NL1007158C2 - Enzymatic modification. - Google Patents

Enzymatic modification.

Info

Publication number
NL1007158C2
NL1007158C2 NL1007158A NL1007158A NL1007158C2 NL 1007158 C2 NL1007158 C2 NL 1007158C2 NL 1007158 A NL1007158 A NL 1007158A NL 1007158 A NL1007158 A NL 1007158A NL 1007158 C2 NL1007158 C2 NL 1007158C2
Authority
NL
Grant status
Grant
Patent type
Prior art keywords
proteins
acid
hydrogen
protein
reaction mixture
Prior art date
Application number
NL1007158A
Other languages
Dutch (nl)
Inventor
Hindrik Jan Huizing
Cees Van Dijk
Carmen Gabriela Boeriu
Original Assignee
Inst Voor Agrotech Onderzoek
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Grant date

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; THEIR TREATMENT, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23JPROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/14Vegetable proteins
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; THEIR TREATMENT, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23JPROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/04Animal proteins
    • A23J3/08Dairy proteins
    • A23J3/10Casein
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; THEIR TREATMENT, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A23B - A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/20Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents
    • A23L29/206Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents of vegetable origin
    • A23L29/212Starch; Modified starch; Starch derivatives, e.g. esters or ethers
    • A23L29/219Chemically modified starch; Reaction or complexation products of starch with other chemicals
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; THEIR TREATMENT, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A23B - A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/20Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents
    • A23L29/275Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing gelling or thickening agents of animal origin, e.g. chitin
    • A23L29/281Proteins, e.g. gelatin or collagen
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; THEIR TREATMENT, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23PSHAPING OR WORKING OF FOODSTUFFS, NOT FULLY COVERED BY A SINGLE OTHER SUBCLASS
    • A23P20/00Coating of foodstuffs; Coatings therefor; Making laminated, multi-layered, stuffed or hollow foodstuffs
    • A23P20/20Making of laminated, multi-layered, stuffed or hollow foodstuffs, e.g. by wrapping in preformed edible dough sheets or in edible food containers
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; THEIR TREATMENT, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23PSHAPING OR WORKING OF FOODSTUFFS, NOT FULLY COVERED BY A SINGLE OTHER SUBCLASS
    • A23P30/00Shaping or working of foodstuffs characterised by the process or apparatus
    • A23P30/40Foaming or whipping
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K1/00General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/107General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
    • C07K1/1072General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups
    • C07K1/1075General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups by covalent attachment of amino acids or peptide residues
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K1/00General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/107General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
    • C07K1/1072General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups
    • C07K1/1077General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups by covalent attachment of residues other than amino acids or peptide residues, e.g. sugars, polyols, fatty acids
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76Albumins
    • C07K14/765Serum albumin, e.g. HSA
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76Albumins
    • C07K14/77Ovalbumin
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/78Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/795Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
    • C07K14/80Cytochromes
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C08ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08LCOMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L33/00Compositions of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and only one being terminated by only one carboxyl radical, or of salts, anhydrides, esters, amides, imides or nitriles thereof; Compositions of derivatives of such polymers
    • C08L33/04Homopolymers or copolymers of esters
    • C08L33/06Homopolymers or copolymers of esters of esters containing only carbon, hydrogen and oxygen, which oxygen atoms are present only as part of the carboxyl radical
    • C08L33/08Homopolymers or copolymers of acrylic acid esters
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C12P7/22Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group aromatic
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/24Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carbonyl group
    • C12P7/26Ketones

Description

ENZYMATISCHE MODIFICATIE ENZYMATIC MODIFICATION

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op de enzymatische modificatie van verschillende substraten. The present invention relates to the enzymatic modification of different substrates.

De uitvinding betreft verder de producten, die door middel van deze chemische modificatie vervaardigd kunnen 5 worden en hun toepassingen. The invention further relates to the products, which can be 5 produced by means of this chemical modification and its applications.

Eiwitten van plantaardige en dierlijke oorsprong worden gebruikt in de voedings- en non food industrie. Proteins of vegetable and animal origin are used in the food and non-food industry. Met name dierlijke eiwitten hebben traditioneel verschillende toepassingen gekend in allerlei voedings-10 middelen en op andere gebieden. In particular, animal proteins traditionally have various applications known in a variety of nutritional agents 10, and in other areas. Plantaardige eiwitten zijn in beginsel goedkoop en in overvloed verkrijgbaar maar hebben het nadeel dat ze vaak niet de voor een bepaalde toepassing gewenste functionele eigenschappen hebben. Vegetable proteins are basically cheap and available in abundance but have the disadvantage that they often do not have a particular application desired functional properties. Hun gebruik in genoemde toepassingen is derhalve 15 steeds veel beperkter geweest. Their use in said applications is 15 therefore always been much more limited.

De functionele eigenschappen van een eiwit hangen in het bijzonder samen met hun fysicochemische en structurele eigenschappen. The functional properties of a protein, in particular, hanging together with their physico-chemical and structural properties. Voor industriële toepassing van eiwitten is het vaak nodig een of meer van dergelijke 20 eigenschappen, zoals dispergeerbaarheid, kleur, schuim-vormend vermogen, kleefsterkte, colloïdbeschermende eigenschappen, bevochtigbaarheid, molecuulgrootte of molecuulvorm te verbeteren of veranderen. For industrial application of proteins is to improve or change often necessary one or more of such 20 properties, such as dispersibility, color, foam-forming performance, adhesive strength, colloïdbeschermende properties, wettability, molecular size or molecular shape. Dit geldt zowel voor plantaardige als voor dierlijke eiwitten. This is true for both the plant as well as for animal protein.

25 De chemische en enzymatische modificatie van eiwitten voor verschillende toepassingen is in de literatuur beschreven. 25 The chemical and enzymatic modification of proteins for different applications has been described in the literature. Dergelijke modificaties zijn bijvoorbeeld het crosslinken van de afzonderlijke eiwitmoleculen met elkaar en/of andere moleculen. Such modifications are, for example, the cross-linking of the individual protein molecules with each other and / or other molecules. Het is het doel van de 30 uitvinding een ten opzichte van de bekende werkwijzen verbeterde modificatiemethode te verschaffen. It is the object of the present invention, a 30 with respect to the known processes to provide improved modification method.

Zoals zal blijken uit de hierna volgende beschrijving van de uitvinding is de sleutelstap in de genoemde modificatiemethode tevens geschikt voor de 35 initiatie van de polymerisatie van bepaalde monomeren en voor de vervaardiging van nieuwe kleurstoffen. As will be apparent from the following description of the invention is the key step in the above method of modification is also suitable for the 35 initiation of the polymerization of certain monomers, and for the manufacture of new dyes.

Als sleutelstap in genoemde modificatiemethode ( verschaft de uitvinding een enzymatisch oxidatieproces, __* ^ λ c\ C\ / *' i') \ 0 υ ( 1 "· ~ 2 omvattende het samen brengen van een oxidatief enzym, een waterstofacceptor en een waterstofdonor in een reactie-mengsel en het in het reactiemengsel onder invloed van het enzym doen verlopen van een oxidatieve reactie met 5 tenminste de waterstofacceptor en de waterstofdonor als substraat. Dit enzymatisch oxidatieproces wordt in het onderstaande ook wel "sleutelproces" of "sleutelstap" genoemd. As a key step in said modification method (the present invention provides an enzymatic oxidation process, __ * ^ λ c \ C \ / * "i") \ 0 υ (1 "· ~ 2 comprising the combination of an oxidative enzyme, a hydrogen acceptor and a hydrogen donor in a reaction mixture, and do it in the reaction mixture, under the influence of the enzyme expiration of an oxidative reaction with 5, at least the hydrogen and the hydrogen donor as a substrate. This enzymatic oxidation process is referred to in the following also called "key process" or "key step".

Afhankelijk van de gewenste toepassing kunnen 10 substraten worden toegevoegd en verschillende typen oxidatieve enzymen, waterstofdonoren en waterstofaccepto-ren worden gekozen. Depending on the desired application can be added 10 of substrates, and various types of oxidative enzymes, hydrogen donors and waterstofaccepto-acids can be selected.

Het actief samenbrengen van de componenten enzym, waterstofdonor, waterstofacceptor en eventueel een 15 of meer andere substraten teneinde een modificatie van deze substraten te bewerkstelligen is niet eerder beschreven . The actively bringing together of the components of enzyme, hydrogen donor, hydrogen acceptor, and optionally one or more other substrates 15 in order to effect a modification of these substrates has not been described previously.

Geschikte enzymen zijn bijvoorbeeld peroxidases, in het bijzonder waterstofperoxidase, polyfenol-20 oxidase en lipoxygenase. Suitable enzymes are, for example, peroxidases, in particular, hydrogen peroxidase, polyphenol oxidase, and lipoxygenase-20.

Bruikbare waterstofdonoren zijn met name fenolen, fenolzuren of fenolhoudende verbindingen, zoals bepaalde kleurstoffen, in het bijzonder alizarine en zijn afgeleiden, antocyanines, flavonoïden en dergelijke. Suitable hydrogen donors are, in particular, phenols, phenolic acids, or phenolic compounds, such as certain dyes, alizarin, in particular, and its derivatives, antocyanines, flavonoids and the like.

25 Waterstofacceptoren zijn bijvoorbeeld water stofperoxide en zuurstof. 25 Hydrogen acceptors include, for example hydrogen peroxide to water and oxygen.

Indien bijvoorbeeld gestreefd wordt naar modificatie van eiwitten omvat het reactiemengsel verder een of meer eiwitten als te crosslinken substraat en doet de 30 waterstofdonor dienst als crosslinkend agens hiervoor. For example, if the aim is to modification of protein, the reaction mixture further comprises one or more proteins as a substrate for crosslinking 30 and causes the hydrogen donor is used as a crosslinking agent for this purpose. De bijzondere voorkeur gaat uit naar fenolen, zoals catechol, of fenolzuren, zoals ferulinezuur, caffeïnezuur, coumarinezuur, vanillinezuur, tyrosine, coniferylalcohol, sinapylalcohol, kaneelzuur, p-coumarylalcohol, sinapine-35 zuur, p-hydroxybenzoëzuur, galluszuur en flavonoïden als crosslinkend agens. Particular preference is given to phenols, such as catechol, or phenolic acids such as ferulic acid, caffeic acid, coumaric acid, vanillic acid, tyrosine, coniferyl alcohol, sinapylalcohol, cinnamic acid, p-coumaryl, sinapine-35 acid, p-hydroxybenzoic acid, gallic acid and flavonoids as crosslinking agent .

Het te crosslinken substraat wordt bij voorkeur gevormd door een of meer van nature in water oplosbare 10071 π >> The substrate for crosslinking is preferably formed by one or more of the naturally water-soluble π >> 10071

t U t : JU t U t: JU

3 eiwitten en/of een of meer in water oplosbaar gemaakte eiwitten en/of mengsels hiervan met een of meer polysac-chariden. 3 proteins, and / or one or more water-solubilised proteins, and / or mixtures thereof with one or more polysac-polysaccharides.

Van nature in water oplosbare eiwitten zijn 5 bijvoorbeeld ovalbumine, runderserumalbumine, cytochroom C, caseïne, collageen, gelatine, soja-eiwit, eiwitten uit groenten of granen, in het bijzonder gluten. Naturally water-soluble proteins are 5 example ovalbumin, bovine serum albumin, cytochrome C, casein, collagen, gelatin, soy protein, protein from vegetables or grains, especially gluten. De in water oplosbaar gemaakte eiwitten zijn bijvoorbeeld afkomstig uit aardappelen. The proteins made soluble in water are for example originating from potatoes. Een geschikt polysaccharide is zetmeel. A suitable polysaccharide is starch. 10 De op deze wijze gemodificeerde (gecrosslinkte) eiwitten of mengsels van eiwitten met polysacchariden kunnen verschillende toepassingen hebben. 10 The modified in this manner (crosslinked) proteins or mixtures of proteins with polysaccharides may have several uses. Zo is het mogelijk van nature schuimende eiwitten, zoals ovalbumine en runderserumalbumine, zodanig te modificeren dat ze na 15 schudden in een waterige oplossing leiden tot de vorming van meer en stabieler schuim dan de niet gemodificeerde versies van deze eiwitten. Thus, it is possible to naturally foaming proteins, such as ovalbumin and bovine serum albumin, to be modified in such a way that it leads, after 15 shaking in an aqueous solution to the formation of more and more stable foam than the non-modified versions of these proteins.

Ook de geleereigenschappen van sommige eiwitten kunnen door de modificatie duidelijk verbeterd worden. Also, the gelling properties of certain proteins can be markedly improved by the modification. De 20 gels, die door de modificatie verkregen worden kunnen gebruikt worden als additief is desserts, als extrusie-hulpstof in diervoeders en dergelijke. 20, the gels, which are obtained by the modification can be used as an additive is desserts, as an extrusion adjuvant in animal feed, and the like.

Eiwitcrosslinking of crosslinking van mengsels van eiwitten met polysacchariden volgens de uitvinding 25 kan verder leiden tot films, die betere eigenschappen hebben dan films vervaardigd van de overeenkomende niet-gecrosslinkte eiwitten of mengsels van eiwitten met polysacchariden. Protein Cross-linking or cross-linking of mixtures of proteins with polysaccharides according to the invention 25 can further lead to films which have better properties than films made from the corresponding non-cross-linked proteins or mixtures of proteins with polysaccharides. Dit zal in de voorbeelden verder worden geïllustreerd. This will be further illustrated in the examples.

30 Welk type product (gel, schuim, film) uiteinde lijk gevormd wordt hangt onder andere af van het gebruikte eiwit en de omstandigheden, enzymhoeveelheid en dergelijke. 30 What type of product (gel, foam, film) end severally formed depends inter alia on the protein used, and the conditions, amount of enzyme, and the like.

Voor schuimvorming worden bij voorkeur eiwitten 35 met gunstige oppervlakte-actieve eigenschappen gebruikt, zoals ovalbumine of BSA, in combinatie met een relatief lage concentratie van het crosslinkend agens (ongeveer 0,5-1% ten opzichte van het eiwit) en een relatief hoge 1 0 0 7 1 5 3 4 concentratie waterstofperoxide (ongeveer 1,5% ten opzichte van het eiwit). For formation of foam are preferably proteins 35 used with favorable surface-active properties, such as ovalbumin or BSA, in combination with a relatively low concentration of the crosslinking agent (about 0.5-1% relative to the protein) and a relatively high 1 7 0 0 1 5 3 4 concentration of hydrogen peroxide (about 1.5% relative to the protein).

Voor de vervaardiging van gels en films worden caseïne-achtige eiwitten gebruikt met een hogere concen-5 tratie van het crosslinkend agens (ongeveer 1 tot 5% ten opzichte van het eiwit) en lagere concentraties waterstofperoxide (ongeveer 0,3-1,5% ten opzichte van het eiwit). For the manufacture of gels and films are casein-type proteins are used with a higher concen-5 concentration of the crosslinking agent (about 1 to 5% with respect to the protein) and lower concentrations of hydrogen peroxide (about 0.3 to 1.5% with respect to the protein).

De producten, die worden verkregen met behulp 10 van de werkwijze volgens de uitvinding, zijn door de aanwezigheid van crosslinkende moleculen in de uiteindelijke structuur anders dan soortgelijke producten, die zijn vervaardigd van eiwitten en/of polysacchariden zonder crosslinkende middelen. The products, which are obtained by means 10 of the process according to the invention are due to the presence of cross-linker molecules in the final structure other than similar products, which are made of proteins and / or polysaccharides without cross-linking agents. Zij verschillen zowel in 15 samenstelling als in eigenschappen. They differ both in composition 15, as well as in properties. Dergelijke nieuwe producten maken derhalve eveneens onderdeel uit van de onderhavige uitvinding. Such new products, therefore, are also part of the present invention.

Het systeem van een oxidatief enzym, zoals peroxidase, een waterstofdonor, zoals een fenol, en een 20 waterstofacceptor, zoals waterstofperoxide, in combinatie met geschikt gekozen eiwitten, zoals caseïne, kan worden toegepast als additief in verven en lijmen, in stijfsel en kleefmiddelen. The system of an oxidative enzyme, such as peroxidase, a hydrogen donor, such as a phenol, and a 20 hydrogen acceptor, such as hydrogen peroxide, in combination with suitably chosen protein such as casein, may be used as an additive in paints and adhesives, in starch and adhesives.

Verrassenderwijs werd gevonden dat het sleu-25 telproces volgens de uitvinding ook gebruikt kan worden voor de initiatie van polymerisatieprocessen, waarbij radicalen betrokken zijn. Surprisingly, it was found that the key c-25 counting process can also be used according to the invention for the initiation of polymerization, in which radicals are involved. De waterstofdonor wordt in dat geval door het oxidatieve enzym omgezet in een radicaal, welke vervolgens dienst doet als initiator in de poly-30 merisatie van tevens in het reactiemengsel aanwezige monomeren, in het bijzonder acrylaten. The hydrogen donor is in this case, by the oxidative enzyme is converted into a radical, which then acts as initiator in the polymerization of poly-30 also monomers present in the reaction mixture, in particular acrylates.

In een andere variant kan het sleutelproces volgens de uitvinding worden toegepast in de vervaardiging van nieuwe kleurstofmoleculen, die stabieler zijn en 35 minder gevoelig voor veranderingen in de pH. In another variation, the key process of the invention can be used in the manufacture of new dye molecules, which are more stable, and 35 less sensitive to changes in pH. In dat geval is de waterstofdonor een organisch kleurstofmolecuul, welke door de oxidatieve enzymatische reactie wordt gekoppeld aan een of meer andere organische kleurstofmo- 1007153 5 leculen van dezelfde of een andere soort. In that case, the hydrogen donor is an organic dye molecule, which is coupled by the oxidative enzymatic reaction to one or more other organic kleurstofmo- 1007153 5 molecules of the same or another species. Het oorspronkelijke organische kleurstofmolecuul is bijvoorbeeld alizarine of een afgeleide daarvan, een antocyaan of een flavonoide. The original organic molecular dye is, for example, alizarin, or a derivative thereof, a antocyaan or a flavonoid. Voorbeelden zijn alizarine natriumsulfonaat, 5 quercitine, myricetine, rutine. Examples include alizarin sodium sulphonate, 5 quercetin, myricetin, rutin.

De nieuwe kleurstoffen, die op deze wijze verkregen worden maken eveneens onderdeel uit van de onderhavige uitvinding. The new dyestuffs, which are obtained in this manner are also part of the present invention.

De onderhavige uitvinding zal verder worden 10 verduidelijkt aan de hand van de begeleidende voorbeelden, die slechts gegeven zijn ter illustratie. The present invention will be further elucidated on the hand 10 of the accompanying examples, which are only given by way of illustration.

VOORBEELDEN VOORBEELD 1 EXAMPLES EXAMPLE 1

Enzymatische modificatie van eiwitten ll Het modificeren van eiwitten voor het verbeteren van hun schuimeigenschappen 5 Eiwitten met bekende schuimeigenschappen, zoals runderserumalbumine (BSA) en ovalbumine, werden behandeld met een systeem van peroxidase, waterstofperoxide en een waterstofdonor ten einde hun schuimcapaciteit en schuim-stabiliteit te verhogen. Enzymatic modification of proteins II The modification of proteins to improve their foam properties 5 Proteins with known foam properties, such as bovine serum albumin (BSA) and ovalbumin, were treated with a system of peroxidase, hydrogen peroxide and a hydrogen donor in order of their foamability and foam stability to to increase.

10 Een oplossing van 1% eiwit (10 mg/ml) werd bereid in 0,1 M fosfaatbuffer pH 7. Van deze oplossing werd 10 ml in een maatcylinder met een inhoud van 50 ml gebracht, en werden 0,056 mg catechol (o,56% ten opzichte van het eiwit) en 40 μΐ van een 0,00027% oplossing 15 (0,001% ten opzichte van het eiwit) toegevoegd en voor zichtig gemengd met de eiwitoplossing. 10 A solution of 1% of protein (10 mg / ml) was prepared in 0.1 M phosphate buffer pH 7. This solution was 10 ml in a measuring cylinder having a capacity of 50 ml, and were 0.056 mg of catechol (o, 56 % relative to the protein), and 40 μΐ of a 0.00027% solution of 15 (0.001% relative to the protein) was added and gently mixed with the protein solution. De enzymatische reactie werd gestart door toevoeging van 50 μΐ 30%-water-stofperoxide (1,5% ten opzichte van het eiwit) aan het reactiemengsel. The enzymatic reaction was started by addition of 50 μΐ -water 30% hydrogen peroxide (1.5% relative to the protein) to the reaction mixture. Na vijftien minuten incubatie werd de 20 oplossing gedurende 10 seconden geschud. After a fifteen minute incubation, the 20 solution was shaken for 10 seconds. Het volume van de vloeistof en van het gevormde schuim werden bepaald door directe aflezing. The volume of the liquid and of the foam formed were determined by direct reading. Om de schuimstabiliteit te bepalen werden de hoogten van respectievelijk het schuim en de vloeistof in de tijd gemeten op intervallen van 30 minu-25 ten. To determine the foam stability were, respectively, the heights of the foam and the liquid measured at the time at intervals of 30 minu-25 at.

1007153 6 1007153 6

In alle gevallen werden schuimen met hogere volumina en stabiliteit verkregen met het product volgens de uitvinding. In all cases, foams with higher volumes and stability obtained with the product according to the invention. De beste resultaten werden verkregen met ovalbumine. The best results were obtained with ovalbumin. Wanneer ovalbumine werd geïncubeerd met 5 peroxidase, waterstofperoxide en catechol, vertoonde de oplossing een donkerder kleur, maar het volume van het gevormde schuim was ongeveer zes maal groter dan met ovalbumine alleen. When ovalbumin was incubated with 5 peroxidase, hydrogen peroxide, and catechol, the solution showed a darker color, but the volume of the foam formed was about six times greater than with ovalbumin alone. Het verkregen schuim onder deze omstandigheden was gedurende ten minste een week stabiel. The foam obtained under these conditions was stable for at least a week.

10 Schuim dat verkregen werd met niet gemodificeerd ovalbumine bleef slechts gedurende een paar uur stabiel. 10 Foam which was obtained with non-modified ovalbumin remained stable only for a few hours.

Om oplossingen en schuimen met een lichtere kleur te krijgen werd ascorbinezuur toegevoegd aan het reactiemengsel na de incubatie met catechol. For solutions, and foams having a lighter color to get ascorbic acid was added to the reaction mixture after the incubation with catechol. Het schuim 15 dat verkregen werd onder deze omstandigheden had een zeer lichte wit-geelachtige kleur en een hoog volume. The foam 15 which was obtained under these conditions had a very light white-yellowish color, and a high volume. Echter, de stabiliteit van het schuim verminderde tot dagen, maar het was nog steeds veel hoger dan de stabiliteit van het schuim dat geproduceerd was door middel van het niet 20 gemodificeerde eiwit (figuur 1). However, the stability of the foam was reduced to days, but it was still much higher than the stability of the foam that was produced by means of the non-modified protein 20 (Figure 1).

Schuim dat verkregen wordt uit gecrosslinkte eiwitten, en wordt gekenmerkt door een hoge stabiliteit, kan een toepassing vinden in de voedingsindustrie voor de productie van slagroom, mousses, soufflés en dergelijke. Foam which is obtained from cross-linked proteins, and is characterized by a high stability, one may find application in the food industry for the production of whipped cream, mousses, souffles, and the like. 25 1.2. 25 1.2. Modificatie van de eiwitten voor het verbeteren van geleereigenschappen Modification of the proteins to improve gelling properties

Enzymatische crosslinking volgens de uitvinding kan de gelering van biopolymeren, zoals eiwitten, verbe-30 teren. Enzymatic cross-linking according to the present invention, the gelation of biopolymers, such as proteins, tars verb-30.

Incubatie van 1% eiwitoplossing met 0,0136 mg of 0,00136 mg peroxidase (0,01-0,001% ten opzichte van het eiwit), 10 μΐ 30%-waterstofperoxide (0,3% ten opzichte van het eiwit) en 0,62 mM fenol (1% ten 35 opzichte van het eiwit) leidde tot gelering na 5 minuten voor runderserumalbumine of na 30 minuten voor ovalbumine. Incubation of 1% protein solution with 0.0136 mg 0.00136 mg or peroxidase (0.01-0.001% relative to the protein), 10 μΐ 30% hydrogen peroxide (0.3% relative to the protein), and 0, 62 mM of phenol (1% with respect to 35 of the protein) resulted in gellation after 5 minutes for bovine serum albumin or after 30 minutes before ovalbumin. De kleur van beide oplossingen en gels varieerde van lichtgeel tot donkerbruin, afhankelijk van het gebruikte 1007133 7 type crosslinkend agens. The color of both solutions and gels ranged from pale yellow to dark brown depending on the type of crosslinking agent used 1007133 7. Het gebruik van een hogere hoeveelheid eiwit voor de crosslinkingsreactie resulteerde in de vorming van gels met een hogere stevigheid en verbeterde eigenschappen. The use of a higher amount of protein for the cross-linking reaction resulted in the formation of gels with higher firmness and improved properties. Deze gels kunnen in verschil-5 lende combinaties gebruikt worden voor de bereiding van desserts, als additief in diervoeder etc. These gels can be used in the difference-5 lumbar combinations for the preparation of desserts, as an additive in animal feed, etc.

1.3. 1.3. Vorming van eiwitfilms door enzymatische crosslin-king 10 De biopolymeren (dat wil zeggen eiwitten en polysacchariden) die in de bovenstaande voorbeelden genoemd worden, werden ook gebruikt in de onderstaande experimenten. Formation of protein films by enzymatic crosslin king-10 The biopolymers (i.e., proteins and polysaccharides) that are referred to in the above examples, were also used in the following experiments. Alle experimenten werden uitgevoerd bij kamertemperatuur (23-25°C). All experiments were performed at room temperature (23-25 ​​° C).

15 Eiwitoplossingen werden op verschillende manie ren bereid, als functie van het type eiwit en de modifi-catiemethode. 15 Protein Solutions were prepared in various manners acids, as a function of the type of protein and the modifier catiemethode. Een 10%-oplossing van caseïne (1 g case-ine/9 ml gedestilleerd water) wordt bereid door verhitting in een waterbad bij 60°C gedurende 30 minuten. A 10% solution of casein (1 g casein / 9 ml of distilled water) is prepared by heating in a water bath at 60 ° C for 30 minutes.

20 Oplossingen van aardappeleiwit werden op een andere manier bereid, omdat aardappeleiwit slecht oplosbaar is. Solutions of potato protein 20 were prepared in a different way, because potato protein is poorly soluble. Bovendien werden lagere concentraties aardappeleiwit gebruikt om eiwitoplossingen met een hoge viscositeit te vermijden. Furthermore, lower concentrations were potato protein used to avoid protein solutions with a high viscosity. In een typisch experiment wordt 0,6 g 25 aardappeleiwit opgelost door het toevoegen van 12 ml 12% SDS. In a typical experiment, 0.6 g of 25 potato protein is dissolved by the addition of 12 ml of 12% SDS. Aan deze oplossing wordt gedemineraliseerd water toegevoegd tot een eindvolume van 16 ml, gevolgd door 4 ml ethanol. To this solution, demineralized water is added up to a final volume of 16 ml, followed by 4 ml of ethanol. In andere experimenten werden dispersies van gluten of aardappeleiwit gebruikt. In other experiments dispersions of gluten or potato protein were used.

30 Zetmeeloplossing werd bereid door het toevoegen van 9 ml gedemineraliseerd water en 1 g zetmeel, het verhitten van het mengsel tot 80°C tot een ondoorzichtige oplossing wordt verkregen en het afkoelen tot kamertemperatuur. Starch solution 30 was prepared by the addition of 9 ml of demineralized water and 1 g of starch, heating the mixture to 80 ° C until an opaque solution is obtained and the allowed to cool to room temperature. Na het afkoelen werd de oplossing gebruikt om 35 eiwit-zetmeelmengsels voor modificatie te gebruiken. After cooling, the solution was used to run 35 protein-starch mixture prior to modification.

1.3.1. 1.3.1. Caseïnefilms i r. Casein Films i r. n 7 '* roiu 'J / i ü o 8 n 7 '* Roiu' J / i ü o 8

In de crosslinkingsexperimenten werd als emul-gator 0,2 g glycerol (1:5, w/w, glycerol:eiwit) aan de eiwitoplossing toegevoegd, gevolgd door toevoeging van 1 ml ethanol. In the cross-linking experiments, as emul-gator 0.2 g of glycerol (1: 5, w / w, glycerol: protein) is added to the protein solution, followed by addition of 1 ml of ethanol. Aan de oplossing werden hoeveelheden va-5 riërend van 10-55 mg van een opgelost crosslinkingsmiddel (5% ten opzichte van eiwit, w/w) en 10 μΐ 30%-H2O2 (0,3% ten opzichte van het eiwit) toegevoegd onder voorzichtig mengen. To the solution were added quantities of Va-5 riërend of 10-55 mg of a dissolved cross-linking agent (5% compared to the protein, w / w) and 10 μΐ -H2O2 30% (0.3% relative to the protein) was added under gently mix. Vervolgens werd vijf maal 2,72 /ig peroxidase (1:100000, enzym:eiwit) op intervallen van 1 minuut 10 toegevoegd. Then, five-fold 2.72 / ig peroxidase (1: 100000, enzyme: protein) is added at intervals of 1 minute 10. Het reactiemengsel werd voorzichtig geroerd gedurende 15 minuten tot 2 uur en de eiwitfilms vervolgens gevormd door de oplossing te gieten op platen met een inwendige diameter van 8,5 cm of op vierkante platen van 12x12 cm. The reaction mixture was gently stirred for 15 minutes to 2 hours, and the protein films then formed by pouring the solution onto plates with an inner diameter of 8.5 cm or on square plates of 12x12 cm. De films werden vervolgens geconditioneerd 15 bij 20°C en 60% vochtigheid. The films were then conditioned for 15 at 20 ° C and 60% humidity. De films worden getoond in figuur 2. The films are shown in Figure 2.

De samenstellingen van de films, hun waterop-losbaarheid, mechanische eigenschappen, waterdamp- en zuurstofpermeabiliteit van de films die op deze wijze 20 bereid werden, werd gemeten. The compositions of the films, their water solubility, mechanical properties, water vapor and oxygen permeability of the films that were prepared in this way, 20 was measured. De resultaten staan in tabel 1. Om de waterdamppermeabiliteit van de eiwitfilms te verminderen werden experimenten uitgevoerd waarin de hydrofobiciteit van het eiwit gemodificeerd werd door toevoeging van chemische reagentia (bijvoorbeeld glu-25 taaraldehyde of lipiden) aan het reactiemengsel gedurende de enzymatische crosslinkingexperimenten. The results are shown in Table 1. In order to reduce the water vapor permeability of the protein films were experiments conducted in which the hydrophobicity of the protein was modified by the addition of chemical reagents (for example, glu-25 taaraldehyde or lipids) to the reaction mixture during the enzymatic cross-linking experiments. De eigenschappen van deze films worden eveneens weergegeven in tabel 1. The properties of these films are also given in Table 1 below.

De films die verkregen werden met enzymatisch 30 gemodificeerd caseïne zwelden, maar losten niet op in water in vergelijking met films van niet gemodificeerd caseïne, die direct oplosten na toevoeging van water. The films obtained were swelled with enzymatically modified casein 30, but did not dissolve in water in comparison with films of unmodified casein, which is directly dissolved after addition of water. Bovendien hebben de films die verkregen worden met gemodificeerd caseïne een lagere zuurstofpermeabiliteit en 35 verbeterde mechanische eigenschappen in vergelijking met films die verkregen werden door gebruikmaking van niet gemodificeerd caseïne. In addition, the films obtained with modified casein a lower oxygen permeability and 35 improved mechanical properties as compared with films that were obtained through the use of non-modified casein.

ί U ü J ί U ü J

9 1.3.2. 9 1.3.2. Caseine-zetmeelfilms Casein-starch films

Films van eiwit en zetmeel (als het gebruikte polysaccharide) werden op dezelfde wijze bereid als boven, met het verschil dat een deel van het eiwit ver-5 vangen werd door zetmeel (gewichtsverhouding eiwit:zetmeel variërend van 1:1 tot 1:2, 1:3, 1:4). Films of protein and starch (if the used polysaccharide) were prepared in the same manner as above, with the difference that a part of the protein far-5 capture was by starch (weight ratio protein: starch ranging from 1: 1 to 1: 2, 1: 3, 1: 4). De films werden gegoten, geconditioneerd bij 20°C en 60% vochtigheid en geanalyseerd voor het bepalen van de eigenschappen (zie tabel 1). The films were cast, conditioned at 20 ° C and 60% humidity, and analyzed for the determination of the properties (see Table 1). De films worden getoond in figuur 3. The films are shown in Figure 3.

10 De op deze wijze verkregen films hebben betere eigenschappen dan die gemaakt zijn met niet gemodificeerd caseïne of niet gemodificeerd caseïne-zetmeelmengsels. 10 The films have superior properties obtained in this way than that are made with non-modified casein, modified casein, or non-starch blends. De films van niet gemodificeerd caseïne of caseïne/zetmeel konden gemakkelijk opgelost worden door verhitting in 15 water, terwijl de films verkregen uit gemodificeerd eiwit/zetmeel onoplosbaar waren in water en eveneens niet opgelost konden worden door koken in ether gedurende 1 uur of door behandeling met 10% SDS. The films of unmodified casein, or casein / starch could be easily dissolved by heating in 15 water, while the films obtained from modified protein / starch were insoluble in water and also could not be dissolved by boiling in ether for 1 hour, or by treatment with 10% SDS.

Bovendien werd in de oplossing, waarin de 20 enzymatisch gemodificeerde caseïne-/zetmeelfilms gesuspendeerd waren, de afwezigheid van zetmeel bewezen door de jodiumtest. In addition, in the solution in which the casein enzymatically modified 20 / starch films were suspended, demonstrated the absence of starch by iodine test. In oplossingen, waarin films gevormd van niet gemodificeerde mengsels van zetmeel en eiwit gesuspendeerd waren, was echter wel zetmeel aanwezig. In solutions in which films are formed from non-modified mixtures of starch and protein were suspended, was, however, starch is present. Deze 25 waarneming is een argument voor crosslinking van zetmeel met het eiwit door de oxidatieve peroxidase gekatalyseerde reactie. 25 This observation is an argument for cross-linking of starch with the protein by the oxidative peroxidase catalyzed reaction.

De films bereid uit gemodificeerde zetmeel/ eiwitmengsels hadden betere mechanische eigenschappen dan 30 die welke verkregen werden uit niet gemodificeerd zetmeel -/eiwitmengsels. The films prepared from modified starch / protein mixtures had better mechanical properties than 30 those obtained from non-modified starch - / protein mixtures.

1.3.3. 1.3.3. Glutenfilms gluten Films

Door de modificatie van gluten door enzymati-35 sche crosslinking op de boven gepresenteerde wijze konden onoplosbare films met uitstekende mechanische eigenschappen verkregen worden. Due to the modification of gluten by Enzymatic-35 cal cross-linking in the above-presented manner insoluble films were able to be obtained with excellent mechanical properties. Het interessantste resultaat was de vorming van een zeer goede film door het behandelen van 1 Oi' ' ' 10 gluten door slechts een fenol en waterstofperoxide zonder het toevoegen van peroxidase. The most interesting result was the formation of a very good film by treating 1 Oi '' 'gluten 10 by only a phenol and hydrogen peroxide, without the addition of peroxidase. De verklaring is dat gluten van zichzelf reeds peroxidase bevat. The explanation is that gluten itself already contains peroxidase. De aanwezigheid hiervan werd experimenteel gedetecteerd en gekwantifi-5 ceerd met een gemodificeerde versie van de ABTS-test (Arnao et al. (1995) Analytical Biochemistry 18, 335-338). The presence of this was experimentally detected and quantified 5-ed with a modified version of the ABTS-assay (Arnao et al. (1995) Analytical Biochemistry 18, 335-338). Dit glutenperoxidase katalyseert de crosslinking van gluten in de aanwezigheid van de toegevoegde substraten (fenol en waterstofperoxide). This glutenperoxidase catalyzes the crosslinking of gluten in the presence of the added substrates (phenol and hydrogen peroxide). Deze film had eigen-10 schappen, die vergelijkbaar zijn met die van films, welke verkregen worden uit gemodificeerd gluten door de katalytische werking van toegevoegd mierikswortelperoxidase. This film had an own-10 properties, which are comparable to those of films, which are obtained from modified gluten by the catalytic action of horseradish peroxidase was added.

De films bereid door de werkwijze volgens de onderhavige uitvinding kunnen toepassing vinden in coa-15 tings voor bijvoorbeeld kaas of voor fruit, dat wordt gebruikt in yoghurt en puddings etc., voor het coaten van papier. The films prepared by the process according to the present invention may find use in coa-ting 15, for example, cheese, or fruit, which is used in yogurt and puddings, etc., for the coating of paper.

Nummer Ingrediënten E^ Stress Strain WVP Number Ingredients E ^ Stress Strain WFP

__[MPa] [MPa] (%) [g/msPa] 20 CONTROLES :_ 1 caseïne 1773±89 34±2 9±5 14 2 caseïne +glycerol 65 ±11 3,1±0,2 85 ±8 16-17 3 caseïne +glycerol +H202 63±9 3,3±0,3 85±22 17-18 4 caseïne +glycerol +catechol 60±6 2,8±0,3 82 ±9 16 + peroxidase 2 5 5 caseïne -(-glycerol +catechol 63±8 2,9±0,3 85±14 18-19 __+HA_____ 6 caseïne Ι-glycerol -(-zetmeel 268±69 6,0±0,5 28±10 14 __+H2Q2_____ __PEROXIDASE + GLYCEROL + HA +:_ 7 caseïne -fcatechol (systeem 81 ±4 4,5±0,5 161 ±18 15-17 volgens de uitvinding) 8 caseïne +zetmeel 204±18 5,5±0,3 39±14 16-19 30 9 caseïne + ferulinezuur 491 ±92 11 ±2 33 ±19 14-16 10 caseïne +vanillinezuur 237±36 8,6±0,6 81 ± 11 13-14 11 caseïne + caffeïnezuur 442 ±41 10,9±0,4 61 ±14 15-16 ♦ ·*** /"Λ 1 Ou / ' υo 11 12 caseïne +catechol +extra 261 ±47 7,9±0,9 113±23 14-15 peroxidase 13 caseïne +catechol bij 65eC 431 ±29 10,3±0,5 110± 12 14-15 14 caseïne +ferulinezuurbij 622 ±54 14,6±0,6 66 ±9 14-16 __6£C_____ 15 caseïn __ [MPa] [MPa] (%) [g / MSpa] 20 CONTROLS: _ 1 casein 1773 ± 89 34 ± 2 9 ± 5 14 2 glycerol casein + 65 ± 11 3.1 ± 0.2 85 ± 8 16- 17 3 casein + glycerol + H202 63 ± 9 3.3 ± 0.3 85 ± 22 4 17-18 casein + glycerol + catechol 60 ± 6 2.8 ± 0.3 82 ± 9 16 + 2 5 5 peroxidase casein - (-glycerol catechol + 63 ± 8 2.9 ± 0.3 85 ± 14 18-19 __ + HA_____ 6 casein Ι-glycerol - (- starch 268 ± 69 6.0 ± 0.5 28 ± 10 14 __ + H2Q2_____ __PEROXIDASE GLYCEROL + + HA +: _ 7 -fcatechol casein (system 81 ± 4 4.5 ± 0.5 161 ± 18 15-17 according to the invention) 8 casein + starch 204 ± 18 5.5 ± 0.3 39 ± 14 16-19 30 9 ferulic acid casein + 491 ± 92 11 ± 2 33 ± 19 10 14-16 casein + vanillic acid 237 ± 36 8.6 ± 0.6 81 ± 11 11 13-14 casein + caffeic acid 442 ± 41 10, 9 ± 0.4 61 ± 14 15-16 ♦ · *** / "Λ 1 Ou / 'υo casein + 11 12 + catechol additional 261 ± 47 7.9 ± 0.9 113 ± 23 13 14-15 peroxidase casein + catechol at 65EC 431 ± 29 10.3 ± 0.5 110 ± 12 14 14-15 ferulinezuurbij casein + 622 ± 54 14.6 ± 0.6 66 ± 9 14-16 __6 £ _____ C 15 casein e +vanillinezuur bij 553±43 13±1 34±17 13-14 65° C __ 5 16 caseïne +caffeïnezuurbij 585±66 13,6±0,8 64 ±23 15-16 __6£C_____ 17 caseïne +catechol 30 min. 557±141 13,1±0,3 104±16 14-15 reactietijd 18 caseïne +catechol 2 uur re- 522±28 12,9±0,6 89±25 14 actietijd 19 caseïne +catechol 5 uur re- 554±32 13 ±0,6 96±14 14 actietijd 20 caseïne +tyrosine 626 ±32 13,5±0,8 37±12 13-14 10 21 caseïne +catechol +glutaar- 549±25 13,0±0,6 87 ± 17 15 aldehyde 22 caseïne +glutaaraldehyde 825± 153 17,8±0,1 47±15 16 zonder enzym 23 caseïne +catechol +steari- 467±16 10,5±0,9 11 ±3 15-16 nezuur 24 caseïne +kaneelzuur 460±16 11,3±0,5 63±10 16 25 caseïne + catechol +chi- 505±46 11,6±0,6 50±19 16-17 tosan 15 _ ANDERE ENZYMEN: 26 caseïne + catechol +polyfe- 463 ±37 12,0±1 85 ±17 15 noloxidase 27 caseïne +tyrosine +polyfe- 851 ±30 17,5±0,5 17 ±5 14-16 noloxidase 28 caseïne + linoleenzuur +li- 804±74 17,8±0,3 21 ±11 14-15 poxygenase 29 caseïne +catechol +l e + vanillic acid at 553 ± 43 13 ± 1 34 ± 17 65 13-14 ° C 5 16 __ caffeïnezuurbij casein + 585 ± 66 13.6 ± 0.8 64 ± 23 15-16 __6 £ _____ 17 C casein catechol + 30 min . 557 ± 141 13.1 ± 0.3 104 ± 16 18 14-15 response casein + catechol 2 hours re- 522 ± 28 12.9 ± 0.6 89 ± 25 14 19 reaction time casein + catechol 5 hours re- 554 ± 32 13 ± 0.6 96 ± 14 14 20 reaction time casein tyrosine + 626 ± 32 13.5 ± 0.8 37 ± 12 13-14 10 21 casein + catechol glutaric + 549 ± 25 13.0 ± 0.6 87 ± 17 15 casein + glutaraldehyde aldehyde 22 825 ± 153 17.8 ± 0.1 47 ± 15 16 23 no enzyme catechol casein + + stearic 467 ± 16 10.5 ± 0.9 11 ± 3 15-16 acid 24 casein + cinnamic acid 460 ± 16 11.3 ± 0.5 63 10 ± 16 25 casein + chimeric catechol + 505 ± 46 11.6 ± 0.6 50 ± 19 15 16-17 chitosan _ OTHER ENZYMES: 26 casein + catechol polyphenylene + 463 ± 37 12.0 ± 1 85 ± 17 15 27 noloxidase casein + tyrosine + polyphenylene 851 ± 30 17.5 ± 0.5 17 ± 5 14-16 28 noloxidase casein + linoleic acid + linoleic 804 ± 74 17.8 ± 0.3 21 ± 11 29 14-15 poxygenase casein + catechol + l ino- 689±26 15,9±0,4 56±27 15 leenzuur + lipoxygenase 20 f inoculation 689 ± 26 15.9 ± 0.4 56 ± 27 15 linolenic acid 20-lipoxygenase + f

s *, ;*7 D s *; * 7 D

I Kj O / i O Kj I O / O i

12 VOORBEELD 2 12 EXAMPLE 2

Gecombineerde chemisch-enzymatische polymerisatie van organische monomeren Combined chemical-enzymatic polymerization of organic monomers

In de praktijk wordt de radicaalpolymerisatie 5 van organische monomeren (bijvoorbeeld acrylaten, styreen) uitgevoerd bij temperaturen van ongeveer 70-80°C in aanwezigheid van een chemische initiator (bijvoorbeeld kaliumperoxidesulfaat of andere radicaal-precursorverbin-dingen). In practice, the 5-radical polymerization of organic monomers (e.g., acrylates, styrene) is carried out at temperatures of about 70-80 ° C in the presence of a chemical initiator (for example, potassium sulfate, peroxide or other free-radical-precursorverbin things).

10 In de methode volgens de onderhavige uitvinding wordt de polymerisatie geïnitieerd bij een temperatuur van 40°C door het enzymatisch oxidatieve systeem ("sleu-telproces") volgens de uitvinding dat bestaat uit peroxidase, een fenol en waterstofperoxide. 10 In the method according to the present invention, the polymerization is initiated at a temperature of 40 ° C by the enzymatic oxidation system ( "key c-counting process") according to the invention which consists of peroxidase, phenol and hydrogen peroxide. De fenolradicalen 15 die gevormd worden door de chemische reactie worden gebruikt als initiatoren voor de radicaalpolymerisatie van acrylaten. The fenolradicalen 15 are used which are formed by the chemical reaction as initiators for the radical polymerization of acrylates. De op deze wijze verkregen polymeren hebben een hogere molecuulmassa en betere mechanische eigenschappen dan die welke verkregen worden door middel 20 van klassieke chemische polymerisatie. The polymers obtained in this manner have a higher molecular weight and better mechanical properties than those obtained by means 20 of classical chemical polymerization.

In een reactievat worden 200 ml water en 0,2 g SDS gemengd. In a reaction vessel, 200 ml of water and 0.2 g SDS mixed. De oplossing wordt verhit tot 40°C en gedurende 1 uur doorborreld met stikstof om al het aanwezige zuurstof te verwijderen. The solution is heated to 40 ° C and sparged with nitrogen for 1 hour in order to remove all of the oxygen present. Vervolgens wordt 12,5 ml butyl-25 acrylaat (0,078 mol) toegevoegd welke eerder gewassen was met 10% NaOH-oplossing om de hydroquinonremmer te verwijderen. Then, 12.5 ml of butyl-acrylate 25 (0.078 mol) is added which had been previously washed with 10% NaOH-solution in order to remove the hydroquinonremmer. De reactie wordt geïnitieerd door toevoeging van 8,8 mg (8,74xl0'5 mol) catechol (opgelost in 5 ml water), 0,34 ml perhydrol (hydrogen peroxide) (10 mM in 30 het reactiemengsel) en 12 mg mierikswortelperoxidase (opgelost in 1 ml water, overeenkomend met een verhouding (w/w) enzym:monomeer=l:10.000). The reaction is initiated by addition of 8.8 mg (8,74xl0'5 moles) of catechol (dissolved in 5 mL of water), 0.34 ml of perhydrol (hydrogen peroxide) (10 mM in 30 the reaction mixture) and 12 mg of horseradish peroxidase ( dissolved in 1 ml of water, corresponding to a ratio (w / w) enzyme: monomer = l: 10,000). Het mengsel wordt onder mengen gedurende anderhalf uur bij 40°C in reactie gebracht. The mixture is added with mixing reacted for one and a half hours at 40 ° C. Na voltooiing wordt de polymeer gescheiden en 35 gegoten op een Petri-schaal. Upon completion, the polymer is separated and 35 cast on a Petri dish.

Het zo verkregen polymeer heeft een molecuulge-wicht van ongeveer 700.000 D in vergelijking met een 1 0 n 7 ·: co 13 controlepolymeer verkregen door chemische polymerisatie die een molecuulgewicht heeft van 142.000 D. This compared to a 1 0 n 7 thus obtained polymer has a molecular weight of approximately 700,000 D ·: co 13 control polymer obtained by chemical polymerization, which has a molecular weight of 142,000 D.

VOORBEELD 3 5 Enzymatische methode voor de synthese van organische kleurstoffen EXAMPLE 3 5 Enzymatic method for the synthesis of organic dyes

Peroxidase katalyseert de oxidatie van een verscheidenheid aan substraten in aanwezigheid van waterstofperoxide (of methyl- en ethylwaterstofperoxides). Peroxidase catalyses the oxidation of a variety of substrates in the presence of hydrogen peroxide (or methyl and ethylwaterstofperoxides). Een 10 grote verscheidenheid aan organische verbindingen kan als substraat voor peroxidase dienen en zo de rol van waterstof donor in radicaalreacties spelen. A 10 wide variety of can serve as a substrate for peroxidase organic compounds and so the role played by hydrogen donor in radical reactions play. Deze categorie omvat onder andere fenolen, aromatische amines en derge-lijke. This category includes, inter alia, phenols, aromatic amines, and the like-actual. Aangezien alizarine, een aantal van zijn afgelei-15 den, antocyaninen (CORRECT ??) en flavonoïden, een fenol-eenheid in het molecuul dragen, kunnen zij substraten zijn voor peroxidase. Since alizarin, a number of his afgelei 15-den, antocyaninen (CORRECT ??) and flavonoids, carry a phenol unit in the molecule, they may be substrates for peroxidase. De verwachting is dat de vorming van een dimeer als resultaat van de radicaaloxidatie van elk van deze verbindingen een specifieke kleur zal hebben 20 en ongevoelig zal zijn voor variaties in pH. It is expected that the formation of a dimer as a result of the free-radical oxidation of each of these compounds will have a specific color will be 20, and insensitive to variations in pH.

In dit experiment worden alizarine natriumsul-fonaat, quercetine, myricetine en rutine gebruikt als substraten voor peroxidase. In this experiment, natriumsul alizarin sulfonate, quercetin, myricetin and rutin used as substrates for peroxidase. In een spectrofotometrische cuvette (d=l cm) met 3 ml 0,05 M fosfaatbuffer van pH 6,1 25 worden porties van de reagensoplossingen toegevoegd in de volgende volgorde: 5 μΐ fenoloplossing en 40 μΐ water-stofperoxideoplossing. In a spectrophotometric cuvette (d = l cm) with 3 ml of 0.05 M phosphate buffer of pH 6.1 25 portions of the reactant solutions are added in the following order: 5 μΐ phenol solution and 40 μΐ hydrogen peroxide solution. Het mengsel wordt gehomogeniseerd door mengen en de reactie wordt geïnitieerd door toevoeging van 10 μΐ peroxidaseoplossing. The mixture is homogenized by mixing and the reaction is initiated by addition of 10 μΐ peroxidaseoplossing. De spectra worden in 30 de tijd opgenomen voor het spectraalgebied 230-800 nm (UV-VIS-spectrofotometer lambda 16, Perkin Elmer), ten opzichte van een referentie die slechts buffer bevat. The spectra are recorded in 30 the time for the spectral region of 230-800 nm (UV-VIS-spectrophotometer Lambda 16, Perkin Elmer), with respect to a reference containing only buffer.

De concentraties van de reagentia in het reac-tiemengsel waren 5,6 μg/ml peroxidase, 2,6 mM waterstof-35 peroxide, 7,18xl0'4 M myricetine, ofwel 1,12x10 * M alizarine sulfonaat, ofwel 8,82xl0'5 M quercetine, ofwel l,36x 10'4 M rutine. The concentrations of the reagents in the reaction mixture were 5.6 ug / ml of peroxidase, 2.6 mM hydrogen peroxide-35, M 7,18xl0'4 myricetin, either 1,12x10 * M alizarin sulfonate, either 8,82xl0 ' 5 M quercetin, or l, 36x 10-4 M rutin. Voor elk experiment wordt het spectrum van de oplossing van fenolsubstraat opgenomen bij θ=0 (Θ is 1 p .·> w V ƒ r -V l.' * ^ u 14 tijd). For each experiment, the spectrum of the solution of phenol substrate is recorded at θ = 0 (Θ is 1 p. ·> W ƒ V r -V L. '* ^ U 14 time). Het eindpunt van de reactie wordt gemeten na ongeveer 24 uur. The endpoint of the reaction is measured after about 24 hours.

Het verloop van de enzymatische oxidatie van verschillende kleurstoffen wordt getoond in tabel 2. The course of the enzymatic oxidation of various dyes is shown in Table 2.

5 5

Tabel 2 Table 2

Experiment Substraat Product Reactieverloop kleur λ™, kleur alizarine 260,8 rood-geel na 1 uur: geel- zeer langzame 333.6 260,8 bruin reactie 518,4 332 420 516 na 24 uur: 260,8 420 myricitine 252,8 geel 294 bruin zeer snelle 368 332,8 (licht) reactie 10 quercitine 253,6 geel na 1 uur: violet snelle reactie 365.6 253,6 (na se- 293.6 conden) 332.8 rood- 484,0 bruin (na na 24 uur: 1 uur) 253.6 bruin (na 293.6 24 uur) 332.8 484 rutine 255,2 geel 242,4 bruin snelle reactie 352 255,6 332.8 Experiment Substrate Product Response Gradient color λ ™ color 260.8 Alizarin red-yellow after one hour: yellow- very slow 333.6 260.8 518.4 332 420 516 brown reaction after 24 hours: 260.8 420 252.8 myricitine yellow 294 brown very rapid 368 332.8 (light) reaction quercitin 253.6 10 yellow after 1 hour: violet rapid response 365.6 253.6 (293.6 serum after conden) 332.8 484.0 reddish brown (after 24 hours after: 1 hr ) 253.6 brown (293.6 after 24 hours) 332.8 255.2 484 rutin yellow brown quick response 242.4 352 255.6 332.8

j. r·, n ”? j. r ·, n "? O O

j UU : io j UU: io

Claims (19)

  1. 1. Enzymatisch oxidatieproces, omvattende het samen brengen van een oxidatief enzym, een waterstofacceptor en een waterstofdonor in een reactiemengsel en het in het reactiemengsel onder invloed van het enzym doen 5 verlopen van een oxidatieve reactie met tenminste de waterstofacceptor en de waterstofdonor als substraat. 1. Enzymatic oxidation process which comprises bringing together an oxidative enzyme, a hydrogen acceptor and a hydrogen donor in a reaction mixture and in the reaction mixture, under the influence of the enzyme do 5 extend from an oxidative reaction with at least the hydrogen and the hydrogen donor as a substrate.
  2. 2. Proces volgens conclusie 1, waarbij verder een te crossiinken substraat in het reactiemengsel aanwezig is en de waterstofdonor dienst doet als crosslinkend 10 agens hiervoor. 2. Process according to claim 1, wherein further to a crossiinken substrate is present in the reaction mixture and makes the hydrogen donor is used as a crosslinking agent 10 for this purpose.
  3. 3. Proces volgens conclusie 2, waarbij het te crossiinken substraat gevormd wordt door een of meer van nature in water oplosbare eiwitten en/of een of meer in water oplosbaar gemaakte eiwitten en/of mengsels hiervan 15 met een of meer polysacchariden. 3. Process according to claim 2, wherein the substrate to be crossiinken is formed by one or more of the naturally water-soluble proteins and / or one or more water-solubilised proteins, and / or mixtures thereof 15, with one or more polysaccharides.
  4. 4. Proces volgens conclusie 3, waarbij de van nature in water oplosbare eiwitten zijn gekozen uit ovalbumine, runderseruma1bumine, cytochroom C, caseïne, collageen, gelatine, soja-eiwit, eiwitten uit groenten of 20 granen, in het bijzonder gluten. 4. A process according to claim 3, wherein the naturally water-soluble proteins are selected from ovalbumin, runderseruma1bumine, cytochrome C, casein, collagen, gelatin, soy protein, vegetable proteins from cereals or 20, in particular gluten.
  5. 5. Proces volgens conclusie 3, waarbij de in water oplosbaar gemaakte eiwitten afkomstig zijn uit aardappelen. 5. A process according to claim 3, wherein the proteins are derived from potatoes made soluble in water.
  6. 6. Proces volgens conclusie 3, waarbij het 25 polysaccharide zetmeel is. 6. A process according to claim 3, wherein the polysaccharide is a 25-starch.
  7. 7. Proces volgens conclusie 1, waarbij de waterstofdonor door het oxidatieve enzym wordt omgezet in een radicaal, welke vervolgens dienst doet als initiator in de polymerisatie van tevens in het reactiemengsel 30 aanwezige monoraeren, in het bijzonder acrylaten. 7. A process according to claim 1, wherein the hydrogen donor by the oxidative enzyme is transformed into a radical, which then acts as initiator in the polymerization of at the same time in the reaction mixture contained 30 monoraeren, in particular acrylates.
  8. 8. Proces volgens conclusie 1, waarbij de waterstofdonor een organisch kleurstofmolecuul is, welke door de oxidatieve enzymatische reactie wordt gekoppeld aan een of meer andere organische kleurstofmoleculen. 8. A process according to claim 1, wherein the hydrogen donor is an organic dye molecule, which is coupled by the oxidative enzymatic reaction to one or more other organic dye molecules.
  9. 9. Proces volgens conclusie 8, waarbij de organische kleurstofmoleculen zijn gekozen uit alizarine, 1. o '7 < ko I KJ Ό ί i -J o alizarine-afgeleiden, antocyanines, flavonoïden, in het bijzonder myricetine, quercitine, rutine. 9. A process according to claim 8, wherein the organic dye molecules are selected from alizarin, 1. o '7 <ko I KJ Ό ί i -J o alizarin-derivatives, antocyanines, flavonoids, in particular, myricetin, quercetin, rutin.
  10. 10. Proces volgens een der conclusies 1-9, waarbij de waterstofdonor wordt gekozen uit fenolen, in 5 het bijzonder catechol, fenolzuren, in het bijzonder ferulinezuur, caffeïnezuur, coumarinezuur, vanillinezuur, tyrosine, coniferylalcohol, sinapylalcohol, kaneelzuur, p-coumarylalcohol, sinapinezuur, p-hydroxybenzoëzuur, galluszuur en flavonoïden, fenolhoudende verbindingen of 10 onverzadigde vetzuren, in het bijzonder linoleenzuur. 10. Process according to any one of claims 1-9, wherein the hydrogen donor is selected from phenols, in 5 particular, catechol, phenolic acids, in particular ferulic acid, caffeic acid, coumaric acid, vanillic acid, tyrosine, coniferyl alcohol, sinapylalcohol, cinnamic acid, p-coumaryl, sinapinic acid, p-hydroxybenzoic acid, gallic acid and flavonoids, phenolic compounds, or 10 unsaturated fatty acids, especially linolenic acid.
  11. 11. Proces volgens een der conclusies 1-10, waarbij de waterstofacceptor waterstofperoxide en/of zuurstof is. 11. Process according to any one of claims 1-10, wherein the hydrogen acceptor is hydrogen peroxide and / or oxygen.
  12. 12. Werkwijze voor het crosslinken van een of 15 meer eiwitten of mengsel van een of meer eiwitten met een of meer polysacchariden, omvattende het samen brengen van de eiwitten of het mengsel van eiwitten met polysacchariden met een oxidatief enzym, een waterstofacceptor en een waterstofdonor in een reactiemengsel en het in het reac-20 tiemengsel onder invloed van het enzym doen verlopen van een oxidatieve reactie, die leidt tot crosslinking van de eiwitten en/of de eiwitten met de polysacchariden. 12. A process for cross-linking of one or 15 more proteins or a mixture of one or more proteins with one or more polysaccharides, comprising the bringing together of the protein or mixture of proteins with polysaccharides with an oxidative enzyme, a hydrogen acceptor and a hydrogen donor in a reaction mixture, and do it in the reaction mixture 20 under the influence of the enzyme expiration of an oxidative reaction, which leads to cross-linking of the proteins and / or the proteins with the polysaccharides.
  13. 13. Werkwijze volgens conclusie 12, met het kenmerk, dat de eiwitten van nature in water oplosbare 25 eiwitten zijn, in het bijzonder ovalbumine, runderseru-malbumine, cytochroom C, caseïne, collageen, gelatine, soja-eiwit, eiwitten uit groenten of granen, in het bijzonder gluten, of in water oplosbaar gemaakte eiwitten, in het bijzonder eiwitten afkomstig zijn uit aardap-30 pelen, waarbij het polysaccharide voor zover aanwezig zetmeel is, waarbij de waterstofdonor wordt gekozen uit fenolen, in het bijzonder catechol, fenolzuren, in het bijzonder ferulinezuur, caffeïnezuur, coumarinezuur, vanillinezuur, tyrosine, coniferylalcohol, sinapylalco-35 hol, kaneelzuur, p-coumarylalcohol, sinapinezuur, p-hydroxybenzoëzuur, galluszuur en flavonoïden, fenolhoudende verbindingen of onverzadigde vetzuren, in het >, o r- 7 1 h Pi io υ is ·-' 'J bijzonder linoleenzuur en waarbij de waterstofacceptor waterstofperoxide en/of zuurstof is. 13. A method according to claim 12, characterized in that the proteins are naturally water-soluble are 25 proteins, especially ovalbumin, runderseru-serum albumin, cytochrome C, casein, collagen, gelatin, soy protein, proteins from vegetables or cereals , in particular gluten, or water-solubilised proteins, are derived, in particular, proteins from potatoe-30 pelen, wherein the polysaccharide, if present, starch, wherein the hydrogen donor is selected from phenols, in particular, catechol, phenolic acids, in particularly ferulic acid, caffeic acid, coumaric acid, vanillic acid, tyrosine, coniferyl alcohol, sinapylalco-35 alcohol, cinnamic acid, p-coumaryl, sinapinic acid, p-hydroxybenzoic acid, gallic acid and flavonoids, phenolic compounds, or unsaturated fatty acids, in>, o r- 7 1 h υ is Pi io · - '' J is particularly linolenic acid, and hydrogen peroxide wherein the hydrogen and / or oxygen.
  14. 14. Werkwijze voor het polymeriseren van acry-laten, omvattende het in en reactiemengsel samenbrengen 5 van acrylaatmonomeren met een oxidatief enzym, een water-stofacceptor en een waterstofdonor en het in het reactie-mengsel onder invloed van het enzym doen verlopen van een oxidatieve reactie, teneinde de waterstofdonor om te zetten in een radicaal voor initiatie van de polymerisa- 10 tie van de monomeren, en het verder laten verlopen van de polymerisatie. 14. A process for the polymerization of acrylates show, comprising the in and reaction mixture bringing together 5 of acrylate monomers with an oxidative enzyme, a water-stofacceptor and do a hydrogen donor, and it is in the reaction mixture, under the influence of the enzyme expiration of an oxidative reaction , so as the hydrogen donor to be converted into a radical for initiating the polymerization of the monomers tie 10, and further smooth running of the polymerization.
  15. 15. Werkwijze voor het vervaardigen van multi-meren van kleurstofmoleculen, omvattende het in een reactiemengsel samenbrengen van een of meer fenolhoudende 15 kleurstoffen als waterstofdonor met een oxidatief enzym en een waterstofacceptor en het in het reactiemengsel onder invloed van het enzym doen verlopen van een oxidatieve reactie met de waterstofdonor als substraat voor het vervaardigen van multimeren van twee of meer kleur- 20 stofmoleculen. 15. A method for the production of multi-mers of dye molecules, which comprises in a reaction mixture to bring together do one or more phenol-15 dyes as the hydrogen-donor with an oxidative enzyme and a hydrogen acceptor, and in the reaction mixture, under the influence of the enzyme expiration of an oxidative reaction with the hydrogen donor as a substrate for the production of multimers of two or more colourants 20 drug molecules.
  16. 16. Stabiel schuim, te verkrijgen door het proces volgens conclusies 1-4, 10 of 11 of de werkwijze volgens conclusie 12 uit te voeren met een van nature reeds schuimvormende eigenschappen bezittend eiwit, zoals 25 ovalbumine of runderseruma1bumine. 16. Stable foam, obtainable by the process as claimed in claims 1-4, 10 or 11 or the method according to claim 12 to be carried out with a naturally already possessing foaming properties of protein, such as ovalbumin or 25 runderseruma1bumine.
  17. 17. Eiwitgel, te verkrijgen door het proces volgens conclusies 1-4, 10 of 11 of de werkwijze volgens conclusie 12 uit te voeren met een van nature reeds gelerende eigenschappen bezittend eiwit, zoals ovalbumine 30 of runderserumalbumine. 17. Protein gel, obtainable by the process as claimed in claims 1-4, 10 or 11 or the method according to claim 12 to be carried out with a naturally already gelling properties possessing protein such as ovalbumin or bovine serum 30 albumin.
  18. 18. Eiwitfilm, te verkrijgen door het proces volgens conclusies 1-4, 10 of 11 of de werkwijze volgens conclusie 12 uit te voeren met een of meer eiwitten, zoals caseïne, of een mengsel van een of meer eiwitten en 35 een of meer polysacchariden, zoals zetmeel. 18. Film Protein, obtainable by the process as claimed in claims 1-4, 10 or 11, or to carry out the method according to claim 12 with one or more proteins, such as casein, or a mixture of one or more proteins and a 35 or more polysaccharides , such as starch.
  19. 19. Kleurstofmolecuul, te verkrijgen door het uitvoeren van de werkwijze volgens conclusie 15. a “·; 19. The dye molecule, obtainable by carrying out the method of claim 15. a "·; ar* i Ü Ü / ί J SAMENWERKINGSVERDRAG (PCT) RAPPORT BETREFFENDE NIEUWHE1DS0NDER20EK VAN INTERNATIONAAL TYPE IOENTIFIKATIE VAN DE NATIONALE AANVRAGE KenmerK van oe aanvrager ol van oe gemacnugoe j L/SF68/MTC/4 j - -.— .......- ..... — . ar * i Ü Ü / ί J Cooperation Treaty (PCT) REPORT ON NIEUWHE1DS0NDER20EK OF INTERNATIONAL TYPE IOENTIFIKATIE OF THE NATIONAL APPLICATION feature of claimant oe ol of oe gemacnugoe j L / SF68 / MTC / 4 j - -.- ...... .- ..... -. - , - ----1 NeoenanOse aanvrage nr. inoienngsoaïjm 1007158 29 september 1997 ingeroepen voorrangsoaojm Aanvrager (Naam) ATO-DLO Datum van net verzoen voor een onderzoen van intemaoonaai type | - - ---- 1 NeoenanOse inoienngsoaïjm Application No. 1007158 September 29, 1997 invoked voorrangsoaojm Applicant (Name) ATO DLO date just atone for a kiss from intemaoonaai type |. Door Oe tnsanoe voor intematonaai OnoerzoeK (ISA) aan net I verzoerr voor een onoerzoeK van mtematronaaJ type begenend nr SN 30063 NL I. CLASSIFICATIE VAN HET ONDERWERP (bij toepassing van verschillen oe classificaties. alle elassificaoe symbolen opgeven) Volgens oe Internationale aassilieaoe (IPC) Int.Cl.6: C 12 P 1/00, C 12 P 7/22, C 12 P 7/26, C 07 K 1/107, C 12 P 19/00, C 09 B 1/00, C 09 B 57/00, C 08 L 33/08, A 23 P 1/16 II. By Oe tnsanoe for intematonaai OnoerzoeK (ISA) to net I verzoerr for onoerzoeK of mtematronaaJ type begenend No SN 30063 EN I. CLASSIFICATION OF THE SUBJECT (using different classifications oe. Elassificaoe abandon all symbols) According oe aassilieaoe International (IPC) Int.Cl.6: C 12 P 1/00, C 12 P 22/07, C 12 P 07/26, C 07 K 1/107, C 12 P 19/00, C 09 B 1/00, C 09 B 57/00, C 08 L 33/08, A 23 P 1/16 II. ONDERZOCHTE GEBIEDEN VAN DE TECHNIEK ____Onderzochte minimum documentatie___ Classificatiesysteem Classrticatiesvrnoolen_ ~_ Int.Cl.6: C 12 P, C 07 K, C 09 B, C 08 L, A 23 P Onaerzocnte anoere oocumentaoe o an oe minimum Documentatie voor zover oergelijke documenten in de onderzochte gat* eden zjjn opgenomen j lil.;_; INVESTIGATED AREAS OF TECHNOLOGY ____Onderzochte minimum documentatie___ Classification Classrticatiesvrnoolen_ ~ _ Int.Cl.6: P C 12, C 07 K, C 09 B, C 08 L, A 23 P Onaerzocnte anoere oocumentaoe an o oe minimum documentation to the extent oergelijke documents the investigated hole * eden zjjn incorporated lil j;. _; GEEN ONOERZOEK MOGELUK VOOR BEPAALDE CONCLUSIES (opmerxingen op aanvullingsalad) : IV.' NO ONOERZOEK MOGELUK CERTAIN CONCLUSIONS (opmerxingen in addition salad): IV. y 1 GEBREK AAN EENHEID VAN UITVINDING (camerxincen cc aanvullincspiafl) -z ” PCT.".S^-'2C ·'a - -S *9^· y is 1 LACK OF UNIT OF INVENTION (camerxincen cc aanvullincspiafl) -z "PCT". S ^ -. "· 2C 'a - -S * 9 ^ ·
NL1007158A 1997-09-29 1997-09-29 Enzymatic modification. NL1007158C2 (en)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL1007158A NL1007158C2 (en) 1997-09-29 1997-09-29 Enzymatic modification.
NL1007158 1997-09-29

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL1007158A NL1007158C2 (en) 1997-09-29 1997-09-29 Enzymatic modification.
PCT/NL1998/000564 WO1999016893A3 (en) 1997-09-29 1998-09-29 Enzymatic modification

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NL1007158C2 true NL1007158C2 (en) 1999-03-30

Family

ID=19765761

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NL1007158A NL1007158C2 (en) 1997-09-29 1997-09-29 Enzymatic modification.

Country Status (2)

Country Link
NL (1) NL1007158C2 (en)
WO (1) WO1999016893A3 (en)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001035882A9 (en) * 1999-11-15 2002-08-15 Texas A & M Univ Sys Wound sealant formed in situ
EP1169922A1 (en) * 2000-07-03 2002-01-09 Instituut Voor Agrotechnologisch Onderzoek (Ato-Dlo) Method of enzymatically cross-linking proteins and phenolic polymers
FR2840215B1 (en) * 2002-06-03 2004-08-27 Oreal Composition containing an active capable of being oxidized by a hydroperoxide, a lipoxygenase and a substrate and method using said composition
EP2025235A1 (en) * 2007-08-08 2009-02-18 Stichting Top Institute Food and Nutrition Use of globular protein - oligosaccharide conjugates
WO2011015504A3 (en) * 2009-08-07 2011-04-07 Unilever Plc Aerated products
CN101864178A (en) * 2010-06-17 2010-10-20 复旦大学 Injected chemical crosslinking protein/polypeptide hydrogel and preparation method thereof
WO2013189966A3 (en) 2012-06-21 2014-05-30 Unilever Plc Hair colouring composition comprising butein
WO2013189965A3 (en) 2012-06-21 2014-05-30 Unilever Plc Hair colouring composition
EP2863880A2 (en) 2012-06-21 2015-04-29 Unilever Plc. Hair colouring composition comprising gossypetin
WO2014122132A1 (en) 2013-02-06 2014-08-14 Unilever Plc Topical colouring composition
CN104004231A (en) * 2014-06-12 2014-08-27 东南大学 Biomacromolecule interpenetrating polymer network hydrogel and preparation method thereof

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2520006A1 (en) * 1982-01-21 1983-07-22 Toyo Jozo Kk Method for quantitative measurement of the unsaturated fatty acids
EP0302734A2 (en) * 1987-08-06 1989-02-08 Oxygenetics Inc. Continuous processes for modifying biologically active materials and the products therefrom
US4900671A (en) * 1985-11-13 1990-02-13 The Mead Corporation Biocatalytic process for preparing phenolic resins using peroxidase or oxidase enzyme
EP0386763A1 (en) * 1989-03-08 1990-09-12 New Oji Paper Co., Ltd. Selective permeable membrane, method of producing and electrode using the same
EP0481815A2 (en) * 1990-10-18 1992-04-22 The Mead Corporation Biocatalytic oxidation using legume, rice and malvaceous plant peroxidases, preparing phenolic resins using such oxidation, and method for purifying peroxidase enzymes
WO1993020119A1 (en) * 1992-03-30 1993-10-14 Deutsche Gelatine-Fabriken Stoess Ag Biodegradable, water resistant polymer material
WO1993023606A1 (en) * 1992-05-18 1993-11-25 Novo Nordisk A/S Process for producing paper or paperboard with increased strength from mechanical pulp
EP0682116A1 (en) * 1994-05-11 1995-11-15 Amano Pharmaceutical Co., Ltd. Ascorbate oxidase, gene encoding the same, process for producing the same, and reagent composition using the same
WO1997019141A1 (en) * 1995-11-17 1997-05-29 Bioinvicta Limited Adhesives

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2520006A1 (en) * 1982-01-21 1983-07-22 Toyo Jozo Kk Method for quantitative measurement of the unsaturated fatty acids
US4900671A (en) * 1985-11-13 1990-02-13 The Mead Corporation Biocatalytic process for preparing phenolic resins using peroxidase or oxidase enzyme
EP0302734A2 (en) * 1987-08-06 1989-02-08 Oxygenetics Inc. Continuous processes for modifying biologically active materials and the products therefrom
EP0386763A1 (en) * 1989-03-08 1990-09-12 New Oji Paper Co., Ltd. Selective permeable membrane, method of producing and electrode using the same
EP0481815A2 (en) * 1990-10-18 1992-04-22 The Mead Corporation Biocatalytic oxidation using legume, rice and malvaceous plant peroxidases, preparing phenolic resins using such oxidation, and method for purifying peroxidase enzymes
WO1993020119A1 (en) * 1992-03-30 1993-10-14 Deutsche Gelatine-Fabriken Stoess Ag Biodegradable, water resistant polymer material
WO1993023606A1 (en) * 1992-05-18 1993-11-25 Novo Nordisk A/S Process for producing paper or paperboard with increased strength from mechanical pulp
EP0682116A1 (en) * 1994-05-11 1995-11-15 Amano Pharmaceutical Co., Ltd. Ascorbate oxidase, gene encoding the same, process for producing the same, and reagent composition using the same
WO1997019141A1 (en) * 1995-11-17 1997-05-29 Bioinvicta Limited Adhesives

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 119, no. 17, 25 October 1993, Columbus, Ohio, US; abstract no. 176413, ESHETE, FELEKE ET AL: "Characteristics of phenol oxidase of Schistosoma mansoni and its functional implications in eggshell synthesis" XP002068271 *
CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 123, no. 1, 3 July 1995, Columbus, Ohio, US; abstract no. 5653, PIERCE, JOHN A. ET AL: "A comparison of native and synthetic mushroom melanins by Fourier-transform infrared spectroscopy" XP002068270 *
CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 94, no. 9, 2 March 1981, Columbus, Ohio, US; abstract no. 60151, LEATHAM, GARY F. ET AL: "In vitro protein polymerization by quinones or free radicals generated by plant or fungal oxidative enzymes" XP002068272 *
J. PARASITOL. (1993), 79(3), 309-17 CODEN: JOPAA2;ISSN: 0022-3395 *
PHYTOCHEMISTRY (1995), 39(1), 49-55 CODEN: PYTCAS;ISSN: 0031-9422 *
PHYTOPATHOLOGY (1980), 70(12), 1134-40 CODEN: PHYTAJ;ISSN: 0031-949X *

Also Published As

Publication number Publication date Type
WO1999016893A3 (en) 1999-05-20 application
WO1999016893A2 (en) 1999-04-08 application

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Minussi et al. Potential applications of laccase in the food industry
McManus et al. The association of proteins with polyphenols
Ranocha et al. Biochemical characterization, molecular cloning and expression of laccases–a divergent gene family–in poplar
Dervilly et al. Isolation of homogeneous fractions from wheat water-soluble arabinoxylans. Influence of the structure on their macromolecular characteristics
Migneault et al. Glutaraldehyde: behavior in aqueous solution, reaction with proteins, and application to enzyme crosslinking
Buchert et al. Crosslinking food proteins for improved functionality
US4119564A (en) Oil-in-water emulsion and process for the preparation thereof
Dicko et al. Evaluation of the effect of germination on phenolic compounds and antioxidant activities in sorghum varieties
Heredia Biophysical and biochemical characteristics of cutin, a plant barrier biopolymer
US6133229A (en) Stabilization of proteins in solution
Suzuki et al. Physicochemical studies of kuzu starch
Wattanachant et al. Effect of crosslinking reagents and hydroxypropylation levels on dual-modified sago starch properties
US4460617A (en) Protein-free coffee whitener and method of making same
Siebert et al. Nature of polyphenol− protein interactions
MATHEIS et al. A review: enzymatic cross‐linking of proteins applicable to foods
US6699694B1 (en) Method for producing α-1,6-branched α-1,4-glucans from sucrose
US5755890A (en) Starch-emulsifier composition and methods of making
Swinkels Composition and properties of commercial native starches
US4247568A (en) Preparation of low-calorie food ingredients from starch
Sampaio et al. Enzymatic grafting of chitosan onto Bombyx mori silk fibroin: kinetic and IR vibrational studies
Le Tien et al. Development of biodegradable films from whey proteins by cross-linking and entrapment in cellulose
DeJong et al. Transglutaminase catalyzed reactions: impact on food applications
Muzzarelli et al. Immobilized enzymes on chitosan columns: α‐Chymotrypsin and acid phosphatase
Selinheimo et al. Formation of protein− oligosaccharide conjugates by laccase and tyrosinase
US3974032A (en) Low D.E. starch hydrolysates of improved stability prepared by enzymatic hydrolysis of dextrins

Legal Events

Date Code Title Description
PD2B A search report has been drawn up
VD1 Lapsed due to non-payment of the annual fee

Effective date: 20020401

VD1 Lapsed due to non-payment of the annual fee

Effective date: 20020401