NL1007827C2

NL1007827C2 - New complexes of beta-lactam antibiotics and poly:hydroxy-naphthalene or -quinoline compounds

Info

Publication number: NL1007827C2
Application number: NL1007827A
Authority: NL
Inventors: Gerjan Kemperman; Rene De Gelder; Petronella C Raemakers-Franken
Original assignee: Dsm Nv
Priority date: 1997-12-18
Filing date: 1997-12-18
Publication date: 1999-06-21

Abstract

Complexes of ~b-lactam antibiotics and polyhydroxy-naphthalenes or -quinolines (I) are new. Complexes of ~b-lactam antibiotics and compounds of formula (I) are new: X = C or N; m, n = 0 or more, provided that m+n = 2 or more. Independent claims are included for the following: (1) preparation of a complex of a ~b-lactam antibiotic and a compound (I), comprising acylating a ~b-lactam nucleus in the presence of (I) and optionally isolating the complex and releasing the antibiotic from the complex; (2) a process for isolating a ~b-lactam antibiotic, comprising contacting the antibiotic with a compound (I) and isolating the resulting complex and optionally releasing the antibiotic from the complex.

Description

• I• I

- 1 - PN 9441- 1 - PN 9441

COMPLEXEN VAN β- LACTAM ANTIBIOTICACOMPLEXES OF β-LACTAM ANTIBIOTICS

5 De uitvinding betreft complexen van een β- lactam antibioticum en een aromatische verbinding.The invention relates to complexes of a β-lactam antibiotic and an aromatic compound.

Dergelijke complexen zijn bekend uit WO-A-93/12250 betreffende de bereiding van antibiotica via enzymatische acylering van een /J-lactamkern in 10 aanwezigheid van naftalenen, in het bijzonder /3-naftol, tijdens de enzymatische acyleringsreactie.Such complexes are known from WO-A-93/12250 concerning the preparation of antibiotics via enzymatic acylation of a / J-lactam core in the presence of naphthalenes, in particular / 3-naphthol, during the enzymatic acylation reaction.

Verrassenderwijze is nu gevonden dat wanneer in plaats van 0-naftol, een aromatische verbinding wordt toegepast met formule 1 (HO) m--O O' (1) waarin X staat voor C of N en m en n een natuurlijk 20 getal (inclusief het getal 0) voorstellen waarbij de som van m en n groter is dan of gelijk aan 2, de complexatie van het /?-lactam antibioticum sneller verloopt en met een hoger rendement waardoor het mogelijk is een hogere opbrengst aan jS-lactam 25 antibioticum te bereiken.Surprisingly, it has now been found that when instead of 0-naphthol, an aromatic compound of formula 1 (HO) m - OO '(1) is used in which X stands for C or N and m and n a natural number (including the number 0) proposals in which the sum of m and n is greater than or equal to 2, the complexation of the /? -lactam antibiotic proceeds faster and with a higher yield, making it possible to achieve a higher yield of jS-lactam antibiotic .

De complexen volgens de uitvinding zijn in het bijzonder nuttige tussenproducten bijvoorbeeld in de enzymatische bereiding van jS-lactam antibiotica, bij de winning van β-lactam antibiotica uit reactiemengsels 30 verkregen na een chemische of enzymatische acyleringsreactie en bij de zuivering van 0-lactam antibiotica.The complexes of the invention are particularly useful intermediates, for example, in the enzymatic preparation of β-lactam antibiotics, in the recovery of β-lactam antibiotics from reaction mixtures obtained after a chemical or enzymatic acylation reaction and in the purification of 0-lactam antibiotics.

De complexen volgens de uitvinding kunnen eenvoudig worden bereid door de β-lactam antibiotica in 35 contact te brengen met een aromatische verbinding met formule 1. De molaire verhouding van de aromatische verbinding met formule 1 tot β-lactam antibioticum is bij voorkeur groter dan 0,5 en ligt in het bijzonder tussen 0,5 en 2. De concentratie van het jS-lactam 1007827 - 2 - antibioticum wordt daarbij bij voorkeur zo hoog mogelijk gekozen, bij voorkeur groter dan 0,01 gew.% β-lactam antibioticum in het reactiemengsel. De temperatuur is daarbij niet bijzonder kritisch en ligt 5 bijvoorbeeld tussen -10 en 100°C, bij voorkeur tussen -5 en 50°C. De pH waarbij de complexen worden gevormd is evenmin bijzonder kritisch; de te bereiken rest-concentratie van het jS-lactam antibioticum in oplossing na complexatie blijkt nagenoeg onafhankelijk van de pH 10 van het mengsel in een brede range van pH-waarden bijvoorbeeld van 1-10 in het bijzonder 2-9, meer in het bijzonder 3-8. Bijgevolg kan de complexvorming eenvoudig worden ingepast op diverse plaatsen in een werkwijze voor de bereiding van jS-lactam antibiotica, 15 bijvoorbeeld tijdens een enzymatische acyleringsreactie, bij de hydrolyse van beschermde β-lactam antibiotica na een chemische acyleringsreactie, waarbij beschermingsgroepen worden toegepast, bij de zuivering van antibiotica en bij het isoleren van β-20 lactam antibiotica uit een reactiemengsel verkregen na de acyleringsreactie of uit de moederloog. Bij voorkeur wordt een pH-waarde tussen 2 en 9, in het bijzonder tussen 4 en 7 gekozen. Uit het complex kan het β-lactam antibioticum worden gewonnen op voor de deskundige 25 algemeen bekende wijze.The complexes according to the invention can be prepared simply by contacting the β-lactam antibiotics with an aromatic compound of formula 1. The molar ratio of the aromatic compound of formula 1 to β-lactam antibiotic is preferably greater than 0, 5 and is in particular between 0.5 and 2. The concentration of the β-lactam 1007827-2 antibiotic is preferably chosen as high as possible, preferably greater than 0.01 wt.% Β-lactam antibiotic in the reaction mixture. The temperature is not particularly critical here and is, for example, between -10 and 100 ° C, preferably between -5 and 50 ° C. Nor is the pH at which the complexes are formed particularly critical; the residual concentration of the β-lactam antibiotic to be reached in solution after complexation appears to be virtually independent of the pH 10 of the mixture in a wide range of pH values, for example from 1-10 in particular 2-9, more in particular 3-8. Consequently, the complex formation can be easily incorporated in various places in a process for the preparation of β-lactam antibiotics, for example during an enzymatic acylation reaction, in the hydrolysis of protected β-lactam antibiotics after a chemical acylation reaction, using protective groups, in the purification of antibiotics and isolation of β-20 lactam antibiotics from a reaction mixture obtained after the acylation reaction or from the mother liquor. Preferably a pH value between 2 and 9, in particular between 4 and 7, is chosen. The β-lactam antibiotic can be recovered from the complex in a manner well known to the skilled worker.

Geschikte aromatische verbindingen zijn bijvoorbeeld naftalenen en chinolines met 2 of meer, in het bijzonder 2, 3 of 4 hydroxy-groepen op de ringen, in het bijzonder dihydroxynaftalenen of 30 dihydroxychinolines, bijvoorbeeld 2,6-dihydroxy-naftaleen, 2,7-dihydroxynaftaleen of 2,3-dihydroxynaftaleen.Suitable aromatic compounds are, for example, naphthalenes and quinolines with 2 or more, in particular 2, 3 or 4, hydroxy groups on the rings, in particular dihydroxynaphthalenes or dihydroxyquinolines, for example 2,6-dihydroxy-naphthalene, 2,7-dihydroxynaphthalene or 2,3-dihydroxynaphthalene.

Een bijzonder geschikte toepassing van de complexen volgens de uitvinding is in de enzymatische 35 acylering van een β-lactamkern met een acyleringsmiddel, waarbij ten minste gedurende een deel van de acyleringsreactie een aromatische verbinding met 1ÜÜ7327 - 3 - formule 1 aanwezig is in het reactiemengsel. Bij een kinetisch gecontroleerde koppeling treedt tijdens een enzymatische acyleringsreactie normaal gesproken hydrolyse van het acyleringsmiddel en het β-lactam 5 antibioticum op. Door de aanwezigheid van de aromatische verbinding in het reactiemengsel en bijgevolg de vorming van de complexen volgens de uitvinding wordt een hogere synthese/hydrolyse verhouding (S/H), de molaire verhouding syntheseproduct 10 (/3-lactam antibioticum) tot hydrolyse product, verkregen en vindt als gevolg van complexatie minder afbraak van het /3-lactam antibioticum plaats. Daarnaast werd een hogere reactiesnelheid gerealiseerd waardoor de afbraak van het β-lactam antibioticum en de β-15 lactamkern wordt beperkt.A particularly suitable application of the complexes according to the invention is in the enzymatic acylation of a β-lactam core with an acylating agent, wherein at least during part of the acylation reaction an aromatic compound with 10327-3-formula 1 is present in the reaction mixture. In a kinetically controlled coupling, hydrolysis of the acylating agent and the β-lactam antibiotic normally occurs during an enzymatic acylation reaction. Due to the presence of the aromatic compound in the reaction mixture and consequently the formation of the complexes according to the invention, a higher synthesis / hydrolysis ratio (S / H), the molar ratio of synthesis product (/ 3-lactam antibiotic) to hydrolysis product, is obtained and due to complexation less degradation of the β-lactam antibiotic takes place. In addition, a higher reaction speed was achieved, which limits the breakdown of the β-lactam antibiotic and the β-15 lactam nucleus.

De concentratie waarbij de enzymatische acyleringsreactie wordt uitgevoerd is niet bijzonder kritisch. De concentratie van de β-lactamkern en van het acyleringsmiddel aan het begin van de 20 acyleringsreactie ligt bijvoorbeeld tussen 100 en 2.000 mM, bij voorkeur tussen 400 en 1.000 mM. Bij voorkeur zijn de β-lactamkern en/of het acyleringsmiddel ten minste tijdens een deel van de acyleringsreactie oververzadigd in het reactiemengsel aanwezig. Dit kan 25 bijvoorbeeld worden bereikt door een mengsel waarin de β-lactamkern en/of het acyleringsmiddel geconcentreerd aanwezig zijn te onderwerpen aan een pH-verhoging of -verlaging of aan een temperatuurverlaging.The concentration at which the enzymatic acylation reaction is carried out is not particularly critical. For example, the concentration of the β-lactam core and of the acylating agent at the start of the acylation reaction is between 100 and 2,000 mM, preferably between 400 and 1,000 mM. Preferably, the β-lactam core and / or the acylating agent are present in the reaction mixture supersaturated during at least part of the acylation reaction. This can be achieved, for example, by subjecting a mixture in which the β-lactam core and / or the acylating agent are present concentrated to a pH increase or decrease or to a temperature decrease.

De uitvinding betreft tevens een werkwijze 30 voor de bereiding van de complexen en het β-lactam antibioticum via (enzymatische) acylering van een β-lactamkern in aanwezigheid van de complexen volgens de uitvinding en de winning van een jS-lactam antibioticum uit een mengsel gebruikmakend van de complexen volgens 35 de uitvinding.The invention also relates to a method for the preparation of the complexes and the β-lactam antibiotic via (enzymatic) acylation of a β-lactam core in the presence of the complexes according to the invention and the extraction of a β-lactam antibiotic from a mixture using of the complexes according to the invention.

De werkwijze volgens de uitvinding kan geschikt worden toegepast bij de bereiding van β-lactam 1007827 - 4 - antibiotica, bijvoorbeeld cephalexine, cefaclor, cephradine, cefadroxil, cefotaxim, cefazoline, cefprozil, loracarbef en cefaloglycine, in het bijzonder cephradine en cefadroxil.The method of the invention can be suitably used in the preparation of β-lactam 1007827-4 antibiotics, for example, cephalexin, cefaclor, cephradine, cefadroxil, cefotaxime, cefazoline, cefprozil, loracarbef and cefaloglycine, in particular cephradine and cefadroxil.

5 In principe kan elke β-lactamkern worden toegepast; in het bijzonder een /3-lactamkern met de algemene formule (1)In principle, any β-lactam core can be used; in particular a 3-lactam core with the general formula (1)

Ro h!K--1/ \Ro h! K - 1 / \

15 O^OK15 O ^ OK

waarin R0 staat voor H of een alkoxygroep met 1-3 C-atomen; Y staat voor CH2, O, S of een geoxideerde vorm van zwavel; en Z staat voor 20 \ \ \wherein R0 represents H or an alkoxy group with 1-3 C atoms; Y represents CH2, O, S or an oxidized form of sulfur; and Z stands for 20 \ \ \

Λ A « AΛ A «A

" Rx , of CH2 25 waarin Rx bijvoorbeeld staat voor H, OH, halogeen, een alkoxygroep met 1-5 C-atomen, een alkylgroep met 1-5 C-atomen, een cycloalkylgroep met 4-8 C-atomen, een aryl of een heteroarylgroep met 6-10 C-atomen, waarbij de 30 groepen eventueel gesubstitueerd kunnen zijn bijvoorbeeld met een alkyl-, een aryl-, een carboxy- of een alkoxygroep met 1-8 C-atomen; en waarin de carbonzuurgroep desgewenst een estergroep kan zijn."Rx, or CH2 wherein Rx represents, for example, H, OH, halogen, an alkoxy group with 1-5 C atoms, an alkyl group with 1-5 C atoms, a cycloalkyl group with 4-8 C atoms, an aryl or a heteroaryl group with 6-10 C atoms, wherein the groups may be optionally substituted, for example, with an alkyl, an aryl, a carboxy or an alkoxy group with 1-8 C atoms, and wherein the carboxylic acid group may optionally have an ester group to be.

Geschikte voorbeelden van /3-lactamkernen die 35 kunnen worden toegepast in de werkwijze volgens de uitvinding zijn cefalosporine-derivaten, bijvoorbeeld een 7-aminocefalosporaanzuur al of niet met een substituent op de 3-plaats, bijvoorbeeld 7-aminocefalosporaanzuur (7-ACA), 40 7-aminodesacetoxycefalosporaanzuur (7-ADCA) en 7-amino- 1007827 - 5 - 3-chloor-cef-3-em-4-carbonzuur (7-ACCA) en 7-amino-3-chloor-8-oxo-l-azabicyclo[4.2.0] oct-2-een-2-carbonzuur.Suitable examples of 3-lactam nuclei which can be used in the method according to the invention are cephalosporin derivatives, for example a 7-aminocephalosporanoic acid with or without a substituent in the 3-position, for example 7-aminocephalosporanoic acid (7-ACA), 40 7-aminodesacetoxycephalosporanic acid (7-ADCA) and 7-amino-1007827 - 5 - 3-chloro-cef-3-em-4-carboxylic acid (7-ACCA) and 7-amino-3-chloro-8-oxo-1 -azabicyclo [4.2.0] oct-2-an-2-carboxylic acid.

In de (enzymatische) acyleringsreactie kunnen als acyleringsmiddel bijvoorbeeld een fenylglycine in 5 geaktiveerde vorm bij voorkeur een (primair, secundair of tertiair) amide of zout daarvan, of een lager alkyl (1-4C) ester, bijvoorbeeld een methylester worden toegepast; als fenylglycines komen bijvoorbeeld in aanmerking al dan niet gesubstitueerde fenylglycines in 10 het bijzonder fenylglycine, p-hydroxyfenylglycine, dihydrofenylglycine.In the (enzymatic) acylation reaction, as acylating agent, for example, a phenylglycine in activated form can preferably be used a (primary, secondary or tertiary) amide or salt thereof, or a lower alkyl (1-4C) ester, for example a methyl ester; as phenylglycines, for example, substituted or unsubstituted phenylglycines, in particular phenylglycine, p-hydroxyphenylglycine, dihydrophenylglycine are suitable.

Als enzym kan daarbij in principe elk enzym worden toegepast dat geschikt is als katalysator in de koppelingsreactie. Dergelijke enzymen zijn bijvoorbeeld 15 de enzymen die bekend zijn onder de algemene aanduiding penicilline amidase of penicilline acylase. Dergelijke enzymen zijn bijvoorbeeld beschreven in J.G. Shewale et. al. Process Biochemistry, Augustus 1989 p. 146-154 en in J.G. Shewale et. al. Process Biochemistry 20 International, Juni 1990, p. 97-103. Voorbeelden van geschikte enzymen zijn enzymen afgeleid van Acetobacter. in het bijzonder Acetobacter pasteurianum, Aeromonas, Alcaligenes, in het bijzonder Alcaligenes faecalis, Aphanocladium. Bacillus sp., in het bijzonder 25 Bacillus megaterium, Cephalosporium, Escherichia, in het bijzonder Escherichia coli. Flavobacterium.In principle, any enzyme suitable as a catalyst in the coupling reaction can be used as the enzyme. Such enzymes are, for example, the enzymes known under the general term penicillin amidase or penicillin acylase. Such enzymes are described, for example, in J.G. Shewale et. al. Process Biochemistry, August 1989 p. 146-154 and in J.G. Shewale et. al. Process Biochemistry 20 International, June 1990, p. 97-103. Examples of suitable enzymes are enzymes derived from Acetobacter. in particular Acetobacter pasteurianum, Aeromonas, Alcaligenes, in particular Alcaligenes faecalis, Aphanocladium. Bacillus sp., In particular Bacillus megaterium, Cephalosporium, Escherichia, in particular Escherichia coli. Flavobacterium.

Fusarium. in het bijzonder Fusarium oxvsporum en Fusarium solani. KIuwera. Mvcoplana. Protaminobacter. Proteus. in het bijzonder Proteus rettgeri. Pseudomonas 30 en Xanthomonas, in het bijzonder Xanthomonas citrii.Fusarium. in particular Fusarium oxvsporum and Fusarium solani. KIuwera. Mvcoplana. Protaminobacter. Proteus. in particular Proteus rettgeri. Pseudomonas 30 and Xanthomonas, in particular Xanthomonas citrii.

Bij voorkeur wordt een geïmmobiliseerd enzym toegepast, aangezien het enzym dan eenvoudig afgescheiden en hergebruikt kan worden.An immobilized enzyme is preferably used, since the enzyme can then be easily separated and reused.

Van de geïmmobiliseerde enzymen die 35 commercieel verkrijgbaar zijn, zijn bijvoorbeeld bijzonder geschikt gebleken het Escherichia coli enzym van Boehringer Mannheim GmbH dat onder de naam Enzygel® 1007827 - 6 - commerciëel verkrijgbaar is, het geïmmobiliseerde Penicilline-G acylase van Recordati en het geïmmobiliseerde Penicilline-G acylase van Pharma Biotechnology Hannover. Daarnaast kunnen enzymen ook 5 als kristallijne stof worden ingezet (CLEC's™).For example, among the immobilized enzymes commercially available, the Escherichia coli enzyme from Boehringer Mannheim GmbH, which is commercially available under the name Enzygel® 1007827-6, has been found to be particularly suitable, the immobilized Penicillin-G acylase from Recordati and the immobilized Penicillin G acylase from Pharma Biotechnology Hannover. In addition, enzymes can also be used as a crystalline substance (CLEC's ™).

De temperatuur waarbij de enzymatische acyleringsreaktie wordt uitgevoerd is niet bijzonder kritisch en ligt vanwege de stabiliteit van het enzym meestal lager dan 40°C, bij voorkeur tussen -5 en 35°C. 10 De pH waarbij de enzymatische acyleringsreactie wordt uitgevoerd ligt meestal tussen 5,5 en 9,5, bij voorkeur tussen 6,0 en 9,0.The temperature at which the enzymatic acylation reaction is carried out is not particularly critical and, due to the stability of the enzyme, is usually below 40 ° C, preferably between -5 and 35 ° C. The pH at which the enzymatic acylation reaction is carried out is usually between 5.5 and 9.5, preferably between 6.0 and 9.0.

Bij voorkeur wordt de reactie vrijwel volledig gestopt wanneer nagenoeg de maximale conversie 15 is bereikt. Een geschikte uitvoeringsvorm om de reactie te stoppen is het verlagen van de pH, bij voorkeur tot een waarde tussen 4,0 en 6,3, in het bijzonder tussen 4,5 en 5,7. Een andere geschikte uitvoeringsvorm is het verlagen van de temperatuur van het reactiemengsel 20 zodra de maximale conversie is bereikt. Ook een combinatie van beide uitvoeringsvormen is mogelijk.Preferably, the reaction is stopped almost completely when the maximum conversion is reached. A suitable embodiment to stop the reaction is to lower the pH, preferably to a value between 4.0 and 6.3, in particular between 4.5 and 5.7. Another suitable embodiment is to lower the temperature of the reaction mixture 20 once the maximum conversion has been reached. A combination of both embodiments is also possible.

Nadat de reactie vrijwel gestopt is bij het bereiken van maximale conversie, is het reactiemengsel meestal aanwezig in de vorm van een suspensie die 25 meerdere vaste stoffen, bijvoorbeeld het antibioticum, D-fenylglycine en eventueel geïmmobiliseerd enzym bevat. Het geïmmobiliseerde enzym wordt, vanwege de proceseconomie, bij voorkeur teruggewonnen. Dit kan bijvoorbeeld geschikt worden uitgevoerd door het 30 reactiemengsel roerend te filteren over een zeef, waarbij bij voorkeur de draairichting van de roerder zodanig wordt gekozen dat de suspensie bij het centrum van de roerder omhooggepompt wordt. Vervolgens kunnen waardevolle componenten, bijvoorbeeld het antibioticum 35 en FG, worden gewonnen, bijvoorbeeld met behulp van een pH-verandering.After the reaction has virtually stopped upon reaching maximum conversion, the reaction mixture is usually present in the form of a suspension containing multiple solids, for example, the antibiotic, D-phenylglycine and optionally immobilized enzyme. Due to the process economy, the immobilized enzyme is preferably recovered. This can conveniently be done, for example, by filtering the reaction mixture over a screen while stirring, preferably selecting the direction of rotation of the stirrer such that the suspension is pumped up at the center of the stirrer. Valuable components, for example the antibiotic 35 and FG, can then be recovered, for example by means of a pH change.

Een pH-verlaging kan in het kader van de 1007827 - 7 - uitvinding bijvoorbeeld worden bewerkstelligd door toevoegen van een zuur. Geschikte zuren zijn bijvoorbeeld minerale zuren, in het bijzonder zwavelzuur, zoutzuur of salpeterzuur en carbonzuren, 5 bijvoorbeeld azijnzuur, oxaalzuur en citroenzuur. Een pH-verhoging kan bijvoorbeeld worden bewerkstelligd door toevoegen van een base. Geschikte basen zijn bijvoorbeeld anorganische basen, in het bijzonder ammonia, kaliloog of natronloog en organische basen, 10 bijvoorbeeld triethylamine en FGA. Bij voorkeur wordt ammonia toegepast.In the context of the invention, a pH reduction can for instance be effected by adding an acid. Suitable acids are, for example, mineral acids, in particular sulfuric, hydrochloric or nitric and carboxylic acids, for example acetic, oxalic and citric acid. For example, a pH increase can be accomplished by adding a base. Suitable bases are, for example, inorganic bases, in particular ammonia, caustic potash or caustic soda and organic bases, for example triethylamine and FGA. Ammonia is preferably used.

De enzymatische acyleringsreaktie en de aangegeven maatregelen bijvoorbeeld de aanmaak van de oververzadigde mengsels kunnen worden uitgevoerd in 15 water. Desgewenst kan het reaktiemengsel ook een organisch oplosmiddel of een mengsel van organische oplosmiddelen bevatten, bij voorkeur minder dan 30 vol.%. Voorbeelden van organische oplosmiddelen die kunnen worden toegepast zijn alcoholen met 1-7 C-20 atomen, bijvoorbeeld een monoalcohol, in het bijzonder methanol of ethanol; een diol, in het bijzonder ethyleenglycol of een triol, in het bijzonder glycerol.The enzymatic acylation reaction and the indicated measures, for example the preparation of the supersaturated mixtures, can be carried out in water. If desired, the reaction mixture may also contain an organic solvent or a mixture of organic solvents, preferably less than 30% by volume. Examples of organic solvents that can be used are alcohols with 1-7 C-20 atoms, for example a monoalcohol, in particular methanol or ethanol; a diol, especially ethylene glycol or a triol, especially glycerol.

De molaire verhouding acyleringsmiddel tot β-lactamkern, d.w.z. de totale hoeveelheid toegevoegd 25 acyleringsmiddel gedeeld door de totale hoeveelheid toegevoegde /3-lactamkern uitgedrukt in molen, is kleiner dan 2,5. Bij voorkeur ligt de molaire verhouding tussen 0,5 en 2,0, in het bijzonder tussen 0,7 en 1,8.The molar ratio of acylating agent to β-lactam core, i.e. the total amount of added acylating agent divided by the total amount of added / 3-lactam core expressed in moles, is less than 2.5. The molar ratio is preferably between 0.5 and 2.0, in particular between 0.7 and 1.8.

30 De enzymatische acyleringsreactie wordt bij voorkeur als batch proces uitgevoerd. Desgewenst is het ook mogelijk om de reactie continu uit te voeren.The enzymatic acylation reaction is preferably carried out as a batch process. If desired, it is also possible to carry out the reaction continuously.

De uitvinding zal verder worden toegelicht aan de hand van de voorbeelden zonder evenwel daardoor 35 te worden beperkt.The invention will be further elucidated by means of the examples without, however, being limited thereby.

Voorbeelden 1007827 - 8 - 7 -ACCA: 7-amino-3 -chloor-cef-3-em-4-carbonzuur 7-ADCA: 7-aminodesacetoxycefalosporaanzuur 6-APA: 6-aminopenicillaanzuur CC1: cefaclor 5 CEX: cephalexine FG: D-fenylglycine FGA: D-fenylglycineamide FGH: D-p-hydroxyfenylglycine FGHM: D-p-hydroxyfenylglycine methylester 10Examples 1007827 - 8 - 7 -ACCA: 7-amino-3-chloro-cef-3-em-4-carboxylic acid 7-ADCA: 7-aminodesacetoxycephalosporanic acid 6-APA: 6-aminopenicillanic acid CC1: cefaclor 5 CEX: cephalexin FG: D -phenylglycine FGA: D-phenylglycine amide FGH: Dp-hydroxyphenylglycine FGHM: Dp-hydroxyphenylglycine methyl ester 10

Assemblase™ is een geïmmobiliseerde Escherichia coli penicilline acylase uit E. coli ATCC 11105, zoals beschreven in WO-A-97/04086. De immobilisatie is uitgevoerd als beschreven in EP-A-222462, waarbij 15 gelatine en chitosan als gelerend agens en glutaaraldehyde als crosslinker zijn gebruikt.Assemblase ™ is an immobilized Escherichia coli penicillin acylase from E. coli ATCC 11105 as described in WO-A-97/04086. Immobilization was performed as described in EP-A-222462 using gelatin and chitosan as gelling agent and glutaraldehyde as crosslinker.

De uiteindelijke activiteit van de Escherichia coli penicilline acylase wordt bepaald door de hoeveelheid enzym die aan de geactiveerde bolletjes 20 is toegevoegd en bedroeg 3 ASU/g drooggewicht waarbij 1 ASU (Amoxicilline Synthese Unit) is gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die per uur l g Amoxicilline.3H20 genereert uit 6-APA en FGHM (bij 20°C); 6,5% 6-APA en 6,5% FGHM).The final activity of the Escherichia coli penicillin acylase is determined by the amount of enzyme added to the activated beads 20 and was 3 ASU / g dry weight with 1 ASU (Amoxicillin Synthesis Unit) defined as the amount of enzyme per hour Amoxicillin. 3H20 generates from 6-APA and FGHM (at 20 ° C); 6.5% 6-APA and 6.5% FGHM).

2525

Voorbeeld IExample I

Complexatie van diverse cefalosprines met diverse naftaleen derivaten als complexerend agens.Complexation of various cephalosprins with various naphthalene derivatives as complexing agent.

Aan een waterige oplossing van een 30 cefalosporine met een concentratie van 1-2 massa % (als aangegeven op t=0) werd een loog- of ammoniakoplossing toegedruppeld tot de pH-waarde van 6,3 was bereikt. Vervolgens werd een equimolaire hoeveelheid van het naftaleenderivaat toegevoegd. Op diverse tijdstippen 35 werden monsters genomen. Na filtratie over een 0,45 μ filter werd in het filtraat m.b.v. HPLC de concentratie van het betreffende cefalosporine bepaald.Lye or ammonia solution was added dropwise to an aqueous solution of a cephalosporin at a concentration of 1-2 mass% (as indicated at t = 0) until the pH value of 6.3 was reached. An equimolar amount of the naphthalene derivative was then added. Samples were taken at various times. After filtration through a 0.45 μ filter, the filtrate was charged with HPLC determined the concentration of the respective cephalosporin.

1007827 .1007827.

- 9 -- 9 -

De resultaten zijn weergegeven in tabel 1.1-1.3.The results are shown in Table 1.1-1.3.

TABEL 1.1 5 Complexatie van cefadroxil met 2,7-dihydroxynaftaleen of 2,6-dihydroxynaftaleen als complexerend agens.TABLE 1.1 5 Complexation of cefadroxil with 2,7-dihydroxynaphthalene or 2,6-dihydroxynaphthalene as complexing agent.

[cefadroxil] in filtraat (m%) 10 Reaktietijd (uur) 0 0,5 1,5 24,0 2,7-dihydroxynaftaleen 1,00 0,15 0,07 0,07 2.6- dihydroxynaftaleen 1,00 0,20 0,19 0,19 15 TABEL 1.2[cefadroxil] in filtrate (m%) 10 Response time (h) 0 0.5 1.5 24.0 2,7-dihydroxynaphthalene 1.00 0.15 0.07 0.07 2.6-dihydroxynaphthalene 1.00 0.20 0.19 0.19 15 TABLE 1.2

Complexatie van cephradine met dihydroxynaftaleen-derivaten als complexerend agens.Complexation of cephradine with dihydroxynaphthalene derivatives as a complexing agent.

20 [cephradine] in filtraat (m%)20 [cephradine] in filtrate (m%)

Reaktietijd (uur) 0 0,5 1,5 24,0 2,3-dihydroxynaftaleen 1,10 0,06 0,06 0,06 2.6- dihydroxynaftaleen 1,10 0,12 0,12 0,10 2.7- dihydroxynaftaleen 1,10 0,15 0,14 0,13 25 1,4-dihydroxynaftaleen 1,10 0,18 0,21 0,33 1,5-dihydroxynaftaleen 1,10 0,86 0,77 0,12 1007627 - 10 -TABEL 1.3Response time (hours) 0 0.5 1.5 24.0 2,3-dihydroxynaphthalene 1.10 0.06 0.06 0.06 2.6-dihydroxynaphthalene 1.10 0.12 0.12 0.10 2.7-dihydroxynaphthalene 1 .10 0.15 0.14 0.13 25 1,4-dihydroxynaphthalene 1.10 0.18 0.21 0.33 1.5-dihydroxynaphthalene 1.10 0.86 0.77 0.12 1007627 - 10 - TABLE 1.3

Complexatie van cephalexine met dihydroxynaftaleen-derivaten als complexerend agens 5 [cephalexine] in filtraat (m%) Reaktietijd (uur) 0 0,5 1,5 24,0 1,5-dihydroxynaftaleen 0,95 0,19 0,18 0,11 2,3-dihydroxynaftaleen 0,95 0,16 0,16 0,13 10 2,6-dihydroxynaftaleen 0,95 0,23 0,22 0,15Complexation of cephalexin with dihydroxynaphthalene derivatives as complexing agent 5 [cephalexin] in filtrate (m%) Response time (h) 0 0.5 1.5 24.0 1,5-dihydroxynaphthalene 0.95 0.19 0.18 0. 11 2,3-dihydroxynaphthalene 0.95 0.16 0.16 0.13 10 2,6-dihydroxynaphthalene 0.95 0.23 0.22 0.15

Voorbeeld IIExample II

Aan een waterige oplossing met 11,1 g FGHM 15 (425 mM) en 9,4 g 7-ADCA (305 mM) werd 3,9 g 2,7- dihydroxynaftaleen toegevoegd (158 mM) bij T=15°C. Voorafgaand aan toevoeging van geïmmobiliseerd Assemblase™ (35,4 g) werd de pH op 7,0 gesteld m.b.v. NH40H. Op diverse tijdstippen werden monsters genomen en 20 geanalyseerd. Conversie, S/H-ratio en de cefadroxilconcentratie in filtraatmonsters zijn weergegeven in Tabel 2.To an aqueous solution containing 11.1 g of FGHM 15 (425 mM) and 9.4 g of 7-ADCA (305 mM) was added 3.9 g of 2,7-dihydroxynaphthalene (158 mM) at T = 15 ° C. Prior to addition of immobilized Assemblase ™ (35.4 g), the pH was adjusted to 7.0 using NH40H. Samples were taken and analyzed at various times. Conversion, S / H ratio and the cefadroxil concentration in filtrate samples are shown in Table 2.

TABEL 2 25TABLE 2 25

Enzymatische synthese van cefadroxil in aanwezigheid van 2,7-dihydroxynaftaleen.Enzymatic synthesis of cefadroxil in the presence of 2,7-dihydroxynaphthalene.

30 Tijd (min) 6 98 193 125030 Time (min) 6 98 193 1250

Conversie (%) 1,6 24,2 55 78 S/H ratio 0,5 2,7 3,0 1,1 [cedrox] (llcraat 0,18 0,12 0,11 0,14 10C7Q'27 'Conversion (%) 1.6 24.2 55 78 S / H ratio 0.5 2.7 3.0 1.1 [cedrox] (lcrate 0.18 0.12 0.11 0.14 10C7Q'27 '

Claims

1. Complex of a / S-lactam antibiotic and an aromatic compound, characterized in that the aromatic compound is a compound of formula (1) / '' V'-x * 08 * 10 (HO) ir (- o | OI (1) X where X stands for C or N and m and n represent a natural number (including the number 0) where the sum of m and n is greater than or equal to 2.

The complex of claim 1, wherein the aromatic compound is a naphthalene.

3. Complex according to claim 2, wherein the β-lactam antibiotic is cefadroxyl and the aromatic compound is 2,7-dihydroxynaphthalene.

Complex according to claim 2, wherein in the β-lactam antibiotic is cephradine and the aromatic compound is 2,3-dihydroxynaphthalene.

The complex of claim 2, wherein the 0-lactam antibiotic is cefaclor and the aromatic compound is 2,6-dihydroxynaphthalene.

6. Process for the preparation of a complex of a β-lactam antibiotic and an aromatic compound of formula (1) wherein X, m and n are as defined above wherein a β-lactam core is acylated with an acylating agent for at least at least part of the acylation reaction a complexing agent is present, characterized in that an aromatic compound of formula (1) as defined above is used as complexing agent. 1007827 I, - 12 -

The method of claim 6, wherein the complex is isolated and the β-lactam antibiotic is released from the complex.

8. A method according to claim 6 or 7, wherein the acylation reaction takes place in the presence of an enzyme.

9. A method of recovering a β-lactam antibiotic wherein a mixture containing the β-lactam antibiotic is contacted with the aromatic compound of formula 1 as defined above, whereby a complex of the β-lactam antibiotic and the aromatic compound is formed and the complex is recovered.

10. A method according to claim 9, wherein subsequently the β-lactam antibiotic is released from the complex.

11. Complexes and methods for the preparation of the complexes and β-lactam antibiotics therefrom, as described and illustrated by the examples. 1C01827 COOPERATION TREATY (PCT) REPORT ON NEWNESS SUBJECTS OF INTERNATIONAL TYPE ION IDENTIFICATION OF OE NATIONAL APPLICATION Characteristic of o · applicant ol of αβ gemacruigae 9441NL New application no. intemaDonaai type By oe Insanoe for Intemaoonaai Onoerzoek (ISA). just request for an investigation of international type segekenO nr. SN 30488 EN I. CLASSIFICATION OF THE SUBJECT (in case of oscassmg of verscfullenoe dassilicaoes. state all ossifieaoeymboies) According to the international classification (IPC) Int.Cl.6: C 07 D 501/12 , C

12 P 35/04 ________________ "| II. TECHNIQUE EXAMINED 1 1 '~ * ——— I _ Unsupported minimum documentation____! Classification system | ____ Classification code __ * __! - j I i {Int.Cl.6: C 07 D , C 12 P j Ij * i I! Jii: I ί ί Onoerzocr.te ancere cocumencaie öan ae minimum dccumenaoe enter so far aergeiiike docenaen m oe oncerzocr.te ceoieoen zqn visen i ί \ I: i: j II j ^ i _ j lil.; _ NO RESEARCH MCLUCK FOR CERTAIN CONCLUSIONS (ccnerxirger. co supplement day IV. ~~ LACK OF UNITY OF INVENTION iccircirc cc replenishment mcsciaci ·