-11-25 | Sumitomo Electric Industries Limited | Apparatus for controlling pipets displaceable relatively to wells of liquid and a culture tray |
WO1990004775A1 (en) * | 1988-10-21 | 1990-05-03 | Biotrace Ltd. | Luminescence or fluorescence monitoring apparatus and method |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU5715400A (en) | 2001-01-09 |
WO2000079237A1 (en) | 2000-12-28 |
EP1192438A1 (en) | 2002-04-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Fröhlich et al. | New techniques for isolation of single prokaryotic cells | |
Bécard et al. | 6 Establishment of Vesicular-arbuscular Mycorrhiza in Root Organ Culture: Review and Proposed Methodology | |
Somasegaran et al. | Methods in legume-Rhizobium technology | |
Hawes | Living plant cells released from the root cap: A regulator of microbial populations in the rhizosphere? | |
CN106841648B (en) | For carrying out the device and method of microbiological analysis to biological sample | |
Bøvre et al. | Neisseria elongata sp. nov., a rod-shaped member of the genus Neisseria. Re-evaluation of cell shape as a criterion in classification | |
Mazumder et al. | Determining chemotactic responses by two subsurface microaerophiles using a simplified capillary assay method | |
US5605813A (en) | Culture slide assembly | |
Francis et al. | Detached leaf inoculation of germplasm for rapid screening of resistance to citrus canker and citrus bacterial spot | |
NL1012394C2 (en) | Method and device for simultaneously and independently sampling frozen cultures of microorganisms and / or eukaryotic cells. | |
US5518925A (en) | Culture slide assembly | |
US4801547A (en) | Device for detecting presence of micro-organisms in a sample | |
US5360721A (en) | Microbial retrieval and sampling method | |
Petersen et al. | Laboratory exercises in microbiology: Discovering the unseen world through hands-on investigation | |
Wise et al. | Culture and maintenance of Agrobacterium strains | |
CN105238734A (en) | Method for simply and quickly separating cercospora monospores | |
GB2590972A (en) | A tissue sampling kit | |
Marvanová | Maintenance of aquatic hyphomycete cultures | |
KR101079829B1 (en) | Method and Apparatus For Automatically Analyzing DAN of Microbe In Food | |
Meyrath et al. | Chapter III Inoculation Techniques—Effects Due to Quality and Quantity of Inoculum | |
Dennis et al. | A novel method for sampling bacteria on plant root and soil surfaces at the microhabitat scale | |
Tsuji et al. | Genetic and phenotypic characterization of bacterial strains isolated in Japan that resemble Erwinia rhapontici and E. persicinus | |
Macleod et al. | Essential techniques of cancer cell culture | |
Stowers et al. | Criteria for selecting infective and efficient strains of Rhizobium for use in tropical agriculture | |
CN203333648U (en) | Separate culture device for biological samples |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD2B | A search report has been drawn up | ||
V1 | Lapsed because of non-payment of the annual fee |
Effective date: 20110101 |